Rolling Circle Amplification是什么意思

英国翻译家亚历山大·弗雷泽·泰特勒增译（Amplification）是很常用的一种翻译技巧，指根据英汉两种语言不同的思维方式、语言习惯和表达方式，在翻译时增添一些词、短句或句子，以便更准确地表达出原文所包含的意义。增译法这种方式多半用在汉译英里。汉语无主句较多，而英语句子一般都要有主语，所以在翻译汉语无主句的时候，除了少数可用英语无主句、被动语态或"Therebe?"结构来翻译以外，一般都要根据语境补出主语，使句子完整。英汉两种语言在名词、代词、连词、介词和冠词的使用方法上也存在很大差别。英语中代词使用频率较高，凡说到人的器官和归某人所有的或与某人有关的事物时，必须在前面加上物主代词。因此，在汉译英时需要增补物主代词，而在英译汉时又需要根据情况适当地删减。

信号幅度微调。国际规定。AMPL英文全称Amplification。逆时针，(转向MIN)，幅度减小，顺时针(转向MAX)幅度增加)，拔出，信号衰减为原来的十分之一。

引申的单词有：amplification，enlighten-type。引申的单词有：enlighten-type，amplification。注音是：一ㄣˇㄕㄣ。词性是：动词。结构是：引(左右结构)申(独体结构)。拼音是：yǐnshēn。引申的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、词语解释【点此查看计划详细内容】引申yǐnshēn。(1)字、词由原义产生新义(如“道”本义为“道路”,“方向、方法、道理”为其引申义)。二、引证解释⒈见“引伸”。三、国语词典由本义推演、转变而成其他的意义。词语翻译英语toextend(themeaningofaword,ananalogyetc)_,derivation德语Ableitung(S)_法语extension四、网络解释引申引申指的是派生意义产生的途径。引申大体上可以分成隐喻和换喻两种方式。关于引申的近义词实践履行奉行推论推行执行实行扩充实施施行关于引申的反义词阻止关于引申的诗句楚馆宾筵引申白门引申白宾关于引申的成语熊经鸟申申冤吐气申祸无良长往远引三令五申穿壁引光关于引申的词语穿壁引光小屈大申郁抑不申申旦达夕奉申贺敬达诚申信申冤吐气申祸无良三令五申申诉无门关于引申的造句1、这是动中即景，写出了路疑无而实有，景似绝而复出的境界，蕴含着生活的哲理，后引申为人在遇到困境时会生出许多希望。2、分号可以理解为句号，就是解释引申。你可以把他们分别理解再联系在一起。3、第二句只是形容车子，问得就是现在指的这辆车去不去图书馆，没有引申的意思。4、一个词有本义、引申义等义项。5、现在引申的意思大概就是说，对某些事物不是很了解，但是可能会知道和这些事物有关的事情或者情况。点此查看更多关于引申的详细信息

放大电路的特征 从作用上来说 具有能量调控的作用 从电路结构来说 有信号输入和较大的信号输出 必须存在晶体管 场效应管 集成块等有源元件从信号类型来说 有 电压放大电路 电流放大电路(功率放大电路) 不知说的是否合理 希望对你有帮助

1、重译法（Repetition)在翻译中，有时为了忠实于原文，不得不重复某些词语，否则就不能忠实表达原文的意思。重译法有如下三大作用：一是为了明确；二是为了强调；三是为了生动。2、增译法（Amplification)为了使译文忠实地表达原文的意思与风格并使译文合乎表达习惯，必须增加一些词语。3、减译法（Omission)和其他一切事物一样，翻译也是有增必有减。理解了增译法之后也就明白了减译法，它是增译法的反面。4、词类转译法（Conversion)在翻译时，由于两种语言在语法和习惯表达上的＇差异，在保证原文意思不变的情况下，译文必须改变词类，这就是词类转译法，这种方法不仅指词类的改变，而且还包括词类作用的改变和一定词序的变化。5、词序调整法（Inversion)词序调整法的英语inversion一词，不能译成“倒译”、“倒译法”或“颠倒词序”之类，否则容易和语法中的“倒装”概念相混淆。inversion作为一种翻译技巧，其意思为：翻译时对词序作必要或必不可少的改变，并不只是纯粹的颠倒词序或倒装。6、正义反译，反义正译（Negation)negation在语法与翻译两个不同学科中含义不尽相同。作为一种翻译技巧，它主要指在翻译实践中，为了使译文忠实而合乎语言习惯地传达原文的意思，有时必须把原文中的肯定说法变成译文中的否定说法，或把原文中的否定说法变成译文中的肯定说法。7、分译法（Division)分译法主要用于长句的翻译。为了使译文忠实、易懂，有时不得不把一个长句译成两句或更多的句子。这是分译法的主要内容，此处所谓的句子不在于结尾处用句号，而在于有无主谓结构，一般说来，含有一个主谓结构的语言部分就是一个句子。8、语态变换法（The change of the voices)这里所说的语态是指主动语态和被动语态，这两种语态在英汉两种语言中的使用情况是很不相同的，被动语态的使用是科技文章的主要特点之一，其用法十分广泛。

用运放搭个电压放大电路就行了，反相跟同相根据需要选择，如果功率要求大就加一级功率放大，具体的可以查看运放的典型放大电路用什么运放要看你的是单电压还是双电压、最高电压多大、带宽够不够、速度够不够等等、如果LM324能满足要求的话也可以

起始模板量浓度低；扩增效率不高；反应条件过于严谨

目录 1 拼音 2 英文参考 3 聚合酶链式反应的定义 4 聚合酶链反应的历史回顾 4.1 核酸体外扩增最早的设想 4.2 聚合酶链反应的发明 5 聚合酶链反应相关技术的发展 6 其它扩增技术 6.1 连接酶链反应 （A） 6.2 依赖核酸序列的扩增 （A） 6.3 转录依赖的扩增系统 （A） 6.4 Qβ复制酶反应 （A） 7 PCR技术的应用举例： 8 PCR的基本原理和概念 8.1 基本原理 8.2 参与PCR反应体系的因素及其作用 9 聚合酶链式反应检查 9.1 聚合酶链式反应正常值 9.2 聚合酶链式反应临床意义 10 参考资料 1 拼音 jù hé méi liàn shì fǎn yìng 2 英文参考 Polymerase Chain Reaction [WS/T 455—2014 卫生监测与评价名词术语] PCR [WS/T 455—2014 卫生监测与评价名词术语] 3 聚合酶链式反应的定义 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是指由引物选择性体外扩增DNA或RNA片段的检测方法[1]。该方法在输血领域可用于各种血型分型、骨髓移植配型、输血传播疾病病原体检测等[1]。 聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种分子生物学实验方法，主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即模板DNA先经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条引物分别与两条模板DNA链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）为底物，使退火引物得以延伸。如此反复，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。[2] 4 聚合酶链反应的历史回顾 4.1 核酸体外扩增最早的设想 由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物，且当时（1970年）Smith等发现了 DNA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，所以，使Khorana等的早期设想被人们遗忘。 4.2 聚合酶链反应的发明 直到1985年，美国PECetus公司的人类遗传研究室 Mullis等人才发明了具有划时代意义的聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）, 使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。其原理类似于DNA的体内 复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件。开始是使用大肠杆菌 DNA聚合酶Klenow片段来扩增人基因组中的特异片段。由于该酶不耐热，因此，每次 加热变性DNA后都要重新补加Klenow酶。在操作多份标本时，这一过程耗时，费力， 且易出错。耐热DNA聚合酶的应用使得PCR反应更易于自动化，继而PECetus公司推 出了第一台PCR热循环仪，使该技术的自动化成为现实。Mullis等因此项技术于1993年 获得诺贝尔奖金。 5 聚合酶链反应相关技术的发展 PCR及其相关技术的发展速度是惊人的。国际上分别于1988年和1990年在美国和 英国召开了第一届和第二届PCR技术专题研讨会。第一届会议主要讨论了PCR的应用 与技术本身的优化问题；第二届会议的主要议题是人类基因组计划与PCR的最新进 展。这充分体现了生物学家对PCR的重视。 （表）聚合酶链反应的相关技术 名　　　称 主要用途 简并引物扩增法 扩增未知基因片段 巢居PCR 提高PCR敏感性、特异性，分析突变 复合PCR 同时检测多个突变或病原 反向PCR 扩增已知序列两侧的未知序列，致产物突变 单一特异引物PCR 扩增未知基因组DNA 单侧引物PCR 通过已知序列扩增未知cDNA 锚定PCR 分析具备不同末端的序列 增效PCR 减少引物二聚体，提高PCR特异性 固著PCR 有利于产物的分离 膜结合PCR 去除污染的杂质或PCR产物残留 表达盒PCR 产生合成或突变蛋白质的DNA片段 连接介导PCR DNA甲基化分析、突变和克隆等 RACEPCR 扩增cDNA末端 定量PCR 定量mRNA或染色体基因 原位PCR 研究表达基因的细胞比例等 臆断PCR 鉴定细菌或遗传作用 通用引物PCR 扩增相关基因或检测相关病原 信使扩增表型分型（mapping） 同时分析少量细胞的mRNA 6 其它扩增技术 与PCR及其相关技术发展的同时，新的扩增技术也不断诞生。这些技术各有利 弊，与PCR互为补充，有的可结合应用，共同构成了核酸体外扩增技术的大家族。我 们相信，随着分子生物学技术的发展，这一家族一定会再涌现出新成员。 其它体外核酸扩增技术（表） 技术 应用 转录依赖的扩增系统（TAS） 检测HIV 连接酶链反应（LCR） 检测点突变 自主序列复制（3SR）系统 研究RNA，临床应用、法医学等 链替代扩增（SDA） 检测、鉴定基因 Qβ复制酶系统 增加探针检测敏感性 循环探针反应 增加探针检测敏感性 6.1 连接酶链反应 （A） 连接酶链反应（Ligase　chain　reaction，LCR）,是一种新的DNA体外扩增和检测 技术,主要用于点突变的研究及靶基因的扩增。是Backman　1997年为检出靶基因序列 中的点突变而设计发明，并申报了专利。 LCR的基本原理为利用DNA连接酶。特异地将双链DNA片段连接,经变性退火连 接三步骤反复循环,从而使靶基因序列大量扩增。 LCR的扩增效率与PCR相当，用耐热连接酶做LCR只用两个温度循环，94℃min变性 和65℃复性并连接，循环30次左右。其产物的检测也较方便灵敏。目前该方法主要用 点突变的研究与检测、微生物病原体的检测及定向诱变等，还可用于单堿基遗传病多 态性及单堿基遗传病的产物诊断，微生物的种型鉴定，癌基因的点突变研究等。 6.2 依赖核酸序列的扩增 （A） 依赖核酸序列的扩增（Nucleic　acid　sequencebased　amplification,NASBA） ，又称自主序列复制系统（selfsustained　sequence　replication，3SR）或再生长 序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术。 NASBA主要用于RNA的扩增、检测及测序。 其基本方法为：将引物,标本加入扩增反应液，65℃1min使RNA分子二级结构打 开,降温至37℃加入逆转录酶,T7RNA聚合酶和RNase　H,并在37℃反应1～1.5小时,其 产物经琼脂糖电泳，溴乙锭染色即可在紫外仪下看到条带。 NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器，不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制，循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR，特异性好。 6.3 转录依赖的扩增系统 （A） 转录依赖的扩增系统（Tranbased　amplification　sytem，TAS），是 Kwen等人于1989年研究报道的，主要用于扩增RNA。 TAS的主要特点是扩增效率高，因为其RNA拷贝数呈10的指数方式增加，只需6个 循环靶序列的拷贝数就能达到2×106。它的另一个特点是特异性高，由于TAS只能进行 6次温度循环，错掺率低，加之用葡聚糖珠夹心杂交，因而特异性也高。 虽然本法有较高的特异性和敏感性，但其循环过程复杂，需重复加入逆转录酶和 T7RNA多聚酶，有待进一步研究。 6.4 Qβ复制酶反应 （A） Kacian等于1972年首次报报Qβ复制酶（Qbeta　replicase）催化RNA模板的自我 复制功能，它能在常温30min，将其天然模板MDV1RNA扩增至109。1986年Chu等报道 用生物标记的靶序列特异性探针，可与亲和素联接的MDV1RNA杂交，经洗脱未被结合 的MDV1后，再加入Qβ复制酶，扩增复制MDV1拷贝，然后用溴乙锭染色检测或用同 源性的第二探针杂交。 Qβ复制酶是一种RNA指导的RNA聚合酶，它有3个特点：①不需寡核苷酸引物的引 导就可启动RNA的合成。②能特异地识别RNA基因中由于分子内堿基配对而形成的特有 的RNA折叠结构。③在Q　β复制酶的天然模板MDV1　RNA的非折叠结构区插入一短的 核酸序列不影响该酶的复制。　因而，如在此区插入核酸探针，则其序列照样可能被 Qβ复制酶扩增。 1988年Lizardi等，将靶基因序列 *** MDV1质粒里，用T7　RNA聚合酶催化转录 出MDV1　RNA探针，这种RNA探针可与靶序列杂交，然后洗去非杂交的探针,加入Qβ 复制酶来扩增探针，被扩增的探针又可作为模板进行扩增，并呈指数递增。其产物 按上述两种方法进行检测。现在该技术又发展了夹心杂交法，分子开关和靶依赖的复 制等技术。 7 PCR技术的应用举例： 研究：基因克隆；DNA测序；分析突变；基因重组与融合；鉴定与调控蛋白质结 合DNA序列；转座子插入位点的绘图；检测基因的修饰；合成基因的构建；构建克隆 或表达载体；检测某基因的内切酶多态性 诊断：细菌（螺旋体、支原体、衣原体、分支杆菌、立克次氏体、白喉杆菌、致 病大肠杆菌、痢疾杆菌、嗜水气单胞菌和艰难梭菌等）；病毒（HTLV、HIV、HBV、 HPVS、EV、CMV、EBV、HSV，麻疹病毒、轮状病毒、细小病毒B19）；寄生虫（疟疾 等）；人遗传病（LeshNyhan综合症、地贫、血友病、BMD、DMD、囊性纤维化等） 免疫学：HLA分裂；T细胞受体或抗体多样化的定性；自身免疫病基因作图；淋巴因子定量 人类基因组工程：用散布重复序列产生DNA标志；遗传图谱的构建（检测DNA、 多态性或 *** 绘图）；物理图谱的构建；测序，表达图谱 法医：犯罪现场标本分析；HLADQ 肿瘤：胰癌、结肠癌、肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、血液恶性肿瘤 组织和群体生物学：遗传聚类研究；动物保护研究；生态学；环境科学；实验遗 传学。 古生物学：考古与博物馆标本分析 动物学：动物传染病的诊断等 植物学：检测植物病原等 8 PCR的基本原理和概念 8.1 基本原理 DNA在细胞中的复制是—个比较复杂的过程。参与复制的基本因素有：DNA聚合酶、DNA连接酶、DNA模板、由引发酶合成的RNA引物、核苷酸原料、无机离子、合适的pH、以及解开DNA的超螺旋及双螺旋等结构的若干酶与蛋白质因子等。 PCR是在试管中进行DNA复制反应，基本原理与体内相似，不同之处是耐热的Taq酶取代DNA聚合酶，用合成的DNA引物替代RNA引物，用加热（变性）、冷却（退火、保温（延伸）等改变温度的办法使DNA得以复制，反复进行变性、退火、延伸循环，就可使DNA无限扩增。PCR的具体过程如下： 将PCR反应体系升温至95℃左右，双链的DNA模板就解开成两条单链，此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下，3"端与5"端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合，此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时，耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的3"端，形成新生的DNA链。每一次循环使反应体系中的DNA分子数增加约一倍。理论上循环几次，就增加为2^n倍。当经30次循环后，DNA产量达2^30拷贝，约为10^9个拷贝。PCR扩增过程见图81。由于实际上扩增效率达不到2倍，因而应为（1+R）^n，R为扩增效率。 8.2 参与PCR反应体系的因素及其作用 参与PCR反应的因素主要包括模板核酸、引物、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg2+、三磷酸脱氧核苷酸（dNTP）、反应温度与循环次数、PCR仪等。现对它们的作用介绍如下： （一）模板核酸 用于PCR的模板核酸可以是DNA，也可以是RNA。当用RNA作模板时，首先要进行反转录生成cDNA，然后再进行正常的PCR循环。核酸模板来源广泛，可以从培养细胞、细菌、病毒、组织、病理标本、考古标本等中提取。 PCR反应时加入的DNA模板量一般为100100000拷贝，现在的技术水平已能从单个细胞制备出相应的cDNA文库。DNA模板含量合适，可以减少PCR多次循环带来的堿基错配。 通常模板DNA用线性DNA分子，若为环状质粒，最好先用酶将其切开成线状分子，因为环状DNA复性太快。 （二）引物 引物决定PCR扩增产物的特异性与长度。因此，引物设计决定PCR反应的成败。 PCR反应中有两种引物，即5"端引物与3"端引物。5"端引物是指与模板5"端序列相同的寡核苷酸，3"端引物是指与模板3"端序列互补的寡核苷酸。对引物的基本要求有：①引物的长度过短会影响PCR的特异性，要求有1630bp，因为4^164.29x10^9，已大于哺乳动物基因组3x10^9bp，保证了特异性结合；引物过长使延伸温度超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74度），亦会影响产物的特异性。②G+C的含量一般为40％60％。③四种堿基应随机分布，不要有连续3个以上的相同嘌吟或嘧啶存在。尤其是引物3"端，不应有连续3个G或c，否则会使引物与核酸的G或c富集区错误互补，而影响PCR的特异性。④引物自身不应存在互补序列而引起自身折叠，起码引物自身连续互补堿基不能大于3bp。⑤两引物之间不应互补，尤其是它们的3"端不应互补。一对引物之间不应多于4个连续堿基有互补性，以免产生引物二聚体。④引物与非特异靶区之间的同源性不要超过70％或有连续8个互补堿基同源，否则导致非特异性扩增。①引物3"端是引发延伸的点。因此不应错配。由于ATCG引起错配有一定规律，以引物3"端A影响最大，因此，尽量避免在引物3"端第一位堿基是A。引物3"端也不要是编码密码子的第三个堿基，以免因为密码子第3位简并性而影响扩增特异性。⑧引物5"端可以修饰，包括加酶切位点，用生物素、荧光物质、地高辛等标记，引入突变位点，引入启动子序列，引入蛋白质结合DNA序列等，引物的设计最好以电脑软件进行指导。 反应体系中，引物浓度一般要求在O.10.5μmol之间。浓度太高，容易生成引物二聚体，或非特异性产物。 引物Tm值与退火温度有关，计算公式为：Tm4（G+C）+2（A+T）。引物Tm值最好在5580℃范围，以接近72℃为最好。 （三）耐热的TaqDNA聚合酶 1976年Chien分离出热稳定聚合酶，1986年Erlich分离并纯化了适于PCR的Tq热稳定性聚合酶，为PCR成为实用技术奠定了基础，现已用基因重组生产。日前可用于PCR的聚合酶有多种：有从水生栖热菌中提取的Taq酶、从嗜热栖热苗中获得的Taq酶、从Litoralis栖热球菌中分离的VENT酶、及从酸热浴硫化裂片苗中分离的Sac酶，而以Taq酶用得最广泛。Taq DNA聚合酶分子量为94kD，75℃时酶比活性为150bs/酶分子，反应温度过高或过低均影响其延伸率，Taq蕾有很高的耐热稳定性。实验表明，在92.5℃、95℃、97.5℃时，其半衰期分别为40min、30min和5min。 纯化的Taq酶在体外无3"5"外切酶活性，因而无校正阅读功能，在扩增过程可引起错配。错配堿基的数量受温度、Mg2+浓度和循环次数的影响。通常，30次循环Taq酶的错配率约为0.25％，高于Klenow酶的错配率。Taq酶在每一次循环中产生的移码突变率为1/30000，堿基替换率为1/8000。应用低浓度的dNTP（各20μmol／L）、1.5mmol/L的Mg2+浓度、高于55℃的复性温度，可提高Taq酶的忠实性，此时的平均错配率仅为5x10^6次/（核苷酸*循环）。 Taq酶具有类似于末端转移酶的TdT的活性，可在新生成的双链产物的3"端加上—个堿基，尤其是dATP最容易加上。因此，欲将PCR产物克隆到载体上，可以用两种处理办法：一是构建dT载体；二是用Klenow酶将3"端的A去掉，即在PCR反应后，先在99℃加热10min灭活Taq酶，调整Mg2+浓度至510mmol/L，加入12U Klenow片段，室温下作用1520min，3"端的A即被切去， Taq酶还具有反转录活性。在23mmol/L Mg2+浓度下68℃时出现类似反转录酶的活性。若有Mg2+存在，则反转录活性更佳，利用这一活性，可直接用于RNAPCR，尤其是短片段的扩增。 以往用Taq酶进行PCR扩增，一般只能扩增小于400bp的DNA片段，经过对酶的结构与功能的改造，以及PCR方法学的改进，现已能扩增20kb以上的DNA分于。 Taq酶在PCR反应中加入的量也很重要，太少当然不好，太多一方面浪费，同时也导致非特异性扩增，通常每lOOμl反应液中含12.5U Taq酶为好。最好在0.55U范围内确定最佳酶浓度。另一个问题是，虽然Taq酶是热稳定性较好的工具酶，也应注意在20℃贮存。 （四）缓冲液 缓冲液提供PCR反应合适的酸堿度与某些离子，常用1050mmol/L。TrisHCI（pH8.38.8）缓冲液。缓冲液中含有50mmol/L KCl有利于引物的退火。有人并加入小牛血清白蛋白（100μg/L）或明胶（0.0％）或Twen20（0.05％0.1％）或二硫基苏糖醇（DDT，5mmol/L）等，认为这些物质可以保护Taq酶。 （五）Mg2+Taq酶的活性需要Mg2+。Mg2+浓度过低，Taq酶活力显暑降低；Mg2+浓度过高，又使酶催化非特异性扩增。Mg2+浓度还影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度、引物二聚体的生成等。Taq酶的活性只与游离的Mg2+浓度有关，而PCR反应体系中，dNTP、引物、DNA模板等中的所有磷酸基团均可与Mg2+结合而降低Mg2+的游离浓度。因此，Mg2+的总量应比dNTP的浓度高0.20.25mmol/L。如果反应体系中含有EDTA等螯合剂，也可结合掉一部分Mg2+。 为了获得Mg2+的最佳浓度，可用下面的优化法。首先在PCR缓冲液小不加入Mg2+，从配置的10mmol/L的Mg2+储存液中取一定量加入到各反应管中，开始以0.5mmol/L的浓度梯度递增（0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,……5.0mmol/L），由PCR反应后的电泳结果可确定Mg2+大概浓度范围，再在该浓度的上下以0.2mmol/L递增与递减几个浓度来精确确定Mg2+最适浓度。 （六）dNTP dNTP为PCR反应的合成原料。每种dNTP浓度应相等，通常的浓度范围为20200gmol/L，在此范围内，PCR产物的量、反应的特异性与忠实性之间的平衡最佳。例如，当每种dNTP为20μmol/L时，理论上可以产生2.6μg的400bp的DNA。使四种dNTP的浓度保持在其Km值（1015μmol/L）以上，可保持堿基掺入的忠实性；若dNTP的浓度大于50mmol/L，则可抑制Taq酶的活性。 （七）反应温度和循环次数 1．变性温度与时间 PCR反应中变性这一步很重要，若不能使模板DNA和PCR产物完全变性，PCR反应就不能成功，DNA分子中G+C含量愈多，要求的变性温度愈高。太高的变性温度和时间又会影响Taq酶的活性，通常的变性温度和时间分别为95℃、30s，有时用97℃、15s。虽然DNA链在变性温度时两链分离只需几秒钟，但反应管内部达到所需温度还需要一定的时间，团此要适当延长时间。为了保证模板DNA能彻底变性．最好为710min，然后在以后的循环中，将变性步骤设为95℃/min。 扩增100300bp短片段时，还呵以用快速的两步PCR法，即变性（9497℃）、退火及延长（5575℃）。 为防止在变性温度时反应液的蒸发，可在反应管内加入12滴液体石蜡。 2．复性温度和时间 复性温度决定PCR的特异性，合适的复性温度应低于引物Tm值的5℃。退火温度过低，引起非特异性扩增；增高退火温度，可提高扩增的特异性，因此要严格规定退火温度。退火反应时间一般为1min。 在PCR开始的头一次循环时，反应从远低于Tm值的温度开温，由于Taq酶在低温时仍具有活性，这时就可能因引物与模板非特异性配对面出现非特异性产物或出现引物二聚体 然后在以后整个PCR反应中，非特异性产物反复扩增，而使PCR严重失败。为了尽量消除这种非特异性扩增，可以使用热起动的方式，热起动方法有几种：一种方法是在PCR系统中加入抗Taq酶抗体。抗体与Taq酶结合，使Taq酶活性受抑制。因此在开始时，虽然温度低，引物可与与模板错配，但因Taq酶没有活性，不会引起非特异性扩增；当进行热变性时，抗体在高温时失活，Taq酶被释放，就可发挥作用，在以后的延伸步骤进行特 异的DNA聚合反应。另一种热起动法是用石蜡将Taq酶与PCR反应系统分隔，因此一开始在室温条件下也没有非特异性扩增。当升温到热变性温度下，石蜡熔化，Taq酶与PCR反面系统混合，从而在以后的步骤中发挥作用。使用热起动可以提高PCR扩增的特异性。 3．延伸温度与时间 延伸温度一般为72℃左右，此时Taq酶活性为每秒钟掺入核苷酸35100个，2kb的片段用1min已足够，若DNA片段较长，扩增时间可适当延长。延伸时间过长又可引起非特异性扩增。 4．循环次数 循环次数主要取决于最初靶分子的浓度，例如在初始靶分子为3x10^5、1.5x10^4、1x10^3和50拷贝数时，循环数可分别为2530、3035、3540从4045。过多的循环次数会增加非特异性产物量及堿基错配数。PCR反应后期，扩增产物的增加并不成为指数方式，称为平台效应。平台效应可能与下列因素有关：dNTP与引物浓度降低，酶对模板的比例相对降低，多次循环后酶活力降低，产物浓度增高后变性不完全而影响引物延伸。 （八）PCR仪 有多种进口与国产PCR仪。仪器的升降温方式可有气体加温、水加温及电热块加温等。温度、循环次数及时间等参数现多用电脑控制。可根据需要选择仪器。 由于PCR方法高度灵敏，少量的靶分子即可扩增至无限数。因此要防止PCR扩增产物污染环境而引起以后的PCR假阳性。为此，应将PCR仪及PCR产物检测等过程与标本制备及PCR反应管的制备尽量在空间分开，最好在不同的房间进行。通常可将实验空间分为标本处理区、反应混合制备和PCR扩增区、产物分析区等。 9 聚合酶链式反应检查 聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 9.1 聚合酶链式反应正常值 体内菌群的种类和比例正常，人体处于动态平衡健康状态。 9.2 聚合酶链式反应临床意义 PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。 异常结果： 各种疾病所致的异常，例如梅毒。①一期梅毒。即硬下疳 ，潜伏期2～4周，外生殖器部位发生暗红色硬肿块 、浅溃疡 ，有软骨样硬度，周围淋巴结肿大。②二期梅毒。在一期梅毒 1～2 个月之后，全身皮肤、粘膜发生对称泛发皮疹、斑疹、丘疹、脓疱疹等。粘膜可发生粘膜斑、扁平湿疣，传染性强。③三期梅毒。发生在感染后2～3年乃至10年，皮肤为树胶样肿，还可涉及骨、关节、心、血管，表现为主动脉炎、主动脉瓣闭锁不全和主动脉瘤等，侵及神经为脊髓痨 ，全身麻痹 （ 麻痹性痴呆 ）等等。

。。。。。。。貌似很多机制啊~~！

extensionamplificationomissionconversiongeneric term or technical terminversion

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification)，是一个比较公认的等温扩增方法，现如今等温扩增法很多，比如RCA,NASBA,RPA...如果可以，你可以参考这篇文献：Loop-mediated isothermal amplification integrated on microfluidic chips for point-of-care quantitative detection of pathogens，它详述了具体过程，由于它使用的引物为对称结构，后来已经改进，将引物设计为不对称结构，从而减少了背景信号的产生，文献参考：Rapid SNP diagnostics using asymmetric isothermal amplification and a new mismatch-suppression technology。

诱发原癌基因突变共有四种方式：(一)点突变 C--ras：12、13、61位密码子点突变，存在于多种肿瘤． C-ras编码蛋白(21kD,P21)：RAS，是一种GTP结合蛋白，具GTP酶活性，是重要的信号转导分子． (二)染色体易位 染色体易位(translocation)：是染色体的一部分因断裂脱离，并与其它染色体联结的重排过程。 因染色体易位造成的原癌基因激活： 1、 因易位使原癌基因与另一基因形成融合基因，产生一个具有致癌活性的融合蛋白， 如t(9：22)使c-abl与bcr融合，产生一个致癌的P210蛋白 2、因易位面使原癌基因表达失控，如t(8：14)易位使c-myc表达失控． (三)基因扩增 基因扩增(gene amplification)即基因拷贝数增加． 如HL-60和其它白血病细胞，C-myc扩增8-22倍．其它：c-erb B，c-net． (四)LTR插入 LTR是逆转录病毒基因组两端的长末端重复(long terminal repeat)，其中含有强启动子序列。

在震动环境中产品损坏通常以环境所产生之震动应力大过结构所能承受之应力(Over Stress)而损坏，但是结构体之自然频率(Natural Frequency)受到环境振动应力所激发并产生共振放大(Resonance Amplification)现象对结构危害最烈。就实务经验以共振放大(Resonance Amplification)造成产品损坏居多，因此在执行振动试验时通常会利用正弦振动伴随着频谱分析仪(FFT Analysis)进行结构共振频率分析同时再以共振点停留方式(Resonance Dwell)验证当振动环境激发结构自然频率(Fn)时结构是否能承受此共振放大应力作为验证方式，此数据将有助于结构设计者了解结构脆弱点并掌握改善方向。

英语翻译是讲究技巧的，常见的技巧有： 1. Diction 2. Amplification 3. Omission 4. Repetition 5. Conversion 6. Restructuring 7. Negation 8. Division每种技巧都有自己的门路，下面我们就来看看英语翻译技巧及举例分析，一起来看看吧!

作用1通交隔直，耦合音频信号输出。作用2为互补管，提供一半工作电压，使互补管得到电压工作。

核酸的等温扩增是一个简单的过程，可以在恒定温度下快速有效地积累核酸序列。自1990年代初期以来，已开发出各种等温扩增技术来替代聚合酶链反应（PCR）。这些等温扩增方法已用于生物传感目标，例如DNA，RNA，细胞，蛋白质，小分子和离子。这些技术在原位或细胞内生物成像和测序中的应用已得到充分证明。通过等温扩增方法生产的扩增子也已被用于构建通用的核酸纳米材料，有望用于生物医学，生物成像和生物传感领域。将等温扩增整合到微系统或便携式设备中，可改善基于核酸的现场测定，并具有很高的灵敏度。也已经基于集成的微流体系统实施了单细胞和单分子分析。 聚合酶链反应（PCR）是目前最受欢迎的扩增技术，用于扩增和检测低丰度核酸，已广泛应用于各个领域。但它需要大型且昂贵的热循环仪，这极大地限制了PCR在资源受限的环境中以及在即时医疗点（POC）分析中的应用。 与需要复杂的热循环以介导变性，退火和随后的延伸的PCR相比，等温扩增可以在一个反应温度和简单条件下（例如在水浴中）进行。核酸的等温扩增已成为一种有前途的替代方法，其中在恒定温度下无需PCR所需的热循环即可实现快速有效的扩增。自1990年代初以来，已开发出数十种采用各种扩增机制的等温核酸扩增技术，这些方法中的大多数对核酸的检测具有惊人的灵敏度。至今已经发表了数千项与核酸等温扩增相关的研究。但是核酸的等温扩增的概念，应用和观点尚未得到全面审查。许多等温扩增技术[例如，指数链置换扩增（E-SDA）和超支化滚环扩增（HRCA）]基于DNA复制，其他的则基于基于酶的消化或无酶的核酸组装。我们根据等温扩增技术的反应动力学将其分类：指数扩增，线性扩增和级联扩增。 各种实验室已经开发出十多种等温指数扩增方法。这些主要包括基于核酸序列的扩增（NASBA），E-SDA，HRCA，引物生成滚环扩增（PG-RCA），环介导的等温扩增（LAMP），解旋酶依赖性扩增（HDA），重组酶聚合酶扩增（RPA），指数扩增反应（EXPAR）和全基因组扩增（WGA）。这些扩增方法中的大多数（例如，NASBA，E-SDA，LAMP，HDA和RPA）使用两种或多种引物扩增核酸模板，而其他诸如HRCA，PG-RCA和EXPAR的引物则利用一种功能模板来扩增核酸模板。此外，尽管HRCA和LAMP仅使用DNA聚合酶即可实现指数扩增，但其他方法则需要其他酶或蛋白质。重要的是，这些方法都具有与PCR相当的高扩增效率。表1提供了不同等温扩增技术的比较。 链置换扩增（SDA）利用两个外部“凸块”引物和两个内部5"尾部区域引物，其中包含一个切口酶识别位点。与切口酶（例如，Nt.BstNBI）一起，离散DNA产物的扩增以快速的方式发生。 NASBA在40℃的较低温度下进行，导致特异性降低。E-SDA使用两个或什至四个引物克服了这一缺点，但是必须针对DNA聚合酶和NEase对该缓冲液进行优化。HRCA仅使用聚合酶，但始终需要在扩增前进行额外的连接过程才能特异性识别靶标。为了提高序列特异性并简化扩增系统，LAMP最初是由Notomi及其同事在2000年提出的。环介导的等温扩增（LAMP）使用4-6个引物，识别目标DNA的6-8个不同区域。 置换链的DNA聚合酶启动合成，其中2个引物形成环结构，以促进随后的扩增 与PCR相反，上述等温扩增方法不能扩增更长的DNA靶标，例如千碱基（kb）区域，这在许多基础研究和诊断应用中是必需的。为了克服这些缺点，HDA于2004年设计出了模仿DNA复制的技术。在体内，DNA通过DNA聚合酶复制，并且各种辅助蛋白（包括DNA解旋酶）被用于分离DNA双链体。在HDA中，DNA解旋酶也用于分离目标dsDNA，并生成用于引物杂交和随后通过DNA聚合酶延伸的sstemplates（图1F）。 HDA反应是一个三步循环过程（模板分离，引物杂交和引物延伸），类似于PCR。但是，dsDNA不会通过DNA解旋酶解链，而不是通过PCR中的热循环步骤解链。通过在一个温度下同时进行链反应，可以实现靶序列超过百万倍的扩增。在第一版HDA中，由于大肠杆菌UvrD解旋酶的热不稳定性，反应温度为37℃。热稳定蛋白的开发使得能够在更高的温度（60-65℃）下更快地扩增，并提高了对病原体和SNP检测的灵敏度和特异性。商业HDA试剂盒可从BioHelix Corporation获得 重组酶聚合酶扩增（RPA）和基于链入侵的扩增（SIBA）是等温扩增方法，可通过重组酶的活性来实现，该酶可帮助引物侵入双链DNA。 T4 UvsX与它的辅助蛋白UvsY和单链结合蛋白gp32结合使用，形成D环重组结构，用于通过Bsu或其他变温链置换DNA聚合酶引发扩增。 RPA使用两个寡核苷酸作为正向和反向引物，例如“等温PCR”，而SIBA还包括更长的侵入寡核苷酸，以帮助促进链的侵入和扩增。独特的是，在等温方法中，RPA可以产生高达1 kb（引物间距离）的扩增子。尽管非特异性扩增可能是一个普遍的挑战，但RPA和SIBA都通常在u301c37°C下进行，避免了其他方法的较高温度。探针可与两种方法一起使用以检测特定的产品。除了诊断扩增应用外，基于重组酶的扩增还显示了在下一代测序工作流程中用于克隆扩增的效用 全基因组扩增（WGA）是表示旨在扩增整个基因组的方法的总称，通常从低量（皮克级到纳克级）的DNA开始，最多产生数十微克量的扩增产物。 WGA已成为利用有限数量的珍贵原料样品或实现单细胞基因组DNA测序的宝贵方法。 MDA过程从与DNA模板结合的随机六聚体引物开始。置换链的聚合酶（通常是phi29 DNA聚合酶）启动扩增，最终结果是长而分支的DNA网络。如果DNA产物将用于下游应用，则可以使用T7核酸内切酶1解析分支。 已经开发出了几种用于高保真全基因组扩增的方法，包括基于PCR的方法，例如简并寡核苷酸PCR（DOP-PCR）和引物延伸预扩增（PEP），但是最常用的方法是多置换扩增（MDA）。该方法利用了phi29或Bst等DNA聚合酶的链置换活性。 对于带有phi29 DNA聚合酶的MDA，将高浓度（10–50μM）的随机六聚体与模板材料和phi29混合，并根据需要的扩增水平孵育1–12小时。 phi29的校对核酸外切酶活性可确保模板DNA的高保真复制，但还需要六聚体引物中的硫代磷酸酯键才能实现高效。对于高产率的反应，可以包括焦磷酸酶，以避免产生高浓度焦磷酸副产物而抑制聚合酶。反应产物非常长（> 30 kb），并通过多重置换机制高度分支。对于下一代测序应用，声波剪切或NEBNext Fragmentation System可以将这些产物解析为可读片段，这是文库制备工作流程的一部分。当将这些产品用于其他下游应用（如纳米孔测序）时，可以使用T7核酸内切酶1解析分支。 尽管指数扩增技术提供了高扩增效率和检测灵敏度，但它们遭受了快速的非特异性扩增和复杂设计的困扰。相反，线性扩增策略更方便，并且排除了非特异性扩增的干扰。尽管测定灵敏度相对较低，但它们仍适合潜力无限的各种应用。 线性SDA仅使用一个引物引发。与E-SDA的双向特性相反，其扩增过程（切口和聚合/置换）是单向的，累积了数千个目标拷贝。通过设计靶标特异性发夹型荧光探针，开发了一种类似的方法，即圆链置换聚合反应，以在1000 s内达到ssDNA靶标的检测限6.4×10-15M。这些线性方法已应用于多个目标的检测。 RCA产生长的重复靶序列的ssDNA。以这种线性格式，HRCA中不需要第二个引物，并且核酸合成是由HRCA中的Phi 29 DNA聚合酶而不是Vent exo-DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶催化的。RCA（u301c37℃）的反应温度低于HRCA（u301c60℃）的反应温度。RCA在1小时内达到了约103倍的扩增，并且可以通过添加ssDNA结合蛋白进一步提高效率。除生物分析应用外，RCA还被用于纳米生物医学，纳米技术，和材料科学中。用RNA聚合酶替代Phi 29 DNA聚合酶，使滚环转录（RCT）成为可能。合成具有重复序列的长RNA链，有望在RNA干扰（RNAi）中得到应用。 核酸测序扩增（NASBA）和转录介导扩增（TMA）是通过RNA进行的类似等温扩增技术。 尽管DNA主要用于RNA检测，但也可以用作起始材料。 设计引物以靶向目标区域为目标，但重要的是，一种引物在5"端包括T7 RNA聚合酶的启动子序列。 这使得能够产生单链RNA物质，其通过反应中包括的逆转录酶被逆转录成cDNA。 DNA-RNA杂种中的RNA被RNase H活性破坏（来自NASBA中的外源蛋白质，或被TMA中的RNase H + RT破坏），而dsDNA由RT产生。然后，该模板通过T7 RNAP和指数扩增结果转录为RNA。 尽管线性扩增策略既方便又快速，但受到信号增益低和检测灵敏度低的限制。为了克服这些限制，已经开发了整合两种或更多种扩增方法的技术。这种所谓的“级联放大”表现出与某些指数放大技术相当的灵敏度。级联扩增的关键要求是上游方法的产物充当下游方法的触发器，因此充当连接这些模块的“桥梁”。 与dsDNA相比，ssDNA在级联扩增的设计上更具通用性。具有积累数千种ssDNA产物的能力，SDA已广泛应用于不同的级联扩增策略。2006年，Willner和同事首次提出了SDA / DNAzyme组合级联扩增的方法，方法是设计一个独特的DNAzyme生成模板。产生了数千个DNAzyme分子，每个分子都可以氧化许多底物分子，从而产生放大的光学信号。因此，实现了级联信号放大。金属离子依赖性DNA酶随后与SDA结合用于级联裂解反应。这种类型的级联策略已应用于各种生物传感器的构建。值得注意的是，前一种方法需要在核酸扩增后产生信号的其他步骤，而后一种方法需要在DNA探针中修饰核糖核苷酸。 除DNA酶外，核酸酶也已整合到SDA中以进行级联扩增。Xia等人通过合并λExo（λExo）。他们开发了一种称为发夹介导的二次酶扩增（HQEA）的一步法。HQEA结合了靶标循环的杂交反应和随后的循环裂解反应，对单细胞水平的microRNA（miRNA）分析显示出很高的敏感性。 NEase最初用于SDA代替Exo， NEase辅助方法与SDA的集成应可导致简单的传感系统，而无需优化反应缓冲液。我们的团队通过开发酶协同等温二次DNA机器（ESQM）证实了这一假设。该DNA机器利用专门设计的发夹探针和两个功能部分来桥接这些方法，并且可以在SDA反应条件下进行级联扩增。 ESQM的信号增强明显高于SDA。Ye等人设计了一种相关方法。此外，我们提出了另一种结合了SDA的级联扩增反应，而没有引入额外的酶来创建三重SDA过程。第一个SDA的产物循环诱导下一个SDA，并且产物回收过程等效于一个SDA过程。该方法在SDA反应条件下可获得明显更高的放大信号。 不同的研究小组还提出了其他几种结合了SDA的级联扩增策略。这些方法将级联扩增过程分为两个独立的反应步骤，这延长了测定时间，并使操作复杂化。 与SDA相似，RCA产生ssDNA产物，并已与其他扩增方法广泛结合。在2007年，Willner和同事开发了RCA / DNAzyme级联扩增，其中合成了长的DNAzyme链以进行第二次扩增反应。已经使用该级联扩增设计了几种生物传感器。目标序列回收的RCA（TR-RCA）和树状RCA也已被设计为RCA级联。在TR-RCA中，哑铃式挂锁探针旨在识别靶序列以激活由过量引物触发的RCA。然后，该RCA过程将目标移开，以激活下一个RCA过程。因此，级联RCA是通过回收靶序列来实现的。在树状RCA中，发夹结构是关键要素。它可以与靶标引发的RCA产物杂交，从而导致释放新的靶标序列。该释放的靶序列在发夹结构中诱导了新的RCA过程，从而导致级联扩增。通过一步扩增反应，这三种级联策略均可提供显着扩增的信号 还已经报道了RCA结合了级联扩增策略以及结合了核酸酶辅助扩增方法的多个反应步骤。 Smith和他的同事们设计了第一种方法，该方法基于FEN催化的侵入性切割，然后进行RCA。表面上人类基因组DNA的两步扩增为SNP分析提供了足够的灵敏度。其他两种核酸酶（NEase和Exo）也已用于开发RCA组合级联扩增。最近证明了一种基于RCA的生物传感器，将无酶CHA与两个单独的扩增反应偶联。尽管需要多个反应步骤，但这些级联方法仍具有很高的测定灵敏度。 前面提到的级联扩增方法涉及聚合酶催化的DNA合成。不含聚合酶的级联技术也已建立。在FEN辅助侵袭方法发展一年后，通过在同质测定中耦合两个侵袭反应，提出了串行侵袭信号放大反应（SISAR）.这种级联版本可在4个分子内为每个靶DNA产生107个以上的报告分子。 FEN辅助的侵入式方法也与NEase辅助的方法结合用于级联酶促信号扩增（CESA）。除了FEN之外，其他核酸酶也可用于序列扩增和循环扩增。Nuclease / DNAzyme-还已经证明了利用级联方法，和相继设计了几种基于HCR和CHA的无酶级联 等温扩增也可以通过信号扩增来实现，而无需依赖新核酸产物（DNA或RNA）的产生。与采用聚合酶的方法相反，这些方法受焦磷酸盐的积累抑制，这些信号放大策略不受产物抑制。基于信号放大机制，这些策略可分为三种类型：核酸酶辅助，DNAzyme辅助和无酶反应。 核酸酶可以切割核酸的磷酸二酯键，并且包括切割DNA的脱氧核糖核酸酶（DNase）和切割RNA的核糖核酸酶（RNase），并且可以进一步分类为Exos和Endos。通常，核酸酶辅助策略涉及回收由不同核酸酶催化的核酸裂解，例如襟翼内切核酸酶（FEN），NEase，双工特异性核酸酶（DSN），REase，Exos，DNase I ，和RNase H，NEase辅助方法和Exo辅助方法被广泛使用，并且基于FEN的方法（入侵者或侵入性测定法）已通过Third Wave Technologies商业化用于SNP基因分型和病毒检测。 在DNA核酶辅助方法中，金属离子依赖性DNA核酶通常用于进行核酸切割。 DNA酶是可催化化学反应并通过在金属离子（例如Mg2+和Pb2 +）存在下形成致密结构而被激活的DNA分子。通过三个步骤（激活，切割和周转）实现了丰富的扩增，为不同的分析物提供了出色的传感性能.具有模仿过氧化酶活性的过氧化物酶的G四联体DNA酶也已被用于通过催化氧化来催化快速信号放大。在这种特殊的DNA酶的基础上，开发了比色，荧光，化学发光（CL），和电化学生物传感应用。 在无酶方法中，既不使用蛋白质酶也不使用DNA酶。代替循环裂解反应，扩增反应仅涉及杂交过程。Pierce和Dirks在2004年提出了第一个无酶方法，即杂交链反应（HCR）。在HCR中，设计了两个具有相同发夹结构（长茎和短环）的部分互补单体DNA构建块（图A）。在没有靶标的情况下，由于势能在长茎保护下的短环中储存，因此杂交反应无法在室温下进行。靶标ssDNA触发交替（两个发夹物种）杂交的链反应，产生长切口的共聚物。该方法将触发的DNA自组装引入纳米结构，并利用DNA作为生物传感和生物成像的放大换能器。另一种无酶信号放大方法是催化发夹装配（CHA），这是通过DNA的模块化电路实现的。杂交（自组装和拆卸）而不是连锁反应（图B），并导致目标和分析形式（荧光，比色和电化学信号）的多样性 由于操作方便和扩增效率高，等温扩增技术已成为生物分析应用中非常有希望的PCR替代方法。最初，通过这些技术成功地证明了核酸（DNA和RNA）检测，SNP基因分型，甚至DNA甲基化分析。随着分子生物学的发展以及适体，抗体和DNA酶的使用，这些方法已广泛用于其他分析物的生物传感，包括蛋白质，细胞，小的生物分子甚至离子。还已经证明了通过几种等温方法进行的原位和细胞内成像。 [1] Zhao Y, Chen F, Li Q, et al. Isothermal amplification of nucleic acids[J]. Chemical reviews, 2015, 115(22): 12491-12545. [2] https://www.neb.com/applications/dna-amplification-pcr-and-qpcr/isothermal-amplification

晶体管是电流控制器件切勿以会有对应的电压就会有对应能的电流，更无法以基极电压来设置电流，所以基极电流则能以较高的电压串以电阻来控制电流。(有直流反馈的列外)

【答案】：是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。是一种基于mRNA反转录和PCR技术建立起来的、一部分的一直区域为起点，扩增基因转录本的未知区域，从而或得mRNA(cDNA)完整序列的方法。简言之就是从低丰度的转录本中快速增长cDNA5"和cDNA3"末端，进而获得全长cDNA的简单有效的方法。该方法具有快捷、方便、高效等优点，可同时获得多个转录本。

这么多句子，给五分，有点少

基因诊断的主要技术有核酸分子杂交、聚合酶链反应、恒温扩增、基因测序和生物芯片技术。 1.1 原理： 具有一定互补序列和核苷酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程，称为核酸分子杂交。杂交的双方是待测核酸序列和探针序列。应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。1.2 基因探针及其标记： 基因探针是一段与待测DNA或RNA互补的核苷酸序列，可以是DNA或RNA，长度不一，可为完整基因，也可为其中一部分。根据探针的来源和性质分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针。作为探针至少必须满足两个条件，一是应为单链（或通过变性形成单链），二是应带有可被示踪和检测的标记。有了合适的探针，就有可能检测出目的基因，观察有无突变，也可根据探针的结合量进行定量检测。选择探针最基本的原则是要有高度特异性，其次也需考虑到制备探针的难易性和检测手段的灵敏性等其他因素。1.3 常用核酸分子杂交技术： ① Southern印迹杂交；② Northern印迹杂交；③斑点杂交（dot blotting）；④原位杂交（in-situ hybridization）；⑤夹心杂交（三明治杂交）；⑥液相杂交。 恒温扩增技术主要包括链置换扩增法( strand displacement amplification , SDA) 、核酸序列扩增法( nucleic acid sequence-based amplification ,NASBA) 、转录介导扩增法( Transcription Mediated Amplification , TMA) 和滚环扩增法(RollingCircle Amplification ,RCA) 以及环介导等温扩增法(Loop-mediated isothermal amplification , LAMP)等。LAMP是Notomi 等在2000 年开发的一种新颖的恒温核酸扩增方法,即环介导等温扩增法( loop-mediated isot hermalamplification , LAMP) ,其特点是针对靶基因的6 个区域设计4 种特异引物,利用一种链置换DNA 聚合酶(Bst DNA polymerase) 在等温条件(65 ℃左右) 保温几十分钟,即可完成核酸扩增反应。不需要模板的热变性、长时间温度循环、繁琐的电泳、紫外观察等过程。LAMP 是一种崭新的DNA 扩增方法,具有简单、快速、特异性强的特点,具有替代PCR 方法的可能性。 它们是DNA杂交 探针技术与半导体工业技术相结合的结晶。该技术系指将大量探针分子固定于支持物上后与带荧光标记的DNA样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。生物芯片技术起源于核酸分子杂交。所谓生物芯片一般指高密度固定在互相支持介质上的生物信息分子（如基因片段、CDNA片段或多肽、蛋白质）的微阵列杂交型芯片（micro-arrays），阵列中每个分子的序列及位置都是已知的，并且是预先设定好的序列点阵。微流控芯片（microfluidic chips）和液态生物芯片是比微阵列芯片后发展的生物芯片新技术，生物芯片技术是系统生物技术的基本内容。什么是生物芯片呢？简单说，生物芯片就是在一块玻璃片、硅片、尼龙膜等材料上放上生物样品，然后由一种仪器收集信号，用计算机分析数据结果。人们可能很容易把生物芯片与电子芯片联系起来，虽然，生物芯片和电子芯片确实有着千丝万缕的联系，但它们是完全不同的两种东西。生物芯片并不等同于电子芯片，只是借用概念，它的原名叫“核酸微阵列”，因为它上面的反应是在交叉的纵列中所发生。芯片的概念取之于集成的概念，如电子芯片的意思就是把大的东西变成小的东西，集成在一起。生物芯片也是集成，不过是生物材料的集成。像实验室检测一样，在生物芯片上检查血糖、蛋白、酶活性等，是基于同样的生物反应原理。所以生物芯片就是一个载体平台。这个平台的材料则有很多种，如硅，玻璃，膜（纤维素膜）等，还有一些三维结构的多聚体，平台上则密密麻麻地摆满了各种生物材料。芯片只是一个载体。做什么东西、检测什么，还是靠生物学家来完成。也就是说，原来要在很大的实验室中需要很多个试管的反应。

增译（Amplification）是很常用的一种翻译技巧，指根据英汉两种语言不同的思维方式、语言习惯和表达方式，在翻译时增添一些词、短句或句子，以便更准确地表达出原文所包含的意义。在不影响原文意思的前提下，在译文中增译一些原文中没有的词汇和表达。增译的前提，即不能影响原文意思，翻译者不可以想怎么增译就怎么增译，这个前提给译者画了一条使用增译的底线。使用增译法的情况增译法这种方式多半用在汉译英里。汉语无主句较多，而英语句子一般都要有主语，所以在翻译汉语无主句的时候，除了少数可用英语无主句、被动语态或"There be…"结构来翻译以外，一般都要根据语境补出主语，使句子完整。英汉两种语言在名词、代词、连词、介词和冠词的使用方法上也存在很大差别。英语中代词使用频率较高，凡说到人的器官和归某人所有的或与某人有关的事物时，必须在前面加上物主代词。因此，在汉译英时需要增补物主代词，而在英译汉时又需要根据情况适当地删减。

增译（Amplification）是很常用的一种翻译技巧，指根据英汉两种语言不同的思维方式、语言习惯和表达方式，在翻译时增添一些词、短句或句子，以便更准确地表达出原文所包含的意义。在不影响原文意思的前提下，在译文中增译一些原文中没有的词汇和表达。增译的前提，即不能影响原文意思，翻译者不可以想怎么增译就怎么增译，这个前提给译者画了一条使用增译的底线。使用增译法的情况增译法这种方式多半用在汉译英里。汉语无主句较多，而英语句子一般都要有主语，所以在翻译汉语无主句的时候，除了少数可用英语无主句、被动语态或"There be…"结构来翻译以外，一般都要根据语境补出主语，使句子完整。英汉两种语言在名词、代词、连词、介词和冠词的使用方法上也存在很大差别。英语中代词使用频率较高，凡说到人的器官和归某人所有的或与某人有关的事物时，必须在前面加上物主代词。因此，在汉译英时需要增补物主代词，而在英译汉时又需要根据情况适当地删减。

增译（Amplification）是很常用的一种翻译技巧，指根据英汉两种语言不同的思维方式、语言习惯和表达方式，在翻译时增添一些词、短句或句子，以便更准确地表达出原文所包含的意义。在不影响原文意思的前提下，在译文中增译一些原文中没有的词汇和表达。增译的前提，即不能影响原文意思，翻译者不可以想怎么增译就怎么增译，这个前提给译者画了一条使用增译的底线。使用增译法的情况增译法这种方式多半用在汉译英里。汉语无主句较多，而英语句子一般都要有主语，所以在翻译汉语无主句的时候，除了少数可用英语无主句、被动语态或"There be…"结构来翻译以外，一般都要根据语境补出主语，使句子完整。英汉两种语言在名词、代词、连词、介词和冠词的使用方法上也存在很大差别。英语中代词使用频率较高，凡说到人的器官和归某人所有的或与某人有关的事物时，必须在前面加上物主代词。因此，在汉译英时需要增补物主代词，而在英译汉时又需要根据情况适当地删减。

增译（Amplification）是很常用的一种翻译技巧，指根据英汉两种语言不同的思维方式、语言习惯和表达方式，在翻译时增添一些词、短句或句子，以便更准确地表达出原文所包含的意义。在不影响原文意思的前提下，在译文中增译一些原文中没有的词汇和表达。增译的前提，即不能影响原文意思，翻译者不可以想怎么增译就怎么增译，这个前提给译者画了一条使用增译的底线。使用增译法的情况增译法这种方式多半用在汉译英里。汉语无主句较多，而英语句子一般都要有主语，所以在翻译汉语无主句的时候，除了少数可用英语无主句、被动语态或"There be…"结构来翻译以外，一般都要根据语境补出主语，使句子完整。英汉两种语言在名词、代词、连词、介词和冠词的使用方法上也存在很大差别。英语中代词使用频率较高，凡说到人的器官和归某人所有的或与某人有关的事物时，必须在前面加上物主代词。因此，在汉译英时需要增补物主代词，而在英译汉时又需要根据情况适当地删减。

信号幅度微调。国际规定。AMPL英文全称Amplification。逆时针，(转向MIN)，幅度减小，顺时针(转向MAX)幅度增加)，拔出，信号衰减为原来的十分之一。

增译法英文：amplification method。增译（Amplification）是很常用的一种翻译技巧，指根据英汉两种语言不同的思维方式、语言习惯和表达方式，在翻译时增添一些词、短句或句子，以便更准确地表达出原文所包含的意义。在不影响原文意思的前提下，在译文中增译一些原文中没有的词汇和表达。增译的前提，即不能影响原文意思，翻译者不可以想怎么增译就怎么增译，这个前提给译者画了一条使用增译的底线。增译法这种方式多半用在汉译英里。汉语无主句较多，而英语句子一般都要有主语，所以在翻译汉语无主句的时候，除了少数可用英语无主句、被动语态或“There be…”结构来翻译以外，一般都要根据语境补出主语，使句子完整。英汉两种语言在名词、代词、连词、介词和冠词的使用方法上也存在很大差别。英语中代词使用频率较高，凡说到人的器官和归某人所有的或与某人有关的事物时，必须在前面加上物主代词。因此，在汉译英时需要增补物主代词，而在英译汉时又需要根据情况适当地删减。

1、重译法（Repetition)在翻译中，有时为了忠实于原文，不得不重复某些词语，否则就不能忠实表达原文的意思。重译法有如下三大作用：一是为了明确；二是为了强调；三是为了生动。2、增译法（Amplification)为了使译文忠实地表达原文的意思与风格并使译文合乎表达习惯，必须增加一些词语。3、减译法（Omission)和其他一切事物一样，翻译也是有增必有减。理解了增译法之后也就明白了减译法，它是增译法的反面。4、词类转译法（Conversion)在翻译时，由于两种语言在语法和习惯表达上的＇差异，在保证原文意思不变的情况下，译文必须改变词类，这就是词类转译法，这种方法不仅指词类的改变，而且还包括词类作用的改变和一定词序的变化。5、词序调整法（Inversion)词序调整法的英语inversion一词，不能译成“倒译”、“倒译法”或“颠倒词序”之类，否则容易和语法中的“倒装”概念相混淆。inversion作为一种翻译技巧，其意思为：翻译时对词序作必要或必不可少的改变，并不只是纯粹的颠倒词序或倒装。6、正义反译，反义正译（Negation)negation在语法与翻译两个不同学科中含义不尽相同。作为一种翻译技巧，它主要指在翻译实践中，为了使译文忠实而合乎语言习惯地传达原文的意思，有时必须把原文中的肯定说法变成译文中的否定说法，或把原文中的否定说法变成译文中的肯定说法。7、分译法（Division)分译法主要用于长句的翻译。为了使译文忠实、易懂，有时不得不把一个长句译成两句或更多的句子。这是分译法的主要内容，此处所谓的句子不在于结尾处用句号，而在于有无主谓结构，一般说来，含有一个主谓结构的语言部分就是一个句子。8、语态变换法（The change of the voices)这里所说的语态是指主动语态和被动语态，这两种语态在英汉两种语言中的使用情况是很不相同的，被动语态的使用是科技文章的主要特点之一，其用法十分广泛。

Amplification-Attenuation-Plot放大衰减图放大衰减测算表plot[英][plu0252t][美][plɑ:t]n.地基，基址图; （戏剧、小说等的）情节; 一块地; 测算表; vt.密谋; 以图表画出，制图; 把…分成小块; 为（文学作品）设计情节; vi.设计作品情节; 标示于图表上; 密谋，暗中策划; 第三人称单数：plots过去分词：plotted复数：plots现在进行时：plotting过去式：plotted

如果是NPN型管，截止失真是顶部削平，饱和失真是底部削平，PNP型管，截止是底部削平，饱和顶部削平。

1、重译法（Repetition)在翻译中，有时为了忠实于原文，不得不重复某些词语，否则就不能忠实表达原文的意思。重译法有如下三大作用：一是为了明确；二是为了强调；三是为了生动。2、增译法（Amplification)为了使译文忠实地表达原文的意思与风格并使译文合乎表达习惯，必须增加一些词语。3、减译法（Omission)和其他一切事物一样，翻译也是有增必有减。理解了增译法之后也就明白了减译法，它是增译法的反面。4、词类转译法（Conversion)在翻译时，由于两种语言在语法和习惯表达上的＇差异，在保证原文意思不变的情况下，译文必须改变词类，这就是词类转译法，这种方法不仅指词类的改变，而且还包括词类作用的改变和一定词序的变化。5、词序调整法（Inversion)词序调整法的英语inversion一词，不能译成“倒译”、“倒译法”或“颠倒词序”之类，否则容易和语法中的“倒装”概念相混淆。inversion作为一种翻译技巧，其意思为：翻译时对词序作必要或必不可少的改变，并不只是纯粹的颠倒词序或倒装。6、正义反译，反义正译（Negation)negation在语法与翻译两个不同学科中含义不尽相同。作为一种翻译技巧，它主要指在翻译实践中，为了使译文忠实而合乎语言习惯地传达原文的意思，有时必须把原文中的肯定说法变成译文中的否定说法，或把原文中的否定说法变成译文中的肯定说法。7、分译法（Division)分译法主要用于长句的翻译。为了使译文忠实、易懂，有时不得不把一个长句译成两句或更多的句子。这是分译法的主要内容，此处所谓的句子不在于结尾处用句号，而在于有无主谓结构，一般说来，含有一个主谓结构的语言部分就是一个句子。8、语态变换法（The change of the voices)这里所说的语态是指主动语态和被动语态，这两种语态在英汉两种语言中的使用情况是很不相同的，被动语态的使用是科技文章的主要特点之一，其用法十分广泛。

1、重译法（Repetition)在翻译中，有时为了忠实于原文，不得不重复某些词语，否则就不能忠实表达原文的意思。重译法有如下三大作用：一是为了明确；二是为了强调；三是为了生动。2、增译法（Amplification)为了使译文忠实地表达原文的意思与风格并使译文合乎表达习惯，必须增加一些词语。3、减译法（Omission)和其他一切事物一样，翻译也是有增必有减。理解了增译法之后也就明白了减译法，它是增译法的反面。4、词类转译法（Conversion)在翻译时，由于两种语言在语法和习惯表达上的＇差异，在保证原文意思不变的情况下，译文必须改变词类，这就是词类转译法，这种方法不仅指词类的改变，而且还包括词类作用的改变和一定词序的变化。5、词序调整法（Inversion)词序调整法的英语inversion一词，不能译成“倒译”、“倒译法”或“颠倒词序”之类，否则容易和语法中的“倒装”概念相混淆。inversion作为一种翻译技巧，其意思为：翻译时对词序作必要或必不可少的改变，并不只是纯粹的颠倒词序或倒装。6、正义反译，反义正译（Negation)negation在语法与翻译两个不同学科中含义不尽相同。作为一种翻译技巧，它主要指在翻译实践中，为了使译文忠实而合乎语言习惯地传达原文的意思，有时必须把原文中的肯定说法变成译文中的否定说法，或把原文中的否定说法变成译文中的肯定说法。7、分译法（Division)分译法主要用于长句的翻译。为了使译文忠实、易懂，有时不得不把一个长句译成两句或更多的句子。这是分译法的主要内容，此处所谓的句子不在于结尾处用句号，而在于有无主谓结构，一般说来，含有一个主谓结构的语言部分就是一个句子。8、语态变换法（The change of the voices)这里所说的语态是指主动语态和被动语态，这两种语态在英汉两种语言中的使用情况是很不相同的，被动语态的使用是科技文章的主要特点之一，其用法十分广泛。

你的两个问题其实是同一个误解:什么是调控？原癌基因对细胞生命活动的调控就是说不考虑基因层面的变动，这种基因就是普通的基因，它能够维持机体的正常生命功能，实现机体的正常“自我调控”。但同时这种基因具有分子层面上的可变性，当多个“原癌基因”发生致癌突变后便有形成肿瘤的可能性。而变化了的原癌基因就是癌基因(有些地方没有分这么清楚)。抑癌基因顾名思义。说到底，就是你说的“原癌基因想怎么样就怎么样”是不对的，原癌基因也是一般基因，基因的表达在正常情况下必定受到机体各种机制的调控。

ae发音的单词如下：1、Aberrance异样。2、Accommodation住宿。3、Accomplishment成就。4、Acceleration加速度。5、Accoutrement装备。6、Accessory附属品。7、Accredited认可的。8、Acceptance接受。9、Acknowledgment承认。10、Acclaimed著名的。11、Acquisition获得。12、Accumulation积累。13、Acquiescence默许。14、Activated激活的。15、Adaptability适应性。16、Adhesive粘性的。17、Admonition警告。18、Adversity逆境。19、Affable和蔼可亲的。20、Affinity亲和力。21、Aggravation加剧。22、Alertness警觉性。23、Ambivalence矛盾心理。24、Amelioration改善。25、Ameliorate改善，提高。26、Amplification放大。27、Anachronism不合时宜的事物。28、Anarchy无政府状态。29、Antithesis对立，对照。30、Apparent显然的，表面的。31、Aquatic水生的。32、Aquifer含水层。33、Archaic古时的，过时的。34、Archive档案，存档。35、Artifact工艺品，文物。

原癌基因调控细胞周期 抑癌基因抑制细胞增殖，促进细胞分化

按其表达蛋白的功能及定位可将常见的癌基因进行分类（表21-1），下面按族类进行介绍。 l.src家族：包括src、abl、fgr、fes、yes、fps、lck、kek、fym、lyn和tkl，它们都含有相似的基因编码结构，产物具有使酪氨酸磷酸化的蛋白激酶活性，定位于胞膜内面或跨膜分。 2.ras家族：包括H-ras、K-ras、N-ras，虽然它们之间的核着酸序列相差很大，但所编码的蛋白质都是P21，位于细胞质膜内面，P21可与GTP结合，有GTP酶活性，并参与cAMP水平的调节。 3.mrc家族：包括c-myc、N-myc、L-myc、fos等数种基因，这些基因编码核内DNA结合蛋白，有直接调节其他基因转录的作用。 4.sis家族：只有sis基因一个成员，其编码的p28与人血小板源生长因子（PDGF）结构十分相似，能刺激间叶组织的细胞分裂繁殖。 5.myb家族：包括myb和myb-ets两个成员，编码核蛋白，能与DNA结合，为核内的一种转录因子。 由上可见，某些癌基因所表达的蛋白质未必都具有转化活性，因此不能认为所有的癌基因都具有致癌活性。"癌基因"的命名显然是不全面的，有必要对"癌基因"这一定义加以修正。目前认为广义的"癌基因"应当是：凡能编码生长因子、生长因子受体、细胞内生长信息传递分子，以及与生长有关的转录调节因子的基因均应归属癌基因的范畴，这一修正大大拓宽了最初提出的癌基因的概念。但基于研究历史的原因，"癌基因"名称一直被沿用。 三、癌基因的活化机制 正常情况下，细胞原癌基因处于相对静止状态，对机体并不构成威胁。相反，它们还具有一定的生理功能，特别是在胚胎发育时期或组织再生的情况下。然而，在某些条件下，如病毒感染、化学致癌物或辐射作用等，它们可相继激活，其被激活的方式主要有以下四类。 （一）获得启动子与增强子 当逆转录病毒感染细胞后，病毒基因组所携带的长末端重复序列（LTR内含较强的启动子和增强子）插人到细胞原癌基因附近或内部，可以启动下游邻近基因的转录和影响附近结构基因的转录水平。从而使原癌基因过度表达或由不表达变为表达，导致细胞发生癌变。如鸡白细胞增生病毒引起的淋巴瘤，就因为该病毒DNA序列整合到宿主正常细胞的c-myc的基因附近，其LTR亦同时被整合，成为c-myc的启动子。这个强启动基因可促使c-myc的表达比正常高30－100倍。 （二）基因易位 染色体易位在肿瘤组织中屡见不鲜，基因定位研究证明，在染色体易位的过程中发生了某些基因的易位（translocation）和重排，使原来无活性的原癌基因移至某些强的启动基因或增强子附近而被活化，因而原癌基因表达增强，导致肿瘤的发生。最受到普遍认可的例子是在人 Burkit淋巴瘤细胞中，位于8号染色体上的c-myc移到14号染色体免疫球蛋白重链基因的调节区附近，与这区活性很高的启动子连接而受到活化。 （三）原癌基因扩增 原癌基因扩增（amplification）是原癌基因数量的增加或表达活性的增强，产生过量的表达蛋白也会导致肿瘤的发生。如ras或c-myc，在某些肿瘤中常常表达蛋白质量升高几十甚至上千倍不等。 （四）点突变 原癌基因在射线或化学致癌剂作用下，可能发生单个碱基的替换--点突变（point mutation），从而改变了表达蛋白的氨基酸组成，造成蛋白质结构的变异。如ras族的癌基因，在正常细胞H-ras中的GGC，在肿瘤细胞中突变为GTC，由此酿成编码的P21蛋白第12位氨基酸由正常细胞的甘氨酸变为肿瘤细胞的缬氨酸。 不同的癌基因在不同的情况下可通过不同的途径被激活，其结果可以是①出现新的表达产物，即原来不表达的基因开始表达，或不该在这个时期表达的基因进行表达；②出现过量的正常表达产物；③出现异常、截短的表达产物。以上异常情况，在肿瘤细胞中可以出现一种或二种以上的组合。

目录 1 拼音 2 英文参考 3 聚合酶链式反应的定义 4 聚合酶链反应的历史回顾 4.1 核酸体外扩增最早的设想 4.2 聚合酶链反应的发明 5 聚合酶链反应相关技术的发展 6 其它扩增技术 6.1 连接酶链反应 （A） 6.2 依赖核酸序列的扩增 （A） 6.3 转录依赖的扩增系统 （A） 6.4 Qβ复制酶反应 （A） 7 PCR技术的应用举例： 8 PCR的基本原理和概念 8.1 基本原理 8.2 参与PCR反应体系的因素及其作用 9 聚合酶链式反应检查 9.1 聚合酶链式反应正常值 9.2 聚合酶链式反应临床意义 10 参考资料 这是一个重定向条目，共享了聚合酶链式反应的内容。 1 拼音 jù hé méi liàn fǎn yìng 2 英文参考 polymerase chain reaction [WS/T 203—2001 输血医学常用术语] PCR [WS/T 203—2001 输血医学常用术语] 3 聚合酶链式反应的定义 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是指由引物选择性体外扩增DNA或RNA片段的检测方法[1]。该方法在输血领域可用于各种血型分型、骨髓移植配型、输血传播疾病病原体检测等[1]。 聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种分子生物学实验方法，主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即模板DNA先经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条引物分别与两条模板DNA链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以四种脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）为底物，使退火引物得以延伸。如此反复，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。[2] 4 聚合酶链反应的历史回顾 4.1 核酸体外扩增最早的设想 由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物，且当时（1970年）Smith等发现了 DNA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，所以，使Khorana等的早期设想被人们遗忘。 4.2 聚合酶链反应的发明 直到1985年，美国PECetus公司的人类遗传研究室 Mullis等人才发明了具有划时代意义的聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）, 使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。其原理类似于DNA的体内 复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件。开始是使用大肠杆菌 DNA聚合酶Klenow片段来扩增人基因组中的特异片段。由于该酶不耐热，因此，每次 加热变性DNA后都要重新补加Klenow酶。在操作多份标本时，这一过程耗时，费力， 且易出错。耐热DNA聚合酶的应用使得PCR反应更易于自动化，继而PECetus公司推 出了第一台PCR热循环仪，使该技术的自动化成为现实。Mullis等因此项技术于1993年 获得诺贝尔奖金。 5 聚合酶链反应相关技术的发展 PCR及其相关技术的发展速度是惊人的。国际上分别于1988年和1990年在美国和 英国召开了第一届和第二届PCR技术专题研讨会。第一届会议主要讨论了PCR的应用 与技术本身的优化问题；第二届会议的主要议题是人类基因组计划与PCR的最新进 展。这充分体现了生物学家对PCR的重视。 （表）聚合酶链反应的相关技术 名　　　称 主要用途 简并引物扩增法 扩增未知基因片段 巢居PCR 提高PCR敏感性、特异性，分析突变 复合PCR 同时检测多个突变或病原 反向PCR 扩增已知序列两侧的未知序列，致产物突变 单一特异引物PCR 扩增未知基因组DNA 单侧引物PCR 通过已知序列扩增未知cDNA 锚定PCR 分析具备不同末端的序列 增效PCR 减少引物二聚体，提高PCR特异性 固著PCR 有利于产物的分离 膜结合PCR 去除污染的杂质或PCR产物残留 表达盒PCR 产生合成或突变蛋白质的DNA片段 连接介导PCR DNA甲基化分析、突变和克隆等 RACEPCR 扩增cDNA末端 定量PCR 定量mRNA或染色体基因 原位PCR 研究表达基因的细胞比例等 臆断PCR 鉴定细菌或遗传作用 通用引物PCR 扩增相关基因或检测相关病原 信使扩增表型分型（mapping） 同时分析少量细胞的mRNA 6 其它扩增技术 与PCR及其相关技术发展的同时，新的扩增技术也不断诞生。这些技术各有利 弊，与PCR互为补充，有的可结合应用，共同构成了核酸体外扩增技术的大家族。我 们相信，随着分子生物学技术的发展，这一家族一定会再涌现出新成员。 其它体外核酸扩增技术（表） 技术 应用 转录依赖的扩增系统（TAS） 检测HIV 连接酶链反应（LCR） 检测点突变 自主序列复制（3SR）系统 研究RNA，临床应用、法医学等 链替代扩增（SDA） 检测、鉴定基因 Qβ复制酶系统 增加探针检测敏感性 循环探针反应 增加探针检测敏感性 6.1 连接酶链反应 （A） 连接酶链反应（Ligase　chain　reaction，LCR）,是一种新的DNA体外扩增和检测 技术,主要用于点突变的研究及靶基因的扩增。是Backman　1997年为检出靶基因序列 中的点突变而设计发明，并申报了专利。 LCR的基本原理为利用DNA连接酶。特异地将双链DNA片段连接,经变性退火连 接三步骤反复循环,从而使靶基因序列大量扩增。 LCR的扩增效率与PCR相当，用耐热连接酶做LCR只用两个温度循环，94℃min变性 和65℃复性并连接，循环30次左右。其产物的检测也较方便灵敏。目前该方法主要用 点突变的研究与检测、微生物病原体的检测及定向诱变等，还可用于单堿基遗传病多 态性及单堿基遗传病的产物诊断，微生物的种型鉴定，癌基因的点突变研究等。 6.2 依赖核酸序列的扩增 （A） 依赖核酸序列的扩增（Nucleic　acid　sequencebased　amplification,NASBA） ，又称自主序列复制系统（selfsustained　sequence　replication，3SR）或再生长 序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术。 NASBA主要用于RNA的扩增、检测及测序。 其基本方法为：将引物,标本加入扩增反应液，65℃1min使RNA分子二级结构打 开,降温至37℃加入逆转录酶,T7RNA聚合酶和RNase　H,并在37℃反应1～1.5小时,其 产物经琼脂糖电泳，溴乙锭染色即可在紫外仪下看到条带。 NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器，不需温度循环。整个反应过程由三种 酶控制，循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR，特异性好。 6.3 转录依赖的扩增系统 （A） 转录依赖的扩增系统（Tranbased　amplification　sytem，TAS），是 Kwen等人于1989年研究报道的，主要用于扩增RNA。 TAS的主要特点是扩增效率高，因为其RNA拷贝数呈10的指数方式增加，只需6个 循环靶序列的拷贝数就能达到2×106。它的另一个特点是特异性高，由于TAS只能进行 6次温度循环，错掺率低，加之用葡聚糖珠夹心杂交，因而特异性也高。 虽然本法有较高的特异性和敏感性，但其循环过程复杂，需重复加入逆转录酶和 T7RNA多聚酶，有待进一步研究。 6.4 Qβ复制酶反应 （A） Kacian等于1972年首次报报Qβ复制酶（Qbeta　replicase）催化RNA模板的自我 复制功能，它能在常温30min，将其天然模板MDV1RNA扩增至109。1986年Chu等报道 用生物标记的靶序列特异性探针，可与亲和素联接的MDV1RNA杂交，经洗脱未被结合 的MDV1后，再加入Qβ复制酶，扩增复制MDV1拷贝，然后用溴乙锭染色检测或用同 源性的第二探针杂交。 Qβ复制酶是一种RNA指导的RNA聚合酶，它有3个特点：①不需寡核苷酸引物的引 导就可启动RNA的合成。②能特异地识别RNA基因中由于分子内堿基配对而形成的特有 的RNA折叠结构。③在Q　β复制酶的天然模板MDV1　RNA的非折叠结构区插入一短的 核酸序列不影响该酶的复制。　因而，如在此区插入核酸探针，则其序列照样可能被 Qβ复制酶扩增。 1988年Lizardi等，将靶基因序列 *** MDV1质粒里，用T7　RNA聚合酶催化转录 出MDV1　RNA探针，这种RNA探针可与靶序列杂交，然后洗去非杂交的探针,加入Qβ 复制酶来扩增探针，被扩增的探针又可作为模板进行扩增，并呈指数递增。其产物 按上述两种方法进行检测。现在该技术又发展了夹心杂交法，分子开关和靶依赖的复 制等技术。 7 PCR技术的应用举例： 研究：基因克隆；DNA测序；分析突变；基因重组与融合；鉴定与调控蛋白质结 合DNA序列；转座子插入位点的绘图；检测基因的修饰；合成基因的构建；构建克隆 或表达载体；检测某基因的内切酶多态性 诊断：细菌（螺旋体、支原体、衣原体、分支杆菌、立克次氏体、白喉杆菌、致 病大肠杆菌、痢疾杆菌、嗜水气单胞菌和艰难梭菌等）；病毒（HTLV、HIV、HBV、 HPVS、EV、CMV、EBV、HSV，麻疹病毒、轮状病毒、细小病毒B19）；寄生虫（疟疾 等）；人遗传病（LeshNyhan综合症、地贫、血友病、BMD、DMD、囊性纤维化等） 免疫学：HLA分裂；T细胞受体或抗体多样化的定性；自身免疫病基因作图；淋巴因子定量 人类基因组工程：用散布重复序列产生DNA标志；遗传图谱的构建（检测DNA、 多态性或 *** 绘图）；物理图谱的构建；测序，表达图谱 法医：犯罪现场标本分析；HLADQ 肿瘤：胰癌、结肠癌、肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、血液恶性肿瘤 组织和群体生物学：遗传聚类研究；动物保护研究；生态学；环境科学；实验遗 传学。 古生物学：考古与博物馆标本分析 动物学：动物传染病的诊断等 植物学：检测植物病原等 8 PCR的基本原理和概念 8.1 基本原理 DNA在细胞中的复制是—个比较复杂的过程。参与复制的基本因素有：DNA聚合酶、DNA连接酶、DNA模板、由引发酶合成的RNA引物、核苷酸原料、无机离子、合适的pH、以及解开DNA的超螺旋及双螺旋等结构的若干酶与蛋白质因子等。 PCR是在试管中进行DNA复制反应，基本原理与体内相似，不同之处是耐热的Taq酶取代DNA聚合酶，用合成的DNA引物替代RNA引物，用加热（变性）、冷却（退火、保温（延伸）等改变温度的办法使DNA得以复制，反复进行变性、退火、延伸循环，就可使DNA无限扩增。PCR的具体过程如下： 将PCR反应体系升温至95℃左右，双链的DNA模板就解开成两条单链，此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下，3"端与5"端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合，此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时，耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的3"端，形成新生的DNA链。每一次循环使反应体系中的DNA分子数增加约一倍。理论上循环几次，就增加为2^n倍。当经30次循环后，DNA产量达2^30拷贝，约为10^9个拷贝。PCR扩增过程见图81。由于实际上扩增效率达不到2倍，因而应为（1+R）^n，R为扩增效率。 8.2 参与PCR反应体系的因素及其作用 参与PCR反应的因素主要包括模板核酸、引物、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg2+、三磷酸脱氧核苷酸（dNTP）、反应温度与循环次数、PCR仪等。现对它们的作用介绍如下： （一）模板核酸 用于PCR的模板核酸可以是DNA，也可以是RNA。当用RNA作模板时，首先要进行反转录生成cDNA，然后再进行正常的PCR循环。核酸模板来源广泛，可以从培养细胞、细菌、病毒、组织、病理标本、考古标本等中提取。 PCR反应时加入的DNA模板量一般为100100000拷贝，现在的技术水平已能从单个细胞制备出相应的cDNA文库。DNA模板含量合适，可以减少PCR多次循环带来的堿基错配。 通常模板DNA用线性DNA分子，若为环状质粒，最好先用酶将其切开成线状分子，因为环状DNA复性太快。 （二）引物 引物决定PCR扩增产物的特异性与长度。因此，引物设计决定PCR反应的成败。 PCR反应中有两种引物，即5"端引物与3"端引物。5"端引物是指与模板5"端序列相同的寡核苷酸，3"端引物是指与模板3"端序列互补的寡核苷酸。对引物的基本要求有：①引物的长度过短会影响PCR的特异性，要求有1630bp，因为4^164.29x10^9，已大于哺乳动物基因组3x10^9bp，保证了特异性结合；引物过长使延伸温度超过Taq DNA聚合酶的最适温度（74度），亦会影响产物的特异性。②G+C的含量一般为40％60％。③四种堿基应随机分布，不要有连续3个以上的相同嘌吟或嘧啶存在。尤其是引物3"端，不应有连续3个G或c，否则会使引物与核酸的G或c富集区错误互补，而影响PCR的特异性。④引物自身不应存在互补序列而引起自身折叠，起码引物自身连续互补堿基不能大于3bp。⑤两引物之间不应互补，尤其是它们的3"端不应互补。一对引物之间不应多于4个连续堿基有互补性，以免产生引物二聚体。④引物与非特异靶区之间的同源性不要超过70％或有连续8个互补堿基同源，否则导致非特异性扩增。①引物3"端是引发延伸的点。因此不应错配。由于ATCG引起错配有一定规律，以引物3"端A影响最大，因此，尽量避免在引物3"端第一位堿基是A。引物3"端也不要是编码密码子的第三个堿基，以免因为密码子第3位简并性而影响扩增特异性。⑧引物5"端可以修饰，包括加酶切位点，用生物素、荧光物质、地高辛等标记，引入突变位点，引入启动子序列，引入蛋白质结合DNA序列等，引物的设计最好以电脑软件进行指导。 反应体系中，引物浓度一般要求在O.10.5μmol之间。浓度太高，容易生成引物二聚体，或非特异性产物。 引物Tm值与退火温度有关，计算公式为：Tm4（G+C）+2（A+T）。引物Tm值最好在5580℃范围，以接近72℃为最好。 （三）耐热的TaqDNA聚合酶 1976年Chien分离出热稳定聚合酶，1986年Erlich分离并纯化了适于PCR的Tq热稳定性聚合酶，为PCR成为实用技术奠定了基础，现已用基因重组生产。日前可用于PCR的聚合酶有多种：有从水生栖热菌中提取的Taq酶、从嗜热栖热苗中获得的Taq酶、从Litoralis栖热球菌中分离的VENT酶、及从酸热浴硫化裂片苗中分离的Sac酶，而以Taq酶用得最广泛。Taq DNA聚合酶分子量为94kD，75℃时酶比活性为150bs/酶分子，反应温度过高或过低均影响其延伸率，Taq蕾有很高的耐热稳定性。实验表明，在92.5℃、95℃、97.5℃时，其半衰期分别为40min、30min和5min。 纯化的Taq酶在体外无3"5"外切酶活性，因而无校正阅读功能，在扩增过程可引起错配。错配堿基的数量受温度、Mg2+浓度和循环次数的影响。通常，30次循环Taq酶的错配率约为0.25％，高于Klenow酶的错配率。Taq酶在每一次循环中产生的移码突变率为1/30000，堿基替换率为1/8000。应用低浓度的dNTP（各20μmol／L）、1.5mmol/L的Mg2+浓度、高于55℃的复性温度，可提高Taq酶的忠实性，此时的平均错配率仅为5x10^6次/（核苷酸*循环）。 Taq酶具有类似于末端转移酶的TdT的活性，可在新生成的双链产物的3"端加上—个堿基，尤其是dATP最容易加上。因此，欲将PCR产物克隆到载体上，可以用两种处理办法：一是构建dT载体；二是用Klenow酶将3"端的A去掉，即在PCR反应后，先在99℃加热10min灭活Taq酶，调整Mg2+浓度至510mmol/L，加入12U Klenow片段，室温下作用1520min，3"端的A即被切去， Taq酶还具有反转录活性。在23mmol/L Mg2+浓度下68℃时出现类似反转录酶的活性。若有Mg2+存在，则反转录活性更佳，利用这一活性，可直接用于RNAPCR，尤其是短片段的扩增。 以往用Taq酶进行PCR扩增，一般只能扩增小于400bp的DNA片段，经过对酶的结构与功能的改造，以及PCR方法学的改进，现已能扩增20kb以上的DNA分于。 Taq酶在PCR反应中加入的量也很重要，太少当然不好，太多一方面浪费，同时也导致非特异性扩增，通常每lOOμl反应液中含12.5U Taq酶为好。最好在0.55U范围内确定最佳酶浓度。另一个问题是，虽然Taq酶是热稳定性较好的工具酶，也应注意在20℃贮存。 （四）缓冲液 缓冲液提供PCR反应合适的酸堿度与某些离子，常用1050mmol/L。TrisHCI（pH8.38.8）缓冲液。缓冲液中含有50mmol/L KCl有利于引物的退火。有人并加入小牛血清白蛋白（100μg/L）或明胶（0.0％）或Twen20（0.05％0.1％）或二硫基苏糖醇（DDT，5mmol/L）等，认为这些物质可以保护Taq酶。 （五）Mg2+Taq酶的活性需要Mg2+。Mg2+浓度过低，Taq酶活力显暑降低；Mg2+浓度过高，又使酶催化非特异性扩增。Mg2+浓度还影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度、引物二聚体的生成等。Taq酶的活性只与游离的Mg2+浓度有关，而PCR反应体系中，dNTP、引物、DNA模板等中的所有磷酸基团均可与Mg2+结合而降低Mg2+的游离浓度。因此，Mg2+的总量应比dNTP的浓度高0.20.25mmol/L。如果反应体系中含有EDTA等螯合剂，也可结合掉一部分Mg2+。 为了获得Mg2+的最佳浓度，可用下面的优化法。首先在PCR缓冲液小不加入Mg2+，从配置的10mmol/L的Mg2+储存液中取一定量加入到各反应管中，开始以0.5mmol/L的浓度梯度递增（0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,……5.0mmol/L），由PCR反应后的电泳结果可确定Mg2+大概浓度范围，再在该浓度的上下以0.2mmol/L递增与递减几个浓度来精确确定Mg2+最适浓度。 （六）dNTP dNTP为PCR反应的合成原料。每种dNTP浓度应相等，通常的浓度范围为20200gmol/L，在此范围内，PCR产物的量、反应的特异性与忠实性之间的平衡最佳。例如，当每种dNTP为20μmol/L时，理论上可以产生2.6μg的400bp的DNA。使四种dNTP的浓度保持在其Km值（1015μmol/L）以上，可保持堿基掺入的忠实性；若dNTP的浓度大于50mmol/L，则可抑制Taq酶的活性。 （七）反应温度和循环次数 1．变性温度与时间 PCR反应中变性这一步很重要，若不能使模板DNA和PCR产物完全变性，PCR反应就不能成功，DNA分子中G+C含量愈多，要求的变性温度愈高。太高的变性温度和时间又会影响Taq酶的活性，通常的变性温度和时间分别为95℃、30s，有时用97℃、15s。虽然DNA链在变性温度时两链分离只需几秒钟，但反应管内部达到所需温度还需要一定的时间，团此要适当延长时间。为了保证模板DNA能彻底变性．最好为710min，然后在以后的循环中，将变性步骤设为95℃/min。 扩增100300bp短片段时，还呵以用快速的两步PCR法，即变性（9497℃）、退火及延长（5575℃）。 为防止在变性温度时反应液的蒸发，可在反应管内加入12滴液体石蜡。 2．复性温度和时间 复性温度决定PCR的特异性，合适的复性温度应低于引物Tm值的5℃。退火温度过低，引起非特异性扩增；增高退火温度，可提高扩增的特异性，因此要严格规定退火温度。退火反应时间一般为1min。 在PCR开始的头一次循环时，反应从远低于Tm值的温度开温，由于Taq酶在低温时仍具有活性，这时就可能因引物与模板非特异性配对面出现非特异性产物或出现引物二聚体 然后在以后整个PCR反应中，非特异性产物反复扩增，而使PCR严重失败。为了尽量消除这种非特异性扩增，可以使用热起动的方式，热起动方法有几种：一种方法是在PCR系统中加入抗Taq酶抗体。抗体与Taq酶结合，使Taq酶活性受抑制。因此在开始时，虽然温度低，引物可与与模板错配，但因Taq酶没有活性，不会引起非特异性扩增；当进行热变性时，抗体在高温时失活，Taq酶被释放，就可发挥作用，在以后的延伸步骤进行特 异的DNA聚合反应。另一种热起动法是用石蜡将Taq酶与PCR反应系统分隔，因此一开始在室温条件下也没有非特异性扩增。当升温到热变性温度下，石蜡熔化，Taq酶与PCR反面系统混合，从而在以后的步骤中发挥作用。使用热起动可以提高PCR扩增的特异性。 3．延伸温度与时间 延伸温度一般为72℃左右，此时Taq酶活性为每秒钟掺入核苷酸35100个，2kb的片段用1min已足够，若DNA片段较长，扩增时间可适当延长。延伸时间过长又可引起非特异性扩增。 4．循环次数 循环次数主要取决于最初靶分子的浓度，例如在初始靶分子为3x10^5、1.5x10^4、1x10^3和50拷贝数时，循环数可分别为2530、3035、3540从4045。过多的循环次数会增加非特异性产物量及堿基错配数。PCR反应后期，扩增产物的增加并不成为指数方式，称为平台效应。平台效应可能与下列因素有关：dNTP与引物浓度降低，酶对模板的比例相对降低，多次循环后酶活力降低，产物浓度增高后变性不完全而影响引物延伸。 （八）PCR仪 有多种进口与国产PCR仪。仪器的升降温方式可有气体加温、水加温及电热块加温等。温度、循环次数及时间等参数现多用电脑控制。可根据需要选择仪器。 由于PCR方法高度灵敏，少量的靶分子即可扩增至无限数。因此要防止PCR扩增产物污染环境而引起以后的PCR假阳性。为此，应将PCR仪及PCR产物检测等过程与标本制备及PCR反应管的制备尽量在空间分开，最好在不同的房间进行。通常可将实验空间分为标本处理区、反应混合制备和PCR扩增区、产物分析区等。 9 聚合酶链式反应检查 聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 9.1 聚合酶链式反应正常值 体内菌群的种类和比例正常，人体处于动态平衡健康状态。 9.2 聚合酶链式反应临床意义 PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。 异常结果： 各种疾病所致的异常，例如梅毒。①一期梅毒。即硬下疳 ，潜伏期2～4周，外生殖器部位发生暗红色硬肿块 、浅溃疡 ，有软骨样硬度，周围淋巴结肿大。②二期梅毒。在一期梅毒 1～2 个月之后，全身皮肤、粘膜发生对称泛发皮疹、斑疹、丘疹、脓疱疹等。粘膜可发生粘膜斑、扁平湿疣，传染性强。③三期梅毒。发生在感染后2～3年乃至10年，皮肤为树胶样肿，还可涉及骨、关节、心、血管，表现为主动脉炎、主动脉瓣闭锁不全和主动脉瘤等，侵及神经为脊髓痨 ，全身麻痹 （ 麻痹性痴呆 ）等等。

catia amplification magnitudeCATIA放大级

真核基因表达调控较原核基因复杂，每个基因都有启动子区域，该区域里有若干个反式调控元件，转录调控因子通过与这些元件的结合启动或抑制基因的转录表达。同时真核染色质的DNA甲基化，组蛋白乙酰化等表观调控机制调节基因的表达。另外真核基因转录发生在细胞核（线粒体基因的转录在线粒体内），翻译则多在胞浆，两个过程是分开的，因此其调控增加了更多的环节和复杂性，转录后的调控占有了更多的分量。此外，真核细胞中还会发生基因扩增（gene amplification），即基因组中的特定段落在某些情况下会复制产生许多拷贝。可以阅读：真核基因表达调控（修订版），高等教育出版社，金惠铭，卢建，殷莲华编写。|||真核基因表达调控较原核基因复杂，每个基因都有启动子区域，该区域里有若干个反式调控元件，转录调控因子通过与这些元件的结合启动或抑制基因的转录表达。同时真核染色质的DNA甲基化，组蛋白乙酰化等表观调控机制调节基因的表达。另外真核基因转录发生在细胞核（线粒体基因的转录在线粒体内），翻译则多在胞浆，两个过程是分开的，因此其调控增加了更多的环节和复杂性，转录后的调控占有了更多的分量。此外，真核细胞中还会发生基因扩增（gene amplification），即基因组中的特定段落在某些情况下会复制产生许多拷贝。可以阅读：真核基因表达调控（修订版），高等教育出版社，金惠铭，卢建，殷莲华编写。|||真核基因表达调控较原核基因复杂，每个基因都有启动子区域，该区域里有若干个反式调控元件，转录调控因子通过与这些元件的结合启动或抑制基因的转录表达.|||真核基因表达调控较原核基因复杂，每个基因都有启动子区域，该区域里有若干个反式调控元件，转录调控因子通过与这些元件的结合启动或抑制基因的转录表达。同时真核染色质的DNA甲基化，组蛋白乙酰化等表观调控机制调节基因的表达。另外真核基因转录发生在细胞核（线粒体基因的转录在线粒体内），翻译则多在胞浆，两个过程是分开的，因此其调控增加了更多的环节和复杂性，转录后的调控占有了更多的分量。此外，真核细胞中还会发生基因扩增（gene amplification），即基因组中的特定段落在某些情况下会复制产生许多拷贝。

分子标记大多以电泳谱带的形式表现， 大致可分为三大类。 第一类是以分子杂交为核心的分子标记技术， 包括：（1） 限制性片段长度多态性标记（Restriction fragment length polymorphism, 简称 RFLP 标记）； （2） DNA 指纹技术（DNA Fingerprinting）； （3） 原位杂交（in situ hybridization） 等； 第二类是以 PCR 反应为核心的分子标记技术， 包括：（1） 随机扩增多态性 DNA 标记（Random amplification polymorphism DNA, 简称 RAPD 标记）； （2） 简单序列重复标记（Simple sequence repeat, 简称 SSR 标记） 或简单序列长度多态性（Simple sequence length polymorphism, 简称 SSLP 标记）； （3） 扩展片段长度多态性标记（Amplified fragment length polymorphism, 简称 AFLP 标记）； （4） 序标位（Sequence tagged sites, 简称 STS 标记）； （5） 序列特征化扩增区域（Sequence charactered amplified region, 简称 SCAR 标记） 等； 第三类是一些新型的分子标记，如： （1） 单核苷酸多态性（Single nuleotide polymorphism, 简称 SNP 标记）； （2） 表达序列标签（Expressed sequences tags, 简称 EST 标记） 等。

　　语言的互相翻译不但有利于各国文化的交流，更有利于语言的发展。在搞翻译工作时最怕碰上习语多的文章。因为为了忠于原者，译文必须既坚持它的外国味，但也要符合本国文字的要求，而翻译习语却是最难把这两个标准一同达到的。 　　为了要适汉地把外国语言中的习语忠实地翻译出来，有经验的翻译工作者一般采取下列几种方法： 　　第一节 词义的确定 　　正确选择词义是保证译文质量的关键，因为词是语言中最小的，最基本的，且能独立运用的语言单位，不搞清词义就无法准确理解句子的意义，更谈不上通顺地道的表达。一般来说，英语的词义比较灵活多变，词义对上下文的依赖也较强。英国著名语言学家福斯(J.R.Firth)说： “Each word when used in a new context is a new word.” (一个词随其上下文不同而具有不同的意义)以下从三个方面详加分析：一词多义，词义的引申(转义，具体化和抽象化)以及词的感情色彩。 　　一、一词多义(polysemy) 　　英语中一词多义的现象非常普遍，翻译时一定要多加注意，比如同一个词在不同的上下文就有不同的意义。例如story一词在下列句子中的意义。 　　u2022Itu2019s quite another story now.现在情形完全不同了。 　　u2022The official concerned refused to confirm the story in the newspaper.有关官员拒绝证实报纸的这条消息。 　　u2022The white-haired girlu2019s story is miserable. 　　白毛女的遭遇(故事)真悲惨。 　　二、词义的引申 　　所谓词义的引申，是指在一个词所具有的基本词义的基础上，进一步加以引申，选择比较合适的词义来表达，使原文的意思表达得更加准确，译文更加通顺流畅。引申有三种情况，即词义转义，词义的具体化和词义的抽象化。如green一词的基本意义是“绿的”，然而在下列短语中却不能简单地译为“绿”，而应作适当的引申。 　　u2022green fingers园艺技能 　　u2022green-eyed嫉妒 　　u2022green hand 新手 　　u2022green grocer果菜商 　　u2022greenhouse温室，暖房 　　(一) 英译汉时，有些词的意义如果照搬辞典的解释进行翻译，会使译文生硬晦涩，甚至会造成误解。这种情况应依据上下文和逻辑关系，将原词转义然后译出。例如： 　　u2022The study of the brain is one of the last frontiers of human knowledge and of much more immediate importance than understanding the infinity of space or the mystery of the atom. 　　对大脑的研究是人类知识的最新领域之一，它比研究无限的宇宙和神秘的原子更迫切，更重要。(不译“最后的边疆”) 　　u2022The beauty of lasers is that they can do machining without physically touching the material. 　　激光的妙处就在于它能进行机械加工而不必实际接触所加工的材料。(不译“美丽”) 　　(二) 词义的具体化是把原文中意义较抽象，笼统的词，依据汉语的表达习惯，引申为意义较具体，较明确的词语来表述。 　　u2022More and more people have realized the necessity of learning computer. 　　越来越多的人认识到了学习计算机的必要性。 　　u2022Her jealousy is the cause of her failure. 　　她的嫉妒心理是她失败的原因。 　　u2022All the irregularities of the students in that university result in punishment. 　　那所大学学生的一切越轨行为都会受到惩处。 　　(三) 词的抽象化与词的具体化相反，我们有时需要把带有具体意义或具体形象的词或短语，进行抽象化处理，使译文更加忠实和通顺。请看下列例句： 　　u2022There are three steps which must be taken before we graduate from the PC technology. 　　我们要完全掌握计算机技术，必须经过3个阶段。 　　Graduate from不能直译成“毕业于”，而应该适当变通，即做抽象化处理，才能做到译文通顺地道。 　　u2022There is a mixture of tiger and the ape in Hitleru2019s character. 　　希特勒生性既凶残又狡猾。 　　本句中的“tiger”和“ape”也不宜直译为“老虎”和“猿”，要进行抽象化处理。 　　u2022Since I got the news at second hand, I didnu2019t take it seriously. 　　这个消息我是间接听来的，所以并没有太当回事。 　　u2022The issue was finally settled under the table. 　　争端终于私下解决了。 　　u2022He earns scarcely enough to keep body and soul together. 　　她挣的钱几乎难以维持生活。 　　u2022I have no head for music. 　　我没有音乐方面的天赋。 　　u2022Brain drain has become No. 1 problem of the developing countries. 　　人才流失已经成为发展中国家的头等大事。 　　u2022Every life has roses and thorns. 　　人生有苦也有乐。 　　u2022She eats like a bird so as to become slim. 　　她吃得很少以便使自己苗条一些。 　　u2022Some students seem to walk on air after they succeed in passing the entrance examination of college. 　　一些学生在考入大学后似乎有些忘乎所以了。 　　三、词的感情色彩 　　词汇按照感情色彩可分为褒义，贬义和中性三类。在翻译过程中，词汇的词性可以根据汉语的表达习惯作适当的调整;词汇的感情色彩则不能随意改变，一般应严格按照原文的精神来处理，也就是说褒义词必须译成褒义词，贬义词必须译成贬义词，中性词必须译成中性词。 　　应当注意的是，英语中有些词语本身就表示了褒义或贬义，那么译文就应当把相应的褒义或贬义表达出来;但是，也有一部分词语本身似乎是中性的，没有褒义或贬义之分，我们只能依据上下文来判断其感情色彩。请看下面的例子： 　　u2022The boy is appreciated by his teacher for his carefulness in his homework. 　　这个男孩因为功课做得认真而受到老师的称赞。 　　u2022Every young man should have big ambition. 　　每个年轻人都应该有远大抱负。 　　u2022Hitleru2019s ambition was falsified at last. 　　希特勒的野心最终未能得逞。 　　第二节 增词法 　　增词法(Amplification),是指在译文中增加某些原文中虽无其字但有其义的词，其目的是使译文更加通顺自然。但要注意的是，增词绝不是无中生有，不是随意增加原文没有的意义。以下从语义增词，结构增词和修辞增词等方面详加说明。

PCR种类太多了举几种常见的PCR吧：荧光定量PCR，TAIL-PCR，重组PCR，降落PCR

全基因组扩增技术（Whole genome amplification，WGA）能够实现对整个基因组的扩增以提供大量可供分析样品的技术 多次退火环状循环扩增技术（Multiple annealing and looping-based amplification cycles，MALBAC）结合了MDA法与PCR方法的特点，使用的35 nt长的引物，由一段固定的27 nt通用引物序列和8 nt随机碱基序列（N8）组成，在0℃时该8 nt随机碱基序列可与模板任意退火，梯度升温至65℃后在具有链置换活性的Bst大片段DNA聚合酶作用下发生链置换聚合反应，得到一系列长度不一的（0.5-1.5 kb）半扩增子（Semiamplicons），在94℃变性、0℃退火以及65℃延伸循环后，上一循环中半扩增子形成了两端具有互补结构（27 nt）的全扩增子（Amplicons），随后降低温度至58℃使得到的扩增子两端互补形成loop结构，从而可以避免引物与其进行结合导致全扩增子倍增导致的不均衡扩增，因此可以很大程度上保证该循环发生的是线性扩增。在经过5个上述类似线性扩增循环后可得到大量全扩增子并做为接下来PCR反应的模板，并使用该27 nt通用引物进行指数PCR反应，因此只有全扩增子才能得到有效扩增，从而实现对整个基因组的高效而又均衡的全扩增 谢晓亮教授在Science上的报告了一种改进的单细胞的WGA法：通过转座子插入进行线性放大。DNA被含有T7启动子的Tn5转座子随机片段化，T7启动子允许线性扩增。LIANTI法优于现有的方法，能在千碱基分辨率进行微CNV检测。这允许直接观察从细胞到细胞不同的，随机发生的DNA复制起始。 1.潘孝明, 梁兴国. 全基因组扩增技术原理及研究进展[J]. 生物技术通报, 2014 (12): 47-54.

1、Storage of FFPE Specimens 1.1、切片保存温度对提取的RNA质量有很大影响 1.2、化学修饰或RNA片段化影响生成的cDNA长度 1.3、切片暴露在空气或光下会影响提取的RNA质量，蜡块保存则不会 1.4、逆转录引物的选择影响RT-PCR的检测结果 2、Influence of Fixation Time 2.1、固定时间长不直接导致RNA片段化，但RT-PCR产物的长度受影响 2.2、固定时间长可能致蜡块保存时RNA片段化速度更快 3、Influence of Specimen Size 3.1、固定时组织厚，包埋后提取的RNA质量差，效果显著 4、RNA from Pathology Samples 4.1、真实手术病理FFPE样本的RNA质量比预期差，可能与样本自溶解相关 4.2、随机引物和oligo-dT混合引物相比单独的oligo-dT引物反转后的目标cDNA更丰度，用另外的反转录酶的结果也类似 To assess the effects of storage time and conditions on the quality of RNA from FFPE samples, freshly prepared paraffin blocks containing formalin-fixed specimens from different rat tissues (liver, kidney, heart, brain, lung and spleen) were stored at different temperatures (room temperature (20–25℃), 4℃ and 37℃). Fig. 1 shows that storage at different temperatures has a profound influence on the extent of RNA fragmentation. RNA isolated from FFPE specimens within 1–3 days after embedding was surprisingly intact, with RNA Integrity Numbers (RIN [8]) around 7 or higher. Even after 1 year storage at 4℃, ribosomal RNA bands were still clearly visible in most RNA eluates, and RIN values around 5–6 could be obtained. In contrast, RNA from blocks stored at room temperature (20–25℃) or 37℃, did not show clearly distinct rRNA bands anymore, and the mean fragment length was well below 2000 and 100 nucleotides, respectively. Samples derived from different organs did not show any significant differences in the extent of fragmentation over time. To determine in how far storage time and conditions affect usefulness of RNA isolated from FFPE material, one-step RT-PCR amplification was performed with primer sets directed against the rat HPRT gene, producing amplicons of different lengths from about 100 to 1100 nucleotides. Notably, even with RNA isolated from FFPE sections within three days after embedding, amplification of fragments up to 700 nt was successful (Fig. 2), whereas longer amplicons (1100 nt) could not be obtained. All amplicons were produced with similar efficiency using RNA isolated from RNAlaterstabilized tissue (not shown). Since BioAnalyser data (Fig. 1) clearly show that RNA up to 4.8 kb in length (size of the 23S rRNA band) can easily be isolated from these FFPE samples, and assuming that the same is true for mRNA, the limiting factor in this case is not RNA length per se. Instead, cDNA synthesis from the isolated RNA is apparently limited by the extent of chemical modification of RNA by formaldehyde during tissue fixation. The RNA purification method used in this study includes a heating step specifically designed to reverse formaldehyde crosslinking, which improves CT values in realtime RT-PCR by as much as 5–6 cycles compared to samples isolated without this step (data not shown). Exposure of individual FFPE sections to light and air had a negative influence on RNA quality, but storage of entire FFPE blocks either in the open or protected from air and light did not influence the effect of storage time on RNA quality, as long as the uppermost section was discarded at each time point, and sections not directly exposed to air were used for RNA preparation (data not shown). In real-time PCR applications, amplicons are usually shorter than 200 nt. However, in cases where oligo-dT priming is used for cDNA synthesis, the distance between the 3" end of the mRNA and the 5" end of the PCR forward primer becomes the limiting factor, because shorter cDNA products may not contain the entire region to be amplified. Consequently, RT-PCR amplicons should be within ,500 nt or less from the mRNA 3" end when oligo-dT priming is used for cDNA synthesis. This is not a concern when random or gene-specific primers are used for cDNA synthesis. Similar considerations regarding cDNA length and distance from the 3" prime end apply to other workflows that rely on cDNA synthesis, such as microarray hybridizations, in cases where oligo-dT priming is used. Another critical factor for nucleic acid quality from FFPE samples are the conditions used for formalin fixation. It is crucial to keep the time between sample acquisition and fixation as short as possible in order to avoid tissue autolysis and nucleic acid degradation by endogenous nucleases. In addition, overfixation can become an issue, particularly if fixation proceeds for considerably longer than 24 hours, resulting in more irreversible crosslinks [3–5]. There are also reports in the literature that fixation by formaldehyde, particularly over extended time periods, results in increased RNA degradation [9]. To assess the influence of overfixation on RNA quality, we compared tissue samples fixed either overnight or for 72 hours in formalin, compared to RNAlater-stabilised tissue samples from the same animal. BioAnalyser data show that even after 72 h fixation in formalin, the RNA is only marginally fragmented, and ribosomal RNA bands are still largely intact (Fig. 3), thus clearly showing that the reaction with formaldehyde itself does not cause nucleic acid fragmentation. In contrast, RT-PCR results demonstrate that prolonged fixation aggravates the negative effects of formaldehyde modification on cDNA synthesis. Whereas amplicons up to 800 nt can be routinely amplified from samples fixed over night, the maximum amplicon length for samples fixed for 72 hours in our PCR system was around 400–600 nt in most cases (Fig. 3). While overfixation did not directly result in increased RNA fragmentation, our preliminary data indicate that overfixation may result in faster RNA fragmentation during storage of FFPE blocks (data not shown). With the exception of small biopsies, penetration of the tissue by the fixative is the rate-limiting step in fixation, with initial penetration rates for formalin around 1 mm per hour. Penetration rates decrease with depth. Thus, around 8 hours are required for penetration of 5 mm tissue [10]. Therefore, it is generally recommended to keep sample thickness around or below 5 mm for efficient and even fixation, in order to avoid the risk of overfixation at the periphery, and tissue autolysis near the center of the specimen [7,11]. We examined the effect of specimen size and thickness by comparing rat kidney and brain samples that were either fixed whole (about 1 cm thick), or cut into smaller pieces, around 3–4 mm thick (Fig. 4). Analysis of RNA purified from these FFPE samples within days after embedding showed strong RNA fragmentation when entire organs where fixed, compared to relatively intact RNA obtained from thinner pieces. The observed fragmentation also resulted in shorter maximum amplicon size in our RT-PCR system. In the electropherograms of RNA from the large specimens, a small amount of longer RNA is still visible (Fig. 4, arrows). Presumably the respective RNA originates from the outer parts of the specimens which were penetrated by the fixative more quickly. The larger amount of these longer RNA molecules in the brain sample is also reflected in longer maximal amplicon size of 600 nt, compared to 400 nt in kidney (Fig. 4). The degradation effect observed here is surprisingly strong, considering that the thickness of the intact rat organs used was around 1 cm only. It is possible that the intact organs are more slowly penetrated compared to equally sized pieces cut from larger tissues. To compare our results from FFPE specimens obtained from animal tissues under strictly controlled conditions with real-life pathology samples, FFPE specimens from surgically removed lung carcinoma were obtained (see Methods). The FFPE samples had been stored for 1, 2, 4, 7, and 10 years at ambient temperature prior to sectioning. RNA preparation was done using the same purification protocol as for the rat samples above. RNA yields from a single 10 mm section were between 2.5 and 16 mg total RNA, with no correlation between age of sample and RNA yield. RNA integrity was checked by capillary electrophoresis (Fig.5a). According to the electropherograms, mean size of RNA fragments isolated was between 220 and less than 100 nt, also with no correlation between age of sample and mean fragment size. Even for the 1 year-old specimens, RNA integrity was significantly inferior to the rat samples after 1 year storage at 37℃ (Fig. 5a, and Fig. 1). The reason for this is most likely tissue autolysis, because thickness of the cancer specimens used for fixation was generally more than 2 cm, which implies more than 24 hours for penetration of the sample by the formalin [10]. To determine the usefulness of such samples for molecular analysis, real-time RT-PCR was performed on the RNA samples. Different primer pairs directed against the human housekeeping gene TBP mRNA were used to amplify fragments at different distances from the 3" end (128, 227, and 428 nt). For cDNA synthesis, the QuantiTect RT kit (QIAGEN) was used, either with a primer mix composed of random and oligo-dT primers (as contained in the kit), or, for comparison, with oligo-dT primer. Using the primer mix, all of the 1- and 2-year old samples and one of the 4-year samples produced threshold cycle (CT) values of 29–35 (Fig. 5b), whereas the remaining samples gave higher CT values, and in some cases failed to produce any meaningful signals within 40 PCR cycles. Although no clear correlation between RNA fragmentation and CT value was observed, the most fragmented RNA sample (4yr –b, lane 6 in Fig. 5a) gave the poorest PCR results. In contrast, using oligo-dT priming for cDNA synthesis resulted in roughly comparable CT values for the amplicon located at 127 nt from the 3" end, but significantly higher values for the more distant amplicons (Fig. 5b). Only 2 samples produced meaningful results consistently for the amplicon located 428 nt from the 39 end. Using a different reverse transcriptase for cDNA synthesis produced similar results (data not shown).

Acronym和Initialism都表示缩写的意思，在一定程度上，Acronym可以包含Initialim。但有些时候二者有着很大的区别。Acronym表示的缩写一般是不同的单词的首字母组成了一个新的单词。比如“RAM（RandomAccessMemory);LASER(LightAmplificationbyStimulatedEmissionofRadiation);NASA(NationalAeronauticsandSpaceAdministration),andOPEC(OrganizationofPetroleumExportingCountries).”而Initialism则仅仅是首字母的组合，并不代表着一个新的单词。比如“FBI(FederalBureauofInvestigation),CIA(CentralIntelligenceAgency),andDVD(DigitalVideoDisk*).”

DNS放大攻击是一种利用DNS服务器的特性，放大攻击流量的DDoS攻击方法。它的实现原理是这样的：1、攻击者伪造目标网站的IP地址，向DNS服务器发送大量的DNS查询请求，要求返回某个域名的所有记录。2、DNS服务器收到查询请求后，会返回一个很大的响应包，包含了该域名的所有记录，比如A记录、MX记录、NS记录等。这样，攻击者就利用了DNS服务器的放大效果，用很小的请求包换来了很大的响应包，从而消耗了目标网站的带宽和资源。对网安有兴趣欢迎百度我们哦~

觉得是需要的从香港到国外的话在机场里面都是需要有和顺报告检查的。我还是要你醒一下，有其他的事情这段时间最好不要去国外，外真的非常的危险，

前段时间我翻家里的过期杂志，看了一下声卡的由来，路够坚难的，百度里音箱的由来是找不到的，

　　原癌基因与抑癌基因　　第一节 概述　　病毒致癌作用，病毒癌基因Viral oncogene，V-onc).。　　细咆癌基因(cellular oncogene ，c-onc)或原癌基因(protoncogene)　　—正常细胞中与v-onc同源的基因，　　抑癌基因(tumor suppressor gene)：是指由于其存在和表达而抑制细胞癌变的基因。　　原癌基因与抑癌基因生物学性质差异：　　1．功能：抑癌基因在细胞生长中起负调节作用，抑制增殖、促进分化成熟与衰老，或引导多余细胞进入程序性细胞死亡(PCD)，原癌基因的作用则相反．　　2．遗传方式：原癌基因是显性的，激活后即参与促进细胞增殖和癌变过程，而抑癌基因为隐性，只有发生纯合失活时才失去抑癌功能．　　3．突变的细胞类型：抑癌基因突变不仅可发生在体细胞中，也可发生在生殖系(germ 1ine)细胞中，并通过其遗传突变，而原癌基因只在体细胞中产生突变。　　第二节 原癌基因　　原癌基因是细胞的正常基因，其表达产物对细胞的生理功能极其重要，只有当原癌基因发生结构改变或过度表达时，才有可能导致细胞癌变。　　一、原癌基因表达的特点：　　l、正常细胞中原癌基因的表达水平一般较低，而且是受生长调节的，其表达主要有三个特点：①具有分化阶段特异性；②细胞类型特异性； ③细胞周期特异性。　　2、肿瘤细胞中原癌基因的表达有2个比较普遍和突出的特点：　　①一些原癌基因具有高水平的表达成过度表达u2022　　②原癌基因的表达程度和次序发生紊乱，不再具有细胞周期特异性。　　3、细胞分化与原癌基因表达 ．　　在分化过程中，与分化有关的原癌基因表达增加，而与细胞增殖有关的原癌基因表达受抑制。　　二，原癌基因的结构改变与其表达激活　　(一)点突变　　C--ras：12、13、61位密码子点突变，存在于多种肿瘤．　　C-ras编码蛋白(21kD,P21)：RAS，是一种GTP结合蛋白，具GTP酶活性，是重要的信号转导分子．　　(二)染色体易位　　染色体易位(translocation)：是染色体的一部分因断裂脱离，并与其它染色体联结的重排过程。　　因染色体易位造成的原癌基因激活：　　1、 因易位使原癌基因与另一基因形成融合基因，产生一个具有致癌活性的融合蛋白，　　如t(9：22)使c-abl与bcr融合，产生一个致癌的P210蛋白　　2、因易位面使原癌基因表达失控，如t(8：14)易位使c-myc表达失控．　　(三)基因扩增　　基因扩增(gene amplification)即基因拷贝数增加．　　如HL-60和其它白血病细胞，C-myc扩增8-22倍．其它：c-erb B，c-net．　　(四)LTR插入　　LTR是逆转录病毒基因组两端的长末端重复(long terminal repeat)，其中含有强启动子序列。　　三、原癌基因产物的功能　　大多数原癌基因编码的蛋白质都是复杂的细胞信号转导网络中的成份，在信号转导途径中有着重要的作用．　　原癌基因产物可作为：　　1、生长因子，如sis(PDGF-β)，fgf家族(int-2，csf-1等)　　2、生长因子受体(质膜)：具酪氨酸蛋白激酶活性，如neu，ht，met，erbB，trk，fms，ros-1等。　　3、非受体酪氨酸蛋白激酶(质膜／胞质)　　如src家族：src，syn，fyn，abl，lck，ros，yes，fes，ret等．　　4、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶(胞质)：如raf，raf-1，mos，pim-1，　　5、G蛋白(质膜内侧)，具GTP结合作用和GTP酶活性，如ras家族中的 H-ras，K-ras，N-ras，以及mel和ral等． ，　　6．核内DNA结合蛋白(转录因子)　　如myc家族，fos家族，Jun家族，ets家族，rel，erb A(类固醇激素受体)　　第三节 抑癌基因　　一、抑癌基因失活与杂合性丢失　　抑癌基因为隐性癌基因，只有发生纯合失活时才对肿瘤形成起作用，通常的表现为抑癌基因的一个等位基因丢失，面另一个存留的等位基因发生突变(点突变、微缺失，重排等)，等位基因丢失常伴有抑癌基因相邻区域的杂合性丢失(Loss of heterozygosity，LOH)，　　LOS指肿瘤中特定染色体上某种DNA多态性标志(如RFLP，VNTR、STR或SSCP等)的等位基因片段在同一患者中由正常组织基因组中的两种变为一种，即等位基因型由杂合子变为纯合子。　　LOH是肿瘤细胞中部分染色体区域缺失的表现。　　二、抑癌基因产物的功能　　抑癌基因p53　　人P53基因定位：17P13，11个外显子编码393个氨基酸。　　p53基因突变：存在于一半以上的人肿瘤中，多为点突变，主要发生于外显子5-8,如肝癌中的249号密码子第3碱基G→T ,与黄曲霉素B1有关。　　P53蛋白结构和功能：　　P53蛋白为核内转录因子，包括①核心区的DNA结合域；②N端转录激活域；③C端介导寡聚体化的结构域。　　1、 P53的中央域识别和结合一个10bp的启动子序列，可激活转录（通过N-端的反式激活域）。P53突变大多发生于中央DNA结合域。　　2、 P53也可结合DNA损伤时产生的单链区域。　　3、 P53是四聚体，寡聚化需要C-端域　　4、P53激活cki p21, 后者抑制细胞周期于G1期.　　5、 p53 激活与负责辐身损伤的修复蛋白GADD45，维持基因组稳定性。　　6、P53诱导凋亡的机制尚不清楚。　　7、正常情况下p53以低水平存在，半衰期短。DNA损伤稳定P53并增加其转录活性　　8、Mdm2使p53不稳定，易被降解，并能直接抑制其反式激活活性（Mdm2是癌基因)　　、人线粒体基因组为16，569bp的双链闭环分子，一条链为重链(H链)，一条链为轻链(L链)，两条链均有编码功能，每个mtDNA分于编码13种蛋白质和24种结构RNA(22rRNA，2tRNA)．　　2、线粒体DNA为母系遗传．　　3、结构基因不含内含子，部分区域有基因重叠，因此病理性mtDNA突变更易发生．　　4、mtDNA突变频率更高．　　5、线粒体DNA突变的表型表达与核DNA不同。

英语比较难的就是它的一词多意，只有你接触的多了才能深刻的体会到次的贴切含义，之前你总会感觉到迷茫的，给你几个好的英语网站，自己去慢慢的尝试下啊~~~~~英语之声，很不错的，尝试一下

AMP是AMP NETCONNECT泰科电子公司的简称，位于美国马萨诸塞州，是全球电气、电子和光纤连接器以及互连系统的首要供货商。HTML代码中&符号的缩写便是AMP。AMP Amplifier 放大器，扩音机；amplification放大。AMP-EN Amplifier Enable 放大器启动端。AMP-N Amplifier Negative 音频放大器信号负。AMP-P Amplifier Positive 音频放大器信号正。AMPC Amplifier Control 放大器控制。American Metal Product 美国金属产品公司。Aviation Modernization Program (美国)航空现代化计划。