过氧化氢酶探究pH值对酶活性的影响实验步骤

过氧化氢酶活力的测定是基于其催化分解过氧化氢的能力。过氧化氢酶可以将H2O2分解成H2O和O2，反应式为：2H2O2 → 2H2O + O2过氧化氢酶的活力可以通过测定上述反应速率来确定。一般情况下，实验会将一定浓度的H2O2溶液加入含有过氧化氢酶的试剂中，然后测定反应前后H2O2浓度的变化，进而计算出过氧化氢酶的活力。过氧化氢酶活力的测定方法：过氧化氢（H2O2）溶液：通常使用30%的H2O2溶液，需要在实验中稀释至合适的浓度。过氧化氢酶溶液：可以从商家购买，也可以从细胞或组织中提取。提取方法可以参考相关文献。磷酸盐缓冲液：pH值为7.0的磷酸盐缓冲液。将磷酸盐缓冲液加入试管中，加入适量的过氧化氢酶溶液，并充分混合。在反应开始之前，加入一定量的H2O2溶液。立即开始计时，并记录反应开始时的H2O2浓度。反应一段时间后（通常为30秒），停止反应，并记录此时的H2O2浓度。通过浓度变化计算出反应速率，并据此计算出过氧化氢酶的活力。过氧化氢酶活力测定是一种常见的生物学实验方法，可以用于研究许多领域，例如细胞代谢、环境污染和疾病诊断。通过上述测定方法可以得出过氧化氢酶的活力值，为后续研究提供基础数据。

过氧化氢酶活性测定（Determination of catalaseactivity），是根据过氧化氢酶（PHD）能催化过氧化氢生成氧的特性，常用碘量法和电极法。前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。酶的催化活性会受其他分子影响：抑制剂是可以降低酶活性的分子；激活剂则是可以增加酶活性的分子。有许多药物和毒药就是酶的抑制剂。酶的活性还可以被温度、化学环境（如pH值）、底物浓度以及电磁波（如微波）等许多因素所影响。一般采用测定酶促反应初速度的方法来测定活力，因为此时干扰因素较少，速度保持恒定。反应速度的单位是浓度/单位时间，可用底物减少或产物增加的量来表示。因为产物浓度从无到有，变化较大，而底物往往过量，其变化不易测准，所以多用产物来测定。

http://jpkc.sdau.edu.cn/jpkc/zhisheng/ziyuan/shiyan/40.htm看一下吧，比较全

一、Km值的定义:(一）当酶促反应速度等于最大反应速度一半时的底物浓度即为Km值。(二）Km值是酶促反应的特征性常数。二、实验原理(一）双倒数作图法（林一贝氏作图法)以1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标求Km值。(二）Hanes 作图法[S]/V为横坐标，以[S]为纵坐标求Km值。(三）过氧化氢酶Km值测定的原理1、HOz在过氧化氢酶的作用下分解生成了HO和 O2;2Hzo过氧化氢爵，2H O+O212、[S]=加入的HO的量;3、V=固定时间内反应掉的HzO2的量=加入HzO2的量―剩余HzO2的量;4、剩余HOz的量可通过 KMnO4滴定测出:2KMnO4+5H,O2+3HpSO4→2MnSO,+KgSO4+5O2+8HzO

过氧化氢酶（Catalase, CAT）是广泛存在于植物、动物和微生物体内主要的抗氧化酶之一，其主要是催化细胞内过氧化氢分解，使其不会进一步产生毒性很大的氢氧自由基，从而保护抗氧化酵素系统的功能作用。过氧化氢酶检测是微生物学家鉴定细菌种类的主要的三种检测手段之一，即用过氧化氢来检测过氧化氢酶是否存在。迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测过氧化氢酶的活性变化。此外，我们还提供其他氧化应激类检测服务，以满足您的不同需求。生化法测定过氧化氢酶样本要求：1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。周期：2~3周

检测过氧化氢酶的化学本质就是蛋白质。，酶大部分是蛋白质，少部分是核酸，过氧化青酶是蛋白质，书上和作业里有时会出现过氧化青酶的实验，最适温度，最适ph值，核酸和温度酸碱的关系是单一的，蛋白质和温度酸碱型的关系是山峰状的。

触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

测压法。测压法是测定过氧化氢分解时析出的氧量(反应过氧化氢酶式为：H2O2+H2OO2+H2O，方法简单。过氧化氢酶(CAT)，是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶，约占过氧化物酶体酶总量的40%。

过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2，使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH过氧化氢酶的作用是使过氧化氢还原成水： 2H2O2=O2↑+ 2H2O中文名称:过氧化氢酶英文别名:Fungal catalase; catalase from bovine liver; catalase F. bov. liv.,cryst.susp. in H2O; Catalase from microorganisms; catalse from bovine liver; catalase from human erythrocytes; catalase from dog liver; catalase from mouse liver; catalase from bison liver; Catalase (bovine liver); Catalase, Human Erythrocytes; Catalase Aspergillus niger; Catalase from Corynebacterium glutamicum; Catalase Micrococcus lysodeikticus; CatalaseCAS:9001-05-2 EINECS:232-577-1 几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能呼吸的生物体内，主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中，其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。CAT是红血素酶，不同的来源有不同的结构。在不同的组织中其活性水平高低不同。过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心脏等器官快，就是因为肝中的CAT含量水平高。 虽然过氧化氢酶完整的催化机制还没有完全被了解，但其催化过程被认为分为两步：H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-E(.+)H2O2 + O=Fe(IV)-E(.+) → H2O + Fe(III)-E + O2[12]其中，“Fe()-E”表示结合在酶上的血红素基团（E）的中心铁原子（Fe）。Fe(IV)-E(.+）为Fe(V)-E的一种共振形式，即铁原子并没有完全氧化到+V价，而是从血红素上接受了一些“支持电子”。因而，反应式中的血红素也就表示为自由基阳离子（.+).过氧化氢进入活性位点并与酶147位上的天冬酰胺残基（Asn147）和74位上的组氨酸残基（His74）相互作用，使得一个质子在氧原子间互相传递。自由的氧原子配位结合，生成水分子和Fe(IV)=O。Fe(IV)=O与第二个过氧化氢分子反应重新形成Fe(III)-E，并生成水分子和氧气。[12]活性中心铁原子的反应活性可能由于357位上酪氨酸残基（Tyr357）的苯酚基侧链的存在（帮助Fe(III）氧化为Fe(IV））而得以提高。反应的效率可能是通过His74和Asn147与反应中间体作用而得以提高。[12]该反应的速率通常可以通过米氏方程来确定。[2]过氧化氢酶也能够氧化其他一些细胞毒性物质，如甲醛、甲酸、苯酚和乙醇。这些氧化过程需要利用过氧化氢通过以下反应来完成：H2O2 + H2R → 2H2O + R同样，具体的反应机制还不清楚。任何重金属离子（如硫酸铜中的铜离子）可以作为过氧化氢酶的非竞争性抑制剂。另外，剧毒性的氰化物是过氧化氢酶的竞争性抑制剂，可以紧密地结合到酶中的血红素上，阻止酶的催化反应。处于过氧化状态的过氧化氢酶中间体的三维结构已经获得解析，可以在蛋白质数据库中检索到。 进行中的过氧化氢酶检测，可以观察到气泡。过氧化氢酶检测是微生物学家鉴定细菌种类的主要的三种检测手段之一，即用过氧化氢来检测过氧化氢酶是否存在。假如细菌中含有过氧化氢酶，则在过氧化氢溶液中加入少量细菌提取物就能观察到氧气气泡生成。有气泡生成，则该菌被认为是呈“过氧化氢酶阳性”。如staphylococcus和micrococcus。没有，则该菌被认为是呈“过氧化氢酶阴性”。如streptococcus和enterococcus。 虽然过氧化氢酶检测无法鉴定特定生物体，但与其他检测方法结合，它可以有效地帮助诊断。此外细菌中是否存在过氧化氢酶，还取决于细胞生长条件和所使用的培养基。 过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。在投弹手甲虫（bombardier beetle）中，过氧化氢酶具有独特用途。这种甲虫具有两套分开储存于腺体中的化学物。大的腺体中储存着对苯二酚和过氧化氢，而小的腺体中储存着过氧化氢酶和辣根过氧化物酶。当甲虫将两个腺体中的化学物质混合在一起时，就会释放出氧气，而氧气既可以氧化对苯二酚又可以作为助推剂。过氧化氢酶也普遍存在于植物中，但不包括真菌，虽然有些真菌被发现在低pH值和温暖的环境下能够产生该酶。绝大多数需氧微生物都含有过氧化氢酶[4]。例外包括Streptococcus，一种没有过氧化氢酶的需氧细菌。部分厌氧微生物，如Methanosarcina barkeri，也含有过氧化氢酶。 过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。在纺织工业中，过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢，以保证成品是不含过氧化物的。它还被用在隐形眼镜的清洁上：眼镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后，使用前再用过氧化氢酶除去残留的过氧化氢。过氧化氢酶在美容业中的使用：一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢，目的是增加表皮上层的细胞氧量。过氧化氢酶在实验室中还常常被用作了解酶对反应速率影响的工具。

用高锰酸钾法测定。实验原理过氧化氢(HO)在工业、生物、医药等方面应用很广泛。利用HO的氧化性漂白毛、丝织物；医药上常用于消毒和杀菌剂；纯HO可作为火箭燃料的22氧化剂：工业上利用HO的还原性除去氯气；植物体内的过氧化氢酶也能催化HO的分解反映，股在生物上利用HO分解所放出的氧气来测量过氧化氢酶的活性。由于HO有着广泛的应用，常需要测定它的含量。由于在酸性溶液中，KMnO的氧化性比H0的氧化性强，所以，测定其含量时，常采用在稀硫酸溶液中，室温条件下用高锰酸钾法测定。开始反应缓慢，第1滴溶液滴入后不易褪色，待产生Mn后，由于Mn的催化作用，加快了反应速率，故滴定速度也应加快，直至溶液呈微红色且半分钟内不退色，即为终点。根据高锰酸钾浓度和滴定中消耗KMnO的体积计算。实验步骤：用吸量管吸取10mlH0样品(约为3%)，置于250ml容量瓶中，加水稀释至22标线，混合物均匀。用移液管准确移取25.00ml过氧化氢稀释液三份，分别置于三个250ml锥形瓶中，各加5mlHSO(3mol/L)，用高锰酸钾标准溶液滴定。开始24反应缓慢，待第一滴高锰酸钾溶液完全褪色后，再加入第二滴，随着反应速度的加快，可逐渐增加滴定速度，直到溶液呈为微红色且半分钟内不退色，即为终点。计算未经稀释样品中的含量。

过氧化氢酶通过氧化还原反应将过氧化氢（双氧水）催化分解为氧和水。根据其反应特点，过氧化氢酶可用于葡萄糖酸钠的双酶法（葡糖氧化酶和过氧化氢酶）生产，提高葡萄糖酸钠的生产效率；如：夏盛液体食品过氧化氢酶FDY-3505也可用于处理含有过氧化氢的污水，能够有效降解过氧化氢，使污水达到排放或者重复利用的标准；如：夏盛液体工业过氧化氢酶40万酶活GDY-2001同时也可用于食品加工过程中，用于除去食品消毒液中的过氧化氢残留。如：夏盛液体食品级过氧化氢酶40万酶活FDY-2213夏盛可提供一站式酶解方案，按客户需求定制专属配方，欢迎各界合作！可与过氧化氢酶配合的相关产品：葡糖氧化酶、碱性蛋白酶、淀粉酶

　　过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法　　【原理】　　H2O2在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低.根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性.　　【仪器与用具】　　紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；　　【试剂】　　0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；　　0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）.　　【方法】　　1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中,加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25ml容量瓶中,并用缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度.混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min,取上部澄清液在4000rpm下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液.5℃下保存备用.

1)操作步骤： ①在1～5号试管中分别加入0．5％的淀粉液2mL。 ②加完淀粉液后，向各试管中加入相应的缓冲液3．00mL，使各试管中反应液的pH值依次稳定在5．00．6．20．6．80.7．40．8．00。 ③分别向1～5号试管中加入0．5％唾液1mL，然后进行37℃恒温水浴。 ④反应过程中，每隔1min从第3号试管中取出一滴反应液，滴在比色板上，加一滴碘液显色，待呈橙黄色时，立即取出5支试管，加碘液显色并比色，记录结果。http://zhidao.baidu.com/question/16805789

as1和as2就是吸光度啊，图上有写明的啊。吸光度就是直接用机器测量出来的啊。我说下怎么测酶活：你不是有7个点嘛，把这七个点对应的吸光值描在坐标纸上，时间为横轴，吸光值为纵轴，那么这7个点可以构成一个近似的直线，那么，这个直线的斜率就是单位时间吸光度的下降值，按照公式就可以算酶活了。

根据文献，我的理解是过氧化物酶催化过氧化氢产生羟基自由基；而过氧化氢酶催化过氧化氢产生氧气

你可能是用的氧化还原测定法吧？加的硫酸很可能起酸化溶液的作用，好多氧化还原滴定中都是选硫酸做介质的，用盐酸或硝酸都易起氧化还原副反应。如果还有疑问，你把实验中所加的所有试剂和用量告诉我，我再帮你分析。

酶具有易变性反应条件温和等特点在强酸强碱高温的因素下都会影响其活性

过氧化氢酶活力测定实验中碘化钾的作用：酸用于过氧化氢酶的灭活。被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵作催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶，约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。测定前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。

土壤过氧化氢酶活性测定方法：过氧化氢酶用高锰酸钾滴定法；脲酶用靛酚蓝比色法；转化酶用3,5-二硝基水杨酸比色法。土壤过氧化氢酶是促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用，土壤过氧化氢酶可用于监测土壤质量信息，作为土壤污染的生物活性正向指标。过氧化氢酶是一种普遍存在于几乎所有生物体内的一种抗氧化酶，它是过氧化物酶体的标志酶，约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶（Catalase, CAT）是一种广泛存在于生物体中的重要酶类，能将有害的过氧化氢转化为水和氧气，因此在土壤质量评价中是一个重要的指标之一。其活性主要受诸如温度、pH、土壤含水量等环境条件的影响。在土壤中，CAT活性的高低与土壤污染、微生物代谢以及土壤氧化还原条件等有关。CAT活性较高的土壤表明土壤微生物代谢强，而且能够有效地降解过氧化氢，具有较好的土壤生态系统功能。因此，可以认为CAT活性越高，土壤的质量越好。然而，CAT活性高并不一定意味着滴定值也会高。CAT活性测定所得的滴定值仅仅是反映了一小部分土壤生态系统的变化，不能代表氧化还原条件、微生物种群结构等其他因素的变化。此外，CAT活性受到多种因素的影响，如土壤中的抑制剂、CAT底物浓度等等，所以CAT活性值不能作为土壤质量评估的唯一依据，需要综合考虑其他多个因素。

过氧化物酶的测定中钼酸铵的作用 钼酸铵是一种显色剂,能够定量测定过氧化物的质量,加在这里是要精确测定过氧化物含量。 钼酸铵（又特种钼酸铵；(T-4)-钼酸铵；四钼酸铵；钼酸二铵；）易于纯化、易于溶解、易于热解离，而且，热解离出的NH3气随加热可充分逸出，不再污染钼产品。因而，钼酸铵广泛用作生产高纯度钼制品的基本原料。比如，热解离钼酸铵生产高纯三氧化钼、用硫化氢硫化钼酸铵溶液生产高纯二硫化钼，通过钼酸铵生产各种含钼的化学试剂等。钼酸铵也常用作生产钼催化剂、钼颜料等钼的化工产品的基本原料。 过氧化物酶的作用 过氧化物酶体是由一层单位膜包裹的囊泡, 直径约为0.5～1.0μm, 通常比线粒体小。 普遍存在于真核生物的各类细胞 中,但在肝细胞和肾细胞中数量特别多。过氧化物酶体的标志酶是过氧化氢酶,它的作用主要是将过氧化氢水解。过氧化氢(H2O2)是氧化酶催化的氧化还原反应中产生的细胞毒性物质,"氧化酶和过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中",从而对细胞起保护作用。 过氧化物酶测定 酶活性测定 按常规法提取健株与病株的粗酶液， ①用愈创木酚法测定过氧化物酶活性； ②用碘酸钾滴定法测定多酚氧化酶活性； ③用碘量法测定过氧化氢酶活性 :wanfangdata../qikan/periodical.articles/fjlxyxb/980121.htm 过氧化物酶活性测定采用愈创木酚法 :shac.gov./nkrx/kjdt/lwzj/t20040726_106488.htm 请问过氧化物酶和辣根过氧化物酶的区别？ 后者是指从辣根中提取的一种过氧化物酶 过氧化物酶的活性如何测定 过氧化物酶都能把过氧化氢分解成氧气和水... 做法就是定时,定量的过氧化氢,在定量的酶的催化下产生了多少氧气. 过氧化物酶,SOD的 作用 SOD不是过氧化物酶，是超氧化物歧化酶。它是一种新型酶制剂,在生物界的分布极广,几乎从人到单细胞生物,从动物到植物,都有它的存在。它对于治疗因超氧离子(O_2~(u-))引起的各种疾病均有一定的疗效,尤其治疗类风溼关节炎、红斑痕疮,皮肌炎等均有明显效果。此外,在防辐射,防衰老,抗肿瘤等方面也已进入临床。广告里面的SOD蜜就是有它的成分。 辣根过氧化物酶的活性测定方法 过氧化物酶（辣根过氧化酶，181U/mg）溶液（约0℃）：取1.7mg过氧化物酶（Serva, Nr,31943）溶于5ml蒸馏水。 辣根，别名：马萝卜，拉丁学名：Armoracia rusticana.属罂粟目，十字花科、辣根属多年生直立草本。全体无毛。根肉质肥大，纺锤形，白色，下部分枝。茎粗壮，表面有纵沟，多分枝。原产欧洲东部和土耳其，已有2000多年的栽培历史。中国的青岛、上海郊区栽培较早，其他城郊或蔬菜加工基地有少量栽培。根有特殊辣味，含烯丙（基）硫氰酸（C3H5CNS），磨碎后干藏，备作煮牛肉及奶油食品的调料，或切片入罐头中调味。中国自古药用，有利尿、兴奋神经之功效。还具有较强的抗癌效果。 过氧化物酶与氧化酶的作用有何不同 过氧化氢酶只是加快过氧化氢分解的，想到于催化剂。过氧化氢酶的作用是使过氧化氢还原成水： 2H2O2=O2↑+ 2H2O 而氧化酶（oxidase）过氧化物酶体中的主要酶类，氧化酶约占过氧化物酶体酶总量的一半。 各种氧化酶作用于不同的底物，其共同特征是氧化底物的同时，将氧还原成过氧化氢： RH2 + O2 → R + H2O2 所以它们之间的区别就是一个是分解过氧化氢的，一个是产生过氧化氢的。 抗坏血酸过氧化物酶的定义？ 一般的酶很难下一个具体的定义，就找到这个，希望对你有帮助。 维生素C过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)是植物体内的重要酶系,是植物AsA-GSH氧化还原途径的重要组分,是清除H2O2(特别是叶绿体中的H_2O_2)的关键酶。 :emuch./journal/article.php?id=CJFDTotal-SWCX200806050 锰过氧化物酶 黄孢原毛平革菌(Phanerochaete Chrysosporium)5．776在初始发酵培养基中产胞外锰过氧化物酶活力极低。为了显著提高锰过氧化物酶活力，对初始发酵培养基进行优化。通过调整培养基中碳源、氮源种类和含量，吐温80新增量，Mn^2+终浓度，静置培养温度、时间，采用分光光度计法测定酶活力，发现黄孢原毛平革菌在限氮高锰培养基中产生较高的锰过氧化物酶。静置液体培养的优化条件是：葡萄糖10g／L；酒石酸铵2mmol／L；吐温80 lg／L；Mn^2+ 9．9μg／L；于34℃静置培养5d；产MnP活力达1200U／L，比优化前提高了近17倍。

这个实验为什么用菲林试剂来检测？菲林试剂是用来检测还原糖的。这个实验至始至终没有还原糖，怎么会用这个试剂来检测呢？是不是你看错题啦？这个实验用快灭火的火苗来检测或可以目测气泡的产生量和速度来检测的。

（1）试管中加入2mL马铃薯块茎提取液、2mlH2O2溶液、2mL无色焦性没食子酸，与前两组实验对照，目的是探究马铃薯块茎提取液是否含有过氧化氢酶．（2）向2号试管中加入2mL马铃薯块茎提取液和2ml蒸馏水，观察颜色变化，该组实验的目的是探究马铃薯块茎提取液本身是否会使焦性没食子酸氧化生成橙红色沉淀，排除马铃薯块茎提取液本身对实验结果的影响．（3）如果2号试管未产生颜色反应，说明马铃薯块茎提取液本身不会使焦性没食子酸氧化生成橙红色沉淀，则出现橙红色沉淀的是3号管，马铃薯块茎提取液中的过氧化氢酶催化H2O2的分解，产生的O2能使溶于水的无色焦性没食子酸氧化成橙红色沉淀．故答案为：（1）2mLH2O2、2mL马铃薯块茎提取液、2mL无色焦性没食子酸（2）排除马铃薯块茎提取液中物质会使焦性没食子酸氧化生成橙红色沉淀（3）3

过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。仪器药品 　　氧电极仪 　　　　　　记录仪 　　电磁搅拌器　　　　　 超级恒温水浴 　　注射器、　　　　　　 微量注射器 　　　　容量瓶 　　反应杯　　　　　　　 亚硫酸钠 过氧化氢酶 　　50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2）。 　　50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。 　　标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。操作步骤1．仪器的标定按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。2．绘制酶活性标准曲线(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。 　　(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。 　　(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl（例如浓度为20、30、40、50U/ml等），记录氧释放曲线。 　　(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。 　　(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。3．样品测定 　　(1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。 　　(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。 　　(3)如果没有标准的过氧化氢酶，不能计算酶活性单位时，也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。

动物肝脏中含有过氧化氢酶，分解过氧化氢生成水和氧气~

酶活性测定按常规法提取健株与病株的粗酶液，①用愈创木酚法测定过氧化物酶活性；②用碘酸钾滴定法测定多酚氧化酶活性；③用碘量法测定过氧化氢酶活性http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/fjlxyxb/980121.htm过氧化物酶活性测定采用愈创木酚法http://www.shac.gov.cn/nkrx/kjdt/lwzj/t20040726_106488.htm

你们用的是什么方法测定的啊？我们做的是用高锰酸钾滴定法诶。

应该是因为与空白对照可以看出过氧化氢酶活力的测定与空白对照的区别

过氧化氢酶的加入

做对比，排除其它因素干扰可能造成的假象。

滴定操作...

葡萄糖氧化酶法测定的基本原理如下：1、原理：葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应中释放过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶催化下与色原性氧受体缩合为红色化合物，此物质在505mm处有最大吸收峰，其吸光度值和葡萄糖量成正比。2、将血清和酶酚混合试剂混匀，置于适宜环境中保温保存，反应完毕后用调零过的分光光度计测定产物于505mm处吸光度值。根据光度值查表或计算可得到样品中葡萄糖浓度。扩展资料：葡萄糖氧化酶法：特异性强、价廉、方法简单。其正常值：空腹全血为3.6～5.3毫摩尔/升（65～95毫克/分升），血浆为3.9～6.1毫摩尔/升（70～110毫克/分升）。葡萄糖测定常用的两种方法中，葡萄糖氧化酶法准确度和精密度符合临床要求，操作简便，是血糖测定的常规检验方法，也可用于脑脊液葡萄糖浓度测定；己糖激酶法为国际临床化学和实验室医学联盟（IFCC）推荐的参考方法。葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下形成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的催化作用下形成水和原子氧,以及原子氧可以将某种无色的化合物氧化成有色的化合物的原理,将上述两种酶和无色化合物固定在纸条上,制成测试葡萄糖含量的酶试纸.这种酶试纸会因为葡萄糖含量的多少呈现不同的颜色.

过氧化氢酶km值的测定实验中，严格按照实验操作流程，能保证准确反映。过氧化氢酶km值的测定实验中，有血液稀释、H2O2浓度的标定、反应速度的测定操作流程。

测定过氧化氢酶活力在果蔬加工中具有重要的意义。这种酶可以催化过氧化氢分解成氧和水的反应，从而帮助保持果蔬原有的色、香、味。此外，过氧化氢酶还可以防止果蔬在冷冻保藏时的发酵变质，以达到保鲜效果。

过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法【原理】H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。【仪器与用具】紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；【试剂】0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。【方法】 1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。表40-2 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管 号S1S2S3粗酶液(ml)0.20.20.2pH7.8磷酸(ml)1.51.51.5蒸馏水(ml)1.01.01.025℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。3.结果计算： 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0－ AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；AS1, AS2—样品管吸光值；Vt—粗酶提取液总体积（ml）；V1—测定用粗酶液体积（ml）；FW—样品鲜重（g）；0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。

过氧化氢酶活性测定（Determination of catalaseactivity），是根据过氧化氢酶（PHD）能催化过氧化氢生成氧的特性，常用碘量法和电极法。过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。任何重金属离子（如硫酸铜中的铜离子）可以作为过氧化氢酶的非竞争性抑制剂。另外，剧毒性的氰化物是过氧化氢酶的竞争性抑制剂，可以紧密地结合到酶中的血红素上，阻止酶的催化反应。

以下是一般的过氧化氢酶测定步骤：1. 样品制备：将待测样品制备成适当的浓度和体积。2. 准备试剂：准备含有过氧化氢的试剂，通常是过氧化氢溶液。3. 加入酶：将过氧化氢酶加入待测样品中，使其催化过氧化氢的分解。4. 反应时间：将样品和试剂在一定的时间内反应，通常是在室温下反应几分钟。5. 停止反应：加入一个停止反应的试剂，通常是一种酸或碱，以停止酶的活性。6. 测定结果：使用特定的测定方法，如比色法或荧光法，来测定反应产生的产物的浓度，从而确定过氧化氢酶的活性。过氧化氢酶活性测定，是根据过氧化氢酶（PHD）能催化过氧化氢生成氧的特性，常用碘量法和电极法。前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。

生物体在进行呼吸代谢的过程中会产生H2O2，这种物质有比较高的氧化性，会伤害细胞中的正常生物大分子如蛋白质和DNA等。过氧化氢酶，是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。可以将H2O2催化分解成H2O和O2，对人体无害。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。这是因为肝脏是人体中最大的化工厂，要进行大量的分解合成代谢，产生H202的速度很快，所以需要高浓度过氧化氢酶工作保护肝细胞。

生物体在进行呼吸代谢的过程中会产生H2O2，这种物质有比较高的氧化性，会伤害细胞中的正常生物大分子如蛋白质和DNA等。过氧化氢酶，是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物体内。可以将H2O2催化分解成H2O和O2，对人体无害。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。这是因为肝脏是人体中最大的化工厂，要进行大量的分解合成代谢，产生H202的速度很快，所以需要高浓度过氧化氢酶工作保护肝细胞。

生物体在进行呼吸代谢的过程中会产生H2O2,这种物质有比较高的氧化性,会 伤害细胞中的正常生物大分子如蛋白质和DNA等.过氧化氢酶,是催化过氧化氢 分解成氧和水的酶,存在于细胞的过氧化物体内.可以将H2O2催化分解成H2O和 O2,对人体无害.过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中,特别在肝 脏中以高浓度存在.这是因为肝脏是人体中最大的化工厂,要进行大量的分解 合成代谢,产生H202的速度很快,所以需要高浓度过氧化氢酶工作保护肝细 胞.

因为在实验过程中使用的锥形瓶有残留水分，稀释了溶液。Km呈负值（即整条直线都向下移动），亦即所有测定的v值都偏大。由v= ，故推断最有可能的原因是v2整体测量值偏小，v2偏小的可能原因是H2O2本身的分解;此外，滴定时读数不准确也会对本实验造成较大影响。前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。以上内容参考：百度百科-过氧化氢酶活性测定

过氧化氢酶（CAT），是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物酶体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶，约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中，特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装，防止食物被氧化。[1]

过氧化氢酶活性测定，是根据过氧化氢酶（PHD）能催化过氧化氢生成氧的特性，常用碘量法和电极法。　　前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围bai测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。

过氧化氢酶(catalase) 过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2，使得H2O2不致于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH 过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶, 约占过氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶的作用是使过氧化氢还原成水: 2H2O2 → O2 + 2H2O过氧化氢酶（CAT）是一种酶类清除剂，又称为触酶，是以铁卟啉为辅基的结合酶。它可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御体系的关键酶之一。CAT作用于过氧化氢的机理实质上是H2O2的歧化，必须有两个H2O2先后与CAT相遇且碰撞在活性中心上，才能发生反应。H2O2浓度越高，分解速度越快。几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能呼吸的生物体内，主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中，其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。CAT是红血素酶，不同的来源有不同的结构。在不同的组织中其活性水平高低不同。过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心脏等器官快，就是因为肝中的CAT含量水平高。

过氧化氢酶大量分布于动植物细胞内，属于活性氧清除剂，可分解机体代谢过程中产生的活性氧如过氧化氢，超氧阴离子等，这些物质可对机体尤其是质膜产生毒害作用，测定这种酶的活力可以评价机体受活性氧毒害程度。过氧化氢酶的活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，可以根据这种酶的活性水平判断植物是否受到氧化损伤（比较某种因素或者复合因素作用下与正常状态下的酶活水平）。

黄孢原毛平革菌(Phanerochaete Chrysosporium)5．776在初始发酵培养基中产胞外锰过氧化物酶活力极低.为了显著提高锰过氧化物酶活力,对初始发酵培养基进行优化.通过调整培养基中碳源、氮源种类和含量,吐温80添加量,Mn^2+终浓度,静置培养温度、时间,采用分光光度计法测定酶活力,发现黄孢原毛平革菌在限氮高锰培养基中产生较高的锰过氧化物酶.静置液体培养的优化条件是：葡萄糖10g／L；酒石酸铵2mmol／L；吐温80 lg／L；Mn^2+ 9．9μg／L；于34℃静置培养5d；产MnP活力达1200U／L,比优化前提高了近17倍.

需要对照组，才能说明在加入过氧化氢酶前后，其反应速率的变化。若加入前后变化不大，则说明过氧化氢酶对其基本无催化作用。

过氧化氢（化学式：H2O2），纯过氧化氢是淡蓝色的黏稠液体，可任意比例与水混溶，是一种强氧化剂，水溶液俗称双氧水，为无色透明液体。其水溶液适用于医用伤口消毒及环境消毒和食品消毒。在一般情况下会缓慢分解成水和氧气，但分解速度极其慢，加快其反应速度的办法是加入催化剂——二氧化锰等或用短波射线照射。具体步骤如下：1. 取1g植物叶片，加5 ml 0.1 mol/L pH 7.8的磷酸二氢钾缓冲液，研磨并静置3小时。2. 取以上样品加入EP管，然后在4 摄氏度，10000rpm离心10min。3. 取上清液，加入等体积的40％蔗糖，并加入0.025%的溴酚蓝，混合均匀。4. 用PAGE（非变性PAGE），浓缩胶：4％ pH6.7，分离胶：10% pH8.9，电压150-200V电泳3-4小时。5. 用过氧化氢酶同工酶染色液进行染色。配方如下：A液: 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸缓冲液 5ml，0.1 mol/L 硫代硫酸钠 3.5 ml， 3％ 过氧化氢25 ml。B液：0.09 mol/L KI 25 mL，蒸馏水25 ml。先用A液浸泡 15分钟后，水洗，再用B液浸泡。过氧化氢同工酶染色经典法的原理———电泳凝胶上的过氧化氢酶将H2 O2 分解生成H2 O和O2 ,但在无过氧化氢酶的区域 ,H2 O2 将K3Fe(CN) 6 还原为K4Fe(CN) 6,而FeCl3再与K4Fe(CN) 6 反应生成蓝色的普鲁士蓝。这样 ,在凝胶的蓝色背景上所看见的透明区带即为含有过氧化氢酶的区域。

首先要配制标准的过氧化氢酶溶液，比如准确配制0.1mol/L，然后取5ml，10ml，15ml，20ml，25ml的标准过氧化氢溶液，用50ml容量瓶稀释到刻度，然后分别测这五个溶液的吸光度，根据过氧化氢酶浓度c和吸光度A可以得到一个线性关系，得到线性曲线就是其吸光度的标准曲线。

化学本质是歧化反应生成水和氧，一般红细胞和肝脏比较多，是一种标志酶。

酶活性的影响因素有温度、溶液的pH以及重金属离子等因素。酶指具有生物催化功能的高分子物质， 在酶的催化反应体系中，反应物分子被称为底物，底物通过酶的催化转化为另一种分子。几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与，以提高效率。与其他非生物催化剂相似，酶通过降低化学反应的活化能（用Ea或ΔG表示）来加快反应速率，大多数的酶可以将其催化的反应之速率提高上百万倍；事实上，酶是提供另一条活化能需求较低的途径，使更多反应粒子能拥有不少于活化能的动能，从而加快反应速率。酶作为催化剂，本身在反应过程中不被消耗，也不影响反应的化学平衡。酶有正催化作用也有负催化作用，不只是加快反应速率，也有减低反应速率。与其他非生物催化剂不同的是，酶具有高度的专一性，只催化特定的反应或产生特定的构型。酶的催化活性会受其他分子影响：抑制剂是可以降低酶活性的分子；激活剂则是可以增加酶活性的分子。有许多药物和毒药就是酶的抑制剂。酶的活性还可以被温度、化学环境（如pH值）、底物浓度以及电磁波（如微波）等许多因素所影响。酶属生物大分子，分子质量至少在1万以上，大的可达百万。酶的催化作用有赖于酶分子的一级结构及空间结构的完整。若酶分子变性或亚基解聚均可导致酶活性丧失。一个值得注意的问题是酶所催化的反应物即底物，却大多为小分物质它们的分子质量比酶要小几个数量级。功能作用：催化酶是一类生物催化剂，生物体内含有数千种酶，它们支配着生物的新陈代谢、营养和能量转换等许多催化过程，与生命过程关系密切的反应大多是酶催化反应。酶的这些性质使细胞内错综复杂的物质代谢过程能有条不紊地进行，使物质代谢与正常的生理机能互相适应。若因遗传缺陷造成某个酶缺损，或其它原因造成酶的活性减弱，均可导致该酶催化的反应异常，使物质代谢紊乱，甚至发生疾病，因此酶与医学的关系十分密切。