ep管是什么管

1、先打开离心机样品仓盖子，检查是否存在异常，如有异常，先排除异常，盖好盖子，接通电源。2、空转测试正常后，关闭电源，打开样品仓，将载有样品的试管对称放置在样品仓试管孔里。3、分离血液样品的离心转速可以设定在3500至4000转每分钟，开启电源进行离心。4、离心结束关闭电源，打开样品仓盖子。5、取出样品仓里面的样品，观察离心效果，如果效果达不到要求，继续设定参数或增加时间或增加转速等进行调整即可。EPPENDORF离心机是eppendorf生产的一款设备，应用于活细胞处理。

http://emuch.net/html/200908/1495993.html

EP ：Epoxy epoxide 分类：化学化工中文：环氧树脂

EPPENDORF管是微量离心管；在40年前,全世界第一只eppendorf 微型离心管诞生于德国eppendorf公司,第一次为分子生物学微量操作实验提供了一种全新概念； Tris碱即为Tris,Tris碱经过hcl调ph后即为tris-cl.也就是tris酸一般Tris全名是Tris Base ,tris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷 Tris是一种生物碱,常用于生物实验中配制各种pH值的缓冲液.1M的Tris溶液的pH值大约是10～11.一般调Tris溶液的pH值是用盐酸. Tris-HCl是三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的英文名称的缩写,用作生物缓冲剂英文名 Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride 别名 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol hydrochloride; Tromethane hydrochloride; Trizma hydrochloride 产品名称 2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇盐酸盐; 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 分子式 C4H11NO3.HCl 分子量 157.59

eppendorf是一家德国公司的名字，最初尤其以生产的1.5毫升离心管为名。后来就把1.5毫升的管子叫做EP.离心管有很多规格，不都叫EP管的。

从各个维度来看，上海艾本德是一家不错的公司。公司工作氛围好，学习氛围浓，每个人都有自己努力的方向和目标，同事相处和谐，福利较为齐全，节假日休息也比较正规，前景较好。同时，公司也会安排调休或者补助，以避免员工过度加班。因此，根据以上信息，上海艾本德值得去。但是，最终是否适合你，还需要根据你的个人情况和职业发展目标来决定。

EP（eppendorf）管是一种小型的离心管。

Eeppendorf是德国的一个生产分子生物学方面的仪器、耗材的品牌，比如实验室离心机、PCR仪、各种规格的移液器及吸头等等；他家的东西质量可靠，在分生物学实验中非常常见，而且常常作为试验和文献中所采用的标准；一般来说Eeppendorf管是指Eeppendorf生产的离心管或者收集管一类的。

用于-70的，我做过的不关生物组织、蛋白什么的，一般是为了检测离心血中的药物成分或尿中的药物成分

1964年Eppendorf 推出了第一台离心机，作为Eppendorf 微量体积系统的组成部分，这也是全球范围内生命科学研究领域的伟大革新。时至今日，Eppendorf 的名字仍旧是 创意的设计、创新的技术和禁得起时间考量的可信赖的质量的代名词。Eppendorf离心机除了高速和高通量外，还具有无与伦比的人体工程学操作和卓越的温控性能。2020 年 3 月，德国 Eppendorf 股份公司宣布收购日本 Koki 集团离心机业务，并将后者高端品牌 himac 纳入旗下。Eppendorf 中国有限公司从 2021 年 4 月 1 日开始销售 himac 高品质大容量落地式和高速离心机，随后会逐渐拓展到其他离心机产品线。himac 高品质产品线的强势加盟，有助于 Eppendorf 为所有离心机细分市场提供满足其需求的产品，从而更好地服务于生命科学、纳米材料、药物开发和医学检测等前沿应用领域。此次战略性收购将夯实 Eppendorf 在多功能台式离心机、落地式和超速离心机等领域的领先者角色，并进一步巩固其在制药、生命科学、临床等用途的全球高端离心机制造商的卓越市场地位。

大家不都按照英语的发音规则拼的么？音标打不出来，就是“艾彭道夫”。至于德国人自己怎么念的，管他呢。

是枪体本身还是枪头？枪头是要灭菌的。eppendorf的枪是可以半枪灭菌的，需要按照说明书拆下来把枪管拿去灭菌。随枪附带的枪头如果密封完好就不用灭菌。

1.按下键“BCA”选择蛋白质显色反应的方法； 2.设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围.按下键“Parameter”用上下键 进行选择和参数调整. 3.将空白对照置入样品孔； 4.按下键“Blank”； 5.仪器记录空白对照,设置为0.000A； 6.将第一个标准品或样品（如需沿用已存储的标准曲线,可直接测样品）置入样品孔； 7.按下“Sample”或“Standard”； 8.依次测定标准品或样品,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果.

eppendrf好

机盖尚未正确闭锁。可以按Open键开盖并将机盖再次关紧即可。离心机是利用离心力，分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械，离心机主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开，或将乳浊液中两种密度不同，又互不相溶的液体分开，它也可用于排除湿固体中的液体，特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物，利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点，有的沉降离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。

1300转速。eppendorf的转速进制为10进1，当数值为13000的时候，就是1300转速，所以13000是1300转速eppendorf。

设一个高的退火温度,设一个低的退火温度,然后会自动计算出中间每排孔的退火温度,你只要用最低和最高的那两个就够了.可以打EPPENDORF的技术支持电话问具体怎么操作.

有说明书的啊。随枪附带的除了说明书外应该还有一个类似小扳手的工具。用这个小扳手在枪的尾部对准卡位适量的转一下，再校准，不行的话再转，再校准。

RPM =revolutions per minute 每分钟多少转

有水货，说白了就是走私进来的，国内是不负责维护保修工作。假货目前比较少

按压的时候有两个档位，不要一次按的太重你就会感觉到~量程不准可能由于移液器量程曾经超量使用过，多吸应该是你按得太重，一般第一档是你要取得标准量~

国产的大龙可以 进口的普兰德 进口的价格高些 质量肯定是很好的

仪器维修，艾本德离心机，生物仪器维修，呢称是我抠抠

【上海巴玖】提示您：建议您调准下。看看说明书，除了说明书外应该还有一个类似小扳手的工具。用这个小扳手在枪的尾部对准卡位适量的转一下，再校准，不行的话再转，再校准。

艾本德离心机显示error3表示出现了故障。error3是错误代码，3这个代码是低压保护的故障，一般情况下是属于缺氟造成的，只要检查低压压力是否在4.5的样子，假如低了，那就要查一下是否有漏氟，需要及时的补氟。

eppendorf移液器有假货的您好，答题不易如有帮助请采纳，谢谢！

error 30 表示30号错误，如果实在搞不懂，可以咨询赫西离心机，他们专业维修eppendorf离心机

如果是全新的EPP的枪一般会偏大点，如果是使用过后的则需要校准后才知道，国标允许误差0.5微升是正负20%，ISO8655标准好像是正负16%吧，满足这个你所要参照要求就是符合标准要求。也就是准的。谢谢！~

降速是速度下降的一个快慢程度的，忘了是0快还是9快了，可以分别试下，看看哪个降得快些

找一下移液器的销售人员，问问他艾本德的售后，据说艾本德的枪不怎么好修，但是挺好用是真的。1-10ul的枪，你如果不是售后的话建议不要自己拆，要不然很容易就掉零部件。

检查一下lid lock 传感器部分

CHO原则上使用方波进行电穿孔，指数波可能需要转换，Eppendorf这个电转化仪是指数波的，按照正常来说CHO电转电压在180V，脉冲时间10-15ms，细胞浓度差不多10的6次方到7次方/ML，质粒浓度大概100ug/ml，如果换成指数波，电压差不多100V左右，详细可以找威尼德电穿孔仪了解了解，这个有时候电转缓冲液配置也很重要，一般来说转化效率和存活率能达到百分之七十左右

生物反应器是一种为细胞生长提供优化的物理和化学环境的装置。细胞相对较为脆弱，且氧气是其生长的必要成分，所以持续不断地通气和搅拌是生物反应器不可或缺的功能，但该通气和搅拌产生的剪切力又会对细胞的生长造成物理伤害，制约着细胞大规模生产。这给生物反应器厂家提出了工艺挑战。一方面，目前市面上的少数是悬浮培养工艺，而多数则是选择一些载体介质来实现单层贴壁培养工艺，进而实现一定程度的大规模。Eppendorf 生物工艺部开发的Fibra-Cel 片状载体为固体支持材料，适合贴壁的哺乳动物细胞、动物细胞以及昆虫细胞分泌表达蛋白，其低剪切力对细胞实现保护，经验证，搭载Fibra-Cel 片状载体的细胞密度相较传统微载体培养高出 10 倍，其3D网状孔隙便于高营养物质和氧传递，具有较高的表面积，且床层压力损失小，能有效进行规模放大。此外，Eppendorf 还提供反应器适配且优化的标准搅拌桨，以及可支持连续及灌流培养过程的特殊搅拌桨：旋转过滤器、细胞提升式搅拌桨和填充床式搅拌桨。另一方面，除了硬件设备的精密和高端制造，细胞生长过程工艺中的参数监控亦至关重要，如PH、温度、溶氧量、废弃物等，这对软件系统也提出了严格的挑战。Eppendorf 生物过程软件，不仅仅是生物过程控制，我们提供 BioCommand 和 DASware Control 软件和数据采集（SCADA）软件组合成先进生物过程控制，功能全面的 DASware 软件套件是新一代生物过程管理软件。DASware 软件套件，新一代生物过程管理系统，是一套智能、灵活的软件解决方案，可提高生物过程研发效率。它可让反应器外接实验设备，进行复杂数据及信息管理，使用过程优 化设计（DoE）工具远程控制生物过程。DASware 可控制任何 Eppendorf 台式反应器系统。BioCommand 软件提升您在发酵及细胞培养过程中进行数据监测、控制及记录的能力。 三种不同套装软件提供对研发、优化工艺及 满足法规对安全性和数据审查的要求。我们致力于提供高精尖的仪器设备，并提供真诚，可靠的服务和解决方案，以助力您保持卓越性能并更大效率地推动您从早期研发至大规模生产的进程。

润滑油是专用的~好多移液器都带一瓶~

不是很适配 容易掉

你直接打eppendorf售后电话，他们会联系你的

插头插座接触不良。离心机就是利用离心力使得需要分离的不同物料得到加速分离的机器，当在使用时出现显示错误error6时是插头插座接触不良的原因，只需将插头拔掉重新插上即可。

EPPENDORF管是微量离心管；在40年前,全世界第一只eppendorf 微型离心管诞生于德国eppendorf公司,第一次为分子生物学微量操作实验提供了一种全新概念； Tris碱即为Tris,Tris碱经过hcl调ph后即为tris-cl.也就是tris酸一般Tris全名是Tris Base ,tris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷 Tris是一种生物碱,常用于生物实验中配制各种pH值的缓冲液.1M的Tris溶液的pH值大约是10～11.一般调Tris溶液的pH值是用盐酸. Tris-HCl是三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的英文名称的缩写,用作生物缓冲剂英文名 Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride 别名 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol hydrochloride; Tromethane hydrochloride; Trizma hydrochloride 产品名称 2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇盐酸盐; 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 分子式 C4H11NO3.HCl 分子量 157.59

EPPENDORF管是微量离心管；在40年前,全世界第一只eppendorf 微型离心管诞生于德国eppendorf公司,第一次为分子生物学微量操作实验提供了一种全新概念；Tris碱即为Tris，Tris碱经过hcl调ph后即为tris-cl。也就是tris酸一般Tris全名是Tris Base ,tris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷Tris是一种生物碱，常用于生物实验中配制各种pH值的缓冲液。1M的Tris溶液的pH值大约是10～11。一般调Tris溶液的pH值是用盐酸。Tris-HCl是三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的英文名称的缩写, 用作生物缓冲剂英文名 Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride 别名 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol hydrochloride; Tromethane hydrochloride; Trizma hydrochloride 产品名称 2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇盐酸盐; 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 分子式 C4H11NO3.HCl 分子量 157.59

有说明书的啊。随枪附带的除了说明书外应该还有一个类似小扳手的工具。用这个小扳手在枪的尾部对准卡位适量的转一下，再校准，不行的话再转，再校准。

有说明书的啊。随枪附带的除了说明书外应该还有一个类似小扳手的工具。用这个小扳手在枪的尾部对准卡位适量的转一下，再校准，不行的话再转，再校准。

负载过重。由于转化器负载过重或者系统不完全，导致艾本德离心机出现错误代码6。离心机是利用离心力，分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。

从细菌中分离质粒 DNA 的具体操作 一、材料含PBS的E.coliDH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管（又称eppendorf管），离心管架。二、设备微量取液器（20μl，200μl，1000μl），台式高速离心机，恒温振荡摇床，高压蒸汽消毒器（灭菌锅），涡旋振荡器，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置和恒温水浴锅等。三、试剂1、LB液体培养基（Luria-Bertani）：称取蛋白胨（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeastextract）5g，NaCl10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调pH至7.5，加去离子水至总体积1升，高压下蒸气灭菌20分钟。2、LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉，高压灭菌。3、氨苄青霉素（Ampicillin，Amp）母液：配成50mg/ml水溶液，-20℃保存备用。4、溶菌酶溶液：用10mmol/LTris·Cl（pH8.0）溶液配制成10mg/ml，并分装成小份（如1.5ml）保存于-20℃，每一小份一经使用后便予丢弃。5、3mol/lNaAc（pH5.2）：50ml水中溶解40.81gNaAc·3H2O，用冰醋酸调pH至5.2，加水定容至100ml，分装后高压灭菌，储存于4℃冰箱。6、溶液1:50mmol/L葡萄糖，25mmol/ L T r i s. Cl（pH8.0），10mmol/LEDTA（pH8.0）。溶液Ⅰ可成批配制，每瓶100ml，高压灭菌15分钟，储存于4℃冰箱。7、溶液Ⅱ：0.2mol/LNaOH（临用前用10mol/LNaOH母液稀释），1%SDS。8、溶液Ⅲ：5mol/LKAc60ml，冰醋酸11.5ml，H2O28.5ml，定容至100ml，并高压灭菌。溶液终浓度为：K+3mol/L，Acˉ5mol/L。9、RNA酶A母液：将RNA酶A溶于10mmol/LTris·Cl（pH7.5），15mmol/LNaCl中，配成10mg/ml的溶液，于100℃加热15分钟，使混有的DNA酶失活。冷却后用1.5mleppendorf管分装成小份保存于-20℃。10、饱和酚：市售酚中含有醌等氧化物，这些产物可引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联，应在160℃用冷凝管进行重蒸。重蒸酚加入0.1%的8-羟基喹啉（作为抗氧化剂），并用等体积的0.5mol/LTris·Cl（pH8.0）和0.1mol/LTris·Cl（pH8.0）缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到7.6以上，因为酸性条件下DNA会分配于有机相。11、氯仿：按氯仿：异戊醇=24：1体积比加入异戊醇。氯仿可使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开，异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫。按体积/体积=1：1混合上述饱和酚与氯仿即得酚/氯仿（1:1）。酚和氯仿均有很强的腐蚀性，操作时应戴手套。12、TE缓冲液：10mmo/LTris·Cl（pH8.0），1mmol/LEDTA（pH8.0）。高压灭菌后储存于4℃冰箱中。13、STET：0.1mol/LNaCl，10mmol/LTris·Cl（pH8.0），10mmol/LEDTA（pH8.0），5%TritonX-100。14、STE：0.1mol/LNaCl，10mmol/LTris·Cl（pH8.0），1mmol/LEDTA（pH8.0）。15、电泳所用试剂：⑴TBE缓冲液（5×）：称取Tris54g，硼酸27.5g，并加入0.5MEDTA（pH8.0）20ml，定溶至1000ml。⑵上样缓冲液（6×）：0.25%溴酚蓝，40%（w/v）蔗糖水溶液。 一、细菌的培养和收集将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基（含50μg/mlAmp）中，37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5mlLB液体培养基（含50μg/mlAmp）中，37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。二、质粒DNA少量快速提取质粒DNA小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样，所得DNA有一定纯度，可满足限制酶切割、电泳分析的需要。（一）、煮沸法1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中，4℃下12000转离心30秒。2、弃上清，将管倒置于卫生纸上几分钟，使液体流尽。3、将菌体沉淀悬浮于120mlSTET溶液中，涡旋混匀。4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液（10mg/ml），涡旋振荡3秒钟。5、将eppendorf管放入沸水浴中，50秒后立即取出。6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。8、取20ml进行电泳检查。[注意]1.对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。2.煮沸法中添加溶菌酶有一定限度，浓度高时，细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。3.提取的质粒DNA中会含有RNA，但RNA并不干扰进一步实验，如限制性内切酶消化，亚克隆及连接反应等。（二）、碱法1、取1.5ml培养液倒入1.5mleppendorf管中，4℃下12000g离心30秒。2、弃上清，将管倒置于卫生纸上数分钟，使液体流尽。3、菌体沉淀重悬浮于100μl溶液Ⅰ中（需剧烈振荡），室温下放置5-10分钟。4、加入新配制的溶液Ⅱ200μl，盖紧管口，快速温和颠倒eppendorf管数次，以混匀内容物（千万不要振荡），冰浴5分钟。5、加入150μl预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，并倒置离心管，温和振荡10秒，使沉淀混匀，冰浴中5-10分钟，4℃下12000g离心5-10分钟。6、上清液移入干净eppendorf管中，加入等体积的酚/氯仿（1:1），振荡混匀，4℃下12000g离心5分钟。7、将水相移入干净eppendorf管中，加入2倍体积的无水乙醇，振荡混匀后置于-20℃冰箱中20分钟，然后4℃下12000g离心10分钟。8、弃上清，将管口敞开倒置于卫生纸上使所有液体流出，加入1ml70%乙醇洗沉淀一次，4℃下12000g离心5-10分钟。9、吸除上清液，将管倒置于卫生纸上使液体流尽，真空干燥10分钟或室温干燥。10、将沉淀溶于20μlTE缓冲液（pH8.0，含20μg/mlRNaseA）中，储于-20℃冰箱中。[注意]1.提取过程应尽量保持低温。2.提取质粒DNA过程中除去蛋白很重要，采用酚/氯仿去除蛋白效果较单独用酚或氯仿好，要将蛋白尽量除干净需多次抽提。3.沉淀DNA通常使用冰乙醇，在低温条件下放置时间稍长可使DNA沉淀完全。沉淀DNA也可用异丙醇（一般使用等体积），且沉淀完全，速度快，但常把盐沉淀下来，所以多数还是用乙醇。（三）、Wizard少量DNA纯化系统Promega公司的Wizard少量DNA纯化系统可快速有效的抽提质粒DNA，整个过程只需15分钟。提取的质粒可直接用于DNA测序、酶切分析和体外转录等。该系统中所含试剂和柱子可以用于50次1-3ml质粒培养液的分离和纯化，试剂包括10ml细胞悬浮液，10ml细胞裂解液；10ml中和液，50mlWizard少量DNA纯化树脂，50ml柱洗液（使用前加95%乙醇至120ml）和50支Wizard微型柱。1、1-3ml过夜培养细胞液4℃下12000g离心1-2分钟。2、去除上清液，菌体细胞悬浮于200μl细胞悬浮液中，充分混合，并移入eppendorf管中。3、加200μl细胞裂解液，颠倒离心管数次，直到溶液变清亮。4、加200μl中和液，颠倒离心管数次。5、4℃下12000g离心5分钟，取上清液于新的eppendorf管中。6、加1mlWizard少量DNA纯化树脂，颠倒离心管数次以充分混匀。7、取一次性注射器，取出注塞，并使注射筒与Wizard微型柱连接，用移液枪将上述混合液加入注射筒中，并用注塞轻推，使混合物进入微型柱。8、将注射器与微型柱分开，取出注塞，再将注射筒与微型柱相连，加入2ml柱洗液，并用注塞轻推，使柱洗液进入微型柱。9、取出微型柱置于eppendorf管中，离心2分钟以除去微型柱中的柱洗液。10、将微型柱放在一个新eppendorf管中，加50μlTE（或水）于微型柱中，静止1分钟后，4℃下12000g离心20秒。11、丢弃微型柱，将eppendorf管中的质粒DNA贮于4℃或-20℃冰箱。[注意]树脂使用前应充分混匀，如有结晶，可将树脂用25-37℃水浴处理10分钟。三、质粒DNA的大量提取和纯化在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA，为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化，常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。（一）、碱法1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250ml，4℃下5000g离心15分钟，弃上清，将离心管倒置使上清液全部流尽。2、将细菌沉淀重新悬浮于50ml用冰预冷的STE中（此步可省略）。3、同步骤1方法离心以收集细菌细胞。4、将细菌沉淀物重新悬浮于5ml溶液I中，充分悬浮菌体细胞。5、加入12ml新配制的溶液Ⅱ，盖紧瓶盖，缓缓地颠倒离心管数次，以充分混匀内容物，冰浴10分钟。6、加9ml用冰预冷的溶液Ⅲ，摇动离心管数次以混匀内容物，冰上放置15分钟，此时应形成白色絮状沉淀。7、4℃下5000g离心15分钟。8、取上清液，加入50mlRNA酶A（10mg/ml），37℃水浴20分钟。9、加入等体积的饱和酚/氯仿，振荡混匀，4℃下12000g离心10分钟。10、取上层水相，加入等体积氯仿，振荡混匀，4℃下12000g离心10分钟。11、取上层水相，加入1/5体积的4mol/LNaCl和10%PEG（分子量6000），冰上放置60分钟。12、4℃下12000g离心15分钟，沉淀用数ml70%冰冷乙醇洗涤，4℃下12000g离心5分钟。13、真空抽干沉淀，溶于500mlTE或水中。[注意]1.提取过程中应尽量保持低温。2.加入溶液Ⅱ和溶液Ⅲ后操作应混和，切忌剧烈振荡。3.由于RNA酶A中常存在有DNA酶，利用RNA酶耐热的特性，使用时应先对该酶液进行热处理（80℃1小时），使DNA酶失活。（二）、Wazard大量DNA纯化系统碱法大量提取DNA往往需要很长的时间.Promega公司的Wiazrd大量DNA纯化系统既简单又快速，只需要离心和真空抽干，这个系统可以从500ml培养液中在3小时以内获得1mg以上的高质量的质粒DNA（200-20000bp）。该系统不需要酚和氯仿抽提，纯化后的DNA溶于水或TE缓冲液中，不含任何盐份，可以直接用于DNA序列分析和酶切反应，也可以用于在核酸酶抑制剂（如RNasin）存在的条件下进行体外转录反应等。该系统中含有的试剂和柱子可以用于10次100-500ml质粒培养液的分离和纯化，试剂包括：150ml细胞悬浮液，150ml细胞裂解液，150ml中和液，100mlWizard大量DNA纯化树脂，125mlWizard柱子洗脱溶液和10支Wizard带有存储离心管的柱子。1、100-500ml细胞培养液置离心管中，22-25℃下5000g离心10分钟，所得细胞沉淀充分悬浮于细胞悬浮液中。2、加15ml细胞裂解溶液并轻轻混合，可以反复倒置混合，但不能用涡旋振荡，细胞裂解完全时，溶液会变清，这一步需要20分钟。3、加15ml中和溶液，立即反复倒置离心管数次，并使之混匀。4、14000g，22-25℃离心15分钟。5、小心地将上清液吸出并移至一个新离心管中。6、加0.5倍体积的异丙醇，混合均匀，14000g22-25℃下离心15分钟。7、弃上清，悬浮DNA沉淀于2mlTE缓冲液中。这一步中也许有的沉淀不能溶解。8、加10mlWizard大量DNA纯化树脂溶液，并涡旋混合。9、每一个样品，使用一支Wizard大量柱子，柱子的头插在真空器上（Promega产品，与此配套）。10、将树脂/DNA混合液转入柱子中，真空抽取树脂/DNA混合液。11、将树脂/DNA混合液抽干后，加13ml柱子洗脱溶液至离心管中，对管底部的树脂/DNA进行洗脱（柱子一边旋转一边加入洗脱液），并加入柱子中。12、真空抽干所加入的洗脱。13、再加12ml柱子洗脱液进柱子并抽干。14、加入5ml80%乙醇漂洗柱中的树脂，柱子真空抽干后将柱子放入用户提供的离心管中，2500rpm（1300g）离心5分钟。15、取出柱子，真空抽干5分钟，再将柱子放入系统中所提供的离心管中，2500rpm（1300g）离心5分钟。16、在柱子中加入1.5ml65-70℃预热过的灭菌重蒸水或TE，1分钟后2500rpm（1300g）离心柱子/离心管5分钟。17、取出柱子，离心管中溶液即为提取的质粒DNA，可以直接放在离心管中，盖上盖子，储存在4℃或-20℃备用。[注意]1.在使用之前，系统所提供的柱子洗脱液按1：1加入125ml95%乙醇。2.纯化树脂必须混匀后再用.（三）、Sephrose2B柱纯化质粒DNA碱法提取的质粒DNA即使用RNA酶处理，仍会含有少量RNA。当有些试验需无RNA污染的DNA制品时，则需进行进一步纯化。一般常用Sepharose2B或Sepharose4B进行纯化，该方法具有快速，条件温和，重复性好，载体物质可以再利用等优点，因而已广泛用于质粒DNA纯化。1、将Sepharose2B经含0.1%SDS的TE（pH8.0）平衡后上柱。2、将至多1ml的DNA溶液铺在Sepharase2B柱上。3、待DNA溶液完全进入柱内后立即在柱的上部连接含有0.1%SDS的TE（pH8.0）贮液瓶。4、以1ml流出液为1份进行收集。5、对每一管测定其OD260值，以确定哪些管中含有质粒DNA。通常质粒DNA在柱上流出的第一个峰中。6、合并所有含质粒的洗脱液，用等体积的酚/氯仿（1:1）抽提，4℃下12000g离心2分钟，将上层水相转入新管。7、加入2倍体积的冰冷无水乙醇，-20℃下沉淀10分钟，然后4℃下12000g离心10分钟，弃去上清液。8、沉淀加70%乙醇洗涤，4℃下12000g离心10分钟，弃去上清液。9、沉淀真空抽干，重新溶于TE或无菌水中。[注意]在装柱过程中，要防止柱床中出现断裂或气泡现象，要使界面保持平整。对新装成的柱，应用含0.1%SDS的TE平衡，以使柱内的凝胶均匀。

材质：当前，市场上吸头基本上都是用聚丙烯塑料（化学惰性高，使用温度范围广的无色透明塑料）做的。不过，同样是聚丙烯，品质差别也会很大：高品质的吸头一般都是用天然聚丙烯，而低廉的吸头则很可能用回收的聚丙烯塑料（这种情况下，我们zui多能说其主要成份是聚丙烯）。除此之外，多数吸头在制造过程中还会加入少量的添加剂，常见的有：1，显色材料。在市场上俗称的蓝枪头（1000ul）和黄枪头（200ul），就是在聚丙烯中加入了相应的显色材料（我们希望是高品质的色母粒，而非低廉的工业颜料）；2，脱模剂。帮助吸头在成形后迅速与模具脱离。当然，添加剂越多，在移液过程中发生不受欢迎的化学反应的概率越高。所以zui好是不加添加剂！但由于对生产工艺要求比较高，完全不加添加剂的吸头在市场上凤毛麟角。包装：吸头的包装形式主要有袋装和盒装。在相对成熟的市场，盒装占多数；在中国，袋装目前是绝对主流——主要还是袋装便宜。所谓袋装，就是把吸头装在塑料自封袋里，每袋500个或1000个（大量程吸头每袋的数量会少很多）。多数用户会买来袋装吸头后，再人工把吸头放入吸头盒里。虽然中国的劳动力比较廉价，但这样也增加了污染吸头的机会！另外，近几年还出现了一种新的包装形式，就是补充装（8板或10板吸头叠成塔状，可以不接触吸头而迅速的把吸头装入吸头盒）。这种吸头需要更少的储存空间，并大幅减少对塑料的使用，从而达到环保的目的。虽然这种形式在国内的份额还微乎其微，但长远来说必定是大势所趋。价格：我们首先讨论袋装吸头（基于10ul、200ul和1000ul三种规格，每袋1000个）。袋装吸头主要分成三个档次：一，进口吸头。二，进口品牌、国内生产；三，国产吸头。其次是盒装吸头和补充装吸头，一般盒装吸头的价格是袋装吸头的1.5-2.5倍，而补充装吸头比盒装吸头便宜10-20％。除了前文讨论的材质、包装和价格，还有一些平常不会提到但同样非常重要的内容。特殊吸头：所谓特殊吸头，是针对特殊样品或特殊应用而专门设计的吸头。主要有下面这么几类：一，凝胶吸头（点样吸头）。吸头尖部或扁平或很细，主要为电泳实验所用；二，广口吸头。吸头尖部口径大于平常，主要用于移取蛋白质等大分子溶液；三，低吸附吸头。吸头内壁经过特殊处理，减少了表面吸附力，用于移取粘性液体；四，加长吸头。用于在容量瓶等容器内的取液；五，外置活塞式吸头。主要用在特殊移液器上，如外置活塞式移液器和连续分配器。适配性：并不是所有的吸头都可以用在任意品牌的相应量程的移液器上，所以我们不得不提醒用户注意吸头的适配性。对此，我们可以从以下几个方面来解读适配性的问题：其一，吸头的专用性。有的品牌的某些系列的移液器只能用它自己的吸头，其它的吸头根本就不能用。如RAININ的多道移液器就必须用RAININ的LTS吸头；其二，适配的程度。zui多的情况是一支移液器可以用多种吸头，但移液的效果则参差不齐。比如说，EPPENDORF的多道移液器用EPPENDORF的吸头，那无论是移液时的感觉还是移液的精度都是一级棒，但EPPENDORF的多道移液器用Axygen的吸头就差强人意了；其三，量程的适配。一般说来，移液器的zui大量程小于或等于吸头的容积，如zui大量程是1000ul的移液器就用1000ul的吸头，而200ul的吸头适配范围较大，可用于zui大量程为20ul、100ul和200ul的移液器；其四，大量程移液器（5ml、10ml和20ml）吸头的专用性。各品牌的大量程移液器往往需要用其自己的吸头，较难找到替代品。所以，如果您需要购买吸头，建议您告诉供应商您适用的吸头的型号或至少提供您所用的移液器的品牌和量程。生物污染：现在，越来越多的用户会要求吸头无RNA酶、无DNA酶、无DNA、无热原质和ATP污染。这是一个好现象，但我不得不提醒两点：*，高温灭菌过的吸头并不能保证无生物污染，要保证无生物污染还需要进行伽马射线处理等步骤。所以，用户自己几乎不可能把普通吸头处理成无生物污染的吸头，而买的无生物污染的盒装吸头应该提供相应的证书，表明相应项目的检测数据。证书上没有数据甚至没有证书的吸头，还是不要相信为好；第二，有的品牌的袋装吸头上会有声明无生物污染的标签，这颇有投机取巧甚至欺骗的嫌疑。试想：只要吸头接触到空气就会有生物污染，而普通自封袋能保证吸头在储运过程中完全不接触空气吗？并且，自封袋被吸头扎破的情况时有发生。带滤芯吸头：顾名思义，就是在吸头的上端有一个通常是白色的滤芯。这个滤芯多数是用聚丙烯制成的，类似于香烟的过滤嘴结构。由于滤芯的存在，移取的样品就不能进入移液器的内部，从而保护移液器的部件不被污染甚至腐蚀，更重要的是也能保证样品间不会有交叉污染。所以，带滤芯吸头也是移取挥发性和腐蚀性样品的一个重要工具。当然，带滤芯吸头的价格比较高，在国内的市场份额很低。并且，国产的带滤芯吸头还很少，其过滤效果也难令人满意。

对于一个PCR反应，虽然有各种各样的PCR仪引物设计软件或者经验公式计算最适的退火温度，可是由于模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能"P"出来结果，细微的变化对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。多次实验可在一台仪器上完成，既节省实验时间提高效率，又节省实验成本。 检验地带网 对于带梯度功能的PCR仪，需要考虑梯度模式下不同梯度管排间的温度均匀性和准确性，还必须考虑仪器在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。这种差异可能导致在梯度模式下得出的最佳条件与标准模式下单独做的结果出现差异。SteadySlope技术是eppendorf拥有的梯度PCR技术专利，可以同样的温度变化速率到达所有设定的梯度温度，所以在梯度模式下具有恒定的温度性。这一技术保证了在梯度模式和普通模式之间可以进行可靠的信息传递，不会因为温度特性不同而导致产量和特异性的变化。MJ没有付专利费而选择在梯度模式下采用不同的降温速率，每个梯度温度之间的温度曲线不同，从梯度模式向普通模式进行转换的可能会出现问题。此外采用TCT（三组回路）技术的梯度PCR仪由于在梯度PCR模式下增加了一个加热和冷却的控制区域，保证了梯度温度控制的精确性并使不同梯度管排间的温度均匀性更好。 在PCR仪上增加原位PCR模块就可以在玻片上进行原位PCR扩增，MJ和eppendorf的PCR仪都有提供原位适配器以满足不同需要。购买配有支持原位PCR模块的PCR仪对从事医学研究的工作者是很值得的，一机两用。 此外，随着基因组高通量研究的需求的提高，各品牌都推出了多槽式高通量PCR仪，各有特长：MJ有一种一拖四，就是1个主机带4个扩增槽，每个槽可以独立控温，一次可以作96x4个样品的PCR，不过一旦出现问题4个都不能用了。ABI则在原来的9700的基础上推出了双384孔的基座，一次完成384x2个样品，使得9700的功能又扩展到高通量领域而无需购买新的机器，可惜两个384槽不能独立控温。

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离心机盖子未盖好

定量移液器的校准——称量法　　校准应在无通风的房间，移液器和空气温度在20℃-25℃之间，相对湿度必需在55％以上。特别是当移液量在50ul以下其空气湿度应越高越好以减少蒸发损失的影响。　　在万分之一级别天平上放置一个小三角烧瓶，用待标定的移液器吸取蒸馏水（隔夜存放）加入小三角烧瓶内底部，每次称重后计量，去皮重后再加蒸馏水，连续加蒸馏水 10次。加蒸馏水的量根据待标定的移液器不同规格而不同，见下表。移液器10次标定称量在所要求的重量范围之内为合格移液器；不合格移液器需要进行调整。移液器标定合格后，填写自校记录。移液器规格 标定使用蒸馏水量 要求重量范围0.5-10ul 2ul 1.75-2.25mg5-40ul 10ul 9.8-10.2mg40-200ul 70ul 69.4-70.6mg200-1000ul 300ul 298.0-302.0mg1- 5ml 2000ul 1990.0-2010.0mg2- 10ml 3500ul 3485.0-3515.0mg一、实验室简单检测（一） 气密性检测移液器吸满液体后，手持垂直放置15s，检查吸嘴的尖头有无液滴，如有，则说明漏气。（二） 准确性检测1) 量程小于1μl，建议使用分光光度法检测。将移液器调至目标体积，然后移取染料溶液，加入一定体积的蒸馏水中，测定溶液的稀释度（334nm或340nm），重复几次移液操作，计算移液器的精确度。2) 量程大于1μl，可以用称重法检测。通过对水的称重，转换成体积（体积=质量/密度），鉴别移液器的准确性。由于水的密度是随着温度变化而变化，且称量天平本身精确度不符合检测要求，检测又大多在一个开放式空间内操作，偏差在所难免。因而，此种称量法只能现场粗略地判断移液器的准确性，进一步的校准必须在专业的实验室操作进行。注意：称重法实验室必备条件是高度灵敏的分析天平（定期校准）、双蒸水和称量容器。水、移液器和吸嘴必须具有相同的温度（20℃时水的密度为0.09982）。二、专业校准移液器的工作量大，长期使用，将会使弹簧弹力发生变形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就会产生误差。为了保证移液器传递液体量的准确性，必须对移液器进行定期校准。为了更好地发挥该类计量仪器的作用，对新购进的仪器要进行校准才能使用；对正在使用的计量仪器，由于长期使用会造成其示值于度量对象的误差，这种误差若不进行控制，及时校正，必定会影响科研工作。因此，对使用的移液器要定期检定、校正，并建立档案，只有这样才能使其在日常工作中更好的发挥作用。目前，在许多实验室条件下进行的常规检测并不能完全取代专业的校准工作，因为校准对于外部环境、工作条件及使用的精密仪器具有较高的技术要求，而这些条件往往是大多数实验室无法提供的。现在一些大型的移液器制造商均采用全球统一的移液器标准操作规范，利用专业软件校正系统，通过计算机对分析天平进行在线控制，测量、数据采集、计算、结果评价等环节由软件控制完成，所有人为操作都被计算机记录随报告打印出来，采用电脑对数据进行评估认证，完全排除了人为操纵校准结果的可能性，并制定当地代理商提供专业的校准和维修服务。下面以eppendorf移液器公司为例，介绍其专业校准操作。（一） 校准的基本操作条件操作室：独立房间，显示温度和湿度状态。温度控制：15~30℃（±0.5℃）湿度控制：60%~90%工作台面：防震、防尘、远离热源、无阳光直射。天平：0.000 01g精密分析天平（小数点后5位），每年需由厂家进行校准。防蒸发装置：Eppendorf提供的湿度阱，防止称量液体的挥发。测试介质：双蒸水，每4h更换一次，批次更换周期不大于2周。（二） 操作过程1） 同温化处理：校正前，所有移液器及校正介质（如工作台、天平、双蒸水等）置于相同操作间至少4h，以确保它们具有相同的温度。2） 内外部清洗。3） 润滑活塞。4） 校准：采用三点校准法，即根据移液器量程范围，选取最低量程、中间值和最高量程三点分别测试10次，各个测试点取其平均值，计算其准确度（inaccuracy）和精确度（imprecision），评价标准符合DIN 12650要求。5） 校准报告：可根据客户需求提供给算计打印的标准报告或PICASO校正报告，符合ISO、DIN或ASTM相关标准。三、影响准确性的因素1） 操作错误：包括30℃手持式移液器吸液；与吸嘴不匹配，较易造成脱落；残留的试剂倒流，污染活塞和密封圈；快速吸液排液，导致部分液体残留在吸头上等都会影响准确性。2） 移液器损坏：包括移液器的头部被刮擦，断裂受损；活塞受污染；弹簧受腐蚀等。3） 操作条件的影响：包括未作调整吸取与水不同密度的液体；样品和移液器的差别太大等。

一、.电转化感受态细胞的制备 　　1.用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照） 　　2.37℃，220rpm，培养14-16个小时。 　　3.第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。 　　4.将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，2500rpm离心10分钟。 　　5.弃上清，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，4℃，4000rpm离心10分钟。 　　6.弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，4000rpm，4℃，离心10min. 　　7.弃上清，往离心杯中加入少量10%甘油（灭菌，预冷），重悬菌体，再加满10%甘油， 4℃， 4000rpm， 离心10min. 　　8. 弃上清，每个离心杯中加入5ml10％的甘油，使沉淀悬浮后，将菌液以300ul/管分装于1.5ml的离心管中，-80 ℃冰箱中保存。同时取100 μl感受态加0.01ng puc18直接电穿孔转化，检测转化效率。 　　9.次日观察转化子生长情况，并记录。 　　二、连接产物纯化 　　1.将连接产物转移至一1.5ml Eppendorf管中，加入下列试剂： 　　10ul of ddH2O 　　2ul of 3M NaAC（PH5.2） 　　50ul of 无水乙醇 　　轻轻混匀，稍微离心并将其置于-20℃放置1小时以上； 　　2.4℃，top Speed 离心30分钟； 　　3.小心移去上清，避免接触到管底的沉淀物； 　　4.加入500ul70％的乙醇，轻轻颠倒几次洗涤沉淀（注：不要离心混匀）； 　　5.4℃，top Speed离心5分钟； 　　6.小心移去上清，将此Eppendorf管置空气中直至无乙醇气味； 　　7.加入10ulddH2O重新溶解沉淀，4℃短期保存，-20℃长期保存备用； 　　三、电转化 　　1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻； 　　2.取1 μl 纯化后的质粒于一1.5ml的离心管中，将其和0.1CM的电极杯一起置于冰上预冷。 　　3.将40～100ul解冻的感受态细胞转移至此1.5ml 的离心管中，小心混匀，冰上放置10min. 　　4.打开电转仪，调至Manual，调节电压为2.1KV. 　　5.将此混合物转移至已预冷的电极杯中，轻轻敲击电极杯使混合物均匀进入电极杯的底部； 　　6. 将电极杯推入电转化仪，按一下pulse键，听到蜂鸣声后，向电击杯中迅速加入1000μl的SOC液体培养基，重悬细胞后，转移到1.5ml的离心管中。 　　7.37℃，220－250rpm复苏1小时。 　　8. 取20ul转化产物加160ulSOC涂板，放于37℃温室，过夜培养，次日查看转化结果。其余菌液加1：1的30％的甘油后混匀－80℃保存。 　　注：每块加有Amp的平板上均匀涂有X-Gal 80μl ，SOC 80μl，IPTG 20 μl. 　　四、电击杯清洗流程 　　1.用清水将电击杯稍冲一下。 　　2.向电击杯中加入的75%酒精浸泡2hr. 　　3.弃去酒精，再用蒸馏水冲洗2~3遍，然后用1ml的枪吸取超纯水反复吹打电击杯10遍以上。 　　4.加入无水乙醇2ml于电击杯中，浸泡30分钟。 　　5.弃去无水乙醇，于通风厨内挥干乙醇。 　　6.将清洗好的电击杯放入-20 ℃冰箱内待用。 　　注：1.不同样品使用的电机杯应分开； 　　2.每周用1％酒精浸泡30分钟。

1．分子克隆是微量操作技术，DNA样品与限制性内切酶的用量都极少，必须严格注意吸样量的准确性及全部放入反应体系中。2．要注意酶切时加样的次序，一般次序为水、缓冲液、DNA各项试剂，最后才加酶液。取液时，Tip头要从溶液表面吸取，以防止Tip头沾去过多的液体与酶，待用的内切酶要放在冰浴内，用后盖紧盖子，立即放回-20℃冰箱，防止限制性内切酶的失活。3．凡用在酶切反应中的一切塑料器皿（Eppendorf管，Tip头等），都要新的，最后用重蒸水清洗，湿热灭菌，置50℃温箱中烘干，使用前打开包装，用镊子夹取，不直接用手去拿，严防手上杂酶污染。4．当样品在37℃与65℃保温时，要注意：（l）防止因盖子未盖严密使水汽进入管内，使反应溶液体积大量增加，造成实验失败。（2）防止由于标签脱落，分不清样品类型。5．由于温差原因，往往在盖上有水汽，因此样品酶切完毕或中间取样电泳要离心2秒钟，以集中体积内溶液，否则会发现酶切后体积少了。