从细胞壁结构的角度论述革兰染色法的可能原理?

革兰染色的原理如下：1. 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。2. 革兰阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。3. 革兰阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄，网孔数目较多，经乙醇或丙酮脱色处理后，细胞壁脱水引起网孔扩大，未被固定的结晶紫与碘复合物通过孔径进入细胞壁内，经丙酮处理后，复合物便溶于其中，使细胞脱色。4. 革兰阴性菌因失去结晶紫与碘复合物而出现红色。希望以上信息对回答您的问题有帮助。

革兰氏染色法的原理是浸泡原理

革兰氏染色法的原理是革兰氏阳性菌和阴性菌在化学和生理性质上差别比较大，染色体的反应也不一样，一般阳性菌和碘和结晶紫的复合物结合比较牢固，不容易脱色，而阴性菌的结合相对比较弱，容易脱色，这是导致染色反应的主要依据。细菌经过碱性燃料结晶紫染色，后经过碘液进行媒染，然后用酒精脱色，在一定的条件下，有的细菌媒染后，颜色不被脱去，有的会被脱去，因此会把细菌分成两类，不被脱去的被称为革兰氏阳性菌，脱去的则被称之为革兰氏阴性菌。脱色后可以在用红色染料进行复染，阳性菌是紫色，阴性菌则被重新染上了红色。很多有芽孢的杆菌和大部分的球菌，还有放射菌以及真菌杜辉呈现革兰氏正反应，而弧菌、螺旋体以及大多数的致病性无芽孢杆菌则呈现出副反应。

革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。革兰氏染色法的原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。通过初染和媒染后，细胞内形成了不溶于水的结晶紫一碘大分子复合物。革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密，故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，加上它基本不含类脂，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙。因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在细胞壁内，使其呈现紫色。而革兰氏阴性细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖网孔不易收缩，加上它类脂含量高，所以当乙醇把类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大缝隙，复合物容易溶出细胞壁。通过乙醇脱色后，细胞又成无色。这时再用红色染料进行复染，革兰氏阴性细菌将获得一层新的颜色-红色，而革兰氏阳性菌则仍呈紫色。革兰氏染色流程及常见种类：革兰氏染色流程革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1、制片、取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。2、初染。滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。3、媒染。用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。4、脱色。用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节：脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。因而脱色时间一般为20-30s。5、复染。用番红液复染约2min，水洗。6、镜检。干燥后，用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。革兰氏染色的常见种类：常见的革兰氏阳性菌有葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌（Streptococcus）、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等及脑膜炎双球菌等。

操作步骤：1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。原理：革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884 年由丹麦医师Gr 二创立的。革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye ）初染液；媒染剂（mordant ) ；脱色剂( decolorising agent ）和复染液（counter stain ）。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet ）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ) 是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95 ％的酒精（ethanol ）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G ＋和G 一两大类群，常用的复染液是番红。

革兰氏染色法的原理是细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）：大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，可以选择青霉素族，头孢曲松钠等。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家汉斯·克里斯蒂安·约阿希姆·革兰氏（HansChristianJoachimGram1853-1938）创立。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。这种染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。革兰氏染色关键步骤是脱色。因为在染色时，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时20~30s。革兰氏染色（GramStaining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（GramPositive）与革兰氏（GramNegative）。这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗有着广泛用途。

革兰氏染色的步骤和原理如下:步骤:1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。2、固定。将载玻片在火焰上方固定。3、染色。加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。4、脱色。用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。5、观察。干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰染色在医学上的重要意义:1、鉴别细菌：用革兰染色法可将所有细菌分成革兰阳性菌及革兰阴性菌两大类，便于初步识别细菌。2、选择药物：临床上可很据病原菌的革兰染色性，选择有效的抗生素用于治疗。3、与致病性有关：有些革兰阳性菌能产生外毒素，而革兰阴性菌则主要具有内毒素，两者致病作用不同。

革兰氏染色法，是将所有细菌区分为革兰氏阴性菌（G-）和革兰氏阳性菌（G+）两大类，是细菌学中最为常用的鉴别染色法。这种染色的方法能够将细菌分为阴性和阳性，主要认为革兰氏颜色染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。染色原理，主要是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，随后再用95%的乙醇进行脱色即可。革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，这种染色法是由丹麦的医生革兰氏于1884年所发明的，最初其是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色及复染等四个步骤。未经过染色的细菌，由于其周围的环境折光率差别较小，故在显微镜下难以进行区分。但是，只要经过染色后，阳性菌会呈现出紫色，阴性菌呈现的则是红色，并且还能够清楚的看到细菌的形态，排列及其某些结构的特征，从而可以轻松地进行分类鉴定。

革兰氏染色 主要用来区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。先来介绍一下这个实验原理： 因为革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖网层较厚且交联致密，没有类脂存在，而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，肽聚糖网层薄且交联较差，外膜上存在较多的类脂。两者的这些区别造成了在进行革兰氏染色后出现不同染色结果。 革兰氏阳性菌：当结晶紫染液和碘液相遇后，形成不溶性的有色复合物，当用乙醇脱色时，因为胞体的失水，而使得肽聚糖交联更加紧密，网孔缩小，把紫色复合物截留在细胞内，从而使细胞呈现紫色；而革兰氏阴性菌与乙醇脱色时，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能截留形成的紫色复合物，所以呈现无色，再经沙黄复染后呈现红色。 革兰氏染色****方法： 1、涂片：利用移液枪吸取10ul的菌液滴在载玻片，用烧红的涂菌棒涂抹均匀，面积适中。 2、干燥与固定：将载玻片放置在酒精灯火焰上方一定距离处，涂菌面向上，将菌液烤干，温度不宜过高，炙烤不宜时间太长，固定就是将涂菌面向上，载玻片快速在火焰中过2-3次。 3、初染：在菌液面上滴加1-2滴草酸铵结晶紫，染色1min 4、水洗：在小股水流下冲洗，直至无色为止。 5、媒染：吸取300ul碘液滴在样本上，染色1min。 6、水洗：在小股水流下冲洗，直至无色为止。 7、脱色：倾斜玻片，滴加95%的乙醇，约30s，再水洗一次。 8、复染：在样本上滴加沙黄染液1-2滴，染色1min。 9、水洗：在小股水流下冲洗，直至流过玻片的水无色为止。 10、干燥与观察：用纸擦去水，干燥后在显微镜下观察，菌体呈现紫色的是革兰氏阳性菌，呈现红色的是革兰氏阴性菌。

细菌细胞的革兰氏染色的结果与细菌细胞壁的肽聚糖层的厚薄、类脂质含量有关。经染色后根据颜色加以区分。革兰氏阳性细菌的细胞壁肽聚糖壁厚、类脂质含量低，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。革兰氏染色法的原理：革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gr二创立的。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G＋和G一两大类群，常用的复染液是番红。操作步骤1、涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰l一2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。2、染色(1）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。(2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。(3）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20一30秒钟，立即用水冲净酒精。(4）复染用番红液染1一2分钟，水洗。(5）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。(6)同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物。它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。扩展资料细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色。因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

革兰氏染色的原理与步骤为:(1) 初染: 用结晶紫,使染色剂进入细胞;(2) 媒染: 用碘液,使之在细胞内与结晶紫形成复合物;(3) 脱色: 常用乙醇进行脱色,它具有使蛋白质变性凝固、脱去脂蛋白、溶解染料的多重作用,革兰氏阳性菌胞壁肽聚糖多,交联度高,脂蛋白和脂多糖少,故酒精作用不易洗脱出结晶紫—碘复合物。革兰氏阴性菌中的染料复合物则易被洗脱出来；(4) 复染: 用比结晶紫浅的染料(常用红色的石炭酸复红或蕃红花红),染色酒精洗脱过的涂片。结果为：如果能抗酒精脱色作用的细菌呈现紫色,因为红色虽被染上,但被紫色掩盖。如果未能抵抗酒精脱色,则呈现红色,即最后染上的颜色。深色(紫色)的为革兰氏阳性菌,红色的为革兰氏阴性菌。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：1、涂片固定.2、草酸铵结晶紫染1分钟.3、自来水冲洗.4、加碘液覆盖涂面染约1分钟.5、水洗,用吸水纸吸去水分.6、加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分.7、蕃红染色液（稀）染2分钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色.其中乙醇脱色是关键，因为如果脱色过度,有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性，如果脱色不够,有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性望采纳！！！

革兰氏染色最常用的细菌鉴别染色法之一。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用稀释复红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G+）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（G-）。革兰氏染色原理尚不尝掸佰赶脂非拌石饱将肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。

革兰氏染色最常用的细菌鉴别染色法之一。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用稀释复红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（g+）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（g-）。革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。

1.等电点学说2.化学学说3.通透性学说★

1、制片要厚薄均匀2、染色时间要控制好3、媒染液要新鲜，防碘挥发。4、脱色时间要撑握准，不能过量。

酒精脱色为整个流程最关键的一步。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。 革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。这种染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。

脱色时间的掌握，是革兰染色成败的关键

革兰染色法是1884年由丹麦医师Gram创立，直到现今，革兰氏染色法仍是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。细菌先经碱性染料结晶紫染色，而后经碘液进行媒染，之后用酒精脱色，在一定条件下有的细菌媒染后的颜色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G-)。为方便进一步观察，脱色后可再用一种红色染料如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被重新染上红色。有芽孢的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌、螺旋体和大多数致病性的无芽孢杆菌都呈现负反应。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的染色液pH和染色时间等条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应； pH很低时，则都可呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫-碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间、脱色方法也应严格控制。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： (一)涂片固定在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。为避免因菌数过多聚集成团，不利于观察细菌个体形态，可在载玻片一侧进行上述操作，而在另一侧再加一滴水，从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄层。若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液，则直接涂布于载玻片上即可，如菌液浓度较大，也可使用水滴再进行一次稀释。涂片最好在室温条件下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯火焰上方较高的位置微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：(1)杀死微生物，固定细胞结构。(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。固定常常利用高温，手执载玻片的一端(涂有标本的远端),标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次，共约2s-3s,并不时以载玻片背面加热，载玻片背面触皮肤，以不觉过烫为宜(不超过60℃),待放置冷后，再进行染色。（二)染色在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。(三)水洗染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。(四)媒染加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。(五)水洗，用吸水纸吸去水分用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。(六)脱色加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。(七)复染蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。(八)干燥，镜检染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

革兰氏染色法的原理是细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。更多关于革兰氏染色法的原理是什么，进入：https://www.abcgonglue.com/ask/45a7981616096684.html?zd查看更多内容

酒精脱色为整个流程最关键的一步。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。（2）草酸铵结晶紫染1分钟。（3）自来水冲洗，去掉浮色。（4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。（5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。（6）用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。扩展资料染色原理：该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低。故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。参考资料来源：百度百科-革兰氏染色法

革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，微生物的细胞小且透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gramstain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basicdye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorisingagent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystalviolet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红

革兰氏染色操作的关键在于严格掌握酒精脱色程度。因为如果脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌；若脱色不够阴性菌可被误染为阳性菌。

革兰氏染色（GramStaining）是用于辨别病菌的一种方式：这类染色法运用细菌细胞壁上的微生物物理性质不一样，可将病菌分为两大类，即革兰氏阳性（GramPositive）与革兰氏阳性菌呈阴性（GramNegative）。这一上色方式由荷兰医师汉斯·布拉德·革兰于1884年所创造发明，最开始是用于辨别肺炎链球菌与克雷白氏肺炎菌中间的关联，后营销推广为辨别细菌种类的关键特点之一，对由病菌感染造成的病症的疾病诊断及医治拥有普遍主要用途。革兰氏染色结果是如何的呢？一、基本原理根据结晶紫初染和碘液媒染后，在植物细胞内产生了不溶解水的结晶紫与碘的一氧化氮合酶，革兰氏阳性菌因为其植物细胞偏厚、肽聚糖网层级较多且化学交联高密度，故遇酒精或甲苯褪色解决时，因缺水反倒使网眼变小，再再加它没有脂质，故酒精解决不容易出现间隙，因而可以把结晶紫与碘一氧化氮合酶紧紧留到壁内，使其仍呈蓝紫色；而革兰氏阳性菌阴性菌因其植物细胞薄、外膜层脂质成分高、肽聚糖层薄且化学交联度差，在遇脱色剂后，以脂质主导的外膜快速融解，薄而疏松的肽聚糖网不可以阻拦结晶紫与碘一氧化氮合酶的总混，因而根据酒精褪色后仍呈没有颜色，再经过沙黄等鲜红色染剂复染，就使革兰氏阳性菌阴性菌呈鲜红色[1]。上色的差别主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差别所造成的。血压革兰氏阳性病菌的植物细胞G细菌细胞壁具备偏厚（20-80nm）而高密度的肽聚糖层，高达50层，占细胞壁成分的40%～95%，它同细胞质的表层紧密相连（图2-9）。有的G细菌细胞壁中带有磷壁酸（teichoic-acid），也称胞壁质（murein），它是凡士林和核糖醇的高聚物，磷壁酸一般以糖或碳水化合物的酯而存有。因为磷壁酸带负电，它在体细胞表面调整正离子浓度值。磷壁酸与细胞生长相关，细胞生长中有自溶素（autolysins）酶类起功效，磷壁酸对自溶有着调整作用，阻拦胞壁过多溶解和壁溶。假如植物细胞的肽聚糖层被消溶，G体细胞变成原生质体（protoplasts），植物细胞荡然无存，而只留存细胞质。除链球菌感染外，大部分G细菌细胞壁中含非常少蛋白。血液革兰氏阳性菌呈阴性病菌的植物细胞G—细菌细胞壁比G细菌细胞壁薄（15～20nm）而构造较繁杂，格外膜（outermembrane）和肽聚糖层（2～3nm）（图2-10）。在植物细胞和细胞质膜中间有一个显著的室内空间，称之为壁膜空隙（periplasmicspace）。外膜G—细菌细胞壁外膜的基本成份是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同细胞质膜相似之处也是两层脂质，但除不饱和脂肪酸外还带有含糖量和蛋白。LPS的含糖量一部分包含关键含糖量和O-特异含糖量。O-特异含糖量由反复支系的碳水化合物化合物分子结构构成，带有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脱氨已糖。因为糖的种类不一样，使各种各样G—体细胞具备不一样特点的LPS。关键含糖量（corepolysaccharide）的关键成分是酮脱氨心酸（ketodeoxyoctonate,KDO）。外膜中还带有几类蛋白质，如蛋白、透亮蛋白质。一些蛋白质具备埋孔功效（porin），管控外部分子结构进到体细胞；有的蛋白质分子结构能够做为噬菌体的蛋白激酶；很多G—病菌对高微生物有高致病是由LPS的成份决策的，它的毒副作用成分常称之为毒素累积（endotoxins）。

革兰氏阴性菌细胞壁中脂类物质含量高，肽聚糖含量低，染色过程中乙醇的处理，溶解了脂类物质，结果使得革兰氏阴性菌细胞通透性增加，染色所用的碘－结晶紫复合物也不会留在细胞内部，而是被乙醇抽提出来，所以革兰氏阴性菌不会被染色，在复染后会呈现复染液的红色。革兰氏阳性菌细胞壁主要成分是肽聚糖，脂含量很低，在乙醇处理后细胞壁中肽聚糖被脱水，孔径减小，通透性降低，染色所用的碘－结晶紫复合物则被困在细胞内部，所以导致细胞呈现紫色。

革兰氏染色法最常用的细菌鉴别染色法之一。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用龙胆紫染色，加碘液媒染后用酒精脱色，再用稀释复红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G+）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（G-）。革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、碳疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。

u2022[原理]革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说。

结晶紫初染，碘媒染形成不溶的结晶紫－碘复合物。G＋因细胞壁厚，肽聚糖交联密，乙醇脱色使孔紧密，不含脂类，不被乙醇溶解，故为紫色；G－正相反。

步骤　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：　　1）涂片固定.　　2）草酸铵结晶紫染1分钟.　　3）自来水冲洗.　　4）加碘液覆盖涂面染约1分钟.　　5）水洗,用吸水纸吸去水分.　　6）加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分.　　7）蕃红染色液（稀）染2分钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.染色结果　　革兰氏阳性菌都呈紫色,革兰氏阴性菌都呈红色.

1.涂片2.干燥3.过火4.初染:用草酸铵结晶紫染色1－2min。用水清洗，再用吸水纸洗掉多余的水。5.媒染:用碘液染色1min，用水清洗，再用吸纸洗掉多余的水。6.脱色:用95%的酒精脱色20－30s，用水清洗掉多余的酒精。用吸水纸洗掉多余的水。6.复染:用番红染液染色2min，用水清洗掉，再用吸水纸洗掉多余的水。7.镜检

革兰氏染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，它基于细胞在不同染色剂作用下颜色反应的不同。革兰氏染色可以将细菌分成革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。其原理是：经过固定、脱色和染色三个步骤，将未染色的细菌涂片先用紫色素（靛基紫）染色，然后用碘溶液使染色体甘露醇结合沉淀形成复合物，再用乙醇或丙酮脱去多余紫色素，最后再用别的染色剂如波尔多红等对未染色的革兰阴性细菌进行染色，观察染色后的颜色变化，革兰阳性菌染色后呈现紫色，而革兰阴性菌染色后呈现红色或粉红色。

革兰氏染色原理是细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色。革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色的步骤细菌经过碱性燃料结晶紫染色，后经过碘液进行媒染，然后用酒精脱色，在一定的条件下，有的细菌媒染后，颜色不被脱去，有的会被脱去，因此会把细菌分成两类，不被脱去的被称为革兰氏阳性菌，脱去的则被称之为革兰氏阴性菌。脱色后可以在用红色染料进行复染，阳性菌是紫色，阴性菌则被重新染上了红色。很多有芽孢的杆菌和大部分的球菌，还有放射菌以及真菌杜辉呈现革兰氏正反应，而弧菌、螺旋体以及大多数的致病性无芽孢杆菌则呈现出副反应。

革兰氏染色法的原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙。因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差。在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。扩展资料：一、方法概述细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。二、常见种类常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。参考资料来源：百度百科－革兰氏染色法

原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。步骤：(一)涂片固定在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。(二)染色在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。(三)水洗染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。(四)媒染加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。(五)水洗，用吸水纸吸去水分用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。(六)脱色加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。(七)复染蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。(八)干燥，镜检染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。扩展资料标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：(1)杀死微生物，固定细胞结构。(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。参考资料来源：百度百科-革兰氏染色法参考资料来源：百度百科-革兰氏染色

步骤：包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰(HansChristianGram，1853年-1938年)于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察阳性紫色阴性红色。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

　　革兰氏染色法的原理是革兰氏阳性菌和阴性菌在化学和生理性质上差别比较大，染色体的反应也不一样，一般阳性菌和碘和结晶紫的复合物结合比较牢固，不容易脱色，而阴性菌的结合相对比较弱，容易脱色，这是导致染色反应的主要依据。 　　细菌经过碱性燃料结晶紫染色，后经过碘液进行媒染，然后用酒精脱色，在一定的条件下，有的细菌媒染后，颜色不被脱去，有的会被脱去，因此会把细菌分成两类，不被脱去的被称为革兰氏阳性菌，脱去的则被称之为革兰氏阴性菌。脱色后可以在用红色染料进行复染，阳性菌是紫色，阴性菌则被重新染上了红色。很多有芽孢的杆菌和大部分的球菌，还有放射菌以及真菌杜辉呈现革兰氏正反应，而弧菌、螺旋体以及大多数的致病性无芽孢杆菌则呈现出副反应。

革兰氏染色法的原理是革兰氏阳性菌和阴性菌在化学和生理性质上差别比较大，染色体的反应也不一样，一般阳性菌和碘和结晶紫的复合物结合比较牢固，不容易脱色，而阴性菌的结合相对比较弱，容易脱色，这是导致染色反应的主要依据。 细菌经过碱性燃料结晶紫染色，后经过碘液进行媒染，然后用酒精脱色，在一定的条件下，有的细菌媒染后，颜色不被脱去，有的会被脱去，因此会把细菌分成两类，不被脱去的被称为革兰氏阳性菌，脱去的则被称之为革兰氏阴性菌。脱色后可以在用红色染料进行复染，阳性菌是紫色，阴性菌则被重新染上了红色。很多有芽孢的杆菌和大部分的球菌，还有放射菌以及真菌杜辉呈现革兰氏正反应，而弧菌、螺旋体以及大多数的致病性无芽孢杆菌则呈现出副反应。

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884 年由丹麦医师Gr 二创立的。革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色。因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察阳性紫色阴性红色。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

革兰氏染色的原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙。 因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差。 在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

革兰氏染色的步骤和原理如下:步骤:1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。2、固定。将载玻片在火焰上方固定。3、染色。加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。4、脱色。用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。5、观察。干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰染色在医学上的重要意义:1、鉴别细菌：用革兰染色法可将所有细菌分成革兰阳性菌及革兰阴性菌两大类，便于初步识别细菌。2、选择药物：临床上可很据病原菌的革兰染色性，选择有效的抗生素用于治疗。3、与致病性有关：有些革兰阳性菌能产生外毒素，而革兰阴性菌则主要具有内毒素，两者致病作用不同。

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。（2）草酸铵结晶紫染1分钟。（3）自来水冲洗，去掉浮色。（4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。（5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。（6）用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。

早在十九世纪丹麦的医生就创立了革兰染色法，到现在为止，革兰染色法广泛被用来做鉴别的一种染色方法。那么革兰氏染色法的基本原理是什么呢?细菌经过碱性燃料结晶紫染色，后经过碘液进行媒染，然后用酒精脱色，在一定的条件下，有的细菌媒染后，颜色不被脱去，有的会被脱去，因此会把细菌分成两类，不被脱去的被称为革兰氏阳性菌，脱去的则被称之为革兰氏阴性菌。脱色后可以在用红色染料进行复染，阳性菌是紫色，阴性菌则被重新染上了红色。很多有芽孢的杆菌和大部分的球菌，还有放射菌以及真菌杜辉呈现革兰氏正反应，而弧菌、螺旋体以及大多数的致病性无芽孢杆菌则呈现出副反应。革兰氏染色法的原理是革兰氏阳性菌和阴性菌在化学和生理性质上差别比较大，染色体的反应也不一样，一般阳性菌和碘和结晶紫的复合物结合比较牢固，不容易脱色，而阴性菌的结合相对比较弱，容易脱色，这是导致染色反应的主要依据。

操作步骤：1．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1一2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。2．染色(1）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。(2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。(3）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20一30秒钟，立即用水冲净酒精。(4）复染用番红液染1一2分钟，水洗。(5）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。(6)同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。原理：革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gr二创立的。革兰氏染色法（Gramstain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G一表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basicdye）初染液；媒染剂（mordant)；脱色剂(decolorisingagent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystalviolet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine)是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G＋和G一两大类群，常用的复染液是番红。

步骤：包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰(Hans Christian Gram，1853年-1938年)于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察阳性紫色阴性红色。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

革兰氏染色操作的关键在于严格掌握酒精脱色程度。因为如果脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌；若脱色不够阴性菌可被误染为阳性菌。

革兰氏染色法的原理 革兰氏染色法的原理： 简单来说：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。 具体来说：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色； 而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。 呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。 扩展资料：革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。这种染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。 经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。 操作流程：革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： （1）载玻片固定。 在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 （2）草酸铵结晶紫染1分钟。 （3）自来水冲洗，去掉浮色。 （4） 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 （5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。 （6）用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。 参考链接：百度百科-革兰氏染色法。 革兰氏染色法的原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： (1)载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 (2)草酸铵结晶紫染1分钟。 (3)自来水冲洗，去掉浮色。 (4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 (5)用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。 (6)用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。 革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立 细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。 为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。 [原理]：革兰氏染色目前有三种观点：等电点学说、化学学说和渗透学说。 1. 等电点学说，革兰氏阳性菌的等电点在PH2-3，比阴性菌（PH4-5）低，加之碘为弱氧化剂，可降低革兰氏阳性菌的等电点，致使两类菌的等电点差异扩大，因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌更强。 2.化学学说，碘液在菌体内与结晶紫结合后又和菌体内核糖核酸镁盐-蛋白质复合物结合，此结合物不易被丙酮酒精脱掉，呈革兰氏染色阳性。 因革兰氏阴性菌缺乏核糖核酸镁盐，故对碘与结晶紫结合物摄取少，且不牢固，易被丙酮酒精脱色而呈革兰氏染色阴性。 3.渗透学说，乙醇使阳性菌所含粘肽多糖脱水而致细胞壁间隙缩小，通透性降低，在菌体内保留了染料-碘复合物，呈紫色。 阴性菌含粘肽少，细胞壁变化不大，通透性不受影响，菌体内的染料-碘复合物较易透出，失去紫色，被复染成为红色。 [试剂]：Crystal violet（结晶紫）、Gram Iodine（碘液）、Decolourizer（丙酮酒精）、Safranin（稀释沙黄） [操作]： 1.标本处理：（1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。 （2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml），经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色。 2.涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。 制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。 3. 染色方法： （1）.加上Crystal violet（结晶紫）后，染色3-5秒或更久，之后用自来水冲洗之。 （2）.加上Gram Iodine（碘液）后染色3-5秒或更久，之后用自来水冲洗之。 （3）.以Decolourizer（丙酮酒精）脱色约5-10秒，并用自来水冲洗之。 （4）.加上Safranin（稀释沙黄）后，染色3-5秒或更久，之后用自来水冲洗之。 （5）.吸干或在空气中凉干后，置油镜镜检。 4.结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。 [报告方式]：革兰氏染色：检出革兰氏阳性球菌 ；革兰氏阴性球菌 检出革兰氏阳性杆菌 ；革兰氏阴性杆菌 [注意事项]： 1.标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 2.玻片通过火焰温度不能太高。 3.若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不在出现紫色为止。 [临床意义]：通过革兰氏染色，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，便于临床治疗。 [附] 1 沙黄（番红）Safranine T [C20H19ClN4=350.85] 红棕色粉末；碱基性染料。在水中溶解，在乙醇中易溶。 2 碘液配制：0.01mol/l碘液——称取1.3g碘，置于50mol烧杯中，加入2.5g碘化钾及25毫升蒸馏水，不断搅拌之，使其溶解均匀。再加0.2mol浓盐酸（体积质量1.19g/cm3），再加蒸馏水稀释到1000mol。 溶液应贮藏在棕色试剂瓶中，储于低温暗橱内。有效期为一个月左右 革兰氏阴性菌，以[大肠杆菌]为代表。 大肠杆菌为兼气性菌种，一般生存於肠道中及厌氧的还境中。革兰氏阴性菌细胞壁的特徵为有一层out member 与阳性菌种不同。 目前对大肠杆菌的研究很多，除了它是一般食物中是否有被污染的指标外，很多分子生物学方面的研究皆需要使用到大肠杆菌当作实验宿主。 【革兰氏染色法he染色法姬姆萨染色法银染色法的机理可以举一些的 初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脱色，最后用复染剂（如番红）复染.经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色（红色），该菌属于革兰氏阴性菌.革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的.实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色.碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力.当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的.革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色.革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色.。 什么是革兰氏染色法？染色过程应注意什么 一、定义 革兰氏染色法是由1884年由丹麦医师Gram创立的一种复染色法，用以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，对其进行分类鉴定。 二、染色原理 1、G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 2、Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。三、染色目的 在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。 四、染色方法步骤 1 、涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2、 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 3、固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4、 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5 、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6 、媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 7 、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 8 、脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。 9 、复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 10 、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 11 、干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色，紫色的是革兰氏阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。五、注意事项 1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。 2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 3、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h,E.coli培养24h。 若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 什么是革兰染色法？其原理、结果和意义 革兰染色法由丹麦病理学家Christain Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类。 原理： G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： (1)载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 (2)草酸铵结晶紫染1分钟。 (3)自来水冲洗，去掉浮色。 (4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 (5)用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。 (6)用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。

一、定义 革兰氏染色法是由1884年由丹麦医师Gram创立的一种复染色法，用以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，对其进行分类鉴定。二、染色原理 1、G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 2、Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。三、染色目的 在细胞发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测，判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。四、染色方法步骤 1 、涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2、 干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 3、固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4、 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5 、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6 、媒染：用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 7 、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 8 、脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。 9 、复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 10 、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 11 、干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色，紫色的是革兰氏阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。五、注意事项 1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。 2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 3、选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。