今天到上海宝藤生物科技有限公司参加了面试，感觉还不错，有没有人比较了解那公司能多透露点信息啊？

一、Solexa测序技术前世今生（——Illumina平台） Solexa高通量测序技术是由英国剑桥大学派生的Solexa公司建立起来的。该方法以单分子阵列技术为基础，是对合成测序技术的发展与延伸。 二、测 序 原 理 Solexa是一种基于边合成边测序技术（Sequencing-By-Synthesis，SBS）的新型测序技术。通过单分子阵列实现在小型芯片（FlowCell）上进行桥式PCR反应。通过可逆阻断技术实现每次只合成一个碱基，再利用相应的激光激发荧光集团，捕获激发光，从而读取碱基信息。 1）Flow Cell结构 2）可逆阻断技术 3）边合成边测序（SBS） a.加入测序引物 b.Cycles1 a)合成第一个碱基 b)清除未反应的碱基和试剂 c)激发荧光信号并读取 （可逆阻断技术的步骤） d)去除荧光基团和阻断基团 （可逆阻断技术的步骤） c.Cycle2……Cycle n 4）桥式PCR（——簇生成之“起始延伸”） 5）桥 式 PCR（——簇生成之“扩增”） 6）桥 式 PCR（——簇生成之“测序”） 7）碱基读取 三、工作流程 四、测 序 类 型 a)单端测序（single-read sequencing，SR） b)双端测序（Paired-endsequencing，PE） c)混样测序（Indexsequencing） 1）FollowCell 接头差异 Paired End Uracil Specific Excision Reagent (USER) 尿嘧啶切割位点 FormamidopyrimidineGlycosylase (fpg) 糖基化酶切割位点 Single Read Periodate Linearization 高碘酸盐切割位点 a）双 端 测 序 Paired-End sequencing（PE/双端测序） u2212检测基因片段两端的基因信息。 b）单 端 测 序 Single-read sequencing（SR，单端测序） u2212只检测基因片段一段的基因信息。 c）混 样 测 序 Index Sequencing：将多种样本混合测序 u2212充分利用solexa高通量测序特点。A：Adapter B：Fragment DNA C：Index seq primer D：Index E：Adapter五、仪 器 构 造 1）Miseq测序仪 六．测序结果展示 Fastq：Fastq是Solexa测序技术中一种反映测序序列的碱基质量的文件格式。 u2022Read 1 u2022Read 2

solexa长笛是美国ABA Music，Inc 出品的手工长笛，有一部分在上海组装。同档次的产品比日本产品便宜。不错的选择。

MNGS（Massively Parallel Next-Generation Sequencing）技术是一种高通量测序技术，也称为下一代测序技术。它的发展可以追溯到2005年左右。传统的DNA测序技术（如Sanger测序）在测序过程中需要进行分离、扩增和分析单个DNA分子，速度较慢且成本较高。MNGS技术的出现改变了这一局面，通过将DNA样本分成数百万个小片段，并同时进行测序，大大提高了测序的速度和效率。首个商用的MNGS平台是由Illumina公司于2006年推出的Solexa测序技术。随后，其他公司也相继推出了各自的MNGS技术平台，如454测序（Roche）、SOLiD测序（Applied Biosystems）等。MNGS技术的发展在基因组学、生物医学研究和临床诊断等领域产生了巨大的影响。它的高通量、高效率和低成本使得大规模基因组测序成为可能，推动了基因组学研究的快速发展，并促进了个性化医学和精准医疗的实现。

专业型长笛。3系的笛头笛身笛尾是925银，按键是镀银。管体的振动性能优于雅马哈6系

第一代指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少第二代为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。第三代特点是单分子测序，多基于纳米科技，无需扩增，对单分链DNA/RNA直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序，核心特点是无需扩增所以成本更低

我卖过。。。相对不错的笛子。。。和村松还是不是一个档次的。。。。但是如果你买成和村松一个价位。。。那就贵太多了。。。。我大概说一下。。。solexa的正常价位。。。银头15000＋ 银管23000＋ 村松如果不是歪货的话。。。银头的应该都比solexa银管的要贵。。。这个只是参考价格。。。

随着亚太地区第一台Illumina Genome Analyzer Ⅱx测序仪进入天津生物芯片，可以提供测序读长为75*2 bp， 每次运行数据量达50-60GB。对于4-5Mb的基因组，可确保每个基因组测序量达到400Mb（100倍覆盖），足以满足全基因组denovo测序和SNP鉴定的需要。Solexa高通量测序平台均可对转录组进行测序，由于两种平台各有其优缺点，针对不同的样品情况，需灵活选用。Illumina测序技术的优点是单次测序获得的数据量大，能够得到更高的覆盖率，检测到更多低丰度的转录本，在已知基因组序列物种的转录组分析中更具优势。Roche 454测序技术的优点是单序列读长可以达到500bp，在未知基因组序列物种的转录组分析中更有优势，其较长的读长便于拼接，能获得更好的转录本数据。Phil Latreille等利用光学图谱研究了X. nematophila基因组，完成了基因组的组装。OpGen公司开发了一种新型的光学图谱技术。天津生物芯片技术责任有限公司于2012年引进国内首台基因组光学图谱，将传统测序技术与基因组光学图谱，可以提供更加完美的基因测序服务 。

第一代指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少第二代为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。第三代特点是单分子测序，多基于纳米科技，无需扩增，对单分链DNA/RNA直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序，核心特点是无需扩增所以成本更低

测序深度可以理解为对一段序列上的区域重复检测的次数，比如一个序列被上某个片段被检测了30次就是30x，深度越大，越准确，覆盖度就是对你的目的基因所覆盖的程度，比如你的序列是有30bp但是由于测序的时候某些区域没有测到，只测到了27bp大小片段，那就是27/30等于90%

reads 是指测出来的序列。M、G等都是和数学单位一样的。数据量1G指1G个碱基，* M reads指 *百万条 reads.

38000价格高，专业级别用

精准医疗（Precision Medicine）是一种将个人基因、环境与生活习惯差异考虑在内的疾病预防与处置的新兴方法。12015年1月20日，美国总统奥巴马在国情咨文中提出“精准医学计划”，希望精准医学可以引领一个医学新时代2。

高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（"Next-generation" sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。更多内容可关注盛景基因。

据说不是美国产的，是上海一个个体长笛制造商，很多年前聘用过一位美国长笛制造技师，指导生产，挂了个美国名字。是听说是这样的，不一定确切。

测序前需要先用一种聚合酶和单链结合蛋白处理带有DNA的磁珠，接着将磁珠放在一种PTP平板上。这种平板上特制有许多直径约为44um的小孔，每个小孔仅能容纳一个磁珠，通过这种方法来固定每个磁珠的位置，以便检测接下来的测序反应过程。测序方法采用 焦磷酸测序法 ，将一种比PTP板上小孔直径更小的磁珠放入小孔中，启动测序反应。测序反应以磁珠上大量扩增出的单链DNA为模板，每次反应加入一种dNTP进行合成反应。如果dNTP能与待测序列配对，则会在合成后释放焦磷酸基团。释放的焦磷酸基团会与反应体系中的ATP硫酸化学酶反应生成ATP。生成的 ATP和荧光素酶共同氧化使测序反应中的荧光素分子并发出荧光 ，同时由PTP板另一侧的CCD照相机记录，最后通过计算机进行光信号处理而获得最终的测序结果。由于每一种dNTP在反应中产生的荧光颜色不同，因此可以根据荧光的颜色来判断被测分子的序列。反应结束后，游离的dNTP会在双磷酸酶的作用下降解ATP，从而导致荧光淬灭，以便使测序反应进入下一个循环。由于454测序技术中，每个测序反应都在PTP板上独立的小孔中进行，因而能大大降低相互间的干扰和测序偏差。 454技术最大的优势在于其能获得较长的测序读长，当前454技术的平均读长可达 400bp ，并且454技术和illumina的Solexa和Hiseq技术不同，它最主要的一个缺点是 无法准确测量同聚物的长度 ，如当序列中存在类似于PolyA的情况时，测序反应会一次加入多个T，而所加入的T的个数只能通过荧光强度推测获得，这就有可能导致结果不准确。也正是由于这一原因，454技术会在测序过程中 引入插入和缺失的测序错误 。

1998年，克莱格·凡特的塞雷拉基因组公司成立，而且宣布将在2001年完成定序工作。随后国际团队也将完成工作的期限提前。2000年6月26日，塞雷拉公司的代表凡特，以及国际合作团队的代表弗朗西斯·柯林斯（Francis Collins），在美国总统柯林顿的陪同下发表演说，宣布人类基因组的概要已经完成。2001年2月，国际团队与塞雷拉公司，分别将研究成果发表於《自然》与《科学》两份期刊。在基因组计划的研究过程中，塞雷拉基因组使用的是霰弹枪定序法（shotgun sequencing），这种方法较为迅速 ，但是仍需以传统定序来分析细节。全基因组测序技术主要包括第二代测序技术（NGS）和第三代测序技术。第二代测序技术已经能够快速、低成本的进行全基因组测序，其设备供应商主要是Solexa （现被Illumina公司合并），454（罗氏公司）和SOLiD（AB公司）。第三代测序技术于2011年4月正式推广，其单分子实时（SMRT）测序技术完全不同与第二代测序，它的序列读长高达3000 bp（Pacific Biosciences 公司研发）。

1，宏基因组提取；提取的样品DNA必须可以代表特定环境中微生物的种类，除需严格遵循取样规则外，取样中应尽量避免对样本的干扰，缩短保存和运输的时间，使样品尽可能代表自然状态下的微生物原貌，获得高质量环境样品中的总DNA是宏基因组文库构建的关键之一。要采用合适的方法，既要尽可能地完全抽提出环境样品中的DNA，又要保持较大的片段以获得完整的目的基因或基因簇。所以总的提取总是在最大提取量和最小剪切力之间折中。应严格操作，谨防污染，并且保持DNA片段的完整和纯度。为了更好地反映环境中的微生物种群并且提高阳性克隆的占有率，需要在克隆之前通过不同的方法对感兴趣的目的基因或基因组进行富集，常用的富集方法有稳定同位素探针、抑制性消减杂交、差异显示、噬菌体展示、亲和捕获及DNA微阵列等技术。2，测序分析：采用Solexa进行宏基因组DNA测序，首先对特定环境微生物种群全基因组DNA进行提取。在提取微生物种群的DNA后制备DNA文库，具体步骤如下：（1）将DNA随机打断成200-500bp的片段；（2）对DNA末端进行修复；（3）将“A”碱基加入到DNA片段的3"末端；（4）在DNA片段的末端加上接头；（5）纯化连接产物；（6）PCR扩增连上接头的DNA片段；（7）检测测序文库。

1）测序文库构建（Library Construction）首先准备基组（虽测序公司要求品量要达200ngGnome Analyzer系统所需品量低至100ng,能应用品限实验）DNA随机片段化几百碱基或更短片段并两加特定接（Adaptor）转录组测序则文库构建要相麻烦些RNA片段化需反转cDNA加接或者先RNA反转cDNA再片段化并加接片段（Insert size）于面数据析影响根据需要选择于基组测序说通选择几种同insert size便组装（Assembly）候获更信息2）锚定桥接（Surface Attachment and Bridge Amplification）Solexa测序反应叫做flow cell玻璃管进行flow cell细8Lane每Lane内表面数固定单链接述步骤带接DNA 片段变性单链与测序通道接引物结合形桥状结构供续预扩增使用

第一代：Sanger测序（已淘汰）　　双脱氧核苷酸末端终止法。引物结合模板/sample, DNsae延伸引物，掺入ddNTP在每一个base位置终止链反应，拼接不同长度合成序列得到所有序列　　缺点：慢　　衍生：鸟枪法。打断长DNA成若干短片段，分别对每个短片段sanger测序从而大大节约时间第二代：Roche 454焦磷酸测序，Illumina Solexa测序，ABI SOLID测序 （目前主流）　　目前主要使用Illumina Solexa测序。“sequencing by synthesis”通过合成进行测序（De novo sequencing）。先"加adapter使目的片段与flowcell连接->PCR扩增目的片段（fluo-tag dNTP）->酶消化反义链只留原始目的片段，得到荧光标记目的片段簇->detect fluorescence(i.e.sequencing)第三代：单分子实时DNA测序（no PCR, 尚未广泛应用）　　单分子荧光测序（边合成边测序）；纳米孔测序（电信号）2.单端测序(Single-read)和双端测序(Paired-end和Mate-pair)的关系ref:https://blog.csdn.net/hanli1992/article/details/82982434main difference : construct sequencing library（接adapter方法不同）Single end:　　　　碎片化DNA->加sequencing primer(SP1)至片段一端后，两端加adapter（A1,A2）->利用adapter将碎片化目的片段固定于flowcell生成DNA簇（2链由于PCR与1链配对故而扩增的2链有SP1识别位点）->由于SP1测序方向的设计，只有2链会被sequencing而1链不会被测序　　“adapter有一对但SP只有一个，一次测序”pair end:　　　　与SE类似，但“adapter和SP都有一对，分别连在DNA两条链两个方向上，两次测序”　　先测2链->去除2链->用对读测序模块(Paired-End Module)引导2链互补链在原位置再生和扩增形成1链DNA簇->1链测序3.call mutation去重mutation来源：cell本身（我们真正想要得到的真实mutation）+ 碎片化DNA时引入error1 + PCR扩增error2细胞量不足或者提取DNA时发生降解都可能造成局部DNA浓度低，直接测序有可能损失该部分微量DNA，故而使用PCR扩增。PCR扩增产生的重复序列可能造成mutation calling 的不准确：　　（1）假阳性变异：原本量很多的DNA通过PCR更多了，故取样测序时可能被重复取样从而产生测序重复序列，这样error1&error2都被放大　　（2）假阴性变异：由于PCR Bias(PCR可能倾向于更多扩增含有某一碱基的DNA片段)，若这个片段恰巧是call mutation用的reference片段上的碱基，那么reference信号的增强也意味着mutation信号的减弱，从而被误判为不重要的mutationGATK、Samtools、Platpus等这种利用贝叶斯原理的变异检测算法都是认为所用的序列数据都不是重复序列（即将它们和其他序列一视同仁地进行变异的判断，所以带来误导），因此必须要进行标记（去除）或者使用PCR-Free的测序方案（这种方案目前正变得越来越流行，特别是对于RNA-Seq来说尤为重要，现在著名的基因组学研究所——Broad Institute，基本都是使用PCR-Free的测序方案）

您好！深圳和美医院产科专家为您解答。唐氏综合征的本质是由于21号染色体三倍体造成，即遗传物质含量异常所致。无创基因检测法直接对母体外周血中的遗传物质含量进行分析。通过Solexa测序技术，直接检测母体血浆中游离的胎儿DNA序列，通过序列对比将这些染色体片段精确定位到每个染色体上，不需要经过任何形式的信号转换，杜绝了假阳性和假阴性发生的可能，具有高度敏感性和特异性，是普通唐筛无法比拟的。而传统血清学方法所检测的对象是疾病所引起的一些现象，同时血清标志物水平存在个体差异，容易造成错检与漏检。因此，基因筛查方法具有更高的准确性。这就是无创基因检测的好处，深圳和美医院提供专业的无创基因检测服务，如果您有相关需要，请拨打0755-33919155。

指一个图形与另一个图形的相似程度 等你学到相似三角形你就会明白的了

索莱萨 301eb吹专业够了 纯银管吹的不费力 大曲子流畅性很好 不会破音 我本来用的301eb 现在又买了包金的那款 同比较国外所谓的中国代工的大牌子 起码索莱萨性价比很高

对DNA分子进行序列测定。1.对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。2.根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA 纳米球测序 （DNA nanoball sequencing）等。3.高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deep sequencing)。4.自从2005年454 Life Sciences公司（2007年该公司被Roche正式收购）推出了454 FLX焦磷酸测序平台（454 FLX pyrosequencing platform）以来，因为他们的拳头产品毛细管阵列电泳测序仪系列（series capillary array electrophoresis sequencing machines）遇到了两个强有力的竞争对手，曾推出过3730xl DNA测序仪（3730xl DNA Analyzer）的Applied BioSystem（ABI）。参考资料互动百科.百度[引用时间2018-3-15]

高通量是个相对的概念，相对于一开始一次测序只能对1个基因进行测序而言，一次可以检测几十几百个基因的测序技术就叫做高通量。低通量、中通量、高通量三者都是相对的概念哦。

去除带有荧光染料的残余ddNTP，不然会有染料峰的干扰；去除残留的酶等蛋白质，因为蛋白质带有苯环，也会对荧光信号的检测带来干扰；毛细管电泳时，要有buffer来保持稳定的离子强度和pH,所以还要再测序前去除盐离子

测序出来的序列每个碱基都对应有一个质量值（用字母或符号表示，可转为ASCII值减去64来看），这个质量值代表测出的这个碱基的准确性，如Solexa GAII测出质量值为20的话代表这个碱基有1%可能是错误的，为13的序列测为5%。如果这条序列普遍质量值较低或平均质量值小于20，也或N很多也算低质量序列。

与一代、二代测序相比,单分子测序技术的优势：由于单分子测序具有通量更高，仪器和试剂相对便宜、操作简单等的优势而比第二代测序技术有更广阔的应用空间。第一代指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少。第二代为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。利用DNA聚合酶合成与模板互补的DNA链， 在三维空间中记录模板位置和核苷酸序列信息， 再反向构建DNA模板的序列。除了DNA合成反应的三大要素（模板、酶、核苷酸）之外， 模板所处位置和反应循环中单色荧光标记的核苷酸顺序(如A、C、G、T )也是最终DNA序列能够完成的关键要素。如果反应所用的核苷酸标记着四种不同的荧光， 则每一次反应循环就需要切换不同波长的光以记录不同的碱基。以上内容参考：百度百科-单分子测序

高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA 纳米球测序 （DNA nanoball sequencing）等。 基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3"末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。

双脱氧链终止法采用DNA复制原理。 Sanger测序反应体系中包括目标DNA片段、脱氧三磷酸核苷酸（dNTP）、双脱氧三磷酸核苷酸（ddNTP）、测序引物及DNA聚合酶等。 测序反应的核心就是其使用的ddNTP：由于缺少3"-OH基团，不具有与另一个dNTP连接形成磷酸二酯键的能力，这些ddNTP可用来中止DNA链的延伸。此外，这些ddNTP上连接有放射性同位素或荧光标记基团，因此可以被自动化的仪器或凝胶成像系统所检测到。 Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa/Hiseq技术和ABI公司的SOLID技术标志第二代测序技术诞生。其中Roche公司的454测序系统是第二代测序技术中第一个商业化运营的测序平台。 其中Illumina市场规模占到75%以上，主要包括Miseq，Hiseq。下面U0001f447就主要介绍它的PE（Pair End双端）测序原理： 名词： flowcell： 测序反应的载体/容器，1个flowcell有8个lane lane： 测序反应的平行泳道，试剂添加、洗脱等过程的发生位置 tile： 每次荧光扫描的位置，肉眼是看不到的 双端测序： 可能序列比较长有四五百bp，两边各测120-150bp junction： 双端测序中间一些没有测到的区域 index(barcode)：一个lane通常要测多个样品，每个样品都加上特定的序列标签，用于区分不同样品。 flowcell构造：一个lane包含两列（swath），每一列有60个tile，每个tile会种下不同的cluster，每个tile在一次循环中会拍照4次（每个碱基一次） 打断以后会出现末端不平整的情况，用酶补平，所以现在的序列是平末端。 完成补平以后，在3"端使用酶加上一个特异的碱基A，加上A之后就可以利用互补配对的原则，加上adapter，这个adpater可以分成两个部分，一个部分是测序的时候需要用的引物序列，另一部分是建库扩增时候需要用的引物序列。 进行PCR扩增，使得我们的DNA样品浓度足够上机要求。 reads1 与 reads2 不发生重叠 flowcell是用于吸附流动DNA片段的槽道，测序就在此进行。上面构建好的文库中的待测序列事先配置好一定的浓度，经过这里的时候，会在特异的化学试剂作用下，强力随机地附着在lane上，与上面的短序列配对。上样的结果就是lane吸附住了冲过来的DNA，并且可以在表面进行桥式PCR扩增。 双端测序之Forward Strand ： 为什么Illumina测序会有长度限制呢？ Hiseq2000测序仪 测序仪搭配了两个flowcell，简称双流动槽。比较经典的Hiseq2500一次能产出700-800Gb数据（此处Gb为测序碱基数，不同于字节数的Gb） 数据量=单端reads长度 * 单端reads个数 * 2（PE) 测序深度=数据量大小 / 参考基因组大小 这是一个新的里程碑。以PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies的纳米孔单分子测序技术为标志，被称之为第三代测序技术。与前两代相比，最大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增，超长读长，平均达到10Kb-15Kb，是二代测序技术的100倍以上，值得注意的是在测序过程中这些序列的读长也不再是相等的。 1. https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2 2. https://zhuanlan.zhihu.com/p/20702684 3. https://mp.weixin.qq.com/s/tWHWA-f1RnP_XWY66p12pg 4. https://mp.weixin.qq.com/s/9KUY43lD5miLdPZJKgRV0A

我买了一支solexa301全银长笛，感觉不错，因为它用的是加厚的全银管，加上键子的密合度很好，所以发音灵敏，声音很有余地，做工很细，而且保修三年。就是比同类长笛略重一点点，性价比很好！

reads是指测出来的序列。M、G等都是和数学单位一样的。数据量1G指1G个碱基，*Mreads指*百万条reads.

测序得到的总碱基数与待测基因组大小的比值，即测序数据量的大小

基因（遗传因子）是具有遗传效应的DNA片段（部分病毒如烟草花叶病毒、HIV的遗传物质是RNA）。基因支持着生命的基本构造和性能。储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡等过程的全部信息。环境和遗传的互相依赖，演绎着生命的繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、衰、病、老、死等一切生命现象都与基因有关。它也是决定生命健康的内在因素。因此，基因具有双重属性：物质性（存在方式）和信息性（根本属性）。

二代测序就是一种技术，不过测序原理分几种，一种是illumina的边合成边测序原理，目前使用最多，还有就是life的h离子转换ph的测序方法，目前也比较多人用，因为比较便宜，最后一种是已经基本淘汰的罗氏的测序方法

二代测序覆盖度低是因为高通量测序。二代测序为高通量测序所以二代测序覆盖度低，二代测序覆盖度低是二代测序的特点。二代测序采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测

你说的1代2代指的是子代1代，2代吗？原本的双链DNA就是亲代，以亲本为模板复制产生的子代DNA就是子1代，子2代.....

以上三者的区别主要在于测序文库的构建方法上。 Single-Read测序(Single-read)首先将DNA样本进行片段化处理形成200-500bp的片段，引物序列连接到DNA片段的一端，然后末端加上接头，将片段固定在 flow cell上生成DNA簇，上机测序单端读取序列。该方式建库简单，操作步骤少，常用于小基因组、转录组、宏基因组测序。 Paired-end文库制备是指在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点，在第一轮测序完成后，去除第一轮测序的模板链，用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增，以达到第二轮测序所用的模板量，进行第二轮互补链的合成测序。 Mate-pair文库制备旨在生成一些短的DNA片段，这些片段包含基因组中较大跨度(2-10 kb)片段两端的序列，更具体地说：首先将基因组DNA随机打断到特定大小（2-10 kb范围可选）；然后经末端修复，生物素标记和环化等实验步骤后，再把环化后的DNA分子打断成400-600 bp的片段并通过带有链亲和霉素的磁珠把那些带有生物素标记的片段捕获。这些捕获的片段再经末端修饰和加上特定接头后建成mate-pair文库，然后上机测序。 主要原因在于Illumina的二代测序仪的读长短，相对于第一代sanger测序法（约1000bp）或者跟同属于NGS的其他测序仪相比短了许多。因此illumina发展了 Paired-end的建库测序技术。同时这种技术还大大推进了基因组学数据分析的发展。 例如，依赖于Paired-end的技术，假设一个DNA片段刚好跨越了重复序列区域（下图左侧）以及独特序列区域（下图右侧）。加入只读取Single-Read，我们只会获得红色实线的序列信息，也就是ATATATAT。接下来，当我们想要将这段read跟reference genome做比对的时候，便会出现问题：到底这段read是出自于红色实线的位置，还是红色虚线的位置？这个问题我们就可以使用Paired-end的技术来加以解决。由于Paired-end reads之间的距离为已知（在此我们设为34bp），我们便可以先定位绿色read的位置，在正确定位出左边红色re reads之间 ad的位置，而不至于将其误判在红色虚线的位置。如下图所示： 此外，根据我们内部的一个测试。在进行de novo assembly的时候，序列长度以及Paired-end的序列信息可以让我们得到最好的组装结果。透过下边可以发现，Paired-end的序列信息甚至比序列长度要来得更为重要。因此，建议大家在选择测序方案的时候，尽量选择Paired-end吧！ 总结，不管采用哪种方式，PE/MP测序的结果除了序列本身外还有 中间的距离信息 。距离信息可以用来判定组装后成对reads间的序列是否准确，也可用来帮助组装。这种测序方式可以用来解决基因组中的重复序列难题，被广泛采用。目前在采用双端测序法时，454平台建库最长（最长能达到20k），Illumina 建库长度最短（小于5k）。由于Solid和Solexa都是采用桥式扩增的方式，其本身自带Paired-End测序能力。而454和Ion Torrent要对打断后的片段进行环化、酶切，然后才能进行 mate-paired 测序。因此建库的成本会比单端测序的高 。 Paired-End reads是如何拼接的？

DNA测序（DNA sequencing）作为一种重要的实验技术，在生物学研究中有着广泛的应用。早在DNA双螺旋结构（Watson and Crick,1953)被发现后不久就有人报道过DNA测序技术，但是当时的操作流程复杂，没能形成规模。随后在1977年Sanger发明了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年A.M.Maxam和W.Gilbert发明了化学降解法。Sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了迄今为止DNA测序的主流。然而随着科学的发展，传统的Sanger测序已经不能完全满足研究的需要，对模式生物进行基因组重测序以及对一些非模式生物的基因组测序，都需要费用更低、通量更高、速度更快的测序技术，第二代测序技术（Next-generation sequencing)应运而生。这三个技术平台各有优点，454 FLX的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到400bp；Solexa测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成本也低，在数据量相同的情况下，成本只有454测序的1/10；SOLID测序的准确度高，原始碱基数据的准确度大于99.94%，而在15X覆盖率时的准确度可以达到99.999%，是目前第二代测序技术中准确度最高的。虽然第二代测序技术的工作一般都由专业的商业公司来完成，但是了解测序原理、操作流程等会对后续的数据分析有很重要的作用，下文将以Illumina/Solexa Genome Analyzer 测序为例，简述第二代测序技术的基本原理、操作流程等方面。

Illumina/Solexa Genome Analyzer测序的基本原理是边合成边测序。在Sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP，当DNA聚合酶合成互补链时，每添加一种dNTP就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测DNA的序列信息。

高通量是相对于第一代测序的，第一代测序只能一次测1个样品的1段序列，产生的数据量相对来说很小，而高通量测序一次能够产生的数据量在几十G上百G，可以一次测很多的样本。在2000年的时候，3700、MegaBace等仪器上的测序也是高通量测序，是相对手工测序或者跑平板胶来说的。不过到2005年以后，高通量测序就改指第二代测序（Next generation sequencing），454、Solexa(后改为Illumina）和SOLiD等第二代测序，比3730等第一代测序的通量提高了成千上万倍，甚至上亿倍，所以称为高通量测序。扩展资料原理：测序方案建立在双脱氧测序法(Sanger等，1977)的基础上。为了从每一克隆插入片段两端成对地进行测序，每一个质粒模板DNA板应配备两个384孔循环测序反应板。测序反应采用Big Dye Terminator chemistry version 3．1(AppliedBiosystems)和标准M13或常用正向引物和反向引物。测序反应通过BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。机械臂负责等分模板试样，起与反应液混合的作用，反应液含有双脱氧核苷酸、荧光标记的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和缓冲液。模板和反应板有条形码，且在BiomekFX移液操作工作站上有条形码读取器跟踪，确保模板和反应液转移中没有错误。30～40线性扩增步骤连续循环在MJResearchTetrads或9700热循环仪(Ap—pliedBiosystems)中进行。参考资料来源：百度百科-基因组高通量测序

　　“普通的基因测序”应该是指“常规DNA测序”吧，是用Sanger法（也就是双脱氧法）进行测序的方法，目前非常普遍的是直接用ABI 3730xl 进行的自动测序，基本上可以做到600bp-800bp的读长。　　高通量测序的概念其实是一个相对的概念，在2000年的时候，3700、MegaBace等仪器上的测序也是高通量测序，是相对手工测序或者跑平板胶来说的。　　不过到2005年以后，高通量测序就改指第二代测序（Next generation sequencing），454、Solexa(后改为Illumina）和SOLiD等第二代测序，比3730等第一代测序的通量提高了成千上万倍，甚至上亿倍，所以称为高通量测序。　　NGS的特点主要有：　　1、通量高。一个RUN能产生500Mb-600Gb的数据量。　　2、读长相对较短。454(约400-500bp)，llumina（100-250bp），SOLiD（75-100）。　　3、单位数据的成本非常低。现在很多项目测序的费用。已经非常低。生物信息分析成本变得更为重要了。

第一代指双脱氧末端终止法，扩增后通过毛细管电泳读取序列，每次获取数据量少第二代为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。第三代特点是单分子测序，多基于纳米科技，无需扩增，对单分链DNA/RNA直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序，核心特点是无需扩增所以成本更低

基因测序能测出cyp2d6多倍体提取基因组DNA，然后随机打断，电泳回收所需长度的DNA片段（0.2~5Kb），加上接头, 进行基因簇cluster制备或电子扩增E-PCR，最后利用Paired-End（Solexa）或者Mate-Pair（SOLiD）的方法对插入片段进行测序。然后对测得的序列组装成Contig，通过Paired-End的距离可进一步组装成Scaffold，进而可组装成染色体等。组装效果与测序深度与覆盖度、测序质量等有关。常用的组装有：SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。

“普通的基因测序”应该是指“常规DNA测序”吧,是用Sanger法（也就是双脱氧法）进行测序的方法,目前非常普遍的是直接用ABI 3730xl 进行的自动测序,基本上可以做到600bp-800bp的读长. 高通量测序的概念其实是一个相对的概念,在2000年的时候,3700、MegaBace等仪器上的测序也是高通量测序,是相对手工测序或者跑平板胶来说的. 不过到2005年以后,高通量测序就改指第二代测序（Next generation sequencing）,454、Solexa(后改为Illumina）和SOLiD等第二代测序,比3730等第一代测序的通量提高了成千上万倍,甚至上亿倍,所以称为高通量测序. NGS的特点主要有： 1、通量高,一个RUN能产生500Mb-600Gb的数据量 2、读长相对较短,454(约400-500bp),Illumina（100-250bp）,SOLiD（75-100） 3、单位数据的成本非常低,现在很多项目测序的费用,已经非常低,生物信息分析成本变得更为重要了.

1）测序文库的构建（Library Construction）首先准备基因组（虽然测序公司要求样品量要达到200ng，但是Gnome Analyzer系统所需的样品量可低至100ng,能应用在很多样品有限的实验中），然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头（Adaptor）。如果是转录组测序，则文库的构建要相对麻烦些，RNA片段化之后需反转成cDNA，然后加上接头，或者先将RNA反转成cDNA，然后再片段化并加上接头。片段的大小（Insert size）对于后面的数据分析有影响，可根据需要来选择。对于基因组测序来说，通常会选择几种不同的insert size，以便在组装（Assembly）的时候获得更多的信息。2）锚定桥接（Surface Attachment and Bridge Amplification）Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell又被细分成8个Lane，每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。3）预扩增（Denaturation and Complete Amplification）添加未标记的dNTP 和普通Taq 酶进行固相桥式PCR 扩增，单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性，释放出互补的单链，锚定到附近的固相表面。通过不断循环，将会在Flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。4）单碱基延伸测序（Single Base Extension and Sequencing）在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相对应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号，并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。从荧光信号获取待测片段的序列信息的过程叫做Base Calling，Illumina公司Base Calling所用的软件是Illumina"s Genome Analyzer Sequencing Control Software and Pipeline Analysis Software。读长会受到多个引起信号衰减的因素所影响，如荧光标记的不完全切割。随着读长的增加，错误率也会随之上升。5）数据分析（Data Analyzing）这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分，但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列，要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的Contigs甚至是整个基因组的框架，或者把这些序列比对到已有的基因组或者相近物种基因组序列上，并进一步分析得到有生物学意义的结果。

454测序：DNA文库制备→emPCR→上机测序 Solexa测序：文库制备→Cluster扩增→边合成边测序 SOLiD测序：样品制备→Emulsion PCR和底物准备→测序反应→图像收集→

用的是哪家公司的仪器？一次测序需要的时间大概是多少

问题一：基因测序中的gap是什么意思 基因(遗传因子)是具有遗传效应的DNA片段。基因支持着生命的基本构造和性能。储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡过程的全部信息。环境和遗传的互相依赖，演绎着生命的繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、衰、病、老、死等一切生命现象都与基因有关。它也是决定生命健康的内在因素。因此，基因具有双重属性:物质性(存在方式)和信息性(根本属性)。 带有遗传讯息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传讯息的表现。组成简单生命最少要265到350个基因。(这涉及到了基因工作组的力量，人类的基因工作组与果蝇的基本相似) 问题二：什么是普通的基因测序，它和高通量测序有什么区别吗 佳学基因为你解答，根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA 纳米球测序 （DNA nanoball sequencing）等。 高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deep sequencing)。 问题三：什么是普通的基因测序，它和高通量测序有什么区别吗 “普通的基因测序”应该是指“常规DNA测序”吧，是用Sanger法（也就是双脱氧法）进行测序的方法，目前非常普遍的是直接用ABI 3730xl 进行的自动测序，基本上可以做到600bp-800bp的读长。 高通量测序的概念其实是一个相对的概念，在2000年的时候，3700、MegaBace等仪器上的测序也是高通量测序，是相对手工测序或者跑平板胶来说的。 不过到2005年以后，高通量测序就改指第二代测序（Next generation sequencing），454、Solexa(后改为Illumina）和SOLiD等第二代测序，比3730等第一代测序的通量提高了成千上万倍，甚至上亿倍，所以称为高通量测序。 NGS的特点主要有： 1、通量高。一个RUN能产生500Mb-600Gb的数据量。 2、读长相对较短。454(约400-500bp)，llumina（100-250bp），SOLiD（75-100）。 3、单位数据的成本非常低。现在很多项目测序的费用。已经非常低。生物信息分析成本变得更为重要了。 问题四：基因测序panel什么意思 基因测序组合套装吧，上下文应该会有介绍的，或者你有啥具体的想了解

测序后的DNA序列与预测的有几个碱基不同DNA测序（DNA sequencing）作为一种重要的实验技术，在生物学研究中有着广泛的应用。早在DNA双螺旋结构（Watson and Crick,1953)被发现后不久就有人报道过DNA测序技术，但是当时的操作流程复杂，没能形成规模。随后在1977年Sanger发明了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年A.M.Maxam和W.Gilbert发明了化学降解法。Sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了迄今为止DNA测序的主流。然而随着科学的发展，传统的Sanger测序已经不能完全满足研究的需要，对模式生物进行基因组重测序以及对一些非模式生物的基因组测序，都需要费用更低、通量更高、速度更快的测序技术，第二代测序技术（Next-generation sequencing)应运而生。这三个技术平台各有优点，454 FLX的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到400bp；Solexa测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成本也低，在数据量相同的情况下，成本只有454测序的1/10；SOLID测序的准确度高，原始碱基数据的准确度大于99.94%，而在15X覆盖率时的准确度可以达到99.999%，是目前第二代测序技术中准确度最高的。虽然第二代测序技术的工作一般都由专业的商业公司来完成，但是了解测序原理、操作流程等会对后续的数据分析有很重要的作用，下文将以Illumina/Solexa Genome Analyzer 测序为例，简述第二代测序技术的基本原理、操作流程等方面。

Pcr之后如何能快速的测得DNA浓度是否够测序高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA 纳米球测序 （DNA nanoball sequencing）等。 基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3"末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。它是一台能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等全自动电脑控制的测定DNA片段的碱基顺序或大小和定量的高档精密仪器。PE公司还提供凝胶高分子聚合物，包括DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)。这些凝胶颗粒孔径均一，避免了配胶条件不一致对测序精度的影响。它主要由毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件组成。电脑中则包括资料收集，分析和仪器运行等软件。它使用最新的CCD摄影机检测器，使DNA测序缩短至2.5h，PCR片段大小分析和定量分析为10～40min。由于该仪器具有DNA测序，PCR片段大小分析和定量分析等功能，因此可进行DNA测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析，临床上可除进行常规DNA测序外，还可进行单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测、HLA配型、法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定等。