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蛋清蛋白怎么分离?

2023-09-06 17:49:31
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西柚不是西游

怎么快速分开蛋清和蛋白啊

1、准备两盘子和几个鸡蛋还有塑料瓶

2、将鸡蛋打入盘内,然后用塑料瓶瓶口对准蛋黄

3、把分离好的蛋黄倒入另一盘内即可

打鸡蛋时如何把蛋清和蛋白分开来?

这个简单啊,有好几种方法呢

>1 只要打蛋时不把蛋黄弄破,蛋黄表面有一层膜的,打到一个碗里只要慢慢把蛋清倒出来就可以了,蛋黄可以用筷子挡住,是倒不出来的

>2 在打蛋的时候别急着把蛋打出来,先把壳在碗边敲破,尽量把口敲的大一点点,也不要太大,一般情况下蛋清就会流出来了,蛋黄却出不来,等到蛋清差不多没了的时候再把鸡蛋壳两边分开,注意别让蛋黄掉下去,平著拿,蛋黄就会留在蛋壳里了

>3 市面上有专门分隔蛋清和蛋黄的工具,很便宜也不贵,买不到也可以用很细密的纱网捞出蛋黄也是没问题的

我个人用的是第二种,但是估计有点难度,我习惯了嘛,推荐你用第3种,适合新手,第1种也很简单的,很高兴为你解答

怎么将蛋白蛋清分开

将双手洗干净,一手拿蛋,一手五指微并掌心向上,下边放著一个碗,将蛋磕开并倒在手指上,蛋清便顺着指缝流进碗中,蛋黄仍在手指上,另作处理。

蛋白蛋清最简单的分离法

蛋白就是蛋清啊?蛋黄和蛋清最简单的分离发就是空的矿泉水瓶吸蛋黄了。

怎样使蛋清和蛋白分离啊 5分

那就做海绵蛋糕吧,海绵蛋糕不用分离蛋清蛋黄。做法是:将蛋黄加糖打发到发白膨胀,再拌入面粉,最后和色拉偿混合就可以了。

不过打发全蛋可比打发蛋白费力哦。

打鸡蛋时怎么才能让蛋清分离

如何分离蛋黄、蛋清

如果手边有专用的厨杯,分离蛋黄、蛋清自然易如反掌,可是,如果没有呢?

其实,分离蛋黄、蛋清还有一招,同样简便易学:

将鸡蛋打在碗里,取一个干净的空矿泉水瓶,挤扁瓶身、用瓶口对着蛋黄,只一松手,蛋黄就进到瓶里了。 揣

将蛋打在漏斗里,蛋清可顺着漏斗流出,而蛋黄仍会留在漏斗中。或将蛋的大头和小头各打一个洞,大头一端略大一些,朝下,让蛋清从中流出,蛋黄仍会留在蛋壳内。待蛋清流完后,打开蛋壳便可取出被分离的蛋黄。

怎样把蛋黄和蛋白分离

怎样快速分开蛋黄和蛋清: 1、准备一个小碗,逐个打到小碗里(预防散黄的蛋,散黄蛋弃不用),再小心地倒进大碗里 2、洗干净你的手,用手捞蛋黄,每次可以捞一个、两个,手指留缝,蛋白就流下去了,然后把蛋黄放到另外的一个碗里面。 3、这个方法可以很快分开二三十个鸡蛋没问题。快而安全。 4、如果你只要分一个鸡蛋,那么把鸡蛋磕两半,把蛋黄在两个鸡蛋壳之间倒腾,蛋清就顺着留到下去,留下一个光秃秃的蛋黄在鸡蛋壳里面。偶还是来一些传统的招数~!简单的,现实可以操作的屡试均可: 你把鸡蛋上打开一个小姆指大的孔,从里面往外倒鸡蛋清就可以了,就可以把蛋黄和蛋清分离了,通常蛋黄是倒不出来的!!你可以试一试,

做蛋糕为什么要把蛋黄和蛋清分开

蛋白单独搅拌会膨胀的很大。如果接触水和油就会受影响。

而蛋黄里含有大量脂肪会影响蛋白的膨胀。

海绵蛋糕则使用全蛋搅拌,主要靠乳化效果,水分、油脂含量偏少,比较干。

戚风蛋糕制作时候才用分蛋打法,蛋黄和蛋白石分开的。主要是为了应用蛋白的发泡性制作松软的口感。

面包和一部分蛋糕,没必要才用分蛋,直接全蛋加入也是可以的。

做蛋糕为什么要把蛋黄蛋清分开打?

蛋白单独搅拌会膨胀的很大。如果接触水和油就会受影响。

而蛋黄里含有大量脂肪会影响蛋白的膨胀。

海绵蛋糕则使用全蛋搅拌,主要靠乳化效果,水分、油脂含量偏少,比较干。

鸡蛋清如何分离

怎样快速分开蛋黄和蛋清:

1、准备一个小碗,逐个打到小碗里(预防散黄的蛋,散黄蛋弃不用),再小心地倒进大碗里

2、洗干净你的手,用手捞蛋黄,每次可以捞一个、两个,手指留缝,蛋白就流下去了,然后把蛋黄放到另外的一个碗里面。

3、这个方法可以很快分开二矗十个鸡蛋没问题。快而安全。

4、如果你只要分一个鸡蛋,那么把鸡蛋磕两半,把蛋黄在两个鸡蛋壳之间倒腾,蛋清就顺着留到下去,留下一个光秃秃的蛋黄在鸡蛋壳里面。

偶还是来一些传统的招数~!简单的,现实可以操作的

屡试均可:

你把鸡蛋上打开一个小姆指大的孔,从里面往外倒鸡蛋清就可以了,就可以把蛋黄和蛋清分离了,通常蛋黄是倒不出来的!!你可以试一试,

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大豆分离蛋白是什么东西?

大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。
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蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么

蛋白质是大分子,相对于大多数的无机物和有机物而言,蛋白质的分离方法:一、根据分子大小来分离蛋白质分子。蛋白质分子属于大分子,它与一些小分子,可以通过透析和超过滤的方法进行分离。蛋白质分子不能通过半透膜,而小分子可以通过半透膜的原理,进行透析。常用的半透膜是玻璃纸或称赛璐玢纸、火棉纸和其它改型纤维素材料。二、根据溶解度的差别来分离蛋白质分子。蛋白质的盐溶和盐析方法。盐溶:在蛋白质水溶液中,加入少量的中性盐,如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等,会增加蛋白质分子表面的电荷,增强蛋白质分子与水分子的作用,从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。盐析:向蛋白质溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低,而出现溶液分层的现象,从而分离蛋白质。除此之外,分离蛋白质分子的方法还有许多,例如:电泳、离子交换层析、疏水作用层析等。
2023-08-30 18:50:301

大豆分离蛋白和大豆浓缩蛋白各自的特点和作用

一、大豆分离蛋白:1、作用:大豆分离蛋白是表面活性剂,既能降低水和油的表面张力,又能降低水和空气的表面张力,易于形成稳定的乳状液。在烤制食品、冷冻食品及汤类食品的制作中,加入大豆分离蛋白作乳化剂可使制品状态稳定。2、特点:大豆分离蛋白是利用脱皮脱脂冷榨豆饼或低温脱溶豆粕为原料,经稀碱萃取、酸沉淀、离心分离、喷雾干燥等工序加工而成的食用大豆蛋白产品。大豆分离蛋白是蛋白质含量>90%的优质蛋白质。不仅蛋白质含量高,而且蛋白质的功能性和营养价值高,是各种食品的优良添加物。二、大豆浓缩蛋白:1、作用:提高产品的净蛋白质含量,改善整体蛋白质氨基酸的可消化利用性,清除可溶性糖分从而减少了多种抗营养因子的危害,在大豆加热过程中对赖氨酸利用效率的影响。2、特点:利用豆粕粉浸出液在等电点(pH4.3~4.5)状态,蛋白质溶解度最低的原理,用离心法将不溶性蛋白质、多糖与可溶性碳水化物、低分子蛋白质分开,然后中和浓缩并进行干燥脱水,即得浓缩蛋白粉。扩展资料:大豆分离蛋白使用注意事项:1、由于大豆分高蛋白的使用,减少了瘦肉用量,增加了肥肉用量,在一定程度上要影响产品的颜色,可以用血或允许使用的色素予以补充。此外,对于中、低档产品由于本来用瘦肉量就少,添加蛋白后相对又减少了瘦肉用量,最好添加少量肉味料,以增加产品的内香味。2、在灌肠制品生产中,多数情况下是使用碱性磷酸盐,在使用大豆分离蛋白时,最好使用酸性磷酸盐,而酸性磷酸盐会降低肉结合水的能力。所以在使用ASP时,最好同时加入葡萄糖酸内酯,以缓冲ASP的作用。3、大豆分离蛋白对盐和调味料有一定的覆盖作用,因此要注意调味料要最后加入,并根据情况调整盐的用量。4、蛋白制品应用于低温块肉制品中,温度应满足蛋白制品功能性热加工要求,大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白制品的功能性通常要在72℃以上(约25分钟)热加工时才能发挥出来,所以低温肉制品在加入蛋白制品时应不低于72℃,25分钟热加工。此外这个温度还可以使加入肉制品中的卡拉胶和玉米淀粉产生功能性和完全糊化,低于此温则有困难。参考资料来源:百度百科-大豆分离蛋白参考资料来源:百度百科-SPC
2023-08-30 18:50:501

蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么

蛋白质分离方法:1、盐析法:盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。2、有机溶剂沉淀法:有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二:其一、与盐溶液一样具有脱水作用;其二、有机溶剂的介电常数比水小,导致溶剂的极性减小。3、蛋白质沉淀剂:蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用,常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。4、聚乙二醇沉淀作用:聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。  蛋白质分离纯化特点:  1、处理过程为单纯物理过程,无任何相变。设备操作温度低,避免了传统工艺的种种弊端。  2、系统采用先进的膜分离技术,工艺简单,运行稳定可靠,处理效率高。  3、可以对生产废水中的有用物质进行提纯回用,实现经济、环保双赢。  4、设备投资少,运行费用低。
2023-08-30 18:51:192

大豆分离蛋白是什么?有什么营养价值?

大豆分离蛋白是利用高科技从脱皮大豆中除去大豆油和水溶性的非蛋白部分后所得。其蛋白纯度极高,是蛋白粉食品主要基料。大豆分离蛋白的主要优点是:1、与其他蛋白质相比,体内消化吸收生物价最高,大豆分离蛋白消化率93%~97%。2、能有效补充体内免疫细胞,为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体,增强机体抗病能力;3、能帮助身体制造新组织以替代坏掉的组织,向细胞输送各种营养,在体内制造酶,有助于将食物转化为能量;蛋白质是体内制造酶的必须原料,如果没有酶就不能进行生化反应,就不能新陈代谢。4、大豆蛋白必须氨基酸含量丰富,不饱和脂肪酸也较高,营养丰富。目前,全世界的食品工业都从大豆中更提取蛋白质,用大豆蛋白所做的食品,脂肪与胆固醇含量的低,不含容易导致腹泻的乳糖。5、适合各种人群,特别是处于亚健康、体质虚弱和生长发育等阶段,需要大量补充蛋白质的人群(如受伤或手术后康复的人士、以及孕妇、哺乳期妇女、发育期青少年、素食者和老人等);也适合做成保健食品添加到儿童、老年人、减肥者及各类人群的膳食中。tips:在选择上注意两点:1uff64看品牌,选择大品牌,质量好,效果佳;2看平台,资质是否齐全、是否有追溯机制,是否与消费者站在一起,售后有保障。
2023-08-30 18:53:113

大豆分离蛋白的作用和功效是什么?

1、高蛋白无论对素食主义者还是对普通人,大豆分离蛋白粉都是完美的优质蛋白补充品。2、低脂对需要低热量膳食的减肥者而言,用大豆蛋白代替膳食中部分蛋白,不仅降低了胆固醇与饱和脂肪的摄入量,同时也达到了营养摄取的均衡。3、增钙大豆蛋白能阻止尿钙损失,促进骨质健康,减少患骨质疏松的几率。4、降胆固醇研究显示,每日服用25g大豆蛋白可有效降低人体血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量,从而降低患心脏病的风险。扩展资料:生产面包时加入不超过5%的分离蛋白,可以增大面包体积,改善表皮色泽,延长货架寿命;加工面条时加入2~3%的分离蛋白,可减少水煮后的断条率、提高面条得率,而且面条色泽好,口感与强力粉面条相似。大豆分离蛋白还可应用于饮料、营养食品、发酵食品等食品行业中,对提高食品品质,增加营养,降低血清胆固醇,防止心脏和脑血管疾病具有独特的作用。将大豆分离蛋白用于代替奶粉,非奶饮料和各种形式的牛奶产品中。营养全面,不含胆固醇,是替代牛奶的食品。大豆分离蛋白代替脱脂奶粉用于冰淇淋的生产,可以改善冰淇淋乳化性质、推迟乳糖结晶、防止“起砂”的现象。参考资料来源:百度百科-大豆分离蛋白
2023-08-30 18:54:411

大豆分离蛋白是什么东西?

大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上,氨基酸种类有近20种,并含有人体必需氨基酸。其营养丰富,不含胆固醇,是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。应用在档次较高的肉制品中加入大豆分离蛋白,不但改善肉制品的质构和增加风味,而且提高了蛋白含量,强化了维生素。由于其功能性较强,用量在2~5%之间就可以起到保水、保脂、防止肉汁离析、提高品质、改善口感的作用。将分离蛋白注射液注入到火腿那样的肉块中,再将肉块进行处理,火腿地率可提高20%,在火锅料产品贡丸、撒尿牛丸、鸡脯丸、闽南香肉、甜不辣、天妇罗、开花肠、亲亲肠、台烤肠、热狗肠、肉串、川香鸡柳、骨肉相连、上校鸡块、麦乐鸡、奥尔良烤鸭胚、调理翅根、腌制琵琶腿、午餐肉、三文治等肉制品加工进。
2023-08-30 18:55:041

大豆分离蛋白是什么东西

大豆分离蛋白是全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白实际上它是一种高品质的大豆蛋白,以超低温脱溶大豆粕为原材料生产制造的一种全票价蛋白质类食用添加剂,在黄豆分离蛋白中带有比较丰富的蛋白,也有二十几类碳水化合物,拥有比较丰富的营养成分,最重要的是它并没有碳水化合物,是一种高品质的食用添加剂。黄豆分离蛋白是一种色调为浅黄色或是奶白色的粉末状样子,没有残渣,能够作为防腐剂用于对如肉类食品这种易腐烂的食材开展冷藏,擦抹在肉上边就假如个食材调加了一层保鲜袋,降低与气体的触碰,使食材能够合理的储存,服用的时间极大地拓宽。大豆分离蛋白的存在形式大豆蛋白质是由一系列氨基酸通过肽键结合而成的高分子有机聚合物,它主要由清蛋白和球蛋白组成,其中清蛋白约占5%,球蛋白约占90%。大豆分离蛋白存在形式的分类方法有两种,一种是根据沉降指数的分类法。大豆蛋白质经高速离心后,按照离心沉降指数分为2S、7S、11S、15S共4级,其中7S和11S为主要成分,也是球蛋白的主要成分,约占总蛋白的70%,它们对大豆分离蛋白的功能特性起着十分重要的主导作用。另一种是根据免疫学特性的分类法。可以分为a一浓缩球蛋白(约占15%)、13一浓缩球蛋白(约占28%)、^y一浓缩球蛋白(约占3%)、可溶性球蛋白(约占40%)4类。
2023-08-30 18:55:391

乳清蛋白和分离蛋白的区别

成分区别:乳清蛋白一般是指将乳清直接烘干,得到的乳清粉末,其中的乳清蛋白极低,一般为百分之十几,不超过百分之三十。而分离乳清蛋白是在乳清蛋白的基础上经过进一步的工艺处理得到的高纯度乳清蛋白,纯度可达90%以上。口感区别:乳清分离蛋白中几乎不含脂肪和乳糖,口味更清单一些,缺乏乳香味。而乳清浓缩蛋白,因为含有相对多的脂肪和乳糖,奶味和口味更好一些。作用区别:分离乳清蛋白中含有大量的优质蛋白,可以为需要的人群提供所需优质蛋白,而乳清蛋白含有大量支键氨基酸,可以极为有效的补充肌肉所需的养份,同时低普林,是目前最适合增加肌肉成长和病患恢复健康的营养补充品。
2023-08-30 18:56:421

大豆蛋白和大豆分离蛋白有区别吗?

大豆分离蛋白是从大豆中分离出来的干粉状食品成分。大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上,氨基酸种类有近20种,并含有人体必需氨基酸。其营养丰富,不含胆固醇,是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。大豆蛋白是一种植物性蛋白质,其氨基酸组成与牛奶蛋白质相近,除蛋氨酸略低外,其余必需氨基酸含量均较丰富,是植物性的完全蛋白质。在营养价值上,可与动物蛋白等同,在基因结构上也是最接近人体氨基酸,所以是最具营养的植物蛋白质。大豆蛋白有着动物蛋白不可比拟的优点,大豆蛋白虽然甲硫氨酸极少,不过不含胆固醇,它特有的生理活性物质———异黄酮具有降胆固醇的作用。
2023-08-30 18:57:083

大豆分离蛋白的应用领域有哪些

大豆(学名:Glycine max (Linn.) Merr.)通称黄豆。豆科大豆属一年生草本,高30-90厘米。茎粗壮,直立,密被褐色长硬毛。叶通常具3小叶;托叶具脉纹,被黄色柔毛;叶柄长2-20厘米;小叶宽卵形,纸质;总状花序短的少花,长的多花;总花梗通常有5-8朵无柄、紧挤的花;苞片披针形,被糙伏毛;小苞片披针形,被伏贴的刚毛;花萼披针形,花紫色、淡紫色或白色,基部具瓣柄,翼瓣蓖状。荚果肥大,稍弯,下垂,黄绿色,密被褐黄色长毛;种子2-5颗,椭圆形、近球形,种皮光滑,有淡绿、黄、褐和黑色等多样。花期6-7月,果期7-9月。
2023-08-30 18:57:302

按分子量大小分离蛋白质的层析技术有哪些

1、透析与超滤透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开.超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质.2、凝胶过滤法也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一.柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadexged)和琼脂糖凝胶(agarosegel).
2023-08-30 18:57:431

DNA与蛋白质的分离

等电聚焦电泳是按蛋白质等电点对蛋白质进行分离的一种电泳技术。不同蛋白质等电点不同,当蛋白质混合物在具有ph梯度(从高到低)的凝胶介质中进行电泳时,便以不同速度移动,并停留在等于其等电点的ph凝胶处,使相同等电点的蛋白质形成很窄的条带,从而使等电点不同的蛋白质得以分离。等点聚焦电泳的用途:(1)按等电点的不同分离蛋白质(2)鉴定蛋白质的等电点核酸的密度梯度离心常用介质为氯化铯。核酸样品经过氯化铯密度梯度离心后,各成分按自身密度不同分别处于离心管的不同位置。就不同大分子来讲rna密度>dna密度>蛋白质密度,因此,离心后rna位于离心管的最下方,蛋白质位于最上层,dna居于中间。就不同构象的dna而言,其分子密度超螺旋dna>环状dna>线形dna;对于同种dna分子来讲,单链dna密度大于双链dna密度;对于g-c含量不同的dna,g-c含量越高,核酸分子密度越大。以个人的看法:没什么可比性。如果一定要比较的话,相同点:(1)均是分离生物大分子的技术;(2)都是制成分离梯度(3)分离结构是相同状态的大分子处于同一条带上,外观相似是不同的条带分布在介质中。不同点:(1)原理不同(2)针对不同的生物大分子的分离技术
2023-08-30 18:58:122

蛋白质提取分离纯化鉴定的实验方案

一.血清ǐ-球蛋白的初步提取1. 血细胞与血清分离: 取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).2. 乳糜粒分离:4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,将乳糜粒吸出,留其余液体备用。 3. 血清蛋白分离:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质。 5000rpm 10°C离心1h,密度梯度离心梯度.液配置:管容量1/3为血清,2/3为1。31g/ml,NaCl+NaBr,搅拌后终密度为1。21g/ml .管上部1/6容积为血清脂蛋白,下部5/6为其它蛋白。4.取2ml下部5/6血清于小试管中,加0.9%氯化钠溶液2.0ml,边搅拌混匀边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液乙4.0ml,加入PBS洗脱液2ml,混匀后于室温中放置10min,此步骤可重复1~2次3000rpm 离心5min.沉淀物即是ǐ-球蛋白.二.凝胶层析提纯血清ǐ-球蛋白(1)装柱:海绵垫装入玻璃柱底端,作为柱底支持物,装入定量的蒸馏水(约为柱体积的1/5),以避免胶粒直接冲击柱底支持物;用玻璃棒小心排除柱底支持物.将密实洗净的层析柱保持垂直位置,关闭出口,柱内留下约2.0ml洗脱液。边搅拌凝胶,边向柱内缓慢,连续,均匀地加入凝胶,(打开柱底端的螺旋夹)不要中断,使胶粒均匀沉降,以免胶面一次性将疑胶从塑料接口加入层析柱内,打开柱底部出口,调节流速0.3ml/min。凝腔随柱内溶液慢慢流下而均匀沉降到层析柱底部倾斜和发生断层;检查装好的凝胶柱用眼观察有无凝胶分层.沟流和气泡现象.最后使凝胶床达20厘米高,床面上保持有洗脱液,操作过程中注意不能让凝胶床表面露出液面并防止层析床内出现“纹路”。用缓冲液平衡凝胶柱,流速控制在3-5s/滴.(2)上样与洗脱:小心控制凝胶柱下端活塞,使柱上的缓冲液面刚好下降至凝胶床表面,关紧下端出口,用长滴管吸取盐析法制备的球蛋白混合样品,将装有上样液的滴管头插入床面以上1-2cm处,小心缓慢地贴壁加到凝胶床表面。柱上样量控制在柱体积的2%-5%.打开下端出口,将流速控制在0.25ml/min使样品进入凝胶床内。关闭出口,小心加入少量0.0175mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3)洗柱内壁。打开下端出口,待缓冲液进入凝胶床后再加少量缓冲液。如此重复三次,以洗净内壁上的样品溶液。然后可加入适量缓冲液开始洗脱。加样开始应立即收集洗脱液。洗脱时接通蠕动泵,流速为0.5ml/min,用部分收集器收集,每管1ml。(3)洗脱液中NH4+与蛋白质的检查:取比色板两个(其中一个为黑色背底),按洗脱液的顺序每管取一滴,分别滴入比色板中,前者加双缩脲2滴,出现蓝色混浊即示有蛋白质析出,由此可估计蛋白质在洗脱各管中的分布及浓度;于另一比色板中,加人奈氏试剂l滴,以观察NH4+出现的情况。 合并球蛋白含量高的各管,混匀。除留少量作电泳鉴定外,其余用DEAE纤维素阴离子交换柱进一步纯化。三.纯化――DEAE纤维素阴离子交换层析用DEAE纤维素装柱约8-10cm高度,并用0.0175mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3)平衡,然后将脱盐后的球蛋白溶液缓慢加于DEAE纤维素阴离子交换柱上,用同一缓冲液洗脱、分管收集。用20%磺基水杨酸溶液检查蛋白质分布情况。(装柱、上样、洗脱,收集及蛋白质检查等操作步骤同凝胶层析)。四.浓缩经DEAE纤维素阴离于交换柱纯化的γ-球蛋白液往往浓度较低。为便于鉴定,常需浓缩。收集较浓的纯化的γ-球蛋白溶液2m1,按每ml加0.2~ 0.25gSephadex G一25干胶,摇动2~3min, 3000r/min 离心5min。上清液即为浓缩的γ-球蛋白溶液。五. 乙酸纤维素薄膜电泳鉴定ǐ-球蛋白(一)仪器与薄膜的准备1.醋酸纤维素薄膜的润洗与选择用竹夹子取一片薄膜,小心地平放在盛有缓冲液的平皿中,若漂浮于液面的薄膜在15—30s内迅速润湿,整条薄膜色泽深浅一致,则此膜均匀可用于电泳;若薄膜润湿缓慢,色泽深浅不一或有条纹及斑点等,则表示薄膜厚薄不均匀应弃去,以免影响电泳结果。将选好的薄膜用竹子轻压,使其完全浸泡于缓冲液中约30min后,方可用于电泳。2.电泳槽的准备根据电泳槽膜支架的宽度,剪裁尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中,各倒入等体积的电极缓冲液,在电泳槽的两个膜支架上,各放两层滤纸条,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电极缓冲液内。当滤纸条全部润湿后,用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁,因而称为滤纸桥。3.电极槽的平衡用平衡装置(或自制平衡管)连接两个电泳槽,使两个电极槽内的缓冲液彼此处于同一水平状态,一般需平衡15——20min。注意,取出平衡装置时应将活塞关紧。(二)点样1.制备点样模板取一张干净滤纸(10×10cm),在距纸边1.5cm处用铅笔划一平行线,此线为点样标志区。2.点样用竹夹子取出浸透的薄膜,夹在两层滤纸间以吸去多余的缓冲液。无光泽面向上平放在点样模板上,使其底边与模板底边对齐。点样区距阴极端1.5cm处。点样时,先用玻璃棒或血色素吸管取2—308L血清,均匀涂在加样器上,再将点样器轻轻印在点样区内,使血清完全渗透至薄膜内,形成一定宽度、粗细均匀的直线。此步是实验的关键,点样前应在滤纸上反复练习,掌握点样技术后再正式点样。(三).电泳用竹夹子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上(点样面朝下),另一端平贴在阳极端支架上,要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直,中间不能下垂。如一电泳槽中同时安放几张薄膜,则薄膜之间应相隔几毫米。盖上电泳槽盖,使薄膜平衡10min。用导线将电泳槽的正、负极与电泳仪的正、负极分别连接,注意不要接错。在室温下电泳,打开电源开关,用电泳仪上细调节旋扭调到每厘米膜宽电流强度为0.3mA(8片薄膜则为4.8mA)。通电10—15min后,将电流调节到每厘米膜宽电流强度为0.5mA(8片共8 mA),电泳时间约50—80min。电泳后调节旋扭使电流为零,关闭电泳仪切断电源。(四).染色与漂洗1.血清蛋白染色与漂洗脱色用解剖镊子取出电泳后的薄膜,放在含0.5%氨基黑10B染色液的培养皿中,浸染5min,取出后再用漂洗液浸洗脱色,每隔10min 换漂洗液一次,连续数次,直至背景蓝色脱尽。取出薄膜放在滤纸上,用吹风机的冷风将薄膜吹干。(五)透明将脱色吹干后的薄膜浸入透明甲液中2min,立即放入透明乙液中浸泡1min,取出后立即紧贴于干净玻璃板上,两者间不能有气泡,约2—3min薄膜完全透明。若透明太慢可用滴管取透明乙液少许在薄膜表面淋洗一次,垂直放置待其自然干燥,或用吹风机冷风吹干且无酸味。再将玻璃板放在流动的自来水下冲洗,当薄膜完全润湿后用单面刀片撬开薄膜的一角,用手轻轻将透明的薄膜取下,用滤纸吸干所有的水分,最后将薄膜置液体石蜡中浸泡3min,再用滤纸吸干液体石蜡,压平。此薄膜透明,区带着色清晰,可用于光吸收计扫描。长期保存不褪色。(六)结果判断与定量血清蛋白电泳经蛋白染色后,可显示出区带,未经透明处理的电泳图谱可直接用于定量测定。可采用洗脱法或光吸收扫描法,测定各蛋白组分相对百分含
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额,我是河北医大的。。。今天下午要交报告了,痛苦中~
2023-08-30 18:58:587

蛋白质分离纯化的蛋白质分离纯化技术

沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质,进而导致有效成分的溶解度发生变化。1、盐析法盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。2、有机溶剂沉淀法有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二:其一、与盐溶液一样具有脱水作用;其二、有机溶剂的介电常数比水小,导致溶剂的极性减小。3、蛋白质沉淀剂蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用,常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。4、聚乙二醇沉淀作用聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。5、选择性沉淀法根据各种蛋白质在不同物理化学因子作用下稳定性不同的特点,用适当的选择性沉淀法,即可使杂蛋白变性沉淀,而欲分离的有效成分则存在于溶液中,从而达到纯化有效成分的目的。 1、吸附柱层析吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相,以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。2、薄层层析薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相,以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层,然后按纸层析操作进行展层。3、聚酰胺薄膜层析聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时,展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程,就能导致分离物质达到分离目的。 亲和层析的原理与众所周知的抗原-抗体、激素-受体和酶-底物等特异性反应的机理相类似,每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中,特异的底物(S)才能和一定的酶(E)结合,产生复合物(E-S)一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力,并产生复合物。而亲和层析与酶-底物反应不同的是,前者进行反应时,配体(类似底物)是固相存在;后者进行反应时,底物呈液相存在。实质上亲和层析是把具有识别能力的配体L(对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等)以共价键的方式固化到含有活化基团的基质M(如活化琼脂糖等)上,制成亲和吸附剂M-L,或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此,当把固相载体装人小层析柱(几毫升到几十毫升床体积)后,让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体有亲和力的物质S就可借助静电引力、范德瓦尔力,以及结构互补效应等作用吸附到固相载体上,而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来,并形成了第一个层析峰。然后,恰当地改变起始缓冲液的pH值、或增加离子强度、或加入抑制剂等因子,即可把物质S从固相载体上解离下来,并形成了第M个层析峰。显然,通过这一操作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体具有亲和力(其大小有差异)时,采用选择性缓冲液进行洗脱,也可以将它们分离开。用过的固相载体经再生处理后,可以重复使用。上面介绍的亲和层析法亦称特异性配体亲和层析法。除此之外,还有一种亲和层析法叫通用性配体亲和层析法。这两种亲和层析法相比,前者的配体一般为复杂的生命大分子物质(如抗体、受体和酶的类似底物等),它具有较强的吸附选择性和较大的结合力。而后者的配体则一般为简单的小分子物质(如金属、染料,以及氨基酸等),它成本低廉、具有较高的吸附容量,通过改善吸附和脱附条件可提高层析的分辨率。 聚焦层析也是一种柱层析。因此,它和另外的层析一样,照例具有流动相,其流动相为多缓冲剂,固定相为多缓冲交换剂。聚焦层析原理可以从pH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐述。1、PH梯度溶液的形成在离子交换层析中,pH梯度溶液的形成是靠梯度混合仪实现的。例如,当使用阴离子交换剂进行层析时,制备pH由高到低呈线性变化的梯度溶液的方法是,在梯度仪的混合室中装高pH溶液,而在另一室装低pH极限溶液,然后打开层析柱的下端出口,让洗脱液连续不断地流过柱体。这时从柱的上部到下部溶液的pH值是由高到低变化的。而在聚焦层析中,当洗脱液流进多缓冲交换剂时,由于交换剂带具有缓冲能力的电荷基团,故pH梯度溶液可以自动形成。例如,当柱中装阴离子交换剂PBE94(作固定相)时,先用起始缓冲液平衡到pH9,再用含pH6的多缓冲剂物质(作流动相)的淋洗液通过柱体,这时多缓冲剂中酸性最强的组分与碱性阴离子交换对结合发生中和作用。随着淋洗液的不断加入,柱内每点的pH值从高到低逐渐下降。照此处理J段时间,从层析柱顶部到底部就形成了pH6~9的梯度。聚焦层析柱中的pH梯度溶液是在淋洗过程中自动形成的,但是随着淋洗的进行,pH梯度会逐渐向下迁移,从底部流出液的pH却由9逐渐降至6,并最后恒定于此值,这时层析柱的pH梯度也就消失了。2、蛋白质的行为蛋白质所带电荷取决于它的等电点(PI)和层析柱中的pH值。当柱中的pH低于蛋白质的PI时,蛋白质带正电荷,且不与阴离于交换剂结合。而随着洗脱剂向前移动,固定相中的pH值是随着淋洗时间延长而变化的。当蛋白质移动至环境pH高于其PI时,蛋白质由带正电行变为带负电荷,并与阴离子交换剂结合。由于洗脱剂的通过,蛋白质周围的环境pH 再次低于PI时,它又带正电荷,并从交换剂解吸下来。随着洗脱液向柱底的迁移,上述过程将反复进行,于是各种蛋白质就在各自的等电点被洗下来,从而达到了分离的目的。不同蛋白质具有不同的等电点,它们在被离子交换剂结合以前,移动之距离是不同的,洗脱出来的先后次序是按等电点排列的。3、聚焦效应蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成是聚焦效应的先决条件。如果一种蛋白质是加到已形成pH梯度的层析柱上时,由于洗脱液的连续流动,它将迅速地迁移到与它等电点相同的pH处。从此位置开始,其蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附,直到在等电点pH时被洗出。若在此蛋白质样品被洗出前,再加入第二份同种蛋白质样品时,后者将在洗脱液的作用下以同样的速度向前移动,而不被固定相吸附,直到其迁移至近似本身等电点的环境处(即第一个作品的缓慢迁移处)。然后两份样品以同样的速度迁移,最后同时从柱底洗出。事实上,在聚焦层析过程中,一种样品分次加入时,只要先加入者尚未洗出,并且有一定的时间进行聚焦,剩余样品还可再加到柱上,其聚焦过程都能顺利完成,得到的结果也是满意的。 多种组分的混合样品进入色谱仪的气化室气化后呈气态。当载气流入时,气化的物质被带人色谱柱内,在固定相和流动相中不断地进行分配.在理想状态下,溶质于气-液两相间的分配可用分配系数Kg描述。当分配系数小时,溶质在柱中就停留时间短,也即滞留因子(Rf)大,所以它将首先从色谱柱流出而进入鉴定器,经放大系统放大后,输出讯号便在记录仪中自动记录下来,这时呈现的图形为色谱图,亦称色谱峰;当分配系数大时,溶质在柱中停留时间就长,其色谱图在记录仪上后出现。由于不同物质有不同的分配系数,所以将一混合样品通过气-液色谱柱时,其所含组分就可得到分离。气相色谱柱效率高、分辨率强的重要原因是,理论塔板数(N)大。毛细管气相色谱的N可达105~6。增加理论塔板数和降低样品组分的不同分子在展层中扩展程度(速率理论),就可明显地提高柱效。以下将讨论塔板理论和速率理论对柱效的影响:1、塔板理论塔板理论是将色谱假设为一个蒸馏塔,塔内存在许多块塔板,样品各组分在每块塔板的液相和气相间进行分配,在柱内塔板间高度H(即理论塔板高度)一定时,在有效范围内,柱子越长,N也就越大,样品各组分分配次数也就越多,分辨率自然提高;若柱长一定时,塔板理论高度H越小,就越能增加样品各组分的分配次数,进而提高其分辨率。因此 N=L/H 在线性分配和忽略塔板间纵向扩散的条件下,根据样品组分的保留时间tr、峰宽W或半峰高宽度2ΔXi,Martin导出了计算N的公式,样品组分峰宽度值越小,理论塔板数越高。实际上,进行色谱分析时,峰宽度值的大小是衡量分辨率高低的一个尺度。2、速率理论根据塔板理论,在H(塔板理论高度)一定时,增加柱长可以提高柱效。但是,柱子过长,将会延长分析时间,降低检测的灵敏度。所以实践中应设法降低H,提高柱效。速率理论主要是分析同一样品的不同分子,在色谱柱中迁移速度差异所引起色谱峰的扩张程度。而涡流扩散、纵向分子扩散和质量传递(包括流动相传质和固定相传质)等因子与速率理论值(H)的密切关系可用下面的公式表示:H=A+B/U+C涡流扩散(A)是由于样品组分随着流动相的移动通过固定相颗粒不均匀的色谱柱时,引起同一组分的不同分子在流动相中形成不规则的"涡流",致使色谱峰变宽、柱效降低。如固定相颗粒均匀、直径小时,则可降低"涡流"现象发生。纵向扩散(B/U)亦称分子扩散项。纵向扩散与样品分子在色谱柱中的流畅程度(有无阻碍)、流动相的速度(U)等因子有关。因此,降低溶质在流动相中扩散系数和缩短溶质在流动相中停留时间,均可降低纵向扩散。传质阻力(C):溶质分子在气相与气液界面进行交换所受的阻力,以及在进入固定相液膜传递的差异性统称传质阻力。传质阻力分别与固定相颗粒直径的平方和固定相液膜厚度成正比关系。 高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好,且须在色谱仪中进行。高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。1、进样系统一般采用隔膜注射进样器或高压进样器完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。2、输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4×107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、pH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。3、分离系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)。固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基团基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基团(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。4、检测系统高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。(1)紫外检测器该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点:使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);灵敏度高(检测下限为10-10?g/ml);线性范围宽;对温度和流速变化不敏感;可检测梯度溶液洗脱的样品。(2)示差折光检测器凡具有与流动相折光率不同的样品组分,均可使用示差折光检测器检测。目前,糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单,但灵敏度低(检测下限为10-7?g/ml),流动相的变化会引起折光率的变化,因此,它既不适用于痕量分析,也不适用于梯度洗脱样品的检测。(3)荧光检测器凡具有荧光的物质,在一定条件下,其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此,这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物(如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等)的测定,其灵敏度很高(检测下限为10-12~10-14?g/ml),痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。(5)数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作,使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。
2023-08-30 18:59:221

当大分子和小分子蛋白质混在一起时采用什么方法可以进行分离啊

将生物大分子与无机盐及有机小分子分离,用什么方法根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等。离心也是经常和其它方法联合使用的一种分离蛋白质的方法。当蛋白质和杂质的溶解度不同时可以利用离心的方法将它们分开。通常实验室中使用透析,凝胶过滤等方法,主要是因为操作简便,价格低廉。如果实验对蛋白质纯度要求极高,所采用的方法也会不同,相应成本也会增加。
2023-08-30 18:59:391

大豆分离蛋白的吸收率是多少啊?

简单的说,如果优质蛋白质的满分是100分的话,那么大豆分离蛋白得了满分,牛肉得了92分。实际上,大豆分离蛋白的蛋白质含量高达90%,且富含8种人体必需氨基酸。要知道,大豆蛋白是植物蛋白中唯一的优质蛋白。因此说,大豆蛋白是植物蛋白里“优等生”并不为过。
2023-08-30 18:59:524

乳清蛋白和分离乳清蛋白哪个好

乳清是干酪生产中的一种天然副产品,由于酪蛋白不易被人体吸收利用,酪蛋白从牛乳中被分离出来,剩余的部分被称为乳清,乳清蛋白就存在于乳清之中。乳清蛋白质的营养价值比酪蛋白、大豆浓缩蛋白、鸡蛋蛋白等蛋白质更优越。乳清中主要的蛋白质成分有b -乳球蛋白(48%)、a -乳白蛋白(19%)、蛋白酶-胨(20%)、血清白蛋白(5%)和免疫球蛋白(8%),各具独特的生物活性;少量存在的其它组分,如乳铁蛋白和乳过氧化物酶,也能从乳清分离出来,同样是高价值的食品配料。 乳清蛋白是最优质最理想的蛋白补充剂,其最佳的氨基酸比例使其生物价最高,易于消化吸收,利用率是大豆蛋白的1.7倍。乳清及乳清蛋白具有的生物活性或保健特性受到了全球广泛的关注,某些乳清分离蛋白的应用领域,更延伸到可作为天然抗菌剂、天然防腐剂和免疫增强剂。乳清蛋白的生物利用价值比许多其他高质量的膳食蛋白如蛋、牛肉或大豆都要高。乳清富含半胱氨酸和蛋氨酸,与缺乏含硫氨基酸(蛋氨酸)的大豆蛋白组合,刚好可以互补,增加蛋白质的生物学价值。这些含硫氨基酸能维持人体内抗氧化剂的水平,并在细胞分裂时尽量稳定DNA。实验证明,乳清蛋白也能刺激人体免疫系统,阻止化学诱发性癌症的发生,同时增加骨骼强度和降低LDL胆固醇水平。所以,乳清蛋白愈来愈多地被应用于保健食品,具有提高蛋白质的生物利用价值,促进人体免疫系统,抑制致病菌生长,促进铁质的吸收,预防结肠癌和保护双歧杆菌的保健作用。
2023-08-30 19:00:151

大豆分离蛋白是什么东西

大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的全价蛋白质食品添加剂。大豆分离蛋白是在低温条件下将豆粕除去油和水溶性非蛋白成分放入碱性溶液中浸提,然后沉淀、洗涤、干燥得到蛋白含量大于90%的蛋白粉,其结构和性质基本代替纯的大豆蛋白。大豆分离蛋白氨基酸种类有近20种,其营养丰富,不含胆固醇。大豆分离蛋白是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一,是表面活性剂,它既能降低水和油的表面张力,又能降低水和空气的表面张力。易于形成稳定的乳状液。在烤制食品、冷冻食品及汤类食品的制作中,加入大豆分离蛋白作乳化剂可使制品状态稳定。大豆分离蛋白的发明背景:美国是世界上最早进行大豆分离蛋白开发研究和实现工业化生产的国家,20世纪40年代开始研究,50年代就研究出大豆分离蛋白,60年代开始生产,直到70年代其生产技术逐渐趋于完善和成熟,国际分离蛋白市场基本由美国垄断和控制。1998年世界大豆分离蛋白的产量约70万t,美国就生产约35万t,占50%。我国70年代开始研究大豆分离蛋白生产及应用技术,80年代初开始生产大豆分离蛋白。我国大豆分离蛋白的生产与发展和食品_丁业,尤其是肉食品等的迅速发展、需求量的大增密切相关。以上内容参考百度百科-大豆分离蛋白
2023-08-30 19:00:531

用SDS-PAGE分离蛋白质时,相对分子质量大的蛋白质迁移速度较快。

用SDS-PAGE分离蛋白质时,相对分子质量大的蛋白质迁移速度较快。 A.正确B.错误正确答案:B
2023-08-30 19:01:131

影响蛋白质电泳分离效果的主要因素有哪些

待分离生物大分子的性质,待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快.缓冲液的性质,缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度,从而对其带电性质产生影响。溶液pH值距离其等电点愈远,其所带净电荷量就越大,电泳的速度也就越大。电场强度,电场强度越大,电泳速度越快。但增大电场强度会引起通过介质的电流强度增大,而造成电泳过程产生的热量增大。电渗,在电场的作用下向负极迁移,带动电极液产生向负极的电渗流。如果电渗方向与待分离分子电泳方向相同,则加快电泳速度,如果相反,则降低电泳速度。
2023-08-30 19:01:432

大豆分离蛋白是什么东西

是食品添加剂。大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白粉是一种高蛋白、低脂、补钙、降胆固醇的产品,是大豆分离蛋白典型的产品代表。
2023-08-30 19:02:061

请简述可用于蛋白质分离纯化的四种方法及其原理?

楼主,方法很多,我就挑几个比较有代表的吧 1.亲和层析:利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合作用而进行分离的一种层析技术. 原理:将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中.那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液,改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来. 2.凝胶过滤:利用一定大小孔隙的具有网状结构的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等),根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度不同,因而通过层析柱的快慢不同而分离的一种层析法. 原理:凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化.层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离.也叫做分子排阻层析(molecular-exclusion chromatography).一种利用带孔凝胶珠作基质,按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术.一般是大分子先流出来,小分子后流出来. 3.聚丙烯酰胺凝胶电泳:用于分离蛋白质和寡糖核苷酸. 作用原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构,具有分子筛效应.它有两种形式:(1)非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开. 4.盐析:增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低的现象.是蛋白质分离纯化中经常使用的方法,最常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等.
2023-08-30 19:02:171

为什么蛋白质处于等电点时溶解度最低

在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
2023-08-30 19:02:312

如何选购蛋白质分离器

蛋白质分离器,也叫蛋白机,是利用水中的气泡表面可以吸附混杂在水中的各种颗粒状的污垢以及可溶性的有机物的原理,采用充氧设备或旋涡泵产生大量的气泡,有效地清除水中的有机物颗粒、蛋白质、有害金属离子等,是海水缸的必备器材之一。下面介绍几种目前市面上比较主流的蛋白质分离器种类:【Air stone (气泡石)式】这是市面上最低档但也是最便宜的一种蛋白机,只能推动很小的水量,适合很小的鱼缸并且饲养很少的生物。【Venturi 式】是一般较经济型的蛋白机,比较适合中小型海水缸。选购时要注意查看是否容易拆洗,是否有大型的污水储存槽等。【Needle Wheel(针叶式)】 这是目前最流行的一种高档蛋白机类型,利用将空气混入进水,再由马达的针叶将空气搅散的设计原理,所得到的气泡非常细且多,而且马达所需的瓦数和进水量也 不大,所处理的水滞流时间较长,可以增加蛋白质和空气凝结的时间,功效非常好。【beckett 气阀】这种设计的蛋白机需要用很强大的水压来推动,推出来的气泡非常细,但是水流量很大,耗电也较大,一般比较适合2000 公升以上的大型珊瑚缸或鱼缸。此设计要注意选购正确的马达,要购买压力大的外接式马达,尽量选购高度更高的设计可以大大的延长水滞流在蛋白机内的时间,大幅提升 效率。另外也要注意气阀不被阻塞,蛋白机管壁也要常清洗。
2023-08-30 19:03:122

蛋白分离纯化所使用的填料有哪些

从方法上来讲,主要是亲和层析、离子交换、分子排阻(分子筛)、疏水层析和反相层析这5种;但具体到每个实验,就会根据您的实验目的(蛋白的纯度、活性、量产以及用途的不同),以及蛋白本身的性质不同(真核或原核、水溶性、稳定性、有无修饰、理化性质等),来设计合理的纯化方法,进而选择不同类型、分辨率和性价比的填料。一般科研实验室,有限考虑亲和层析填料,若有更高的纯度要求,再考虑不同分辨率的离子交换或分子筛填料。蛋白纯化,GE的填料是最丰富,也是最稳定的,你可以参考最新的GE 凝胶选择指南。如,我在文库钟搜的2014版的:http://wenku.baidu.com/link?url=XIgERGPVdEqYduRPs-_IG_oelM9Z1rfOL251YOGRpVhTHhLtWOVsPKk3T4lmZ-w9kUGfOxfGMmUwgpZhlg3sDORyoAEVA7WGpw2RRmC0ify
2023-08-30 19:03:291

蛋白质的分离纯化

蛋白质的分离纯化方法如下:一、根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析法:中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析。2、等电点沉淀法:蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的ph达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用。3、低温有机溶剂沉淀法:用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分辨力比盐析高,但蛋白质较易变性,应在低温下进行。二、根据蛋白质分子大小的差别的分离方法1、透析与超滤:透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。2、凝胶过滤法:也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶和琼脂糖凝胶。三、根据蛋白质带电性质进行分离1、电泳法:各种蛋白质在同一ph条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳。这是利用一种两性电解质作为载体,电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的ph梯度,当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自等电点的ph位置就停止,此法可用于分析和制备各种蛋白质。2、离子交换层析法:离子交换剂有阳离子交换剂(如:羧甲基纤维素;cm-纤维素)和阴离子交换剂(二乙氨基乙基纤维素),当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时,带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上,随后用改变ph或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。
2023-08-30 19:03:561

蛋白质分离提纯方法

蛋白质分离提纯的一般原则1. 前处理 把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来,保持原来的天然状态,并不丢失生物活性。常用的方法:匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等。 超声波破碎法:当声波达到一定频率时,使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术。超声波引起的快速振动使液体局部产生低气压,这个低气压使液体转化为气体,即形成很多小气泡。由于局部压力的转换,压力重新升高,气泡崩溃。崩溃的气泡产生一个振动波并传送到液体中,形成剪切力使细胞破碎。2. 粗分级 分离可用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大,3. 细分级 样品的进一步纯化。样品经粗分离以后,一般体积较小,杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化,一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。 结晶是最后的一步分离纯化的方法:1.分子大小;2.溶解度;3.电荷;4.吸附性质;5.对配体分子的生物亲和力等。(一)根据分子大小不同的纯化方法1. 透析 利用蛋白质分子不能通过半透膜,使蛋白质和其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。2. 密度梯度离心。 蛋白质颗粒的沉降系数不仅决定于它的大小,而且也取决于它的密度。3. 凝胶过滤 利用蛋白质分子大小,因为凝胶过滤所用的介质是凝胶珠,其内部是多孔的网状结构。当不同的分子大小的蛋白质分子流过凝胶层析柱时,比凝胶珠孔径大的分子进入珠内的网状结构,而被排阻在凝胶珠之外随溶剂在凝胶珠之间的空隙向下移动并最先流出柱外,比网孔小的分子能不同程度底自由出入凝胶珠的内外,由于不同大小的分子所经路径不同而得到分离。大分子先被洗脱下来。小分子后被洗脱(二)利用溶解度差别的纯化方法1.等电点沉淀和PH的控制 蛋白质处于等电点时,其净电荷为零,由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而聚集沉淀。因此在其他条件相同时,它的溶解度达到最底点,利用等电点分离蛋白质是一种常用的方法。2. 蛋白质的盐溶和盐析 中性盐可以增加蛋白质的溶解度,这种现象称为盐溶。盐溶作用是由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后,带电层使蛋白质分子彼此排斥,而蛋白质分子与水相互作用加强了,因而溶解度增加 当溶液的离子强度增加到一定数值时,蛋白质的溶解度开始下降。当离子强度足够高时,很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来,这种现象称为盐析。 盐析作用的主要原因是大量中性盐的加入使水的活性降低,原来溶液的大部分甚至全部的自由基水转变成盐离子的水化水
2023-08-30 19:04:273

大豆分离蛋白是什么东西?

大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白是利用高科技从脱皮大豆中除去大豆油和水溶性的非蛋白部分后所得,大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上,氨基酸种类有近20种,并含有人体必需氨基酸。其营养丰富,不含胆固醇,是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。大豆分离蛋白的主要优点1、 与其他蛋白质相比,体内消化吸收生物价最高,大豆分离蛋白消化率93%~97%。2、 能有效补充体内免疫细胞,为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体,增强机体抗病能力。3、 能帮助身体制造新组织以替代坏掉的组织,向细胞输送各种营养,在体内制造酶,有助于将食物转化为能量;蛋白质是体内制造酶的必须原料,如果没有酶就不能进行生化反应,就不能新陈代谢。4、 大豆蛋白必须氨基酸含量丰富,不饱和脂肪酸也较高,营养丰富。目前,全世界的食品工业都从大豆中更提取蛋白质,用大豆蛋白所做的食品,脂肪与胆固醇含量的低,不含容易导致腹泻的乳糖。
2023-08-30 19:05:101

蛋白质的分离方法?

盐析、等电点沉淀、双水相萃取、色谱分离等
2023-08-30 19:05:512

大豆分离蛋白和大豆浓缩蛋白各自的特点和作用

  大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上,氨基酸种类有近20种,并含有人体必需氨基酸。其营养丰富,不含胆固醇,是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一。  大豆分离蛋白的功能特性:  乳化性:大豆分离蛋白是表面活性剂,它既能降低水和油的表面张力,又能降低水和空气的表面张力。易于形成稳定的乳状液。在烤制食品、冷冻食品及汤类食品的制作中,加入大豆分离蛋白作乳化剂可使制品状态稳定。  水合性:大豆分离蛋白沿着它的肽链骨架,含有很多极性基,所以具有吸水性、保水性和膨胀性。分离蛋白的吸水力比浓缩蛋白要强许多,而且几乎不受温度的影响。分离蛋白在加工时还有保持水份的能力,最高水分保持能力为14g水/g蛋白质。  3吸油性:分离蛋白加入肉制品中,能形成乳状液和凝胶基质,防止脂肪向表面移动,因而起着促进脂肪吸收或脂肪结合的作用。可以减少肉制品加工过程中脂肪和汁液的损失,有助于维持外形的稳定。分离蛋白的吸油率为154%。  凝胶性:它使分离蛋白具有较高的粘度、可塑性和弹性,既可做水的载体,也可做风味剂、糖及其它配合物的载体,这对食品加工极为有利。  发泡性:大豆蛋白中,分离蛋白的发泡性能最好。利用大豆蛋白质的发泡性,可以赋予食品以疏松的结构和良好的口感。  结膜性:当肉切碎后,用分离蛋白与鸡蛋蛋白的混合物涂在其纤维表面,形成薄膜,易于干燥,可以防止气味散失,有利于再水化过程,并对再水化产品提供合理的结构。  大豆分离蛋白的理化指标:  蛋白(干基)%≥90 脂肪%≤1  水分%≤6 灰分%≤5.5  粗纤维≤1 氮溶解指数(NSI)≥85~95  砷mg/kg≤0.5 铅mg/kg≤1.0  大豆分离蛋白的应用:  1肉类制品:在档次较高的肉制品中加入大豆分离蛋白,不但改善肉制品的质构和增加风味,而且提高了蛋白含量,强化了维生素。由于其功能性较强,用量在2~5%之间就可以起到保水、保脂、防止肉汁离析、提高品质、改善口感的作用。将分离蛋白注射液注入到火腿那样的肉块中,再将肉块进行处理,火腿地率可提高20%。分离蛋白用于炸鱼糕、鱼卷或鱼肉香肠中,可取带20~40%的鱼肉。  2乳制品:将大豆分离蛋白用于代替奶粉,非奶饮料和各种形式的牛奶产品中。营养全面,不含胆固醇,是替代牛奶的食品。大豆分离蛋白代替脱脂奶粉用于冰淇淋的生产,可以改善冰淇淋乳化性质、推迟乳糖结晶、防止“起砂”的现象。  3面制品:生产面包时加入不超过5%的分离蛋白,可以增大面包体积、改善表皮色泽、延长货架寿命;加工面条时加入2~3%的分离蛋白,可减少水煮后的断条率、提高面条得率,而且面条色泽好,口感与强力粉面条相似。  大豆分离蛋白还可应用于饮料、营养食品、发酵食品等食品行业中。  大豆浓缩蛋白  开放分类: 油料预处理、油料前期处理、油料加工  大豆浓缩蛋白是用高质量的豆粕除去水溶性或醇溶性非蛋白部分后,所制得的含有70%(干基)左右蛋白质(N×6.25)的大豆蛋白产品。  1、 食品级:  具有高凝胶性、乳化性或高分散性,大大提高了综合利用率,降低生产成本,广泛应用在肉加工食品、烘焙食品、冰激淋、糖果和饮料的生产中。  质量标准:  1) 色泽 :乳白色、浅黄色  2) 气味 :浓缩蛋白的固有气味,无其它异味。  3) 蛋白质含量(N*6.25): ≥68-72%  4) 水分 :7-9%  5) 脂肪 :<0.8%  6) 灰分 :<6.0%  7) 规定的纤维总量 :<4%  8) NSI : 5-10  9) 粒度 :100目(98%通过)  10) 菌落总数 :≤30000cfu/g  11) 大肠菌群 :≤30MPN/100g  12)致病菌(沙门氏菌,志贺氏菌,金黄色葡萄球菌)不得检出。  13)持油持水比 :1:3:3  2、 饲料级:  各种氨基酸含量及其丰富,动物食后消化吸收率高,抗营养因子极低,无其它异味,口感好,特别适用于乳猪、水产、犊牛、宠物的饲料添加。建议添加量:每吨饲料加50-200公斤。  质量标准:  1) 蛋白质含量(N*6.25): ≥65%(干基)  2) 水分 :7-9%  3) 脂肪 :<0.8%  4) 粒度 :50目(98%通过)
2023-08-30 19:06:103

蛋白质的分离方法有哪些?它们各依据蛋白质的什么性质或特点?

我知道的有层析,是根据分子量大小,还有凝胶电泳应该是根据分子量大小及所带电荷大小吧。希望对你有用。
2023-08-30 19:06:382

求蛋白分离纯化步骤

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤:(一)材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:1.机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。2.渗透破碎法这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。3.反复冻融法生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。4.超声波法使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。5.酶法如用溶菌酶破坏微生物细胞等。(二)蛋白质的抽提通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。(三)蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法:1.等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。2.盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。3.有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。(四)样品的进一步分离纯化用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
2023-08-30 19:06:551

我想问一下大豆蛋白和大豆分离蛋白有区别吗

一、特性不同1、大豆蛋白:大豆蛋白是一种植物性蛋白质,其氨基酸组成与牛奶蛋白质相近,除蛋氨酸略低外,其余必需氨基酸含量均较丰富,是植物性的完全蛋白质。2、大豆分离蛋白:大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。具有乳化性、水合性、吸油性、凝胶性、发泡性及结膜性。二、蛋白质含量不同1、大豆蛋白:蛋白质含量约为38%以上。2、大豆分离蛋白:大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上。三、存在方式不同1、大豆蛋白:大豆蛋白产品有粉状大豆蛋白产品和组织化大豆蛋白产品两种。2、大豆分离蛋白:大豆蛋白质是由一系列氨基酸通过肽键结合而成的高分子有机聚合物,它主要由清蛋白和球蛋白组成,其中清蛋白约占5%,球蛋白约占90%。更多关于大豆蛋白和大豆分离蛋白有区别吗,进入:https://www.abcgonglue.com/ask/2d3add1615823694.html?zd查看更多内容
2023-08-30 19:07:101

如何对将蛋白质和氯化钠进行分离

(一)根据配体特异性的分离方法-亲和色谱法亲和层析法(aflinity chromatography)是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand)的分子能特异而非共价地结合。其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质,因此蛋白质的分离(Separation),提纯(Purification)和鉴定(Characterization)是生物化学中的重要的一部分,至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,因此往往采取几种方法联合使用。(二)根据蛋白质分子大小的差别的分离方法1、透析与超滤透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。2、凝胶过滤法也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadex ged)和琼脂糖凝胶(agarose gel)。(三)根据蛋白质带电性质进行分离蛋白质在不同pH环境中带电性质和电荷数量不同,可将其分开。
2023-08-30 19:07:331

蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么

1.根据分子大小不同进行分离纯化蛋白质是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子大小不同,因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离.根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等.透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法.透析是将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液进行分离.超滤是利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜,而蛋白质被截留在半透膜上的过程.这两种方法都可以将蛋白质大分子与以无机盐为主的小分子分开.它们经常和盐析、盐溶方法联合使用,在进行盐析或盐溶后可以利用这两种方法除去引入的无机盐.由于超滤过程中,滤膜表面容易被吸附的蛋白质堵塞,以致超滤速度减慢,截流物质的分子量也越来越小.所以在使用超滤方法时要选择合适的滤膜,也可以选择切向流过滤得到更理想的效果离心也是经常和其它方法联合使用的一种分离蛋白质的方法.当蛋白质和杂质的溶解度不同时可以利用离心的方法将它们分开.例如,在从大米渣中提取蛋白质的实验中,加入纤维素酶和α-淀粉酶进行预处理后,再用离心的方法将有用物质与分解掉的杂质进行初步分离[3].使蛋白质在具有密度梯度的介质中离心的方法称为密度梯度(区带)离心.常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度.可以根据所需密度和渗透压的范围选择合适的密度梯度.密度梯度离心曾用于纯化苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白,得到的产品纯度高但产量偏低.蒋辰等[6]通过比较不同密度梯度介质的分离效果,利用溴化钠密度梯度得到了高纯度的苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白.凝胶过滤也称凝胶渗透层析,是根据蛋白质分子大小不同分离蛋白质最有效的方法之一.凝胶过滤的原理是当不同蛋白质流经凝胶层析柱时,比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内网状结构,而被排阻在凝胶珠之外,随着溶剂在凝胶珠之间的空隙向下运动并最先流出柱外;反之,比凝胶珠孔径小的分子后流出柱外.目前常用的凝胶有交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶等.在甘露糖蛋白提纯的过程中使用凝胶过滤方法可以得到很好的效果,纯度鉴定证明产品为分子量约为32 kDa、成分是多糖∶蛋白质(88∶12)、多糖为甘露糖的单一均匀糖蛋白[1].凝胶过滤在抗凝血蛋白的提取过程中也被用来除去大多数杂蛋白及小分子的杂质[7].2.根据溶解度不同进行分离纯化影响蛋白质溶解度的外部条件有很多,比如溶液的pH值、离子强度、介电常数和温度等.但在同一条件下,不同的蛋白质因其分子结构的不同而有不同的溶解度,根据蛋白质分子结构的特点,适当地改变外部条件,就可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度,达到分离纯化蛋白质的目的.常用的方法有等电点沉淀和pH值调节、蛋白质的盐溶和盐析、有机溶剂法、双水相萃取法、反胶团萃取法等.等电点沉淀和pH值调节是最常用的方法.每种蛋白质都有自己的等电点,而且在等电点时溶解度最低;相反,有些蛋白质在一定pH值时很容易溶解.因而可以通过调节溶液的pH值来分离纯化蛋白质.王洪新等[8]研究茶叶蛋白质提取过程发现,pH值为时茶叶蛋白提取效果最好,提取率达到36·8%,初步纯化得率为91·0%.李殿宝[9]在从葵花脱脂粕中提取蛋白质时将蛋白溶液的pH值调到3~4,使目标蛋白于等电点沉淀出来.等电点沉淀法还应用于葡萄籽中蛋白质的提取.李凤英等[10]测得葡萄籽蛋白质的等电点为3·8.他们利用碱溶法提取葡萄籽蛋白质,得到了最佳的提取工艺为:以1×10-5mol·L-1的NaOH溶液,按1∶5的料液比,在40℃搅拌40 min,葡萄籽蛋白质提取率达73·78%.另外还可以利用碱法提取大米蛋白,其持水性、吸油性和起泡性等均优于酶法提取[11].利用酸法提取得到的鲢鱼鱼肉蛋白质无腥味、色泽洁白,蛋白质产率高达90%[12].蛋白质的盐溶和盐析是中性盐显著影响球状蛋白质溶解度的现象,其中,增加蛋白质溶解度的现象称盐溶,反之为盐析.应当指出,同样浓度的二价离子中性盐,如MgCl2、(NH4)2SO4对蛋白质溶解度影响的效果,要比一价离子中性盐如NaCl、NH4Cl大得多.在葡萄籽蛋白提取工艺中除了可以利用碱溶法还可以利用盐溶法来提取蛋白质,其最佳提取工艺是:以10%NaCl溶液,按1∶25的料液比,在30℃搅拌提取30min,蛋白质提取率为57·25%[10].盐析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸钠絮凝法、硫酸铵盐析法,其中硫酸铵盐析法广泛应用于生产.由于硫酸铵在水中呈酸性,为防止其对蛋白质的破坏,应用氨水调pH值至中性.为防止不同分子之间产生共沉淀现象,蛋白质样品的含量一般控制在0·2% ~2·0%.利用盐溶和盐析对蛋白质进行提纯后,通常要使用透析或者凝胶过滤的方法除去中性盐[13].有机溶剂提取法的原理是:与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白质在水中的溶解度显著降低;而且在一定温度、pH值和离子强度下,引起蛋白质沉淀的有机溶剂的浓度不同,因此,控制有机溶剂的浓度可以分离纯化蛋白质.例如,在冰浴中磁力搅拌下,在4℃预冷的培养液中缓慢加入乙醇(-25℃),可以使冰核蛋白析出,从而纯化冰核蛋白[14].由于在室温下,有机溶剂不仅能引起蛋白质的沉淀,而且伴随着变性.因此,通常要将有机溶剂冷却,然后在不断搅拌下加入有机溶剂防止局部浓度过高,蛋白质变性问题就可以很大程度上得到解决.对于一些和脂质结合比较牢固或分子中极性侧链较多、不溶于水的蛋白质,可以用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂提取,它们有一定的亲水性和较强的亲脂性,是理想的提取液.冷乙醇分离法提取免疫球蛋白最早由Cohn于1949年提出,用于制备丙种球蛋白.冷乙醇法也是目前WHO规程和中国生物制品规程推荐的方法,不仅分辨率高、提纯效果好、可同时分离多种血浆成分,而且有抑菌、清除和灭病毒的作用[15].萃取是分离和提纯有机化合物常用的一种方法,而双水相萃取和反胶团萃取可以用来分离蛋白质.双水相萃取技术(Aqueous two phase extraction,ATPE)是指亲水性聚合物水溶液在一定条件下形成双水相,由于被分离物在两相中分配的不同,便可实现分离,被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取.此方法可以在室温环境下进行,双水相中的聚合物还可以提高蛋白质的稳定性,收率较高.对于细胞内的蛋白质,需要先对细胞进行有效破碎.目的蛋白常分布在上相并得到浓缩,细胞碎片等固体物分布在下相中.采用双水相系统浓缩目的蛋白,受聚合物分子量及浓度、溶液pH值、离子强度、盐类型及浓度的影响[16].反胶团萃取法是利用反胶团将蛋白质包裹其中而达到提取蛋白质的目的.反胶团是当表面活性剂在非极性有机溶剂溶解时自发聚集而形成的一种纳米尺寸的聚集体.这种方法的优点是萃取过程中蛋白质因位于反胶团的内部而受到反胶团的保护.程世贤等[17]就利用反胶团萃取法提取了大豆中的蛋白质.3.根据电荷不同进行分离纯化根据蛋白质的电荷即酸碱性质不同分离蛋白质的方法有电泳和离子交换层析两类.在外电场的作用下,带电颗粒(如不处于等电点状态的蛋白质分子)将向着与其电性相反的电极移动,这种现象称为电泳.聚丙烯酰胺电泳是一种以聚丙烯酰胺为介质的区带电泳,常用于分离蛋白质.它的优点是设备简单、操作方便、样品用量少.等电聚焦是一种高分辨率的蛋白质分离技术,也可以用于蛋白质的等电点测定.利用等电聚焦技术分离蛋白质混合物是在具有pH梯度的介质中进行的.在外电场作用下各种蛋白质将移向并聚焦在等于其等电点的pH值梯度处形成一个窄条带.孙臣忠等[18]研究了聚丙烯酰胺电泳、等电聚焦电泳和等速提纯电泳在分离纯化蛋白质中的应用.结果发现,聚丙烯酰胺电泳的条带分辨率低,加样量不高;等电聚焦电泳分辨率最高,可以分离同种蛋白的亚成分,加样量最小;等速提纯电泳区带分辨率较高,可将样品分成单一成分,加样量最大.离子交换层析(Ion exchange chromatography,IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法.离子交换层析中,基质由带有电荷的树脂或纤维素组成.带有正电荷的为阴离子交换树脂;反之为阳离子交换树脂.离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化.当蛋白质处于不同的pH值条件下,其带电状况也不同.阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,被留在层析柱上,通过提高洗脱液中的盐浓度,将吸附在层析柱上的蛋白质洗脱下来,其中结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来.反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来.李全宏等[19]将离子交换层析应用于浓缩苹果汁中蛋白质的提纯.另外,离子交换层析还用于抗凝血蛋白的提取[7].4. 利用对配体的特异亲和力进行分离纯化亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力(即生物学亲和力)建立起来的一种有效的纯化方法.它通常只需一步处理即可将目的蛋白质从复杂的混合物中分离出来,并且纯度相当高.应用亲和层析须了解纯化物质的结构和生物学特性,以便设计出最好的分离条件.近年来,亲和层析技术被广泛应用于靶标蛋白尤其是疫苗的分离纯化,特别是在融合蛋白的分离纯化上,亲和层析更是起到了举足轻重的作用,因为融合蛋白具有特异性结合能力[20].亲和层析在基因工程亚单位疫苗的分离纯化中应用也相当广泛[21].范继业等[22]利用壳聚糖亲和层析提取的抑肽酶比活达到71 428 BAEE·mg-1,纯化回收率达到62·5%.该方法成本较低,吸附剂价格低廉、机械强度高、抗污染能力较强、非特异性吸附较小、可反复使用、适用性广,产品质量稳定.
2023-08-30 19:07:452

分离蛋白质混合物的方法主要是根据蛋白质在溶液中的哪些性质

(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要视有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间.但另一方面,温度升高会使蛋白质变性失活,因此,基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作.为了避免蛋白质提以过程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等).下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择.1、pH值蛋白质,酶是具有等电点的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内.用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化,从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说,碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液.2、盐浓度稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用.同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔.升浓度为宜.缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液.(二)有机溶剂提取法一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶,不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中,可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂,它们具的一定的亲水性,还有较强的亲脂性、是理想的提脂蛋白的提取液.但必须在低温下操作.丁醇提取法对提取一些与脂质结合紧密的蛋白质和酶特别优越,一是因为丁醇亲脂性强,特别是溶解磷脂的能力强;二是丁醇兼具亲水性,在溶解度范围内(度为10%,40度为6.6%)不会引起酶的变性失活.另外,丁醇提取法的pH及温度选择范围较广,也适用于动植物及微生物材料.二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多,主要有:(一)根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”,于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出.盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好.由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀.影响盐析的因素有:(1)温度:除对温度敏感的蛋白质在低温(4度)操作外,一般可在室温中进行.一般温度低蛋白质溶介度降低.但有的蛋白质(如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白)在较高的温度(25度)比0度时溶解度低,更容易盐析.(2)pH值:大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶介度最低.(3)蛋白质浓度:蛋白质浓度高时,欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来(共沉现象).因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释,使蛋白质含量在2.5-3.0%.蛋白质盐析常用的中性盐,主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等. 其中应用最多的硫酸铵,它的优点是温度系数小而溶解度大(25度时饱和溶液为4.1M,即767克/升;0度时饱和溶解度为3.9M,即676克/升),在这一溶解度范围内,许多蛋白质和酶都可以盐析出来;另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好,不易引起蛋白质变性.硫酸铵溶液的pH常在4.5-5.5之间,当用其他pH值进行盐析时,需用硫酸或氨水调节.蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入秀析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行.此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短.2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用.3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂,甲醇,乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降低并析出,此法分辨力比盐析高,但蛋白质较易变性,应在低温下进行.(二)根据蛋白质分子大小的差别的分离方法1、透析与超滤 透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开.超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质.2、凝胶过滤法 也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一.柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadex ged)和琼脂糖凝胶(agarose gel).(三)根据蛋白质带电性质进行分离蛋白质在不同pH环境中带电性质和电荷数量不同,可将其分开.1、电泳法各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开.值得重视的是等电聚焦电泳,这是利用一种两性电解质作为载体,电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度,当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自等电点的pH位置就停止,此法可用于分析和制备各种蛋白质.2、离子交换层析法离子交换剂有阳离子交换剂(如:羧甲基纤维素;CM-纤维素)和阴离子交换剂(二乙氨基乙基纤维素;DEAE?FONT FACE="宋体" LANG="ZH-CN">纤维素),当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时,带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上,随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来.(详见层析技术章)(四)根据配体特异性的分离方法-亲和色谱法 亲和层析法(aflinity chromatography)是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高.这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand)的分子能特异而非共价地结合.其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质,因此蛋白质的分离(Separation),提纯(Purification)和鉴定(Characterization)是生物化学中的重要的一部分,至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,因此往往采取几种方法联合使用.细胞的破碎 1、高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度.此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等.2、玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织.3、超声波处理法:用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,在1KG至10KG频率下处理10-15分钟,此法的缺点是在处理过程会产生大量的热,应采取相应降温措施.对超声波敏感和核酸应慎用.4、反复冻融法:将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎.5、化学处理法:有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏,细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好.无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力,但不是全部,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取.浓缩、干燥及保存 一、样品的浓缩生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和鉴定的目的,往往需要进行浓缩.常用的浓缩方法的:1、减压加温蒸发浓缩通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸发愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩.2、空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液,表面不断通过空气流;或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室,用电扇对准吹风,使透过膜外的溶剂不沁蒸发,而达到浓缩目的,此法浓缩速度慢,不适于大量溶液的浓缩.3、冰冻法 生物大分子在低温结成冰,盐类及生物大分子不进入冰内而留在液相中,操作时先将待浓缩的溶液冷却使之变成固体,然后缓慢地融解,利用溶剂与溶质融点介点的差别而达到除去大部分溶剂的目的.如蛋白质和酶的盐溶液用此法浓缩时,不含蛋白质和酶的纯冰结晶浮于液面,蛋白质和酶则集中于下层溶液中,移去上层冰块,可得蛋白质和酶的浓缩液.4、吸收法 通过吸收剂直接收除去溶液中溶液分子使之浓缩.所用的吸收剂必需与溶液不起化学反应,对生物大分子不吸附,易与溶液分开.常用的吸收剂有聚乙二醇,聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝胶等,使用聚乙二醇吸收剂时,先将生物大分子溶液装入半透膜的袋里,外加聚乙二醇复盖置于4度下,袋内溶剂渗出即被聚乙二醇迅速吸去,聚乙二醇被水饱和后要更换新的直至达到所需要的体积.5、超滤法 超滤法是使用一种特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤的方法,不液体在一定压力下(氮气压或真空泵压)通过膜时,溶剂和小分子透过,大分子受阻保留,这是近年来发展起来的新方法,最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐,并具有成本低,操作方便,条件温和,能较好地保持生物大分子的活性,回收率高等优点.应用超滤法关键在于膜的选择,不同类型和规格的膜,水的流速,分子量截止值(即大体上能被膜保留分子最小分子量值)等参数均不同,必须根据工作需要来选用.另外,超滤装置形式,溶质成份及性质、溶液浓度等都对超滤效果的一定影响.Diaflo 超滤膜的分子量截留值:膜名称分子量截留值孔的大的平均直径 XM-300300,000140XM-200100,00055XM-5050,00030PM-30 30,00022UM-2020,00018PM-1010,00015UM-21,00012UM05500 10用上面的超滤膜制成空心的纤维管,将很多根这样的管拢成一束,管的两端与低离子强度的缓冲液相连,使缓冲液不断地在管中流动.然后将纤维管浸入待透析的蛋白质溶液中.当缓冲液流过纤维管时,则小分子很易透过膜而扩散,大分子则不能.这就是纤维过滤秀析法,由于透析面积增大,因而使透析时间缩短10倍.二、干燥生物大分子制备得到产品,为防止变质,易于保存,常需要干燥处理,最常用的方法是冷冻干燥和真空干燥.真空干燥适用于不耐高温,易于氧化物质的干燥和保存,整个装置包括干燥器、冷凝器及真空干燥原理外,同时增加了温度因素.在相同压力下,水蒸汽压随温度下降而下降,故在低温低压下,冰很易升华为气体.操作时一般先将待干燥的液体冷冻到冰点以下使之变成固体,然后在低温低压下将溶剂变成气体而除去.此法干后的产品具有疏松、溶解度好、保持天然结构等优点,适用于各类生物大分子的干燥保存.三、贮存生物大分子的稳定性与保存方法的很大关系.干燥的制品一般比较稳定,在低温情况下其活性可在数日甚至数年无明显变化,贮藏要求简单,只要将干燥的样品置于干燥器内(内装有干燥剂)密封,保持0-4度冰箱即可,液态贮藏时应注意以下几点.1、样品不能太稀,必须浓缩到一定浓度才能封装贮藏,样品太稀易使生物大分子变性.2、一般需加入防腐剂和稳定剂,常用的防腐剂有甲苯、苯甲酸、氯仿、百里酚等.蛋白质和酶常用的稳定剂有硫酸铵糊、蔗糖、甘油等,如酶也可加入底物和辅酶以提高其稳定性.此外,钙、锌、硼酸等溶液对某些酶也有一定保护作用.核酸大分子一般保存在氯化钠或柠檬酸钠的标准缓冲液中.3、贮藏温度要求低,大多数在0度左右冰箱保存,有的则要求更低,应视不同物质而定.
2023-08-30 19:08:211

蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么

透析,盐析,凝胶电泳,凝胶过滤,亲和层析等,根据实际情况选取。
2023-08-30 19:08:322

大豆蛋白和大豆分离蛋白有区别吗

一、特性不同 1、大豆蛋白:大豆蛋白是一种植物性蛋白质,其氨基酸组成与牛奶蛋白质相近,除蛋氨酸略低外,其余必需氨基酸含量均较丰富,是植物性的完全蛋白质。 2、大豆分离蛋白:大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。具有乳化性、水合性、吸油性、凝胶性、发泡性及结膜性。 二、蛋白质含量不同 1、大豆蛋白:蛋白质含量约为38%以上。 2、大豆分离蛋白:大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上。 三、存在方式不同 1、大豆蛋白:大豆蛋白产品有粉状大豆蛋白产品和组织化大豆蛋白产品两种。 2、大豆分离蛋白:大豆蛋白质是由一系列氨基酸通过肽键结合而成的高分子有机聚合物,它主要由清蛋白和球蛋白组成,其中清蛋白约占5%,球蛋白约占90%。
2023-08-30 19:08:431

从细胞培养液中怎么分离蛋白质?

把细胞离心下来后,用TCA或(NH4)2SO4沉淀下来就可以啦.再把沉淀溶解到适当的buffer里就可以做后面的实验.
2023-08-30 19:08:502

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种?各自的作用原理是什么?

凝胶色谱法,根据相对分子量的大小
2023-08-30 19:09:012

简述蛋白质分离纯化与鉴定的主要方法有哪些?其特点是什么?

①浊点萃取法(CPE): 浊点萃取法(cloud point extraction,CPE)是近年来出现的一种新兴的液—液萃取技术,它不使用挥发性有机溶剂,不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础,改变实验参数引发相分离,将疏水性物质与亲水性物质分离。目前该法已成功地应用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化及环境样品的前处理中。 CPE 法除了利用增溶作用外,还利用了表面活性剂另一个重要性质——浊点现象。溶液静置一段时间(或离心)后会形成两个透明的液相:一为表面活性剂相(约占总体积的5%);另一为水相(胶束浓度等于CMC)。外界条件(如温度)向相反方向变化,两相便消失,再次成为均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物质如膜蛋白,与表面活性剂的疏水基团结合,被萃取进表面活性剂相,亲水性物质留在水相,这种利用浊点现象使样品中疏水性物质与亲水性物质分离的萃取方法就是浊点萃取。图1显示了由温度变化引发的这种相分离现象。温度的改变,引起水化层的破坏,增强了表面活性剂的疏水性。 ②置换色谱法:置换色谱(displacement chromatography)作为一种非线性色谱技术,是指样品输入色谱柱后,用一种与固定相作用力极强的置换剂(displacer)通人色谱柱,去替代结合在固定相表面的溶质分子。样品在置换剂的推动下沿色谱柱前进,使样品中各组分按作用力强弱的次序,形成一系列前后相邻的谱带,并在置换剂的推动下流出色谱柱。置换色谱的分离行为与样品组分和置换剂在实验条件下的吸附等湿线有直接的联系。置换色谱要求样品组分及置换剂的吸附等湿线应为Langmuir 型,而且置换剂相对于被分离的各组分应有最强的吸附能力,其吸附等温线位于所有组分的吸附等温线的上方。③亲和层析法(aflinity chromatography)是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand)的分子能特异而非共价地结合。其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质,因此蛋白质的分离(Separation),提纯(Purification)和鉴定(Characterization)是生物化学中的重要的一部分,至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,因此往往采取几种方法联合使用。④电泳法:各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳,这是利用一种两性电解质作为载体,电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度,当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自等电点的pH位置就停止,此法可用于分析和制备各种蛋白质。
2023-08-30 19:09:231

想问大豆蛋白和大豆分离蛋白有区别吗

一、特性不同1、大豆蛋白:大豆蛋白是一种植物性蛋白质,其氨基酸组成与牛奶蛋白质相近,除蛋氨酸略低外,其余必需氨基酸含量均较丰富,是植物性的完全蛋白质。2、大豆分离蛋白:大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品添加剂。具有乳化性、水合性、吸油性、凝胶性、发泡性及结膜性。二、蛋白质含量不同1、大豆蛋白:蛋白质含量约为38%以上。2、大豆分离蛋白:大豆分离蛋白中蛋白质含量在90%以上。三、存在方式不同1、大豆蛋白:大豆蛋白产品有粉状大豆蛋白产品和组织化大豆蛋白产品两种。2、大豆分离蛋白:大豆蛋白质是由一系列氨基酸通过肽键结合而成的高分子有机聚合物,它主要由清蛋白和球蛋白组成,其中清蛋白约占5%,球蛋白约占90%。更多关于大豆蛋白和大豆分离蛋白有区别吗,进入:https://www.abcgonglue.com/ask/2d3add1615823694.html?zd查看更多内容
2023-08-30 19:09:311

细胞内蛋白质大分子怎么分离纯化

破细胞 过Ni柱 过分子筛 过离子交换
2023-08-30 19:09:422

DNA与蛋白质的分离

等电聚焦电泳是按蛋白质等电点对蛋白质进行分离的一种电泳技术。不同蛋白质等电点不同,当蛋白质混合物在具有pH梯度(从高到低)的凝胶介质中进行电泳时,便以不同速度移动,并停留在等于其等电点的pH凝胶处,使相同等电点的蛋白质形成很窄的条带,从而使等电点不同的蛋白质得以分离。等点聚焦电泳的用途:(1)按等电点的不同分离蛋白质(2)鉴定蛋白质的等电点核酸的密度梯度离心常用介质为氯化铯。核酸样品经过氯化铯密度梯度离心后,各成分按自身密度不同分别处于离心管的不同位置。就不同大分子来讲RNA密度>DNA密度>蛋白质密度,因此,离心后RNA位于离心管的最下方,蛋白质位于最上层,DNA居于中间。就不同构象的DNA而言,其分子密度超螺旋DNA>环状DNA>线形DNA;对于同种DNA分子来讲,单链DNA密度大于双链DNA密度;对于G-C含量不同的DNA,G-C含量越高,核酸分子密度越大。以个人的看法:没什么可比性。如果一定要比较的话,相同点:(1)均是分离生物大分子的技术;(2)都是制成分离梯度(3)分离结构是相同状态的大分子处于同一条带上,外观相似是不同的条带分布在介质中。不同点:(1)原理不同(2)针对不同的生物大分子的分离技术
2023-08-30 19:09:521

大豆分离蛋白是什么东西?

大豆分离蛋白是全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白实际上它是一种高品质的大豆蛋白,以超低温脱溶大豆粕为原材料生产制造的一种全票价蛋白质类食用添加剂,在黄豆分离蛋白中带有比较丰富的蛋白,也有二十几类碳水化合物,拥有比较丰富的营养成分,最重要的是它并没有碳水化合物,是一种高品质的食用添加剂。黄豆分离蛋白是一种色调为浅黄色或是奶白色的粉末状样子,没有残渣,能够作为防腐剂用于对如肉类食品这种易腐烂的食材开展冷藏,擦抹在肉上边就假如个食材调加了一层保鲜袋,降低与气体的触碰,使食材能够合理的储存,服用的时间极大地拓宽。营养价值:高蛋白。无论对素食主义者还是对普通人,大豆分离蛋白粉都是完美的优质蛋白补充品。低脂。对需要低热量膳食的减肥者而言,用大豆蛋白代替膳食中部分蛋白,不仅降低了胆固醇与饱和脂肪的摄入量,同时也达到了营养摄取的均衡。增钙。大豆蛋白能阻止尿钙损失,促进骨质健康,减少患骨质疏松的几率。
2023-08-30 19:10:011

分离分子量不同的三种蛋白质的一个方案

1、透析与超滤透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开.超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质.2、凝胶过滤法也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一.柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadex ged)和琼脂糖凝胶(agarose gel).搜索盐析法提取蛋白质蛋白质的四大禁忌谷壳分离分布区域化学分离最佳方法补充蛋白质最好办法什么是沉析技术
2023-08-30 19:10:192

大豆分离蛋白的作用和功效是什么?

1、高蛋白无论对素食主义者还是对普通人,大豆分离蛋白粉都是完美的优质蛋白补充品。2、低脂对需要低热量膳食的减肥者而言,用大豆蛋白代替膳食中部分蛋白,不仅降低了胆固醇与饱和脂肪的摄入量,同时也达到了营养摄取的均衡。3、增钙大豆蛋白能阻止尿钙损失,促进骨质健康,减少患骨质疏松的几率。4、降胆固醇研究显示,每日服用25g大豆蛋白可有效降低人体血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量,从而降低患心脏病的风险。扩展资料:生产面包时加入不超过5%的分离蛋白,可以增大面包体积,改善表皮色泽,延长货架寿命;加工面条时加入2~3%的分离蛋白,可减少水煮后的断条率、提高面条得率,而且面条色泽好,口感与强力粉面条相似。大豆分离蛋白还可应用于饮料、营养食品、发酵食品等食品行业中,对提高食品品质,增加营养,降低血清胆固醇,防止心脏和脑血管疾病具有独特的作用。将大豆分离蛋白用于代替奶粉,非奶饮料和各种形式的牛奶产品中。营养全面,不含胆固醇,是替代牛奶的食品。大豆分离蛋白代替脱脂奶粉用于冰淇淋的生产,可以改善冰淇淋乳化性质、推迟乳糖结晶、防止“起砂”的现象。参考资料来源:百度百科-大豆分离蛋白
2023-08-30 19:10:281

蛋白质纯化的药物分离

一、根据蛋白质溶解度不同的分离1、蛋白质的盐析法:中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析。2、等电点沉淀法:蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,因而溶解度也最小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用。二、根据蛋白质分子大小的差别的分离方法1、透析与超滤:透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力,使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。2、凝胶过滤法: 也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadex ged)和琼脂糖凝胶(agarose gel)。三、根据蛋白质带电性质进行分离1、电泳法:各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳,这是利用一种两性电解质作为载体,电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度,当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自等电点的pH位置就停止,此法可用于分析和制备各种蛋白质。2、离子交换层析法:离子交换剂有阳离子交换剂(如:羧甲基纤维素;CM-纤维素)和阴离子交换剂(二乙氨基乙基纤维素),当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时,带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上,随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。四、根据配体特异性的分离方法-亲和色谱法亲和层析法(aflinity chromatography)是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand)的分子能特异而非共价地结合。其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质,因此蛋白质的分离(Separation),提纯(Purification)和鉴定(Characterization)是生物化学中的重要的一部分,至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,因此往往采取几种方法联合使用。
2023-08-30 19:10:441