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个人所得税如何申报操作流程自然人电子税务局扣缴端

2023-08-02 19:53:48
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自然人电子税务局(扣缴端)需通过5个步骤来完成申报,下面是具体操作介绍:

1、打开自然人电子税务局(扣缴端),点击登录。

2、选择申报类型。

3、选择并填写适用的申报表。

4、选择税款计算,系统自动计算应缴纳的税额。

5、选择申报表报送,点击发送申报,操作完成。

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自然人电子税务局扣缴端怎么添加企业答:1、登录软件之后,点击右上角的"企业管理"选项,点击右上角的"企业管理"选项.2、然后点击"添加",输入纳税人识别号,再确认一遍纳税人识别号,点击"保存"即可,输入纳税人识别号.自然人扣缴客户端中,身份验证状态有哪些?有什么含义?【待验证】:表示人员信息初次添加或修改时的默认状态;【验证中】:表示尚未获取到公安机关的居民身份登记信息,系统会自动获取到验证结果,无需再进行另外的操作;【验证通过】:表示采集的人员信息与公安系统的信息是一致的;【验证失败】:表示该自然人身份信息与公安机关的居民身份登记信息不一致,可以核实后将信息修改正确,如果确认无问题的,可暂时忽略该验证结果,正常进行申报;【暂不验证】:表示该自然人身份证件类型为非居民身份证(如来华工作许可证、外国护照等),目前尚无法进行验证,可以忽略该结果,正常进行后续操作.扣缴客户端中,对已有申报记录的人员信息删除:已经在扣缴客户端中申报过的人员,为了保证数据的完整性,不能删除,可以在"人员信息采集"中将"人员状态"修改为"非正常".若希望在人员信息采集页面中不再显示该人员,点击【人员信息采集】→【更多操作】→【隐藏非正常人员】即可.自然人电子税务局扣缴端怎么添加企业通过本文的手把手教你,是不是操作起来已经得心应手了?不相信的朋友可以立马打开客户端点击右上角的企业管理进行添加验证一下,并不是每次申报都需要添加,下次只要点开选择需要申报的企业名称就可以了.
2023-08-02 06:13:581

自然人电子税务局(扣缴端)交易节点没有定义

自然人电子税务局(扣缴端)交易节点没有定义是指您在自然人电子税务局(扣缴端)进行操作时,系统提示当前的交易节点没有定义。这是因为系统正在维护或升级,或者所进行的操作不符合系统的要求,导致系统无法对其进行处理。遇到这种情况,联系当地的税务部门或者电子税务局客服进行咨询解决。他们可以帮助您检查您的操作是否符合规范,并提供相应的解决方法。也可以在系统恢复后再进行相应的操作。
2023-08-02 06:14:071

自然人电子税务局(扣缴端)换电脑怎么作废已申报数据

如需作废已申报数据,须先登录电子税务局扣缴端,进入“工资薪金所得个人所得税申报”菜单,选择“删除申报表”功能,按照操作提示完成作废操作。如需作废已申报数据,可以按照以下步骤进行:1. 登录电子税务局扣缴端。在浏览器中打开电子税务局网址,输入纳税人识别号和密码,登录电子税务局扣缴端。2. 进入“工资薪金所得个人所得税申报”菜单。根据实际情况选择相应的申报菜单。3. 选择“删除申报表”功能。在相应的申报菜单中,找到“删除申报表”功能,并点击进入。4. 按照操作提示完成作废操作。在弹出的对话框中,选择需要作废的申报表,确认信息后点击“删除”即可完成作废操作。需要注意的是,作废已申报数据可能会影响纳税人的相关记录和历史申报情况,建议在进行此操作前仔细核对所需修改或作废的申报数据。如果已提交的申报数据已经过了申报期限,还能作废吗?一般情况下,已提交的申报数据过了申报期限后是无法进行修改或作废的。但如发现填报错误或遗漏,需要作出更正时,可以依据税务机关相关规定进行补正申报。如需作废已申报数据,纳税人需要在电子税务局扣缴端中完成相关操作。 在进行此操作前建议仔细核对所需修改或作废的申报数据。如果已经过了申报期限,可以根据税务机关相关规定进行补正申报。【法律依据】:《中华人民共和国税收征收管理法》 第六十二条 纳税人未按照规定的期限办理纳税申报和报送纳税资料的,或者扣缴义务人未按照规定的期限向税务机关报送代扣代缴、代收代缴税款报告表和有关资料的,由税务机关责令限期改正,可以处二千元以下的罚款节严重的,可以处二千元以上一万元以下的罚款。
2023-08-02 06:14:281

自然人电子税务局(扣缴端)怎么改地区?

自然人电子税务局扣缴端是纳税人在税局网站上进行申报、缴纳税款的工具。如果需要修改账户的地区信息,可以按以下步骤操作:1. 首先登录电子税务局扣缴端,进入“纳税人信息管理”-“个人信息管理”栏目。2. 在个人信息页面中,找到“常用信息”模块,点击“地区代码”旁边的“修改”按钮。3. 在修改地区页面中输入正确的地区代码和地址等信息,然后点击“确定”按钮完成修改。4. 修改完成后,系统会自动保存修改后的信息,进入申报时,就会根据所选的地区信息进行相应的处理和计算。以上就是修改自然人电子税务局扣缴端地区信息的具体步骤。添加新的地区信息,可以通过同样的步骤进行操作。在进行税务申报时,一定要注意填写正确的地区代码和地址信息,错误可能会导致税务申报的不准确及延迟处理。
2023-08-02 06:14:361

自然人电子税务局缴扣端出现扩展属性不一致是什么原因,如何修复?

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2023-08-02 06:14:441

自然人电子税务局(扣缴端)怎么添加公司

自然人电子税务局扣缴端添加公司的方式如下:1、进入后出现实名登录界面,点击右侧申报密码登录,出现已有企业的账户信息,输入登陆密码进入;2、登录进入自然人电子税务局后,点击右上角的单位管理;3、进入单位管理界面,点击添加按钮;4、在添加单位界面,输入纳税人识别号,点击保存;5、如果添加成功,就会弹出添加成功的界面,如果添加不成功,需要检查纳税人识别号是否正确;6、添加完成后即可在单位管理界面看到已经添加的单位,显示待申报,点击进入按钮,进入登录界面,即可使用相应单位密码进行登录。《中华人民共和国个人所得税法》第十条有下列情形之一的,纳税人应当依法办理纳税申报:(一)取得综合所得需要办理汇算清缴;(二)取得应税所得没有扣缴义务人;(三)取得应税所得,扣缴义务人未扣缴税款;(四)取得境外所得;(五)因移居境外注销中国户籍;(六)非居民个人在中国境内从两处以上取得工资、薪金所得;(七)国务院规定的其他情形。扣缴义务人应当按照国家规定办理全员全额扣缴申报,并向纳税人提供其个人所得和已扣缴税款等信息。
2023-08-02 06:15:191

自然人电子税务局扣缴端怎么添加企业

品牌型号:联想小新Pro16 2022款系统版本:Windows10软件版本:百度浏览器8.7.5自然人电子税务局扣缴端添加企业可以通过自然人电子税务局的单位管理进行添加企业,具体操作如下:通过单位管理添加1、点击登录在浏览器中,搜索并点击自然人电子税务局,填写信息后点击登录。2、点击单位管理登录后点击单位管理。3、点击保存在单位管理界面点击添加,输入纳税人识别号,点击保存即可进行添加。法律依据《中华人民共和国税收征收管理法》第二十五条 纳税人必须依照法律、行政法规规定或者税务机关依照法律、行政法规的规定确定的申报期限、申报内容如实办理纳税申报,报送纳税申报表、财务会计报表以及税务机关根据实际需要要求纳税人报送的其他纳税资料。扣缴义务人必须依照法律、行政法规规定或者税务机关依照法律、行政法规的规定确定的申报期限、申报内容如实报送代扣代缴、代收代缴税款报告表以及税务机关根据实际需要要求扣缴义务人报送的其他有关资料。第二十六条 纳税人、扣缴义务人可以直接到税务机关办理纳税申报或者报送代扣代缴、代收代缴税款报告表,也可以按照规定采取邮寄、数据电文或者其他方式办理上述申报、报送事项。第二十七条 纳税人、扣缴义务人不能按期办理纳税申报或者报送代扣代缴、代收代缴税款报告表的,经税务机关核准,可以延期申报。经核准延期办理前款规定的申报、报送事项的,应当在纳税期内按照上期实际缴纳的税额或者税务机关核定的税额预缴税款,并在核准的延期内办理税款结算。
2023-08-02 06:15:551

自然人电子税务局(扣缴端)一直在转圈怎么弄

自然人电子税务局(扣缴端)一直在转圈应当检查网络是否良好。1、网络连接失败造成,重新连接网络就好了。2、服务器人员较多出现无妨进入状态,换个时间段就好了。3、系统出现故障,推出重新登录就好了。
2023-08-02 06:16:231

自然人电子税务局(扣缴端)

自然人电子税务局零申报流程如下:(1)登录电子税务局,点击报表后面的填写申报表。(2)进入到增值税申报表后,报表里的数据都填写零,有些地区的增值税申报表也可以不用填就空着。(3)增值税零申报也就是没有收入,所以报表里的数据都是零,把报表拉到最下方,对纳税人进行数字签名,或者输入纳税人密码。(4)输入密码之后,检查日期和报表里的零数据,核对无误之后点击<提交>。法律依据:《中华人民共和国税收征收管理法实施细则》第三十三条:纳税人、扣缴义务人的纳税申报或者代扣代缴、代收代缴税款报告表的主要内容包括:税种、税目,应纳税项目或者应代扣代缴。代收代缴税款项目,计税依据,扣除项目及标准,适用税率或者单位税额,应退税项目及税额、应减免税项目及税额,应纳税额或者应代扣代缴、代收代缴税额,税款所属期限、延期缴纳税款、欠税、滞纳金等。
2023-08-02 06:16:331

企业自然人电子税务局(扣缴端)怎么申报可以一个人都没有吗?

企业自然人电子税务局(扣缴端)不可以一个人都没有,在个税申报系统申报。根据查询相关公开信息可知,企业自然人电子税务局申报扣缴端口不论集团公司还是子公司必须以公司全体人员信息进行提交,通过登录个税申报系统按照要求输入公司名称、纳税人识别号和申报密码即可,因此企业自然人电子税务局(扣缴端)不可以一个人都没有,在个税申报系统申报。扣缴端申报是当月薪酬产生发生额,就需要进行申报。
2023-08-02 06:16:521

青岛自然人电子税务局(扣缴端)怎么下载

下载方法如下:1、使用浏览器进入自然人电子税务局官网,点击右上角的下载服务。2、在下载服务中点击左下角的软件工具。3、找到自然人电子税务(扣缴端),点击后面的下载。4、选择下载的文件位置,点击下载即可。
2023-08-02 06:17:081

新办企业怎样登录自然人电子税务局(扣缴端)?

答:新办企业登录自然人电子税务局方法如下:使用电子营业执照登陆当地电子税务局第一步:打开电子税务局登录模块,选择“企业账号登陆”,点击“电子证照登陆”。第二步:在弹出的二维码中,打开手机,使用电子营业执照小程序进行扫码认证登陆,点击“扫一扫”。第三步:选择电子营业执照并输入密码。第四步:点击“确认登陆”后,电子税务局即可自动登录。
2023-08-02 06:17:371

自然人电子税务局扣缴端申报状态未申报启动更正启动不了

系统错误。重新启动系统即可。自然人电子税务局(扣缴端)”(即原来的自然人税收管理系统扣缴客户端)是专门用于个人所得税代扣代缴(预扣预缴)申报的客户端软件。
2023-08-02 06:17:531

自然人电子税务局(扣缴端)怎么申报

品牌型号:iphone14系统版本:ios16软件版本:自然人电子税务局2.3.30自然人电子税务局(扣缴端)可通过自然人电子税务局(扣缴端)进行申报,具体申报步骤如下:使用自然人电子税务局(扣缴端)app进行申报。1、登录自然人电子税务局(扣缴端)打开自然人电子税务局(扣缴端),点击登录。2、点击申报类型选择申报类型。3、填写申报表选择并填写适用的申报表。4、税款计算选择税款计算,系统自动计算应缴纳的税额。5、点击申报表报送选择申报表报送,点击发送申报,操作完成。法律依据《个人所得税法》第十一条 居民个人取得综合所得,按年计算个人所得税;有扣缴义务人的,由扣缴义务人按月或者按次预扣预缴税款;需要办理汇算清缴的,应当在取得所得的次年三月一日至六月三十日内办理汇算清缴。预扣预缴办法由国务院税务主管部门制定。居民个人向扣缴义务人提供专项附加扣除信息的,扣缴义务人按月预扣预缴税款时应当按照规定予以扣除,不得拒绝。非居民个人取得工资、薪金所得,劳务报酬所得,稿酬所得和特许权使用费所得,有扣缴义务人的,由扣缴义务人按月或者按次代扣代缴税款,不办理汇算清缴。
2023-08-02 06:18:151

自然人扣缴端里怎么切换省份

自然人扣缴端里切换省份,在地区选项选择切换,就可以选另外一个省份。自然人扣缴端里切换更换选择地区,流程如下:1、将自然人电子税务局(扣缴端)卸载重装,再进入,此时可看到地区已默认选择,且为灰色不可更改;2、双击自然人电子税务局(扣缴端)安装包“ETax.exe”;3、点选“卸载”,点击“快速卸载”;4、点击“是”开始自动卸载,点击“确定”即可成功卸载;5、卸载完成后,前往之前的安装目录(一般为C盘),将残留的“ITSKHD”文件夹下所有文件删除;6、重新安装自然人电子税务局(扣缴端)并进入,即可单击选择新的地区。自然人电子税务局(扣缴客户端)用于扣缴义务人为在本单位取得所得的人员办理全员全额扣缴申报和代理经营所得纳税申报。【法律依据】《中华人民共和国个人所得税法》第二条 下列各项个人所得,应当缴纳个人所得税:(一)工资、薪金所得;(二)劳务报酬所得;(三)稿酬所得;(四)特许权使用费所得;(五)经营所得;(六)利息、股息、红利所得;(七)财产租赁所得;(八)财产转让所得;(九)偶然所得。居民个人取得前款第一项至第四项所得(以下称综合所得),按纳税年度合并计算个人所得税;非居民个人取得前款第一项至第四项所得,按月或者按次分项计算个人所得税。纳税人取得前款第五项至第九项所得,依照本法规定分别计算个人所得税。第七条 居民个人从中国境外取得的所得,可以从其应纳税额中抵免已在境外缴纳的个人所得税税额,但抵免额不得超过该纳税人境外所得依照本法规定计算的应纳税额。
2023-08-02 06:18:531

自然人电子税务局web端是什么意思

自然人电子税务局web端是扣缴义务人快捷办理扣缴申报等相关业务的一个新渠道,主要包含人员信息采集、专项附加扣除信息采集、扣缴申报、经营所得申报、税款缴纳、查询统计等业务功能。如果之前使用过扣缴客户端,便会发现,他们的功能模块基本相同。 演示机型:华为MateBook X 系统版本:win10 APP版本:Google Chrome 89.0 自然人电子税务局web端是扣缴义务人快捷办理扣缴申报等相关业务的一个新渠道,主要包含人员信息采集、专项附加扣除信息采集、扣缴申报、经营所得申报、税款缴纳、查询统计等业务功能。如果之前使用过扣缴客户端,便会发现,他们的功能模块基本相同。
2023-08-02 06:19:031

自然人电子税务局(扣缴端)怎么维护银行账户

不用维护。绑定完成后已由系统自行设定好。
2023-08-02 06:19:291

如何下载安装自然人电子税务局(扣缴端)?个税师(1+x个税计算)证书证书范围会不会

自然人电子税务局(扣缴端)可通过所在 省(市、自 治区、直 辖市)税务局的官 方网 站下 载,或在自然人电 子税 务局网 页端 下 载。
2023-08-02 06:19:471

在另外一台电脑上下载了自然人电子税务局扣税端软件 从新做人员采集 ,为什么?

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个税怎么在电子税务局上申报?

一、打开自然人电子税务局扣缴端软件;二、点击信息采集,将当期新增或减少人员作正常和非正常状态填写;三、填写人员信息后,点击上报,将人员信息同步;四、点击综合所得填报界面,根据提示,选择复制上月数据,或根据标准模版填写;五、计算税款,点击申报,查看反馈信息确认是否申报成功;六、点击税款缴纳,完成当期个税申报。一、打开自然人电子税务局扣缴端软件;二、点击信息采集,将当期新增或减少人员作正常和非正常状态填写;三、填写人员信息后,点击上报,将人员信息同步;四、点击综合所得填报界面,根据提示,选择复制上月数据,或根据标准模版填写;五、计算税款,点击申报,查看反馈信息确认是否申报成功;六、点击税款缴纳,完成当期个税申报。
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2023-08-02 06:20:213

自然人电子税务局(扣缴端)怎么申报

自然人电子税务局零申报流程如下:(1)登录电子税务局,点击报表后面的填写申报表。(2)进入到增值税申报表后,报表里的数据都填写零,有些地区的增值税申报表也可以不用填就空着。(3)增值税零申报也就是没有收入,所以报表里的数据都是零,把报表拉到最下方,对纳税人进行数字签名,或者输入纳税人密码。(4)输入密码之后,检查日期和报表里的零数据,核对无误之后点击<提交>。法律依据:《中华人民共和国税收征收管理法实施细则》第卖烂颂三十三条:纳税人、扣缴义务人的纳税申报或者代扣代缴、代收代缴税款报告表的主要内容包括:税种、税目,应纳税项目或者应代扣代缴。代收代缴税款项目,计税依据,扣除项目及标准,适用税率或者单位税额,应退税项目及税额中郑、应减免税项目及税额,应纳税额或者应代扣代缴、代收代缴税额,税款所属期限、延期缴纳税款、欠税、滞纳历孙金等。
2023-08-02 06:21:051

自然人电子税务局扣缴端怎么操作

1、点击“办税授权管理”,企业权限管理页面点击“查看详情”,可“新增授权人员”信息,系统限制人数上限为20人,且必须为已注册为本平台用户的自然人;2、新增授权人员信息,权限类型分为:办税权限和管理权限,前者可在自然人税收管理系统扣缴客户端添加企业纳税人识别号后进行办税操作,后者不仅可在扣缴客户端添加企业纳税人识别号进行办税操作,还可给其他人员分配权限。根据授权人员情况,将授权期限类型分为定期和长期。选择长期,则只需填写授权期限起;选择定期,需要填写授权期限起和授权期限止。
2023-08-02 06:21:291

企业个人所得税如何申报

品牌型号:HUAWEI Mate 40E Pro系统版本:HarmonyOS3.0.0软件版本:微信8.0.30企业个人所得税登录“自然人电子税务局(扣缴端)”软件即可申报,具体操作方法如下:通过软件申报1、登录“自然人电子税务局(扣缴端)”软件通过“自然人电子税务局”下载并安装“自然人电子税务局(扣缴端)”,然后按照指引录入单位信息、设置登录密码登录进入。2、填写申报人员的基本信息点击“人员信息采集”和“专项附加扣除信息采集”的选项并按照指引采集和填写申报人员的基本信息等相关资料。3、点击左侧“综合所得申报”点击“综合所得申报”的选项,然后在“正常工资薪金所得”界面中填写数据,最后确认申报项目的数据是否有误。4、填写报表点击“发送申报”按照指引确认系统自动生成的数据,点击“发送申报”并向系统后台提交个人所得税的申报表。5、点击“立即缴款”选项并完成税费的缴纳提交后点击“税款缴纳”的菜单并选择“三方协议缴款”,在确认税款金额无误后点击“立即缴款”并完成缴纳。法律依据《中华人民共和国税收征收管理法》第一条 为了加强税收征收管理,规范税收征收和缴纳行为,保障国家税收收入,保护纳税人的合法权益,促进经济和社会发展,制定本法。第二条 凡依法由税务机关征收的各种税收的征收管理,均适用本法。第三条 税收的开征、停征以及减税、免税、退税、补税,依照法律的规定执行;法律授权国务院规定的,依照国务院制定的行政法规的规定执行。任何机关、单位和个人不得违反法律、行政法规的规定,擅自作出税收开征、停征以及减税、免税、退税、补税和其他同税收法律、行政法规相抵触的决定。 第四条 法律、行政法规规定负有纳税义务的单位和个人为纳税人。法律、行政法规规定负有代扣代缴、代收代缴税款义务的单位和个人为扣缴义务人。纳税人、扣缴义务人必须依照法律、行政法规的规定缴纳税款、代扣代缴、代收代缴税款。
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山东省自然人电子税务局(扣缴端)怎么下载

您好,自然人电子税务局(扣缴端)下载您可以按照以下步骤进行操作:1.使用浏览器进入自然人电子税务局官网,点击右上角的下载服务。2.在下载服务中点击左下角的软件工具。3.找到自然人电子税务(扣缴端),点击后面的下载。4.选择下载的文件位置,点击下载即可。
2023-08-02 06:22:591

自然人电子税务局(扣缴端)专项附加扣除信息采集人员怎么删除?

您好,专项附加扣除信息的删除可以按照以下步骤操作:登录自然人电子税务局(扣缴端)。选择专项附加扣除信息采集。点击特殊情形处理。选择要删除的人员信息。点击更多操作。选择删除。点击确认。完成以上步骤即可删除该专项附加扣除信息。
2023-08-02 06:23:061

个人所得税扣缴客户端怎么登录?

自然人电子税务局扣缴端添加公司的方式如下:1、进入后出现实名登录界面,点击右侧申报密码登录,出现已有企业的账户信息,输入登陆密码进入;2、登录进入自然人电子税务局后,点击右上角的单位管理;3、进入单位管理界面,点击添加按钮;4、在添加单位界面,输入纳税人识别号,点击保存;5、如果添加成功,就会弹出添加成功的界面,如果添加不成功,需要检查纳税人识别号是否正确;6、添加完成后即可在单位管理界面看到已经添加的单位,显示待申报,点击进入按钮,进入登录界面,即可使用相应单位密码进行登录。《中华人民共和国个人所得税法》第十条有下列情形之一的,纳税人应当依法办理纳税申报:(一)取得综合所得需要办理汇算清缴;(二)取得应税所得没有扣缴义务人;(三)取得应税所得,扣缴义务人未扣缴税款;(四)取得境外所得;(五)因移居境外注销中国户籍;(六)非居民个人在中国境内从两处以上取得工资、薪金所得;(七)国务院规定的其他情形。扣缴义务人应当按照国家规定办理全员全额扣缴申报,并向纳税人提供其个人所得和已扣缴税款等信息。
2023-08-02 06:23:291

自然人电子税务局(扣缴端)怎么添加三方协议

1、登录电子税务局。2、点击我要办税,选择“其他服务事项”。3、点击“网签三方协议”。4、输入银行账号信息,注意,勾选“我已阅读”,点击“提交”。5、点击“网签三方协议查询”。6、查看三方协议签署结果,验证通过的账号可使用进行扣缴税额等。
2023-08-02 06:24:071

平板怎么安装自然人电子税务局(扣缴端)

在自然人电子税务局官网下载。1、进入自然人电子税务局官网直接搜索自然人电子税务局,进入官网。2、点击下载进入官网后,点击右上角的下载服务。3、下载即可。
2023-08-02 06:24:141

怎样才能在自然人电子税务局中添加单位信息?

自然人电子税务局扣缴端添加公司的方式如下:1、进入后出现实名登录界面,点击右侧申报密码登录,出现已有企业的账户信息,输入登陆密码进入;2、登录进入自然人电子税务局后,点击右上角的单位管理;3、进入单位管理界面,点击添加按钮;4、在添加单位界面,输入纳税人识别号,点击保存;5、如果添加成功,就会弹出添加成功的界面,如果添加不成功,需要检查纳税人识别号是否正确;6、添加完成后即可在单位管理界面看到已经添加的单位,显示待申报,点击进入按钮,进入登录界面,即可使用相应单位密码进行登录。《中华人民共和国个人所得税法》第十条有下列情形之一的,纳税人应当依法办理纳税申报:(一)取得综合所得需要办理汇算清缴;(二)取得应税所得没有扣缴义务人;(三)取得应税所得,扣缴义务人未扣缴税款;(四)取得境外所得;(五)因移居境外注销中国户籍;(六)非居民个人在中国境内从两处以上取得工资、薪金所得;(七)国务院规定的其他情形。扣缴义务人应当按照国家规定办理全员全额扣缴申报,并向纳税人提供其个人所得和已扣缴税款等信息。
2023-08-02 06:24:301

有限责任(自然人独资)电子税务局怎样申报?

找到当地电子税务局官网,实名认证后登录,在 我要办税 中申报当月税种,在此之前已进行税务登记已核定税种
2023-08-02 06:24:582

如何在自然人软件中切换省份?

自然人扣缴端里切换省份,在地区选项选择切换,就可以选另外一个省份。自然人扣缴端里切换更换选择地区,流程如下:1、将自然人电子税务局(扣缴端)卸载重装,再进入,此时可看到地区已默认选择,且为灰色不可更改;2、双击自然人电子税务局(扣缴端)安装包“ETax.exe”;3、点选“卸载”,点击“快速卸载”;4、点击“是”开始自动卸载,点击“确定”即可成功卸载;5、卸载完成后,前往之前的安装目录(一般为C盘),将残留的“ITSKHD”文件夹下所有文件删除;6、重新安装自然人电子税务局(扣缴端)并进入,即可单击选择新的地区。自然人电子税务局(扣缴客户端)用于扣缴义务人为在本单位取得所得的人员办理全员全额扣缴申报和代理经营所得纳税申报。【法律依据】《中华人民共和国个人所得税法》第二条 下列各项个人所得,应当缴纳个人所得税:(一)工资、薪金所得;(二)劳务报酬所得;(三)稿酬所得;(四)特许权使用费所得;(五)经营所得;(六)利息、股息、红利所得;(七)财产租赁所得;(八)财产转让所得;(九)偶然所得。居民个人取得前款第一项至第四项所得(以下称综合所得),按纳税年度合并计算个人所得税;非居民个人取得前款第一项至第四项所得,按月或者按次分项计算个人所得税。纳税人取得前款第五项至第九项所得,依照本法规定分别计算个人所得税。第七条 居民个人从中国境外取得的所得,可以从其应纳税额中抵免已在境外缴纳的个人所得税税额,但抵免额不得超过该纳税人境外所得依照本法规定计算的应纳税额。
2023-08-02 06:25:051

新办企业怎样登录自然人电子税务局(扣缴端)?

新办企业登录自然人电子税务局方法如下:使用电子营业执照登陆当地电子税务局 第一步:打开电子税务局登录模块,选择“企业账号登陆”,点击“电子证照登陆”。 第二步:在弹出的二维码中,打开手机,使用电子营业执照小程序进行扫码认证登陆,点击“扫一扫”。 第三步:选择电子营业执照并输入密码。 第四步:点击“确认登陆”后,电子税务局即可自动登录。
2023-08-02 06:25:311

自然人电子税务局(扣缴端),企业是第一次登陆,没有密码怎么设置?

手机个人所得税APP重置申报密码操作流程:1、使用法人或者财务负责人账号,登录个人所得税APP。2、进入【个人中心】--【企业办税权限】,点击要重置申报密码的单位,进入【企业办税人员列表】界面,当角色是法人或财务负责人的时候,左下角会有【重置申报密码】功能。3、点击【重置申报密码】,判断该账号是否有绑定的手机。如果没有绑定手机号,需要先到【个人中心】--【安全中心】绑定手机号;如果有,则进入申报密码重置页面;4、输入新密码并确认密码后,获取短信验证码,页面上所有内容输入完成后,点击【保存】,申报密码重置成功,提示重置成功即可。温馨提示:获取验证码的手机号是您注册个税所得税APP时绑定的手机号,可以在【安全中心】查看。注意事项:1、登录密码的长度必须是8-20位;2、登录密码必须是数字、英文字母、符号三种中的两种组合;3、若忘记登录密码,在登录界面可以通过“忘记登录密码”重置登录密码;4、进入软件后,可以在:系统设置>>系统管理>>登录密码设置中修改登录密码;
2023-08-02 06:25:411

自然人电子税务局(扣缴端)20号可以报个人税吗?

可以。自然人电子税务局(扣缴端)是一款全国通用版个税申报软件,依照该软件上的税务申报规定可知,在每月的20号是可以报个人个人税的,只需要出示相关证件上传即可。
2023-08-02 06:26:111

自然人电子税务局怎么添加企业

自然人电子税务局扣缴端添加公司的方式如下:1、进入后出现实名登录界面,点击右侧申报密码登录,出现已有企业的账户信息,输入登陆密码进入;2、登录进入自然人电子税务局后,点击右上角的单位管理;3、进入单位管理界面,点击添加按钮;4、在添加单位界面,输入纳税人识别号,点击保存;5、如果添加成功,就会弹出添加成功的界面,如果添加不成功,需要检查纳税人识别号是否正确;6、添加完成后即可在单位管理界面看到已经添加的单位,显示待申报,点击进入按钮,进入登录界面,即可使用相应单位密码进行登录。《中华人民共和国个人所得税法》第十条有下列情形之一的,纳税人应当依法办理纳税申报:(一)取得综合所得需要办理汇算清缴;(二)取得应税所得没有扣缴义务人;(三)取得应税所得,扣缴义务人未扣缴税款;(四)取得境外所得;(五)因移居境外注销中国户籍;(六)非居民个人在中国境内从两处以上取得工资、薪金所得;(七)国务院规定的其他情形。扣缴义务人应当按照国家规定办理全员全额扣缴申报,并向纳税人提供其个人所得和已扣缴税款等信息。
2023-08-02 06:26:301

企业个人所得税如何申报

品牌型号:HUAWEI Mate 40E Pro系统版本:HarmonyOS3.0.0软件版本:微信8.0.30企业个人所得税登录“自然人电子税务局(扣缴端)”软件即可申孝拆亮报,具体操作方法如下:通过软件申报1、登录“自然人电子税务局(扣缴端)”软件通过“自然人电子税务局”下载并安装“自然人电子税务局(扣缴端)”,然后按照指引录入单位信息、设置登录密码登录进入。2、填写申报人员的基本信息点击“人员信息采集”和“专项附加扣除信息采集”的选项并按照指引采集和填写申报人员的基本信息等相关资料。3、点击左侧“综合所得申报”点击“综合所得申报”的选项,然后在“正常工资薪金所得”界面中填写数据,最后确认申报项目的数据是否有误。4、填写报表点击“发送申报”按照指引确认系统自动生成的数据,点击“发送申报”并向系统后台提交个人所得税的申报表。5、点击“立即缴款”选项并完成税费的缴纳提交后点击“税款缴纳”的菜单并选择“三方协议缴款”,在确认税款金额无误后点击“立即缴款”并完成巧宽缴纳。法律依据《中华人民共和国税收征收管理法》第一条 为了加强税收征收管理,规范税收征收御纳和缴纳行为,保障国家税收收入,保护纳税人的合法权益,促进经济和社会发展,制定本法。第二条 凡依法由税务机关征收的各种税收的征收管理,均适用本法。第三条 税收的开征、停征以及减税、免税、退税、补税,依照法律的规定执行;法律授权国务院规定的,依照国务院制定的行政法规的规定执行。任何机关、单位和个人不得违反法律、行政法规的规定,擅自作出税收开征、停征以及减税、免税、退税、补税和其他同税收法律、行政法规相抵触的决定。 第四条 法律、行政法规规定负有纳税义务的单位和个人为纳税人。法律、行政法规规定负有代扣代缴、代收代缴税款义务的单位和个人为扣缴义务人。纳税人、扣缴义务人必须依照法律、行政法规的规定缴纳税款、代扣代缴、代收代缴税款。
2023-08-02 06:26:451

自然人电子税务局(扣缴端)里面的每月已扣个税填哪里?

自然人电子税务局(扣缴端)里面的每月已扣(已缴)个税自动生成,不用自己填写。申报个人所得税,可登录自然人电子税务局扣缴端,先采集人员(有专项附加的要采集附加),再填写发送报表,最后缴款。“自然人电子税务局扣缴端”是专门用于个人所得税代扣代缴申报的客户端软件,是全国通用版的,纳税人可以直接登录后台进行使用。可以在线查询纳税记录、申报收入以及申诉记录等信息。让纳税人可以随时随地在线完成个税申报。
2023-08-02 06:27:571

如何在自然人扣缴端切换省份

自然人扣缴端里切换省份,在地区选项选择切换,就可以选另外一个省份。自然人扣缴端里切换更换选择地区,流程如下:1、将自然人电子税务局(扣缴端)卸载重装,再进入,此时可看到地区已默认选择,且为灰色不可更改;2、双击自然人电子税务局(扣缴端)安装包“ETax.exe”;3、点选“卸载”,点击“快速卸载”;4、点击“是”开始自动卸载,点击“确定”即可成功卸载;5、卸载完成后,前往之前的安装目录(一般为C盘),将残留的“ITSKHD”文件夹下所有文件删除;6、重新安装自然人电子税务局(扣缴端)并进入,即可单击选择新的地区。自然人电子税务局(扣缴客户端)用于扣缴义务人为在本单位取得所得的人员办理全员全额扣缴申报和代理经营所得纳税申报。【法律依据】《中华人民共和国个人所得税法》第二条 下列各项个人所得,应当缴纳个人所得税:(一)工资、薪金所得;(二)劳务报酬所得;(三)稿酬所得;(四)特许权使用费所得;(五)经营所得;(六)利息、股息、红利所得;(七)财产租赁所得;(八)财产转让所得;(九)偶然所得。居民个人取得前款第一项至第四项所得(以下称综合所得),按纳税年度合并计算个人所得税;非居民个人取得前款第一项至第四项所得,按月或者按次分项计算个人所得税。纳税人取得前款第五项至第九项所得,依照本法规定分别计算个人所得税。第七条 居民个人从中国境外取得的所得,可以从其应纳税额中抵免已在境外缴纳的个人所得税税额,但抵免额不得超过该纳税人境外所得依照本法规定计算的应纳税额。
2023-08-02 06:28:121

怎样下载电子税务局个税扣缴客户端

企业个税申报客户端需通过3个步骤来完成下载,下面是具体操作介绍:1、打开自然人电子税务局,选择公众服务,点击下载服务。2、选择软件工具。3、选择自然人电子税务局(扣缴端),点击下载,操作完成。
2023-08-02 06:29:151

自然人在电子税务局开发票怎么缴费

自然人在电子税务局开发票缴费方式如下:1、实名登录“自然人电子税务局(扣缴端)”。2、完成各项个税的申报。3、点击“税款缴纳”。
2023-08-02 06:29:221

自然人个税APP怎么申报个税?

一、打开自然人电子税务局扣缴端软件;二、点击信息采集,将当期新增或减少人员作正常和非正常状态填写;三、填写人员信息后,点击上报,将人员信息同步;四、点击综合所得填报界面,根据提示,选择复制上月数据,或根据标准模版填写;五、计算税款,点击申报,查看反馈信息确认是否申报成功;六、点击税款缴纳,完成当期个税申报。一、打开自然人电子税务局扣缴端软件;二、点击信息采集,将当期新增或减少人员作正常和非正常状态填写;三、填写人员信息后,点击上报,将人员信息同步;四、点击综合所得填报界面,根据提示,选择复制上月数据,或根据标准模版填写;五、计算税款,点击申报,查看反馈信息确认是否申报成功;六、点击税款缴纳,完成当期个税申报。
2023-08-02 06:30:391

自然人电子税务局(扣缴端)更改不了位置

最后就是5.卸载完成后,前往之前的安装目录(一般为C盘),将残留的“ITSKHD”文件夹下所有文件删除。6.重新安装自然人电子税务局(扣缴端)并进入,即可单击选择新的地区。
2023-08-02 06:30:521

自然人电子商务局扣缴端更多操作界面在哪里

自然人电子商务局扣缴端更多操作界面具体情况如下。纳税人到办税服务厅完成并档后,点击扣缴客户端【人员信息采集】-【更多操作】,选择【特殊情形处理】-【人员并档】,选择正确的人员进行获取并档信息。在自然人电子税务局(扣缴端)中,将错误的人员的“人员状态”信息设置为“非正常”,并报送即可;之后重新添加正确的信息。
2023-08-02 06:31:001

自然人电子税务局(扣缴端)人员信息如何报送?

自然人电子税务局(扣缴端)人员信息如何报送?打开自然人电子税务局(扣缴端)左侧【人员信息采集】菜单,点击【报送】按钮,报送成功即可。注:系统自动检测需要报送的人员信息,无需手工选择。
2023-08-02 06:31:102

亚马逊海外自营是什么意思

亚马逊海外自营是由海外仓库(一般为亚马逊美国)发货,售后根据实际情况来定。亚马逊公司(Amazon,简称亚马逊;NASDAQ:AMZN),是美国最大的一家网络电子商务公司,位于华盛顿州的西雅图。是网络上最早开始经营电子商务的公司之一,亚马逊成立于1995年,一开始只经营网络的书籍销售业务,现在则扩及了范围相当广的其他产品,已成为全球商品品种最多的网上零售商和全球第二大互联网企业,在公司名下,也包括了AlexaInternet、a9、lab126、和互联网电影数据库(Internet Movie Database,IMDB)等子公司。 亚马逊及其它销售商为客户提供数百万种独特的全新、翻新及二手商品,如影视、音乐和游戏、数码下载、电子和电脑、家居园艺用品、玩具、婴幼儿用品、食品、服饰、鞋类和珠宝、健康和个人护理用品、体育及户外用品、玩具、汽车及工业产品等。2004年8月,亚马逊全资收购卓越网。2016年6月30日,亚马逊日本网站推出汉语版页面;同年10月,亚马逊排2016年全球100大最有价值品牌第8名。2017年3月29日,亚马逊宣布关闭旗下Quidsi部门,原因是无法让它旗下的Diapers.com和Soap.com两个电商网站实现盈利。2018年5月11日,亚马逊正式上调Prime包年会员费,从之前的99美元上调到119美元;同年9月5日,亚马逊总市值突破万亿美元大关,成为继苹果后第二家市值突破万亿美元大关的科技公司。2019年4月18日,亚马逊中国正式对外宣布,将于7月18日停止为亚马逊中国网站上的第三方卖家提供卖家服务,但保留跨境贸易、全球开店、云计算、kindle等业务。
2023-08-02 06:21:451

Partnering 模式的适用情况有(  )。

【答案】:A、B、D本题考查Partnering 模式的适用情况。选项C是不确定因素较多的项目。选项E不属于。
2023-08-02 06:21:481

陷阱的英语单词怎样拼

陷阱[xiàn jǐng]trap; pitfall; pit; gin; hook例句太多人都掉进了这个陷阱中。It"s a trap too many people fall into.
2023-08-02 06:21:511

陷阱的英语单词怎样拼

pitfall;pit;trap;gin;
2023-08-02 06:21:443

测植物dna多态性是以条带数最多的为参照吗

分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比,DNA分子标记具有的优越性有:大多数分子标记为共显性,对隐性的性状的选择十分便利;基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用于标记分析;分子标记揭示来自DNA的变异;表现为中性,不影响目标性状的表达,与不良性状无连锁;检测手段简单、迅速。随着分子生物学技术的发展,现在DNA分子标记技术已有数十种,广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。分子标记的概念有广义和狭义之分。广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。  理想的分子标记必须达以下几个要求:(1) 具有高的多态性;(2)共显性遗传,即利用分子标记可鉴别二倍体中杂合和纯合基因型;(3) 能明确辨别等位基因;(4) 遍布整个基因组;(5)除特殊位点的标记外,要求分子标记均匀分布于整个基因组;(6) 选择中性(即无基因多效性);(7)检测手段简单、快速(如实验程序易自动化);(8) 开发成本和使用成本尽量低廉;(9)在实验室内和实验室间重复性好(便于数据交换)。但是,目前发现的任何一种分子标记均不能满足以所有要求。  【分子标记的种类】  一、基于分子杂交技术的分子标记技术   此类标记技术是利用限制性内切酶解及凝胶电泳分离不同的生物 DNA 分子,然后用经标记的特异 DNA 探针与之进行杂交,通过放射自显影或非同位素显色技术来揭示 DNA 的多态性。   ① 限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)   1974年Grodzicker等创立了限制性片段长度多态性(RFLP)技术,它是一种以DNA—DNA杂交为基础的第一代遗传标记。RFLP基本原理:利用特定的限制性内切酶识别并切割不同生物个体的基因组DNA,得到大小不等的DNA片段,所产生的DNA数目和各个片段的长度反映了DNA分子上不同酶切位点的分布情况。通过凝胶电泳分析这些片段,就形成不同带,然后与克隆DNA探针进行Southern杂交和放射显影,即获得反映个体特异性的RFLP图谱。它所代表的是基因组DNA在限制性内切酶消化后产生片段在长度上差异。由于不同个体的等位基因之间碱基的替换、重排、缺失等变化导致限制内切酶识别和酶切发生改变从而造成基因型间限制性片段长度的差异。  RFLP的等位基因其有共显性特点。RFLP标记位点数量不受限制,通常可检测到的基因座位数为1—4个。RFLP技术也存在一些缺陷,主要是克隆可表现基因组DNA多态性的探针较为困难;另外,实验操作较繁锁,检测周期长,成本费用也很高。自RFLP问世以来,已经在基因定位及分型、遗传连锁图谱的构建、疾病的基因诊断等研究中仍得到了广泛的应用。  ② 数目可变串联重复多态性(Variable Number of Tandem Repeats,VNTR )   数目可变串联重复序列又称小卫星DNA (MinisatelliteDNA),是一种重复DNA小序列,为10到几百核苷酸,拷贝数10一10001不等。VNTR基本原理与RFLP大致相同,只是对限制性内切酶和DNA探针有特殊要求:(1)限制性内切酶的酶切位点必须不在重复序列中,以保证小卫星或微卫星序列的完整性。(2)内切酶在基因组的其他部位有较多酶切位点,则可使卫星序列所在片段含有较少无关序列,通过电泳可充分显示不同长度重复序列片段的多态性。(3)分子杂交所用DNA探针核昔酸序列必须是小卫星序列或微卫星序列,通过分子杂交和放射自显影后,就可一次性检测到众多小卫星或微卫星位点,得到个体特异性的DNA指纹图谱。  小卫星标记的多态信息含量较高,在17一19之间。缺点是数量有限,而且在基因组上分布不均匀,这就极大限制其在基因定位中的应用。VNTR也存在实验操作繁琐、检测时间长、成本高的缺点。   二、基于PCR技术的分子标记技术  (一)、随机引物的PCR标记  所用引物的核苷酸序列是随机的,其扩增的 DNA 区域事先未知。随机引物PCR扩增的DNA 区段产生多态性的分子基础是模板 DNA扩增区段上引物结合位点的碱基序列的突变,不同来源的基因组在该区段上表现为扩增产物有无差异或扩增片段大小的差异。随机引物PCR标记表现为显性或共显性。  ① 随机扩增多态性DNA (Random Amplified Polymorphism DNA,RAPD )  RAPD技术是1990年由Wiliam和Welsh等人利用PCR技术发展的检测DNA多态性的方法。基本原理:它是利用随机引物(一般为8—10bp)通过PCR反应非定点扩增DNA片段,然后用凝胶电泳分析扩增产物DNA片段的多态性。扩增片段多态性便反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD所使用的引物各不相同,但对任一特定引物,它在基因组DNA序列上有其特定的结合位点,一旦基因组在这些区域发生DAN片段插人、缺失或碱基突变,就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化,从而导致扩增产物数量和大小发生改变,表现出多态性。就单一引物而言,其只能检测基因组特定区域DNA多态性,但利用一系列引物则可使检测区域扩大到整个基因组,因此,RAPD可用于对整个基因组DNA进行多态性检测,也可用于构建基因组指纹图谱。  与RFLP相比,RAPD具有以下优点:(1)技术简单,检测速度快;(2)RAPD分析只需少量DNA样品;(3)不依赖于种属特异性和基因组结构,一套引物可用于不同生物基因组分析;(4)成本较低。但RAPD也存在一些缺点:(1)RAPD标记是一个显性标记,不能鉴别杂合子和纯合子;(2)存在共迁移问题,凝胶电泳只能分开不同长度DNA片段,而不能分开那些分子量相同但碱基序列组成不同的DNA片段;(3) RAPD技术中影响因素很多,所以实验的稳定性和重复性差。  ② 任意引物PCR (Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction, AP—PCR)   在AP—PCR分析中,所使用的引物较长(10-50 bp) ,PCR反应分为两个阶段,首先寡核昔酸引物在低严谨条件下与模板DNA退火,此时发生了一些合成,以便稳定模板与引物之间相互作用。然后进行高严谨退火条件的循环,两个位点间那些序列在低严谨度退火条件下发生的引物延伸可继续在高严谨条件下扩增。采用变性聚丙烯酞胺凝胶电泳分析PCR产物,最终反应结果与RAPD类似。只要设计的引物在低严谨退火条件下能减少引物产生人为产物,应用成对组合的引物可以产生新的AP—PCR谱带,但引物配对组合使用时,得到的图谱与单引物单独使用时产生的图谱之和很不相同,这样,50个引物能产生1250种不同指纹图谱。  AP—PCR方法不需预知序列资料,而且检测的基因组样本是任意的,还能够用于检测近等基因系(或同类系)中的多态性。AP—PCR的缺点是每个新的多态性都必须经纯化才能进一步使用。另外,此方法在杂合体中仅可辨别长度多态性。  ③ DNA扩增指纹印迹(DNA Amplification Fingerprinting,DAF)  DAF是一种改进的RAPD分析技术,与RAPD技术不同的是,DAF分析中所使用的引物浓度更高,长度更短(一般为5一8bp),因此它所提供的谱带信息比RAPD大得多,如当使用5个核昔酸的引物时,引物和模板的组合大约可扩增出10一100个DNA片段。PCR扩增产物是在凝胶上进行分离,通过银染即可产生非常复杂带型。  (二)、特异引物的PCR标记   特异引物的PCR标记所用引物是针对已知序列的 DNA 区段而设计的,具有特定核苷酸序列(通常为 18—24 bp),可在常规PCR复性温度下进行扩增,对基因组 DNA 的特定区域进行多态性分析。   ① 序列标志位点(Sequence Tagged Sites,STS)  STS是对以特定对引物序进行PCR特异扩增的一类分子标记的统称。通过设计特定的引物,使其与基因组DNA序列中特定结合位点结合,从而可用来扩增基因组中特定区域,分析其多态性。利用特异PCR技术的最大优点是它产生信息非常可靠,而不像RFLP和RAPD那样存在某种模糊性。  ② 简单重复序列(Simple Sequence Repeat,SSR)  简单重复序(SSR)也称微卫星DNA,其串联重复的核心序列为1一6 bp,其中最常见是双核昔酸重复,即(CA) n和(TG)n每个微卫星DNA的核心序列结构相同,重复单位数目10一60个,其高度多态性主要来源于串联数目的不同。SSR标记的基本原理:根据微卫星序列两端互补序列设计引物,通过PCR反应扩增微卫星片段,由于核心序列串联重复数目不同,因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物,将扩增产物进行凝胶电泳,根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。  SSR具有以下一些优点:(l)一般检测到的是一个单一的多等位基因位点;(2)微卫星呈共显性遗传,故可鉴别杂合子和纯合子;(3)所需DNA量少。显然,在采用SSR技术分析微卫星DNA多态性时必须知道重复序列两端的DNA序列的信息。如不能直接从DNA数据库查寻则首先必须对其进行测序。  ③ 序列特异性扩增区(Sequence—characterized Amplified Region,SCAR)   SCAR标记是在RAPD技术基础上发展起来的。SCAR标记是将目标 RAPD片段进行克隆并对其末端测序,根据 RAPD 片段两端序列设计特异引物,对基因 DNA片段再进行PCR特异扩增,把与原RAPD片段相对应的单一位点鉴别出来。SCAR标记是共显性遗传,待检 DNA间的差异可直接通过有无扩增产物来显示。SCAR标记方便、快捷、可靠,可以快速检测大量个体,结果稳定性好,重现性高。   ④ 单引物扩增反应(Single Primer Amplificatipn Reawtion,SPAR)  SPAR技术是与RAPD技术相似的一种标记技术,SPAR也只用一个引物,但所用的引物是在SSR的基础上设计的。这些引物能与SSR之间的间隔序列进行特异性结合,然后通过P(:R技术扩增SSR之间的DNA序列,凝胶电泳分离扩增产物,分析其多态性。另外,还有一种与SPAR技术非常相似的标记技术,即ISTR ( Inverse Sequence—taggedRepeat)技术,ISTR所用的引物是在反向重复序列基础上设计的,PCR扩增的是反向重复序列之间的DIVA序列。  ⑤ DNA单链构象多态性(Single Strand Conformation Polymorphism,SSCP)  SSCP是指等长的单链DNA因核昔酸序列的差异而产生构象变异,在非变性聚丙烯酞胺中的表现为电泳迁移率的差别。单链DNA构象分析对DNA序列的改变非常敏感,常常一个碱基差别都能显示出来。在SSCP分析中,利用PCR技术定点扩增基因组DNA中某一目的片段,将扩增产物进行变性处理,双链DNA分开成单链,再用非变性聚丙烯酞胺凝胶电泳分离,根据条带位置变化来判断目的片段中是否存在突变。SSCP结果判定是通过多个样品之间对比,观察条带之间位置改变,从而显示出不同生物个体的DNA特异性,达到指纹分析目的。为了进一步提高SSCP的检出率,可将SSCP分析与其它突变检测方法相结合。其中与杂交双链分析(Heterocluplexanalysis,Het)法结合可以大大提高检出率。Het法是用探针与要检测的单链DNA或RNA进行杂交,含有一对碱基对错配的杂交链可以和完全互补的杂交链在非变性PAG凝胶上通过电泳被分离开。对同一靶序列分别进行SSCP和Het分析可以使点突变的检出率接近100%,而且实验简便。  ⑥ 双脱氧化指纹法(Dideoxy Fingerprints,ddF )  ddF是将双脱氧末端终止测序法与SSCP结合起来的分析技术,对由双脱氧末端终止的长短不一的单链DNA进行SSCP分析。如果目的片段存在一个突变,则所有大于某一大小对应于突主变位置的双脱氧终止片段无野生型系统,对于每一个突有多次机会检测其迁移率改变,提高了检测突变的效率。ddF方法克服了SSCP分析时因DNA长度影响SSCP显示的困难,通过一种双脱氧核昔酸生产特异性的单链DNA,使其中长度合适的DNA片段显示SSCP改变。  三、基于限制性酶切和PCR技术的DNA标记   ① 扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP )   AFLP是1993年荷兰科学家Zbaeau和Vos发展起来的一种检测DNA多态性的新方法。AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物,其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA片段,再使双链人工接头的酶切片段相边接,作为扩增反应的模板 DNA,然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增,最后在接头互补链的基础上添加1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA基因再进行选择性扩增,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测获得的DNA扩增片段,根据扩增片段长度的不同检测出多态性。引物由三部分组成:与人工接头互补的核心碱基序列、限制性内切酶识别序列、引物3"端的选择碱基序列(1—10bp)。接头与接头相邻的酶切片段的几个碱基序列为结合位点。该技术的独特之处在于所用的专用引物可在知道 DNA信息的前提下就可对酶切片段进行PCR 扩增。为使酶切浓度大小分布均匀,一般采用两个限制性内切酶,一个酶为多切点,另一个酶切点数较少,因而AFLP 分析产生的主要是由两个酶共同酶切的片段。AFLP 结合了 RFLP 和RAPD两种技术的优点,具有分辨率高、稳定性好、效率高的优点。但它的技术费用昂贵,对 DNA 的纯度和内切酶的质量要求很高。尽管 AFLP技术诞生时间较短,但可称之为分子标记技术的又一次重大突破,被认为是目前一种十分理想、有效的分子标记。   ② 酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphism Sequences,CAPS )   CAPS技术又称为PCR—RFLP,它实质上是PCR技术与RFLP技术结合的一种方法。CAPS的基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19—27bp),然后用这些引物扩增该位点上的某一DNA片段,接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得扩增产物,凝胶电泳分离酶切片段,染色并进行RFLP分析。GAPS标记揭示的是特异PGR片段的限制性长度变异的信息。CAPS是一类共显性分子标记,其优点是避免了RFLP分析中膜转印这一步骤,又能保持RFLP分析的精确度。另外,由于很多限制性内切酶均可与扩增DNA酶切,所以检测到多态性机会较大。  四、基于DNA芯片技术的分子标记技术   核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)  SNP标记是美国学者LanderE于1996年提出的第三代DNA遗传标记。SNP是指同一位点的不同等位基因之间仅有个别核苷酸的差异或只有小的插入、缺失等。从分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测,SNP 标记可帮助区分两个个体遗传物质的差异。人类基因组大约每 1000 bp SNP出现一次,已有2000多个标记定位于人类染色体,对人类基因组学研究具有重要意义。检测 SNP 的最佳方法是 DNA 芯片技术。SNP被称为第三代 DNA 分子标记技术,随着 DNA 芯片技术的发展,其有望成为最重要最有效的分子标记技。   【分子标记的应用领域】  (一)、基因组作图和基因定位研究  长期以来,各种生物的遗传图谱几乎都是根据诸如形态、生理和生化等常规标记来构建的,所建成的遗传图谱仅限少数种类的生物,而且图谱分辨率大多很低,图距大,饱和度低,因而应用价值有限。分子标记用于遗传图谱构建是遗传学领域的重大进展之一。随着新的标记技术的发展,生物遗传图谱名单上的新成员将不断增加,图谱上标记的密度也将越来越高。建立起完整的高密度的分子图谱,就可以定位感兴趣的基因。  (二)、基于图谱克隆基因  图位克隆(Map—bascdcloning))是近几年随着分子标记遗传图谱的相继建立和基因分子定位而发展起来的一种新的基因克隆技术。利用分子标记辅助的图位克隆无需事先知道基因的序列,也不必了解基因的表达产物,就可以直接克隆基因。图位克隆是最为通用的基因识别途径,至少在理论上适用于一切基因。基因组研究提供的高密度遗传图谱、大尺寸物理图谱、大片段基因组文库和基因组全序列,已为图位克隆的广泛应用铺平了道路。  (三)、物种亲缘关系和系统分类中的应用  分子标记广泛存在于基因组的各个区域,通过对随机分布于整个基因组的分子标记的多态性进行比较,就能够全面评估研究对象的多样性,并揭示其遗传本质。利用遗传多样性的结果可以对物种进行聚类分析,进而了解其系统发育与亲缘关系。分子标记的发展为研究物种亲缘关系和系统分类提供了有力的手段。  (四)、用于疾病诊断和遗传病连锁分析  1980年,Bostein等成功的将PFLP技术用于镰刀型贫血症的诊断分析,开创了基因诊断的先河。PFLP是以孟德尔方式遗传,因此可以作为染色体上致病基因座位的遗传标志。目前,许多与相连锁的致病基因得以定位。小卫星和微卫星因其高度多态性而被广泛用于疾病诊断和遗传病的连锁分析。随着高通量SNP检测技术方法的出现,作为数量最多且易于批量检测的多态标记,SNP在连锁分析与基因定位,包括复杂疾病的基因定位、关联分析、个体和群体对环境致病因子与药物的易感性研究中将发挥愈来愈重要的作用。  【分子标记技术的展望】  目前,分子标记技术已飞速发展,并被广泛应用于动植物的遗传研究中。分子标记中的已在玉米、大豆、鸡、猪等动植物育种和生产中有许多应用研究,主要集中在基因定位、辅助育种、疾病治疗等方面的应用研究工作,取得了一些应用成果。分子标记技术的开发是近年来分子生物学领域研究的热点。随着分子生物学理论与技术的迅猛发展,必将研发出分析速度更快、成本更低、信息量更大的分子标记技术。而分子标记技术与提取程序化、电泳胶片分析自动化、信息(数据)处理计算机化的结合,必将加速遗传图谱的构建、基因定位、基因克隆、物种亲缘关系鉴别及与人类相关的致病基因的诊断和分析。
2023-08-02 06:21:431