限制酶使核苷酸内部的磷酸基与脱氧核苷酸之间的键发生水解对吗

（1）因为限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，也不能否用PstⅠ、Apa...

点评：
本题考点： 基因工程的应用；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题结合转基因抗病香蕉的培育过程图，考查基因工程和植物组织培养技术的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．

A、SmaⅠ切割位点为CCC↓GGG，形成的是平末端，A正确；
B、Sau3AⅠ的切割位点位于识别序列的一侧，B错误；
C、BamHⅠ和Sau3AⅠ切割后形成的相同的黏性末端，C错误；
D、因为Y=C或T，R=A或G，所以HindⅡ限制酶可识别多种序列，D错误．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查限制酶的作用，考查学生分析图形和从图中获取信息的能力．

由题图2可知有4个DNA片段，由于βS较βA长，在电泳过程中，迁移速率较慢，由此可得1号的是由两段1.35 kb的DNA片段组成，其基因型为βSβS，2号是由一段1.35 kb的DNA片段和1.15 kb的DNA片段，其基因型为βAβS，3号两段1.15 kb的DNA片段组成，其基因型为βAβA．
故选：A

点评：
本题考点： 蛋白质的提取和分离；基因工程的原理及技术．

考点点评： 解题关键：①理解DNA电泳法的原理，DNA的片段越小，其在电泳场中的移动速度越快；②正确识图，通过分析图1、图2，推断相关结论．

（1）因目的基因和质粒都是用E1切开且质粒上有两个E1酶切位点，故Ap^r基因和Tc^r基因的黏性末端相同，既可能出现Ap^r基因和X-1连接的产物（X-1），也可能出现Tc^r基因和X-1连接的产物（X-2），还可能出现X-1两端连接形成的产物（X-3）．
（2）X-1含有Ap^r基因，该基因表达后对青霉素有抗性，X-2含有Tc^r基因，该基因表达后对四环素有抗性，X-3不含抗性基因，X-4同时含有Ap^r和Tc^r基因，Ap^r和Tc^r基因表达后，对青霉素、四环素都有抗性．故而在含有青霉素或四环素的两种培养基上不能生长的大肠杆菌中不含X-1、X-2、X-4，即无质粒细胞和含X-3的细胞．
（3）用E1酶切X-1，产生850对碱基的Ap^r基因大部分碱基片段和3550对碱基含有E2酶切位点的片段．与Tc^r基因形成含有4750个碱基对的X-2质粒．用E2酶切割质粒，由环状变为链状，碱基对数不变．
（4）含X-4的细胞数与含X-1的细胞数的比值与形成这两种质粒的数量有关．这两种质粒的形成是通过末端随机结合形成碱基对，再由DNA连接酶连接缺口，而DNA连接酶对该DNA片段无选择作用，故增加DNA连接酶的用量，不改变题中的比值．
故答案为：
（1）ABC
（2）无质粒细胞含X-3的细胞
（3）4750
（4）不能DNA连接酶对DNA片段没有选择性或者DNA末端相同

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图和理解能力，比较抽象，需要耐心分析．

A、a酶可以把原有DNA切成4段，说明有该DNA分子上有3个切口，即a酶的识别序列有3个，b酶把大小是2100的DNA切成大小分别为1900和200两个片段，再把大小是1400的DNA切成大小分别为800和600两个片段，说明b酶在该DNA分子上有2个切口，A正确；
B、由图可以看出a酶和b酶切割后产生的黏性末端相同，它们之间能相互连接，B错误；
C、a酶与b酶切断的化学键均为磷酸二酯键，C错误；
D、质粒为环状DNA，并且酶a在该DNA分子上有3个识别序列，因此用a酶切割可以得到3种切割产物，D错误．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题难度适中，属于考纲中理解层次的要求，着重考查了限制酶的识别位点和切割结果，考生要能够根据切割结果判断切割位点，并且两种限制酶切割形成的末端相同，因此能够互相连接．

（1）由抗病基因中酶切割位点可知，限制酶SmaⅠ的切割位点在抗病基因中间，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以不能用限制酶SmaⅠ．根据重组质粒中目的基因的位置可知，切割质粒用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割．所以不能用PstⅠ、ApaⅠ限制酶．
（2）根据题意，培养基中有卡那霉素，所以培养的微生物中要含有抗卡那霉素基因作用为标记基因．
（3）在植物组织培养的不同阶段，培养基中激素种类、数量、比例不同，所以②③不能用同种培养基．
（4）④过程不需要添加植物激素，因为植物的芽能产生生长素，促进生根．
故答案为：
（1）不能对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构不能
（2）抗卡那霉素
（3）不能两阶段培养基中激素种类、数量、比例不同
（4）因为芽能产生生长素，促进根的生长

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；植物培养的条件及过程．

考点点评： 本题考查转基因植物培育过程，要求学生理解限制酶的用法、识记激素对植物组织培养的作用．

限制酶I的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制酶II的识别序列和切点是-^↓GATC-，可知限制酶II能够识别和切割限制酶I切割后的黏性末端．据题图可知，目的基因两端分别是限制酶I的识别序列和切点是-G^↓GATCC-和限制酶II的识别序列和切点是-^↓GATC-，只有用限制酶II才能同时将目的基因切割下来．质粒有GeneI和GeneⅡ表示两种标记基因，分别有限制酶II的识别序列和限制酶I的识别序列；如果用限制酶II切割，则GeneI 和GeneⅡ都被破坏，造成重组质粒无标记基因；用限制酶I切割，则破坏GeneⅡ，保留GeneI，其黏性末端和切割目的基因所在DNA的黏性末端相同，可以连接形成重组DNA．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程限制酶相关知识，意在考查考生的识图和理解能力，解题的关键是理解基因表达载体构建的过程．

A、限制酶切割的是磷酸二酯键，A错误；
B、-CCGC^↓GG-序列被限制酶切割后断裂的碱基对有2对，B错误；
C、限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列，C错误；
D、-CATG^↓-和-G^↓GATCC-序列被限制酶切出的黏性末端核苷酸数目具有四个，D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了限制酶的特点，知道限制酶的作用部位以及能写出限制酶切割形成的黏性末端．

限制酶所识别的是特定的碱基序列，并在特定部位进行切割，不同的限制酶识别不同的核苷酸序列并识别不同的切点，黏性末端不同．但不同的粘性末端有时是可以进行拼接的，只要切下的游离碱基互补即可互补黏合，由图示可知BamHI和BglII都可切下序列-GATC-，故末端互补序列-GATC-，故D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题主要考查黏性末端的知识．解答本题的关键是理解限制酶的特点．限制酶所识别的是特定的碱基序列，并在特定部位进行切割，限制酶不同，所识别的碱基序列不同，黏性末端不同，但不同的粘性末端有时是可以进行拼接的，不要混淆．

A、限制酶的识别位点一般由4、5、6或8个核苷酸序列组成，故A错误；
B、据图分析，SmaⅠ限制酶切割后产生的是平末端，故B错误；
C、用DNA连接酶连接平末端的效率比黏性末端低，故C错误；
D、细菌细胞内限制酶可以切割外源DNA，防止外源DNA入侵，是一套完善的防御机制，故D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查限制酶的特点、功能的相关知识，意在考查学生提取信息、分析推理能力，平时应该加强训练．

A、由以上分析可知，a酶的识别序列有3个，b酶的识别序列有2个，A正确；
B、a酶与b酶切出的黏性末端相同，用DNA连接酶可以将它们连接起来，B错误；
C、限制酶切割的化学键都是磷酸二酯键，C正确；
D、a酶和b酶切割后形成的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可连接形成AGATCC∥TCTAGG或GGATCT∥CCTAGA．所以用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所得DNA分子中AGATCC∥TCTAGG序列会明显增多，D正确．
故选：A．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合图表，考查基因工程的原理及技术，重点考查限制酶的相关知识，要求考生识记限制酶的特点及作用，能比较图中a酶和b酶的识别序列，明确两者切割后产生的黏性末端相同；能分析表中数据，明确a酶有3个识别位点，b酶有2个识别位点，再结合所学的知识准确判断各选项．