凝胶渗透色谱用的是哪种三氯苯

是。凝胶色谱是排阻色谱，一般情况下，分子小，可以进入凝胶孔道，需要走很长的路径才能通过凝胶层，大分子不能进入凝胶空隙，很快通过凝胶层，所以移动快，停留时间短。凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。

凝胶色谱分析是一种重要的蛋白质分析方法，用于描述多肽或蛋白质在色谱柱中的行为。凝胶色谱（GC）主要分为两种类型：尺寸排除色谱和离子交换色谱。以下是凝胶色谱分析结果的几个重要方面：1、峰的高度：GC图中的峰高（y轴）通常代表检测到的样品在特定的分馏时期的相对量。高峰通常表示贡献较大的组分，而较低的峰则表明组分浓度低。2、峰的形状：GC图中的峰形通常揭示有关分子的分子量和构象。峰形的宽度和对称性（或不对称性）可以从中获得关于组分大小和形状的信息。3、保留时间：GC图中的保留时间通常是峰的中心到图谱初始点之间的时间（x轴）。保留时间可能对照蛋白质样品的尺寸和形状，因此有可能用于刻画蛋白质的分子量和构象特征。4、分离度：GC图中的分离度通常是两个峰之间多少时间或距离（在轴上的）之间的差异。如果峰之间的进程足够宽，这可能表明组分分离不充分。分离度计算对选择和定量所有组分的能力有关键作用。综上所述，凝胶色谱分析不仅仅只有一个峰值得看。通常来说，要综合考虑图形中的几个方面来解释GC图，以便获得更多样的分析结果和相关蛋白质的信息。

凝胶色谱的原理比较特殊,类似于分子筛.待分离组分在进入凝胶色谱后,会依据分子量的不同,进入或者不进入固定相凝胶的孔隙中,不能进入凝胶孔隙的分子会很快随流动相洗脱,而能够进入凝胶孔隙的分子则需要更长时间的冲洗才能够流出固定相,从而实现了根据分子量差异对各组分的分离.调整固定相使用的凝胶的交联度可以调整凝胶孔隙的大小；改变流动相的溶剂组成会改变固定相凝胶的溶涨状态,进而改变孔隙的大小,获得不同的分离效果. 如果你只是想测一下分子量范围,可以用它,如果想更好的分离,最好选择其他色谱分析法.

在凝胶色谱操作过程中,若发生洗脱液流干,露出凝胶颗粒，就有空气进入，若不重新装填，混入的空气，影响液体在柱内的流动，从而影响生物大分子物质的分离效果

凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分子质量和相对分子质量分布，同时根据所用凝胶填料不同，可分离脂溶性和水溶性物质，分离相对分子质量的范围从几百万到100以下。近年来，凝胶色谱也广泛用于小分子化合物。相对分子质量相近而化学结构不同的物质，不可能通过凝胶渗透色谱法达到完全分离纯化的目的。凝胶色谱不能分辨分子大小相近的化合物，相对分子质量相差需在10%以上才能得到分离。

凝胶色谱柱这样延后出峰时间：1、更换孔径更大的凝胶，例如将SephadexG-100换成G-150。2、降低流动相的流速。3、更换相对分子量更小的洗脱剂。

1.当然是色谱柱。2.是色谱柱（内的）填料；3.则是填料的粒径均匀性；4.是填料的孔径的大小分布均匀性；5.还与填料的强度有关；6.与装柱技术、条件有关；7.与柱规格有关，如长短、粗细；8.与流动相有关；9.与样品和柱填料的性能有关；10.与色谱仪器质量有关；11.还有与操作的人的能力也不无关。欢迎登陆：http://www.mkf.cn/

为了保持气相色谱分析的准确度，载气的流量要求恒定，其变化小于1％，通常使用减压阀、稳压阀、针形阀等，来控制气流的稳定性。减压阀减压阀俗称氧气表，装在高压气瓶的出口，用来将高压气体调节到较小的工作压力，通常将10～15MPa压力减小到0.1～0.5MPa。由于气相色谱中所用载气流量较小，一般在100mL/min以下，所以单靠减压阀来控制流速是比较困难的，通常在减压阀输出气体的管线中还要串联稳压阀或针形阀，以精确地控制气体的流速。稳压阀稳压阀用以稳定载气(或燃气)的压力，常用的是波纹管双腔式稳压阀。使用这种稳压阀时进气口压力不得超过0.6MPa，出气口压力一般在0.1～0.3 MPa时稳压效果最好。使用时气源压力应高于输出压力0.05MPa。稳压阀不工作时，应顺时针转动放松调节手柄，使阀关闭，以防止波纹管、压簧长期受力疲劳而失效。使用时进气口和出气口不要接反，以免损坏波纹管。所用气源应干燥，无腐蚀性，无机械杂质。

给你举个例子，凝胶电泳以葡聚糖凝胶电泳为例，我们要铺一块凝胶板，然后在板一端点样，通电，由于样品带电子，向正极方向移动，分子量大的跑的慢，小的跑得快，然后我们可以染色观察。它的作用一般是分离核酸。然后凝胶色谱一般是指色谱柱，从上段加样之后大分子物质难以进入凝胶空隙，从边上流，而小分子就容易进入凝胶空隙，因此大分子流出的速度更快，这种方法主要用途是给高聚物分级（但是我们实验用那一次是用来分离分子量不同的蛋白质的）

凝胶色谱分离的依据是相对分子质量的大小。由凝胶色谱法分离蛋白质的原理可知，凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

1.分析对象差别:气相色谱仪的分析对象: (1)能气化、热稳定性好和沸点较低的样品。 (2)高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物样品不能检...高效液相色谱仪的分析对象: (1)溶解后能制成溶液的样品。 (2)不受样品挥发性...2.流动相差别:气相色谱仪的流动相: (1)流动相为惰性气体。 (2)组分与流动相之间无亲合作用力,只与固定相作用。

凝胶色谱填料合成技术的进展主要在下面四个方面：填料的微球化、窄粒度分布多孔硅微球的合成成功、小孔径多孔硅微球合成成功以及新的硅微球表面化学改性的发展。近年来在这方面有较多的新产品，中国也有许多单位在研制和生产。高效凝胶色谱正在迅速改变凝胶色谱的应用面。高效色谱柱除了对填料的粒度有要求外，对粒度分布也要求相当窄。用一般的制备方法往往得到粒度较宽的产品，需要进一步过筛。当填料的粒度在30微米以下时，这种过筛非常困难，已经成为填料制备上一个较大的技术难关。Kirkland，最近利用了尿素和甲醛在酸性介质中形成大小均匀的液体高聚物，加入某种硅溶胶时，硅溶胶的微珠将在液体高聚物中凝聚。最后把有机高聚物灼烧掉后就能得到由微粒硅珠堆积而成的多孔填料。这种堆积硅珠是球形的，粒度分布很窄，填料的孔径决定于原始硅溶胶的规格，用不同的硅胶就可以制得不同孔径的填料。柴志宽等则利用一种硅胶制成粒度分布窄的填料后，再利用适当的扩孔方法以得到各种孔径的填料。从这些方法制得的微球填料，粒度分布可以达到相当窄，所以可以不经筛选直接使用。随着进样技术和色谱柱接头设计的改进，现在已经可以得到柱效每米在八万到十万的凝胶色谱填料。Wheals用四种GPC用的微球硅胶装填色谱柱，都能达到每米八万到十万块塔板数的高效。他用这种色谱柱有效地进行了案件侦查中所要求的分析问题。

凝胶色谱法的迁移方向是从样品的上端向下端。这是因为凝胶色谱法是一种分离技术，它将样品分离成不同的组分来分析样品。在凝胶色谱柱中，样品被加入到柱的顶部，在柱中向下移动。在移动过程中，不同的组分会以不同的速度通过柱，并在柱的底部分离出来。因此，凝胶色谱法的迁移方向是从上到下。

凝胶色谱是依赖于分子量大小分析或分离蛋白的方法。一般来讲，凝胶色谱不会用于蛋白的的生产工艺或大量纯化，因为成本高，分离的效率低。但凝胶色谱可用于分析或小量制备，用于区分和血红蛋白有较大分子量差异的杂蛋白，或者排除有部分降解/聚集的目标蛋白。欢迎继续讨论，纯属手打，欢迎采纳，祝愉快！

凝胶色谱分离可以分离大小范围在几百到数千碱基之间的分子。它主要是通过改变电泳溶液中离子强度、酸碱度和电压来实现分离的。当分子越大，它就会沿着电泳溶液移动更迅速，从而更快地到达终点。凝胶色谱可以分离的大小可以从几十碱基到数千碱基不等，一个大的分子分离速度可能比一个小的分子慢得多。

凝胶色谱和凝胶电泳的相同点是基于凝胶的分离技术。根据查询相关资料信息，凝胶色谱和凝胶电泳使用凝胶状的材料作为分离介质，通过吸附、层析或分离电泳的方法，将待测样品分为不同的构成部分，在物理和化学的结果上改变样品的组成。

凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography、GPC)1964年，由J.C.Moore首先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离和鉴定，而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。(聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开）

综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。

凝胶具有化学惰性，它不具有吸附、分配和离子交换作用。让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙（较大）和粒子内的通孔（较小）。当聚合物溶液流经色谱柱（凝胶颗粒）时，较大的分子（体积大于凝胶孔隙）被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多；中等体积的分子可以渗入较大的孔隙中，但受到较小孔隙的排阻，介乎上述两种情况之间。 经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面（即淋洗时间短），相对分子质量小的在后面（即淋洗时间长）。自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。（1） 体积排除（2）限性扩散（3） 流动分离 由于GPC对聚合物的分离是基于分子流体力学体积，即对于相同的分子流体力学体积，在同一个保留时间流出，即流体力学体积相同。两种柔性链的流体力学体积相同：[η]1M1=[η]2M2k1M1α1+1=k1M2α2+1两边取对数：lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2即如果已知标准样和被测高聚物的k、α值，就可以由已知相对分子质量的标准样品M1标定待测样品的相对分子质量M2。

GPC实验室为了检测物质的分子量分布，样品浓度大与小，只会影响整个色谱图谱的大小，不会对整个数据产生较大影响。当然，样品太稀会导致两头的数据有较大的误差。

当不同相对分子质量的蛋白质通过凝胶柱时，分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长移动的速度慢，而分子量大的蛋白质分子不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，最先洗脱出来． 故选：A．

凝胶色谱法中全渗透点是指在分离某种大分子化合物（如蛋白质、DNA等）时，当分离试样的分子量大于凝胶的孔径时，试样的分子就不能进入凝胶内部，而只能在凝胶的表面层流动。这个分子量的临界值就称为凝胶的全渗透点。在全渗透点以下，分子可以自由地穿过凝胶的孔隙，因此分离效果较差；而在全渗透点以上，分子无法穿过凝胶的孔隙，因此分离效果会更好。全渗透点是凝胶色谱法中的重要参数之一，能够帮助确定适合分离试样的凝胶孔径大小，从而提高分离的效率和准确性。

直接法：在测定淋出液浓度的同时测定其粘度或光散射，从而求出其分子量。间接法：用一组分子量不等的、单分散的试样为标准样品，分别测定它们的淋出体积和分子量，则可确定二者之间的关系。 GPC仪的组成：泵系统、（自动）进样系统、凝胶色谱柱、检测系统和数据采集与处理系统。2.1.1.泵系统：包括一个溶剂储存器、一套脱气装置和一个高压泵。它的工作是使流动相（溶剂）以恒定的流速流入色谱柱。泵的工作状况好坏直接影响着最终数据的准确性。越是精密的仪器，要求泵的工作状态越稳定。要求流量的误差应该低于0.01mL/min。2.1.2.色谱柱：GPC仪分离的核心部件。是在一根不锈钢空心细管中加入孔径不同的微粒作为填料。每根色谱柱都有一定的相对分子质量分离范围和渗透极限，色谱柱有使用的上限和下限。色谱柱的使用上限是当聚合物最小的分子的尺寸比色谱柱中最大的凝胶的尺寸还大，这时高聚物进入不了凝胶颗粒孔径，全部从凝胶颗粒外部流过，这就没有达到分离不同相对分子质量的高聚物的目的。而且还有堵塞凝胶孔的可能，影响色谱柱的分离效果，降低其使用寿命。色谱柱的使用下限就是当聚合物中最大尺寸的分子链比凝胶孔的最小孔径还要小，这时也没有达到分离不同相对分子质量的目的。所以在使用凝胶色谱仪测定相对分子质量时，必须首先选择好与聚合物相对分子质量范围相配的色谱柱。2.1.3.填料（根据所使用的溶剂选择填料，对填料最基本的要求是填料不能被溶剂溶解）：交联聚苯乙烯凝胶（适用于有机溶剂，可耐高温）、交联聚乙酸乙烯酯凝胶（最高100℃，适用于乙醇、丙酮一类极性溶剂）多孔硅球（适用于水和有机溶剂）、多孔玻璃、多孔氧化铝（适用于水和有机溶剂)2.1.4.柱子：玻璃、不锈钢2.1.5.检测系统：通用型检测器：适用于所有高聚物和有机化合物的检测。有示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器。2.1.6.示差折光仪检测器：溶剂的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的区别。2.1.7.紫外吸收检测器：在溶质的特征吸波长附近溶剂没有强烈的吸收。2.1.8.选择型检测器：适用于对该检测器有特殊响应的高聚物和有机化合物。有紫外、红外、荧光、电导检测器等。 2.2.1.溶剂的选择： 能溶解多种聚合物；不能腐蚀仪器部件；与检测器相匹配。2.2.2.把激光光散射与凝胶色谱仪联用，在得到浓度谱图的同时，还可得到散射光强对淋出体积的谱图，从而计算出分子量分布曲线和整个试样的各种平均分子量2.2.3.激光光散射实验中必须对样品严格除尘，溶液中的灰尘会产生强烈的光散射，严重干扰聚合物溶液光散射的测量。溶液除尘是光散射成败的关键。首先是溶剂除尘，配置测试样品的溶剂应进行精馏，并经过0.2μm超滤膜过滤后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超滤膜过滤。另外，测试中所用的器械，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水强力冲洗。

凝胶色谱是一种排阻色谱。也就是指根据流动相分子体积进行速度分配的一种色谱。你提到接流份，那应该是制备性色谱，现在有商品型制备色谱，色谱柱竖直放置，从底部上样，洗脱溶剂从下往上流，流速是固定的。接流份需要进行多次分析，选择截取合适的时间段的流份。洗脱溶剂的选择与其他色谱是不一样的，溶剂主要考虑是否会溶解固定相，是否能溶解你的样品。

1、凝胶色谱法又称为凝胶过滤法、 凝胶层析、凝胶渗透层析、通透层析、分子筛层析。 2、凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 3、凝胶的种类及性质 （1）交联葡聚糖凝胶（Sephadex） 交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。 （2）Sephadex LH-20，是Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。 （3）琼脂糖凝胶： 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌处理。 （4）聚丙烯酰胺凝胶： 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rad厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。 （5）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

1、凝胶色谱法又称为凝胶过滤法、 凝胶层析、凝胶渗透层析、通透层析、分子筛层析。 2、凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 3、凝胶的种类及性质 （1）交联葡聚糖凝胶（Sephadex） 交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。 （2）Sephadex LH-20，是Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。 （3）琼脂糖凝胶： 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌处理。 （4）聚丙烯酰胺凝胶： 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rad厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。 （5）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。

（一）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-GelP），由日本tosoh的TSKGEL的pw系列，适合蛋白和多糖的纯化。（二）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵SephadexLH-20，是—SephadexG-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（三）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小排队，凝胶表现分子筛效应。

（一）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P（Bio-GelP），由日本tosoh的TSKGEL的pw系列，适合蛋白和多糖的纯化。（二）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵SephadexLH-20，是—SephadexG-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（三）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。

根据我学到的生化知识。正确的应该是凝胶色谱是根据分子大小（也就是体积形状来分离的），说它是根据分子质量大小分离只是因为被分离的东西一般是蛋白质，而蛋白质的分子质量一般和其大小成正相关。当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶珠内网状结构，被排阻在凝胶珠之外，随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下移动，并最先流出柱外；比网孔小的分子能不同程度的自由进出凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子先被洗脱出来，小分子后被洗脱出来。这个在高等教育出版社，王镜岩老师编的《生物化学》第301页 蛋白质的分离纯化原则上有详细解释。至于你看到的练习和书本上为什么这样写，为了你考试能考高分，建议你拿我的答案和书上的区别去请教你们生物老师，得到他肯定的说法。

凝胶色谱可以分离分子量不同的物质大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，所以小分子物质的下移速度慢。

凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术，是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。

抱歉！这个我真不会。

凝胶色谱可以分离分子量不同的物质大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，所以小分子物质的下移速度慢。

在凝胶色谱操作中一旦洗脱液流干应该重新加入洗脱液。根据查询相关公开信息：在凝胶色谱操作过程中，若发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒，就有空气进入，若不重新装填，混入的空气，影响液体在柱内的流动，从而影响生物大分子物质的分离效果，应当重新加入洗脱液。

凝胶色谱流速过慢操作规程：1、开机：在开泵之前要将流动相用超声波清洗器脱气。打开泵的电源开关，这时泵的控制面板上的显示屏上显示等待状态，预设流量为1.000ml/min。按动控制面板上的EDIT/ENTER键，使其处于编辑状态，用上下键调节流量至0.100ml/min，然后按动RUN/STOP键使泵开始运转，这时的流量为0.100ml/min。按动EDIT/ENTER键及上下键调节流量并按动MENU键确定从而改变泵的流量。改变流量时速度不要太快，要等泵的压力稳定之后再进行下步操做。如果发现泵的进液管中有气泡存在，应及时除去气泡。方法是：先将泵头上的冲洗阀拧松，然后按动泵的控制面板上的MENU键使显示屏上显示purge一项，再按EDIT/ENTER键确定后即开始冲洗泵头。到预设时间（一般为5分钟）后，冲洗过程会自动停止。将菜单调回显示流速一栏，重新调节流速开始运行泵。2、检测器：打开检测器的电源开关。检测器自检后其控制面板上的显示器将显示检测器的各种参数。按动2ndfunc键然后按Int℃将显示检测器的温度。要改变检测器温度时，按动2ndfunc键然后按动Set℃键再输入要设订的温度值，最后按ENTER键即可。每次更换溶剂后，需冲洗参比池30分钟左右。按动2ndfunc键和Purge键可开始清洗。清洗完毕后，再按动2ndfunc键和Purge键即可恢复检测状态。3、数据接收：打开数据接口电源开关并打开GPC软件，点软件上的数据接收键后，即可开始进行数据接收工作。4、样品的配制：仪器测试样品的浓度在2g/l左右（一般用20毫克试样配制成10毫升的样品，分子量较低的试样浓度可以适当高些）。配制好的样品需放置24小时左右以使试样充分溶解。溶好的样品还要用滤膜过滤，除去不溶物质（这是为防止损坏凝胶柱）。5、进样：进样量一般为50μl或75μl。微型注射器先用流动相清洗4到5次，然后再样品冲洗4到5次。进样时，一定要使注射器中没有气泡存在。进样时，先将检测器回零后再扳动进样器进样，大约进样5分钟后将进样器手柄扳回原位。6、关机：测试完毕之后，应再在测试流量下继续运行30分钟左右。之后逐渐降低泵的流速直至到零。关闭泵的电源。关闭检测器的电源。关闭接口电源。退出软件。

凝胶色谱分离基本原理是（） A.极性大小B.与-OH缔合氢键C.分子大小D.扩散原理正确答案：分子大小

(1)④→①→②→③ (2)不能破坏凝胶面 贴着管壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动 (3)完全进入凝胶层 (4)红色的蛋白质 5

（1）全部组分均在溶剂分子洗脱之前洗脱下来，分离时间短。（2）可以预测洗脱时间，可以连续进样。（3）凝胶色谱的分离过程不依靠分子间作用力，一般情况下，没有强保留的分子累积在色谱柱，所以分离时试样组分不会丢失，柱的使用寿命也会延长。（4）保留时间短，色谱峰窄，容易检测。

体积排阻色谱法检测的是最大分子量是利用样品分子大小尺寸来进行分离的。色谱柱里面有许多带有孔洞的球型颗粒，小分子的物质分子会进入这些孔洞再出来，所以会增加停留时间，而大分子进不去这些孔洞，就在球型颗粒之间的缝隙直接通过。所以大分子先出色谱柱，先出峰，小分子后出色谱柱，后出峰。

基本就是一回事，细的方面还是有些差别的。一个是过滤的原理，一个是渗透的原理。建议你到“生化色谱网”去看看，那里比较专业。

示差检测器。根据查询百度文库得知，凝胶色谱仪03c2模块是示差检测器。凝胶色谱仪的示差检测器是一种通用型的检测器，可与输液泵、进样器、控制器等组成凝胶渗透色谱系统，也可与液相色谱仪串联使用做通用型检测器。凝胶色谱仪采用国际先进技术及关键部件的基础上结合自主创新，该设备用于水性和油性高分子聚合物的分子量大小及分子量分布检测，以及糖类、醇、脂肪酸、脂类的定性定量分析。

A、相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，A错误； B、相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，B正确； C、相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，C错误； D、相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，且其路程短，移动的速度快，D错误． 故选：B．

联系：都是根据被分离样品通过色谱柱的时间来将其分离。 广义来说，凝胶渗透色谱也可认为是高效液相色谱的一种。不同：1原理不同：凝胶渗透色谱是根据样品中物质体积的大小不同将其分离。 高效液相色谱是根据样品物质与色谱中物质的吸附-解析平衡来将其分离，也就是 根据物质的吸附系数不同达到分离的效果。 2色谱柱中的填料不同：凝胶渗透色谱中的填料为孔洞大小不同的凝胶，而高效液 相色谱中的填料有很多种类，分离的原理也有所不同。

【答案】：凝胶渗透色谱的分离核心是装有多孔性载体的色谱柱。假如高分子的体积比所有的孔洞的尺寸大，任何孔洞都不能进入，那么它只能从载体的粒间流过，其淋洗出体积Ve即为色谱柱的粒间体积V0；假如高分子的体积比所有的孔洞的尺寸小，任何孔洞都能进入，其淋出体积与溶剂分子的相同即为色谱柱的粒间体积V0加孔洞体积Vi，即Ve=V0+Vi；假如高分子的体积是中等大小，它能进入部分孔洞，高分子的体积愈小，所能进入的孔洞体积愈小，其淋出体积就愈小；高分子的体积愈小，所能进入的孔洞体积愈大，其淋出体积就愈大，即V0＜Ve＜V0+Vi。这种不考虑溶质和载体之间的吸附效应以及溶质在流动相和固定相之间的分配效应，其淋出体积仅仅由溶质分子尺寸和载体的孔洞尺寸决定，分离完全是由于体积排除效应所致，故称为体积排除机理。

首先：蛋白质本身是大分子物质，但是不同的蛋白质分子量又不同，差异还是比较大的。其次：凝胶颗粒内部的孔道并是都一样大，路径并不都相同。所以如果分子量较大的分子，其分子量都超过凝胶颗粒内部的孔径，那么它们都只能从外面过，路径差不多，分不开；而分子量较小的蛋白质则可进入不同大小的孔道，通过不同路径将其分开；其他比蛋白质小的分子，由于都能进入凝胶的全部空隙，也不会有好地分离效果。所以答案为C是说的过去的。

　　方便、准确、速度快。　　测定分子量一般就是凝胶色谱和粘度计，然后再折算成道尔顿分子量，凝胶给出的信息丰富，不仅能给出重均分子量，还能给出数均、z均、分子量分布系数等信息。　　制样要注意不要有大颗粒不溶物堵塞色谱柱，进样前要用0.45um滤膜过滤，还要注意浓度不可太大，不能超过柱子耐受力，也不可太小，让检测器检测不到也不好。　　溶解时间也要统一，一个小时和一天的可能结果会有差别，根据样品性质使用保护柱，振摇也要注意，这些都是为了防止某些脆弱的分子被弄裂了，降低了分子量，增大了分布系数。

D

我觉得是和分子筛的孔径大小有关~~~ SDS-PAGE的孔径较大~~ 所以不管是什么分子量的都经孔径走~~ 所以最后大的蛋白被滞留在后面~~~ 而凝胶色谱的孔径较小~~~ 质量大的蛋白不经过孔径走而是从孔径的间隙走 路径就短了很多~~~ 所以大的先出来~~~不知道是不是这么回事~~~~~~