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英语语法基础知识大全【浅谈归纳、对比法在英语语法课中的运用】

2023-07-14 23:39:13
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Chen

  摘 要:本文从语法教学的角度,针对非英语专业学生的英语语法学习中的薄弱环节――非谓语动词分词用法进行分析,并通过归纳、对比法总结出语法的规则,有助学生对该语法点的掌握。

  关键词:非英语专业学生 英语语法课 非谓语动词 归纳、对比法 讲授

  

  从语法教学的角度来看,归纳法是先让学生掌握接触具体的语言现象,然后在此基础上总结出语法的规则来。归纳法能激发学生的思维活动,调动学生的学习主动性和积极性,比较适合于英语学生掌握外语语法的学习心理过程,因而效果好,较多用,是语法教学的主要方法,其主要教学过程是:1. 信息输入,观察(imformation,observation);2. 对比(analyse,comparison);3. 归纳(summary);4. 练习(exercises)。在语法教学中,对比穿插其中,它能显现出句子内在联系,避免混淆,加深理解。现就语法“过去分词”(past participle)中,归纳法的运用做例析。

  由于大学英语教材中语法分词的用法`只提供少量例句,用法介绍不系统,教师可先复习现在分词的用法,在此基础上再教过去分词的用法:

  分词有两种,一种是现在分词,另一种是过去分词。这两种分词在句子中能担任的成分大体相同,主要是在意思上有主动与被动之分、进行与完成之分。[1]前者有主动的意思,后者有被动的意思,有时表示的时间也不相同。

  

  一、信息输入(imformation)

  

  观察复习现在分词的例句。

  1. China is a developing country.

  2. The doctor examining the patient is my brother.

  3. The situation is encouraging.

  4. I heard someone opening the door.

  5.Following the doctor"s advice,the patient will soon get well.

  6. The patient entered the ward supported by two nurses.

  教师引导学生说明:上面六句里现在分词或短语在句中的作用分别为定、表、宾补和状语,现在分词一般具有主动和进行的意思。

  

  二、分析对比现在分词和过去分词的句子

  

  教师将上面六个例句分别改为:

  1. America is a developed country.

  2. The patient examined by the doctor is my brother.

  3. I feel encouraged by the situation.

  4. I heard the door opened.

  5. Given some medicine ,the patient will soon get well.

  6.The patient entered the ward supporting himself with a stick.

  通过与前六句的逐句的对比、分析,使学生认识到:

  1. 过去分词和现在分词一样,是非谓语动词,在句中所充当的作用相类似。

  2. 单个的分词做定语,一般位于所修饰名词之前;而分词短语做定语,一般位于被修饰名词之后,相当于一个省略的限制性定语从句。不同:单个过去分词有时也可置于被修饰名词之后,而单个现在分词却不能。

  eg. The problem discussed is an important one.

  3. 某些表示感觉的分词做表语时,现在分词是令人有某种感觉,意义是主动的。而过去分词是人被引起某种感觉,意义是被动的。

  eg. The news is surprising.

  消息令人吃惊。

  He was surprised at the news.

  他听到这消息感到吃惊。

  4. 分词做状语时,其逻辑主语必须和主句的主语一致,所以句中主语和分词之间的主动、被动关系,往往可作为确定用现在分词还是过去分词的方法。

  Eg._______(give)some medicine ,the patient will soon get well .

  我们可以看看主句主语the patient和(give)some medicine 之间的关系,因为病人和给药间的关系是被动的,所以选用give的过去分词given作为正确词形来填空。

  

  三、归纳(summary)

  

  概括起来要使学生掌握:

  1. 分词是动词的非谓语形式。在句中主要起形容词、副词的作用。在句中能充当定语、表语、宾语补足语和状语。它也可有自己的宾语、状语,有时也有它的逻辑主语。

  2. 现在分词有主动或进行的意义,过去分词有被动或完成的意义。

  

  四、练习

  

  用归纳法来上一堂语法课,语法由浅入深,一环扣一环,既能有层次地呈现新的教学内容,又能和前面所学的语法有机地联系起来,能充分发挥教师的主导作用和学生的主体作用,培养学生分析和综合运用的能力。

  

  参考文献:

  [1]张道真.实用英语语法[M].北京:商务印书馆出版,1981,(5):25.

  [2]薄冰,赵德鑫.英语语法手册[M].北京:商务印书馆出版,1979,(1):217.

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analyse analyze analysis的区别?

analyse、analyze、analysis的区别为:意思不同、用法不同、侧重点不同。一、意思不同1.analyse:分析。2.analyze:(分析)研究;分解;解析。3.analysis:对,对抗,很,非常,十分。二、用法不同1.analyse:analyse的基本意思是“分析”,指对事物的各个组成部分进行深入的研究以弄清事物的性质、结构及各组成部分的相互关系及原因、效果、动机、可能性等。2.analyze:在科技术语中可指“分解”,即严密考证某物的质、量或纯正度。还可指“对?进行精神分析,对?做心理分析”。analyse是及物动词,后跟名词或代词作宾语。3.analysis:基本意思是“分析”,指对事物的各个组成部分及其性质、结构和相互关系的研究,有时还有有意识地去发现或揭示事物的性质、原因、效果、动机或可能性并以此作为作出判断或采取行动的基础之意。三、侧重点不同1.analyse:研究分析各个部分。美式英语的用法。2.analyze:是英式英语的用法。3.analysis:研究一个整体的各部分,以及其各部分组成整体的关系。
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【分析】

词典解释 :analyse 将事物、现象、概念分门别类,离析出本质及其内在联系。
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古汉语中分析是什么意思

◎ 分析 fēnxī[analyse] 将事物、现象、概念分门别类,离析出本质及其内在联系--------------------------1.分开;区分。《汉书·孔安国传》:“世所传《百两篇》者,出 东莱 张霸 ,分析合二十九篇以为数十。又采《左氏传》、《书叙》为作首尾,凡百二篇。”《后汉书·徐防传》:“臣闻《诗》、《书》、《礼》、《乐》,定自 孔子 ;发明章句,始於 子夏 。其后诸家分析,各有异说。” 清 陈鳣 《对策》卷二:“又有古文出于 孔 壁,别有《闺门》一章,自馀分析十八章,总为二十二章。”2.离别;分离。 晋 刘琨 《答卢谌诗并书》:“天下之寳,当与天下共之。但分析之日,不能不怅恨耳。”《宋书·谢灵运传》:“于时内慢神器,外侮戎狄。君子横流,庶萌分析。”《南史·宋纪上》:“自 玄 篡逆,于今历载,弥年亢旱,人不聊生,士庶疲於转输,文武困於板筑,室家分析,父子乖离。”3.分解辨析。今指把一件事物、一种现象、一个概念分成各个部分,找出这些部分的本质属性和彼此之间的关系。跟“综合”相对。《后汉书·马援传》:“又於帝前聚米为山谷,指画形埶,开示众军所从道径往来,分析曲折,昭然可晓。” 唐 韩愈 《论变盐法事宜状》:“ 平叔 所上变法条件,臣终始详度,恐不可施行。各随本条分析利害如后。” 巴金 《谈<灭亡>》:“《灭亡》出版以后,我读到了读者们的各种不同的意见。我也常常在分析自己的作品。”4.申辩;辩白。《资治通鉴·后梁太祖开平四年》:“御史司宪 崔沂 劾奏:‘ 彦卿 杀人阙下,请论如法。"帝命 彦卿 分析。”《古今小说·沉小霞相会出师表》:“ 张千 、 李万 被这妇人一哭一诉,就要分析几句,没处插嘴。”5.分家。《旧唐书·刘君良传》:“ 大业 末,天下饥馑, 君良 妻劝其分析,乃窃取庭树上鸟鶵,交置诸巢中,令羣鸟鬭竞,举家怪之,其妻曰:‘方今天下大乱,争鬭之秋,禽鸟尚不能相容,况於人乎!" 君良 从之。”《续资治通鉴·宋孝宗乾道八年》:“上农可使三役,中农二役,下农一役。其尝有万顷者,则使其子孙分析之时,必以三农之数为限。”《醒世恒言·三孝廉让产立高名》:“依我说不如早早分析,将财产三分拨开,各人自去营运。” 郭沫若 《我的童年》第一篇三:“闹了好多年辰要分爨的家终竟分析了,但又并不是彻底的分析,我们有三四百石租的田地没有分。”6.分割,离析。 宋 王安石 《上仁宗皇帝言事书》:“於是诸侯王之子弟,各有分土,而势强地大者,卒以分析弱小。” 明 冯梦龙 《智囊补·上智·主父偃》:“ 汉 患诸侯强, 主父偃 谋,令诸侯以私恩自裂地分其子弟,而 汉 为定其封号, 汉 有厚恩,而诸侯渐自分析弱小云。” 康有为 《大同书》辛部第三章:“凡行政之区,有上达下达之异,皆视其国土之大小以为分析之广狭。”
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分析英语怎么说

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2023-07-14 23:15:291

解释理解分析结论

分析的解释 [analyse] 将事物、现象、 概念 分门别类,离析出本质及其内在联系 详细解释 (1).分开;区分。 《汉书·孔安国传》 :“世所传 《百两篇》 者,出 东莱 张霸 ,分析合二十九篇以为数十。又采 《左氏传》 、 《书叙》 为作首尾,凡百二篇。” 《后汉书·徐防传》 :“臣闻 《诗》 、 《书》 、 《礼》 、 《乐》 ,定自 孔子 ; 发明 章句,始於 子夏 。其后诸家分析,各有异说。” 清 陈鳣 《对策》 卷二:“又有 古文 出于 孔 壁,别有 《闺门》 一章,自馀分析十八章,总为二 十二 章。” (2).离别;分离。 晋 刘琨 《答卢谌诗并书》 :“ 天下 之寳,当与天下共之。但分析之日,不能不怅恨耳。” 《宋书·谢灵运传》 :“于时内慢神器,外侮戎狄。 君子 横流,庶萌分析。” 《南史·宋纪上》 :“自 玄 * ,于今历载,弥年亢旱,人不聊生,士庶疲於转输, 文武 困於板筑,室家分析,父子乖离。” (3).分解辨析。今指把一件事物、一种现象、一个概念分成各个部分,找出这些部分的本质属性和 彼此 之间 的关系。跟“综合” 相对 。 《后汉书·马援传》 :“又於帝前聚米为山谷,指画形埶,开示众军所从道径往来,分析 曲折 ,昭然可晓。” 唐 韩愈 《论变盐法事宜状》 :“ 平叔 所上变法条件,臣终始详度,恐不可施行。各随本条分析利害如后。” 巴金 《谈< 灭亡 >》 :“ 《灭亡》 出版以后,我读到了读者们的各种 不同 的意见。我也常常在分析自己的作品。” (4).申辩;辩白。 《资治通鉴·后梁太祖开平四年》 :“御史司宪 崔沂 劾奏:‘ 彦卿 * 阙下,请论如法。"帝命 彦卿 分析。” 《古今小说·沉小霞相会 出师 表》 :“ 张千 、 李万 被这妇人一哭一诉,就要分析几句,没处插嘴。” (5).分家。 《旧唐书·刘君良传》 :“ 大业 末,天下饥馑, 君良 妻劝其分析,乃窃取庭树上鸟鶵,交置诸巢中,令羣鸟鬭竞,举家怪之,其妻曰:‘方今天下大乱,争鬭之秋,禽鸟尚不能相容,况於人乎!" 君良 从之。” 《续资治通鉴·宋孝宗 乾道 八年》 :“上农可使三役,中农二役,下农一役。其尝有万顷者,则使其子孙分析之时,必以三农之数为限。” 《醒世恒言·三孝廉让产立高名》 :“依我说不如早早分析,将财产三分拨开,各人自去营运。” 郭沫若 《我的童年》 第一篇三:“闹了好多年辰要分爨的家终竟分析了,但又并 不是 彻底 的分析,我们有三四百石租的田地没有分。” (6).分割,离析。 宋 王安石 《上仁宗皇帝言事书》 :“於是 诸侯 王之子弟,各有分土,而势强地大者,卒以分析弱小。” 明 冯梦龙 《智囊补·上智·主父偃》 :“ 汉 患诸侯强, 主父偃 谋,令诸侯以私恩自裂地分其子弟,而 汉 为定其封号, 汉 有厚恩,而诸侯渐自分析弱小云。” 康 有为 《大同书》 辛部第三章:“凡行政之区,有上达 下达 之异,皆视其国土之大小以为分析之广狭。” 词语分解 分的解释 分 ē 区划开:分开。划分。分野(划分的范围)。分界。分明。条分缕析。分解。 由整体中取出或产生出一部分:分发。分忧。分心劳神。 由机构内独立出的部分:分会。分行(俷 )。 散,离:分裂。分离。分别。 析的解释 析 ī 分开:条分缕析。 分崩离析 。 解释:分析。剖析。析疑。赏析。析出(a.分析出来;b.固体从液体或气体中分离出来)。辨析。 部首 :木。
2023-07-14 23:16:061

析的近义词是什么

析xī[动](1) (形声。字从木,从斤,斤亦声。"斤"指斧钺。"木"指树木、木材。"木"与"斤"联合起来表示"凿破木材"。本义:以斧破木)(2) 同本义 [cut]析,破木也。--《说文》析,劈也。--《声类》析薪如之何?匪斧不克。--《诗·齐风·南山》扶桑可薪,析木可焚,是桂永存。--明·方孝孺《双桂轩铭》(3) 又如:析木(劈开木头);析薪(劈柴)(4) 分析,辨认 [analyse]
2023-07-14 23:16:151

高二选择性必修一英语单词有哪些?

将高中选择性必修一五个单元单词分别编成一段话
2023-07-14 23:16:231

这句话中anyone和everyone属于不定代词,为什么它们后面的动词get,think,analyse不用第三人称单数呢?

因为这些动词都是跟在情态动词can后面的,所以要用原形。
2023-07-14 23:16:432

MySQL优化之数据类型的使用

   有助于效率的类型选择    使你的数据尽可能小   最基本的优化之一是使你的数据(和索引)在磁盘上(并且在内存中)占据的空间尽可能小 这能给出巨大的改进 因为磁盘读入较快并且通常也用较少的主存储器 如果在更小的列上做索引 索引也占据较少的资源   你能用下面的技术使表的性能更好并且使存储空间最小   ·尽可能地使用最有效(最小)的类型 MySQL有很多节省磁盘空间和内存的专业化类型   ·如果可能使表更小 使用较小的整数类型 例如 MEDIUMINT经常比INT好一些   ·如果可能 声明列为NOT NULL 它使任何事情更快而且你为每列节省一位 注意如果在你的应用程序中你确实需要NULL 你应该毫无疑问使用它 只是避免缺省地在所有列上有它    使用定长列 不使用可变长列   这条准则对被经常修改 从而容易产生碎片的表来说特别重要 例如 应该选择 CHAR 列而不选择 VARCHAR 列 所要权衡的是使用定长列时 表所占用的空间更多 但如果能够承担这种空间的耗费 使用定长行将比使用可变长的行处理快得多    将列定义为 NOT NULL   这样处理更快 所需空间更少 而且有时还能简化查询 因为不需要检查是否存在特例 NULL    考虑使用 ENUM 列   如果有一个只含有限数目的特定值的列 那么应该考虑将其转换为 ENUM 列 ENUM 列的值可以更快地处理 因为它们在内部是以数值表示的    有关BLOB和TEXT类型    使用BLOB和TEXT类型的优点   用 BLOB 存储应用程序中包装或未包装的数据 有可能使原来需要几个检索操作才能完成的数据检索得以在单个检索操作中完成 而且还对存储标准表结构不易表示的数据或随时间变化的数据有帮助    使用BLOB和TEXT类型的可能弊端   另一方面 BLOB 值也有自己的固有问题 特别是在进行大量的 DELETE 或 UPDATE 操作时更是如此 删除 BLOB 会在表中留下一个大空白 在以后将需用一个记录或可能是不同大小的多个记录来填充   除非有必要 否则应避免检索较大的 BLOB 或 TEXT 值 例如 除非肯定WHERE 子句能够将结果恰好限制在所想要的行上 否则 SELECT * 查询不是一个好办法 这样做可能会将非常大的 BLOB 值无目的地从网络上拖过来 这是存储在另一列中的 BLOB 标识信息很有用的另一种情形 可以搜索该列以确定想要的行 然后从限定的行中检索 BLOB 值    必要的准则   对容易产生碎片的表使用 OPTIMIZE TABLE   大量进行修改的表 特别是那些含有可变长列的表 容易产生碎片 碎片不好 因为它在存储表的磁盘块中产生不使用的空间 随着时间的增长 必须读取更多的块才能取到有效的行 从而降低了性能 任意具有可变长行的表都存在这个问题 但这个问题对 BLOB 列更为突出 因为它们尺寸的变化非常大 经常使用 OPTIMIZE TABLE 有助于保持性能不下降    使用多列索引   多列索引列有时很有用 一种技术是根据其他列建立一个散列值 并将其存储在一个独立的列中 然后可通过搜索散列值找到行 这只对精确匹配的查询有效 (散列值对具有诸如 < 或 >= 这样的操作符的范围搜索没有用处) 在MySQL 版及以上版本中 散列值可利用 MD ( ) 函数产生 散列索引对 BLOB 列特别有用 有一事要注意 在 MySQL 以前的版本中 不能索引 BLOB 类型 甚至是在 或更新的版本中 利用散列值作为标识值来查找 BLOB 值也比搜索 BLOB 列本身更快   将 BLOB 值隔离在一个独立的表中   在某些情况下 将 BLOB 列从表中移出放入另一个副表可能具有一定的意义 条件是移出 BLOB 列后可将表转换为定长行格式 这样会减少主表中的碎片 而且能利用定长行的性能优势    使用ANALYSE过程检查表列   如果使用的是 MySQL 或更新的版本 应该执行 PROCEDURE ANALYSE( ) 查看它所提供的关于表中列的信息   ANALYSE([max elements [max memory]])   它检验来自你的查询的结果并返回结果的分析   max elements(缺省 )是 *** yse将注意的每列不同值的最大数量 这被ANALYSE用来检查最佳的列类型是否应该是ENUM类型   max memory(缺省 )是在 *** yse尝试寻找所有不同值的时候应该分配给每列的最大内存量   SELECT FROM WHERE PROCEDURE ANALYSE([max elements [max memory]])   例如   mysql>SELECT * FROM student PROCEDURE ANALYSE();   mysql>SELECT * FROM student PROCEDURE ANALYSE( );   相应输出中有一列是关于表中每列的最佳列类型的建议 第二个例子要求 PROCEDURE ANALYSE( ) 不要建议含有多于 个值或取多于 字节的 ENUM 类型(可根据需要更改这些值) 如果没有这样的限制 输出可能会很长;ENUM 的定义也会很难阅读 lishixinzhi/Article/program/MySQL/201311/29636
2023-07-14 23:16:501

英语问题

identify relevant business strategies for your chosen business unit。这个for短语我认为是修饰identify relevant business strategies的目的状语。这个问题不必纠结,明白该句意思即可。再如i saw a book on the desk.其中on the desk1作宾补:我看见一本书在桌上。2作定语:我看见了桌子上的一本书。3作状语:在桌上我看见了一本书。analyse the insurance cover for each of the interested parties.这里的the insurance cover是保险费的意思作宾语for each of the interested parties.可以看做定语修饰the insurance cover。注意:这里cover不可能是动词。因为前面已经有谓语动词 analyse。equipped with advanced technology for student use.这里的student use是名词词组,其中student是作定语的名词修饰use。for student use短语作定语修饰advanced technology一般动词不定式的复合结构for sb to do 可以作定语修饰的是主语或宾语。而equipped with advanced technology for student use是过去分词短语,里面没有主语或动词的宾语。
2023-07-14 23:17:061

paperyy与知网的差别?

大概在16%—36%paperyy与知网的差别一般在5%-10%,不同论文查重系统由于其算法和数据库的差别,所以其查重结果是不可能一致的,而每篇进行查重的论文又不相同,这就涉及到了具体问题具体分析.不过paperyy与知网的差别如果在5%-10%的话。论文初稿用paperyy系统查重是没问题的,论文定稿建议还是用与学校一致的查重系统比较稳妥。PaperYY论文查重系统PaperYY的论文查重系统覆盖了10种数据类型和20种专业参数,收录了16个数据库,对比数据高达50亿条,同时支持目录、封面、参考文献的识别,支持引文的提取,资源系统是比较完善的。PaperYY不仅给出更精准的查重结果,还在PaperYY的检测报告中清楚的标出论文优化的方案。针对查重意见对重复的部分进行论文的降重,如针对“修改建议”进行修改,或者直接点击“自动降重”对该重复内容进行降重对于前期论文的查重、修改参考的性价比很高。
2023-07-14 23:16:591

求诺拉·琼斯的“不知为何”(dont know why)的中英文歌词

Don"t know why 不知为何 Norah Jones诺拉·琼斯I waited "til I saw the sun我等待直到我看到太阳I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来I left you by the house of fun我让你成为众人的笑柄I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来When I saw the break of day 当我看到天亮时I wished that I could fly away我希望我能飞走Instead of kneeling in the sand而不是跪在沙尘中Catching teardrops in my hand手中接着我的眼泪My heart is drenched in wine我的心浸在酒里But you"ll be on my mind 但你却在我心间Forever 永远Out across the endless sea穿越无际的海洋I would die in ecstasy我会在幻想中死去But I"ll be a bag of bones但我将是的躯壳Driving down the road along独自前行My heart is drenched in wine我的心浸在酒里But you"ll be on my mind 但你却在我心间Forever 永远Something has to make you run有些事情让你不得不跑开I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来I feel as empty as a drum我感觉自己像只鼓一样空虚I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来I don"t know why I didn"t come我不知道为什么我没来
2023-07-14 23:17:002

Xanadu是什么牌子的怀表?

什么时候的表?
2023-07-14 23:17:022

i have a dream!什么意思?

我有一个梦想
2023-07-14 23:17:023

美国火警电话

911
2023-07-14 23:17:055

英语演讲稿精选:我有一个梦想(I Have a Dream)

为大家收集整理了《英语演讲稿精选:我有一个梦想(I Have a Dream)》供大家参考,希望对大家有所帮助!!! 1963年8月23日,马丁u30fb路德u30fb金组织了美国历影响深远的“自由进军”运动。他率领一支庞大的*队伍向首都华盛顿进军,为全美国的黑人争取人权。他在林肯纪念堂前向25万人发表了的演说《我有一个梦想》,为反对种族歧视、争取平等发出呼号。马丁u30fb路德u30fb金1964年获诺贝尔和平奖。1968年4月4日他在田纳西州被暗杀。 在演说中,他说出了的平等口号: 我梦想有一天,这个国家将会奋起,实现其立国信条的真谛:“我们认为这些真理不证自明:人人生而平等。” I have a dream that one day this nation will rise up and live out the true meaning of its creed: "We hold these truths to be self-evident, that all men are created equal." 我梦想有一天,在佐治亚州的红色山岗上,昔日奴隶的儿子能够同昔日奴隶主的儿子同席而坐,亲如手足。 I have a dream that one day on the red hills of Georgia, the sons of former slaves and the sons of former slave owners will be able to sit down together at the table of brotherhood. 我梦想有一天,我的四个孩子将生活在一个不是以肤色的深浅,而是以品格的优劣作为评判标准的国家里。 I have a dream that my four little children will one day live in a nation where they will not be judged by the color of their skin but by the content of their character.演讲全文:I Have a Dream by Martin Luther King, Jr. I am happy to join with you today in what will go down in history as the greatest demonstration for freedom in the history of our nation. Five score years ago, a great American, in whose symbolic shadow we stand today, signed the Emancipation Proclamation. This momentous decree came as a great beacon light of hope to millions of Negro slaves who had been seared in the flames of withering injustice. It came as a joyous daybreak to end the long night of their captivity. But one hundred years later, the Negro still is not free. One hundred years later, the life of the Negro is still sadly crippled by the manacles of segregation and the chains of discrimination. One hundred years later, the Negro lives on a lonely island of poverty in the midst of a vast ocean of material prosperity. One hundred years later, the Negro is still languished in the corners of American society and finds himself an exile in his own land. And so we"ve come here today to dramatize a shameful condition. In a sense we"ve come to our nation"s capital to cash a check. When the architects of our republic wrote the magnificent words of the Constitution and the Declaration of Independence, they were signing a promissory note to which every American was to fall heir. This note was a promise that all men, yes, black men as well as white men, would be guaranteed the "unalienable Rights" of "Life, Liberty and the pursuit of Happiness." It is obvious today that America has defaulted on this promissory note, insofar as her citizens of color are concerned. Instead of honoring this sacred obligation, America has given the Negro people a bad check, a check which has come back marked "insufficient funds." But we refuse to believe that the bank of justice is bankrupt. We refuse to believe that there are insufficient funds in the great vaults of opportunity of this nation. And so, we"ve come to cash this check, a check that will give us upon demand the riches of freedom and the security of justice. We have also come to this hallowed spot to remind America of the fierce urgency of Now. This is no time to engage in the luxury of cooling off or to take the tranquilizing drug of gradualism. Now is the time to make real the promises of democracy. Now is the time to rise from the dark and desolate valley of segregation to the sunlit path of racial justice. Now is the time to lift our nation from the quicksands of racial injustice to the solid rock of brotherhood. Now is the time to make justice a reality for all of God"s children. It would be fatal for the nation to overlook the urgency of the moment. This sweltering summer of the Negro"s legitimate discontent will not pass until there is an invigorating autumn of freedom and equality. Nineteen sixty-three is not an end, but a beginning. And those who hope that the Negro needed to blow off steam and will now be content will have a rude awakening if the nation returns to business as usual. And there will be neither rest nor tranquility in America until the Negro is granted his citizenship rights. The whirlwinds of revolt will continue to shake the foundations of our nation until the bright day of justice emerges. But there is something that I must say to my people, who stand on the warm threshold which leads into the palace of justice: In the process of gaining our rightful place, we must not be guilty of wrongful deeds. Let us not seek to satisfy our thirst for freedom by drinking from the cup of bitterness and hatred. We must forever conduct our struggle on the high plane of dignity and discipline. We must not allow our creative protest to degenerate into physical violence. Again and again, we must rise to the majestic heights of meeting physical force with soul force. The marvelous new militancy which has engulfed the Negro community must not lead us to a distrust of all white people, for many of our white brothers, as evidenced by their presence here today, have come to realize that their destiny is tied up with our destiny. And they have come to realize that their freedom is inextricably bound to our freedom. We cannot walk alone. And as we walk, we must make the pledge that we shall always march ahead. We cannot turn back. There are those who are asking the devotees of civil rights, "When will you be satisfied?" We can never be satisfied as long as the Negro is the victim of the unspeakable horrors of police brutality. We can never be satisfied as long as our bodies, heavy with the fatigue of travel, cannot gain lodging in the motels of the highways and the hotels of the cities. We cannot be satisfied as long as a Negro in Mississippi cannot vote and a Negro in New York believes he has nothing for which to vote. No, no, we are not satisfied, and we will not be satisfied until "justice rolls down like waters, and righteousness like a mighty stream."I am not unmindful that some of you have come here out of great trials and tribulations. Some of you have come fresh from narrow jail cells. And some of you have come from areas where your quest -- quest for freedom left you battered by the storms of persecution and staggered by the winds of police brutality. You have been the veterans of creative suffering. Continue to work with the faith that unearned suffering is redemptive. Go back to Mississippi, go back to Alabama, go back to South Carolina, go back to Georgia, go back to Louisiana, go back to the slums and ghettos of our northern cities, knowing that somehow this situation can and will be changed. Let us not wallow in the valley of despair, I say to you today, my friends. And so even though we face the difficulties of today and tomorrow, I still have a dream. It is a dream deeply rooted in the American dream. I have a dream that one day this nation will rise up and live out the true meaning of its creed: "We hold these truths to be self-evident, that all men are created equal." I have a dream that one day on the red hills of Georgia, the sons of former slaves and the sons of former slave owners will be able to sit down together at the table of brotherhood. I have a dream that one day even the state of Mississippi, a state sweltering with the heat of injustice, sweltering with the heat of oppression, will be transformed into an oasis of freedom and justice. I have a dream that my four little children will one day live in a nation where they will not be judged by the color of their skin but by the content of their character. I have a dream today! I have a dream that one day, down in Alabama, with its vicious racists, with its governor having his lips dripping with the words of "interposition" and "nullification" -- one day right there in Alabama little black boys and black girls will be able to join hands with little white boys and white girls as sisters and brothers. I have a dream today! I have a dream that one day every valley shall be exalted, and every hill and mountain shall be made low, the rough places will be made plain, and the crooked places will be made straight; "and the glory of the Lord shall be revealed and all flesh shall see it together."? This is our hope, and this is the faith that I go back to the South with. With this faith, we will be able to hew out of the mountain of despair a stone of hope. With this faith, we will be able to transform the jangling discords of our nation into a beautiful symphony of brotherhood. With this faith, we will be able to work together, to pray together, to struggle together, to go to jail together, to stand up for freedom together, knowing that we will be free one day. And this will be the day -- this will be the day when all of God"s children will be able to sing with new meaning: My country "tis of thee, sweet land of liberty, of thee I sing. Land where my fathers died, land of the Pilgrim"s pride, From every mountainside, let freedom ring! And if America is to be a great nation, this must become true. And so let freedom ring from the prodigious hilltops of New Hampshire. Let freedom ring from the mighty mountains of New York. Let freedom ring from the heightening Alleghenies of Pennsylvania. Let freedom ring from the snow-capped Rockies of Colorado. Let freedom ring from the curvaceous slopes of California. But not only that: Let freedom ring from Stone Mountain of Georgia. Let freedom ring from Lookout Mountain of Tennessee. Let freedom ring from every hill and molehill of Mississippi. From every mountainside, let freedom ring. And when this happens, when we allow freedom ring, when we let it ring from every village and every hamlet, from every state and every city, we will be able to speed up that day when all of God"s children, black men and white men, Jews and Gentiles, Protestants and Catholics, will be able to join hands and sing in the words of the old Negro spiritual: Free at last! free at last! Thank God Almighty, we are free at last!
2023-07-14 23:17:091

七彩阳光广播体操一共有多少节?分别是什么?

七彩阳光广播体操共分9节,68个八拍。分别是:预备节:(8拍×4)第一节:伸展运动(8拍×8)第二节:扩胸运动(8拍×8)第三节:踢腿运动(8拍×8)第四节:体侧运动(8拍×8)第五节:体转运动(8拍×8)第六节:腹背运动(8拍×8)第七节:跳跃运动(8拍×8)第八节:整理运动(8拍×8)扩展资料:一、小学广播体操第一套:1、小学生广播体操1 2、小学生广播体操2第二套:1、初升的太阳 2、雏鹰起飞第三套:1、希望风帆 2、七彩阳光二、中学广播体操第一套:1、中学生广播体操1 2、中学生广播体操2第二套:1、青春的活力 2、时代在召唤第三套:1、舞动青春 2、放飞理想参考资料:百度百科_七彩阳光百度百科_广播体操
2023-07-14 23:17:161

PaperYY是一个什么样的查重系统?

免费查重但是跟维普知网查出来有较大的偏差的查重系统。就是大概做个参考,知道自己那里是复制粘贴,哪里是自己写的。
2023-07-14 23:17:183

马丁·路德·金《I have a dream》

这里看看,希望对你有帮助!
2023-07-14 23:17:194

流式细胞仪亚二倍体凋亡峰怎么分析

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。美国著名生物试剂公司CLONTECH和Invitrogen公司分别开发了多种标记的AnnexinV产品,简便快速,10分钟就可完成检测。其中带荧光标记的Annexin V-EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)及Annexin V-FITC,灵敏度高,可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合蛋白Annexin V-EGFP,EGFP与PS 的结合比例为1:1,还可进行定量检测。除此之外,还提供生物素偶联的Annexin V,可通过常用的酶联显色反应来检测。另外,MACS公司将磁珠包被Annexin V,可采用磁分选方法筛选凋亡细胞。2)细胞内氧化还原状态改变的检测:这反应了细胞凋亡研究中相对较新的趋势,研究什么样的氧化还原环境引起下游事件的发生。CLONTECH公司的ApoAlertTMGlutathioneDetection Kit通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。正常状态下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要,许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。在Jurcat和一些其它类型的细胞中,细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关,此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外,还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如:HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化,不能用此法检测。3)细胞色素C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1(apoptoticprotease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。ApoAlertTMCell Fractionation Kit不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。4) 线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正常细胞中,它在线粒体中形成聚集体,发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中,因线粒体穿膜电位的改变,它以单体形式存在于细胞液中,发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlertMitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是,这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。 细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法:1) TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)通过DNA末端转移酶将带标记的dNTP (多为dUTP)间接(通过地高辛)或直接接到DNA片段的3"-OH端,再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少(如活体组织切片)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的ApoAlert?LM-PCRLadder Assay Kit通过LM-PCR(ligation-mediated PCR),连上特异性接头,专一性地扩增核小体的梯度片段,从而灵敏地检测凋亡时产生的核小体的梯度片段。此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产生这一现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。3) Telemerase Detection (端粒酶检测)这是相对来说推出较早,用得较多的一种方法。端粒酶是由RNA和蛋白组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列,使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的,每分裂一次,染色体的端粒会缩短,这可能作为有丝分裂的一种时钟,表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现,90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。Invitrogen公司的TRAP-ezeTelemerase Detection Kit在1996年率先推出。它提供特定的寡核苷酸底物,分别与底物及端粒重复序列配对的引物。如果待测样本中含有端粒酶活性,就能在底物上接上不同个数的6碱基(GGTTAG)端粒重复序列,通过PCR反应,产物电泳检测就可观察到相差六个碱基的DNALadder现象(参见图4)。此外,Intergen公司还提供用酶联免疫法(ELISA)检测的试剂盒.同样,这种检测方法也不专对细胞凋亡,检测结果也不纯反应细胞凋亡的发生。 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜1. 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。2. 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。3.透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪(Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,较其它方法有不可比拟的优越性,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。在APO的研究得到较为广泛的应用,开辟了新途径。1 光散射法在FCM 系统中,被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。细胞坏死由于胞体肿胀,细胞核亦碎裂分解故FSC 和SCC 均增高。正常细胞FSC 高而SSC 低。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞表面免疫荧光分析结合起来,用以区别辩认经这些特殊处理发生选择凋亡的淋巴细胞亚型,也可用于活细胞分类。值得注意的是,根据FSC和SSC 判断凋亡细胞的可靠性受被测细胞形态上的均一性和核细胞浆比率影响很大,因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好而在肿瘤细胞凋亡中其可靠性较差。2  细胞DNA 含量的测定细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于正常细胞的二倍体。用碘化丙啶( PI) 染色后分析,可在二倍体C0/ G1 ,峰前出现“亚二倍体”峰,即细胞凋亡峰(APO峰) ,根据APO 峰可测出凋亡细胞百分率,该法简单易行,可大批定量检测凋亡标本,亦可同时分析细胞的细胞周期位置。另外,应用FCM 方法通过对DNA 和RNA 的联合检测可以鉴别出G0 期细胞,因此,可分析细胞凋亡与G1 或G0 细胸的关系。DNA 降解的程度取决于凋亡的阶段、细胞的类型和凋亡诱发因子的特性。染色过程中DNA 的逸出量变化也影响FCM 检测结果。据研究,将高浓度的磷酸盐———枸椽酸盐缓冲液加入漂洗液中,可增高降解DNA 的逸出量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力。DNA含量测定在检测细胞凋亡中的局限性在于其特异性和敏感性均不高。特异性不高是因为APO 峰代表了一组细胞群体,包括凋亡细胞、机械损伤细胞、低DNA含量的细胞或不同染色体结构的细胞,在上述情况下,DNA 与荧光染料的结合量均小。另外,非固定的细胞在低渗溶液中被溶解时,可导致大量的核碎片出现,此时APO 峰的细胞数目只代表了核碎片的数目,并不代表凋亡细胞数目。敏感性较差的原因是细胞凋亡早期只有DNA 断裂点出现,但尚未出现DNA 片段的大量丢失,所以该法不能检出早期凋亡细胞和发生于S 期或G2/ M 期的凋亡细胞,因为其实际含量不低于二倍体细胞所含的DNA ,因此该法进行凋亡细胞分析时应结合其它形态或生化方法,以期更准确地分析细胞的凋亡状态。3  Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)AO可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或通过变性而产生的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因此,通过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。在测定被标准化后,绿色和红色荧光强度的量与总DNA 含量成比例,红色荧光与总体细胞(红色加绿色) 荧光的比率表示细胞中变性DNA 的比例,因此,这种方法可用于评价DNA 对原位变性的敏感性。有时候,凋亡细胞DNA 降解不明显,依赖于DNA 降解来检测细胞凋亡的方法如细胞DNA含量测定、DNA 末端标记等就难以检测到细胞凋亡变化。AO法检测凋亡的原理不依赖于DNA 片断的产生,因此其最主要的优点是可应用于寡核小体片段与凋亡不相平衡等情况,但AO 染色法不能有效区分有丝分裂细胞和凋亡细胞。4  若丹明( Rh123) 染色法细胞生活状态下,胞膜上的钠-钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,形成细胞膜电位。FCM 可以检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料,对细胞膜具有通透性,线粒体膜尤敏感。细胞存活状态时,若丹明123 通过细胞膜,积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时,线粒体膜的转运能力下降,电负性降低,故细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失,荧光强度降低,据此检测细胞的凋亡变化。但应指出,在凋亡的早期阶段,由于胞膜尚完整,大多数细胞器和细胞功能相对较好,因此,Rh123法对于早期凋亡细胞和活细胞的鉴别比较困难。5  原位末端标记技术细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL) 。INST 是利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到凋亡细胞内断裂的DNA 处的3"末端,同时水解5"末端,以修复DNA ,若使用已标记的核苷酸即可显示出有断裂DNA 的细胞。1993 年,Gorczyca 等提出了末端脱氧核糖核酸转移酶( TdT) 标记法采检测凋亡细胞的DNA 断裂,此种方法已得到广泛应用。由于内源性核酸内切酶激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,并产生与DNA 断点数目相同的3"2 羟基末端, TdT 可以将生物素化的dUTP 标记至3"2 羟基末端,通过卵白素2FITC 系统,使DNA 的断点部位发生特异荧光而签别出凋亡细胞,TdT 末端标记法是鉴别凋亡细胞比较特异的一种方法。脑组织中的凋亡细胞很少,因此基因组DNA 片断需要更灵敏的检测技术。将TUNEL 法与FCM 结合起来可以提高检测凋亡细胞中DNA 片断的灵敏度。经凋亡诱导因子处理一定时间后的细胞,原位末端标记的凋亡比Hoechst33342 染色显示的要多,提示TUNEL 可检测出尚未出现明显凋亡形态学特征但已发生DNA 裂解的核,从而使检测的灵敏度提高。对比研究表明, TUNEL 的敏感性远远高于ISNT ,尤其在APO早期TUNEL 法阳性率较高,可能是APO 发生时DNA 多数为双链同时断裂,单链少见的原因。后者是依赖DNA 多聚酶介导的修复反应,故ISNT 的阳性率相对较低。TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。但由于断裂DNA 的标记过程比较复杂,涉及多种因素,所以末端标记的阴性结果并不一定代表DNA链的完整,应排除方法上的问题,如TdT 酶活力的丧失等诸多影响因素。因此应用TdT 末端标记法鉴别凋亡细胞必须同时设阳性及阴性对照组,以便得到可靠结果。6  Annexin V/ PI 法1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,利用其特性可以检测细胞凋亡。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死或凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胆区分开来。FCM 通过Annexin V —FITC 标志暴露于细胞膜上的PS 结合PI 进入损伤细胞膜标记降解DNA 分析凋亡与坏死细胞。在检测时有4个亚群包括机械性损伤细胞(Annexin - / P1 + ) 、正常细胞(An2nexin - / PI - )、凋亡细胞(Annexin + / PI - ) 和继发性坏死细胞(Annexin + / PI + ) 被区分。Boersma 等应用Ampexin V2FITE染色法检测细胞毒药物处理后的中国仓鼠细胞凋亡变化,FCM 检测发现荧光信号强弱不同的两种细胞亚群。进一步形态学等证实弱荧光细胞亚群代表早期凋亡细胞,强荧光亚群代表晚期凋亡细胞,可见其是检测和定量凋亡细胞的一种较为可靠的方法。细胞凋亡时膜上PS外露早于DNA 断裂发生,因此该法检测早期凋亡更为灵敏,且该法不需要固定细胞,避免了PI 法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL 法因固定出现的DNA 片段丢失,因此更加省时,结果亦更可靠,是目前最为理想的凋亡定量检测方法。7  其 他7.1  ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。与TUNEL法相比,ssDNA 具有更强的灵敏性。TUNEL 法检测的凋亡细胞可能只是单抗法检测的凋亡细胞中的一个亚类。ssDNA法检测APO 一般用免疫荧光法。但也可和FCM 结合应用。单抗法使用简便、成本低、应用广泛。ssDNA 单抗可以区别坏死和凋亡、甚至能检测前期凋亡,凋亡后坏亡和一些特殊的凋亡形式(如无片段化的细胞凋亡) 。因此, ssDNA 单抗法可望成为一种新的特异灵敏检测细胞凋亡的方法。7.2  细胞凋亡的相关蛋白分析 研究发现,有不少基因参加凋亡调控,这些基因产物可参与促进或抑制APO 的发生、发展,因此检测凋亡调节基因蛋白对研究APO 及其调控有重要作用。迄今为止,已可对大量细胞凋亡调节基因的蛋白产物分析,如P53 蛋白、caspases、C2myc、Fas 抗原、TNF、bcl22 家族蛋白、cyclin、ras 等。FCM 用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确。8  展 望近几年来,随着FCM技术的不断发展和APO 研究的逐渐深入,FCM 在细胞凋亡研究中日益广泛。应用FCM 定量检测凋亡细胞简便、快速、客观,并可进行多参数检测,因此,可同时对APO 及其相关的癌基因表达、细胞周期分布等诸多因素进行相关分析,可以比较深入地了解凋亡的调节机制。尽管应用FCM 进行细胞凋亡研究的方法较多,但FCM检测凋亡细胞的方法一般基于细胞凋亡过程中形态、生化等某一方面的特性,因而难于了解凋亡过程中发生的各种变化的相互关系,也使该类方法缺乏特异性,所以,联合应用多种针对不同特性的FCM检测方法,才能更为有效地鉴别凋亡细胞。同时,FCM 研究结果尚需同时结合形态学观察或生物化学方法,才能更加深入地了解凋亡细胞的生物学特性。随着生物技术的发展及人们对APO 本质认识的深入,相信在不久的将来,定会有更为特异和敏感的方法问世,有助于细胞凋亡取得突破性进展。
2023-07-14 23:17:221

manufacture是动词生产制造的意思manufacturer是名词生产商;制造商的意思manufacturing形容词制造的;制造业的名词是制造业取名字的话一般用第三个比如.....manufacturingcompany/corporation意思是.....制造公司
2023-07-14 23:17:241

paperyy会不会泄露原文

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2023-07-14 23:17:251

抖音马达一袋油歌名叫什么

马达一袋油是什么歌一首dj英文歌sadden e say you
2023-07-14 23:16:543

“I have a dream”的英文版和中文翻译!

I have a dream ……I say to you, my friends, so even though we must face the difficulties of today and tomorrow, I still have a dream. It is a dream deeply rooted in the American d ream. I have a dream that one day this nation will rise up and live out the true meaning of its creed - we hold these truths to be self-evident, that all men are created equal. I have a dream that one day on the red hills of Georgia, sons of former slaves and sons of former slave-owners will be able to sit down together at the table of brotherhood. I have a dream that one day, even the state of Mississippi, a state sweltering with the heat of injustice, sweltering with the heat of oppression, will be transformed into an oasis of freedom and justice. I have a dream my four little children will one day live in a nation where they will not be judged by the color of their skin but by the content of their character. I have a dream today! I have a dream that one day down in Alabama, with its vicious racists, with its governor having his lips dripping with the words of interposition and nullification, one day right there in Alabama little black boys and black girls will be able to join hands with little white boys and white girls as sisters and brothers. I have a dream today. I have a dream that one day every valley shall be exalted, every hill and mountain shall be made low, the rough places shall be made plain, and the crooked places shall be made straight and the glory of the Lord will be revealed and all flesh shall see it together. This is our hope. This is the faith that I go back to the South with. With this faith we will be able to hew out of the mountain of despair a stone of hope. With this faith we will be able to transform the jangling discords of our nation into a beautiful symphony of brotherhood. With this faith we will be able to work together, to pray together, to go to jail together, knowing that we will be free one day. This will be the day when all of God"s children will be able to sing with new meaning-"my country "tis of thee; sweet land of liberty; of thee I sing; land where my fathers died, land of the pilgrim"s pride; from every mountain side, let freedom ring"-and if America is to be a great nation, this must become true. So let freedom ring -- from the prodigious hill tops of New Hampshire, let freedom ring; from the mighty mountains of New York.Let freedom ring -- from the heightening Alleghenies of Pennsylvania. Let freedom ring from the snow-capped Rockies of Colorado. Let freedom ring from the curvaceous slopes of California. But not only that.Let freedom ring from the Stone Mountain of Georgia. Let freedom ring from Lookout Mountain of Tennessee. Let freedom ring from every hill and molehill of Mississippi, from every mountainside, let freedom ring. When we allow freedom to ring, when we let it ring from every village and hamlet, from every state and city, we will be able to speed up that day when all of God"s children - black men and white men, Jews and Gentiles, Catholics and Protestants - will be able to join hands and to sing in the words of the old Negro spiritual, "Free at last, free at last; thank God Almighty, we are free at last." 我有一个梦 马丁.路德.金 ……今天,我对你们说,我的朋友们,尽管此时的困难与挫折,我们仍然有个梦,这是深深扎根于美国梦中的梦。 我有一个梦:有一天,这个国家将站起来,并实现它的信条的真正含义:“我们认为这些真理是不言而喻的,即所有的人都生来平等。” 我有一个梦:有一天,在乔治亚州的红色山丘上,从前奴隶的子孙们和从前奴隶主的子孙们将能像兄弟般地坐在同一桌旁。 我有一个梦:有一天,甚至密西西比州,一个有着不公正和压迫的热浪袭人的荒漠之州,将改造成自由和公正的绿洲。 我有一个梦:我的4个小孩将有一天生活在一个国度里,在那里,人们不是从他们的肤色,而是从他们的品格来评价他们。 今天我有一个梦想! 我有一个梦:有一天,阿拉巴马州将变成这样一个地方,那里黑人小男孩、小女孩可以和白人小男孩、小女孩,像兄弟姐妹一样手牵手并肩而行。 今天我有一个梦想。 我有一个梦:有一天,每一个峡谷将升高,每一座山丘和高峰被削低,崎岖粗糙的地方改造成平原,弯弯曲曲的地方变得笔直,上帝的荣耀得以展露,全人类都将举目共睹。 这是我们的希望,这是信念,带着这个信念我回到南方,怀着这个信念我们将能从绝望之山中开采出一块希望之石。怀着这个信念,我们将能把我们国家的刺耳的不和音,转变成一曲优美动听的兄弟情谊交响曲。怀着这个信念,我们将能工作在一起,祈祷在一起,奋斗在一起,一起赴监狱,一起为自由而挺住。因为我们知道,有一天我们将获自由。 将会有一天,那时,所有上帝的孩子们将能以新的含义高唱: 我的祖国, 你是自由的乐土。 我为你歌唱: 我的先辈的安葬之地, 让自由的声音, 响彻每一道山岗。 如果说美国是一个伟大的国家,这必须要成真。因此,让自由的声音从新罕布什尔州巨大的山巅响起吧。让自由的声音从纽约州巍巍群山响起吧,让自由的声音从宾夕法尼亚州阿拉根尼高原响起吧! 让自由的声音从科罗拉多州冰雪覆盖的落基山脉响起吧! 让自由的声音从加利福尼亚婀娜多姿的山峰上响起吧! 但不仅如此,还让自由之声从乔治亚州的石峰上响起吧! 让自由之声从田纳西州的观景峰响起吧! 让自由之声从密西西比州的每一道山丘响起吧!在每一道山坡上,让自由之声响起吧! 当我们让自由之声响彻之时,当我们让它从每一座村庄,从每一个州和每一座城市响起时,我们将能加速这一天的到来,那时,所有上帝的孩子们,黑人和白人,犹太人和异教徒们,基督徒和天主教徒们,将能手挽手,以那古老的黑人圣歌的歌词高唱; “终于自由了!终于自由了!感谢全能的上帝,我们终于自由了!”满意请采纳
2023-07-14 23:16:541

norah jones的音乐属于什么类型的jazz啊?

http://www.norahjones.com/
2023-07-14 23:16:532

manufacture造句

The company specializes in the manufacture of high-tech electronics products. (意思:该公司专业生产高科技电子产品。)The manufacture of automobiles requires complex assembly lines and skilled workers. (意思:汽车制造需要复杂的装配线和熟练的工人。)The chemicals used in the manufacture of plastics can have harmful effects on the environment. (意思:用于塑料制造的化学物质可能对环境产生有害影响。)The textile factory has modern equipment for the manufacture of high-quality fabrics. (意思:这家纺织工厂拥有现代化的设备,用于生产高品质的面料。)The company outsources the manufacture of some of its products to overseas factories to cut costs. (意思:该公司将部分产品的制造外包给海外工厂以降低成本。)
2023-07-14 23:16:491

细胞凋亡的检测

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都适用),可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。美国著名生物试剂公司CLONTECH和Invitrogen公司分别开发了多种标记的Annexin V产品,简便快速,10分钟就可完成检测。其中带荧光标记的Annexin V-EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)及Annexin V-FITC,灵敏度高,可作为FACS(流式细胞分选)方法筛选凋亡细胞的基础。由于融合蛋白Annexin V-EGFP,EGFP与PS 的结合比例为1:1,还可进行定量检测。除此之外,还提供生物素偶联的Annexin V,可通过常用的酶联显色反应来检测。另外,MACS公司将磁珠包被Annexin V,可采用磁分选方法筛选凋亡细胞。2)细胞内氧化还原状态改变的检测:这反应了细胞凋亡研究中相对较新的趋势,研究什么样的氧化还原环境引起下游事件的发生。CLONTECH公司的ApoAlertTM GlutathioneDetection Kit通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。正常状态下,谷光苷肽(glutathione:GSH)作为细胞的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而定期去除,氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要,许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被去除。在Jurcat和一些其它类型的细胞中,细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时,细胞液就由还原环境转为氧化环境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关,此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外,还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如:HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化,不能用此法检测。3)细胞色素C的定位检测细胞色素C作为一种信号物质,在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下,它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中,凋亡信号刺激使其从线粒体释放至细胞液,结合Apaf-1 (apoptoticprotease activating factor-1)后启动caspase级联反应:细胞色素C/Apaf-1复合物激活caspase-9,后者再激活caspase-3和其它下游caspase。细胞色素C氧化酶亚单位Ⅳ(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ:COX4)是定位在线粒体内膜上的膜蛋白,凋亡发生时,它保留在线粒体内,因而它是线粒体富集部分的一个非常有用的标志。ApoAlertTMCell Fractionation Kit不用超离心,可从凋亡和非凋亡细胞中快速有效分离出高度富集的线粒体部分,再进一步通过Western杂交用细胞色素C抗体和COX4抗体标示细胞色素C和COX4的存在位置,从而判断凋亡的发生。4) 线粒体膜电位变化的检测:在凋亡研究的早期,从形态学观测上线粒体没有明显的变化。随着凋亡机制研究的深入,发现线粒体凋亡也是细胞凋亡的重要组成部分,发生很多生理生化变化。例如,在受到凋亡诱导后线粒体转膜电位会发生变化,导致膜穿透性的改变。MitoSensorTM,一个阳离子性的染色剂,对此改变非常敏感,呈现出不同的荧光染色。正常细胞中,它在线粒体中形成聚集体,发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中,因线粒体穿膜电位的改变,它以单体形式存在于细胞液中,发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。CLONTECH公司的ApoAlert Mitochondrial Membrane Sensor Kit就采用这种原理来检测线粒体膜电位的变化。但是,这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。 细胞凋亡晚期中,核酸内切酶(某些Caspase的底物)在核小体之间剪切核DNA,产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下两种方法:1) TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling)通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP (多为dUTP)间接(通过地高辛)或直接接到DNA片段的3"-OH端,再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。美国Intergen公司提供多种标记方法,直接荧光标记,地高辛介导荧光标记或过氧化物酶联显色,可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。其中,直接标记步骤少,操作简便。而间接标记有信号放大的作用,检测灵敏度高。2) LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少(如活体组织切片)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。CLONTECH公司的ApoAlert?LM-PCR Ladder Assay Kit通过LM-PCR(ligation-mediated PCR),连上特异性接头,专一性地扩增核小体的梯度片段,从而灵敏地检测凋亡时产生的核小体的梯度片段。此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这一特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产生这一现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的干扰。3) Telemerase Detection (端粒酶检测)这是相对来说推出较早,用得较多的一种方法。端粒酶是由RNA和蛋白组成的核蛋白,它可以自身RNA为模板逆转录合成端粒区重复序列,使细胞获得“永生化”。正常体细胞是没有端粒酶活性的,每分裂一次,染色体的端粒会缩短,这可能作为有丝分裂的一种时钟,表明细胞年龄、复制衰老或细胞凋亡的信号。研究发现,90%以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性。Invitrogen公司的TRAP-eze Telemerase Detection Kit在1996年率先推出。它提供特定的寡核苷酸底物,分别与底物及端粒重复序列配对的引物。如果待测样本中含有端粒酶活性,就能在底物上接上不同个数的6碱基(GGTTAG)端粒重复序列,通过PCR反应,产物电泳检测就可观察到相差六个碱基的DNA Ladder现象(参见图4)。此外,Intergen公司还提供用酶联免疫法(ELISA)检测的试剂盒.同样,这种检测方法也不专对细胞凋亡,检测结果也不纯反应细胞凋亡的发生。 根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1.光学显微镜和倒置显微镜1. 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。2. 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2.荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三种染料与 DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释成终浓度为2~5mg/ml。DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为0.5 ~1mg/ml。结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。3.透射电子显微镜观察结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。 细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和计算机技术等集于一体,较其它方法有不可比拟的优越性,既可定性又可定量,且具有简单、快速和敏感性高的特点,可进行多参数和活体细胞分析。在APO 的研究得到较为广泛的应用,开辟了新途径。1 光散射法在FCM 系统中,被检细胞在液流中通过仪器测量区时,经激光照射,细胞向空间360°立体角的所有方向散射光线,其中前向散射光( FSC) 的强度与细胞大小有关,而侧向散射光(SSC) 的强度与质膜和细胞内部的折射率有关。细胞凋亡时,细胞固缩,体积变小,核碎裂形成,细胞内颗粒往往增多,故凋亡细胞FSC 降低而SSC 增高。细胞坏死由于胞体肿胀,细胞核亦碎裂分解故FSC 和SCC 均增高。正常细胞FSC 高而SSC 低。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞表面免疫荧光分析结合起来,用以区别辩认经这些特殊处理发生选择凋亡的淋巴细胞亚型,也可用于活细胞分类。值得注意的是,根据FSC 和SSC 判断凋亡细胞的可靠性受被测细胞形态上的均一性和核细胞浆比率影响很大,因此在某些淋巴细胞凋亡中,用光散射特性检测凋亡的可靠性较好而在肿瘤细胞凋亡中其可靠性较差。2  细胞DNA 含量的测定细胞凋亡时,核酸内切酶激活,导致DNA 断裂,这是凋亡的特征性表现,也为FCM 鉴别凋亡细胞奠定了基础。而检测细胞凋亡DNA 断裂的方法中,最常用、最简便的就是细胞DNA 含量分析。当细胞用乙醇、TrtionX—100 处理后细胞膜上出现漏洞,小片段DNA 从细胞内释放出来,使其DNA 含量低于正常细胞的二倍体。用碘化丙啶( PI) 染色后分析,可在二倍体C0/ G1 ,峰前出现“亚二倍体”峰,即细胞凋亡峰(APO峰) ,根据APO 峰可测出凋亡细胞百分率,该法简单易行,可大批定量检测凋亡标本,亦可同时分析细胞的细胞周期位置。另外,应用FCM 方法通过对DNA 和RNA 的联合检测可以鉴别出G0 期细胞,因此,可分析细胞凋亡与G1 或G0 细胸的关系。DNA 降解的程度取决于凋亡的阶段、细胞的类型和凋亡诱发因子的特性。染色过程中DNA 的逸出量变化也影响FCM 检测结果。据研究,将高浓度的磷酸盐———枸椽酸盐缓冲液加入漂洗液中,可增高降解DNA 的逸出量,从而提高鉴别凋亡细胞与正常细胞的能力。DNA 含量测定在检测细胞凋亡中的局限性在于其特异性和敏感性均不高。特异性不高是因为APO 峰代表了一组细胞群体,包括凋亡细胞、机械损伤细胞、低DNA 含量的细胞或不同染色体结构的细胞,在上述情况下,DNA 与荧光染料的结合量均小。另外,非固定的细胞在低渗溶液中被溶解时,可导致大量的核碎片出现,此时APO 峰的细胞数目只代表了核碎片的数目,并不代表凋亡细胞数目。敏感性较差的原因是细胞凋亡早期只有DNA 断裂点出现,但尚未出现DNA 片段的大量丢失,所以该法不能检出早期凋亡细胞和发生于S 期或G2/ M 期的凋亡细胞,因为其实际含量不低于二倍体细胞所含的DNA ,因此该法进行凋亡细胞分析时应结合其它形态或生化方法,以期更准确地分析细胞的凋亡状态。3  Y 啶橙染色法( Acridine Orange ,AO)AO 可将细胞或细胞核中的双链DNA 和变性DNA 染成不同颜色的荧光。AO 插入双链DNA 中时,发绿色荧光;AO也可与单链或通过变性而产生的DNA 单链发生作用,这时发出红色荧光,因此,通过FCM 检测不同的荧光,可判断凋亡的发生。在测定被标准化后,绿色和红色荧光强度的量与总DNA 含量成比例,红色荧光与总体细胞(红色加绿色) 荧光的比率表示细胞中变性DNA 的比例,因此,这种方法可用于评价DNA 对原位变性的敏感性。有时候,凋亡细胞DNA 降解不明显,依赖于DNA 降解来检测细胞凋亡的方法如细胞DNA含量测定、DNA 末端标记等就难以检测到细胞凋亡变化。AO法检测凋亡的原理不依赖于DNA 片断的产生,因此其最主要的优点是可应用于寡核小体片段与凋亡不相平衡等情况,但AO 染色法不能有效区分有丝分裂细胞和凋亡细胞。4  若丹明( Rh123) 染色法细胞生活状态下,胞膜上的钠- 钾泵、钙泵等的作用,使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度,包括Na + , K+ ,Cl - ,Ca2 + 等,形成细胞膜电位。FCM 可以检测亲脂性离子荧光染料在胞膜内外的分布,来测量膜电位的高低,以评价细胞的活力。Rh123 是一种亲脂性阳离子荧光染料,对细胞膜具有通透性,线粒体膜尤敏感。细胞存活状态时,若丹明123 通过细胞膜,积聚于线粒体发出绿色荧光。在细胞凋亡时,线粒体膜的转运能力下降,电负性降低,故细胞线粒体积聚Rh123 的能力也丧失,荧光强度降低,据此检测细胞的凋亡变化。但应指出,在凋亡的早期阶段,由于胞膜尚完整,大多数细胞器和细胞功能相对较好,因此,Rh123 法对于早期凋亡细胞和活细胞的鉴别比较困难。5  原位末端标记技术细胞凋亡时,DNA 断裂早于形态学改变及DNA 含量减少,原位末端标记( ISEL) 是将渗入到凋亡细胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下与凋亡细胞因内源性核酸酶的激活而产生的单股或双股断裂相结合,较前述方面具更高灵敏性。通常有两种方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介导的单位缺口平移( INST) ; ②末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记( TUNEL) 。INST 是利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到凋亡细胞内断裂的DNA 处的3"末端,同时水解5"末端,以修复DNA ,若使用已标记的核苷酸即可显示出有断裂DNA 的细胞。1993 年,Gorczyca 等提出了末端脱氧核糖核酸转移酶( TdT) 标记法采检测凋亡细胞的DNA 断裂,此种方法已得到广泛应用。由于内源性核酸内切酶激活,细胞自身的染色质或DNA 被切割,并产生与DNA 断点数目相同的3"2 羟基末端, TdT 可以将生物素化的dUTP 标记至3"2 羟基末端,通过卵白素2FITC 系统,使DNA 的断点部位发生特异荧光而签别出凋亡细胞,TdT 末端标记法是鉴别凋亡细胞比较特异的一种方法。脑组织中的凋亡细胞很少,因此基因组DNA 片断需要更灵敏的检测技术。将TUNEL 法与FCM 结合起来可以提高检测凋亡细胞中DNA 片断的灵敏度。经凋亡诱导因子处理一定时间后的细胞,原位末端标记的凋亡比Hoechst33342 染色显示的要多,提示TUNEL 可检测出尚未出现明显凋亡形态学特征但已发生DNA 裂解的核,从而使检测的灵敏度提高。对比研究表明, TUNEL 的敏感性远远高于ISNT ,尤其在APO早期TUNEL 法阳性率较高,可能是APO 发生时DNA 多数为双链同时断裂,单链少见的原因。后者是依赖DNA 多聚酶介导的修复反应,故ISNT 的阳性率相对较低。TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。但由于断裂DNA 的标记过程比较复杂,涉及多种因素,所以末端标记的阴性结果并不一定代表DNA链的完整,应排除方法上的问题,如TdT 酶活力的丧失等诸多影响因素。因此应用TdT 末端标记法鉴别凋亡细胞必须同时设阳性及阴性对照组,以便得到可靠结果。6  Annexin V/ PI 法1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin ,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,利用其特性可以检测细胞凋亡。但坏死细胞PS 亦暴露于外表使Annexin V 结合阳性,因此使用Annexin V 这一参数不能区分坏死或凋亡,必须同时采用PI 这一参数将坏死细胆区分开来。FCM 通过Annexin V —FITC 标志暴露于细胞膜上的PS 结合PI 进入损伤细胞膜标记降解DNA 分析凋亡与坏死细胞。在检测时有4个亚群包括机械性损伤细胞(Annexin - / P1 + ) 、正常细胞(An2nexin - / PI - ) 、凋亡细胞(Annexin + / PI - ) 和继发性坏死细胞(Annexin + / PI + ) 被区分。Boersma 等应用Ampexin V2FITE染色法检测细胞毒药物处理后的中国仓鼠细胞凋亡变化,FCM 检测发现荧光信号强弱不同的两种细胞亚群。进一步形态学等证实弱荧光细胞亚群代表早期凋亡细胞,强荧光亚群代表晚期凋亡细胞,可见其是检测和定量凋亡细胞的一种较为可靠的方法。细胞凋亡时膜上PS 外露早于DNA 断裂发生,因此该法检测早期凋亡更为灵敏,且该法不需要固定细胞,避免了PI 法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL 法因固定出现的DNA 片段丢失,因此更加省时,结果亦更可靠,是目前最为理想的凋亡定量检测方法。7  其 他7.1  ssDNA 单抗法 把抗单链DNA(ssDNA) 单克隆抗体用于细胞凋亡的检测,是一种偶然发现,因为在应用ssDNA 单抗(荧光法) 检测细胞毒性药物诱导DNA 损伤中,观察到凋亡的白血病细胞(MOL T24) 有较强的荧光,后来经过适当的改进,证明ssDNA 单抗可以特异地识别凋亡细胞。与TUNEL法相比,ssDNA 具有更强的灵敏性。TUNEL 法检测的凋亡细胞可能只是单抗法检测的凋亡细胞中的一个亚类。ssDNA法检测APO 一般用免疫荧光法。但也可和FCM 结合应用。单抗法使用简便、成本低、应用广泛。ssDNA 单抗可以区别坏死和凋亡、甚至能检测前期凋亡,凋亡后坏亡和一些特殊的凋亡形式(如无片段化的细胞凋亡) 。因此, ssDNA 单抗法可望成为一种新的特异灵敏检测细胞凋亡的方法。7.2  细胞凋亡的相关蛋白分析 研究发现,有不少基因参加凋亡调控,这些基因产物可参与促进或抑制APO 的发生、发展,因此检测凋亡调节基因蛋白对研究APO 及其调控有重要作用。迄今为止,已可对大量细胞凋亡调节基因的蛋白产物分析,如P53 蛋白、caspases、C2myc、Fas 抗原、TNF、bcl22 家族蛋白、cyclin、ras 等。FCM 用荧光标记的各种调控蛋白单抗染色,收集不同波长的荧光信号,检测细胞膜表面或细胞内荧光分子数量,可以了解每个细胞的变化,而且所需样品少,方法简便、快捷、准确。8  展 望近几年来,随着FCM 技术的不断发展和APO 研究的逐渐深入,FCM 在细胞凋亡研究中日益广泛。应用FCM 定量检测凋亡细胞简便、快速、客观,并可进行多参数检测,因此,可同时对APO 及其相关的癌基因表达、细胞周期分布等诸多因素进行相关分析,可以比较深入地了解凋亡的调节机制。尽管应用FCM 进行细胞凋亡研究的方法较多,但FCM检测凋亡细胞的方法一般基于细胞凋亡过程中形态、生化等某一方面的特性,因而难于了解凋亡过程中发生的各种变化的相互关系,也使该类方法缺乏特异性,所以,联合应用多种针对不同特性的FCM 检测方法,才能更为有效地鉴别凋亡细胞。同时,FCM 研究结果尚需同时结合形态学观察或生物化学方法,才能更加深入地了解凋亡细胞的生物学特性。随着生物技术的发展及人们对APO 本质认识的深入,相信在不久的将来,定会有更为特异和敏感的方法问世,有助于细胞凋亡取得突破性进展。
2023-07-14 23:16:491

亚大马达哟歌叫什么

歌名《Xanadu》马达一袋油演唱:乌梅师傅
2023-07-14 23:16:471

知网和paperyy哪个查重率高

这是两个完全不同的论文查重系统,算法以及数据都存在差异,所以检测结果肯定也不同,至于哪个查重率高,只有自己查了才知道。
2023-07-14 23:16:463

求歌手 Norah Jones 简介

个人完全档案资料姓名:诺拉琼斯性别:女出生年月:1979.3.30英文名:NorahJones星座:白羊座血型:嗜好:身高:170cm国籍:美国个人简历诺拉琼斯1979年出生于纽约(4岁和母亲迁居至德州,求学过程都在德洲),15岁进入“乾净灵魂美声”艾瑞卡巴度母校BookerT.Washington中学主修表演及视觉艺术,从此与爵士乐结下不解之缘。在连续获得DownBeat学生音乐奖96年及97年“最佳爵士歌手”音乐奖后,99年夏天,她趁著暑假前往纽约,立刻爱上曼哈顿活力充沛的音乐环境。2000年秋,签入BlueNote,成为BlueNote音乐大厂中最年轻的爵士女伶。诺拉-琼斯的新碟《不知何故》(Don"tKnowWhy)在第45届格莱美大奖上共获八项提名,并且无一落空,共获得年度最佳唱片、年度最佳专辑、年度最佳单曲、年度最佳新人、最佳流行女歌手、最佳流行乐演唱专辑、最佳非古典录音工程专辑、年度古典制作人八项大奖,成为本次格莱美奖的最大赢家。推荐诺拉琼斯绝美专辑《远走高飞》中文名称:远走高飞英文名称:ComeAwayWithMe资源类型:MP3!发行时间:2002年专辑歌手:诺拉琼斯(NorahJones)地区:美国语言:英语简介:2003年的全球歌坛绝不会遗忘NorahJones这号人物,年仅23岁的女生和专辑《ComeAwayWithMe》一举赢得了45届格莱美年度最佳唱片、年度最佳专辑、年度最佳单曲、年度最佳新人等八项大奖,成为本届格莱美最大赢家。全球燃烧一片好评,风光程度令人咋舌。她的出现让久未有惊喜的爵士乐坛,灌注了一丝青春活力。打从专辑第一首歌《Don"tKnowWhy》开口那瞬间,迷雾温柔的嗓音就紧抓心灵,钢琴流泻思念,唱片里的每首歌都简单且韵味十足,特别是诗意般的歌词处处有风景映入心底,令人迷醉的声音可以成为紧张生活的调味品。NorahJones让广大乐迷领会到原来爵士不只有传统的即兴摇摆,当它与其它乐种相融合时,也可以有这么精采的作品呈现。专辑曲目01.Don"tKnowWhy02.SevenYears03.ColdColdHeart04.Feelin"theSameWay05.ComeAwayWithMe06.ShoottheMoon07.TurnMeOn08.Lonestar09.I"veGottoSeeYouAgain10.PainterSong11.OneFlightDown12.Nightingale13.TheLongDayIsOver14.TheNearnessofYou
2023-07-14 23:16:451

DavidWells主要经历

DavidWellsDavidWells是一名演员,代表作品有《ElephantSighs》、《OtisE.》等。外文名:DavidWells职业:演员代表作品:《ElephantSighs》合作人物:MarkFite
2023-07-14 23:16:391

诺拉琼斯档案

thank u
2023-07-14 23:16:384

PaperYY论文查重结果偏高吗?

都说了用这个简单测一下就可以,别当真,用维普知网啊。
2023-07-14 23:16:362

那些球星名字开头字母是S的~

舍瓦
2023-07-14 23:16:3312