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freenind怎么读

2023-08-02 19:49:25
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贝贝

确定不是freemind

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free怎么读

福瑞
2023-08-02 06:00:033

free用英语怎么读

free用英语的读法:英[friu02d0]、美[friu02d0]。free,英文单词,主要用作动词、形容词、副词,作及物动词时意思是“使自由,解放;释放”,作形容词时意思是“免费的;自由的,不受约束的;(化学)游离的”,作副词时意思是“自由地;免费”。自由是一个政治哲学概念,在这个条件下人类可以自我支配,凭借自身意志而行动,并对自身的行为负责。学术上对于自由概念有不同的看法,在对个人与社会的关系认识上有差异。自由的最基本含义是不受限制和阻碍(束缚、控制、强迫或强制),或者说限制或阻碍的不存在。例句:1、I have no ambitions other than to have a happy life and be free.我没有雄心大志,只求自由自在地过幸福生活。2、Students have a free choice of courses in their final year.学生在最后一学年可以自由选修课程。3、You are free to come and go as you please.你来去自由。4、They gave me free access to all the files.他们让我自由查阅所有档案资料。5、The researchers set the birds free.研究人员把鸟放了。
2023-08-02 06:00:111

free怎么读 free的读法

1、free英[friu02d0]美[friu02d0]。 2、adj.自由的(不是囚犯或奴隶); 随心所欲的; 不受限制的; 言行自由的; 3、vt.释放; 使自由; 解放; 使摆脱; 解除(或去除、清除); 4、adv.免费; 脱离束缚; 5、[例句]Its a free country; Ill say what I like!这是个自由的国家,我想说什么就说什么!
2023-08-02 06:00:421

Free怎么读

汉语读法 夫瑞
2023-08-02 06:00:513

free英语咋念?谐音

音标:fri:如果看不懂音标的话,试试读中文:福(轻声)瑞希望能帮到忙,毕竟还是初一的,知识水平有限。。
2023-08-02 06:01:101

free英语咋念?谐音

。。。。。。。。。。夫瑞
2023-08-02 06:01:208

ifree这个英文怎么读?

艾 拂瑞~~
2023-08-02 06:01:383

freebuds怎么读?

freebuds,读音[fri: bu028cdz]。free buds意思是:自由的花蕾。重点词汇:free英[fri:]释义:adj.免费的;自由的,不受约束的;[化学]游离的。vt.使自由,解放;释放。adv.自由地;免费。n.(Free)人名;(英)弗里。词语辨析free from,free of这两个短语都可作“没有…的”或“免于…的”解。free from用得更普遍。在danger,pain,trouble,difficulty,influence等词前惯用free from;而在charge,rent,duty等词前惯用free of。
2023-08-02 06:01:541

freewheelers怎么读

free wheelers 全部释义和例句>> 自由职业wheel 英[wi:l] 美[wi:l] n. 轮子; 旋转; Wheels 汽车; 有…轮子的汽车(或自行车等) vi. 转动,旋转; 突然转变方向; vt. 推; 拉(车) 使变换方向; (使) 迅速转身; [例句]The action of the crank turns the wheel.这根曲轴的作用是使轮子转动。[其他] 第三人称单数:wheels 复数:wheels 现在分词:wheeling过去式:wheeled 过去分词:wheeled
2023-08-02 06:02:242

free中文谐音唱法

音标:fri:如果看不懂音标的话,试试读中文:福(轻声)瑞FREEadj. 自由的(不是囚犯或奴隶); 随心所欲的; 不受限制的; 言行自由的; 未拴住的; 不收费的; 无阻碍的; 不含有害物的; 没有…的; 未固定的; 未使用的; 没有安排活动的; 随便给出的; 不拘泥原文的; vt. 释放; 使自由; 解放; 使摆脱; 解除(或去除、清除); 使可用(于某目的); 使能腾出时间; adv. 免费; 脱离束缚;
2023-08-02 06:02:331

freesor怎么读

frees英 [f"ri:z] 美 [f"ri:z]v.免除,释放( free的第三人称单数 ); 使…免除,使…释放,使…。。摆脱or英 [ɔ:(r)] 美 [ɔr]conj.或,或者; 还是; 不然,否则; 左右prep.<古、诗>在…之前,比…更早n.[纹章]黑金色、黑色
2023-08-02 06:02:411

freesale英语怎么读?

free sale,有两层意思,一层是免费购买,另一层是酒店用语,不用预订,随时可以入住的意思。第一个词读音类似于汉语“福瑞”,第二个词可以用拼音标注为“sei ao”。
2023-08-02 06:02:501

FreenBecky怎么发音?

FreenBecky发音为[fri:n ˈbɛki:],其中"fri:n"的发音类似于"frin",读作双音节,字母"i"的读音为/ i /,强读音节;而"ˈbɛki:"读作三音节,重读音节为第一音节"ˈbɛ",字母"e"的读音为/ ɛ /。FreenBecky是一个非常独特的名字,由两个单词"Free"和"Becky"组成,代表着自由和青春活力。在英语中,名字的发音和拼写常常因地域和个人口音而有所不同,但通常以标准英语音标为准。
2023-08-02 06:02:581

freefron是什么意思 freefron的中文翻译、读音、例句

freefron通常被翻译为”联合负荷”的意思,在日常中也代表”联合负荷”的意思,发音音标为[freefron],freefron来源于英语,在《牛津英汉双解词典》中,共找到39个与freefron相关的近义词和例句freefron的词典翻译1.联合负荷用法及短语示例freefron一般作为名词使用,在常见短语或俚语中出现较多自考/成考有疑问、不知道自考/成考考点内容、不清楚当地自考/成考政策,点击底部咨询官网老师,免费领取复习资料:https://www.87dh.com/xl/
2023-08-02 06:03:151

free 男子游泳部叶月渚的日文名怎么读

Hazuki Nagisa
2023-08-02 06:03:294

innisfree怎么读?

in 尼 死 free
2023-08-02 06:04:025

尽的读音有哪些

[ ā ]叹词,表示赞叹或惊异:~,这花真美呀!~哈。~呀。[ á ]叹词,表示疑问或反问:~,你说什么?[ ǎ ]叹词,表示疑惑:~,这是怎么回事?[ à ]1.叹词,表示应诺(音较短):~,好吧!2.叹词,表示醒悟(音较长):~,我这才明白过来!3.表示赞叹(音较长):~,亲爱的祖国![ a ]助词,在句末,表示惊叹的语气(常因前面字音不同而发生变音,可用不同的字来表示):你好~(哇)!真新鲜~(哪)!相关组词啊呀 啊唷 啊哈 么啊 啊哟 啾啊 啊捏 嗯啊
2023-08-02 06:04:3810

free是怎么读的?

福瑞。
2023-08-02 06:06:469

空闲的英文怎么说?

1、空闲的英文是:free。读音:英 [friu02d0],美[friu02d0]。 释义:adj. 自由的;免费的;畅通的;没有…的;未使用的;空闲的;随意的。v. 释放;使自由;使摆脱;解除;使可用于(某目的)。adv. 免费地;自由地。2、free作“免费的,无偿的”“空闲的;不忙的”解时,无比较级和最高级形式。3、例句:我没有多少空闲时间。I dont have much free time.
2023-08-02 06:07:111

free英语怎么读,怎么应用

有点像 福利
2023-08-02 06:07:275

空闲的英文怎么写

free
2023-08-02 06:07:494

空闲的用英语怎么读

空闲的英文怎么写有奖励写回答共8个回答百度网友0dee686高粉答主2020-02-28繁杂信息太多,你要学会辨别关注成为第2161位粉丝空闲的英文:free读音:英 [friː]     美 [friː]释义:adj. 自由的;免费的;畅通的;没有…的;未使用的;空闲的;随意的v. 释放;使自由;使摆脱;解除;使可用于(某目的)adv. 免费地;自由地语法:adj. (形容词)1、free的基本意思是“自由的”,强调没有外部压迫,自己有权决定自己的行动。2、free作“免费的,无偿的”“空闲的;不忙的”解时,无比较级和最高级形式。3、free作“摆脱…的; 不受…影响的”“大方的,慷慨的”解时,只用作表语。4、free在句中可用作定语、表语或补语。用作定语时,一般后置,偶尔也可前置;用作表语时,其后可接动词不定式,也可接from、in、of、with等引起的短语。扩展资料:近义词:release读音:英 [rɪ"liːs]     美 [rɪ"liːs]释义:n. 释放;让渡;发行vt. 释放;让与;准予发表;发射语法:v. (动词)1、release的基本意思是“释放,放开”,指把人或动物从某种束缚或痛苦中解放出来,使之继续自由活动,用作及物动词,接名词或代词作宾语,宾语后面常接介词from。2、release还可作“发布,发行”解,一般指发布消息,新闻等,用作及物动词,接名词或代词作宾语。3、release可用于被动结构。例句:The prisoner was questioned before his release.囚犯被释放之前受到了审问。
2023-08-02 06:08:124

freebuds的正确发音是什么?

freebuds,读音[fri: bu028cdz]。意思是:自由的花蕾。重点词汇:free释义:adj.免费的;自由的,不受约束的;[化学]游离的。vt.使自由,解放;释放。adv.自由地;免费。n.(Free)人名;(英)弗里。词语用法free的基本意思是“自由的”,强调没有外部压迫,自己有权决定自己的行动。free作“免费的,无偿的”“空闲的;不忙的”解时,无比较级和最高级形式。free作“摆脱…的;不受…影响的”“大方的,慷慨的”解时,只用作表语。free在句中可用作定语、表语或补语。用作定语时,一般后置,偶尔也可前置;用作表语时,其后可接动词不定式,也可接from、in、of、with等引起的短语。free用作副词时有两个意思:一是指“免费地”;二是指“自由地,无拘束地”。free引申可作“松,松弛”解。
2023-08-02 06:08:191

free,full这两个单词什么意思,怎么读?

空闲 充满父役 发儿
2023-08-02 06:08:481

鹿befree怎么读?

你可以下一个有道词典去查一查。
2023-08-02 06:08:584

srchafreen名字怎么读

free怎么读 free作为英文在一个常用单词,经常被拿来使用。其发音分为英式 [friu02d0]
2023-08-02 06:09:051

freebuds怎么读?

freebuds,读音[fri: bu028cdz]。free buds意思是:自由的花蕾。重点词汇:free英[fri:]释义:adj.免费的;自由的,不受约束的;[化学]游离的。vt.使自由,解放;释放。adv.自由地;免费。n.(Free)人名;(英)弗里。词语用法free的基本意思是“自由的”,强调没有外部压迫,自己有权决定自己的行动。free作“免费的,无偿的”“空闲的;不忙的”解时,无比较级和最高级形式。free作“摆脱…的;不受…影响的”“大方的,慷慨的”解时,只用作表语。free在句中可用作定语、表语或补语。用作定语时,一般后置,偶尔也可前置;用作表语时,其后可接动词不定式,也可接from、in、of、with等引起的短语。free用作副词时有两个意思:一是指“免费地”;二是指“自由地,无拘束地”。free引申可作“松,松弛”解。
2023-08-02 06:09:341

freebuds pro怎么读

free buds pro读音是:英:[fri:][bu028cd][pru0259u028a]。重点词汇:free。英[fri:]释义:adj.免费的;自由的;随心所欲的;不含..…的;免于,不遭受;空闲的;未使用的,空着的;无阻碍的;不拘泥于原文的;游离的;不吝惜的;干净整洁的;不含……的;(风)顺的。adv.自由地;免费地;帆脚索被松开地。v.释放;使解脱出来;使免于;使可用于;使能腾出时间。n.<英,非正式>自由转会。【名】(Free)(英)弗里(人名)。[第三人称单数frees;现在分词:freeing;过去式:freed;过去分词:freed;比较级:freer;最高级:freest]短语:free software自由软件;自由软体;免费软件;自在软件。例句:用作形容词(adj.)The prisoners wish to be free again.囚犯们希望重获自由。As a freelancer,he has more free time to himself.因为是个自由职业者,他有更多属于自己的自由时间。
2023-08-02 06:10:101

freebuds英文读法是什么?

freebuds,读音[fri: bu028cdz]。free buds意思是:自由的花蕾。重点词汇:free英[fri:]释义:adj.免费的;自由的,不受约束的;[化学]游离的。vt.使自由,解放;释放。adv.自由地;免费。n.(Free)人名;(英)弗里。z]。free buds意思是:自由的花蕾。重点词汇:free英[fri:]英语翻译技巧:第一、省略翻译法这与最开始提到的增译法相反,就是要求你把不符合汉语,或者英语的表达的方式、思维的习惯或者语言的习惯的部分删去,以免使所翻译出的句子沉杂累赘。第二、合并法合并翻译法就是把多个短句子或者简单句合并到一起,形成一个复合句或者说复杂句,多出现在汉译英的题目里出现,比如最后会翻译成定语从句、状语从句、宾语从句等等。
2023-08-02 06:10:361

be free怎么读

您指的是拼音吗?bi(第一声) f(轻声并且快速) ri(第四声)
2023-08-02 06:10:521

freeplus怎么读?

芙丽芳丝...也可以分开来读吧,free 然后plus
2023-08-02 06:11:011

free loop翻译,怎样读?

翻译:管不住的音符 读音:福re 路噗
2023-08-02 06:11:411

amount of free time怎么读

amount 英[u0259u02c8mau028ant] 美[u0259u02c8mau028ant] n. 量,数量; 总额; 本利之和; 全部效果,全部含义; vi. (在意义、价值、效果、程度等方面) 等于; 等同,接近; 合计,总共; 发展成为; [例句]He needs that amount of money to survive.他需要那样一笔钱以生存下去。[其他] 第三人称单数:amounts 复数:amounts 现在分词:amounting过去式:amounted 过去分词:amounted形近词: dismount unmount paramount 双语例句 柯林斯词典 英英释义 百度百科free time 英[fri: taim] 美[fri tau026am] [词典] 免费时间,非工作时间,空闲时间; 闲空; 暇; 空暇; [例句]Everyone needs some free time for rest and relaxation.每个人都需要一些休息和放松的自由时间。双语例句 英英释义 百度百科 百度知道
2023-08-02 06:11:491

1到30的英文单词怎么读

  1到30的英文单词你们知道它怎么写以后,是否也知道它们的读音呢?下面是我给大家带来1到30的英文单词读音,供大家参阅!   1到30的英文单词读音   1 one [wu028cn]   2 two: [ tu: ]   3 three: [ u03b8ri: ]   4four: [ fo: ]   5 five: [ faiv ]   6 six: [ siks ]   7 seven: [ "seven ]   8 eight: [ eit ]   9 nine: [ nain ]   10ten: [ ten ]   11 eleven: [ i"leven ]   12 twelve: [ twelv ]   13thirteen: [u02ccu03b8u025c:u02c8ti:n]   14 fourteen: [ "fo:"ti:n ]   15 fifteen: [ "fif"ti:n ]   16 sixteen: [ "siks"ti:n ]   17 seventeen: [ "seven"ti:n ]   18 eighteen: [ "ei"ti:n ]   19 nineteen [ "nain"ti:n ]   20 twenty: [ "twenti ]   21twenty-one ["twentu026au02ccwu028cn]   22twenty-two[u02cctwentu026a"tu:]   23twenty-three[t"wenti:u03b8r"i:]   24twenty-four [t"wenti:f"u0254:r]   25twenty-five   26twenty-six[t"wenti:s"u026aks]   27twenty-seven [t"wenti:s"evn]   28twenty-eight [t"wenti:"eu026at]   29twenty-nine [t"wenti:n"au026an]   30thirty[u02c8u03b8u025c:ti]   1的英语例句   1. You must enter a valid name of at least % 1 characters.   您必须键入至少%1个字符的有效名称.   2. Can I have more than 1 account?   我可以有1个以上的帐户 吗 ?   3. This is 1 project that will lead on to several projects.   这是1个项目,这将导致到了几个项目.   4. It"s set to a 1 px highlight on the bottom right.   在右下部设置了1个像素的高光.   5. This star time , is the 1 st star time which begins school.   这个星期, 算是开学的第1个星期吧.   6. Parents that he began weight at about 1 month old.   他的家人说他的体重从1个月大的时候开始增长.   7. The Korean War lasted for 3 years and 1 month.   朝鲜战争历时3年零1个月,在大国的干涉下,朝鲜半岛未能通过武力实现统一,南北双方从终点又回到起点.   8. Add eggs 1 at a time, beating to blend after each addition.   这时加入1个鸡蛋, 继续搅拌至所有的东西混合起来.   9. One examiner repeated this procedure after a 1 - month interval.   一位考官重复这个程序后1个月的间隔.   10. OcM, DMC and DXD at 66.1 cM.   DMC和DXD在同一个家系的同一个位点检测到了1个QTL,187家系(66.1cM).   11. Please enter no more than % 1 characters.   请输入不超过%1个的字符.   12. Mattress 1 Pc. Not too soft.   床垫1个不宜过于柔软.   13. Car Safety Seat 1 Pc. against traffic accident.   汽车安全座椅1个防止乘车意外.   14. Swim complete Cheng needs 1 half hours.   游完全程需1个半小时.   15. In a vessel heat oil. Add finely cut 1 big onion and fry till brown.   在容器中将油加热, 加入1个切碎的大洋葱炒至棕色.   30的双语例句   1. He made me do 30 press-ups.   他要我做30个俯卧撑。   2. He was imprisoned for two concurrent terms of 30 months and 18 months.   他被判处30个月和18个月的监禁,合并执行。   3. If that aircraft"s carrying 30 prisoners, I"m Elvis Presley.   如果那个飞机里会有30个囚犯, 那我就是猫王.   4. In all around 1500 cases and thirty 30 deaths have been confirmed.   总共确认有大约1500病例和30个死亡病例.   5. Built - in with radio tuner function which lets you preset 30 FM channels.   内 置 收音机功能,更可预设30个FM电台频道.   6. He governeth 30 Legions Infernal Spirits, and his Seal is this, etc.   他统率着30个恶魔军团, 这是他的封印.   7. It is said that frigates have 30 archer missile pods.   一般来说护卫舰有30个射手导弹发射舱.   8. They covenanted with Judas for 30 pieces of silver.   他们用30个银币收买了犹大.   9. Test your brainpower on 30 exciting levels of increasing complexity.   在复杂性递增的30个关卡中锻炼你的脑力.   10. All returns must be received within 30 calendar days of purchase date.   所有退货必须在收到购买之日起30个日历日.   11. At least 30 thirty nations have had cases of Buruli ulcer disease.   至少已经有30个国家出现了布鲁里溃疡病.   12. Over 30 unique free animated gifs included to get you started.   包括了30个独一无二的免费动态GIF图片.   13. You will need 30 bottles for a standard 23 liter recipe.   您需要30个瓶子来装一份23公升标准的配方.   14. Sometimes up to 30 dolls can be combined inside the biggest doll.   有时多达30个玩偶都能被逐一套入最大的玩偶里.   15. The annual sale task of Party B is 30 containers.   乙方年销售任务为30个货柜.
2023-08-02 06:11:571

英文国家怎么读

国家guó jiācountry; state; nation:第三世界国家 Third World countries友好国家 friendly country国家大事 national affairs国家尊严 national dignity发达国家 developed country发展中国家 developing country沿海国家 coast state有关国家 state concerned
2023-08-02 06:12:072

午餐用英语怎么读

lunch双语例句1.Kenworthforwenthislunch.肯沃斯放弃了午餐。2.Ihadlunch.我在商业区吃的午饭。3.Iwasjustscrubbingsomecarrotsforlunch.我正在刷洗胡萝卜,准备做午饭。4.She"scookinglunch.她在做午饭。5.She"smakinglunch.她正在做午饭。
2023-08-02 06:12:462

lunch怎么读

lunch的读音是:英[l_nt_]。lunch的例句是用作名词(n.)Wehadawonderfullunch.我们吃了顿很不错的午餐。lunch的词语用法是n.(名词)lunch的意思是“午餐”,有时也可指两顿饭之间的便餐,既可用作可数名词,也可用作不可数名词,常与动词have,take等连用表示“吃午饭”。泛指午餐时其前不加冠词,若有定语修饰时可加不定冠词,特指某顿饭时也可加定冠词。一、详尽释义n.(名词)午餐便餐午餐的食品便餐便当点心作午餐用的食物午饭v.(动词)为?供应午餐吃午餐供给午餐用午餐吃(午餐)二、双解释义n.(名词)[U][C]午餐ausuallylightmealeateninthemiddleofthedayv.(动词)vi.&vt.吃午餐;供给午餐eatlunch;providewithortakeouttolunch三、英英释义Noun:amiddaymealVerb:takethemiddaymeal;"Atwhattimeareyoulunching?"provideamiddaymealfor;"Sheluncheduswell"四、例句Wehadawonderfullunch.我们吃了顿很不错的午餐。Let"sgettogetherforlunch.让我们一起吃顿午餐吧。Icanlunchoffthebreadleftoverfromyesterday.午餐我可以吃昨天剩下的面包。Weshallbedelightedifyou"lllunchwithus.你要能来和我们一道吃午饭,我们就高兴了。Theyshallbeabletogiveusabetterlunch.他们应该可以提供好一些的午饭。ForlunchtherewillbeaSmorgasbord.午餐将提供瑞典式自助餐。五、词汇搭配用作名词(n.)动词+~attendalunch出席午餐bringalunchtoschool带饭上学carryone"slunch带着午餐comeforlunch来吃午饭cookalunch做午餐eatlunch吃午饭finishlunch吃完午餐fixlunch准备午饭givealunchforsb设午餐招待某人gotolunch去吃午饭havelunch进午餐makealunch做午餐missone"slunch没赶上吃午餐orderalunch订饭preparelunch准备午饭providelunch提供午餐servelunch供应午饭shootone"slunch呕吐takelunch带午饭形容词+~biglunch丰盛的午餐coldlunch冷的午餐comfortablelunch美餐excellentlunch盛宴finelunch精美的午餐freelunch免费午餐fulllunch丰盛的午餐goodlunch丰盛的午餐hotlunch热午餐latelunch很晚才吃的午餐lightlunch清淡的午餐nicelunch美好的午餐plainlunch便饭poorlunch不丰盛的午餐regularlunch一般午餐suitablelunch适宜的午餐well-cookedlunch烹饪考究的午餐wholesomelunch有益于健康的午餐名词+~basketlunch野外吃的便餐boxlunch盒装午餐businesslunch工作午餐Christmaslunch圣诞午餐picniclunch野餐platelunch盘子内盛有各色菜肴的客饭workinglunch工作午餐~+名词lunchfork餐叉lunchhour午餐时间lunchplate餐盘lunchtable餐桌lunchthings餐具,碗筷介词+~afterlunch午餐后atlunch在吃午餐beforelunch饭前duringlunch在就餐时forlunch作为午餐用作动词(v.)~+名词lunchthepoor为穷人提供午餐lunchvisitor请客人吃午餐~+副词lunchwell提供丰盛的午餐lunchabundantly提供丰盛的午餐lunchbriefly提供简洁的午餐lunchconveniently提供方便的午餐lunchformally提供正式的午餐lunchfrugally供应简单的午餐lunchincompetently提供不适当的午餐lunchlaudably提供值得赞许的午餐lunchofficially提供正式的午餐lunchparticularly提供特别的午餐lunchsubstantially提供丰盛的午餐lunchswiftly迅速提供午餐lunchunaccountably莫名其妙地提供午餐lunchunexpectedly意外提供午餐lunchunreasonably不合理地提供午餐lunchuselessly没必要地提供午餐lunchin在家吃午饭lunchoff吃掉lunchout在外面吃午饭~+介词lunchon午餐吃?lunchwith和?一起吃午饭六、情景对话请客lunchA:Doyouhavesometimetomorrow?明天有空吧?lunch的意思B:Yes,Ido.有啊。lunch的解释A:Howabouthavinglunchwithme?一起吃顿中饭怎样?B:Goodidea.好主意。点餐lunch在线翻译A:Forlunchwehavechicken,beefandChinesenoodles.Whichonewouldyoulike?午餐我们提供鸡肉、牛肉和中国面条。请问您要那样?B:Chinesenoodles,please.请来中国面条。请客A:Thislunchisonmetoday,今天这顿饭算我请客。B:Ithinkyougotitlasttime.我记得上回也是你请的。A:It‘smypleasure.我请得心里高兴。B:That‘sveryniceofyou.既然这样,那就多谢了。七、常见错误n.(名词)我请她出去吃饭。误Iaskedherouttothelunch.正Iaskedherouttolunch.午饭后,请帮助我擦擦碗碟。误Helpmedryupafterthelunch.正Helpmedryupafterlunch.车队经常在这里停下来吃午饭。误Truckconvoysoftenstopoverforthelunchhere.正Truckconvoysoftenstopoverforlunchhere.析在表示三餐的名词前,通常不用冠词。lunch的相关近义词luncheon、nooninglunch的相关临近词luncheon、lunatic、lunchery、lunchbox、lunching、lunchin、lunchbox、lunchbook、lunchout、lunchroom、lunchhook、lunchhour
2023-08-02 06:12:571

彩票里说的杀号定胆是什么意思?

对啊人家杀的号码偏偏是中奖号。
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数学,语文,英语,历史,地理,生物,用英语怎么说?

MathematicsLiterature/ReadingEnglishHistoryGeographyBiology
2023-08-02 06:11:126

哪位来介绍一下哈梯文明 拜谢

赫梯王国位于小亚细亚半岛,讲赫梯语的哈梯人和公元前2000年代迁来的讲涅西特语的涅西特人共同创造了赫梯国家。赫梯王国公元前2000年代兴起于小亚细亚这一古老的文明地区。小亚细亚是近东文明与爱琴文明联系的桥梁和纽带。亚述人曾经于公元前3000年代末至公元前2000年代初在小亚细亚建立了若干商业殖民地,其中最著名的是卡尼什商业公社。亚述人还把楔形文字带到了小亚细亚。形成于公元前19世纪中叶的赫梯国家当初只是若干小国。人们知道的最早的统治者是库萨尔的皮哈纳及其子阿尼塔。在皮哈纳时期,库萨尔毁灭了涅西特人的哈图什城,其子阿尼塔两次战胜了皮乌斯提统治的哈梯人的国家,并征服了普鲁斯汉达。阿尼塔时期,已不复存在亚述商业殖民地。赫梯国家记载自己的历史从库萨尔的另一位统治者拉巴尔纳时开始。拉巴尔纳征服了小亚东部的地区,使赫梯国家的版图从地中海扩大到黑海。拉巴尔纳二世(哈图西里一世)使北部叙利亚的阿拉拉赫臣服于自己,还战胜了该地区的乌尔苏和哈苏这两大城市。此时“赫梯”作为一个国家的名字开始用于表示整个赫梯人的国家。拉巴尔纳二世死后,赫梯发生了所谓“王子们的奴隶的起义”。即被库萨尔征服的地区人民的起义。王亲贵族们在哈图什尔一世的继承者穆尔西里一世的联合下,镇压了这次起义,并迁都哈图什。他野心勃勃地把征服的矛头指向了两河流域南部,于公元前1595夺取并毁坏了巴比伦城。哈图什尔和穆尔西里两人的征服活动使赫梯国家成了当时近东地区的一个大国。穆尔西里一世死于宫廷阴谋,赫梯王国陷入王位争夺的内战之中。赫梯国王铁列平于公元前16世纪后期进行了改革,解决了赫梯王国的王位继承问题。改革前的赫梯国王的权力受到彭库斯会议(公民会议)和图里亚斯会议(贵族会议)的制约。这两种会议有权决定王位继承,还管理司法等事务。王位继承问题常常造成政治上的动乱。铁列平确定了王位继承的原则,即首先应由长子继承王位,长子如果不在,由次子继承,依此类推;如果没有王子继承,就让长女选择丈夫做国王。王室内部互相争斗杀戮的问题也得到解决,国王不得任意杀戮其兄弟姊妹,王室内部纠纷由彭库斯会议做出裁决,国王亲属犯了罪,只由其本人负责,不得牵连其家属,也不得没收其财产。公元前15世纪末至前13世纪中叶是赫梯历史上的新王国时期,正值赫梯王国最强盛的时期。这一时期编制了《赫梯法典》。在国王苏庇路里乌玛一世统治时期,赫梯摧毁了由胡里特人建立的米坦尼王国的实力,攻占了米坦尼王国的首都瓦努坎尼,扶持了傀儡国王。他自己的儿子也成为其他一些小国的国王。赫梯在新王国时期在叙利亚同埃及进行了争霸战争。霍连姆赫布、拉美西斯一世、塞提一世、拉美西斯二世这些埃及第19王朝前期的法老们同赫梯进行了激烈的争夺。交战双方在卡迭什战役中受到惨重损失。在赫梯新王哈图西里二世执政时,赫梯同埃及的拉美西斯二世在公元前1283年缔结了和约。公元前1246年,国王哈图西里三世采取和亲政策,将自己的一个女儿嫁给埃及的拉美西斯法老。后来发现于埃及卡纳克庙宇墙上的一幅雕刻,就描绘了当时埃及法老迎娶赫梯公主的情景。公元前13世纪末,“海上民族”席卷了东部地中海地区,赫梯王国亦被其肢解。公元前8世纪,残存的赫梯王国被亚述帝国所灭。赫梯人是一个习惯于征战的民族,世代征战让赫梯人认识到没有强劲的军队是不行的。赫梯历代国王保持有一支人数多达30万的军队。他们的武器先进,使用短斧、利剑和弓箭。赫梯人在冶铁方面颇具名气,是西亚地区最早发明冶铁术和使用铁器的国家,赫梯王把铁视为专利,不许外传,以至铁贵如黄金,其价格竟是黄铜的60倍。赫梯的铁兵器曾使埃及等国为之胆寒。赫梯人打击敌人最有效的武器是战车;在战场上,他们驱赶披着铁甲的马拉战车冲锋陷阵,所向披靡,使来敌闻风丧胆。在赫梯王国里,妇女享有美索不达米亚和埃及妇女所享受不到的权力和自由。赫梯法律允许妇女和男子一样拥有职业;皇家的文件和国宝显示国王和王后共享大权,赫梯王朝的某一时期,曾有王后单独临朝统治的记载。惯用年表旧王国(Old Hittite Kingdom) (前1750年 - 前1500年) 哈图什(Hattusa)成为首都 中王国(Middle Hittite Kingdom) (前1500年 - 前1450年) 新王国(New Hittite Kingdom) (帝国) (前1450年 - 前1180年): 苏庇路里乌玛一世征服叙利亚; 穆瓦塔里(Muwatalli)进攻埃及(Kadesh)赫梯君主列表(表中所有的日期都是推测的。苏联考古学界和西方考古学界各自采用一套很不同的时间表)·古王国皮坦纳 前18世纪上半叶 第一个已知的国王 阿尼塔 前18世纪中叶 名字失传的统治者 拉巴尔那一世 前1680年 - 前1650年 哈图西里一世 前1650年 - 前1620年 即拉巴尔那二世 穆尔西里一世 前1620年 - 前1590年 汉提里一世 前1590年 - 前1560年 齐丹塔一世 前1560年 - 前1550年 阿蒙纳 前1550年 - 前1530年 胡齐亚一世 前1530年 - 前1525年 铁列平 前1525年 - 前1500年 有些研究者认为并无以下6人。 阿鲁万纳 塔胡尔瓦伊里 汉提里二世 齐丹塔二世 胡齐亚二世 穆瓦塔里一世 ·中王国关于中王国,没有任何资料保存下来。但有的研究者将古王国的最后6位君主列为中王国时期的统治者。 ·新王国前4位统治者的先后顺序无法确定。 图特哈里一世 前1430年 - 前1410年 哈图西里二世 前1410年 - 前1400年 可能并无此人 图特哈里二世 前1400年 - 前1390年 阿尔努万一世 前1390年 - 前1380年 图特哈里三世 前1380年 - 前1370年 苏庇路里乌玛一世 前1370年 - 前1330年或前1358年 - 前1323年 阿尔努万二世 前1330年或前1323年 - 前1322年 穆尔西里二世 前1330年 - 前1295年或前1322年 - 前1285年 穆瓦塔里二世 前1295年 - 前1282年或前1285年 - 前1273年 乌尔希泰舒普 前1282年 - 前1275年或前1273年 - 前1266年即穆尔西里三世 哈图西里三世 前1275年 - 前1245年或前1266年 - 前1236年 图特哈里四世 前1245年 - 前1215年或前1236年 - 前1220年 阿尔努万三世 前1215年 - 前1210年或前1220年 - 前1218年 苏庇路里乌玛二世 前1210年或前1218年 - 前1200年
2023-08-02 06:11:191

勇敢的面对困难的英语作文不少于60字

Bravely Facing Up to DifficultiesLife is full of challenges and difficulties, which we cannot escape no matter how much we try. However, the way we deal with these difficulties can determine our success or failure.When facing difficulties, some people choose to give up and feel hopeless, while others bravely confront them and try to find solutions. It is true that facing up to difficulties can be scary and uncomfortable, but it is also a necessary process for personal growth and development.In fact, the difficulties we face in life can help us build resilience and perseverance, and help us learn to problem-solve and think creatively. Furthermore, overcoming difficulties can give us a sense of accomplishment. which can motivate us to keep going and pursue our goals even more fiercely.Therefore, we should never be afraid of difficulties, but should bravely face them head-on. By doing this, we can not only overcome them but also become stronger and more confident individuals.
2023-08-02 06:11:203

汽车tripa是什么意思?

底盘机油的行驶里程,换油就清零
2023-08-02 06:11:277

什么是官网,官网怎么识别

“官方网站”一词是网络上对主办者所持有网站约定俗成的一种称谓,它表示该网站专属主办者意志的体现,带有专用的权威的意思。那么如何分辨真假官网呢?最简单的方法,只要在百度或者谷歌搜“xxx官网”或“xxx官方网站”,排在最前的便是你要找的官网.不过,这种方法只适用于少数非常知名的大品牌,如苹果官网、诺基亚官网等,并不适用于所有品牌。因此,识别真假官网也需要从多个方面综合考量,就像中医讲究望闻问切一样。这里总结了3个简单有效的考察因素:1、官网的页面设计。通常真正的官网都会看上去很顺眼,一看就知道是用心设计的、花高成本打造的。2、官网的域名域名就是网址中“http://www.”到第一个“/”之间的部分,通常都是abc.com或abc.com.cn或abc.cn等等abc.xxx的形式,现在主流的浏览器基本都带有域名突出显示功能,这样可以有效的防止假冒网站、钓鱼网站采用障眼法来以假乱真蒙骗网民。知名企业通常都会使用企业品牌的名称作为官网域名。3、Alexa全球排名Alexa.com是一家专门发布网站世界排名的网站,在业界比较权威,通过查看某个网站的Alexa全球排名,你就可以大概了解该网站目前的人气情况,单独看排名的数值虽然看不出什么名堂,但和其他同类网站比较一下排名,就能对比出来了。
2023-08-02 06:11:281

急需一些英语词组…!

get upget outget downgive offtake awaytake offput upput downset asset input in
2023-08-02 06:11:323

大家说的网站排名是什么意思

一般所指的网站排名主要可分为几大类,有Alexa网站排名,中国网站排名,百度排名等。下面我们来一一讲解一下几大排名的功能。对于任何一家网站来说,要想在网站推广中取得成功,搜索引擎优化都是至为关键的一项任务。同时,随着搜索引擎不断变换它们的排名算法规则,每次算法上的改变都会让一些排名很好的网站在一夜之间名落孙山,而失去排名的直接后果就是失去了网站固有的可观访问量。所以每次搜索引擎算法的改变都会在网站之中引起不小的改动和焦虑。可以说,搜索引擎优化是一个复杂的任务。一、Alexa排名Alexa网站排名由国外Alexa公司制作,其公司通过长期对互联网网络大量的数据统计与研究,而得到一个关于每个网站在世界互联网网络中的综合排名和分类排名,Alexa网站排名是当前习惯性用于衡量某一个网站有多大流量的指示标,并且它还提供了包括综合排名、到访量排名、页面访问量排名查询数据等。Alexa的网站排名可通过Alexa官网查询到数据,也或通过国内网站Alexa搜网等众多网站查询数据结果。国内网站Alexa搜网的优势就是全中文版,并且数据经过整理易于数据阅读。二、中国TOP中国网站排名是我国国内自主研发的一个高精度统计互联网信息的排名,由中国互联网协会主办,国务院新闻办公室网络局、信息产业部电信管理局指导,北京中搜在线软件有限公司提供技术支持的大型网站排名项目。中国网站排名网的主旨是按照客观、真实、公正原则,以网站访问流量统计数据为依据适时发布“中国网站排名”,是中国互联网协会把握互联网发展趋势、引导互联网行业发展、服务广大网民、服务政府决策的公益举措。三、百度TOP百度网站排名,一般是指存在于国内网站站长朋友们对某个网站在百度搜索引擎中的搜索结果排名。在国内的搜索引擎所占市场份额上百度也是龙头老大,而网民已习惯于由搜索引擎开始互联网之旅,因此众多站长为求在百度搜索结果上能排名前几位而各展神通,费尽心力,不断通过SEO或百度竞价排名以求一个好的名次。
2023-08-02 06:11:052

别人说英文THS,怎么用英语缩写回答不客气

np = no problem
2023-08-02 06:11:018

电动车下坡路关掉电源滑行好不好?

电动车下坡路关掉电源滑行好不好?不好。
2023-08-02 06:11:0112

政治、历史、地理、生物、物理的英文怎么拼?

Politics, history, geography, biology, physics
2023-08-02 06:10:526

THS是啥意思?

thx = thanks 谢谢ths也可能=thanks 看看上下文就知道写这个词的人的本意了thsabbr. 混合动力系统(Toyota Hybrid System);高速列车;变速箱液压开关(Transmission Hydraulic Switch);总加热面(Total Heating Surface)
2023-08-02 06:10:501

生物分子标记

分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比,DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性的性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标性状的表达,与不良性状无连锁;检测手段简单、迅速。随着分子生物学技术的发展,现在DNA分子标记技术已有数十种,广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。  分子标记的概念有广义和狭义之分。广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。  理想的分子标记必须达以下几个要求:(1) 具有高的多态性;(2)共显性遗传,即利用分子标记可鉴别二倍体中杂合和纯合基因型;(3) 能明确辨别等位基因;(4) 遍布整个基因组;(5)除特殊位点的标记外,要求分子标记均匀分布于整个基因组;(6) 选择中性(即无基因多效性);(7)检测手段简单、快速(如实验程序易自动化);(8) 开发成本和使用成本尽量低廉;(9)在实验室内和实验室间重复性好(便于数据交换)。但是,目前发现的任何一种分子标记均不能满足以所有要求。  【分子标记的种类】  一、基于分子杂交技术的分子标记技术   此类标记技术是利用限制性内切酶解及凝胶电泳分离不同的生物 DNA 分子,然后用经标记的特异 DNA 探针与之进行杂交,通过放射自显影或非同位素显色技术来揭示 DNA 的多态性。   ① 限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)   1974年Grodzicker等创立了限制性片段长度多态性(RFLP)技术,它是一种以DNA—DNA杂交为基础的第一代遗传标记。RFLP基本原理:利用特定的限制性内切酶识别并切割不同生物个体的基因组DNA,得到大小不等的DNA片段,所产生的DNA数目和各个片段的长度反映了DNA分子上不同酶切位点的分布情况。通过凝胶电泳分析这些片段,就形成不同带,然后与克隆DNA探针进行Southern杂交和放射显影,即获得反映个体特异性的RFLP图谱。它所代表的是基因组DNA在限制性内切酶消化后产生片段在长度上差异。由于不同个体的等位基因之间碱基的替换、重排、缺失等变化导致限制内切酶识别和酶切发生改变从而造成基因型间限制性片段长度的差异。  RFLP的等位基因其有共显性特点。RFLP标记位点数量不受限制,通常可检测到的基因座位数为1—4个。RFLP技术也存在一些缺陷,主要是克隆可表现基因组DNA多态性的探针较为困难;另外,实验操作较繁锁,检测周期长,成本费用也很高。自RFLP问世以来,已经在基因定位及分型、遗传连锁图谱的构建、疾病的基因诊断等研究中仍得到了广泛的应用。  ② 数目可变串联重复多态性(Variable Number of Tandem Repeats,VNTR )   数目可变串联重复序列又称小卫星DNA (MinisatelliteDNA),是一种重复DNA小序列,为10到几百核苷酸,拷贝数10一10001不等。VNTR基本原理与RFLP大致相同,只是对限制性内切酶和DNA探针有特殊要求:(1)限制性内切酶的酶切位点必须不在重复序列中,以保证小卫星或微卫星序列的完整性。(2)内切酶在基因组的其他部位有较多酶切位点,则可使卫星序列所在片段含有较少无关序列,通过电泳可充分显示不同长度重复序列片段的多态性。(3)分子杂交所用DNA探针核昔酸序列必须是小卫星序列或微卫星序列,通过分子杂交和放射自显影后,就可一次性检测到众多小卫星或微卫星位点,得到个体特异性的DNA指纹图谱。  小卫星标记的多态信息含量较高,在17一19之间。缺点是数量有限,而且在基因组上分布不均匀,这就极大限制其在基因定位中的应用。VNTR也存在实验操作繁琐、检测时间长、成本高的缺点。   二、基于PCR技术的分子标记技术  (一)、随机引物的PCR标记  所用引物的核苷酸序列是随机的,其扩增的 DNA 区域事先未知。随机引物PCR扩增的DNA 区段产生多态性的分子基础是模板 DNA扩增区段上引物结合位点的碱基序列的突变,不同来源的基因组在该区段上表现为扩增产物有无差异或扩增片段大小的差异。随机引物PCR标记表现为显性或共显性。  ① 随机扩增多态性DNA (Random Amplified Polymorphism DNA,RAPD )  RAPD技术是1990年由Wiliam和Welsh等人利用PCR技术发展的检测DNA多态性的方法。基本原理:它是利用随机引物(一般为8—10bp)通过PCR反应非定点扩增DNA片段,然后用凝胶电泳分析扩增产物DNA片段的多态性。扩增片段多态性便反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD所使用的引物各不相同,但对任一特定引物,它在基因组DNA序列上有其特定的结合位点,一旦基因组在这些区域发生DAN片段插人、缺失或碱基突变,就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化,从而导致扩增产物数量和大小发生改变,表现出多态性。就单一引物而言,其只能检测基因组特定区域DNA多态性,但利用一系列引物则可使检测区域扩大到整个基因组,因此,RAPD可用于对整个基因组DNA进行多态性检测,也可用于构建基因组指纹图谱。  与RFLP相比,RAPD具有以下优点:(1)技术简单,检测速度快;(2)RAPD分析只需少量DNA样品;(3)不依赖于种属特异性和基因组结构,一套引物可用于不同生物基因组分析;(4)成本较低。但RAPD也存在一些缺点:(1)RAPD标记是一个显性标记,不能鉴别杂合子和纯合子;(2)存在共迁移问题,凝胶电泳只能分开不同长度DNA片段,而不能分开那些分子量相同但碱基序列组成不同的DNA片段;(3) RAPD技术中影响因素很多,所以实验的稳定性和重复性差。  ② 任意引物PCR (Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction, AP—PCR)   在AP—PCR分析中,所使用的引物较长(10-50 bp) ,PCR反应分为两个阶段,首先寡核昔酸引物在低严谨条件下与模板DNA退火,此时发生了一些合成,以便稳定模板与引物之间相互作用。然后进行高严谨退火条件的循环,两个位点间那些序列在低严谨度退火条件下发生的引物延伸可继续在高严谨条件下扩增。采用变性聚丙烯酞胺凝胶电泳分析PCR产物,最终反应结果与RAPD类似。只要设计的引物在低严谨退火条件下能减少引物产生人为产物,应用成对组合的引物可以产生新的AP—PCR谱带,但引物配对组合使用时,得到的图谱与单引物单独使用时产生的图谱之和很不相同,这样,50个引物能产生1250种不同指纹图谱。  AP—PCR方法不需预知序列资料,而且检测的基因组样本是任意的,还能够用于检测近等基因系(或同类系)中的多态性。AP—PCR的缺点是每个新的多态性都必须经纯化才能进一步使用。另外,此方法在杂合体中仅可辨别长度多态性。  ③ DNA扩增指纹印迹(DNA Amplification Fingerprinting,DAF)  DAF是一种改进的RAPD分析技术,与RAPD技术不同的是,DAF分析中所使用的引物浓度更高,长度更短(一般为5一8bp),因此它所提供的谱带信息比RAPD大得多,如当使用5个核昔酸的引物时,引物和模板的组合大约可扩增出10一100个DNA片段。PCR扩增产物是在凝胶上进行分离,通过银染即可产生非常复杂带型。  (二)、特异引物的PCR标记   特异引物的PCR标记所用引物是针对已知序列的 DNA 区段而设计的,具有特定核苷酸序列(通常为 18—24 bp),可在常规PCR复性温度下进行扩增,对基因组 DNA 的特定区域进行多态性分析。   ① 序列标志位点(Sequence Tagged Sites,STS)  STS是对以特定对引物序进行PCR特异扩增的一类分子标记的统称。通过设计特定的引物,使其与基因组DNA序列中特定结合位点结合,从而可用来扩增基因组中特定区域,分析其多态性。利用特异PCR技术的最大优点是它产生信息非常可靠,而不像RFLP和RAPD那样存在某种模糊性。  ② 简单重复序列(Simple Sequence Repeat,SSR)  简单重复序(SSR)也称微卫星DNA,其串联重复的核心序列为1一6 bp,其中最常见是双核昔酸重复,即(CA) n和(TG)n每个微卫星DNA的核心序列结构相同,重复单位数目10一60个,其高度多态性主要来源于串联数目的不同。SSR标记的基本原理:根据微卫星序列两端互补序列设计引物,通过PCR反应扩增微卫星片段,由于核心序列串联重复数目不同,因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物,将扩增产物进行凝胶电泳,根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。  SSR具有以下一些优点:(l)一般检测到的是一个单一的多等位基因位点;(2)微卫星呈共显性遗传,故可鉴别杂合子和纯合子;(3)所需DNA量少。显然,在采用SSR技术分析微卫星DNA多态性时必须知道重复序列两端的DNA序列的信息。如不能直接从DNA数据库查寻则首先必须对其进行测序。  ③ 序列特异性扩增区(Sequence—characterized Amplified Region,SCAR)   SCAR标记是在RAPD技术基础上发展起来的。SCAR标记是将目标 RAPD片段进行克隆并对其末端测序,根据 RAPD 片段两端序列设计特异引物,对基因 DNA片段再进行PCR特异扩增,把与原RAPD片段相对应的单一位点鉴别出来。SCAR标记是共显性遗传,待检 DNA间的差异可直接通过有无扩增产物来显示。SCAR标记方便、快捷、可靠,可以快速检测大量个体,结果稳定性好,重现性高。   ④ 单引物扩增反应(Single Primer Amplificatipn Reawtion,SPAR)  SPAR技术是与RAPD技术相似的一种标记技术,SPAR也只用一个引物,但所用的引物是在SSR的基础上设计的。这些引物能与SSR之间的间隔序列进行特异性结合,然后通过P(:R技术扩增SSR之间的DNA序列,凝胶电泳分离扩增产物,分析其多态性。另外,还有一种与SPAR技术非常相似的标记技术,即ISTR ( Inverse Sequence—taggedRepeat)技术,ISTR所用的引物是在反向重复序列基础上设计的,PCR扩增的是反向重复序列之间的DIVA序列。  ⑤ DNA单链构象多态性(Single Strand Conformation Polymorphism,SSCP)  SSCP是指等长的单链DNA因核昔酸序列的差异而产生构象变异,在非变性聚丙烯酞胺中的表现为电泳迁移率的差别。单链DNA构象分析对DNA序列的改变非常敏感,常常一个碱基差别都能显示出来。在SSCP分析中,利用PCR技术定点扩增基因组DNA中某一目的片段,将扩增产物进行变性处理,双链DNA分开成单链,再用非变性聚丙烯酞胺凝胶电泳分离,根据条带位置变化来判断目的片段中是否存在突变。SSCP结果判定是通过多个样品之间对比,观察条带之间位置改变,从而显示出不同生物个体的DNA特异性,达到指纹分析目的。为了进一步提高SSCP的检出率,可将SSCP分析与其它突变检测方法相结合。其中与杂交双链分析(Heterocluplexanalysis,Het)法结合可以大大提高检出率。Het法是用探针与要检测的单链DNA或RNA进行杂交,含有一对碱基对错配的杂交链可以和完全互补的杂交链在非变性PAG凝胶上通过电泳被分离开。对同一靶序列分别进行SSCP和Het分析可以使点突变的检出率接近100%,而且实验简便。  ⑥ 双脱氧化指纹法(Dideoxy Fingerprints,ddF )  ddF是将双脱氧末端终止测序法与SSCP结合起来的分析技术,对由双脱氧末端终止的长短不一的单链DNA进行SSCP分析。如果目的片段存在一个突变,则所有大于某一大小对应于突主变位置的双脱氧终止片段无野生型系统,对于每一个突有多次机会检测其迁移率改变,提高了检测突变的效率。ddF方法克服了SSCP分析时因DNA长度影响SSCP显示的困难,通过一种双脱氧核昔酸生产特异性的单链DNA,使其中长度合适的DNA片段显示SSCP改变。  三、基于限制性酶切和PCR技术的DNA标记   ① 扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP )   AFLP是1993年荷兰科学家Zbaeau和Vos发展起来的一种检测DNA多态性的新方法。AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物,其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA片段,再使双链人工接头的酶切片段相边接,作为扩增反应的模板 DNA,然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增,最后在接头互补链的基础上添加1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA基因再进行选择性扩增,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测获得的DNA扩增片段,根据扩增片段长度的不同检测出多态性。引物由三部分组成:与人工接头互补的核心碱基序列、限制性内切酶识别序列、引物3"端的选择碱基序列(1—10bp)。接头与接头相邻的酶切片段的几个碱基序列为结合位点。该技术的独特之处在于所用的专用引物可在知道 DNA信息的前提下就可对酶切片段进行PCR 扩增。为使酶切浓度大小分布均匀,一般采用两个限制性内切酶,一个酶为多切点,另一个酶切点数较少,因而AFLP 分析产生的主要是由两个酶共同酶切的片段。AFLP 结合了 RFLP 和RAPD两种技术的优点,具有分辨率高、稳定性好、效率高的优点。但它的技术费用昂贵,对 DNA 的纯度和内切酶的质量要求很高。尽管 AFLP技术诞生时间较短,但可称之为分子标记技术的又一次重大突破,被认为是目前一种十分理想、有效的分子标记。   ② 酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphism Sequences,CAPS )   CAPS技术又称为PCR—RFLP,它实质上是PCR技术与RFLP技术结合的一种方法。CAPS的基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19—27bp),然后用这些引物扩增该位点上的某一DNA片段,接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得扩增产物,凝胶电泳分离酶切片段,染色并进行RFLP分析。GAPS标记揭示的是特异PGR片段的限制性长度变异的信息。CAPS是一类共显性分子标记,其优点是避免了RFLP分析中膜转印这一步骤,又能保持RFLP分析的精确度。另外,由于很多限制性内切酶均可与扩增DNA酶切,所以检测到多态性机会较大。  四、基于DNA芯片技术的分子标记技术   核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)  SNP标记是美国学者LanderE于1996年提出的第三代DNA遗传标记。SNP是指同一位点的不同等位基因之间仅有个别核苷酸的差异或只有小的插入、缺失等。从分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测,SNP 标记可帮助区分两个个体遗传物质的差异。人类基因组大约每 1000 bp SNP出现一次,已有2000多个标记定位于人类染色体,对人类基因组学研究具有重要意义。检测 SNP 的最佳方法是 DNA 芯片技术。SNP被称为第三代 DNA 分子标记技术,随着 DNA 芯片技术的发展,其有望成为最重要最有效的分子标记技。   【分子标记的应用领域】  (一)、基因组作图和基因定位研究  长期以来,各种生物的遗传图谱几乎都是根据诸如形态、生理和生化等常规标记来构建的,所建成的遗传图谱仅限少数种类的生物,而且图谱分辨率大多很低,图距大,饱和度低,因而应用价值有限。分子标记用于遗传图谱构建是遗传学领域的重大进展之一。随着新的标记技术的发展,生物遗传图谱名单上的新成员将不断增加,图谱上标记的密度也将越来越高。建立起完整的高密度的分子图谱,就可以定位感兴趣的基因。  (二)、基于图谱克隆基因  图位克隆(Map—bascdcloning))是近几年随着分子标记遗传图谱的相继建立和基因分子定位而发展起来的一种新的基因克隆技术。利用分子标记辅助的图位克隆无需事先知道基因的序列,也不必了解基因的表达产物,就可以直接克隆基因。图位克隆是最为通用的基因识别途径,至少在理论上适用于一切基因。基因组研究提供的高密度遗传图谱、大尺寸物理图谱、大片段基因组文库和基因组全序列,已为图位克隆的广泛应用铺平了道路。  (三)、物种亲缘关系和系统分类中的应用  分子标记广泛存在于基因组的各个区域,通过对随机分布于整个基因组的分子标记的多态性进行比较,就能够全面评估研究对象的多样性,并揭示其遗传本质。利用遗传多样性的结果可以对物种进行聚类分析,进而了解其系统发育与亲缘关系。分子标记的发展为研究物种亲缘关系和系统分类提供了有力的手段。  (四)、用于疾病诊断和遗传病连锁分析  1980年,Bostein等成功的将PFLP技术用于镰刀型贫血症的诊断分析,开创了基因诊断的先河。PFLP是以孟德尔方式遗传,因此可以作为染色体上致病基因座位的遗传标志。目前,许多与相连锁的致病基因得以定位。小卫星和微卫星因其高度多态性而被广泛用于疾病诊断和遗传病的连锁分析。随着高通量SNP检测技术方法的出现,作为数量最多且易于批量检测的多态标记,SNP在连锁分析与基因定位,包括复杂疾病的基因定位、关联分析、个体和群体对环境致病因子与药物的易感性研究中将发挥愈来愈重要的作用。  【分子标记技术的展望】  目前,分子标记技术已飞速发展,并被广泛应用于动植物的遗传研究中。分子标记中的已在玉米、大豆、鸡、猪等动植物育种和生产中有许多应用研究,主要集中在基因定位、辅助育种、疾病治疗等方面的应用研究工作,取得了一些应用成果。分子标记技术的开发是近年来分子生物学领域研究的热点。随着分子生物学理论与技术的迅猛发展,必将研发出分析速度更快、成本更低、信息量更大的分子标记技术。而分子标记技术与提取程序化、电泳胶片分析自动化、信息(数据)处理计算机化的结合,必将加速遗传图谱的构建、基因定位、基因克隆、物种亲缘关系鉴别及与人类相关的致病基因的诊断和分析。
2023-08-02 06:10:501