PCR扩增一个500bp大小的DNA片段,若用凝胶电泳检测,用多大浓度的琼脂糖凝胶

影响PCR扩增结果的因素请问影响PCR扩增结果好坏的因素有哪些,最重要的因素又是什么呢?可能我问的不是很清楚，其实主要是

影响PCR扩增结果的因素
请问影响PCR扩增结果好坏的因素有哪些,最重要的因素又是什么呢?
可能我问的不是很清楚，其实主要是想问操作中需要注意的事项，引物是已经确定的，呵呵，不好意思，我以前没有做过这方面的实验，觉得有点盲目，请多多指教。

血酬的惆怅1年前3

jeep35702 共回答了20个问题 | 采纳率95%

我个人感觉对PCR影响最大的是模板质量和退火温度,至于其他的影响因素那就太多了,模板纯度浓度,引物质量,体系中的物质（buffer,酶,Mg2+,dntp浓度）,退火和延伸温度.一般来讲,引物从reference上找,然后参照reference上的体系稍作调整即可,有需要直接HI我吧,我不一定在,看到给你回

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在DNA的PCR扩增反应中加入过量的Taq酶会不会发生什么严重的后果?

我不迟钝1年前1

ZITA1021 共回答了16个问题 | 采纳率87.5%

正常情况下如果酶量偏高则会出现很多非特异性扩增,比如引物二聚体、非目的片段等,跑胶的时候也会出现很多乱七八糟的条带,但是如果酶量非常的多,则会对反应产生抑制作用,就像可逆反应一样,酶量太多会抑制反应的正向进行,严重的时候甚至没有目的条带,加酶的时候尽量按照产品说明书去配,这样可以有效避免上述发生可能性.

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一个基因转录后存在不同的剪接体,我需要做反转录PCR扩增该基因所以mRNA,怎么选mRN

4fds51年前2

ruirayshi 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

两种反转录的方法,一种是用oligoT作为引物,把所有的mRNA都反转录了,这个应该是有用的.另一种方法,是用特异性的引物去反转录,这个的话,你要看这种基因的转录后剪切有没有把最后一个外显子切掉的情况,如果没有的话,也是可以用Reverse primer去反转录的.
mRNA的选择方面,只要你提取mRNA的细胞是有这种基因表达,且存在可变剪切的机制,这样提取的mRNA就可以做下一步实验的.

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RT- PCR扩增图分析 为什么出来两条带,是什么原因呢

snoopycaozi1年前1

89911161 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

你把Y轴由对数设置变成线性就是一条了,看这样子是阳性没问题了

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如果PCR扩增实验中PCR产物在琼脂糖凝胶电泳试验中有条带,但是很浅,应该调整那些条件.

jinhewansheng1年前4

iceweier 共回答了23个问题 | 采纳率87%

尝试其他退火温度...有人提了,我就不重复了.
如果没有非特异性条带,可以取4-5ul产物,直接作模板进行2次PCR..

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英语翻译本文通过PCR、转化、提质粒、酶切、连主要接、纯化等步骤构建了质粒pET28a-NULP1.先通过PCR扩增出了

英语翻译
本文通过PCR、转化、提质粒、酶切、连主要接、纯化等步骤构建了质粒pET28a-NULP1.先通过PCR扩增出了nulp1,并将nulp1连接入pMD18-T载体酶切检测并测序,得到正确的nulp1,再将nulp1连接到pET-28a载体,成功构建了pET-28a-NULP1重组质粒.
1楼你纯粹是GOOGLE复制

白玉狐狸1年前2

wuzhiwo 共回答了22个问题 | 采纳率100%

This aritcle through the steps such as PCR,transformation,distilling plasmid,EcoRI,connecting main links,purification and so on,in order to built the plasmid pET28a-NULP1.First,amplifing the nulp1 through PCR,and connecting the nulp1 to the carrier EcoRI pMD18-T then testing and sequencing,when you got the correct nulp1,then connecting nulp1 to carrier pET-28a,built the regrouping plasmid pET-28a-NULP1 successfully.

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PCR扩增出来几条带,怎么改进我扩增的是霉菌18rDNA,大小是1600，PCR体系是50的，条件是94,3min;94

PCR扩增出来几条带,怎么改进
我扩增的是霉菌18rDNA,大小是1600，PCR体系是50的，条件是94,3min;94,1min;55,1min,72,1min,72,10min.30个循环，按道理来说，电泳后应该只有一条带，但我的有四条带，有三条在1000--2000之间，且靠的很近，另一条比2000大，这是怎么回事啊？要怎样改进啊？

ai宝de_缃1年前2

友东 共回答了24个问题 | 采纳率100%

两方面考虑：
1 改善PCR反应条件,从你提供的情况看,55度退火太低.建议做个温度梯度PCR,在55度到67度间,每升高2度,做一个反应.另建议将反应体系设为20微升（温度升降过程易于达到目标值）.
2. 如果通过改变退火温度,仍然达不到想要效果,考虑模板是否合适；此外,建议对引物重新设计,适当增长引物长度,改变引物位置.
考虑到了上述因素,一般来说,没道理做不出一条带的.

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pcr扩增反应中设置延伸的原因

mylovelr1年前1

乔媚娘是个GAY 共回答了12个问题 | 采纳率100%

延伸是给出合成扩增子的时间.扩增子较小时（一两百个碱基对）,很快就能够合成完毕,延伸步骤不是很重要,但是如果扩增子较大（几千碱基对）,则不给出足够延伸时间便无法合成完整的扩增子.合成/扩增速度是看DNA聚合酶的性质.通常建议的设置是眉一千bp给一分钟延伸时间.

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小片段DNA（100-200bp）的PCR扩增

小片段DNA（100-200bp）的PCR扩增
PCR模板是100bp-200bp的片段,用SSR引物扩增的时候,出现的不是单一的目的带,目的带出现的同时还有许多非特异性扩增条带,有时候就是条带扩不出来,对于小片段模板的扩增,怎样能扩出单一条带?

答案无关1年前2

我的uu是笨笨 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%

这个,出现非特异性扩增估计跟模板,引物,以至于反应条件都有关系.
可以减少延伸时间,因为你扩的片段很小,没有必要花很长时间延伸.
我P SSR的程序是94度 35s
55度 35s
72度 45s
前面的预变性和最后的延伸时间都可以随便定,没有严格要求.
如果还不行的话,你可以把模板或者引物换一换,看看有没有效果.

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怎样分析凝胶电泳图像的条带?PCR扩增的目的是什么?

怎样分析凝胶电泳图像的条带?PCR扩增的目的是什么?
带有Marker的电泳图像怎么分析,怎么确定电泳条带中DNA的大小?另外,我们为什么要对少量的DNA进行PCR扩增?以Marker为参照,DNA扩增前后,DNA相对于Marker的位置是同样的吗?

23zt1年前4

公园5 共回答了13个问题 | 采纳率92.3%

你用的应该是DL2000Marker 每一条带都代表一个分子量 看一下目的条带靠近哪条带能估算出分子量
PCR扩增是为了得到目的带 扩大浓度进行后续试验
DNA扩增前后的位置取决于你扩增的目的片段的长度 以及PCR体系是否合理

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高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列

高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列
1 ttgtaaaaaa attaaattaa taagaaatta aatgagatca ttaaatttag ataatttggc
61 ggtattttaa atagttagag gaatttgtca gttaaatgat actccacgag tggaatgtcc
121 tagtgaagtt tttatgtatt gttgtataaa aattatttta taagaattat aattaaaata
181 tttaatttaa tttgaattca aatcaaaatg tagaattatt agggttagat gaattacaat
241 ttaatttaac attggagtta tttttttaat taaaataata aaaaaggatt taaaagtaaa
301 tttaagtaaa tatttaaatt gaaatattaa ttaaaatatg

树梢上的麻雀1年前2

cte7 共回答了10个问题 | 采纳率90%

F Primer:5'- TTG TAA AAA AAT TAA ATT AA-3'
R Primer:5'- CAT ATT TTA ATT AAT ATT TC -3'
你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很容易自我折叠或者与DNA链产生非特异性结合,所以强烈建议将引物至少设计在20bp以上,最好可以到30bp.

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应用PCR扩增来鉴定细菌是为什么要进行凝胶电泳?

小南20031年前4

风雨飘零_ 共回答了26个问题 | 采纳率100%

电泳后的迁移距离对照参照marker可以用来确定片段长度,以此来进行鉴定

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组织提取的cDNA和细胞提取的cDNA用同一引物PCR扩增出来的条带长度不一样,是什么原因?有什么方法改进吗

狐眼看世界1年前1

vavaww 共回答了15个问题 | 采纳率100%

　　这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式（alternative splicing）,所以产生的不同的模版cDNA.你先查查ncbi看看你要检测的基因有几种mRNA.

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组蛋白基因指的是什么?组蛋白基因作为引物,进行PCR扩增,进行分子系统学的研究,有什么意义?

抛洒梦想1年前1

lingjiaxin1985 共回答了10个问题 | 采纳率80%

组蛋白基因(histone gene)
组蛋白基因在各种生物体内重复的次数不一样,但都在中度重复的范围内.通常每种组蛋白的基因在同一种生物中拷贝数是相同的.鸡的基因组中组蛋白基因有10个拷贝,在哺乳动物中为20拷贝,非洲爪蟾为40拷贝,而海胆的每种组蛋白的基因达300-600拷贝.不同生物中组蛋白基因在基因组中的排列不一样,组蛋白基因没有一定的排列方式,而在拷贝数高的基因组中（>100拷贝）,大部份组蛋白基因串联重复形成基因簇.

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请问博凌科为的高保真PCR扩增试剂盒有哪些特点?

wang755cn1年前1

唠叨的猪猪 共回答了12个问题 | 采纳率100%

博凌科为的高保真PCR扩增试剂盒提供DNA高保真扩增所需要的基本试剂.DNA扩增时,用户需要自行准备模板和扩增所需要的引物.高温嗜热Pfu DNA聚合酶主要用于对保真度要求非常高的DNA扩增,这些扩增要求扩增的产物中不能出现突变等错误.Taq DNA聚合酶的扩增性能很强,但是用Taq扩增的PCR产物中有难以避免的随机突变.Pfu DNA聚合酶除了5′-3′的聚合特性外,还有3′-5′端外切酶活性,具有校正DNA扩增过程中突变.Pfu DNA的长片段扩增的能力不及Taq DNA聚合酶,客户如果用于长链PCR扩增,可选用本公司的Long Taq或者Taq Plus DNA 聚合酶.

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（2012•泰州一模）重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而

（2012•泰州一模）重叠延伸pcr技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次pcr扩增，从而获得目的基因的方法．该技术在扩增较长片段的dna、不同来源的dna片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景．如图是利用重叠延伸pcr技术扩增某目的基因的过程．其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物（图中引物2、引物3），分别pcr，获得有重叠链的两种 dna片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因．结合所学知识，分析下列问题．

（1）引物中g+c的含量影响着引物与模板dna结合的稳定性，引物中g+c的含量越高，结合稳定性______．
（2）在第一阶段获得两种具有重叠片段dna 的过程中，必须将引物l、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为______．
（3）引物l、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，***生______种双链dna分子．
（4）在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链dna至少要经过______次复制．
（5）若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：______、______、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因．

米奇C1年前1

爱吃青菜的虫 共回答了23个问题 | 采纳率91.3%

解题思路：PCR技术进行的条件有：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定性的DNA聚合酶，所运用的原理为DNA分子的复制，遵循碱基互补配对原则．而在DNA分子中C-C之间有三个氢键，能增强DNA分子结构的稳定性．

（1）由于一个C-C之间有三个氢键，而一个A-T之间有两个氢键，所以引物中C+C含量越高，引物与模板DNA的结合就越稳定．
（2）从图中可以看出，引物2和引物3相应的碱基之间可以进行配对，所以如果将引物2和3放在一个反应系统中，则会引起引物2和3 的失效．
（3）两个反应系统中各自形成两种DNA分子，但由于引物1和引物4形成两个与原DNA相同的DNA分子，所以含有引物1和4的DNA属于同一种DNA，故总共形成三种DNA分子．
（4）第一次复制形成的两个DNA分子分别含有引物1和引物2，图中第一阶段形成的DNA分子同时具有引物1和引物2，图示双链DNA分子至少要经过第二次复制才能形成．
（5）利用微生物扩增该目的基因，需要将目的基因导入受体细胞，而导入受体细胞首先要将目的基因与载体结合．
故答案为：（8分）（每空1分，特殊说明除外）
（1）越高 （2）引物2和3中存在互补配对片段，置于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用
（3）3 （4）2 （5）目的基因与载体结合（2分） 将重组DNA导入受体细胞（2分）

点评：
本题考点： PCR技术的基本操作和应用．

考点点评： 本题考查了PCR技术的相关知识，意在考查考生的分析能力、从题中获取有效信息的能力、理解所学知识要点，构建相应知识框架的能力，难度适中．

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RT-PCR扩增条件问题我是做real-timePCR,需要测定六个基因的mRNA表达差异.这六个基因我是分开来扩增的,

RT-PCR扩增条件问题
我是做real-timePCR,需要测定六个基因的mRNA表达差异.这六个基因我是分开来扩增的,因为样本太多.每个样本都达到了平台期的,并且我所加的mRNA的模板数、引物量、dye、mix都是一样的.但是我在扩增的时候,为了达到最大的扩增效率,这六个基因我都分别采取了不用的扩增温度、循环数,这样各组得出来的CT值具有可比性吗?期待尽得到答复,谢谢……

1654781年前1

malan868 共回答了11个问题 | 采纳率90.9%

应该可以,CT只是和你初始的mRNA表达量有关,当然的是在各种酶和原料充足的的情况下,和循环次数没什么关系 不过有问题的就是你的荧光蛋白发光会受到温度影响的,你只能大概的比较下,表达量大的话还好,如果差异小的,建议重新做一下

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如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物

tepcshixinshagua1年前3

luckyzero 共回答了22个问题 | 采纳率95.5%

把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度） 延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因,引物必须要在起始密码子之前,或包含起始密码子.最后加上酶切位点就可以了.

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PCR实验技术急切求知：真菌18S rDNA ITS序列PCR扩增实验原理?

独行天下zcm1年前1

p879 共回答了17个问题 | 采纳率100%

给楼主找了个PCR技术指导,希望有点帮助 http://bbs.biogo.net/read.php?tid=56483&keyword=PCR%BC%BC%CA%F5

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pcr扩增时用矿物油或其它物质封液的目的是什么?

suzhihua1231年前3

作家rrrr 共回答了19个问题 | 采纳率89.5%

有些PCR仪盖子的温度性能不好,PCR管的密封性能不好,PCR管盖子没盖严等都会造成管内物质的蒸发,跑光了就没有产物了,实验也就失败了,因此用矿物油封液,防止挥发

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10×PCR扩增缓冲液中的10×是什么意思?

集结一号1年前2

zhk927 共回答了28个问题 | 采纳率78.6%

生物化学中用的试剂,标 N× 就是说用的时候要在体系中稀释到N倍体积,比如 10× PCR buffer 就是每 50μL体系总体积中添加 5μL 即可.

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PCR扩增后的目的基因如何提取分离?对阳性克隆中的目的基因又如何提取分离?

莎尔娜1年前2

nuo_chen 共回答了20个问题 | 采纳率90%

PCR扩增的目的基因可以跑电泳后,把目的DNA带纹切下来,回收就可以了；
阳性克隆的目的基因,可以先对这个克隆液体培养后提取质粒（如果是重组在质粒载体上的）或染色体（如果是YAC之类的）,酶切后电泳,回收.
这个有专门的回收试剂盒,很方便的.

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普通PCR扩增反应是否可以消除DNA甲基化?

普通PCR扩增反应是否可以消除DNA甲基化?
换句话说,就是PCR产物是否不含甲基化?

丁香千千结1年前1

又蜘蛛往 共回答了27个问题 | 采纳率77.8%

可以的.
普通的PCR反应是不会把甲基化修饰加上去的,你可以利用这个特点消除甲基化.

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请问PCR扩增中加入引物有什么用?

抓鱼的刀1年前1

sk198818 共回答了20个问题 | 采纳率90%

1,这是由DNA聚合酶决定的.DNA聚合酶只能在具有前端片段的情况之下,才能够顺着这个片段合成下去.所以一定要有引物作为DNA聚合酶的引导片断.
2.引物结合在DNA的什么位置决定了要扩增的部分.因此引物根据双链互补的原则设计出来,从而确定DNA扩增的区域.

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引物是否只是PCR扩增中的目标链,它与扩增产生的DNA链序列有什么区别?

朝天两棍1年前1

舒密伽 共回答了20个问题 | 采纳率90%

引物是核算复制的起点片段,体内是RNA,PCR技术使用的是DNA片段,将来成为扩增之后的DNA组成部分,位于其一端,引物的量决定扩增所达到的DNA量

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PCR扩增时,引物是否插入载体后再复制?

天上mm1年前2

hbbfwx 共回答了14个问题 | 采纳率78.6%

pcr是体外扩增,没有载体,你以为是在细胞里面呀,PCR体系温度变性时94℃,40秒蛋白质早就变性了,
PCR是引物直接开始和模板DNA结合,在taq酶作用下延伸.我这两天正在做这个实验呢.没错!

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琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?实验首先是用PCR扩增DNA片段,然后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量,结果失败了,EB染

琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?
实验首先是用PCR扩增DNA片段,然后用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物的量,结果失败了,EB染色后凝胶上没有出现亮带.请教各位牛人这些步骤里面可能出现问题的在哪里?

傻瓜6661年前3

cns1ck 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

可能性太多了.
1.你跑胶一般都要放MARKER或者叫DNA LADDER吧,这个MARKER除外对DNA标记大小以外,还可以用来监控ELECTROPHORESIS的质量,如果MARKER显示而DNA没显示,说明ELECTROPHORESIS正常而DNA有问题,如果MARKER和DNA都没有显示,说明是你的电永出现了问题.
ELECTROPHORESIS的可能问题有,1.ELECTROPHORESIS BUFFER浓度问题,2.BUFFER太陈旧了从而失效 3.跑过了（根据SIZE来看）
2.如果证明是DNA复制也就是PCR的问题,可能性就太多了.
具体包括你所使用的PCR
BUFFER：浓度问题（需要1X）,盐析问题（有时候放置太久其中的SALT会析出,溶解不透彻就会失效）,氯化镁浓度问题.
DDNTP：浓度问题（可能配得浓度不够）,陈旧性问题.
TAQ：你的酶有可能失效.
PRIMER问题：你的PRIMER可能NOT WORK.也可能你的ANNEALING TEM有问题,初次使用PRIMER的时候建议作温度的GRADIANT TEST,测试最佳ANNEALING TEM.PRIMER也可能太陈旧了,浓度或高或低.PRIMER容易行程DIMER.
PCR PROGRAMME的设置问题：这个最简单,建议仔细过一遍.
总之,如果是PCR的问题,建议每次保持其他不变,只改变其中的一项来把问题找出来,另外提醒你最好要作POSITIVE 和NEGATIVE CONTROL.

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PCR扩增时为什么需要引物呢?

神的耳语1年前3

玩火的女子 共回答了21个问题 | 采纳率85.7%

因为DNA聚合时需要3‘OH,这个只能由引物提供（没原因,就因为是那样）.这个引物是一小段RNA ,引物绝对是RNA,而不是DNA.看看DNA复制需要什么酶就知道了,需要依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP）如果是DNA,那么复制的时候要引物干什么呢?我直接用互补脱氧核糖核酸就完了,干嘛还弄一引物,然后复制完再水解掉?本人生化学的还是不错的,别人都说难,我也不觉得.

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可以请你回答一下怎样对一个样本做PCR扩增吗?）

Findbug1年前1

hutingtingst 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%

提取样本的基因,作为模板,加dNTP、酶、Buffer、灭菌水等,放到PCR里跑,

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PCR扩增电泳后为什么没有条带呢

嘻哈bright1年前1

wmf1982 共回答了24个问题 | 采纳率95.8%

因素很多~是不是忘加东西啦~模板浓度会不会太浓或者不够啊,是不是需要纯化啊~退火温度合不合适啊~是不是要换酶啊~mg离子浓度啊~具体问题具体分析~先跑个温度梯度吧~

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在PCR扩增试验中,加入一种模版DNA片段,但实验得到的产物却有2中DNA.原因是什么?

在PCR扩增试验中,加入一种模版DNA片段,但实验得到的产物却有2中DNA.原因是什么?
A基金突变 BTaqDNA聚合酶发生变异 C基因污染 D温度过高 顺便写出原因好吗,谢啦

zhangc_com102101年前1

fomo 共回答了18个问题 | 采纳率83.3%

D错 因为温度过高会使DNA变性所以不会有2种DNA C错 因为基因污染结果只会是有或没有DNA产生不会有2种DNA C错 因为TAQ酶如果变异结果也只会是有或没有DNA产生不会有2种DNA 所以A对 基因突变会使其基因序列或碱基发生变化所以有可能.

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PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?

PCR扩增时RNA引物序列设计时,引物序列是与目标基因前的序列互补呢,还是与目标基因互补?
就是说引物序列与目标基因是否有交叉?
如果引物是和其始、终止序列互补设计，而不是与目标基因的前后序列设计，那么当我们最后酶切除引物的时候，基因的序列不就不完整了吗？

蝶起1年前1

aizsq 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

特定的引物决定了所扩增的DNA片断.引物是人工合成的短DNA片断,一般不超过50个碱基(通常18－25个),它们与所要扩增的DNA片断的起始和终止区域完全互补.在“退火”时引物结合于DNA模板的起始和终止点,DNA聚合酶结合到这两个位置,开始合成新的DNA链.
(在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上叫"退火")

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要用PCR扩增下图所示的两段序列之间的DNA,请从所列出的引物中选出合适的一对.

要用PCR扩增下图所示的两段序列之间的DNA,请从所列出的引物中选出合适的一对.
5’-GACCTGTGGAAGC----------------CATACGGGATTG-3’
3’-CTGGACACCTTCG-----------------GTATGCCCTAAC-5’
引物 1 引物2
1) 5’-CTGGACACCTTCG 5) 5’- GTATGCCCTAAC
2) 5’- GCTTCCACAGGTC 6) 5’- GTTAGGGCATAC
3) 5’-CGAAGGTGTCCAG 7) 5’-CAATCCCGTATG
4) 5’- GACCTGTGGAAGC 8) 5’- CATACGGGATTG

醉是那朵茉莉1年前1

我为球狂168 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

4,7
按照碱基互补配对原则
3’-CTGGACACCTTCG 目的DNA
5’- GACCTGTGGAAGC 引物

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PCR扩增实验时试剂的加入为何要从少到多

猛爆王1年前1

bangduozhen 共回答了14个问题 | 采纳率92.9%

其实做PCR时,一般是先加水,然后buffer、mg2+、dntps、引物、酶,分装后再分别加模板

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PCR扩增抗除草剂基因为什么是克隆?

139513906991年前2

就看帅哥 共回答了17个问题 | 采纳率76.5%

生物上克隆包括分子水平、细胞水平、个体水平的克隆,PCR扩增基因属于分子水平上的克隆

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如何对PCR扩增的产物进行酶切?

foreverhf02241年前1

轻骑兵的战役 共回答了21个问题 | 采纳率95.2%

Fermentas公司的研究表明,限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性,可以通过稀释（3倍以上）扩增混合液,适当提高酶量和反映时间,进行酶切.个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了或基因表 型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度（37度或更高）下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一 定的程度上表现出来,可能会影响到酶切产物末端的正确性.结果是要么装不上去,要么装上去切不下来,测序发现末端引物碱基少了.正确安全的做法是先通过琼 脂糖电泳回收产物,然后酶切,酶切可以适当提高酶的用量.

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对PCR扩增的产物进行酶切的方法?

圣殿追逐1年前1

湘皖婷1 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

Fermentas公司的研究表明,限制性内切酶在 PCR扩增体系中仍然有部分活性,可以通过稀释(3倍以上)扩增混合液,适当提高酶量和反映时间,进行酶切.我个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了克隆或基因表型分析,由于Taq,Pfu等高温聚合酶在酶切温度(37度或更高)下,仍然保持一定的活性,高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一定的程度上表现出来,可能会影响到酶切产物末端的正确性.结果是要么装不上去,要么装上去切不下来,测序发现末端引物碱基少了.正确安全的做法是先通过琼脂糖电泳回收产物,然后酶切,酶切可以适当提高酶的用量.一般的做法是从50ulPCR反应中回收的产物,溶解于45ul水中,加入酶,酶切后的产物通过从溶液中回收DNA的方式直接回收,不需要跑琼脂糖电泳.

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PCR扩增技术与体内DNA复制的区别

248621061年前1

819kk76 共回答了15个问题 | 采纳率86.7%

有关PCR
PCR是高温解旋
体内用的是DNA解旋酶

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PCR扩增技术中“引物”的作用是什么?其复制方向是由“5,3”还是“3,5”?

又龙又贝1年前2

jikyhew 共回答了12个问题 | 采纳率91.7%

http://baike.baidu.com/view/352480.htm

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PCR扩增实验之后,产物用琼脂糖凝胶电泳,为什么看不到光带?添加试剂没有问题

yizhi11年前5

chenchen0099 共回答了10个问题 | 采纳率100%

实验有没有跑标准分子量DNA Marker?如果Marker电泳后条带正常,那么就是PCR无扩增条带；如果Marker也看不见,那就是配胶有问题,或者配胶用的试剂（比如染料）有问题

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做细菌pcr扩增的时候,琼脂糖电泳在100到250之间有亮条带,但是在250到500之间多出了一亮条带,这是怎么回

wtianqya1年前2

laogongaiwo123 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

那是非特异性扩增片段,因为你使用的引物不光扩增了你的条带,还复制了其他一段DNA,只要非特异性扩增不是很强你也不是做qPCR,基本没有影响的,做PCR常会遇到.

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关于pcr扩增上游引物扩增到什么地方终止,怎么终止是上游引物选扩增模板,然后下游引物以新合成的模板为模板扩增?

carol13951年前1

如是忘了多好 共回答了21个问题 | 采纳率90.5%

DNA有终止子的,扩增到终止子的地方就停止了.具体终止子怎么把它终止的,看生化课本吧.不同物种的DNA也不一样.
一般给你碱基序列的那条模板,假设为A链,它的互补链是B链.
第一次延伸：上游引物是识别B链往下延伸的,它延伸出来的碱基序列跟A链一样.下游引物是识别A链往下延伸,它延伸出来的序列跟B链一样.
5'----------------3’A
3------5 上游引物
下游引物5------3
3'----------------5'
第二次延伸：新合成的链同原始的模板一样也可作为模板扩增.

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PCR扩增中需要能量吗?

中大垃圾1年前3

fengye4400 共回答了16个问题 | 采纳率100%

PCR扩增中需要能量,因为需要外界能量断开DNA分子内的氢键.
❤您的问题已经被解答~(>^ω^

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为什么PCR扩增循环数30次为宜?

fgetzg9l1年前2

406006311 共回答了33个问题 | 采纳率90.9%

一般情况下,循环30次产生的基因片段就够用了,在进行下去酶的活性可能也不会太好

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筛选引物PCR扩增后变性聚丙烯酰胺跑不出条带,或条带模糊,是怎么回事?

xxm3051年前3

大土炮 共回答了23个问题 | 采纳率91.3%

首先我想问问pcr的产物不都是跑agarose胶吗?你怎么跑变性聚丙烯酰胺胶呢?
如果是agarose胶,跑不出来,你有没有做阳性对照啊?你的pcr work不work啊?可能是pcr就不work呢?然后你pcr的产物是如何保存的?如果放在4度时间长了,是会降解的.就是出现条带模糊.或者是你agarose胶融的不好?

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博凌科为的长片段PCR扩增试剂盒

咬一口mengmeng1年前1

爱梦笑 共回答了19个问题 | 采纳率94.7%

长片段PCR扩增试剂盒所用的酶是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶,这种混合酶可以染色体和其它细胞器的DNA为模板高效进行PCR反应.在人的染色体上可以扩增出27kb的DNA片段,而以DNA为模板则可以扩增出40 kb的片段.
质量控制：每批长片段PCR扩增试剂都进行功能测试,常规条件下可以用特异性引物从λDNA上扩增出30 kb的片段.
一般建议：
长片段PCR扩增试剂盒可以很稳定的扩增出终长度小于1 2 kb的片段位口基因组DNA）；当扩增片段终长度在12～20 kb时（如基因组DNA）,那么模板质量,变性条件和恰当的dNTP/Mg离子浓度等相关条件对于实验结果非常关键；如果扩增片段总长度大于20kb,则操作条件需要进步优化.
注 意：
※ 对于长片段扩增,请使用薄壁PCR管.
储存条件：
-20℃一年有效

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PCR扩增过程中,生成的扩增片段大小一样吗?如果不一样,是否影响扩增片段的纯度?

znwll1年前1

paddy_84 共回答了20个问题 | 采纳率100%

如果引物特异性比较高,模板比较纯的话产物也是一样的,如果担心有其他的片段,可以用第一次PCR产物稀释后作为模板继续PCR,这样就能得道比较纯的产物了.

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在PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳实验中,如何知道所观察的样品在电泳过程中的大概位置

今天看了1年前1

speedis11 共回答了15个问题 | 采纳率66.7%

看溴酚蓝作为指示,溴酚蓝大概跟250bp的条带位置差不多,如果你的条带长度短于250bp,那么溴酚蓝跑到胶的一半长度就可以拍照了；如果你的条带长度大于250bp,那么溴酚蓝跑到胶的三分之二或者四分之三位置就可以拍照了.主要看你经验,多跑几次就有感觉了.

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在基因进行PCR扩增过程中涉及到哪些要素?其中哪些因素决定了PCR的效率?

lvgirl1年前1

198759 共回答了18个问题 | 采纳率88.9%

预变性
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟.
变性步骤
循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可 缩短该步骤时间
变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败.
引物退火
退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度.然后在此次实验基础上做出预估.
引物延伸
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）.
循环数
大多数PCR含25-35循环.
最后延伸
在最后一个循环后,反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链.——————————————————————————————————————————
如果进行PCR首先确定的是底物的纯度,苯酚有报道称会印象PCR过程.
引物就不多说了,退火温度对PCR的特异性有较大影响.延伸时间要看扩增片段长短,循环数不能太多要不非特异性扩增太多.

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