融合蛋白表达法的优缺点是什么?

GST标签太大了,HIS小,但是估计没GST好纯化,我用的是HIS标签,结果,总有两个杂蛋白去不掉,挺郁闷,上AKATA效果也不怎么好如果多个大个的GST不影响你蛋白活性的话,那GST吧.

0.05 M EDTA(pH8.0)
组份浓度：0.05 M EDTA
配制量：1 L
配制方法：
1.称取18.61 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中.
2.加入约800 ml的去离子水,充分搅拌.
3.用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH).
注意：pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解.
4.加去离子水将溶液定容至1 L.
5.适量分成小份后,高温高压灭菌.
6.室温保存.
溶解的时候一定要注意调pH值,否则很难溶.也可配成10×或20×的母液储存.方法同上.

根据目的基因序列设计引物；PCR目的基因片段；跑胶,产物回收,纯化；连接T载体（如PMD18t）；转化宿主菌；筛选单克隆；测序；大量培养,提取重组质粒；酶切,电泳,回收,纯化,连接表达载体（如pET系列）,转化；筛选单克隆；酶切鉴定,测序；诱导表达；裂解细胞；过Ni亲和层析；注意：可溶蛋白和包涵体处理根据实验目的是不一样的.若对蛋白纯度不满意可以综合使用其他分离技术,如离子交换树脂等.如his标签影响蛋白活性可切除,此外如果目标蛋白活性较低或失活,可以共表达一些其他蛋白（如分子伴侣等）.若蛋白活性需要糖基化则应该考虑真核表达系统.总之,没有一种表达体系能够完美表达每一种蛋白,根据目的蛋白的结构（是否有稀有密码子、二硫键、糖基化、膜蛋白、复杂折叠、其他翻译后修饰系统）来选择合适的系统,才能达到理想的目的.

如果只要蛋白,不需要GST Tag,就挂柱子,用凝血酶把蛋白切下来.
如果需要tag,可以用分子筛分离.

GFP还是相当稳定的.
体外不太容易降解,体内降解的半衰期也蛮长的.

gst融合蛋白是将谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase）与目标蛋白做成融合蛋白的方式在外源表达
His-tag融合蛋白是六个连续组氨酸标签与目标蛋白做成融合蛋白的方式在外源表达

是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子.由于最初是由白细胞产生又在白细胞间发挥作用,所以由此得名,现仍一直沿用.白细胞介素interleukin缩写为IL.关于免疫反应的表达和调节,有来源于淋巴细胞或巨噬细胞等...

GST标签可以增加可溶性,同时避免目的蛋白降解

一抗要抗小鼠要适合做western
二抗要抗一抗,要有HRP
不知道你的什么融合蛋白,你也可以抗你融合上去的tag.

我利用盐酸胍裂解了融合表达的包涵体蛋白然后亲和纯化,现在想要脱盐处理,不但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0

加上前面的融合肽以及终止子之前翻译的一个肽段，最终表达的蛋白分子量是59KD左右

A recombinant protein can be tagged N-terminally or C-ternimally with a 6XHis tag. This tag is better in prokaryotic system rather than mammalian system. 6X His tag is an affinity tag which allows the tagged recombinant protein to be purified in the process of affinity purification. 6XHis tag binds to NTA-agarose. The resin contains nickle ions which binds to Histidine tag.

差减：你手上有2张指纹图谱,一张是有目的蛋白的,一张没有,2张图叠加,剔除共同拥有剩下来的就是目的蛋白的