求西野カナ 会いたくて 会いたくて的日文歌词+中文歌词+罗马音

歌名：lonely歌手：Nana编者：思露花雨I am lonely lonely lonelyI am lonely lonely in my lifeI am lonely lonely lonelyGod help me help me to survive!Remember first time we met day oneKids in the garden" playin" games heaven" funExcitin" and amazin" havin" a real friend of mineFeel my heartbeat and for real friend of mineFace to face and eye to eyeUsin" our hands to buy and supplyChillin" is cool from january to juneAnd we still stiked together like the glueAnd know the rulesForever you and I and believe it was clearIf I ever should fall I could count on you with no fearRunnin" out of time I see who"s fakeAlone without protection from all them snakesAll for one one for all I was toldBlack white yellow no matter if your young or oldNana"s in the house to let you knowWhat I see is how I fell and damn I"m aloneI am lonely lonely lonelyI am lonely lonely in my lifeI am lonely lonely lonelyGod help me help me to survive!Everybody"s tripppin" on meOh lord come help me pleaseI did some bad things in my lifeWhy can"t you rescue me "cause you"ve got all I needI know I got to pay the priceTaht"s why I"m lonely lonely lonelyI"m so lonely lonelyTaht"s why I"m lonely lonely lonelyCheppin" thru the streets at night after a fuss and fightTears in my eyes I"m a man lookin" for the lightDark is the path I know he will rescue meThe lord is my shepard I"m cool despite emergencyWhom shall I fear exept the godThank you for the blessin" and the skils on the micFive years we know there"s no diggityFree at last see the light in meWhat goes up must come downI"ll be around while you heading towards deathtownAllways look forward hardly never look backSo many tears and the snakes on my jockNow I"m riding in my big fat rideYour ass is late so look for the lineNana in the house to let you knowWhat I see is how I feel so leave me aloneI am lonely lonely lonelyI am lonely lonely in my lifeI am lonely lonely lonelyGod help me help me to survive!Everybody"s tripppin" on meOh lord come help me pleaseI did some bad things in my lifeWhy can"t you rescue me "cause you"ve got all I needI know I got to pay the priceKnock on my door whom you lookin" forA dream or reality enemies at my doorEyes I realize it"s fantasize I must be highSo let me live before I dieOnce again grab the bottle twist the cap to surviveYour life is yours my life is mineNo emotions in this world full of liesStep by step and be versatileLove peace and cash that"s what is"s all aboutAlone by yourself than you lack there"s no doubt aboutI"m always into something making moves to improveWhat would you do if you were in my shoesBoom a letter oops another suicideMeet me for a ride at the boulevardNana"s in the house to let you knowWhat I see is how I feel and damn I"m aloneI am lonely lonely lonelyI am lonely lonely in my lifeI am lonely lonely lonelyhttp://music.baidu.com/song/54079422

RAY~~

STARS - LEYONA 酷我音乐盒有资源

更新1: 抱歉，是六个中文字组合而成﹗ misono hitomi RYTHEM HAYATO (市原隼人) TOMIKO (伴都美子) HARUKA (绫瀬はるか) MASAMI (长泽まさみ) RYOHEI (千叶凉平@w-inds.) YUSUKE (伊崎右典@FLAME) HISATO (伊崎央登@FLAME) HIROKI (中土居宏宜@Lead) SHINYA (谷内伸也@Lead) TEPPEI (小池彻平@WaT) MISAKO (宇野実彩子@AAA) CHIAKI (伊藤千晃@AAA) YUKARI (后藤友香里@AAA) HIROKO (阿久津博子@mihimaru GT) MIYAKE (三宅光幸@mihimaru GT) TACKEY (滝沢秀明@タッキー&翼) 够唔够? =____=` 2007-03-27 23:10:07 补充： 等我仲谂左咁多个...中文我净系识呢两个 = =佐々木蔵之介大久保麻梨子 参考: 自己 takuro(Glay) tomoka(ZONE) mizuho(ZONE) sakura miyavi hitomi ...... 参考: / showta SOPHIA Leyona hitomi

是徐贤的我会等你，QQ音乐有的。少女时代的徐贤——最好听的那首片尾曲

2011年9月11日，AKB48的第22张单曲“飞翔入手”剧场版握手会发表了组合将成立的消息。9月中旬，开始招募一期生。11月2日，一期生初披露，共28名2012年1月14日，《Heavy Rotation》MV发布会召开2月11日，《Ingin Bertemu》电视初披露2月13日，研究生Intania Pratama Ilham和Siti Gayatri毕业。2月15日，Melody Nurramdhani Laksani参与AKB48单曲《NEW SHIP》录制并担任Centre。3月10日，《Karena Kusuka Dirimu》电视初披露。4月15日，初冠番《JKT48 School》开始放映5月10日，研究生Allisa Astri和Fahira毕业7月9日 ，《Ponytail dan Shu-shu》电视初披露。7月11日，官方粉丝俱乐部设立发表。7月17日，RCTI的广播节目“Mega Konser JKT48”中出演，披露了10曲。 8月23日，AKB48成员Aki Takajo（高城亚树）、Haruka Nakagawa（仲川遥香）移籍至JKT48。 9月8日，雅加达市内的商场u30fbFX内的专用剧场开张。11月4日，2期生披露，共31名。11月25日，Neneng Rosediana毕业。12月10日，Cleopatra辞退。12月23日 ，Team J成立，共有23名成员，队长为Devi Kinal Putri。12月24日，为配合新专辑《Heavy Rotation》发售，举办了免费派发10万张CD的宣传活动。 2013年1月10日，研究生Althea Callista和Nurhalima Oktavianti辞退。1月11日，Team J成员Alissa Galliamova毕业。2月16日，第一张专辑《Heavy Rotation》发售。4月12日，研究生Olivia Robberecht辞退。4月28日，成员Aki Takajo兼任AKB48 Team B。5月11日，第一张单曲《RIVER》发售。6月18日，宣布了Team J成员Rena Nozawa（野泽玲奈）兼任AKB48的消息，但具体队伍所属尚未宣布。 6月23日，开始了首次巡回演唱会“Perkenalkan, Nama Kami JKT48”。6月25日，Team KIII成立，共有18名成员。7月3日，第二张单曲《Apakah Kau Melihat Mentari Senja?》发售；演唱会会场发表了Team KIII的队长为Shinta Naomi。7月4日，巡回演唱会“Perkenalkan, Nama Kami JKT48”结束。7月6日，发售公演DVD《Pajama Drive Gen1+2》，同时收录一期生公演CD。8月21日，与AKB48同日发售单曲《Fortune Cookie Yang Mencinta》。8月26日，成员Melody Nurramdhani Laksani受邀担任日本冈山县水果大使一职，次年连任。 9月1日，成员Rena Nozawa兼任AKB48 Team K。 9月9日，Team KIII Intar Putri Kariina和研究生Annisa Athia辞退。10月30日，成员Melody Nurramdhani Laksani的首本solo写真《The Natural Face of Melody》发售。11月6日，Team KIII为在印尼上映的动漫电影《口袋妖怪》演唱片尾曲并进行相关的宣传活动。 11月26日，第四张单曲《Musim Panas Sounds Good!》发售。11月30日，研究生Dellia Erdita和Nadhifa Karimah辞退。12月7日，演唱会《Perkenalkan, Nama Kami JKT48》DVD发售。12月21日，公演《Aturan Anti Cinta》、《Matahari Milikku》DVD发售；举办2周年纪念演唱会“JKT48 2nd Anniversary Live in Concert ‘Performing All Out! Terima kasih telah menjadi temanku"”，并宣布Melody Nurramdhani Laksani成为JKT48总队长。12月22日，Team J Diasta Priswarini和Sonya Pandarmawan毕业。12月28日，Team J Stella Cornelia毕业。2014年1月17日，成员Jessica Veranda的首本solo写真《J.V.u301cOSHAREu301c》发售。1月23日，Team KIII Octi Sevpin辞退。2月16日，Team J Cindy Gulla毕业。2月23日，Jennifer Rachel Natasya和Thalia Lvanka Elizabeth升格至Team J。2月24日，在AKB48大组阁祭中宣布了Aki Takajo解除JKT兼任、Rena Nozowa移籍至AKB48以及AKB48成员Rina Chikano（近野莉菜）以及至JKT48的消息 2月27日，成员Nabilah Ratna Ayu Azalia的首本solo写真《OTENBA u301cCheerful Girlu301c》发售。3月5日，第五张单曲《Flying Get》发售，并宣布了JKT48将举办总选举的消息。 3月15日，举办了”Flying Get 发售纪念演唱会“；JKT48 6th单曲选拔总选举第一次中间发表，第一名为Melody Nurramdhani Laksani；3期生初披露，共32名。3月24日，研究生Pipit Anandah辞退，同时退出总选举。3月25日，JKT48 6th单曲选拔总选举第二次中间发表，第一名仍为Melody Nurramdhani Laksani。4月26日，举办了“JKT48 6th单曲选抜总选举u301c由大家决定的、16名选拔成员u301c　重要的事要由大家决定!”（u301cみんなが决める，16人选抜メンバーu301c　大事なことはみんなで决めよう!）（第一届单曲选拔总选举）开票仪式。总队长Melody Nurramdhani Laksani获得第一名，同时取得了第六张单曲的中心位置。而Haruka Nakagawa与第二名Jessica Veranda相差九票位居第三。 5月18日，第六张单曲《Gingham Check》握手会初披露；同时二期研究生全体升格。6月5日，以JKT48为背景的电影《Viva！JKT48！》上映。。6月8日，成员Haruka Nakagawa在个人G+上宣布将作为JKT48成员一直活动到毕业。6月11日，第六张单曲《Gingham Check》，同时举办了举办了”Gingham Check 发售纪念演唱会发售“。6月21日，开始第二次全国巡回演唱会。6月25日，Team KIII举办了独自演唱会并披露了新歌。6月30日，印尼斋月第二天，Haruka Nakagawa及Nabilah Ratna Ayu Azalia开始不定期出演综艺节目《Ini Talkshow》的斋月特别版《Ini Sahur》。该节目除了主持人Sule的魅力外，JKT48成员的出演也令人期待。由于该节目在印尼影响力巨大，使得Haruka知名度大升，成为斋月内全团电视登场次数最多的成员，甚至登上世界话题热门。7月6日，成员Melody Nurramdhani Laksani连任担任日本冈山县水果大使一职，与部分成员在日本开始了为期四天的宣传活动。8月11日，Haruka Nakagawa再次登场印尼综艺节目《Ini Talkshow》，由于斋月内Haruka出演该节目得到极大的支持与反响，此后Haruka成为该节目的不定期常规出演。研究生Shaffa Nabila毕业。8月27日，第七张单曲《Papan Penanda Isi Hati》发售。10月4日，演唱会《JKT48 2nd Anniversary Live in Concert ‘Performing All Out! Terima kasih telah menjadi temanku》DVD发售。11月8日，公演《Demi Seseorang》、《Gadis Gadis Remaja》DVD发售11月22日，研究生Kezia Putri Andinta和Milenia Christien Glory Goenawan毕业12月7日，在握手会上宣布JKT48将成立首个衍生组合，同时公布成员。公演《Aturan Anti Cinta》、《Matahari Milikku》CD发售。Team J Rica Leyona毕业。12月20日，印尼电视新闻上播出了成员NabilahRatna AyuAzalia将要主演恐怖电影《Wewe…》的消息，预定于2015年4月上映。12月24日，第八张单曲《Angin Sedang Berhembus》发售12月26日，研究生Zebi Magnolia Fawwaz毕业。12月27日，举办了三周年纪念演唱会。初日，衍生组合正式出道并在推特上募集组合名称，演唱会即将结束之际AKB48成员高桥南及JKT48前成员Diasta Priswarini发来祝贺vcr。同时发表了JKT48将推出首部纪录片以及初期冠名番组《JKT48 School》DVD化的消息。12月28日，三周年纪念演唱会结束，衍生组合正式定名为“4 Gulali（4 棉花糖）”。当日，AKB48成员兼JKT48前成员的Rena Nozawa（野泽玲奈）及JKT48前成员Stella Cornelia发来祝贺vcr。同时发表了JKT48与AKB48将于2015年2月举行联合演唱会的消息。2015年1月10日，开始招募四期生。1月25日，在剧场内举办了三期研究生的第二次单独演唱会，当天宣布Team T成立，成员16名。1月29日，发表了AKB48×JKT48演唱会的参加成员，JKT48共计67名成员，AKB48共计16名。2月27日，Team KIII成员Noella Sisterina毕业。2月28日，发表了Team KIII和Team T的新公演、以及新单曲和2015年总选举即将开始的消息。3月18日，在音乐番组《Dahsya》七周年庆上披露了第九张单曲《Pareo adalah Emerald》。3月27日，第九张单曲《Pareo adalah Emerald》发售。4月7日，JKT48 10th单曲选拔总选举第一次中间发表。4月14日，JKT48 10th单曲选拔总选举第二次中间发表。5月2日，举办了第二届单曲选拔总选举开票仪式。Jessica Veranda获得第一名，同时取得了第十张单曲的中心位置。而去年第一名Melody Nurramdhani Laksani降至第三。5月27日，第十张单曲发售。

日文精选大概明年会发，英文专辑正在制作中，据说eat you up好像会作为新专辑的主打，虽然这首歌曝光有一段时间了，但是光碟却一直没有发行，所以大家才会有这种猜测，应该会很快，不过具体日期还没公布。韩语专辑遥遥无期...

也写作Tim J或是チームJ，代表色为红色队长是Shania Junianatha 姓名昵称出生日期加入时期出身地备注总选举最高名次Ayana ShahabA-chan1997年6月7日1期大阪日本和印尼、阿拉伯混血，曾在大阪居住日本名“シャハブ彩菜” 14Beby Chaesara AnadilaBeby　　1998年3月18日万隆　5Delima RizkyDelima1997年10月25日茂物　圈外Dena Siti RohyatiDena1997年3月15日2期-　圈外Elaine HartantoElaine1996年4月3日3期-元Team T（初代）17Frieska Anastasia LaksaniFrieska1996年3月4日1期万隆姐姐是Melody Nurramdhani Laksani19Gabriela Margareth WarouwGaby1998年4月11日雅加达　16Ghaida FarisyaGhaida1995年5月29日班迪格朗48Group毕业撤回第一人9Jennifer Rachel NatasyaRachel1999年4月10日2期-　圈外Jessica VaniaJeje1996年1月22日1期雅加达本名Jessica Vania Widjaja16Jessica VerandaVe1993年8月19日雅加达本名Jessica Veranda Hardj 1Melody Nurramdhani LaksaniMelo1992年3月24日万隆ACE/队长/剧场支配人兼任妹妹是Frieska Anastasia Laksani日本冈山县水果大使 1Nabilah Ratna Ayu AzaliaAyu-chin1999年11月11日雅加达Team J最年少 6Rezky Wiranti DhikeIkey1995年11月22日班古鲁　　30Sendy ArianiSendy1993年8月12日雅加达曾以Sendy Xenia的名义进行歌手活动15Shania JunianthaShan-Ju　　1998年6月27日梭罗现Team J第二任队长4Shinta NaomiNaomi1996年6月4日2期-元Team KIII（S.N）Team KIII第一任队长妹妹是Sinka Juliani 24Sofia MeifalianiSofia 1998年4月23日3期-研究生时期红组所属圈外Sonia NataliaSonia1997年12月17日1期三宝垄　姐姐是毕业成员Stella Corneli本名Sonia Natalia Winartoa 圈外Thalia Ivanka ElizabethVanka1999年6月29日2期-本名Thalia Ivanka Elizabeth Frederik圈外 也写作Tim K或是チームKIII，代表色为黄色队长为Devi Kinal Putri 姓名昵称出生日期加入时期出身地备注总选举最高名次Alicia ChanziaAcha1999年5月24日2期万隆本名Alicia Chanzia Ayu KemasehTeam KIII最年少 圈外Cindy YuviaCinvia1998年1月14日雅加达　　9Della DelilaDella1998年11月15日-　　圈外Devi Kinal PutriKinal1996年1月2日1期万隆元Team J（D.K.P.）Team J第一任队长现Team KIII第二任队长 5Dwi Putri BonitaUty1997年11月17日2期-　　28Fakhiryani ShafariyantiShafa1995年7月14日-本名Fakhiryani Harrya Shafariyanti圈外Jennifer HannaHanna1998年1月26日马辰港　　15Lidya Maulida DjuhandarLidya1996年8月17日-　　31Nadila Cindi WantariNadila1998年9月23日茂物　　圈外NataliaNat1996年12月28日-　　圈外　　Priscillia Sari DewiSisil1999年4月5日-　　8Ratu Vienny FitrilyaViny1996年2月23日雅加达　　7Rina ChikanoChikarina1993年4月23日AKB485期东京Team KIII最年长。隶属经纪公司伊藤公司日本籍成员，本名“近野莉菜” 18Riskha FairunissaIkha1996年3月22日2期-　　11Rona AnggreaniRona、Ayen1995年3月19日亚巴苏鲁安本名Rona Ariesta Anggreani 21Sinka JulianiSinka1996年7月4日-姐姐是Shinta Naomi27Viviyona AprianiYona1994年4月13日-　　10 也写作Tim T或是チームT，代表色为粉色队长为Haruka Nakagawa 姓名昵称出生日期加入时期出身地备注总选举最高名次Amanda Dwi AristaManda1997年3月24日3期-研究生时期红组所属圈外Aninditha Rahma CahyadiAnin1999年1月5日-研究生时期红组所属圈外Ayu Safira OktavianiOkta1999年10月1日-研究生时期红组所属圈外Chikita Ravenska MamesahChika1996年3月18日-研究生时期红组白组兼任 圈外Feni FitriyantiFeni1999年1月16日-研究生时期红组所属圈外Fransisca Saraswati Puspa DewiSisca2000年2月24日-研究生时期白组所属圈外Haruka NakagawaHaruka1992年2月10日1期东京元AKB48三期生隶属经纪公司尾木制作本名中川遥香，日本籍成员，日本艺名“仲川遥香”JKT48最年长元Team J（D.K.P.）现Team T第一任队长 2Maria Genoveva Natalia Desy Purnamasari GunawanDesy1996年12月25日3期-研究生时期红组所属29Martha GracielaGrace1999年3月5日-研究生时期红组所属圈外Michelle Christo KusnadiMichelle1999年10月28日-研究生时期白组所属20Nadhifa SalsabilaNadse1999年3月7日-研究生时期白组所属圈外Ni Made Ayu Vania AurelliaAurel1999年8月8日-研究生时期红组所属圈外Nina Hamidah　Nina　2000年3月2日-研究生时期白组所属圈外Shani Indira NatioShani1998年10月5日-研究生时期红组所属32Shania GraciaGracia1999年8月31日-研究生时期红组所属圈外Stephanie Pricilla Indarto PutriStefi 2000年11月19日-研究生时期白组所属 圈外Syahfira Angela NurhalizaAngela2000年12月20日-JKT48最年少研究生时期白组所属 圈外Yansen IndianiCesen1999年6月15日-研究生时期红组所属圈外 也写作Trainee 姓名昵称出生日期加入时期出身地备注总选举最高名次Alycia FerryanaCia1998年5月22日3期-原白组所属圈外Anggie Putri KurniasariAnggie1996年3月13日-研究生最年长原白组所属 圈外Farina Yogi DevaniFarina1999年5月11日-原白组所属圈外Indah Permata SariSari1998年1月19日-原白组所属圈外Putri Farin KartikaFarin1996年9月5日-原红组所属圈外Rizka KhalilaYukka1999年2月19日-原白组所属圈外Triarona KusumaTya1999年12月6日-原红组所属圈外Adriani ElisabethLisa2000年5月10日4期　　　　　　未参加ChristiChristi1999年11月14日　　　　　　未参加Cindy Hapsari Maharani Pujiantoro PutriCindy1998年9月13日　　　　　　未参加Fidly Immanda AzzahraFia2001年3月19日　　　　未参加Jessica Berliana EkawardaniJessica1999年7月4日　　　　未参加Jinan Safa SafiraJinan1999年7月8日　　　　未参加Made Devi Ranita NingtaraDevi2000年11月18日　　　　未参加Mega SuryaniMega2002年7月9日　　　　未参加Melati Putri Rahel SesiliaMelati2000年1月1日　　　　未参加Sri LintangLintang2000年11月5日　　　　未参加Tan Zhi Hui CelineCeline2001年8月21日　　　　　　未参加Zahra Yuriva DermawanYuri2000年7月10日　　　　未参加 姓名昵称出生日期加入时期终所属队伍毕业日期出身地备注总选举最高名次Alissa GalliamovaMova1993年8月28日1期J2013年1月21日-　未举办Intar Putri KariinaKariin1997年10月23日2期KIII2013年9月9日-　Diasta PriswariniDiasta1991年9月9日1期J2013年12月22日　　-　Sonya PandarmawanSonya1996年5月18日-中文名为“潘美君”台湾与印尼的混血儿 Stella CorneliaStella1996年11月3日K2013年12月28日-妹妹是Sonia Natalia本名Stella Cornelia Winarto Octi SevpinOcti1997年10月7日2期KIII2014年1月23日-本名Octi Sevpin Cahyaning AyuCindy GullaCindy1997年5月29日1期J2014年2月16日-本名Cindy Christina GullaAki TakajoAkicha1991年10月3日AKB6期J2014年4月24日琦玉县　　日本籍成员，日本名“高城亚树”取消兼任 不参加Rena NozawaRena-chan1998年5月6日1期爱知县曾兼任AKB48 Team K移籍至AKB48 Team B日本籍成员，日本名“野泽玲奈” Rica LeyonaRica1991年8月19日2014年12月7日雅加达在籍时JKT48最年长　　7Noella SisterinaNoella1997年11月6日2期KIII2015年2月25日-　　圈外Novinta Dhini Nobi-chan 1995年11月26日2期KIII2015年8月17日巴厘岛本名Novinta Dhini Soetopo圈外ThaliaTata1996年12月22日2期KIII2015年8月26日-　　13Andela YuwonoAndela1997年4月25日3期T2015年9月4日-研究生时期白组所属4 AKB48的Google+使用者（AKB48のぐぐたす民）（2012年3月27日 - 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1最后的问候 http://daumbgm.nefficient.co.kr/ ... 090423300136406.wma 2Oh Le Le http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-3/2580453234.mp3 3Voglio Vederti Danza http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-3/25746204188.mp3 4One Goal http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-3/25739537815.mp3 5Mr DJ http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/25818319558.mp3 6Sound Of My Dream http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/25812956449.mp3 7DJ水手 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/191232835627.mp3 8Can"t Get You Out Of My Head http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/11633604708.mp3 9My Oh My http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/11632148226.mp3 10韩毒绝版. http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/10934940437.mp3 11韩潮慢摇 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8621446862.mp3 12蚂蚁皇后 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8622577641.mp3 13Welcome To The Club http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8619397643.mp3 14意大利商业慢摇 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/866233769.mp3 15Gimme More http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8539588572.mp3 16让我变做你的狗DJ http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8555267510.mp3 17野狼王的士高 当我看着你的眼 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8451697543.mp3 18野狼王的士高 靠近我 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-2/8452804261.mp3 19冰河时代3 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/30931890366.mp3 20超级舞者舞林大会串烧 http://www.hao8hao.com/upload/mu ... 3/1206566823947.mp3 21Burning http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/3088984945.mp3 22女声英文DJ舞曲 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/29812674938.mp3 23Prendilo E Mettilo http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/29351150712.mp3 24Ths Is How We Do It http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/271136169677.mp3 25One Way http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/271059727879.mp3 26Ein Kleines Lied http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/271053450240.mp3 27喜欢的 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/271014856762.mp3 28爱得太迟ReMix http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/271011147924.mp3 29down do be di down http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/710407517.mp3 30luckg http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/261051673812.mp3 31浪之夜热播无奈版 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/261056743946.mp3 32新干线disco现场版 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/261057590069.mp3 33LA LA LOVE http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/26117711990.mp3 34SABA RINA http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/261114203954.mp3 35Just For Tonight http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/24841668800.mp3 36Hes A Runner http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/24827197225.mp3 37so let go 凤舞九天第一场开场混音 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/18459634234.mp3 38rhythm of love http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/7041838895.mp3 39情歌Cant get you out http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/62353157372.mp3 40最爱酒吧打烊乐 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/6213548403.mp3 41Where s The Party http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/6151270861.mp3 42真爱狂想曲 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/6135488226.mp3 43过火dj 最hi现场版 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/31637522736.mp3 44依稀 过火Remix http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/3168872363.mp3 45Alcastar http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/31452675378.mp3 46女唱哦哦哦 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/3149488088.mp3 47经典男子 Sara http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/31357502247.mp3 48韩毒绝版 现场Club http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2008-1/2551283509.mp3 49TA LA LA 更多慢摇 3081013. qzone.qq.com 50舒服的女子慢摇吧 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61348738371.mp3 51英文经典 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61314949857.mp3 52Last Summer http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61258539024.mp3 53春泥 DJ http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61237868270.mp3 54ciao bella http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61226740856.mp3 55激情喊麦 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61133486509.mp3 56异域女唱 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/6120593928.mp3 57Sarbatoarea noptilor de vara http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61112859481.mp3 58金色时代club现场 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/6117137281.mp3 59Heaven http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61023393015.mp3 60On The Radio http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/61044188134.mp3 61riseandfall意大利（极嗨） http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/2449500365.mp3 62DJ喊麦 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/6102650686.mp3 63英文经典 http://hyking.geu.cn/xmlstore/1/356/Music/200781263083005.mp3 64say what you want http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/6957194685.mp3 65凤舞九天,开场曲 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/2511469082.mp3 66凤舞九天开场曲三 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-12/2516353162.mp3 67清风DJ迪吧现场 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/29945526431.mp3 68英文经典舞曲 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/29941381164.mp3 69深情女子 http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/271859476141.mp3 70金色时代 club现场 http://podcache.cctv.com/publish ... ub1195711711460.mp3 71balla da li http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/221419252761.mp3 72Call It Love Remix http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/22149123919.mp3 73Curly SUmmer http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/221356680994.mp3 74Sarai Sempre Con Me http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/221346410305.mp3 75how do you do http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/221337343096.mp3 76Sey Body http://www.jdzblog.com/UploadFiles/2007-11/221334280296.mp3 77she was crying http

CF下载地址:http://cf.gamedl.qq.com/CrossFire_OBV030_Full.exe你的配置不好自己上火线玩玩嘛基本FPS高于40玩火线是比较流畅的

动词不定式是to have a skeleyon

这个可以？

Sunshine on me？Leyona唱的那首？

leona

歌曲名:爱と微笑みと花歌手:Leyona专辑:PATCHWORK「爱と微笑みと花」作词∶冈本定义作曲∶冈本定义歌∶Leyonaなぜ私は泣いているのだろうおとなげもなくそう始めから知っていたのにこうなることも神様はイジワルねこんなにもこわれやすくもろいものを本当に美しく造られたの心に咲く花の种をまきましょうもう一度谁かを上手く爱せるようにほら雨上がりの澄んだ空へ虹が架かるよでも涙が乾いてゆくあいだに消えてしまうの永远に変わらないものなどない约束をやぶることはこわいけど见えない键を外すわ囚われた小鸟を逃がしてあげましょうもう二度と自由を爱で缚らないように神様の悪フザケねこんなにも変わりやすくうつろうものを何よりも美しく造られたなんて心に咲く花の种をまきましょうもう一度谁かを上手に爱せるようにけなげに咲く花に水をあげましょういつの日か私もやさしく微笑えるように【 おわり 】http://music.baidu.com/song/26940279

STARS - LEYONA 酷我音乐盒有资源

歌曲名:Get Down歌手:E-Max - Mr Noba专辑:Compilation Jumpers United (Mix Digital 1)「GET DOWN」作词∶新美香作曲∶マツキタイジロウ歌∶LeyonaI miss you so muchCan"t get you out of my mindA wonderful nightI wonder where are you nowEvery time I hear the melodyAlways makes me think about youOh, baby Won"t you darling...Let me be with you tonight to hold you tightTake me back to the sweet days of dreamingGet down with me...　Baby!Baby!Baby!Take me back to the crazy days with youGet down to the funky boogie music...one more timeOh...　babyI miss you so muchSo crazy about you nowI love you so muchDon"t know why but I love youEvery night I dream about your sweet eyesAlways makes me miss about youOh, baby Won"t you darling...Let me dance with you tonight...　all through the nightTake me back to the sweet days of dreamingGet down with me...　Baby!Baby!Baby!Take me back to the crazy days with youGet down to the funky boogie musicI know that you"re the one for meIt took me long realizeBut now I know, I won"t let you go away from meTake me back to the sweet day of dreamingTake me back to the crazy days with youTake me back to the sweet days of dreamingGet down with me...　Baby!Baby!Baby!Take me back to the crazy days with youGet down to the funky boogie musicGet down to the funky boogie musicGet down to the funky boogie music...one more time...just one more time【 おわり 】http://music.baidu.com/song/2661060

不对任何人说不希望自己被困住这并不是妨碍或是什麼我也有这种情况发生两个人之间的秘密只有我知道只让正直的你见到is this love, is this love现在也是 没办法将这份感情完全隐藏住眼中只看的到你(how can i control myself)说出口的那瞬间总觉得说这一切会全部消失不见你却不知道 ...is this love?mail若不发送出去那无法被忘记的言语被残留著一定会感到后悔若是事情已经决定好对白就不被需要了(i just need your touch boy)再更加地紧紧抱住我吧is this love, is this love现在也是 没办法将这份感情完全隐藏住眼中只看的到你(even when i close my eyes)想要一直笑著为何又突然想要哭泣却没有任何人知道 ...is this love?when i reach my hand and i call your namei just find myself deeply breath againall this confusion makes me want you moredon"t know why i keep on coming back to youis this love, is this love现在也是 没办法将这份感情完全隐藏住眼中只看的到你(how can i control myself)说出口的那瞬间总觉得说这一切会全部消失不见你却不知道 ...is this love?is this love, is this love现在也是 没办法将这份感情完全隐藏住眼中只看的到你(even when i close my eyes)想要一直笑著为何又突然想要哭泣却没有任何人知道 ...is this love?

你这个是错的 啊 应该为The only person I have ever known has a skeleton in the cupboard

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感染了爱情后门病毒病毒，EXE文件的后缀都改成ZMX了。 病毒信息： 病毒名称: Worm.Supnot.u 中文名称: 恶邮差变种U 威胁级别: 3A 病毒别名: 爱情后门变种V [瑞星] 密码杀手 [江民] 病毒类型: 蠕虫、后门 受影响系统:Win9x/Win2000/Winnt/ WinXP/Windows Server 2003 技术特点： · 病毒破坏： 1、发送大量病毒邮件阻塞网络和邮件服务器； 2、释放后门病毒 病毒将在系统中殖入远程后门代码，该代码， 将响应远程恶意用户tcp请求建方一个远程 shell进程。（win9x为 command.com ，NT, WIN2K,WINXP为cmd.exe）， 可以对本地机器进行完 全控制。 3、释放通过QQ传播的病毒：“Win32.Troj. QQmsgSupnot” 该病毒通过发送诱惑信息导致用户上当，从而中毒， 详情请参考该病毒报告。 4、病毒变向感染可执行文件 病毒可能会将EXE文件改名为ZMX文件，并设置属性为“隐藏” 和“系统”，如：病毒搜索到 一个名为“Winword.exe”的文件，会将其改名“ Winword.zmx”并设置属性“隐藏”和“系 统”，然后释放一个名为“Winword.exe”的病毒复本。 这个功能的条件是：病毒运行后，每隔一小时会检查系统中是否有“ 网络映射驱动器”和 “可移动驱器”，如果有，侧会进行上述变相的文件感染。 · 发作现象：共享目录会塞满此蠕虫的文件，一般容易辨认 · 系统修改：（点击查看详情） A、自我复制到 %SYSDIR%IEXPLORE.EXE %SYSDIR%kernel66.dll %SYSDIR%RAVMOND.exe %SYSDIR%SysBoot.EXE %SYSDIR%WinDriver.exe %SYSDIR%winexe.exe %SYSDIR%WinGate.exe %SYSDIR%WinHelp.exe %DRIVER%SysBoot.exe B、病毒将释放一个DLL文件， 此文件将在系统中殖入远程后门代码 %SYSDIR% eg678.dll %SYSDIR%Task688.dll 病毒将释放一个利用QQ发送消息传播的病毒:"Win32. Troj.QQmsgSupnot"，相关文件名目录为： %SYSDIR%internet.exe %SYSDIR%svch0st.exe C、添加以下键值 HKEY_CLASSES_ROOTexefile shellopencommand (默认) : %SYSDIR%WINEXE.EXE "%1" %* HKEY_LOCAL_MACHINESoftware MicrosoftWindows CurrentversionRun "WinGate initialize" = "%SYSDIR%WINGATE.EXE -REMOTESHELL" HKEY_LOCAL_MACHINESoftware MicrosoftWindows CurrentversionRun "WinHelp" = "%SYSDIR%WINHELP.EXE" HKEY_LOCAL_MACHINESoftware MicrosoftWindows CurrentversionRun "Remote Procedure Call Locator" = "RUNDLL32.EXE REG678.DLL ONDLL_REG" HKEY_LOCAL_MACHINESoftware MicrosoftWindows CurrentversionRun "Program In Windows" = "%SYSDIR%IEXPLORE.EXE" HKEY_LOCAL_MACHINESoftware MicrosoftWindows CurrentversionRunServices "SystemTra" = "%WINDIR%SYSTRA.EXE /SYSTRA:KERNEL32.DLL" 在win9x下还修改系统文件： WIN.INI [WINDOWS] "RUN" = "RAVMOND.EXE" 在win2k、NT、XP下注册服务： HKEY_LOCAL_MACHINESYSTEM CurrentControlSetServicesll_ reg Display Name = "ll_reg " IMAGEPATH ＝ "RUNDLL32.EXE TASK688.DLL ONDLL_SERVER" HKEY_LOCAL_MACHINESYSTEM CurrentControlSetServices Windows Management Instrumentation Driver Extension Display Name = "Windows Management Instrumentation Driver Extension" IMAGEPATH = "%SYSTEM%WINDRIVER.EXE -START_SERVER" 病毒也将在每一个硬盘和可移动盘的根目录下建立一个文件： AUTORUN.INF的文件，内容为： [AUTORUN] Open="%DRIVER%:SysBoot.EXE" /StartExplorer 其中%DRIVER%为相应的驱动器。 这样在用户打开该驱动器后将运行病毒 D、Windows弱口令密码试探攻击、放出后门程序、盗取密码 E、病毒利用mapi及搜出的email地址， 对收信箱里的邮件进行回复（传播）。 邮件标题随机从病毒体内选出 F、当病毒被运行后每隔一定时间发送一次通知邮件给位于 163. com的一个信箱,邮件内容为中毒系统的ip地址， 以便利用病毒的后门进行控制 使用专杀工具： 用户也可以到 http://www.duba.net/ download/3/28.shtml免费下载恶邮差专杀工具 ，并进行该 病毒的清除，推荐到安全模式查杀。 · 手动清除： 该病毒手工清除比较困难，建议使用杀毒软件或专杀工具， 推荐到安全模式查杀。 注意：如果您的机器上有“可移动磁盘”和“网络映射驱动器”时， 请注意搜索所有的 “*.zmx”文件，找到后请将其后缀改名为exe。 推荐使用专杀工具来清除，可以自动恢复被病 毒改名的正常文件。 cmd中通过下面这条命令改回属性：attrib -s -h *.zmx /s（在发现zmx文件的磁盘跟目录下运行，如：F:> attrib -s -h *.zmx /s) 如果你嫌一个一个改文件后缀名很烦，可以新建一个txt文件。 输入如下内容: @dir /b /s *.zmx>zmx_file.txt @for /f "delims==" %%a in (zmx_file.txt) do ren "%%a" *.exe @del zmx_file.txt 然后保存成lovegate_rename_files. bat。把此文件copy到发现zmx文件的磁盘跟目录下， 双击。

烧炭党叛乱（1820年—1821年）1814年烧炭党（马志尼，后组‘青年意大利党"）开始在那不勒斯组织革命活动；至1820年组织已强大得足以凭自己的军队侵略那不勒斯，迫使国王答应实行烧炭党草议的新宪法。但翌年革命被奥地利人以“神圣同盟”在奥地利、普鲁士和俄罗斯之间的中介人身分镇压。两西西里王国叛乱1820年，西班牙人成功推翻宪法，促进了意大利相似的活动。从西班牙人的经验得到启发，两西西里王国的军队中由古格雷莫·佩佩指挥的一个团——一个烧炭党——造反，征服两西西里王国的半岛部分。国王斐迪南德一世同意颁布新宪法。但革命人士无法赢得公众的支持，更成为神圣同盟的奥牙利军队。斐迪南德一世废除宪法，并开始有系统地迫害革命者。西西里很多革命支持者，包括米谢勒·阿玛尼，在其后数十年被迫流亡海外。皮埃蒙特叛乱皮埃蒙特的革命运动领袖是Santorre di Santarosa，他希望能赶走奥地利人，并将意大利统一到萨伏依王朝下。皮埃蒙特的革命在Alessandria开始，军队在当地采用了奇萨尔皮尼共和国的绿、白、红三色旗。在国王离开国家时代为处理事务的摄政王通过新宪法以安抚革命者，但国王回国后却推翻了宪法，并向神圣同盟寻求援助。Di Santarosa的军队战败。1830年左右，支持一个统一的意大利的革命意识高涨；一连串叛乱为在意大利半岛建立一个国家奠定基础。The Duke of Modena, Francis IV野心很大，希望藉著扩大势力范围而成为意大利北部的国王。1826年，Francis明言他不会阻止破坏意大利统一的反对势力。受到声明的鼓励，当地的革命人士开始组织起来。1831年，法国七月革命期间，革命人士迫使国王退位，并在法国新国王路易·菲利浦的鼓励下开始七月王朝。路易·菲利浦答应包括Ciro Menotti在内的革命人士，如果奥地利尝试干扰军队，他会作出干预。不过，因为害怕会失去王位，路易·菲利浦在Menotti计划的起义中没有作出干预。但事实并非如此——在1831年，Papal police得悉Menotti计划的叛乱，将他和其他谋反者拘捕。同时，亦有其他叛乱在波隆那、Forlì、拉文纳、Imola、费拉拉、Pesaro和Urbino的Papal Legations发生。这些以三色旗取代教皇旗的成功的革命迅速布满整个Papal Legations，他们新成立的当地政府宣称建立了一个统一个意大利国家。在Modena及Papal Legations的革命掀起了Duchy of Parma的类似活动，大公国亦采用了三色旗；Marie Louise公爵离开了城市。发生叛乱的省计划统一为Province Italiane unite（统一的意大利省），当时的教宗国瑞十六世向奥地利求助以对抗造反者。梅特涅警告路易·菲利浦奥地利没有意图让意大利的问题自由发展，而且不会忍受法国的干预。路易·菲利浦拒绝提供任何军事援助，更逮捕了在法国居住的意大利爱国人士。1831年春天，奥地利军队开始进军意大利半岛，慢慢镇压每个发生了革命的省中的抵抗，结束了很多成熟的革命运动，并捕获了其领袖，包括Menotti。 1848年1月，革命骚乱开始在西西里岛发生。不久，革命扩展至整个欧洲。1848年2月，法国国王路易·菲利浦被迫逃亡，法兰西第二共和国宣告成立。骚乱无可避免扩展至意大利，事实上革命者亦强迫大部分意大利统治者实行君主立宪，而在米兰和威尼斯的起义亦暂时驱逐了奥地利人。不久，萨丁尼亚王国国王卡洛·阿尔贝托认定统一意大利的时刻已经来临。宣称“意大利会自己建立自己”，他向奥地利宣战。在Battle of Custoza中，他于1848年7月24日迅速被奥地利元帅约瑟夫·拉德斯基打败。双方很快便达成停战协定，拉德斯基重新控制整个伦巴底-威尼斯大区，但威尼斯得以幸免，一个共和国在达尼埃尔·曼宁领导下于威尼斯宣告成立。当拉德斯基巩固他在伦巴底-威尼斯大区的势力，以及阿尔贝托的伤势渐愈时，事情在意大利其他部份变得更严重。三月时勉强答应宪法的君主开始与他们的宪政大臣发生冲突，经常导致正面冲突。最初，共和国取得优势，迫使君主逃离他们的首都。这包括当时的教宗庇护九世。庇护九世最初被视为改革者，但与革命人士的冲突令他对君主立宪政府的理念感到酸溜溜。至1849年初他逃离罗马。激进的意大利民族主义者，包括马志尼及加里波底，宣告成立罗马共和国。列强有机会对罗马共和国的成立作出回应前，在阿尔贝托的军队接受逃亡海外的波兰元帅Albert Chrzanowski训练的同时，阿尔贝托决定再次与奥地利决战。1849年3月23日，但是很快他在Novara中被拉德斯基再次击败。这次战败是最后一次。阿尔贝托退位，由他的儿子维托里奥·伊曼纽尔二世接任，皮埃蒙特人统一意大利或征服伦巴底的野心亦已经——至少暂时——结束。战争于8月9日签署条约后正式结束。战后剩下罗马及威尼斯共和国。四月，Nicolas Oudinot下的一支法国军队被派遣到罗马。表面上，法国人希望协助教宗及其国民和解，但不久法国人被迫倾向某一方，并决定恢复教宗的地位。经过两个月的围城，罗马于1849年6月29日投降，教宗复位。加里波底和马志尼再次流亡海外——1850年，加里波底流亡美国纽约市。同时，奥地利人包围威尼斯，威尼斯被迫于8月24日投降。奥地利人亦发起恢复意大利中部的秩序，恢复被逼走的太子的地位，并建立他们对教皇国的控制。革命因而完全瓦解。1848年革命，也被称作第一次意大利独立战争. 尽管卡洛·阿尔贝托已经被奥地利人彻底击败，但是皮埃蒙特人并没有完全放弃希望。加富尔在1852年成为首相，同样也有着扩张的雄心。但是他已经察觉到仅凭撒丁王国自己的力量是无法完成的，因此，他希望借助英法的力量赶走奥地利人。为此，撒丁王国在1855年加入了克里米亚战争并支持英国和法国。但是这一做法没有取得预期的效果——意大利人的利益在战后的巴黎和会上被忽视了。尽管如此，这场战争还是取得了一个有益的结果，奥地利被孤立了，因为它试图在战争中对战争双方搞平衡，以至于战争双方对其都没有好感。在1858年1月14日，一个意大利民族主义者Felice Orsini试图行刺法国皇帝拿破仑三世。失败后被捕入狱，他在狱中写信给拿破仑三世，呼吁他给予意大利民族主义者以帮助。拿破仑三世在年轻的时候曾加入过烧炭党，他还认为自己是一个进步的思想家，在经历了这件事情之后，开始坚信自己应该为意大利的命运做些什么。1858年夏，加富尔与拿破仑会面，双方同意对奥地利联合作战。按照协议撒丁王国在战后接收奥地利在意大利的领地（伦巴第和威尼斯）以及帕尔马和摩德纳，与此同时，法国将获得撒丁王国在阿尔卑斯山麓的领地萨伏依和尼斯。意大利中部和南部将保持原样，尽管据传皇帝的侄子将取代哈布斯堡家族而成为托斯卡纳的主人。为了使法国的干涉不被视为侵略行径，加富尔将煽动伦巴第的革命活动，从而引诱奥地利的入侵。然而，事情的进展并不如计划的那样顺利。奥地利人在处理皮埃蒙特人引发的叛乱时表现得出奇地有耐心。皮埃蒙特人在1859年三月的总动员在一定程度上宣告失败，从而使得引诱奥地利入侵的计划破产。没有奥地利的入侵，法国就无法名正言顺地“干涉”。失去了法国的支持，加富尔就无法承担战争的风险了。正在这个时候，奥地利发出了解除动员的最后通牒，皮埃蒙特当然加以拒绝，使得奥地利看起来是入侵者，使得法国能够顺利“干涉”。这场战争很快结束。即使奥地利推进至皮埃蒙特，亦无力对抗。在由拿破仑三世带领的法国军队抵达前，奥地利已无法保住阿尔卑斯山的路线。6月4日的马真塔战争中，法国和萨丁尼亚战胜Gyulai伯爵的奥地利军队，奥地利由伦巴底的大部分地区撤军，拿破仑和维托里奥·伊曼纽尔二世以胜利者的姿态进入米兰。6月24日，两军之间的第二场战争于苏法利诺爆发。奥地利国王弗朗茨·约瑟夫亦有亲自指挥其军队，双方皆展示了一些作战技巧，但法国亦再次战胜。奥地利撤军至威尼斯边境的要塞。 在1866年的普奥战争中，奥地利帝国与普鲁士王国竞争在德意志诸国的领导地位。意大利王国抓住这个机会，企图夺回奥地利帝国手中的威尼西亚，而与普鲁士结成盟友。奥地利试图去说服意大利王国政府，接受威尼西亚为代价而不插手战事。然而，于4月8日意大利王国与普鲁士签订协议，意大利王国将取得威尼西亚。6月20日，意大利王国向奥地利帝国宣战。在意大利一统中，普奥战争被称为“第三次独立战争”，在第一次(1848年)及第二次(1859年)的独立战争之后。意大利国王维托里奥·埃马努埃莱二世催促引导军队渡过明乔河去入侵威尼西亚，同时加里波底率领他那支名为阿尔卑斯山猎人的志愿军去入侵蒂罗尔。意大利正规军的冒险以惨败告终。意大利王国陆军在6月24日与奥军于库斯托扎开战，意军遭受失败。7月20日，意大利海军于利萨海战中大败，海军损失惨重。意大利命运并未全部如此凄凉，7月21日加里波底的志愿军于贝泽卡战胜奥军，并朝特伦托进军。7月3日，萨多瓦会战，奥军被普军完全击败，普军进逼维也纳。同时，普鲁士首相奥托·冯·俾斯麦见其目标已经达成，于7月27日与奥地利签订停战协定。意大利王国正式于8月12日与奥地利停战。加里波底于胜利的行军中被召回，并且发出一份简短的辞职电报，上面只有“服从”（Obbedisco）一字。尽管意大利表现差劲，但普鲁士在北线的胜利，确保奥地利割让威尼西亚。10月12日在维也纳签订的条约中，奥皇同意将威尼西亚割予拿破仑三世，然后拿破仑三世在10月19日将威尼西亚让予意大利。条约中，表示威尼西亚的合并，经过公投才能变成有效。公投于10月21、22日举行。历史学家认为此公投，是在军队的监控下进行，因为仅仅只有0.01%的投票者投下反对票。许多支持独立的威尼斯人认为，这是一个阻止威尼西亚独立的骗局。奥地利军队对于意大利人的进入，作出了一些反对，但成效不大。伊曼纽尔二世进入威尼斯，并表现了他对圣马可广场的尊重。

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首先说说嵌入式开发吧，嵌入式开发就是指在嵌入式操作系统下进行开发，一般常用的系统有WinCE,Palm，Symbian现在又多linux,android等，都有相应的SDK开发包。用单片机汇编开发也算是嵌入式，用高级一点的处理器，arm7,arm9，arm10.arm11 到最新的arm context系列，powerpc什么的开发起来，不过要加操作系统而已，也属于嵌入式的开发. 针对你的问题一般认为搞嵌入式的可以分为两类人：一种是底层硬件的开发还可能写一些底层的驱动程序，另一类是做应用软件或者专职驱动开发的软件开发人员，不管底层的具体硬件实现。以上是我的初浅认识，总之这就看你怎样抉择了，看你擅长哪一类的！

日语：斯米马森 韩语：米安四木你大 英语：SORRY 额 楼主啊 你是不是做了对不起女朋友的事啊 要说那么多对不起干嘛 真是的 ...03

我爱你"这三个字很容易就说出口了,*着激情,*着欲望,我们站在心爱的人面前,带着"怦怦"的心跳说:"我爱你".这三个字即是承诺也是烙印,有人感到沉重,有人感到束缚,逃走了,忘记了,一切宛如烟云.其实,爱是很难说出口的,是需要勇气和毅力的. 爱的最高境界是经得起平淡的流年. 英 语:i love you 法 语:je t"aime,je t"adore 德 语:ich liebe dich 希 腊语:s"agapo 犹 太语:ani ohev otach(male o* **male),ani ohevet otcha (male o* **male) 匈 牙 利:szeretlek 爱 尔 兰:taim i"ngra leat 爱 沙 尼 亚:mina armastan sind 芬 兰:min rakastan sinua 比 利 时佛兰芒语:ik zie u graag 意 大 利语:ti amo,ti vogliobene 拉 丁语:te amo,vos amo 拉 托 维 亚:es tevi milu 里 斯 本:lingo gramo-te bue",chavalinha 立 陶 宛:tave myliu 马 其 顿:te sakam 马 尔 它:inhobbok 波 兰:kocham cie,ja cie kocham 葡 萄 牙:eu amo-te 罗 马 尼 亚:te iu besc,te ador 荷 兰:ik hou van jou 捷 克:miluji te 丹 麦:jeg elsker dig 阿 尔 萨 斯:ich hoan dich gear 亚 美 尼 亚:yes kezi seeroom yem 巴 伐 利 亚:i mog di narrisch gern 保 加 利 亚:ahs te obicham 西 班 牙加泰隆语:t"estim 克 罗 地 亚:volim te 阿 塞 疆 语:men seni serivem 孟 加 拉:ami tomay bhalobashi 缅 甸:chit pa de 柬 埔 寨:bong salang oun 菲 律 宾:mahal kita,iniibig kita 印 度 古 吉 拉 特 语:hoon tane prem karun chuun 北 印 度 语:main tumse pyar karta hoon 印 度 尼 西 亚:saja kasih saudari 日 本:kimi o ai****eru sukiyo 朝 鲜:tangshin-i cho-a-yo 爪 哇 语:aku tresno marang sliromu 老 挝:khoi huk chau 马 来 语:saya cinta mu 马来西亚:saya cintamu 蒙古语:bi chamd hairtai 尼泊尔:ma tumilai maya garchu,ma timilai man parauchu 波斯语:tora dost daram 他加禄语:mahal kita 南非语:ek het jou lief ek is lief vir jou 加纳:me do wo 埃塞俄比亚阿姆哈雷地区:ene ewedechalu(for ladies) ene ewedehalwe(for men) 阿拉伯语:ana ahebak(to a male) arabic ana ahebek(to a female) 瑞士德语:ich li b dich 克里奥尔语:mon kontan ou 豪萨语:ina sonki 肯尼亚班图语:nigwedete 马达加斯加语:tiako ianao 印度阿萨姆邦语:moi tomak bhal pau 南亚泰米尔语:tamil n"an unnaik kathalikkinren 印度泰卢固语:neenu ninnu pra"mistu"nnanu 泰国:ch"an rak khun 乌尔都语:mein tumhay pyar karti hun(woman to man) mein tumhay pyar karta hun(man to woman) 越南:em ye"u anh(woman to man) anh ye"u em(man to woman) 新西兰毛里语:kia hoahai 爱斯基摩:nagligivaget 格陵兰岛:asavakit 冰岛:e"g elska tig 阿尔巴尼亚:t dua shume 俄罗斯:ya vas iyublyu,ya tibia lyublyu 塞尔维亚:volim te 斯洛文尼亚语:ljubim te 西班牙:te amo,tequiero 瑞典:jag lskar dig 土尔其:seni seviyorum 乌克兰:ja vas kokhaju 威尔士:rwy"n dy garu di 亚述语:ana bayanookh(female to male) ana bayinakh(male to female) 高加索切尔克斯语:wise cas 中 国:wo ai ni

中位数算法为：把所有值由从高到低（或由低到高）排序后找出正中间的一个数作为中位数。方法一：若一共有奇数个要观察的数，则通过把所有值由从高到低（或由低到高）排序后找出正中间的一个数作为中位数。方法二：若一共有偶数个要观察的数，把所有值由从高到低（或由低到高）排列后，再将所有数分为左右两组，将两组靠在一起的两个数相加再除以二，就得到中位数。中位数意思：统计学中的专有名词，是按顺序排列的一组数据中居于中间位置的数，代表一个样本、种群或概率分布中的一个数值，其可将数值集合划分为相等的上下两部分。对于有限的数集，可以通过把所有观察值高低排序后找出正中间的一个作为中位数。如果观察值有偶数个，通常取最中间的两个数值的平均数作为中位数。[z7981.cn][yhpx.net.cn][newbusinessway.cn][v8206.cn][mach-5.cn][capian.cn][tengbaoda.cn][hi0516.cn][midea.fj.cn][jjshunda.cn]

一.安装USB驱动1.驱动安装包路径:工具包目录下：driver HandsetWinDriver_win7_64_20140411.rar2.解压缩后双击如下DriverSetup.exe即可,驱动在后台自行安装没有引导.3.安装成功后会有如下界面显示.点击确定即可.二.镜像烧写1.手机和电脑先不要连接，双击工具包中的 “最小系统恢复工具.exe”，不同电脑登陆时间有所差别，如果时间较长请耐心等待2.主界面出现后，选择要烧写的手机型号3.点击 “开始”4.手机重新安装电池和电脑通过USB连接，即开始烧写，烧写成功后出现如下截图5.如果手机连上去后工具1分钟以上界面没有任何变化，请做如下尝试按照 如上1)->2)->3)->4)步骤多试几次如果还是不行，在步骤3）中点击开始按钮后在设备管理器中查看如下preloader端口是否出现，如果没有出现就是驱动没有安装好需要重新安装驱动。三.SD卡升级准备1.在论坛官网中找到合适的卡刷包2.准备一张 microSD 卡，确认已格式化为FAT32格式。3.在 microSD 卡根目录下创建一个【dload】文件夹。4.将软件升级包加压缩，将包中的“UPDATA.APP”拷贝到 microSD 卡【dload】文件夹中。 将 microSD 卡插入手机。5.升级软件之前，请检查电池电量，确保电池电量超过20%四.强制升级1.断开手机跟电脑或其它设备（如充电器）的连接，重新上电池。2.同时按住音量上下键，然后按电源键。3.开机画面出来之后，放开电源键，继续按住音量上下键，直到进入如下升级界面后再松开音量上下键。 整个升级过程大约需要3分钟。在升级过程中，请不要取出电池，建议您最好不要进行任何操作，静静等待

第1—24届 略第25届（1992年）第4名第26届（1996年）季军第27届（2000年）季军第28届（2004年）第4名第29届（2008年）冠军第30届（2012年）冠军 第1—5届 略第6届 （1991年）第8名第7届 （1995年）亚军第9届 （1999年）季军第10届（2003年）亚军第11届（2007年）亚军第12届 (2011年) 第5名 第1—10届 略第11届（1990年）第7名第12届（1994年）亚军第13届（1998年）第4名第14届（2002年）第7名第15届（2006年）亚军第16届（2010年） 亚军第17届（2014年）季军 第1届（1993年）第4名第2届（1994年）冠军第3届（1995年）亚军第4届（1996年）冠军第5届（1997年）未晋级总决赛第6届（1998年）冠军第7届（1999年）亚军第8届（2000年）季军第9届（2001年）第5名第10届（2002年）第4名第11届（2003年）第7名第12届（2004年）冠军第13届（2005年）冠军第14届（2006年）冠军第15届（2007年）第5名第16届（2008年）冠军第17届（2009年）冠军第18届 （2010年） 亚军第19届（2011年） 亚军第20届 （2012年）亚军第21届 （2013年）冠军第22届 （2014年）冠军第23届（2015年）季军 第1—15届 略第16届（2000年）第4名第17届（2001年）季军第18届（2002年）亚军第19届（2003年）季军第20届（2004年）未参赛第21届（2005年）冠军第22届（2006年）冠军第23届（2007年）未参赛第24届（2008年）未参赛第25届 （2009年）冠军第26届（2010年） 未参赛第27届（2011年）未参赛第28届（2013年） 冠军第29届（2014年）第5名 2004年 冠军2005年 第四名2006年 亚军2007年 亚军2008年 冠军2009年 第5名2010年 第8名2011年 冠军2012年 亚军2013年 季军2014年 退赛 第1届 （1993年） 没有获得外卡第2届（1997年） 季军第3届 （2001年） 第4名第4届（2005年） 冠军第5届 （2009年） 亚军第6届 （2013年） 冠军 巴西女排的老将级别的人物。法比亚娜无论是在巴西国内，还是在世界排坛，她都有这非常高的知名度与人气，这也有一部分原因要归于她绝佳的身体素质。她的拦网也是经常名列技术排名前茅。【英文名】Fabiana Claudino【位置】 副攻【生日】1985.01.24　【身高】 193cm【体重】76kg【扣球高度】 314cm　【拦网高度】 293cm　个人成绩：2003年：世界杯女子排球赛亚军、世界女排大奖赛第七名；2004年：雅典奥运会第四名、世界女排大奖赛冠军；2005年：世界大冠军杯女子排球赛冠军、世界女排大奖赛冠军；2006年：世界女子排球锦标赛亚军、世界女排大奖赛冠军；2007年：世界杯女子排球赛亚军、世界女排大奖赛第五名；2008年：北京奥运会冠军、世界女排大奖赛冠军；2009年：世界大冠军杯女子排球赛亚军、世界女排大奖赛冠军；2010年：世界女排锦标赛亚军、世界女排大奖赛亚军。2011年：世界杯女子排球赛第5名、世界女排大奖赛亚军。2012年：世界女排大奖赛亚军。伦敦奥运会女排冠军。法比亚娜的身体素质好，一方面是她的身高有193cm，在女排队员中比较出众的，而且她的强攻非常有力，经常是依靠高点强攻而得分。而且，她也融入了很多的亚洲快球的打法，很多亚洲球队所使用的方法，她也可以熟练应用。这也是巴西女排成为世界王牌队伍的原因之一。 英文名： Danielle Lins性别：女国家：巴西出生日期：1985年1月5日身高：181厘米体重：68kg　项目：排球巴西女排国家队二传个人战绩　2009年世界女排大冠军杯亚军、世界女排大奖赛冠军 姓名：阿德尼兹娅生日： 1986年12月18日性别：女身高：183 厘米体重：62 公斤国家及地区：巴西巴西国家女子排球队球员 中文名： 塔伊萨 外文名： Thaisa Menezes 国籍： 巴西 出生地： 巴西 出生日期： 1987年5月15日 性别： 女 团队:巴西女排身高:196cm体重:79公斤运动项目:排球扣球高度:316cm拦网高度:301cm主要成绩2008年：北京奥运会金牌、世界女排大奖赛冠军。2009年：世界大冠军杯女子排球赛亚军、世界女排大奖赛冠军。2010年：世界女排锦标赛亚军、世界女排大奖赛亚军。2011年：世界杯女子排球赛第五名、世界女排大奖赛亚军。2012年：世界女排大奖赛亚军，伦敦奥运会女排冠军。 玛丽安妮-斯泰因布莱彻（Marianne Steinbrecher），女，1983年08月23日生于荷兰，排球运动员。获得过北京奥运会冠军；世界女排大奖赛冠军等世界级大赛奖项。冷艳版的美女，南美洲白人美女的典范。小嘴，翘眉，娇嫩的肌肤组成了诱人的俏丽面孔。基本上没有见玛丽安妮笑过，但是却会被玛丽安妮的美丽容貌所吸引。玛丽安妮在2004年世界女排大奖赛中一战成名，能够在与雷拉、比亚等名将的激烈竞争中脱颖而出成为巴西女排在奥运会上的主力接应显示了玛丽安妮不俗的实力。20多岁的她身高出众、拦网效果好、进攻点多、扣球力量大，年轻的她具备成为优秀接应的所有条件，如今她也确实是巴西女排最有威胁的扣球点。在激情飞扬的巴西女排中，玛丽安妮因为其安静的性格显得更加与众不同。现今的她实力勿庸置疑，相信不久的将来，她将是世界排坛最让人瞩目的选手。　巴西虽然是个很全面的队伍，可是主攻薄弱一直是他们的弱点。在吉马良斯把玛丽推上主攻位置后，虽然强攻实力得到提升，但玛丽不过关的一传还是不能解决巴西主攻位置的问题。然而，吉马良斯依旧不放弃玛丽，于是把她从巴西一起带向他执教的俱乐部，借此就近训练玛丽。玛丽安妮刚加盟PESARO就是绝对的正选，可以看出吉马良斯对玛丽的厚爱！主攻薄弱是巴西的软肋，而玛丽的强攻实力是巴西迫切需要的。2013年，巴西队虽然已经拥有了谢拉，法比亚娜与索萨，只不过玛丽不成长起来，巴西还是不具备夺取世界冠军的绝对实力。只有玛丽安妮的觉醒，解决了强攻的问题，巴西才有可能成为真正的王者！　奥运会最大的收获无疑是玛丽安妮与谢拉的恋情。2004年前的雅典奥运会，初出茅庐的玛丽安妮担纲接应曾经有过令人惊艳的表现，然而在半决赛对阵俄罗斯的关键战役中，21岁的马列安妮连续三次后攻踩线断送了巴西队的前程，也由此开始在国家队大门外徘徊。2008年玛丽安妮卷土重来，她在主教练吉马良斯的鼎力支持下担纲主攻，她凌厉的前后排进攻以及出色的端拦网使得巴西队网上竞争力得到了极大的提高，同时她的突破也给了队友谢拉最有力的支持。玛丽安妮走向成熟成为了巴西队获胜的关键。 杰奎琳·卡瓦霍（Jaqueline Carvalho,1983.12.31），是一名来自巴西的女子排球运动员。杰奎琳·卡瓦霍（Jaqueline Carvalho）是典型的巴西美女，也是巴西女排的绝对主力，高束的头发，清秀的面庞，186厘米的身高，还有热情奔放的巴西女郎性格，再加上出色的技术，这杰奎琳成了巴西女排的大明 星。　杰奎琳出生于里约热内卢，小时候接触最多的是足球。直到9岁那年，她的父亲才给她买第一个排球，而她的排球运动也是从沙滩排球开始的。由于天赋出色，杰奎琳很快展现了自己在排球项目的实力。17岁那年，她就入选了巴西女排的国家队，成为那届国家队里最年轻的选手。　杰奎琳是典型的兴奋性球员，她在场上比赛气质突出，拼劲十足让巴西女排更具活力。尽管她的强攻绝对实力有限，但是相对全面的技术还是让其成为巴西女排的绝对主力。2007年，在杰奎琳深陷兴奋剂风波的三个月中，巴西女排的成绩一落千丈，在世界女排大奖赛总决赛中，巴西女排跌至谷底，仅仅获得第五名。日本女排世界杯赛，杰奎琳解禁复出，她的回归盘活了整个巴西女排，尽管未能夺冠，但确保了会的入场券，这也证明了杰奎琳的价值。 姓名：费尔南达生日： 1980年01月10日性别：女身高：172 cm体重：66 kg国家及地区：巴西出生地：巴西 萨萨，巴西女排队员，身披10号球衣。姓名：萨萨英文名： Welissa Gonzaga　位置：主攻生日： 1982.09.09身高： 179cm体重：76kg扣球高度： 300cm拦网高度：287cm巴西女排在北京奥运会上力克美国女排夺得冠军,现效力于美国排球俱乐部. 姓名:坦达拉性别:女国籍:巴西团队:巴西女排出生:1988年10月30日　运动项目:排球 生日： 1989年04月24日性别：女身高：183 厘米　体重：75 kg国家及地区：巴西出生地： 巴西 谢拉，巴西女排主力队员之一，面容姣好，是世界排坛为数不多的靓妹级别队员之一，极具魅力。而且她的进攻手段丰富，拦网和发球成绩也都非常突出，这也要归结为她的良好的身体素质。姓名：Sheilla Castro中文名：谢拉性别：女国籍：巴西出生地：巴西贝洛奥里藏特（Belo Horizonte）出生日期：1983年07月01日身高：1.85m体重：68kg项目：女子排球　场上位置：接应二传国家队号码：13扣球高度：3.04cm拦网高度：2.89cm曾经效力队：Mackenzie (1997-2000), MRV/Minas (2001-2004) and Scavolini Pesaro (2004-2008)，São Caetano（2008-至今）Sheilla已签约VAKIFBANK最喜欢的颜色：粉色最喜欢的食物：巴西烤肉最喜欢的音乐：Brazilian最喜欢的书：Ramsés Collection最喜欢的电影：百万宝贝最喜欢的男演员：Tom Hanks最喜欢的女演员：帕米拉.安德森业余体育爱好：网球（排坛美女都爱网球）体育明星偶像：Ayrton Senna （F1的塞纳，巴西人，已故）最喜欢的食物：意大利菜目标：奥运冠军谢拉是巴西女排的进攻核心，也是队中少有的集实力与人气于一身的明星球员。谢拉是一名技术型的接应，她的优势在于手臂长，身体协调性好，脚步灵活，反应敏捷，扣球手法多样，具有敏锐的观察能力，能够将扣球线路的变化与打手出界、打吊结合等战术完美地结合在一起。她的发球也很有特点，能够将大力跳发球和长线跳飘球相结合，以线路刁钻、技巧多变取胜。谢拉的滞空能力强，加之击球点高，扣球经常是落地开花直接得分，她的拦网也不错，判断准确，对手很难顺利通过。谢拉是一个攻防均衡、技术全面且有特点的队员，也是让对手极为头疼、重点盯防的对象 。

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底座安装方法：1.将4颗螺钉从扇体上取出。2.四个柱扣位对齐并套住后，先将上扣位用力向内推卡住（发出响声），再用同样的方法卡住下扣位。3.将底盘放入扇体后将电源线固定在底盘线扣位，用螺钉固定底盘和扇体后，注意将电源线拉直。

1)运行installkm．bat，安装windriver kernel module。安装完毕后打开设备浏览器，出现jungo→windriver即安装成功。 2)请核实机器背面的激光打印的序列号： 机器序列号印为15位(最后一位为字母“p”)，将不能开机的文曲星v5100通过usb与pc连接，同时按下“桌面”和"f2”键，并按“reset”，按照系统提示信息，先后按“y”、“n”键； 3)第2步正礁操作后，windors；将弹出发现新硬件对话框，按照安装新硬件向导安装设备驱动程序，设备描述文件为boottool．inf。 如果安装成功，在设备浏览器中将出现device一项运行： 1)确认安装驱动成功后，运行“系统初始还原工具．exe”； 2)通过usb线连接文曲星与pc； 3)请核实机器背面的激光打印的序列号： 机器序列号印为15位(最后一位为字母“p”)，将不能开机的文曲星v5100通过usb与pc连接，同时按下“桌面”和“f2”键，并按reset”，按照系统提示信息，先后按“y”、“n”键； 4)左键单击“还原系统”按钮。在弹出的对话框单击“是”开始系统还原进程。 一般会经历读取数据文件→擦除闪存→写入闪存→结束。 大约需要十几分钟，根据您的pc性能而定。 1)运行程序之后，请注意先reset文曲星，然后3秒钟之后再点击“还原系统”按钮。 2)如果v5100与pc连接不成功，请先将“系统初始还原工具”程序退出，然后按运行步骤重试。 3)不要在安装设备驱动程序期间随意reset文曲星。 4)不要在擦除闪存和写入闪存的时候reset文曲星。以免对您的文曲星或者windows造成异常损害。 5)本工具暂不能在win98系统运行。 用户电脑的c盘应该保留至少100m空间。

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偷个懒用google翻译。 中文:对不起,我爱你 英文:Sorry,I love you 德语:Es tut mir leid, ich liebe dich 哀思 土特 米和 类特，依稀 里拨 底细 法语:Je suis désolé, Je t"aime 如 素 缔造来，如 呆木 日语:私はごめん、爱してる 挖大喜挖 高迈恩，阿姨西带路 韩语:ubbf8uc548ud558ub2e4, uc0acub791ud55cub2e4 米暗含大，撒浪函大 葡萄牙语:Pesaroso, eu te amo 白撒ro扫，爱物 带 啊毛 意大利语:Mi dispiace, ti amo 米 第四比啊才，地 啊毛 西班牙语:Lo siento, Te quiero 老 四眼多，带 亏爱ro 阿拉伯语:u0648u0627u0646u0627 u0622u0633u0641 u060c u0623u062du0628u0643（不会） 希腊语:∧υπu03acμαι, σε αγαπu03ce 路把脉，塞 啊噶拨 俄语:Я извиняюсь, я люблю тебя 呀 椅子vi你呀幽思，呀 留步六 击毙呀

您好，请问您这款是什么型号的呢？建议拔掉电源重新通电使用看下，如无法排除，需要售后检查处理哈。

すみません（sumimasen）拼音是 si mi ma sen，意义以上两位已经解释得很清楚了 2，すいません（suimasen）拼音是 si i ma sen，用法和すみません差不多。 3，ご免（gomen）是ご免なさい的省略说法，不如ご免なさい正式，用于朋友之间 4，ご免なさい（gomennasai），用法略，参考楼上 5，失礼ですが（shitsureidesuga），拼音是siciledesiga，也相当于EXCUSE ME 6，失礼します（sitsureishimasu），拼音是sicilesimasi，相当于“再见”，对长辈用。 7，お邪魔します（ojiamashimasu），相当于“打扰您了” 8，悪いですが（waruidesuga），相当于“实在不好意思，但是...”，用于求人办事等等。

可以电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πrην可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。影响电泳迁移率的因素⒈电场强度 电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。当电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。电压在500V以上，电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。⒉溶液的pH值 溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（-COOH），又有碱性基团（-NH2）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点（isoelctric point，pI）。若溶液pH处于等电点酸侧，即pH＜pl，则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动。若溶液pH处于等电点碱侧，即pH＞pl，则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。⒊溶液的离子强度 电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。其原因是带电质点吸引相反符合的离子聚集其周围，形成一个与运动质点符合相反的离子氛（ionic atmosphere），离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。可用离子强度I表示。⒋电渗 在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（electro-osmosis）。其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电。如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH-带负电荷，与纸接触的水溶液因产生H3O+，带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速度要快，若质点原来移向正极，表现速度比其固有速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。电泳分析常用方法（一）醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。⒈材料与试剂 醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液，浓度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要点⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。⑵加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白质的常规电泳分析，每cm加样线不超过1μl，相当于60-80μg的蛋白质。⑶电泳：可在室温下进行。电压为25V/cm，电流为0.4-0.6mA/cm宽。⑷染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。⑸脱色与透明：对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是5％醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。（二）凝胶电泳以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广，介绍如下：⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述 琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。⒉琼脂糖凝胶电泳分离核酸的基本技术 在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中，DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比；分子构型也对迁移率有影响，如共价闭环DNA＞直线DNA＞开环双链DNA。当凝胶浓度太高时，凝胶孔径变小，环状DNA（球形）不能进入胶中，相对迁移率为0，而同等大小的直线DNA（刚性棒状）可以按长轴方向前移，相对迁移率大于0。⑴设备与试剂：琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶，而且制胶与加样都比较方便，故应用比较广泛。核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有TBE（0.08mol/L Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸钠，0.0018mol/L EDTA）。⑵凝胶制备：用上述缓冲液配制0.5％-0.8％琼脂糖凝胶溶液，沸水浴或微波炉加热使之融化，冷至55℃时加入溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5μg/ml，然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中，厚度依样品浓度而定。注胶时，梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脱凝固后，取出梳子，加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。⑶样品制备与加样：溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料（0.025％溴酚蓝或桔黄橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使样品集中，每齿孔可加样5-10μg。⑷电泳：一般电压为5-15V/cm。对大分子的分离可用电压5V/cm。电泳过程最好在低温条件下进行。⑸样品回收：电泳结束后在紫外灯下观察样品的分离情况，对需要的DNA分子或特殊片段可从电泳后的凝胶中以不同的方法进行回收，如电泳洗脱法：在紫外灯下切取含核酸区带的凝胶，将其装入透析袋（内含适量新鲜电泳缓冲液），扎紧透析袋后，平放在水平型电泳槽两电极之间的浅层缓冲液中，100V电泳2-3小时，然后正负电极交换，反向电泳2分钟，使透析袋上的DNA释放出来。吸出含DNA的溶液，进行酚抽提、乙醇沉淀等步骤即可完成样品的回收。其它还有低融点琼脂糖法、醋酸铵溶液浸出法、冷冻挤压法等，但各种方法都仅仅有利于小分子量DNA片段（＜1kb）的回收，随着DNA分子量的增大，回收量显著下降。（三）等电聚焦电泳技术等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动，直至某一pH位点时失去电荷而停止移动，此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点（pl）。同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它们的等电点上聚焦为止。可见在该方法中，等电点是蛋白质组分的特性量度，将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中，在电场内经过一定时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上，形成分离的蛋白质区带。⒉pH梯度的组成 pH梯度的组成方式有二种，一种是人工pH梯度，由于其不稳定，重复性差，现已不再使用。另一种是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物，在正极端吸入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在负极端引入碱液，如氢氧化钠、氨水等。电泳开始前两性电解质的混合物pH为一均值，即各段介质中的pH相等，用pH0表示。电泳开始后，混合物中pH最低的分子，带负电荷最多，pI1为其等电点，向正极移动速度最快，当移动到正极附近的酸液界面时，pH突然下降，甚至接近或稍低于PI1，这一分子不再向前移动而停留在此区域内。由于两性电解质具有一定的缓冲能力，使其周围一定的区域内介质的pH保持在它的等电点范围。pH稍高的第二种两性电解质，其等电点为pI2，也移向正极，由于pI2＞pI1，因此定位于第一种两性电解质之后，这样，经过一定时间后，具有不同等电点的两性电解质按各自的等电点依次排列，形成了从正极到负极等电点递增，由低到高的线性pH梯度，如图16-3所示。⒊两性电解质载体与支持介质 理想的两性电解质载体应在pI处有足够的缓冲能力及电导，前者保证pH梯度的稳定，后者允许一定的电流通过。不同pI的两性电解质应有相似的电导系数从而使整个体系的电导均匀。两性电解质的分子量要小，易于应用分子筛或透析方法将其与被分离的高分子物质分开，而且不应与被分离物质发生反应或使之变性。常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等，其中聚丙烯酰胺凝胶为最常应用。电泳后，不可用染色剂直接染色，因为常用的蛋白质染色剂也能和两性电解质结合，因此应先将凝胶浸泡在5％的三氯醋酸中去除两性电解质，然后再以适当的方法染色。（四）其他电泳技术⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法 1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋白质变性和肽链舒展。IEF电泳结束后，将圆柱形凝胶在SDS-PAGE所应用的样品处理液（内含SDS、β-巯基乙醇）中振荡平衡，然后包埋在SDS-PAGE的凝胶板上端，即可进行第二向电泳。IEF/ SDS-PAGE双向电泳对蛋白质（包括核糖体蛋白、组蛋白等）的分离是极为精细的，因此特别适合于分离细菌或细胞中复杂的蛋白质组分。⒉毛细管电泳 Neuhoff等人于1973年建立了毛细管均一浓度和梯度浓度凝胶用来分析微量蛋白质的方法，即微柱胶电泳，均一浓度的凝胶是将毛细管浸入凝胶混合液中，使凝胶充满总体积的2/3左右，然后将其揿入约厚2mm的代用粘土垫上，封闭管底，用一支直径比盛凝胶的毛细管更细的硬质玻璃毛细管吸水铺在凝胶上。聚合后，除去水层并用毛细管加蛋白质溶液（0.1-1.0μl，浓度为1-3mg/ml）于凝胶上，毛细管的空隙用电极缓冲液注满，切除插入粘土部分，即可电泳。目前毛细管电泳分析仪的诞生，特别是美国生物系统公司的高效电泳色谱仪为DNA片段、蛋白质及多肽等生物大分子的分离、回收提供了快速、有效的途径。高效电泳色谱法是将凝胶电泳解析度和快速液相色谱技术溶为一体，在从凝胶中洗脱样品时，连续的洗脱液流载着分离好的成分，通过一个连机检测器，将结果显示并打印记录。高效电泳色谱法既具有凝胶电泳固有的高分辨率，生物相容性的优点，又可方便地连续洗脱样品。各电泳法，除另有规定外，照下述方法操作。一、纸电泳法 1.仪器装置 包括电泳室及直流电源两部分。 常用的水平式电泳室装置如图，包括两个电泳槽A和一个可以密封的玻璃(或相应材料)盖B；两侧的电泳槽均用有机玻璃（或相应材料）板C分成两部分；外格装有铂电极(直径0.5～0.8cm)D；里格为可放滤纸E的有机玻璃电泳槽架F，此架可从槽中取出；两侧电泳槽A内的铂电极D经隔离导线穿过槽壁与外接电泳仪电源相连。 电源为具有稳压器的直流电源，常压电泳一般在100～500V，高压电泳一般在500～10 000V。2. 操作法 (1) 电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液(pH3.0) 取枸橼酸 (C6H8O7·H2O)39.04g与枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g，加水4000ml，使溶解。 (2) 滤纸 取色谱滤纸置1mol/L甲酸溶液中浸泡过夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干，备用。可按需要裁成长27cm、宽18cm的滤纸，或根据电泳室的大小裁剪，并在距长度方向一端5～8cm处划一起始线，每隔2.5～3cm处做一记号备点样用。 (3) 点样 有湿点法和干点法。湿点法是将裁好的滤纸全部浸入枸橼酸盐缓冲液(pH3.0)中，湿润后，取出，用滤纸吸干多余的缓冲液，置电泳槽架上，使起始线靠近阴极端，将滤纸两端浸入缓冲液中，然后用微量注射器精密点加供试品溶液，每点10μl,共3点，并留2个空白位置。 干点法是将供试品溶液点于滤纸上，吹干、再点，反复数次，直至点完规定量的供试品溶液，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处最后喷湿，本法适用于稀的供试品溶液。 (4) 电泳 于电泳槽中加入适量电泳缓冲液,浸没铂电极，接通电泳仪稳压电源挡,调整电压梯度为18～20V/cm，电泳约1小时45分钟，取出,立即吹干,置紫外光灯(254nm)下检视，用铅笔划出紫色斑点的位置。 (5) 含量测定 剪下供试品斑点和与斑点位置面积相近的空白滤纸，剪成细条，分别置试管中，各精密加入0.01mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，放置1小时，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，也可用自然沉降或离心法倾取上清液，按各药品项下的规定测定吸收度，并按吸收系数计算含量。二、醋酸纤维素薄膜电泳法 1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂 (1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加水溶解使成1000ml。 (2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。 (3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混匀。 (4) 透明液 取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。 3.操作法 (1) 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm的膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 点样与电泳 于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl,在10～12V/cm电位梯度下电泳。电泳区带距离以4～5cm为宜。 (3) 染色 电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。 (4) 透明 将洗净并完全干后的膜条浸于透明液中10～15分钟，取出平铺于洁净的玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光度计上测定和作标本长期保存。 (5) 含量测定 未经透明处理的醋酸纤维素薄膜电泳图可按各药品项下规定的方法测定，一般采用洗脱法或扫描法，测定各蛋白质组分的相对百分含量。 洗脱法 将洗净的膜条用滤纸吸干，剪下供试品溶液各电泳图谱的电泳区带，分别浸于1.6％的氢氧化钠溶液中，振摇数次，至洗脱完全， 于一定波长下测定吸收度。同时剪取与供试品膜条相应的无蛋白部位，同法操作作对照。先计算吸收值总和，再计算各蛋白组分所占百分率。 扫描法 将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪通过反射 （未透明薄膜） 或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，横坐标为膜条的长度，纵坐标为吸收度，计算各蛋白组分的百分含量。亦可用微机处理积分计算。三、琼脂糖凝胶电泳法 1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂 (1) 醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH至3.0，再加水至1000ml。 (2) 甲苯胺蓝溶液 取甲苯胺蓝0.1g，加水100ml使溶解。 3.操作法 (1)制胶 取琼脂糖约0.2g，加水10ml，置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)10ml，混匀，趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻璃板上，厚度约3mm，静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层，即得。 (2) 标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下规定配制。 (3) 点样与电泳 在电泳槽内加入醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0),将凝胶板置于电泳槽架上，经滤纸桥浸入缓冲液。于凝胶板负极端分别点样1μl，立即接通电源，在电压梯度约30V/cm，电流强度1～2mA/cm的条件下，电泳约20分钟，关闭电源。 (4) 染色与脱色 取下凝胶板，用甲苯胺蓝溶液染色，用水洗去多余的染色液至背景无色为止。四、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 1.仪器装置 通常由稳流电泳仪和圆盘或平板电泳槽组成。其电泳室有上、下两槽,每个槽中都有固定的铂电极，铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流挡上。2.试剂 (1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g，四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L盐酸溶液48ml，再加水溶解并稀释至100ml,置棕色瓶内，在冰箱中保存。 (2)溶液B 取丙烯酰胺30.0g、次甲基双丙烯酰胺0.74g，加水溶解并稀释至100ml,滤过，置棕色瓶内，在冰箱中保存。 (3)电极缓冲液(pH8.3) 取三羟甲基氨基甲烷6g、甘氨酸28.8g,加水溶解并稀释至1000ml，置冰箱中保存，用前稀释10倍。 (4)溴酚蓝指示液 取溴酚蓝0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml与90％乙醇5ml,微热使溶解，加20％乙醇制成250ml。 (5)染色液 取0.25％(W/V)考马斯亮蓝G<[250]>溶液2.5ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。 (6)稀染色液 取上述染色液2ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。 (7)脱色液 7％醋酸溶液。3.操作法 (1)制胶 取溶液A2ml，溶液B5.4ml，加尿素2.9g使溶解，再加水4ml，混匀，抽气赶去溶液中气泡， 加0.56％过硫酸铵溶液2ml，混匀制成胶液，立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10×0.5cm)中,使胶层高度达6～7cm, 然后徐徐滴加水少量，使覆盖胶面，管底气泡必须赶走，静置约30分钟，待出现明显界面时即聚合完毕，吸去水层。 (2)标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下的规定。 (3)电泳 将已制好的凝胶玻璃管装入圆盘电泳槽内，每管加供试品或标准品溶液50～100μl，为防止扩散可加甘油或40％蔗糖溶液1～2滴及0.04％溴酚蓝指示液1滴,也可直接在上槽缓冲液中加0.04％溴酚蓝指示液数滴，玻璃管的上部用电极缓冲液充满，上端接负极、下端接正极。调节起始电流使每管为1mA，数分钟后，加大电流使每管为2～3mA，当溴酚蓝指示液移至距玻璃管底部1cm处，关闭电源。 (4)染色和脱色 电泳完毕，用装有长针头并吸满水的注射器,自胶管底部沿胶管壁将水压入，胶条即从管内滑出，将胶条浸入稀染色液过夜或用染色液浸泡10～30分钟，以水漂洗干净，再用脱色液脱色至无蛋白区带凝胶的底色透明为止。 (5)结果判断 将胶条置灯下观察，根据供试品与标准品的色带位置和色泽深浅程度进行判断。 相对迁移率 供试品和标准品的电泳区带有时可用相对迁移率(R"<[m]>)进行比较。其计算式如下： 进胶端到供试品或标准品区带的距离 相对迁移率(R"<[m]>)＝——进胶端到溴酚蓝区带的距离 扫描 将清晰的胶条置双波长薄层扫描仪或凝胶电泳扫描仪中扫描并积分，由各组分的峰面积计算百分含量。五、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量,是根据大多数蛋白都能与阳离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不同蛋白分子的电荷效应,使蛋白分子相对迁移率(R"<[m]>)的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子量的标准蛋白的对数和相对迁移率所作的标准曲线中求出供试品的分子量。1.仪器装置 除另有规定外，同聚丙烯酰胺凝胶电泳。2.试剂 (1)丙烯酰胺液溶 称取丙烯酰胺22.2g与双丙烯酰胺0.6g， 溶于100ml水中，贮于褐色瓶中低温保存。 (2) 凝胶缓冲液 称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)8.82g 、磷酸氢二钠(Na2HPO4 ·12H2O)51.55g与十二烷基硫酸钠2.0g，加水至1000ml(若有沉淀析出,可加温至37℃溶解)。 (3)电泳缓冲液 将凝胶缓冲液稀释1倍。 (4)染色液 称取25mg考马斯亮蓝R<[250]>,溶于57％乙醇与9.2％醋酸混合液100ml中。 (5)脱色液 取无水乙醇75ml，加冰醋酸50ml，用水稀释至1000ml。3.操作法 除下列规定外，其他均同聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (1)制胶 用丙烯酰胺溶液－凝胶缓冲液－水－1.6％过硫酸铵溶液-四甲基乙二胺(需冷却)(10.1∶15.0∶3.4∶1.5∶0.045) 配制而成。 (2)标准蛋白溶液及供试品溶液的制备 取标准蛋白，加水制成每1ml中含2～5mg的溶液，与水解液(取尿素21.6g和十二烷基硫酸钠0.04g，溶于40ml水中)1∶3混合，置冰箱中过夜。供试品照上述方法配制。 (3)电泳 调节电流使每管为8mA。4.相对迁移率和分子量计算 将电泳脱色后的区带用卡尺或用扫描定位法测量染料移动的距离、染色前胶条长度、蛋白移动距离和脱色后的胶条长度。按下式计算相对迁移率： 蛋白移动的距离 染色前的胶条长度 相对迁移率(R"<[m]>)＝———×——— 脱色后的胶条长度 染料移动的前沿距离 以R"<[m]>为横坐标,已知分子量标准蛋白的对数为纵坐标,在半对数坐标纸上绘图,由标准曲线中查出供试品分子量。

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德语的"对不起"应该是Entshudigung!

省略号的主要作用有表示语言的延长、表示语言或歌曲等的省略、表示语句的转折、表示语言断断续续、表示事物或道理的多项列老蔽举等。省略号是表明文句中省略内容的标号．省略号的主要用法是表示省略．省略的内容主埋大要有四：一是引文；二是重复性词语；三是类似语句；四是列举．扩侍液州展资料：省略号的用法1．引文的省略，用省略号标明．例如：她轻轻地哼起了《摇篮曲》：“月儿明，风儿静，树叶儿遮窗棂啊??”2．列举的省略，用省略号标明．例如：在广州有花市上，牡丹、吊钟、水仙、梅花、菊花、山茶、墨兰??春秋冬三季的鲜花都挤在一起啦！3．说话断断续续，可以用省略号表示．例如：“我??对不起??大家，我??没有??完成??任务．”参考资料：百度百科-省略号[wap.meigegou.com.cn/article/307549.html][wap.lisa-c.cn/article/208736.html][wap.zjsyby.cn/article/321957.html][wap.haqksm.com.cn/article/836059.html][wap.qiyue520.cn/article/283790.html][wap.y1990.cn/article/673940.html][wap.369door.cn/article/421078.html][wap.lingstar.cn/article/613742.html][wap.scdypost.cn/article/156428.html][wap.towords.cn/article/231785.html][wap.xuchin.cn/article/265893.html][wap.celiyi.cn/article/638157.html][wap.shoess.cn/article/079263.html][wap.bbjshop.cn/article/269873.html][wap.bbjshop.cn/article/382697.html]

他来源于意大利统一之前的罗马教皇国。 在基督教的早期，教会处于非法状态，直至罗马皇帝君士坦丁大帝在位时期方给予基督教合法地位。也是在此之后，由于罗马皇帝和贵族的捐赠，基督教会的财产得以飞速增长。君士坦丁大帝将拉特兰宫赠给教会，这成为教会最早收到的一笔重大捐赠。除了房产之外，在意大利本土及罗马帝国各行省，捐赠给教会的地产和财富也不断增加。不过，教会是作为私人领主占有这些土地的，并不拥有这些赠土的主权。 公元5世纪时，西罗马帝国遭到蛮族的不断入侵，导致476年被东哥特人灭亡。西罗马灭亡后，其原有领土陷入无主状态，在这种情况下，意大利的基督教会组织起来，在罗马主教的治理下，逐渐成为意大利中部地区事实上的世俗统治者。 公元6世纪后，教皇国的雏形开始出现，但是查士丁尼大帝治下的拜占庭帝国对意大利展开了一系列征服活动，破坏了教皇国的政治和经济基础。伦巴底人将拜占庭势力逐出意大利。虽然此时的罗马主教（教皇）在名义上还要臣服于拜占庭皇帝，但是罗马教会的相对独立使得罗马主教有资本与君士坦丁堡主教和拜占庭皇帝相抗衡，罗马主教格历高里二世甚至开除了拜占庭皇帝利奥三世的教籍。 至公元7世纪，随着拜占庭帝国的衰落，罗马教会作为意大利最大的土地所有者，再度对拜占庭势力所不及的罗马城周围地区展开统治，并利用军事、外交手段（甚至包括贿赂）来抵抗伦巴底人的进攻。在罗马教会的努力下，伦巴底人停止南下，转而集中攻打亚平宁半岛北部以拉文纳城为核心的拜占庭总督辖区。728年，伦巴底国王路易特普兰德将拉丁地区的一些乡村和城镇捐献给罗马主教，这些土地（被称为“Patrimonium Petri”，即“圣彼得的遗产”）成为教皇国的立国基石。 751年，拜占庭在意大利的领土最终全部沦丧于伦巴底人之手。罗马地区（此时已经发展为罗马公国）彻底切断了和拜占庭帝国的联系。教皇司提反二世通过向法兰克人领袖“矮子”丕平大献殷勤，从而解除了伦巴底人的威胁。司提反采取了一系列向丕平示好的行动，包括批准后者废黜墨洛温王朝末代国王希尔德里克三世而自立为王。司提反还封丕平为罗马贵族。作为回报，丕平率军在754年进入意大利。在此后的两年中，他平定了意大利中部和北部的许多地方，然后将其作为对教会的奉献赠送给罗马教皇。在781年，丕平的儿子查理曼大帝宣布教皇为这些地区的最高统治者。 丕平奉献的土地包括拉文纳的原拜占庭总督辖区，贝内文托公国的一部分，托斯卡纳，科西嘉，伦巴底，中意大利五城（Pentapolis）地区——里米尼（Rimini）、佩萨罗（Pesaro）、法诺（Fano）、西尼加利亚（Senigallia）和安科纳（Ancona），以及其他一些城市。 丕平的献土扩大了教皇的统治区域，然而也带来一个法理上的问题：既然教皇所统治的领土是由法兰克帝国所赠，那么教皇在世俗政治中是否相应地成为法兰克皇帝的封建附庸呢？ 为了提高教皇国的威望，以及打消丕平的继承人日后利用这一献土行为来控制教廷的可能，罗马教廷在750年至850年之间大胆伪造了一份被称为“君士坦丁献土”的文献（拉丁语：Constitutum Donatio Constantini；Constitutum domini Constantini imperatoris），试图宣布教皇国所拥有的土地是在公元4世纪时由罗马皇帝君士坦丁一世奉献给罗马主教西尔维斯特二世的。该文献说，君士坦丁大帝在西尔维斯特二世通过祈祷为其治好麻风病后接受了洗礼，并在受洗后的第四天就决定将帝国都城罗马捐赠给基督教会，并在博斯普鲁斯海峡旁的拜占庭营建新都。该文献还断言，君士坦丁大帝不仅向罗马主教捐赠了意大利中部地区，而且还捐献了整个罗马帝国的西半部领土，并授予教皇及其后任者对其进行世俗统治的权力。 法兰克帝国的分裂从另一方面解决了教皇国法律地位的难题。查理曼大帝死后，帝国在9世纪分裂为三部分。虽然在此后的几个世纪中，以法兰克国王直系继承人自居的历代法国国王往往宣布自己为教廷的世俗保护者，甚至将教廷和教皇由罗马搬迁至阿维尼翁，但是在欧洲却不再有哪位皇帝或国王可以以法兰克帝国唯一继承者的身份对教皇国提出宗主权要求。 罗马教会和法兰克人的合作在800年达到了顶峰。在此之前，像东方的君士坦丁堡教会一样，罗马教皇和罗马教会的地位（至少在名义上）是从属于罗马帝国的唯一继承人，即东罗马皇帝的。教皇和君士坦丁堡大主教被认为是上帝在人间的宗教事务代表，而罗马（东罗马）皇帝是上帝在人间的世俗事务代表。基督教会和人民都认为，世界上只有一个皇帝，即罗马皇帝。797年君士坦丁六世被废，以及其母亲伊琳娜皇太后自立为罗马女皇（797年-802年在位），使得罗马教会有理由拒绝承认君士坦丁堡统治者的最高权威。罗马教会宣称，罗马皇帝的名义在希腊人（即拜占庭人）中已经不存在了，因此罗马教皇、所有的主教、法兰克元老元和罗马城的所有长老经过商议，决定把法兰克国王加冕为皇帝，使罗马帝国永远传承下去。 800年，教皇利奥三世将查理曼大帝加冕为“受上帝委托统治罗马帝国的伟大皇帝奥古斯都陛下”（Karolus Augustus a Deo coronatus magnus Imperator Romanum），神圣罗马帝国诞生（此时尚无“神圣罗马帝国”的国名，至康拉德二世时始称“罗马帝国”，至腓特烈一世时，为了与“神圣罗马教会”的名称相抗衡，方始称“神圣罗马帝国”）。 罗马教会认为，将查理曼加冕为奥古斯都和罗马皇帝，并不是宣告西方基督教世界从此与东罗马帝国分庭抗礼。在他们看来，476年西罗马末帝被废黜，并不标志着西罗马帝国的灭亡，而是标志着罗马帝国的归一，东罗马帝国重新成为单一的、没有分裂的罗马帝国。查理曼加冕为奥古斯都和罗马皇帝，意味着罗马帝国的正统皇统从“新罗马”——君士坦丁堡重新返回罗马城。 但是，因为东罗马帝国的皇统并未就此中断，所以此后基督教世界出现了两个并立的最高统治者，一个在君士坦丁堡，一个在罗马。他们并不像过去的东西罗马帝国皇帝那样和平并立，而是彼此指责对方是僭越者，宣布自己是唯一真正而合法的基督教会和人民的领袖。从这一点来说，利奥三世通过为查理曼大帝加冕，使罗马教会（及其领地）摆脱了臣服于东罗马皇帝的从属地位。从此之后，罗马教皇成为西方基督教世界的最高宗教领袖。

旋转蒸发仪主要有Heidolph（德国）、Buchi（瑞士）、IKA（德国）、EYELA（日本，东京理化），一般实验室预算够的话都会优先考虑Heidolph和Buchi。因为后面两个品牌现在都是中国工厂代加工的，品质方面不敢保证。四个品牌中，Heidolph的名气最大，其加热锅的最高温度可达210℃，控制精度为±0.1℃，而且仪器的细节方面做得非常人性化。

sorry(英文) 3971210731(韩文) извините (俄文) désolé (法文) pesaroso (葡萄牙文) apesadumbrado(西班牙文) droevig 荷兰语 mothasefam波斯 Es tut mir Leid (ess toot meer lite)德国 Slihah (transliterated)希伯来语 Mi dispiace (me dispyachay) 意大利 Gomen nasai (transliterated) 日本（残念） Af ederim (ahf ay-dare-im) 土耳其 Ignoscas - 拉丁 (forgive me) Maaf kijiye 印度 scuzma 罗马尼亚 maaf印度尼西亚 171815121219阿拉伯 捷克： prosím 丹麦语： undskyld 爱沙尼亚语： kuidas palun 芬兰语： anteeksi kuinka 希腊语： π0409 ε07πατε; 匈牙利语： Tessék 冰岛语： afsaki08! fyrirgef08u! 拉脱维亚语： kā， lūdzu 立陶宛语： (atsi) pra08au 挪威语： sa du hva 波兰语： S00ucham 斯洛伐克： prosím 斯洛文尼亚语： oprostite 瑞典语： hursa

磺胺二甲嘧啶(SM )是畜牧生产中应用最广泛的磺胺类药物之一。广泛用于畜禽疾病的治疗和预防，食用含磺胺二甲嘧啶的动物组织，能导致机体发生过敏反应，破坏机体正常菌群生态平衡，引起致病菌产生耐药性|1]。我国、欧盟和FAO／wH0规定，动物组织中SM 最高残留限量为100 ug／kg。畜牧生产中应用的磺胺类药物进入外界环境，可能随污水或地表径流，渗漏进入地下水或污染附近的池塘，对水环境中的非靶生物可能产生毒性或在其体内富集，造成环境污染[2]。由此引起的该药物在水产品中的残留也受到关注。在动物体内，磺胺二甲嘧啶主要经乙酰化酶代谢形成N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶(N 一ACE—SM )L3州]。在人体内，N -ACE-SM 可逆转化成为药物原形，从而具有药理活性。因而，N 一ACE—SM的残留测定也是有必要的。日本规定磺胺二甲嘧啶的残留标识物为磺胺二甲嘧啶原形和N -ACE—SMz L6J。本文建立了磺胺二甲嘧啶原形和乙酰化磺胺二甲嘧啶残留的高效液相色谱测定法。l 材料与方法1．1 试验材料1．1．1 标准品 磺胺二甲嘧啶，白色结晶，纯度>99 ，美国Sigma公司；N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶，白色结晶，由本实验室自行合成。1．1．2 主要试剂 乙腈，色谱纯，Fisher公司；冰醋酸：分析纯，北京化学试剂公司；正己烷，无水硫酸钠和正丙醇：均为分析纯，北京化工厂。1．1．3 主要仪器设备 高效液相色谱仪：SCL-10AVP系统控制仪，DGU-12A 脱气装置SPDM10AVP二极管阵列检测器，LC一10ATVP泵，Class—VP工作站(日本Shimadzu公司)。调速多用振荡器：HY一4型，常州同华电器有限公司。组织匀浆机：Nissei AM-6，日本Ace公司。旋转蒸发器：Laborota 4003型，德国Heidolph公司。离心机：LD4-2A，北京医用离心机厂。电子天平：0．01 mg，Sartorius公司。微量移液器：北京青云航空仪表有限公司。磁力搅拌器：7 8-1型，浙江乐清乐成电器厂。隔膜真空泵(GM-0．33)、溶剂过滤器，均为天津市腾达过滤器件厂产品。SPE柱：Sep-Pak Vac12cc(2g)碱性氧化铝柱，美国Waters公司。1．2 试验方法1．2．1 色谱条件 色谱柱：C e反相液相色谱柱，Inertsil ODS-3(4．6 mm×250 mm，粒径5 m)；流动相：水一乙腈一乙酸(76：24：0．05，V／V／V)；检测波长：265 nm；进样量：50 ttL；流速：1 mL／mim。1．2．2 标准溶液的配置 精密称取SM 和N 一ACE-SMz各0．010 0 g，用乙腈溶解并定容至100mL，配置成100 ttg／mL的2种标准贮备液，一20℃避光保存。标准贮备液再用乙腈稀释，配置成浓度为10 ttg／mL标准工作液，一20℃避光保存。1．2．3 标准曲线绘制于测定当日用流动相将SM 、N 一ACE—SM 的标准工作液稀释，配制成浓度为0．01、0．02、0．05、0．10、0．50、1．00 和2．50t*g／mL的混合标准溶液，各取50 L进样，HPLC检测，对峰面积积分。每一浓度进样5次，取平均值，然后以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制上述2种化合物的标准曲线，求出回归曲线和相关系数。1．2．4 样品前处理1．2．4．1 提取和净化：鲟鱼肌肉去皮，于15 000r／rain匀浆3 rain后，准确称取2．00 g肌肉组织匀浆，加入乙腈25 mL，无水硫酸钠4 g，中速振荡20rain，3 000 r／rain离心5 rain。取上清于含30 mL正己烷的100 mL分液漏斗中，振摇1 rain，静置20rain，收集下层。分离后的残渣再用25 mL乙腈提取1次，振荡20 rain后，3 000 r／rain离心5 rain。倒入分液漏斗中振荡2 rain后静置分层，合并2次所得的下层溶液，加入正丙醇10 mL，40℃下减压蒸馏，残留物用5 mL乙腈一水(95：5，V／V)溶解。1．2．4．2 萃取：预先用15 mL乙腈一水(95：5，V／V)平衡Sep—Pak Vac 12cc(2g)碱性氧化铝柱，然后上样，用5 mL乙腈一水(95：5，V／V)洗涤，不收集；再用5 mL乙腈一水(75：25，V／V)洗脱，收集洗脱液，氮气吹至近干，残留物用流动相定容至2．0mL，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。1．2．5 回收率的测定设20、100、2 000 t*g／kg 3个组织添加水平，并设空白对照，每个水平设5个平行。分别称取匀浆肌肉组织2．00 g，添加一定体积的标准工作液，使肌肉组织中药物浓度分别为20、100、2 000 t*g／kg，涡动1 rain，静置10 rain，按样品前处理方法进行处理后进HPLC分析。根据各组分的峰面积计算其浓度和回收率。1．2．6 检测限的测定10个空白鲟鱼肌肉样品，每个空白肌肉准确称取2．00 g，按样品前处理方法处理，测得基线噪音值，按信噪比为3计算，求得鲟鱼肌肉组织中SM。和N 一ACE-SM2测定方法的检测限。1．2．7 精密度的测定 3 d内，每日准确称取匀浆组织各2．00 g，每个浓度3个平行，分别添加一定体积的标准溶液，使组织中SM 和N 一ACE—SM 药物浓度为20、100、2 000 t,g／kg，涡动1 rain，静置1Orain后，按样品前处理方法进行处理。El内每个浓度取5个样品，每个样品重复进样测定5次，上述3个添加浓度分别作3个El间重复。求各组分的峰面积，计算2种药物在El内与El间回收率的平均值与标准误。2 结 果2．1 标准曲线取上述配制的各浓度的磺胺二甲嘧啶、N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶混合标准工作液在选定的色谱条件下进行测定，在浓度为0．01～2．0 p．g／mI 范围内，色谱峰面积与浓度呈线性相关。如表1所示，标准品和样品的色谱图见图1。表1 SM：、N‘一ACE-SM：标准曲线回归方程与相关系数Table 1 Standard curves regression equations andcorrelative coefficients of SM 2 and N‘-ACE-SM22．2 检测限根据10个空白组织的基线噪音值，求其平均值，以平均噪音的3倍计算检测限，求得肌肉组织中SM，、N —ACE—SM2的检测限均为10．0 ttg／kg。2．3 添加回收率和精密度在20、100、2 000 ttg／kg(低、中、高)3个浓度的添加水平，对鲟鱼肌肉样本进行添加回收试验，结果见表2和表3。表2 鲟鱼肌肉组织中SM：、N4_ACE—SM：的添加回收率(n-5)Table 2 Recovery of SM2 and N4_ACE·SM2from fortified m uscles3 讨 论3．1 样品提取关于肌肉组织中磺胺二甲嘧啶、N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶的提取方法，已有的报道大多用二氯甲烷[川、乙腈 或偏磷酸一甲醇(2：1，V／V)[ 作提取溶剂。用二氯甲烷提取时，组织漂浮在提取溶剂表面，倾倒困难；使用偏磷酸一甲醇作提取溶剂，由于含有大量的水分，造成减压蒸馏耗时费力；使用乙酸乙酯提取效率最高，但提取的组织内源性物质也最多，净化较困难，净化方法还需要进一步研究。采用乙腈作提取溶剂，提取效率较低，但增加提取溶剂的量，可获得满意的回收率，另外用乙腈提取时共提的杂质也较少。经过反复试验，用25 mL乙腈，提取2次，可将目标分析物提取出来。盐析会促进溶质的析出，可提高有机溶剂提取效果。本试验在提取溶剂中加入无水NazSO ，提高了磺胺二甲嘧啶和N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶的提取效率，当Na SO 加至4 g时，回收率不再增加。因此，选用添加无水硫酸钠的量为4 g。3．2 样品净化样品净化是样品前处理步骤中关键的一步，选择SPE柱的种类尤为重要，它直接关系到方法的回收率。文献报道用于净化的SPE柱有C。。柱[3 ]，本方法选用的碱性氧化铝柱为正相柱，洗脱溶剂黏滞系数小，自然状态下很快流干，操作较简单。3．3 检测磺胺类药物的检测，文献报道有紫外检测器、荧光检测器和电化学检测器。电化学检测器的电极需要稳定的时间较长，样品杂质容易污染电极。荧光检测器的灵敏度和选择性比紫外检测器高。SM用荧光胺衍生化后生成的产物具有荧光性，但N 一ACE—SM 不能用荧光胺衍生化，限制了荧光检测器的应用。紫外检测器为目前测定磺胺类药物最常用的检测器，可直接测定，无需衍生化，简捷迅速。我们采用二极管阵列检测器检测，选取两种药物光谱图的最大吸收波长作测定波长。光谱见图2。3．4 回收率与检测限在本试验条件下，对鲟鱼肌肉组织在20、100、2 000 ttg／kg添加浓度范围内，磺胺二甲嘧啶、N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶的检测限均为10．0“g／kg。Ho—rie等L7 报道用于测定肌肉中上述两种药物方法的检测限为20．0 gg／kg，本方法的检测限低于文献报道值；回收率与之接近，但本方法操作较简单。3．5 操作注意事项磺胺类药物在高温、光线直射、空气暴露等环境条件下，会部分降解氧化损失，故在样品提取净化操作过程中，要尽可能在避光、室温小于25℃条件下操作，所用的器皿也应尽可能采用棕色；标准液及样液应在冷藏、避光条件下保存；样液也应尽快分析。本试验结果表明，100 ttg／mL 的标准液在一20℃、黑暗条件下可保存6个月。图没办法上传，加我qq445177317，可以给你，写百度知道就可。

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