绿叶层析带

纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。其原理是：利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离开来，在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。由于纤维素上的亲水羟基使这部分水围绕在纤维素周围，不易扩散而形成固定相。在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线上的色素就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，与分子大小有关，那些分配系数大的色素分子，随层析液向上移动较快，形成的色素带集中在滤纸的上部，而分配系数小的色素分子，随层析向上移动较慢，形成的色素带集中在滤纸的下面。

纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。其原理是：利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离开来，在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。由于纤维素上的亲水羟基使这部分水围绕在纤维素周围，不易扩散而形成固定相。在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线上的色素就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，与分子大小有关，那些分配系数大的色素分子，随层析液向上移动较快，形成的色素带集中在滤纸的上部，而分配系数小的色素分子，随层析向上移动较慢，形成的色素带集中在滤纸的下面。

纸层析法的原理（D）A.萃取原理B.毛细现象C.蒸馏原理D.极性相似相溶原理纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维和水有较强的亲和力，能吸收22%左右的水，而且其中6~7%的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，在一般条件下较难脱去，而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱，所以一般的纸层析实际上是以滤纸纤维的结合水为固定相，以有机溶剂为流动相。提取有关光合作用色素的实验中，就是利用纸层析法，将溶解度不同的色素提取出来背景理论首先要了解什么叫分配层析；分配层析是利用混合物中各组分在两种不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法。分配系数是指一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解达到平衡时，该溶质在两种溶剂中所具有浓度之比。不同的物质因其在各种溶剂中的溶解度不同，因而也就有不同的分配系数。分配层析中应用最广泛的多孔支持物是滤纸，其次是硅胶、硅藻土、纤维素粉、淀粉和微孔聚乙烯粉等。下面主要介绍纸层析。理论依据在实际操作中，点样后的滤纸一端浸没于流动相液面之下，由于毛细作用，有机相即流动相开始从滤纸的一端向另一端渗透扩展。当流动相（有机相）沿滤纸经点样处时，样品点上的溶质在水和有机相之间不断进行分配，一部分样品离开原点随流动相移动，进入无溶质区，此时又重新分配，一部分溶质由流动相进入固定相（水相）。随着流动相的不断移动，因样品中各种不同的溶质组分有不同的分配系数，移动速率也不一样，所以各种不同的部分按其各自的分配系数不断进行分配，并沿着流动相流动的方向移动，从而使样品中各组分得到分离和纯化。纸层析对混合物进行分离时，发生两种作用：第一种是溶质在结合于纤维上的水与流过滤纸的有机相进行分配（即液—液分离）；第二种是滤纸纤维对溶质的吸附及溶质溶解于流动相的不同分配比进行分配（即固—液分配）。虽然混合物的彼此分离是这两种因素共同作用的结果。

纸层析：是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维和水有较强的亲和力，能吸收百分之22左右的水，而且其中百分之6到百分之7的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，所以在一般条件下较难脱去。而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力很弱，所以一般的纸层析实际上是以滤纸纤维的结合水为固定相，以有机溶剂为流动相通常会利用此特性达到分离鉴定的目的。例如在提取有关光合作用色素的实验中，就是利用纸层析法，将溶解度不同的色素提取出来。

纸层析法又称纸色谱法，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质有不同的分配系数，移动速度因此而不同，从而达到分离的目的。希望对你有帮助

氨基酸的纸色谱原理是比值原理。根据查询相关资料显示，纸层析法是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相.在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点。在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，它们分布在滤纸的不同位置上，物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值来表示所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值原理。

这应该是分离色素常用的方法。它的原理是，利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离开，在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。固定相是指被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维素上的亲水羟基使这部分水束缚在纤维素周围，不易扩散而成为固定相。在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线上的色素就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，与分子大小有关，那些分配系数大的色素分子，随层析液向上移动得快，形成的色素带集中在滤纸的上部；而分配系数小的色素分子，随层析向上移动得慢，形成的色素带集中在滤纸的下面。

　　纸层析法分离色素条带是：叶绿体中色素分离原理是各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素。溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢。分离的结果是：从上到下依次是：胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。　　1、纸层析法分离出的色素带的颜色分布是橙黄色、胡萝卜素、黄色、叶黄素、蓝绿色、叶绿素a、黄绿色、叶绿素b，叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，类胡罗卜素主要吸收蓝紫光。　　2、叶绿素a的色素带最宽，原因是叶绿素a的含量最多。色素在纸带上的宽窄主要取决于色素分子本身的结构，以及色素分子随层析液扩散时与固定相之间的亲和力。叶绿素a的分子量大，分子间的相互作用力也大，这样在固定相中移动的速度就慢，色素重叠，使之集中分布在较窄的范围内。　　3、光合色素包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素，这四种色素在层析液中的溶解度不同，所以在滤纸条上的扩散速度也不同，因此色素带有高有低。由上至下依次是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b。

塔板理论就是将色谱层析柱比作蒸馏塔,待分离组分在分馏塔的塔板间移动,在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡,随着流动相的流动,组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板,并不断形成新的平衡. 而柱效通常用每米层析柱的理论塔板数（N）或每个塔板的柱床长度H（理论塔板高度,HETP）表示. 纸层析又称纸色谱法,以纸为载体的色谱法.滤纸纤维的结合水为固定相,而以有机溶剂作为流动相.由于样品中各物质分配系数不同,因而扩散速度不同,从而达到分离的目的.

二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法,其中滤纸纤维上吸附的水是固定相 水是固定相,配层析法,其中滤纸纤维上吸附的水是固定相,展层用的有机溶剂是流动相 在层析时,有机溶剂是流动相.展层用的有机溶剂是流动相.在层析时, 将样品点在距滤纸一端约2～的某一处,将样品点在距滤纸一端约 3cm的某一处,的某一处 该点称为原点； 该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层,沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基 酸在两相中不断分配.由于分配系数（ 酸在两相中不断分配.由于分配系数（Kd） 不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置,物质被分离后在纸层析图谱上的位置,可用 比移值（ 来表示.比移值（Rf）来表示.所谓R 是指在纸层析中,所谓 f,是指在纸层析中,从原点至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（ ） 停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与 原点至溶剂前沿的距离（ ）的比值.原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值.如图 原点到层析点中心的距离 X Rf = = Y 原点到溶剂前沿的距离 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变）,某种物质的R ）,某种物质的 层析纸质量等不变）,某种物质的 f 值是常 因此可作为定性依据.数,因此可作为定性依据.由于氨基酸无色,由于氨基酸无色,可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析.氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析.本 实验利用纸层析法分离氨基酸.实验利用纸层析法分离氨基酸.

氨基酸的纸层析 一、 实验目的 1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法.2.学习纸层析法的操作技术,分析未知样品氨基酸的成分.二、 实验原理 用滤纸为支持物进行层析的方法,称为纸层析法,它是分配层析法的一种.纸层析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成.滤纸纤维的—OH 基的亲水性基团,可吸附有机溶剂中的水作为固定相,有机溶剂作为流动相,它沿滤纸自下向上移动,称为上行层析；反之,使有机溶剂自上而下移动,称为下行层析.将样品点在滤纸上进行展层,样品中的各种氨基酸即在二相中不断进行分配,由于它们各自的分配系数不同,故在流动相中移动速率不等,从而使不同的氨基酸得到分离和提纯.纸层析法主要是依据混合组分对二相分配系数的差异进行分离,但亦存在着某种程度的吸附作用和离子交换现象.氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点,氨基酸在滤纸上的移动速率用Rf 表示.Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 只要实验条件(如温度、展层溶剂的组分、pH、滤纸的质量等)不变,Rf 值是常数,因此可做定性分析参考.如果溶质中氨基酸组分较多或其中某些组分的Rf 值相同或近似,用单向层析不宜将它们分开,为此可进行双向层析,在第一溶剂展开后将滤纸转动90度,以第一次展层所得的层析点为原点,再用另一种溶剂展层,即可达到分离目的.由于氨基酸无色,可利用茚三酮反应使氨基酸层析点显色,从而定性和定量.三、仪器和试剂 仪器 层析滤纸、烧杯、剪刀、层析缸、培养皿、猴头喷雾器、微量加样器或毛细管、吹风机一个、直 尺、铅笔等.试剂 1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉) 甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶于5mL 水中.蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中.亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶于5mL 水中.氨基酸混合液：甘氨酸50mg,亮氨酸25mg,蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中.2.展层溶剂 碱相溶剂：正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇 = 13∶13∶13(V/V) 酸相溶剂：正丁醇∶80%甲酸∶水 = 15∶3∶2(V/V),摇匀后放置半天以上,取上清液备用.3.显色贮备液：0.4mol/L 茚三酮—异丙醇∶甲酸∶水=20∶1∶5.4.0.1%硫酸铜：75%乙醇=2∶38,临用前按比例混合.四、实验步骤 (1)标准氨基酸单向上行层析法 1.画基线 戴上指套或橡皮手套,在长约20cm、宽约17cm 滤纸上,距短边2.5cm 处,用铅笔画一条线,即为基线.2.点样 在原线上,从距纸的长边4cm处开始,每隔3cm 用微量注射器或毛细管依次分别点上甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和混合氨基酸溶液.点样点干后可重复点加1～2次.每一点的直径不超过2mm,点样量以每种氨基酸含5～20ug 为宜.3.展层 将点好样的滤纸卷成筒形,滤纸两边不相接触,用线固定好,将原线的下端浸入盛有溶剂的培养皿中,不需平衡可立即展层.展层剂为酸性溶剂系统,在展层溶剂中加入显色贮备液(每10mL 展层剂加0.0.5mL 的显色贮备液)进行展层,基线必须保持在液面之上,以免氨基酸与溶剂直接接触.盖好层析缸,当溶剂前沿距纸端2cm 时(大约3h),取出滤纸.4.显色 滤纸取出后,吹干或在80℃左右烘箱内烘3～5min,即出现紫红色的氨基酸层析 斑点.用铅笔划下层析斑点,可进行定性、定量测定.(2)混合氨基酸双向上行纸层析法 1.滤纸准备 将滤纸裁成约28cm2的正方形,在距滤纸相邻两边各2cm 处的交点上,用铅笔划下一点,做为原点.2.点样 取混合氨基酸溶液(5mg/mL)10～15μL,分别点在原点上.3.展层与显色 将点好样的滤纸卷成半筒形,立在培养皿中,原点应在下端.取少量12%的氨水与小烧杯中,盖好层析缸,平衡过夜.次日,取出氨水,加适量碱相溶剂(第一向)与培养皿中,盖好层析缸,上行展层,当溶剂前沿距滤纸上端1～2cm 时,取出滤纸,冷风吹干.将滤纸转90o,再卷成半筒形,竖立在干净培养皿中,并于小烧杯中至少量酸相溶剂,盖好层析缸,平衡过夜,次日将加显色剂的酸性溶剂(每10mL 展层剂加0.0.5mL 的显色贮备液)倾入培养皿中,进行第2向展层.展层毕,取出滤纸,用热风吹干,蓝紫色斑点即显现.五、计算 单向层析的Rf 值,按 “Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离”计量后计算.双向层析Rf 值,由两个数值组成,在第一向计量一次,第二向计量一次,分别与已知的氨基酸在酸碱系统的Rf 值对比,即可初步决定它为何种氨基酸的斑点,将它剪下,在同一张纸剪下一块大小相同的空白纸作为对照,用硫酸铜—乙醇溶液洗脱,用722型分光光度计测定其吸光度,在标准曲线上查出氨基酸的含量.

为什么可以用纸层析法分离谷氨酸和赖氨酸？把产生谷氨酸的棒状杆菌放在紫外线下照射，一部分细菌便产生突变，基因的突变影响到细菌细胞代谢产物的改变，于是，由原来产生谷氨酸的细菌变成了产生赖氨酸的细菌

纸层析法中的展开剂之所以能够在滤纸上展开的主要原理是毛细现象，展开时定性滤纸一部分插入层析液中，让层析液利用毛细现象爬上来，从而展开。而纸层析法中物质的分离则是利用相似相溶原理，纸层析是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相，利用各组分的极性不同，在流动相中的溶解度不同而达到分离。

纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。纸层析法可分为一般纸层析法，圆形纸层析法、反相纸层析法和双向纸层析法。等 用途　　通常可用于叶绿素的色素成分检验，氨基酸的鉴定及测定，橘皮精油成分检验及一些特定细胞筛查等实验。原理　　纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。 　　试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描仪测定。色谱系统　　固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。编辑本段应用操作方法　　将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。应用及实例介绍　　在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。 　　纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、 [1]叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤 　　纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法 　　能清楚地将叶绿体中的色素分离。注意事项　　纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。编辑本段实验仪器药品　　大试管 台天平 研钵(配带孔纸板,防止丙酮挥发) 量筒 烧杯 漏斗 　　软木塞 滤纸 丙酮（可用无水乙醇替代） 四氯化碳 无水硫酸钠 碳酸钙 石英砂操作步骤　　1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。 　　2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。 　　3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。 4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。 　　经过0.5—1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。[1]普通高中相关实验　　植物叶绿体中色素的提取与分离 　　用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml量筒一只，天平一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片 　　试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸钙、碳酸钠 　　材料：新鲜的菠菜叶、青菜叶、大叶黄杨叶片 　　背景资料： 　　1、 叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。 　　2、 叶绿素分布于基粒的片层薄膜上，加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成，使色素溶解于丙酮中。 　　3、 破碎的细胞中含有草酸等有机酸，叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合态，镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合，减少镁离子的转移，防止研磨时叶绿体色素的破坏。所以在研磨时加入适量的碳酸钙，同时加入碳酸钠的道理亦如此。 　　4、 在过滤时选用脱脂棉或纱布，而不用滤纸。原因主要有下：（1）色素分子比较大，不容易透过滤纸； （2）滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度，影响实验效果；（3）叶绿素是脂溶性，根据相似相容的原理，脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失，增强实验效果。 　　5、 根据物理学中的毛细现象，画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理，是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。但如果用火烤的话，会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管，而影响层析液的扩散。 　　6、 由于液面的不同位置表面张力不同，纸条接近液面时，其边缘的表面的张力较大，层析液沿滤纸边缘扩散过快，而导致色素带分离不整齐的现象。故而，在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。 　　7、 为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。同时，防止因液体表面张力引起层析液沿滤纸条向上的“壁流”而导致色素溶解。 　　8、 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

　　纸层析法的介质是纸而层析除了纸层析外还有凝胶层析，毛细管层析等。 　　层析法：又称色层分析法或色谱法，是利用混合物中各组成部分物理化学性质的差异，如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等，使各组成部分在两相中的分布程度不同。一相为固定的，称为固定相，另一相流过固定相，称为流动相，从而使各组成部分以不同的速度移动而达到分离的目的。 　　纸层析法：又称纸色谱法，是用纸作为载体的一种色谱法，其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂相的在同一介质中分散速度不同来分析的。固定相一般为纸纤

两者原理是相同的，都是通过时对化合物的不同吸附力，而达到分离的目的。

在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。在做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎，浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。 大试管 台天平研钵(配带孔纸板,防止丙酮挥发) 量筒 烧杯 漏斗软木塞 滤纸 丙酮（可用无水乙醇替代） 四氯化碳 无水硫酸钠 碳酸钙 石英砂 1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。 4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。经过0.5—1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。 植物叶绿体中色素的提取与分离用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml量筒一只，天平一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸钙、碳酸钠材料：新鲜的菠菜叶、青菜叶、大叶黄杨叶片背景资料：1、 叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。2、 叶绿素分布于基粒的片层薄膜上，加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成，使色素溶解于丙酮中。3、 破碎的细胞中含有草酸等有机酸，叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合态，镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合，减少镁离子的转移，防止研磨时叶绿体色素的破坏。所以在研磨时加入适量的碳酸钙，同时加入碳酸钠的道理亦如此。4、 在过滤时选用脱脂棉或纱布，而不用滤纸。原因主要有下：（1）色素分子比较大，不容易透过滤纸； （2）滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度，影响实验效果；（3）叶绿素是脂溶性，根据相似相容的原理，脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失，增强实验效果。5、 根据物理学中的毛细现象，画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理，是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。但如果用火烤的话，会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管，而影响层析液的扩散。6、 由于液面的不同位置表面张力不同，纸条接近液面时，其边缘的表面的张力较大，层析液沿滤纸边缘扩散过快，而导致色素带分离不整齐的现象。故而，在插入层析液的滤纸条一端剪去两个角。7、 为了防止滤纸条倒入层析液中而使层析实验失败。同时，防止因液体表面张力引起层析液沿滤纸条向上的“壁流”而导致色素溶解。8、 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次又一次的分配。结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

就是在层析纸上用细线的方式画上某种物质 将其末端放入某种有机溶剂中 利用该物质在此溶剂中溶解度 及扩散的速度不同而出现的分层 每层代表的物质不同！ 注意 不能将细线碰触到容积；且线应画的细 直 且多次。

叶绿体中色素分离原理是各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同，从而分离色素．溶解度大，扩散速度快；溶解度小，扩散速度慢． 分离的结果是： 所以滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b． 故选：A．

　　（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理.2、掌握氨基酸纸层析的操作原理.（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应,在转氨酶的催化下,氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用.转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中,是体内氨基酸代谢的重要途径.氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化,此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上.各种转氨酶的活性不同,其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸 + 丙氨酸 uf0beuf0beuf0aeuf0acALT谷氨酸 + 丙酮酸 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物,加肝匀浆保温后,用纸层析法检查谷氨酸的出现,以证明转氨基作用.纸层析属于分配层析.以滤纸为支持物,滤纸纤维与水亲合力强,水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相.有机溶剂与水不相溶,把预分离物质加到滤纸的一端,使流动溶剂经此向另一端移动,这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配.由于物质分配系数的差异,而使移动速度就不一样,在固定相中,分配趋势较大的组分,随流动相移动的速度就慢,反之,在流动相分配趋势较大的成分,移动速度快,最终不同的组分彼此分离,物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：物质在一定的溶液中的分配系数是一定的,故比值Rf也相对稳定,因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质.（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液.2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍.3、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔 细调至pH7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml.4 、0.1mol/Lα－酮戊二酸称取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后,加磷酸盐缓冲液至100ml.5、0.1mol/L 谷氨酸溶液称取谷氨酸0.735克,先溶于少量0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后,加磷酸盐缓冲液至50 ml.6、0.5%茚三酮溶液称取茚三酮0.5克于100 ml丙酮中溶解.7、层析溶剂：将重蒸过的酚2份和水1份按比例混合后,放入分液漏斗中,震荡,静置24小时后分层,将下部酚层转移到瓶中备用.仪器：玻璃匀浆器、10ml试管、培养皿、表面皿、沸水浴锅、37℃恒温水浴箱、9cm圆滤纸、烘箱、手术剪刀、分液漏斗.

同一种液体，对一种固体来说是浸润的，对另一种固体来说可能是不浸润的.水能浸润玻璃，但不能浸润石蜡.水银不能浸润玻璃，但能浸润锌.所以，纸层析法利用吸收/浸润原理。课本上就是这个道理，你理解错了

相同

如图1所示，在滤纸的作用是支持剂： 2，固定相是水，与水不混溶或部分混溶的溶剂的流动相：/>一个Rf值=物质的斑点（浓度中心）移动的距离的移动距离/溶剂前沿= A / B： 4,0.05（可能会有所不同书参考价值差异）色谱滤纸材料称为普通滤纸材料是比较均匀的，一定纯度，不应该包含可溶于水和有机溶剂的物质; 6，饱和色谱溶剂系统展开这些组件在使用前寻呼漏斗充分混合，然后静置分层。上层饱和溶剂，说，发展代理，较低的饱和水，上述平衡剂; 7手的包含大量的碎片，影响整个系统的，有不同的效果在不同的色谱 8，两个边缘理论上影响不大，但实际操作中，为了便于准确，不依赖; 防止污迹除了准备工作，经营的主要关注是不是察觉太强大了; 10，油笔; 11，进行了大量的信息或在线书籍，纸层析分区色谱，输入关键字，最好先分区色谱原理看到它我只是参考书，不是这方面的专家，

纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相.在层析时,将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处,该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数（Kd）不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rateofflow,Rf）来表示.所谓Rf,是指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值：在一定条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关.

纸层析法分离色素原理是色素在层析液中的溶解度不同，随着层析液扩散的速度不同，溶解度越大，扩散的速度越快，其色素带距离滤液细线越远，反之则越近．叶绿体色素的纸层析结果显示叶绿素b位于层析滤纸的最下端，说明叶绿素b在层祈液中的溶解度最小． 故选：A．

（一）层析技术的原理 　　层析法是目前广泛应用的一种分离技术。本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。 　　层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。 　　（二）层析法分类见表 　　（三）层析法的特点与应用 表　按两相所处状态分类 　 流动相 液体 气体 　 液体 液-液层析法 气-液层析法 固定相 　 　 固体 液-固层析法 气-固层析法 　　层析法是根据物质的理化性质不同而建立的分离分析方法。根据层析峰的位置及峰高或峰面积，可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用，可检测 出层析后各组份的浓度或质量，同时绘出层析图。层析仪与电子计算机联用，可使操作及数据处理自动化，大大缩短分析时间。由于层析法具有分辨率高、灵敏度 高、选择性好、速度快等特点，因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析，尤其适用于生物样品的分离分析。近年来，已成为生物化学及分子生物学常用的分析方 法。在医药卫生、环境化学、高分子材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用。 表　按层析原理分类 　　　名称 　　分离原理 吸附层析法 组份在吸附剂表面吸附固定相是固体吸附剂，各能力不同 分配层析法 各组份在流动相和静止液相（固相）中的分配系数不同 离子交换层析法 固定相是离子交换剂，各组份与离子交换剂亲和力不同 凝胶层析法 固定相是多孔凝胶，各组份的分子大小不同，因而在凝胶上受阻滞的程度不同 亲和层析法 固定相只能与一种待分离组份专一结合，以此和无亲和力的其它组份分离 表　按操作形式不同分类 名称 操作形式 柱层析法 固定相装于柱内，使样品沿着一个方向前移而达分离 薄层层析法 将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上，点样后用流动相展开，使各组份分离 纸层析法 用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开，使各组份分离 薄膜层析法 将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜，以类似纸层析方法进行物质的分离

分离色素的原理是根据色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的在滤纸条上扩散速度最快，而色素带的宽窄取决于色素的含量．滤纸条从上到下依次是：胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b． 故选：A．

这个题目是考察你对层析法的了解吧，层析法层析出来的不是胡叶AB 吧 从上到下胡萝卜素，叶黄素，叶绿素A 叶绿素B 。应该是洋葱是埋在土里的，那个是种子吧，不需要有光合作用的色素。我是这样理解的。所以应该是没有色素带。

原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。其原理是：利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离开来，在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。纸色谱法指的是把一种溶剂固定在固体的支持物上，由于滤纸纤维对水有较强的亲和力，一般能吸附其自身质量。

赖氨酸和谷氨酸、作为流动相。1、本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸。无色物质的纸色谱可用光谱法紫外光照射、或显色法鉴定，氨基酸纸色谱图谱常用茚三酮。2、相溶原理为：是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。

　　纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。　　纸层析法依据极性相似相溶原理，利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离。 　　纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，纸层析所用展层溶剂大多由有机溶剂和水组成。其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。因为滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。　　试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置，其中，比移值就是原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比。　　由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描仪测定。

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相.在层析时,将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处,该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数（Kd）不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow,Rf）来表示.所谓Rf,是指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值： 在一定条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关. ^__^

原理是根据物质的分子大小、吸附能力、亲和力、分配系数等物理化学性质的不同，使得样品各组份以不同的比例分布在两相中，一个为固定相，一个为流动相，当流动相流经固定相时，各组分以不同的速度流动，达到分离的目的。

纸层析是以滤纸为惰性支持物。滤纸纤维和水有较强的亲和力，能吸收22％左右的水，而且其中6~7％的水是以氢键形式与纤维素的羟基结合，在一般条件下较难脱去，而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力甚弱，所以一般的纸层析实际上是以滤纸纤维的结合水为固定相，以有机溶剂为流动相，当流动相沿纸经过样品时，样品点上的溶质在水和有机相之间不断进行分配，一部分样品随流动相移动，进入无溶质区，此时又重新分配，一部分溶质由流动相进入固定相（水相）。随着流动相的不断移动，各种不同的部分按其各自的分配系数不断进行分配，并沿着流动相移动，从而使物质得到分离和提纯。

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值：在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。其原理是：利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离开来，在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。由于纤维素上的亲水羟基使这部分水围绕在纤维素周围，不易扩散而形成固定相。在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线上的色素就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。

氨基酸的纸层析 一、 实验目的 1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法.2.学习纸层析法的操作技术,分析未知样品氨基酸的成分.二、 实验原理 用滤纸为支持物进行层析的方法,称为纸层析法,它是分配层析法的一种.纸层析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成.滤纸纤维的—OH 基的亲水性基团,可吸附有机溶剂中的水作为固定相,有机溶剂作为流动相,它沿滤纸自下向上移动,称为上行层析；反之,使有机溶剂自上而下移动,称为下行层析.将样品点在滤纸上进行展层,样品中的各种氨基酸即在二相中不断进行分配,由于它们各自的分配系数不同,故在流动相中移动速率不等,从而使不同的氨基酸得到分离和提纯.纸层析法主要是依据混合组分对二相分配系数的差异进行分离,但亦存在着某种程度的吸附作用和离子交换现象.氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点,氨基酸在滤纸上的移动速率用Rf 表示.Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 只要实验条件(如温度、展层溶剂的组分、pH、滤纸的质量等)不变,Rf 值是常数,因此可做定性分析参考.如果溶质中氨基酸组分较多或其中某些组分的Rf 值相同或近似,用单向层析不宜将它们分开,为此可进行双向层析,在第一溶剂展开后将滤纸转动90度,以第一次展层所得的层析点为原点,再用另一种溶剂展层,即可达到分离目的.由于氨基酸无色,可利用茚三酮反应使氨基酸层析点显色,从而定性和定量.三、仪器和试剂 仪器 层析滤纸、烧杯、剪刀、层析缸、培养皿、猴头喷雾器、微量加样器或毛细管、吹风机一个、直 尺、铅笔等.试剂 1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉) 甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶于5mL 水中.蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中.亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶于5mL 水中.氨基酸混合液：甘氨酸50mg,亮氨酸25mg,蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中.2.展层溶剂 碱相溶剂：正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇 = 13∶13∶13(V/V) 酸相溶剂：正丁醇∶80%甲酸∶水 = 15∶3∶2(V/V),摇匀后放置半天以上,取上清液备用.3.显色贮备液：0.4mol/L 茚三酮—异丙醇∶甲酸∶水=20∶1∶5.4.0.1%硫酸铜：75%乙醇=2∶38,临用前按比例混合.四、实验步骤 (1)标准氨基酸单向上行层析法 1.画基线 戴上指套或橡皮手套,在长约20cm、宽约17cm 滤纸上,距短边2.5cm 处,用铅笔画一条线,即为基线.2.点样 在原线上,从距纸的长边4cm处开始,每隔3cm 用微量注射器或毛细管依次分别点上甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和混合氨基酸溶液.点样点干后可重复点加1～2次.每一点的直径不超过2mm,点样量以每种氨基酸含5～20ug 为宜.3.展层 将点好样的滤纸卷成筒形,滤纸两边不相接触,用线固定好,将原线的下端浸入盛有溶剂的培养皿中,不需平衡可立即展层.展层剂为酸性溶剂系统,在展层溶剂中加入显色贮备液(每10mL 展层剂加0.0.5mL 的显色贮备液)进行展层,基线必须保持在液面之上,以免氨基酸与溶剂直接接触.盖好层析缸,当溶剂前沿距纸端2cm 时(大约3h),取出滤纸.4.显色 滤纸取出后,吹干或在80℃左右烘箱内烘3～5min,即出现紫红色的氨基酸层析 斑点.用铅笔划下层析斑点,可进行定性、定量测定.(2)混合氨基酸双向上行纸层析法 1.滤纸准备 将滤纸裁成约28cm2的正方形,在距滤纸相邻两边各2cm 处的交点上,用铅笔划下一点,做为原点.2.点样 取混合氨基酸溶液(5mg/mL)10～15μL,分别点在原点上.3.展层与显色 将点好样的滤纸卷成半筒形,立在培养皿中,原点应在下端.取少量12%的氨水与小烧杯中,盖好层析缸,平衡过夜.次日,取出氨水,加适量碱相溶剂(第一向)与培养皿中,盖好层析缸,上行展层,当溶剂前沿距滤纸上端1～2cm 时,取出滤纸,冷风吹干.将滤纸转90o,再卷成半筒形,竖立在干净培养皿中,并于小烧杯中至少量酸相溶剂,盖好层析缸,平衡过夜,次日将加显色剂的酸性溶剂(每10mL 展层剂加0.0.5mL 的显色贮备液)倾入培养皿中,进行第2向展层.展层毕,取出滤纸,用热风吹干,蓝紫色斑点即显现.五、计算 单向层析的Rf 值,按 “Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离”计量后计算.双向层析Rf 值,由两个数值组成,在第一向计量一次,第二向计量一次,分别与已知的氨基酸在酸碱系统的Rf 值对比,即可初步决定它为何种氨基酸的斑点,将它剪下,在同一张纸剪下一块大小相同的空白纸作为对照,用硫酸铜—乙醇溶液洗脱,用722型分光光度计测定其吸光度,在标准曲线上查出氨基酸的含量.

不同色素在溶液中的含量、溶解度不同，使得他们在层析液中的宽窄、高度不同

分离叶绿体色素常用的纸层析法是一种分配层析.分配层析的原理是,利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异,将它们分离. 在纸层析中的流动相是指层析液,在毛细拉力作用下,层析液能不断由下向上流动.固定相是指被吸附在滤纸纤维之间的水分.由于纤维素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤维素周围,不易扩散而成为固定相.在层析过程中,当层析液在毛细拉力作用下,上升流经色素滤液细线时,滤液细线上的色素就相继融入层析液,随着层析液上升,并发生在分配,即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中,直到平衡.由于分配系数的不同,那些分配系数大的色素分子,随层析液向上移动得快,形成的色素带集中在滤纸的上部；而分配系数小的色素分子,随层析向上移动得慢,形成的色素带集中在滤纸的下面.

分离叶绿体色素常用的纸层析法是一种分配层析。分配层析的原理是，利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离。 在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。固定相是指被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤维素周围，不易扩散而成为固定相。在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线上的色素就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生在分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，那些分配系数大的色素分子，随层析液向上移动得快，形成的色素带集中在滤纸的上部；而分配系数小的色素分子，随层析向上移动得慢，形成的色素带集中在滤纸的下面。

溶液和溶质的极性

吸附薄层层析的原理与纸层析原理不一致，薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，而纸层析法是用纸作为载体的一种色谱法，其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂系的在同一介质中分散速度不同来分析的。薄层色谱法（TLC）薄层色谱具有选用范围广，重现性好等优点，常用于中药各种成分的鉴别。用固定波长对薄层展开的各斑点作薄层扫描图谱比目测的层析图谱更为客观准确。但由于受薄层板的质量和开放式层析系统等外界因素的影响，易引起一定的实验误差。

因为色素的溶解度不同，所以在滤纸条上的上升高度也不同。如果还是不懂可以自己做实验，把紫色（随便，不是三原色就行）颜料溶进水中，在用纸条去吸（水不能太多），过一会会发现颜色分层（应该是红色和蓝色）。

二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维上吸附的水是固定相水是固定相，配层析法，其中滤纸纤维上吸附的水是固定相，展层用的有机溶剂是流动相在层析时，有机溶剂是流动相。展层用的有机溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～的某一处，将样品点在距滤纸一端约～3cm的某一处，的某一处该点称为原点；该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数（酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（来表示。比移值（Rf）来表示。所谓R是指在纸层析中，所谓f，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（）停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（）的比值。原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图原点到层析点中心的距离XRf==Y原点到溶剂前沿的距离在一定条件下（如温度、展层剂的组成、在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的R），某种物质的层析纸质量等不变），某种物质的f值是常因此可作为定性依据。数，因此可作为定性依据。由于氨基酸无色，由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本实验利用纸层析法分离氨基酸。实验利用纸层析法分离氨基酸。

不同色素溶解度不同

因为它们在有机溶剂中的溶解度不同

纸层析法的介质是纸而层析除了纸层析外还有凝胶层析，毛细管层析等。 层析法：又称色层分析法或色谱法，是利用混合物中各组成部分物理化学性质的差异，如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等，使各组成部分在两相中的分布程度不同。一相为固定的，称为固定相，另一相流过固定相，称为流动相，从而使各组成部分以不同的速度移动而达到分离的目的。 纸层析法：又称纸色谱法，是用纸作为载体的一种色谱法，其应用的原理是相似相溶原理，是通过分裂相的在同一介质中分散速度不同来分析的。固定相一般为纸纤

谷氨酸为酸性（极性）氨基酸，丙氨酸为非极性氨基酸。于是在以极性有机溶剂（酒精）为展层剂的的流动相中，非极性的迁移快，而谷氨酸在乙醇的分配系数比丙氨酸大，迁移率慢。纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。扩展资料：纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，反之则慢；含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法。色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。参考资料来源：百度百科——纸层析法

和被测物质极性、展开剂极性有关，也和固相吸附剂的吸附能力、洗脱剂的洗脱能力有关。做此实验时，有如下注意点。1、层析液放入适量，标准是保持层析过程既不挥发完（因此层析过程最好盖住），也不没刻线。2、层析时间不应太长，否则使一种液体爬到最高处就不能测其Rf，最好实验前做一小测试判断液体爬到最高处的时间。3、层析完后尽快用铅笔画出区域（为圆形），防止颜色褪掉。等测量时，测量刻线到圆心的距离，按照公式即可。扩展资料试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。作为单体鉴别时，试样所显主色谱斑点的颜色（或荧光）与供置，应与对照（标准）样所显主色的谱斑点或供试品-对照品（1∶1）混合所显的主色谱斑点相同。作为质量指标（纯度）检查时，可取一定量的试样，经展开后，按各单体的规定，检视其所显杂质色谱斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为含量测定时，可将色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定，也可用色谱扫描仪测定。参考资料来源：百度百科-纸层析法参考资料来源：百度百科-RF值

酒精可以融合它，所以我们可以看见颜色