- cloudcone
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为了表明HAX-1 的降解是凋亡过程的一部分以及OMI可能的参与,我们用ucf-101抑制剂。ucf-101是此前报道过的(13)卵母细胞成熟抑制因子蛋白酶解活性的一种特异性抑制剂。当HK-2 细胞在ucf-101的存在下用顺铂处理时,凋亡细胞百分比下降,而且这种抑制剂明显阻止了HAX-1的降解。当抑制剂浓度加大时这种效应更加突出。
为了证实这种抑制剂在本系统中的特异性,并排除其他蛋白酶而不是OMI 涉及HAX-1酶切的可能性,我们使用mnd2 小鼠衍生的细胞系(9)。小鼠胚胎成纤母细胞系(mnd2-MSCV)没有可检测的OMI 蛋白酶活性(9)。相同的细胞系被转染到野生型人类OMI的cDNA (mnd2-MSCV-卵母细胞成熟抑制因子) 中,表达了大量的活性OMI蛋白(14)。我们发现mnd2-MSCV细胞用各种刺激剂诱导凋亡时,凋亡细胞的数量非常低。 进一步讲,没有观察到可检测的HAX-1酶切。这和细胞凋亡很旺盛的mnd2-MSCV-OMI细胞相反,并且HAX-1含量和细胞凋亡水平呈反比关系。该试验清楚地表明了卵母细胞成熟抑制因子单独决定HAX-1的酶切,在本实验使用的条件下对于细胞凋亡是必须的。HAX-1的亚细胞位置取决于细胞形状(21, 30),并且已经有报道说可以存在于线粒体、细胞质或质膜 (10、21、22、30)中。 我们对细胞亚组分进行了分离操作来研究OMI酶切HAX-1 蛋白的位点。我们发现HEK293 细胞中的HAX-1蛋白主要存在于线粒体,并且这个位点不随刺激剂反应的改变而变化。 这暗示着卵母细胞成熟抑制因子靠酶切HAX-1 蛋白来启动线粒体中的细胞凋亡。这和最近的研究是一致的,该研究表明卵母细胞成熟抑制因子能诱导用TNF处理的人类神经多肽的凋亡而不从线粒体中释放出来(7)。尽管几个研究清楚地把HAX-1界定为一种抗凋亡蛋白,它发挥功能的机理仍然未知。HAX-1 和Bcl-2蛋白家族有序列相似性 (10, 22)。
- 牛云
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表示, HAX-1 退化是apoptotic 过程的一部分并且任一介入Omi 可以有, 我们曾经ucf-101 抗化剂ucf-101 是Omi 的蛋白水解的活动的一种具体抗化剂和早先被描述了(13) 。当HK-2 细胞被对待了与cisplatin 在ucf-101 面前, apoptotic 细胞的百分比减少了并且抗化剂极大阻拦了HAX-1 退化。这个作用是更加发出音的当抗化剂的更高的浓度被使用了。 证实抗化剂的特异性在这个系统和排除可能性, 其它蛋白酶而不是Omi 被介入在HAX-1 卵裂, 我们曾经细胞线从mnd2 老鼠被获得(9) 。父母细胞线(mnd2-MSCV) 从老鼠胚胎成纤维细胞被获得没有可发现的Omi 蛋白水解的活动(9) 。同样细胞线是transfected 以狂放的型人的Omi DNA (mnd2-MSCV-Omi) 并且表达高水平活跃Omi 蛋白质(14) 。我们发现在mnd2-MSCV 细胞里, 当导致接受apoptosis 与各种各样的刺激, apoptotic 细胞的数量是非常降低。此外, HAX-1 可发现的卵裂未被观察。这是与apoptosis 健壮的mnd2-MSCV-Omi 细胞对比, 并且HAX-1 水平与程度相反地是比例apoptosis 。这个实验清楚地表示, Omi 负责单一地对HAX-1 卵裂, 是根本的为apoptosis 在条件下被使用在这些实验。HAX-1 亚细胞地方化取决于细胞类型(21, 30) 并且被报告是存在在线粒体、细胞质, 或血浆膜(10, 21, 22, 30) 。我们执行亚细胞分馏调查HAX-1 卵裂由Omi 发生的地方。我们发现, 在HEK293 细胞里, HAX-1 是主要地存在在线粒体, 并且这地方化没有改变以回应apoptotic 刺激。这建议, Omi 可能创始apoptosis 在线粒体由劈开HAX-1 蛋白质。这是与显示的一项最近研究一致Omi 可能导致apoptosis 在人的嗜中性被对待与TNF- 没有从线粒体被发布(7) 。虽然几项研究清楚地定义HAX-1 作为anti-apoptotic 蛋白质, 它的作用机制是未知的。HAX-1 有序列相似性对Bcl-2 家庭蛋白质(10, 22) 。
- CarieVinne
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为了要表示 HAX-1 降格是 apoptotic 程序的部份,而且任何的牵涉 Omi 可能有,我们用了 ucf-101 抑制剂。 ucf-101 是 Omi 的产生蛋白水解活动的一个特定抑制剂和已经在先前被描述。 (13) 当 HK-2 细胞在 ucf-101 之前被以 cisplatin 治疗的时候, apoptotic 细胞的百分比减少了,而且抑制剂重要地阻塞了 HAX-1 降格。 当抑制剂的较高的集中被用的时候,这效果更显着。
为了确定这一个系统的抑制剂的特异性而且排除可能性:另外的一个蛋白并非 Omi 参与 HAX-1 卵裂, 我们二手的细胞线起源于 mnd 2只老鼠了.(9) 父母细胞线 (mnd 2 MSCV 的) 起源于 , 老鼠胚胎成纤维细胞没有可发觉的 Omi 产生蛋白水解的活动。 (9) 相同的细胞线已经用野性的类型是 transfected 人类的 Omi cDNA(mnd 2 MSCV 的-Omi) 而且表达高度活跃的 Omi 蛋白质。 (14)我们在 mnd 中发现那 2 MSCV 的细胞, 当感应的时候用各种不同的刺激遭受 apoptosis, apoptotic 细胞的数字非常低。 此外, HAX-1 的没有可发觉卵裂被观察。 这是与 mnd apoptosis 是强健的,而且 HAX-1 水平反的成比例 apoptosis 的程度的 2 MSCV -Omi 细胞相反。 这实验清楚地表示 Omi 独自地负责 HAX-1 卵裂,这在被用于这些实验的情况之下对 apoptosis 是必要的。 HAX-1 次格状自动化局限仰赖细胞类型 (21,30) 和已经被报告存在于 mitochondria ,细胞质或血浆薄膜。 (10,21,22,30) 我们运行了次格状自动化分别调查 Omi 的 HAX-1 卵裂发生的地方。 在 HEK293 细胞, 我们发现,HAX-1 在 mitochondria 中是居多出现,而且这一个局限没有回应 apoptotic 刺激改变。 这建议 Omi 藉由劈开 HAX-1 蛋白质能在 mitochondria 中开始 apoptosis 。 这与表示 Omi 能在被以 TNF 治疗的人类的好中性白血球中引诱 apoptosis 的一项最近的研究一致- 没有从 mitochondria 被释放.(7) 虽然一些研究清楚地定义如反 apoptotic 蛋白质的 HAX-1 ,但是它的功能的机制是未知的。 HAX-1 有对蛋白质的 Bcl-2 科的序列相似性。 (10,22)