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计算机工作原理

2023-08-23 14:48:15
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蓓蓓

计算机工作原理如下:

1、 计算机硬件由五个基本部分组成:运算器、控制器、存储器、输入设备和输出设备。

2、计算机内部采用二进制来表示程序和数据。

3、采用“存储程序”的方式,将程序和数据放入同一个存储器中(内存储器),计算机能够自动高速地从存储器中取出指令加以执行。

可以说计算机硬件的五大部件中每一个部件都有相对独立的功能,分别完成各自不同的工作。五大部件实际上是在控制器的控制下协调统一地工作。首先,把表示计算步骤的程序和计算中需要的原始数据,在控制器输入命令的控制下,通过输入设备送入计算机的存储器存储。其次当计算开始时,在取指令作用下把程序指令逐条送入控制器。控制器对指令进行译码,并根据指令的操作要求向存储器和运算器发出存储、取数命令和运算命令,经过运算器计算并把结果存放在存储器内。在控制器的取数和输出命令作用下,通过输出设备输出计算结果。

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计算机的基本工作原理是什么?

冯·诺依曼结构特点现代计算机发展所遵循的基本结构形式始终是冯·诺依曼机结构。这种结构特点是“程序存储,共享数据,顺序执行”,需要CPU从存储器取出指令和数据进行相应的计算。主要特点有:1、单处理机结构,机器以运算器为中心;2、采用程序存储思想;3、指令和数据一样可以参与运算;4、数据以二进制表示;5、将软件和硬件完全分离;6、指令由操作码和操作数组成;7、指令顺序执行。扩展资料:对冯·诺依曼计算机体系结构缺陷的分析:1、指令和数据存储在同一个存储器中,形成系统对存储器的过分依赖。如果储存器件的发展受阻,系统的发展也将受阻。2、指令在存储器中按其执行顺序存放,由指令计数器PC指明要执行的指令所在的单元地址。然后取出指令执行操作任务。所以指令的执行是串行。影响了系统执行的速度。3、存储器是按地址访问的线性编址,按顺序排列的地址访问,利于存储和执行的机器语言指令,适用于作数值计算。但是高级语言表示的存储器则是一组有名字的变量,按名字调用变量,不按地址访问。机器语言同高级语言在语义上存在很大的间隔,称之为冯·诺依曼语义间隔。消除语义间隔成了计算机发展面临的一大难题。4、冯·诺依曼体系结构计算机是为算术和逻辑运算而诞生的,目前在数值处理方面已经到达较高的速度和精度,而非数值处理应用领域发展缓慢,需要在体系结构方面有重大的突破。5、传统的冯·诺依曼型结构属于控制驱动方式。它是执行指令代码对数值代码进行处理,只要指令明确,输入数据准确,启动程序后自动运行而且结果是预期的。一旦指令和数据有错误,机器不会主动修改指令并完善程序。而人类生活中有许多信息是模糊的,事件的发生、发展和结果是不能预期的,现代计算机的智能是无法应对如此复杂任务的。
2023-08-16 00:45:301

计算机的基本工作原理是什么

1、计算机的基本原理主要分为存储程序和程序控制,预先要把控制计算机如何进行操作的指令序列(称为程序)和原始数据通过输入设备输送到计算机内存中。每一条指令中明确规定了计算机从哪个地址取数,进行什么操作,然后送到什么地址去等步骤。2、计算机在运行时,先从内存中取出第一条指令,通过控制器的译码,按指令的要求,从存储器中取出数据进行指定的运算和逻辑操作等加工,然后再按地址把结果送到内存中去。接下来,再取出第二条指令,在控制器的指挥下完成规定操作。依此进行下去。直至遇到停止指令。程序与数据一样存取,按程序编排的顺序,一步一步地取出指令,自动地完成指令规定的操作是计算机最基本的工作原理,这一原理最初是由美籍匈牙利数学家冯.诺依曼于1945年提出来的,故称为冯.诺依曼原理,冯诺依曼体系结构计算机的工作原理可以概括为八个字:存储程序、程序控制。3、存储程序:将解题的步骤编成程序(通常由若干指令组成),并把程序存放在计算机的存储器中(指主存或内存)。4、程序控制:从计算机主存中读出指令并送到计算机的控制器,控制器根据当前指令的功能,控制全机执行指令规定的操作,完成指令的功能。重复这一操作,直到程序中指令执行完毕。
2023-08-16 00:47:201

输入设备工作原理 在线等!!!!!!

输出设备:显示器(即屏幕)、打印机、绘图仪、语音输出设备、磁盘输入设备:键盘、鼠标、摄像头、扫描仪、游戏操纵杆计算机基本工作原理即“存储程序”原理,它是由冯·诺依曼提出的。计算机包括运算器、存储器、控制器、输入设备和输出设备五大基本部件 。计算机内部应采用二进制表示指令和数据 。计算机系统应按照下述模式工作:将编好的程序和原始数据,输入并存储在计算机的内存储器中(即“存储程序”);计算机按照程序逐条取出指令加以分析,并执行指令规定的操作(即“程序控制”)。这一原理称为“存储程序”原理,是现代计算机的基本工作原理,至今的计算机仍采用这一原理。
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你其他三道论述题的答案有了没? 我国基础教育正在进行史无前例的课程改革。理解这次课程改革的伟大意义,需要明确两个问题:第一,我国基础教育现行课程体系的根本问题是什么:第二,本次课程改革所推出的新课程的功能与目标是什么。  我国基础教育现行课程体系的根本问题首先表现在课程价值观的扭曲。教育有两种基本价值:一是促进人的发展,这是教育的内在价值、根本价值;二是承担社会所赋予的人才选拔功能,这是教育的外在价值、工具价值。现行课程体系的根本问题是把教育的两种价值割裂开来、对立起来。选拔功能被强化为教育的根本价值:为选拔而教,为选拔而学,人的发展沦为选拔的副产品。课程是什么?课程是使学生在中考、高考中获得成功的工具、手段。至于课程本身的引人入胜之处、课程的人的发展的价值则被漠视或未得到应有的体现。这是诸多教育悲剧产生的根源。扭曲了的课程价值观在现行课程体系中充分暴露出来:知识技能取向的课程目标:繁、难、偏、旧且过于注重书本知识的课程内容;具有严重“分科主义”倾向的课程结构:课程实施过于强调接受学习、死记硬背、机械训练;选拔取向的课程评价:中央集权的课程管理:等等。  确立体现时代精神的新的课程价值观、根治现行课程体系的弊端是本次课程改革的根本任务。  新课程的基本价值取向是:为了每一个学生的发展。这意味着我国基础教育课程体系必须走出目标单一、过程僵化、方式机械的“生产模式”,让每一个学生的个性获得充分发展,培养出丰富多采的人格。这是我国素质教育课程体系的根本要求。素质教育课程体系当然承担社会所赋予的人才选拔功能,但它把课程本身的引人入胜之处、课程的个性发展价值视为根本,让每一个个性充分发展的人去健康地接受社会的选拔和其他挑战。这种既适应我国素质教育的内在要求,又体现时代精神的新的课程价值观在新课程的功能与目标中集中展现出来:  1.新课程确立起新的知识观,从而走出了课程目标的知识技能取向。现行课程体系过分强调了知识技能的确定性,把知识技能视为普遍的、僵化的、外在于人的、供人掌握的东西,由此导致课程目标的知识技能取向和课程实施的“灌输主义”倾向。新课程不再把知识技能视为凝固起来的供人掌握和存储的东西,它合理地承认了知识技能的不确定性,知识技能的本质在于人们通过它而进行批判性、创造性思维,并由此建构出新的意义。基于这种新的知识观,新课程的目标就超越了知识技能取向,使知识技能的获得过程同时成为学会学习和形成正确价值观的过程。新课程各科课程标准把知识与技能、过程与方法(即对知识技能的反思与应用)、情感态度价值观(即通过知识技能而建构出的个性意义)三者真正统一起来,从而使我国基础教育课程体系产生了质的飞跃。  2.新课程确立起新的学生观,从而使个性发展成为课程的根本目标.新课程认为,学生不是被人塑造和控制、供人驱使和利用的工具,而是有其内在价值的独特存在,学生即目的。因此,个性发展是课程的根本目标。如何理解学生的个性发展?新课程认为,每一个学生的个性既是具有独特性、自主性的存在,又是关系中的存在。所以,新课程从三大关系上理解学生的个性发展、规划课程目标,即学生与自我的关系(即“具有健壮的体魄和良好的心理素质,养成健康的审美情趣和生活方式”,等等):学生与他人和社会的关系(即“具有社会责任感,努力为人民服务”,等等):学生与自然的关系(即“具有初步的创新精神、实践能力、科学和人文素养以及环境意识”)。用一种整体的观点来全面把握学生的个性发展并将其视为课程的根本目标,这使我国基础教育课程体系具有了新的起点。  3.新课程确立起课程与社会生活的连续性,从而使新课程植根于生活的土壤。新课程认为,课程不是孤立于生活世界的抽象存在,而是生活世界的有机构成;课程不是把学生与其生活割裂开来的屏障,而是使学生与其生活有机融合起来的基本途径。所以,回归生活世界是新课程的基本理念之一。帮助学生反思、体验、享受生活并提升、完善生活是新课程的基本追求。增进学校与社会的密切联系,增强学校生活的社会性,培养学生的实践能力、社会责任感和关心社会生活的态度是新课程的目标、内容和实施过程的重要特色。  由此看来,新课程实现了基础教育课程概念的重建.课程是什么?课程是教师、学生、教材、环境四因素动态交互作用的“生态系统”。学生与教师的经验即课程。生活即课程。自然即课程。分门别类的教材只是课程的一个因素,这个因素只有在和其他因素整合起来、成为课程生态的有机构成的时候,它才发挥应有的作用。
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MotoRazr折叠手机多少钱?

摩托罗拉Razr2019延续了Razr经典的设计语言,与市面上绝大多数采用横折式的折叠屏手机不同,摩托罗拉Razr2019采用竖折的折叠方式,折叠后只有4寸大小,可以很方便的塞入上衣口袋,折叠之后可以看到一块外屏,这块外屏的大小为2.7英寸,分辨率为800x600,它可以显示时间,短信,来电等信息。完全展开后则是一块6.2英寸21:9比例屏幕,分辨率为2142x876,屏幕显示效果良好,几乎看不到折叠的痕迹,屏幕也是很顺滑但与玻璃的质感还是有点差距,值得一提的是,摩托罗拉Razr2019如刀锋般展开后机身厚度真的是很惊艳,造型也很吸睛。除此以外摩托罗拉Razr2019还特地增加了屏内弯曲的空间,在折叠的时候,用户可透过手机的横截面看到屏幕以复杂的水滴形弯曲,而不是被直接折叠过去的这个创新还是可圈可点的。在售价方面,MotoRazr国际市场定价为1499美元(约1.4万元人民币)。联想并未公布国内市场定价。
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质粒提取的基本原理

质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。实验原理提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。详细内容请参考《分子克隆实验指南》。[1] 另外,复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章,提供了质粒提取机理的详细解说。碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli(大肠杆菌)中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要OH-处理的强度和时间不要太过,当pH值恢复到中性时,DNA双链就会再次形成。在裂解过程中,细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物,后者被十二烷基硫酸盐包盖。当用K+取代Na+时,复合物会从溶液中有效地沉淀下来,离心除去变性剂后,就可以从上清中回收复性的质粒DNA。在SDS存在的条件下,碱水解是一项非常灵活的技术,它对E. coli的所有菌株都适用,并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL以上。煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中,然后加热到100℃使其裂解。加热除了破坏细菌外壁,还有助于解开DNA链的碱基配对,并使蛋白质和染色体DNA变性。但是。闭环质粒DNA链彼此不会分离,这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。当温度下降后,闭环DNA的碱基又各就各位,形成超螺旋分子,离心除去变性的染色体DNA和蛋白质,就可从上清中回收质粒DNA。煮沸裂解法对于小于15kb的小质粒很有效,可用于提取少至lmL(小量制备),多至250mL(大量制备)菌液的质粒,并且对大多数的大肠杆菌菌株都适用。但对于那些经变性剂、溶菌酶及加热处理后能释放大量碳水化合物的大肠杆菌菌株,则不推荐使用该法。这是因为碳水化合物很难除去,会抑制限制酶和聚合酶活性。若碳水化合物的量很大,在CsCl-溴化乙锭梯度离心中会使超螺旋质粒DNA带变得模糊不清。大肠杆菌菌株HBl01及其衍生菌株(其中包括TGl)能产生大量的碳水化合物,不适于用煮沸法裂解。质粒小提试剂盒用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,它结合了优化的碱裂解法,以及方便快捷的硅膜离心技术,具有高效,快捷的特点,能在30min内完成全部操作。利用试剂盒能从1-5mL过夜培养的大肠杆菌菌液中纯化得到10-40μg高质量的质粒DNA(OD260/OD280=1.7-1.9),此质粒DNA可直接用于DNA序列分析,各种酶促反应,PCR以及部分细胞系的转染等。
2023-08-16 00:46:491

透视镜怎么形容

有色玻璃,双面,可观察房间内人的动作,不令人察觉。根据查询楼盘网显示,透视镜是一面有色玻璃,外观跟镜子相像,在另一个房间可以看到这个房间的一举一动。透视镜的原理是利用光在不同的环境下产生单面反观的效果,像透视镜的一面会镀上银,非常薄,一半的光可以通过,而另外一半的光会直接被反射回去。
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邯郸学院英语专业修双学位

双学位,广义是指第二学士学位、是与境外大学合作开展的“双学位”项目、辅修专业学位(辅修二学位)。在我国通常语境中仅指辅修专业学位。辅修专业学位,是在本科学习阶段,学习本专业的同时,跨学科门类学习另一专业的学位课程,达到全部要求后获得教育部统一制作、授权颁发、学信网注册的普通高等教育本科毕业证、学位证的同时,获得高等院校颁发的另一学科的辅修专业证书(辅修学历证书)和高等院校颁发的双学士学位证书(辅修学位证书),未达到申请学士学位要求者可获得辅修学历(辅修证书、辅修结业证书)。双学位(辅修专业学位)由学校自行制定批准;与之对比第二学士学位需要教育部备案。双学位证书是在一个学位证上注上两个学位名称或颁发高等院校制作的“双学位证书”;而第二学士学位是另外颁发教育部统一制作的毕业证书和学位证书(第二学士学位的毕业证及学位证是教育部授权颁发,与普通本科生毕业证学位证相同,学历和学位分别可以在教育部学信网及教育部学位网(中国学位与研究生教育信息网)上备案查询,受国家公务员考试等承认)。
2023-08-16 00:46:531

关于吃饭的英语短句

1. 关于用餐的英语句子 I"m so hungry. I"m starving. 我好饿。我快要饿死了。 My stomach is growling. 我的肚子咕咕叫了。 The food is very tasty. 这饭菜很好吃。 The soup smells good. 这汤闻起来很香。 I can"t finish this. 我吃不下了。 I"m too full. 我太饱了。 It"s too sweet. 太甜了。 What a complete breakfast! 真是一顿营养丰富的早餐啊! You should eat more. 你该多吃一点。 2. 关于用餐的英语句子 I"m so hungry. I"m starving.我好饿。 我快要饿死了。My stomach is growling.我的肚子咕咕叫了。 The food is very tasty.这饭菜很好吃。The soup smells good.这汤闻起来很香。 I can"t finish this.我吃不下了。I"m too full.我太饱了。 It"s too sweet.太甜了。What a complete breakfast!真是一顿营养丰富的早餐啊!You should eat more.你该多吃一点。 3. 有哪些关于食物的英语句子 1、The words about food contains vegetables, fruits, drinks, meat and others. 有关食物的单词包括蔬菜、水果、饮料、肉类等。 2、My favourite food is apples. Do you know why? Let me tell you. 我最喜欢的食物是苹果。你知道是为什么吗?让我告诉你。 3、Not every day cream cakes instead of long fat man. 没有天天吃奶油蛋糕而不长胖的人。 4、An apple a day, keep the doctor away. 一天一个苹果,医生远离我。 5、I don"t want junk food anymore. I"d like to try some healthy foods. 我再也不想吃垃圾食品了。我想吃点健康的食物。 6、Healthy foods are more and more unpopular among pupils. 小学生越来越不喜欢健康食品。 7、Healthy foods don"t include most snacks as they are high in suger. 大多数零食都不是健康食品,因为它们含糖量太高。 8、It"s time for you to swap your chips for a healthier diet. 你不能再吃薯条了,应该吃点健康食品。 9、Eat to live,but not live to eat. 吃饭是为了生存,但生存不是为了吃饭。 10、Radish and ginger keep away from doctor. 冬吃萝卜夏吃姜,不劳医生开药方。 4. 能不能教我一些关于吃饭的英语短语 I am very, very hungry. I have not eaten for 3 days. I love rice. We have rice for dinner everyday. Can you recommand a good restuarant in this area? We usually eat out at weekdays, but we cook in during weekend. I have to have chips and cola when I watch TV. I love everything my Mom cooks. I hope my wife can cook as well as my Mom. 5. 关于英语食物的句子大全 英语食物的写法是:food 1、读音 food 英 [fuu02d0d] 美 [fud] 2、释义 n. 食物;养料 3、短语 food industry 食品工业,食品产业 food and drink 饮食;食品与饮料 food processing 食品加工,食品处理;进食,食品热杀菌 green food 绿色食品 health food 保健食品 fast food 速食,快餐 food production 食品生产;粮食生产;食品加工 chinese food 中餐;中国食物;中式食品 food security 粮食安全;食品安全;食物保障 4、句式 ①.What"s your favorite food? My favourite food is… ②.Do you like …? Yes, I do. No, I don"t. ③.Can I have some…?Sure ④.What would you like? I"d like … ⑤What would you like to eat/ drink? 5、例句 This food disagrees with her. 这种食物对她有害。 He heaped food on the plate. 他把食物堆放在盘子里。 We cannot exist without air, food and water. 我们没有空气、食物和水就不能生存。
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1朱熹的课程与教学思想? 2孔子论诗的“兴、观、群、怨”说? 课程论的发展历程 课程论及主要流派

课程与 教学论试题一、单项选择题1.把教学过程分为明了、联想、系统、方法四个阶段的教育家是( )A.杜威 B.洛克 C.凯洛夫 D.赫尔巴特 2.“泰勒原理”的实践基础是( )A.活动分析 B.解放兴趣 C.八年研究 D.泰主罗义3.提出“最近发展区”理论假设的是( ) A.赞科夫 B.巴班斯基C.维果茨基 D.列昂节夫4.确定学习者需要的过程本质上是( )A.教师提供选择的过程B.家长提供选择的过程C.学习者自由选择的过程D.学校提供选择的过程5.( )是指向于特定课程与教学目标、受特定课程内容所制约、为师生所共同遵循的教与学的操作规范和步骤。 A.教学过程 B.教学原则 C.教学方法 D.教学设计6.“精神助产术”的确立者是( )A.苏格拉底 B.亚里士多德 C.柏拉图 D.黑格尔7.( )提出,课程开发的任务之一,是要提供实施的“过程原则”。A.斯腾豪斯 B.泰勒 C.塔巴 D.奥利沃8.“副学习”概念的提出者是( )A.克伯屈 B.杰克逊 C.巴罗 D.杜威9.被誉为“现代课程理论的圣经”的著作是(《 》)A.课程 B.课程编制 C.课程与教学的基本原理 D.怎样编制课程10.施瓦布主张,课程开发的基本方法应是( ) A.工作分析 B.课程审议 C.活动分析 D.职业分析 11.五六十年代出现了所谓的“三大新教学论流派”,( )是其中之一。A.行为主义教学论 B.人本主义教学论 C.尝试教学论 D.发展性教学论12.杜威实现课程与教学一体化的具体途径是( )A.从做中学 B.反省思维 C.主动作业 D.问题教学13.被看作是课程开发的经典模式、传统模式的是( )A.情境模式 B.目标模式 C.批判模式 D.过程模式14.( )的本质含义在于鼓励教师对课程实践的反思批判和发挥创造作用。 A.目标原则 B.量力性原则 C.过程原则 D.思想性原则 15.“道尔顿制”的确立者是( ) A.巴班斯基 B.布卢姆 C.帕克赫斯特 D.瓦根舍因16.范例教学的三个基本特性是( )A.基本性、基础性、范例性 B.基本性、全面性、范例性 C.个体性、基础性、范例性 D.全员性、基本性、范例性17.“非指导性教学”的教育目的是使学生( )A.一般发展 B.自我实现 C.全面发展 D.情感发展 18.( )是具体体现在课程开发与教学设计中的教育价值。A.教育目的 B.教育目标 C.课程与教学目标 D.课时目标19.生成性目标取向追求的是( )A.普遍主义 B.唯科学主义 C.实践理性 D.解放理性20.( )是根据特定的教育价值观及相应的课程目标,从学科知识、当代社会生活经验或学习者的经验中选择课程要素的过程。 A.课程编制 B.课程开发 C.课程实施 D.课程选择21.“学校课程不断建构出新的社会生活经验”,这是( )的观点。 A.被动适应论 B.主动适应论 C.滞后论 D.超越论 22.课程组织的基本标准有连续性、顺序性和( ) A.整合性 B.逻辑性 C.个别性 D.超体性 23.浪漫自然主义经验课程的代表人物是( )A.杜威 B.卢梭 C.斯宾塞 D.夸美纽斯24.把课程分为理想的、正式的、理解的、运作的、经验的五个不同层次的是( ) A.古德莱德 B.查特斯 C.斯金纳 D.杜威 25.课程实施的忠实取向在本质上受( )支配。A.技术理性 B.实践理性 C.解放理性 D.理论理性 26.( )是在课程开发或课程实施还在发展或完善过程中时所采用的评价。 A.形成性评价 B.总结性评价 C.诊断性评价 D.内在评价27.把教育评价分为古典的考试型时期、心理测量占统治地位时期、后现代时期的教育家是( ) A.利维 B.泰勒 C.布卢姆 D.莱斯 28.下列各项中( )不属于建构主义教学模式。 A.随机访问教学 B.情境教学 C.支架式教学 D.问题教学 29.在“学科结构运动”中诞生的一种新的课程形态是( ) A.学术中心课程 B.社会问题中心课程 C.儿童活动中心课程 D.人格中心课程30.在非指导性教学中,教师是作为( )存在的。 A.先知者 B.管理者 C.促进者 D.指导者第二部分 非选择题二、简答题(每小题6分,共30分)1.“教育目标分类学”有哪些基本特征?2.目标取向、过程取向、主体取向三种评价取向各自的本质是什么?3.简述程序教学的含义与教学设计的原则。4.倡导综合课程的基本依据是什么?5.教学过程的本质表现在哪些方面?三、论述题(共25分,第1小题12分,第2小题13分)1.论述“共同解决问题型”教学方法的含义、价值与实施条件。2.世界课程改革有哪些发展趋势?据此应如何深化我国的课程改革?四、材料分析题(共15分) 夸美纽斯曾经写道:“教师是自然的仆人,不是自然的主人;他的使命是培植,不是改变,所以,假如他发现了某门学科与某个学生的天性不合,他决不应强迫他去学习;因为在某一方面缺少的东西多半会由另一方面去补足。……假如没有一个学生违背本人的意志,被迫去学习任何学科,我们就不会有发生厌恶和智力受到抑制的情形了。每个人都会顺着他的自然的倾向去发展。” 这段话表达了怎样的教学思想?应如何看待这种思想?如何在教育实践中运用这种思想? 课程与教学论试题参考答案 一、单项选择题(每小题1分,共30分) 1.D 2.C 3.C 4.C 5.C 6.A 7.A 8.A 9.C 10.B11.D 12.C 13.B 14.C 15.C 16.A 17.B 18.C 19.C 20.D21.D 22.A 23.B 24.A 25.A 26.A 27.A 28.D 29.A 30.C二、简答题(每小题6分,共30分)1.教育目标具有层级结构。教育目标要以学生具体的、外显的行为来描述。教育目标超越了学科内容。2.目标取向:受科技理性或工具理性所支配,核心是追求对被评价对象的有效控制和改进。过程取向:受实践理性所支配,强调评价者与被评价者的交互作用、强调评价者对评价情境的理解、强调过程本身的价值。主体取向:受解放理性所支配,倡导对评价情境的理解而不是控制,以人的自由与解放作为评价的根本目的。3.含义:将预先审定的教材精心组织成有逻辑的顺序,借助教学机器,使学生以个别化的方式进行学习的教学模式。原则:积极反应、小步子、即时强化、自定步调、低错误率4.文化或学科知识的发展不是相互隔离、彼此封闭的,而是相互作用、彼此关联的。学生的发展与当代社会生活息息相关。学生的心理发展具有整体性。5.教学过程是教师与学生以课堂为主渠道的交往过程。教学过程是教学认识过程与人类一般认识过程的统一。教学过程是教养和教育的统一。三、论述题(共25分,第1小题12分,第2小题13分)1.含义:是通过师生的民主对话与讨论而共同思考、探究和解决问题,由此获得知识技能、发展能力和人格的教学方法。价值:体现了教育的民主性追求。充分调动了教师与学生两类主体的主动性和创造性,有助于提高教学质量。有助于提高学生的学习积极性、问题解决和探究能力、创造性、交往能力等。实施条件:学生必须在具备了一定的基础知识的情况下,对所要讨论的问题有一定的洞察和理解的前提下才能对这种教学方法更有效地利用。2.趋势:国家课程开发与校本课程开发的统一;把信息技术知识和学习者的个人知识作为课程内容的有机构成;提倡多样化的课程结构;重视课程实施的研究,重视教师进修;提高课程改革的科学化水平,建立专家咨询机构。四、材料分析题(共15分) 略。
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翻盖折叠屏手机摩托罗拉RAZR首次曝光:包装盒设计惊艳

五侠春秋作乱,一时兴亡。牛编辑带你一轮又一轮地看最新消息。它 今天天气很好,而且。这是阅读最新信息和放松的好时机。没有悬念,让 让我们互相了解一下。今天,联想总经理金戈 s手机中国业务部,在微博中曝光了摩托罗拉RAZR量产版的真机和包装盒图片。经典的翻盖设计结合折叠屏非常科幻,包装造型更是酷炫。从曝光的图片来看,量产版摩托罗拉RAZR的设计没有大的变化,与之前发布的设计非常一致。最吸引人的是,这是包装盒的首次曝光。摩托罗拉RAZR是非常独特的包装盒。之前的折叠屏手机包装盒还是很规整的方形盒子设计,而摩托罗拉RAZR则标新立异,采用了独特的三棱柱包装盒。顶部的透明塑料衬有摩托罗拉标志,非常独特。摩托罗拉Razr的屏幕尺寸在折叠后为2.7英寸,分辨率为800,600,在展开后为6.2英寸,分辨率为2,142,876。手机下方有一个宽凸的下巴,支持指纹识别;配置方面,搭载高通骁龙710处理器,Android 9 Pie系统,6GB 128GB存储,电池容量2510mAh。根据官方的说法,其售价将为1499美元,约合人民币1.1万元。了解更多《翻盖式折叠屏手机摩托罗拉RAZR首曝:包装盒设计十分惊艳》,请关注深空游戏资讯栏目,深空编辑将为您持续更新更多科技资讯。王者之心2点击试玩
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好事多磨指的是爱情吗

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2023-08-16 00:46:562

单向透光镜子是什么原理?

单向透光镜子能产生单面反光的效果,是由镜子两面所处的环境光的强度不同造成的。单面镜的玻璃面上涂有很薄的银膜或铝膜,这层膜并非反射所有的入射光,而是能让一半的入射光通过,而另一半被反射回去。可以看到,房间1被反射回来的光比房间2透射过来的弱光要强得多,因此从1看向玻璃,看到的1中物体。而从2看向玻璃时,由于从1透射过来的光线要比2本身反射回来的光线强得多,则在2看到的是1中的物体。也就是说,从1看去,玻璃相当于一面平面镜,只能看到自己;从2看去,却可以看到1中的一切,但是不能把它当作镜子使用。如果将光照强度改变一下,1弱2强,则看到的效果刚好相反。扩展资料单向透光镜子应用1、广泛应用与监狱、派出所、审讯室、高级人民法院、公检法机构审讯室、精神病医院、大学科研究机构研究所、学校会议室、幼儿园、大型会议室、办公室、等。在一定灯光效果配合下,可达到外面看不到里面,里面可以清楚看到外面的单向透视效果,经过研究部门特殊处理之后,该产品还具有防爆隔音效果。2、为增强单向透视玻璃的单向透视整体反射率,建议在玻璃上方均匀安装三至四盏100W-150W射灯(白色、既:无色),45度角射向玻璃镜面中部,以加强玻璃镜面整体反射率,提升玻璃的单向透视效果。参考资料来源:百度百科-单向透视镜参考资料来源:百度百科-单向透视玻璃
2023-08-16 00:46:591

质粒提取的原理和步骤

看这个,我们都用这个方法
2023-08-16 00:46:593

英语专业选修双学位,选什么好?

英语专业当然是文科的啊。至于你想修双学位,那要看你的兴趣以及你自己以后打算干的职业。像我的同学和师姐,他们选的是金融,如果换做是我当初大一的时候,我会选人力资源,因为我的兴趣是干这行,现在也在干这行,可惜我当时没有修双学位的想法,唉。哦,忘了说,我、我同学、我师姐都是英语专业的,不过我是文学英语方向,他们是商务英语方向。其实你修双学位,又强调了你是文科的,其实是怕学高数微积分那些是吧?我只能说,既然你有那个决心,就要克服这些障碍的,除非你自己的兴趣是另一个文科专业,比如新闻、心理学什么的。
2023-08-16 00:47:001

猫头鹰,英语单词怎么写

猫头鹰The owl
2023-08-16 00:47:023

我非常饿怎么说英语?

I am very hungry
2023-08-16 00:47:047

质粒DNA的大量提取和纯化有哪些步骤

大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的,都是通过一定的方法(如加碱裂解)使在细菌内大量扩增的质粒释放出来,然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA,最终将DNA提取出来。区别:1.大提用于大量菌液的提取,100ml-500ml 均可,而小提用的菌液量很少,一般1.5-5ml。2.一般试剂盒中大提比小提多了溶菌酶、异丙醇(回收沉淀核酸)、含一定量PEG的氯化物(回收质粒DNA)及乙酸铵等,其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化,所以大提的产物比小提的量多很多,而且纯度很高。3.小提一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验,大提用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。
2023-08-16 00:47:081

方差分析中SST,SSA,SSE,SSB全称是什么

若只是比较不同地区玉米产量差异,可以用单因素方差分析;若同时想了解不同地区与不同处理下的产量差异可以用双因素方差分析。
2023-08-16 00:47:112

红外透视镜片是一种什么材料 什么原理

红外透视镜片 红外线滤镜是广大摄影爱好者非常喜欢的一种摄影器材,也是某些特殊行业工作中的利器,如公安部门用它来摄录肉眼难以看清的犯罪痕迹,科研部门用它来记录隔离实验过程,文物保护部门用它来鉴定文物等等。我们还可以利用红外摄影,在漆黑无光的环境下拍摄肉眼无法看见的景象;也可以利用红外滤镜拍摄辨认那些经过涂改、伪造或烧坏的文件。在风光摄影中,红外滤镜还能够滤除大气雾霭的影响,将远处的景物拍得意想不到的清晰。透视原理:由于红外光比可见光具有更长的波长,这使它比可见光更少地被某些材料和纺织面料反射。
2023-08-16 00:47:141

摩托罗拉razr2022参数

摩托罗拉razr2022是摩托罗拉旗下的一款折叠屏手机,这块手机炫酷的着地皮吸引力不少小伙伴,被称为业界黑马。接下来我们来看看这款手机的参数配置吧。 摩托罗拉razr2022介绍: 1、是一款非常炫酷的折叠屏手机。 2、拥有一块6.7英寸的主屏幕,和一块2.7英寸的副屏幕。 3、12GB的运行内存,大有喜也完全OK。 4、还配备了一块3500 mAhjong的大电池和30W的快充,续航能力也是杠杠的。 摩托罗拉razr2022参数配置表: 国内发布时间 2022年08月11日 手机类型 5G手机,4G手机,3G手机,智能手机,折叠屏手机 机身材质 金属中框,玻璃后壳 指纹识别 侧面指纹识别 面部识别 支持 硬件 CPU型号 高通 骁龙8+ Gen1 CPU频率 3.2GHz X2*1+2.75GHz A710*3+1.8GHz A510*4 CPU核心数 八核 RAM容量 12GB ROM存储类型 UFS 3.1 扬声器 立体声双扬声器,杜比全景声 屏幕 屏幕尺寸 主:6.7英寸 副:2.7英寸 屏幕类型 全面屏(中置挖孔屏),折叠屏,直面屏 分辨率 2400×1080像 素副:800×573像素 屏幕刷新率 144Hz 屏幕技术 盖板康宁大猩猩3D玻璃 摄像头 摄像头总数 2 像素 后置主摄镜头:5000万像素 后置超广角镜头:1300万像素 前置主摄:3200万像素 微距 2.8cmcm 防抖功能 后置主摄镜头:OIS光学防抖 后置超广角镜头:OIS光学防抖 前置主摄:OIS光学防抖 广角 121° 网络与连接 网络类型 5G,4G,3G WLAN功能 双频WiFi,WiFi6(IEEE 802.11 a/b/g/n/ac/ax) 蓝牙 蓝牙5.3,支持SBC/AAC/LHDC/APTX HD/LDAC NFC 支持NFC 机身接口 USB Type-C接口 功能与服务 三防功能 生活防水
2023-08-16 00:47:151

简答题1.教师进行教育教学研究的意义?教育学的

一、教师为什么要做课题研究?1、教师专业成长的需要。时代发展很快,教育改革的步伐也很快。在信息化的社会里,要立足就必须有不断学习的意识和能力;要有勇于实践、创新的能力;要适应素质教育对我们老师提出的新要求:教育、教学工作的模式由“经验型”转向“科研型”。实践表明:一线教师在教育教学上能积极参与教科研的实践,自觉学习理论,更新教育观念,以科研带教研,以教研促教改,对提高教师自身的素质大有裨益。许多名师成了搞教育科研的最大受益者(如桃花江小学就因此出了九位特级教师,益阳市一中更是由教科室主任带领12人团队参加这次培训),完全可以说:“教师参加教育科学研究,是提高自身素质的重要途径。”2、解决实际问题的需要。做课题研究主要是为了解决在教育、教学中发现的问题及遇到的困惑。这些问题包括自己教学实践的问题,有学生行为习惯、道德表现的问题,有学校教育的问题,还有学校管理模式的问题。但要注意,一线教师脱离教学实践做研究,做那些大而空的课题,徒劳无益。3、有助于养成严谨的工作作风。课题研究的严密性,也促使教师的教育、教学工作更加科学化、系统化。4、有助于形成科研教学意识。我们都知道,做课题时少不了要查阅大量的资料。当你阅读了大量的有关教育、教学的书籍后,就有利于形成自己的教学理念。教科研实践活动不但转变了教师的教育观念,重要的是使我们养成一种用新的教育理念去审视自己的日常工作的习惯;自觉地去改进自己的教育手段和教学方法,进行教学反思。综上所述,教育科研是当代教师工作的基本方式之一,是当代教师进行学习的方式之一。课题驱动、行动研究是教师自我发展、自我提高的基本方法,教师职业化要求我们必须研究教育,必须由“教书匠”向科研型教师转变。二、课题研究的一般途径(一)课题研究的过程与阶段划分课题研究一般是按照以下流程来实施的:选题——学习与查阅资料——课题申报与课题评审立项——开题论证——开展研究——中期评估检查——完成研究报告,申请结题——评奖推广(二)关于选题1、选题的基本原则:一是前瞻性原则,对象要新,视角要新;二是科学性原则;三是可行性原则,选题要与客观实践相符,可实现;四是价值性原则,要能够运用于教学实践,有指导教学实践的意义;五是明确性原则,选题能够准确反应各研究要素的内涵和外延。2、选题注意事项:一是从实际出发,在研究中实践,在实践中研究;二是不要贪大求全;三是注重平时积累,从小处着手,要有问题意识,做教育教学的有心人,在平时教学中发现问题,总结教学经验;四是适合自己的,就是最好的。3、选课题从哪些方面入手⑴从有关部门发布的课题指南中得到课题每个地方都有教育科学研究管理机构或教育科研规划领导小组(比如湖南的是“湖南教育科学规划网”,安化县教育局的“微型课题研究”),这些机构或部门在一定的时间范围里都会定期或不定期地发布一些教育科研课题指南。对这些《指南》中的课题也可以根据自己的实际,进一步具体化,提出符合自己实际情况的问题来。当然,这些问题是否有研究的价值,还得根据各自的实际情况进行分析论证。⑵从教学实际所急需解决的问题中提出课题在你的工作中哪些问题是急需解决的?是学校的教学常规管理问题,是学校课堂教学质量不尽人意,还是学生的学习效果不理想?像这样一些问题中往往就有你要找的课题。例如,有些班主任对班级的管理很有成效,特别是对一些“捣蛋”的学生的教育管理很有一套,于是有教师就提出:“运用非常规性方法进行班级进行管理的研究”的课题。⑶从平常的教学实践中发现课题对于一般的人来说,天天完成的教学工作和所看到的现象好像没有任何特别的感觉,对这些工作和现象似乎都已成为了一种习惯,甚至也不愿意多考虑它一下,因为它太平常、太普通了。然而,一个具有敏锐思维的人往往可以看出其中的问题,而这些问题大多正是值得我们研究的、有价值的课题。比如,有些教师通过大量的听课发现,教师在课堂上所讲的很多话学生并没有注意听,也没有认真地去听,而在老师看来这些话又是对学生的学习有影响的,于是就提出了“课堂教学中培养学生倾听能力的研究”的课题。⑷从其他领域的先进经验和方法中移植和借鉴而提出课题人们常说:它山之石,可以攻玉。不同学科、不同领域的先进经验、方法应用在不同学科和不同领域将会产生什么样的效果和作用呢?这恐怕也是一个很具有吸引力的问题。例如,能不能采用写作文的教学方法进行数学教学?英语教学中特别注重情境教学和对话,这是为了加深学生对语法和词汇的理解和应用,如果将它应用到语文教学中来又将会有一个什么样的结果呢?像这样的问题很多,只要你放开思路,大胆地设想,就不愁找不到你所关心的、有价值的问题,只要你能提出问题,课题也就会很容易得到了。(三)关于方案设计一个详尽的课题方案,是课题研究成功的保障。曾不止一次地听搞科研的专家说:课题方案制定好了,课题也就做好了一半。设计方案的基本框架:(1)课题名称 (2)问题的提出 (3)研究的依据和研究假设(4)研究的内容(5)研究的方法 (6)研究对象(7)研究步骤 (8)研究保障 (9)成果预测(10)课题组的组成及分工 (11)经费预算 (12)资料附录(四)课题研究的方法任何科学研究除了要应用哲学方法和一般科学方法之外,都还要有具体的研究方法、技术手段。这里介绍几种课题研究的方法。调查法 即通过问卷、访谈等方式,搜集研究对象的现实状况的有关材料,以此发现问题,探索规律的方法。基本步骤为:选择课题→确定调查对象→选择调查方法→制定调查方案→开展调查→分析调查资料→撰写调查报告。文献法 文献研究法就是对文献进行查阅、分析、整理,从而找出事物本质属性的一种研究方法。文献包括图书杂志、电子资源、档案文件、会议资料等。基本步骤为:确立课题→搜集文献→阅读文献、做好摘记→分析文献→得出结论、提炼观点。实验法 借鉴自然科学的实验方法,在教育实践中采取的“假设—求证”活动。基本步骤为:提出研究假设→选择实验对象→进行前测→开始实验→进行后测→对检测结果统计分析→撰写实验报告。案例法 以具体的事例、题例、课例为研究对象,在了解、认识、分析的基础上,寻找出一些更为积极的教育方法的过程。基本步骤为:确立案例(比如教学设计)→呈现案例发生的过程(比如教学实录)→分析和诊断案例(比如教学反思)→归纳结论、得出启示。行动研究法 行动研究是由社会情境(教育情境)的参与者,为提高对所从事的社会(教育)实践的理性认识,为加强对实践活动及其所依赖的背景的理解而进行的反思研究。步骤:计划→行动→观察→反思。行动研究可以理解为,从实际工作需要中寻找课题,在实际工作过程中进行研究,由实际工作者或与研究者共同参与,使研究成果为实际工作者理解、掌握和应用,达到解决实际问题,改变社会行为的目的。做到“没有无行动的研究,也没有无研究的行动”。叙事研究法 所谓叙事研究就是抓住人类经验的故事性特征进行研究,并用故事的形式呈现研究结果的一种研究方式。其基本步骤为:确定研究问题→选择研究对象→进行观察访谈(记述事件)→整理分析资料→撰写研究报告(教学反思)。叙事研究可以使教师看到平时司空见惯的事情的意义,通过对自己遇到了什么问题、怎样对待这个问题和怎样解决这个问题的叙述,达到反思自己的教育生活,并在反思中改进自己的教育实践,重建自己的教育生活的目的。必须注意,在教育科研中,仅用单一的方法进行研究难以得出科学研究结果,每一种方法都有其优点与局限性。采用单一的方法,往往只能获取部分信息,而遗漏许多其它有用信息,难以做出全面准确的结论。因此提倡使用综合的方法,或几种方法并用,或以一种方法为主,其它方法为辅进行研究。例如进行某项调查研究,主要采用问卷调查以得到大量数据,但也要辅之以访谈调查,以使结论更加可靠,材料更加丰富。(五)课题研究的成果呈现形式课题研究的成果分为报告类和行动实践类。报告类主要包括:1、结题报告:结题报告是一种专门用于科研课题结题验收的实用性报告类文体。它是研究者在课题研究结束后对科研课题研究过程和研究成果进行客观、全面、实事求是的描述,是课题研究所有材料中最主要的材料,也是科研课题结题验收的主要依据。2、哲理型论文:用深刻的哲理和严密的逻辑论证来说明问题,一般应用于理论性研究成果。要求论点明确,论据确凿,论述严密,清楚展示理论观点和体系的形成过程。也称学术论文。3、实验报告:在教育科研活动中,针对某个做法或某个教育问题,运用以实验为主的研究方法对其进行观测、分析、综合、判断,如实、系统、科学地将其过程和结果记录下来,写成文章,就是教育实验报告。4、经验总结:对教育经验活动及经验认识进行分析、加工、制作、整理,形成较为系统的、合乎逻辑的认识,使之上升到教育理论的高度,从而揭示教育实践的客观规律。5、调查报告:根据教育实践的需要和预期的目的,运用观察、测量、采集、询问等调研手段对有关教育问题进行研究后写出的书面报告。研究者可以进入现场考察,也可间接调查。6、教育评论:对教育教学思想、现象和个案进行评论的文章。行动实践类主要包括:1、研究日志:记录的是教师所观察到的、所感受到的、所解释的和反思的内容。2、教育叙事:教师在行动研究过程中用叙事的方法所做的某些简短的记录,也指教师在行动研究中采用叙事方法写作的成型的研究成果。3、教育案例:教师将发生的事例经过一定的思维加工,以案例的形式表现出来,是重新认识,整理自己思维的过程。4、教学课例:强调对上课事实进行详细的罗列以及加上简要的评析或反思。5、教学反思:对教学过程中一段教学经历的批判性思考,肯定其中可取的做法并分析原因,找出其中存在的问题并对其成因加以分析。6、音像作品:在研究过程中录制或摄制的音像材料。三、消除当前教育科研的一些不良现象1、前紧后松,无影无踪。一些课题立项后并没有开展实质性的研究,形成开题放“响炮”,研究放“空炮”,结题放“哑炮”的局面。2010年安化在市里立项的课题多达47项,最终只有3项参与结题,数据一公布,全场哗然,但这3项中有我们清塘课题组的《走进清塘校本教材的开发和利用》顺利结题并在网上公投评为市三等奖。2、人浮于事,两手空空。课题立项后,课题组成员没有落实分工。人浮于事,课题组名存实亡,只有一两个人做点事,其他人都是空挂名享受成果,到结题的时候手上几乎没有有价值的资料。3、注重形式,忽视过程。据了解,很多课题就是匆匆开题,迅速结题,没有过程,结题报告中的结论是事先都有了的。通常的做法是:做几节课,写几篇文章,到网上找几篇相关文章东拼西凑,据为己有,甚至把过去做的事情拿来炒炒冷饭,套上新的理念,贴个新标签,升华一下,就宣称解决了重大难题,意义深远,徒有其名,而无其实,这种课题往往难以结题,即使勉强结了题也没有多少价值。4、跟风而上,创新不足。课题研究要有创新,创新不是跟风,著作要读,专家的理论要学,研究的方法要学,但不能总停留在“复述”的层面上,要想办法使专家的理念、方法落地、生根、开花、结果,就必须使课题研究的内容贴近教师的教育教学实践过程中遇到的真实问题,范围不宜太宽太泛,目标不宜太高太玄。研究的方法最好是以解决具体问题为主的微观研究,研究过程应该与改进和提升教师自己的教学能力密切相关,策略、方法应该方便教师与自己的教学实践建立关联,使而后生成的东西可以成为校本研究的对象和过程,不能让教师望而却步。一旦“校本”的东西实实在在了,这个研究才有了存在的价值。5、闭门造车,缺乏引领。我们看到一线教师做课题一般是孤军奋战,没有形成研究团队。我认为,要使研究具有生命力,就要获得各个方面的支持。一个成功的课题研究,离不开专家的支持。课题最终是否成功,最现实的是你做的课题是否获奖,要得到专家的认可。因此,做课题还要去找教研员、科研专家等进行沟通,尽可能得到他们的指点,使研究的课题更具有严密性、科学性。“板凳要坐十年冷,文章不写一句空。”范文澜先生这幅对联告诉我们,做课题研究首先要有坐十年乃至二十年冷板凳的思想准备,以坚忍不拔的毅力去克服常人难以想像的困难,要树立坚定的信心和决心。这正是我们做课题研究应当具备的精神,让我们以此共勉!
2023-08-16 00:47:182

摩托罗拉razr折叠屏手机评测

摩托罗拉razr是一款大胆尝试的折叠屏手机,它采用了独特的翻盖设计,使得用户能够同时享受到传统手机和折叠屏手机的使用体验。在外观方面,摩托罗拉razr采用了经典的V型设计,有些像20世纪90年代的老式薄膜式手机,但是折叠后却成为了一款非常精致的手机。虽然并不像三星Galaxy Fold那样大,但摩托罗拉razr的折叠屏尺寸同样达到了6.2英寸。摩托罗拉razr的屏幕采用了pOLED技术,颜色饱和度和对比度很高,屏幕下部的折痕对于大多数用户来说并不太明显。屏幕和翻盖之间的接口非常紧密,折叠后的屏幕并不会受到太大的压力和磨损。在使用体验方面,摩托罗拉razr可以实现无缝转换,在折叠和展开过程中并不会出现任何明显的卡顿或停滞。它的顶部有2.7英寸的屏幕,用于查看通知、控制音乐播放等操作。摩托罗拉razr还配备了2800mAh的电池,支持15W的快速充电。摩托罗拉razr并不是一款高性能手机,它采用的是中低端的Snapdragon 710处理器和6GB的RAM,但是它完全可以满足日常使用的需求。不过,由于摩托罗拉razr的设计限制,它并没有摄像头凸起,在摄像头方面的表现并不是太出色。总的来说,摩托罗拉razr是一款充满设计感和个性的折叠屏手机,适合那些热爱尝试新技术和新品类的用户。它的价格相对较高,并不是最适合普通用户的选择。
2023-08-16 00:46:352

owl国外哪里直播

owl国外在ESPN1台、ESPN2台、ESPN3台直播。根据查询相关公开信息,ESPN和暴雪达成了多年的转播权协议,将会在ESPN1台、ESPN2台、ESPN3台直播OWLS1季后赛、OW世界杯和OWL第二赛季,同时迪士尼的XD频道也会进行直播,以及ABC家庭频道将会转播OWL的回顾节目。
2023-08-16 00:46:351

质粒DNA纯化的试验原理

质粒DNA纯化的试验原理:溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合,进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加,作为补偿,将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后,超螺旋度大为增加, 从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限,可继续结合更多溴化乙锭,直至达到饱和( 每2个碱基对大约结合1个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别,线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来,氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时,为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁,但其中最好的方法,也应是聚乙二醇分级沉淀法。从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多,其分离的依据可利用分子大小不同,碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好,既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA,由于DNA片段较大易于损伤断裂,因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA,且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒,用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。质粒DNA纯化的试验步骤:测量DNA溶液的体积,按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液(10mg/ml溶于水);立即将溴化乙锭溶液(漂浮在表层)与DNA-氯化铯溶液混匀, 溶液的终密度应为1.55g/ml(溶液的折射率为1.3860)溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内(如用锡箔完全包裹的瓶子),于室温保存。室温下用Sorvall SS34头(或与其相当的转头)以8000rpm离心5min, 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h(VTi65 转头)、 以45 000rpm离心48h(Ti50转头)、以60 000rpm离心24h(Ti65转头)或者以60 000rpm离心24h(Ti70.1转头)。普通光照下,在梯中心可见两条DNA区带, 上部区带材料通常较少,由线状的细菌(染色体)DNA和带切口的环状质粒DNA组成:下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物,位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl-溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在,将扩展为一条宽带,并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现,只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷,可收集整个DNA区高产水平时才会出现,只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷,可收集整个DNA区带,用CsCl溶液(ρ=1.58g/ml)将体积调到15ml,在两个离心管中再度离心,使DNA达到平衡。收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入,为尽量减少污染的机会,首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带(杂色体DNA):用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂,然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头(其斜面向上)插入管中,以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内,用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头(18号),将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。
2023-08-16 00:46:342

有没有透视镜

2023-08-16 00:46:347

你正在干什么英语

问题一:你正在干什么 用英语怎么说 What are you doing now? 问题二:你正在干什么用英语翻译 你正在干什么 What are you doing 问题三:当别人问你正在做什么时,你应该回答说什么?(英语) 5分 A正确 B应该说 I am playing basketball 问题四:“你在干什么”用英文怎么翻译,谢谢。 你在干什么是:what are you doing ? 还有其他一些常用语也给你吧。希望你猜那我的答案、谢谢。 1. Absolutely not. 绝对不是。 2. Are you ing with me? 你跟我一起去吗? 3. Are you sure? 你能肯定吗? 4. As soon as possible. 尽快。 5. Believe me. 相信我。 6. Buy it . 买下来! 7. Call me tomorrow. 明天打电话给我。 8. Can you speak slowly? 请您说得慢些好吗? 9. e with me. 跟我来。 10. Congratulations. 恭喜恭喜。 11. Do it right! 把它做对。 12. Do you mean it ? 你是当真的吗? 13. Do you see him often? 你经常见到他吗? 14. Do you see it? = Do you understand? 你明白了吗? 15. Do you want it? 你要吗? 16. Do you want something? 你想要些什么? 17. Don"t do it . 不要做。 18. Don"t exaggerate. 不要夸张。 19. Don"t tell me that. 不要告诉我。 20. Give me a hand . 帮我一下。 21. Go right ahead. 一直往前走。 22. Have a good trip. 祝旅途愉快。 23. Have a nice day. 祝你一天过得愉快。 24. Have you finished? 你做完了吗? 25. He doesn"t have time. 他没空。 26. He is on his way. 他现在已经在路上了。 27. How are you doing? 你好吗? 28. How long are you staying ? 你要呆多久? 29. I am crazy about her. 我对她着迷了。 30. I am wasting my time . 我在浪费时间。 31. I can do it . 我能做。 32. I can"t believe it . 我简直不能相信。 33. I can"t wait . 我不能再等了。 34. I don"t have time . 我没时间了。 35. I don"t know anybody. 我一个人都不认识。 36. I don"t like it . 我不喜欢。 37. I don"t think so . 我认为不是。 38. I feel much better. 我感觉好多了。 39. I found it . 我找到了。 40. I hope so . 我希望如此。 41. I knew it . 我早知道了。 42. I noticed that. 我注意到了。 43. I see. 我明白了。 44. I speak English well. 我英语说得很好。 45. I think so . 我认为是这样的。 46. I want to speak with him. 我想跟他说话。 47. I won. 我赢了。 48. I would like a cup of coffee, please. 请给我一杯咖啡。 49. I"m hungry. 我饿死了。 50. I......>> 问题五:你在干什么的英文 What are you doing 问题六:昨天你在干什么?用英文 What were you doing yesterday?请采纳 问题七:你在干什么用英语怎么说 1. What are you doing 2. What the hell are you doing 3. What are you about 4. what r u doing 问题八:你在干嘛?用英语怎么说 What are you doing 问题九:当暴风雨来的时候你正在干什么用英语怎么说(两种) What were you doing when the storm came? What were you doing while the storm was ing? 问题十:你正在干什么,我正在跑步英语 睡懒觉
2023-08-16 00:46:331

2015年在职研究生全国联考教育硕士部分考试真题

2015年在职研究生全国联考教育硕士部分考试真题。教育学在职研究生培养目标:教育学在职研究生培养具有良好思想道德品质、较高教育理论素养和较强教育实际工作能力的中、高等师范院校师资、中小学校教育科研人员、教育科学研究单位研究人员、各级教育行政管理人员和其他教育工作者。教育管理在职研究生主干学科:教育学、心理学。主要课程:普通心理学、教育心理学、中国教育史、外国教育史、教育通论、教学论、德育原理。教育社会学、教育统计测量评价、教育研究方法、教育管理学、教育经济学、教育哲学、课程理论。中小学语文或数学教学法。一、名词解释1、教育2、综合课程3、道德认识二、简答题1、简述教育对经济的促进作用2、简述一堂好课的主要特征3、简述良好师生的主要特征三、论述题结合实际论述教育如何提升人类地位教育学在职研究生就业方向1、掌握教育学科的基本理论和基本知识;2、掌握教育科学研究的基本方法:3、具有从事教育专业教学和其它一两门中小学学科教学工作的能力;4、熟悉我国的教育方针、政策和法规;5、了解教育科学的理论前沿、教育改革的实际状况和发展趋势;6、掌握文献检索、资料查询的基本方法,具有一定的科学研究和实际工作能力。考研政策不清晰?同等学力在职申硕有困惑?院校专业不好选?点击底部官网,有专业老师为你答疑解惑,211/985名校研究生硕士/博士开放网申报名中:https://www.87dh.com/yjs2/
2023-08-16 00:46:291

MotoRazr折叠手机是什么处理器?

摩托罗拉Razr2019搭载高通骁龙710处理器,配备6GB内存+128GB存储,后置1600万像素,电池容量为2510mAh,运行原生Android系统。2019Razr的设计与V3非常相似,都是翻盖设计。虽然外观相似,但内部已经有翻天覆地的变化。2019Razr采用了双屏+折叠屏设计,其中主屏为21:9的OLED屏幕,分辨率为2142×876,由于折叠特性,所以表面为塑料材质。外屏为2.7英寸的OLED屏幕,分辨率为800×600,表面为玻璃材质。这块屏幕被称为快速查看屏。2019Razr有两个摄像头,主摄1600万像素,副摄500万。
2023-08-16 00:46:281

owl和oh读音区别?

后者会带h的音
2023-08-16 00:46:272

电气施工图中SSB65N-63/1P/C16表示什么意思?

SSB65N-63/1P/C16是微型断路器型号,属于上海三开电气产品;SSB65--开关型号N --分段级别(6KA)63 --壳架电流等级1P --开关极数C16 --开关额定电流具体的请参考:http://www.shsk.cn/products_info.aspx?ProductsID=100&ProductsCateID=14&cateid=14&Cate_Id=14
2023-08-16 00:46:271

什么是转染?为什么要质粒转染?

转染(transfection):指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。转染目的:研究你的目的片段到细胞内的表达。转染一般是将目的基因构建到某个载体,将构建好的重组质粒导入细胞中,这样就能表达你所要的目的蛋白用于后续实验。
2023-08-16 00:46:261

能不能通过自考加学位英语考试获得双学位

我报的自考是没门科目达到一定的分数线,就可以参加学士英语 ,如果英文过了就可以拿到学士学位证,按照你那样的情况 ,英语过了 一般都可以拿到学位证的(虽然专业不同,原理相同哈)
2023-08-16 00:46:233

2013小学教育学考点命题:8.1小学德育概述

第八章 德育   从历年考试来看,本章需要注意理解和应用的知识点有:德育的概念,德育的构成要素,小学德育过程的概念及其要素,小学德育过程的规律,德育的原则、途径和方法等。此外,德育过程的规律、德育的基本原则等知识点有出简答题、论述题的可能,考生在复习时需重点掌握。 第一节 小学德育概述   一、什么是德育   (一)德育的概念   “德育”是近代以来才出现的名词。就西方而言,在18世纪70一80年代,德国哲学家康德就把遵从道德法则培养自由人的教育称为道德教育,简称德育。到19世纪中叶,斯宾塞发表《教育论》,把教育明确划分为“智育”、“德育”、“体育”,从此,“德育”逐渐成为教育世界里一个基本概念和常用术语。   就我国来看,虽然古代学校教育的主要构成就是德育,但并无“德育”之名。“德育”一词于20世纪初传人我国。有学者认为,1902年《钦定学堂章程》最早使用“德育”一词①。1912年,蔡元培撰文阐述新教育思想,提出“军国民教育”、“实利主义教育”、“公民道德教育”、“世界观教育”、“美感教育”并举。在其影响之下,当年国民政府颁布了“注重道德教育,以实利主义教育、军国民教育辅之,要以美感教育完成其道德”的教育宗旨,标志着“德育”一词已成为我国教育界通用的术语①。今天,尽管“德育”这个词耳熟能详,但不同的教育观对德育有不同的理解。一般说来,德育是教育者依据特定社会或阶级的要求和德育规律,对受教育者实施有目的、有计划、系统的影响,并通过受教育者积极的认识体验、身体力行,以培养他们特定的政治思想意识和道德品质的活动。简言之,德育是教育者有目的地培养受教育者的品德的活动。   德育的实质是育德,德育的“德”是指品德。因此德育即品德教育。德育是思想教育、政治教育和道德教育的总称。德育就是教育者根据一定社会或阶级的要求将社会思想政治准则和道德规范转化为受教育者思想、政治、道德品质的活动。它相对于体育、智育而言,是思想教育、政治教育和道德教育的总称,而不是道德教育的简称或政治教育的代名词。   具体说来,德育有广义与狭义之分。广义的德育泛指所有有目的、有计划地对社会成员在政治、思想与道德等方面施加影响的活动,包括社会德育、社区德育、学校德育和家庭德育等方面。狭义的德育则专指学校德育,即教育者在特定的时、空内对青少年学生在政治、思想与道德等方面所施加的有目的、有计划、有系统的影响。本章主要讲的是狭义的德育,亦即学校德育。   德育是各个社会共有的社会、教育现象,具有社会性,与人类社会共始终。德育随社会发展变化而发展变化,具有历史性,在阶级和民族存在的社会具有阶级性和民族性,在德育历史发展过程中,其原理、原则和内容、方法等存在一定的共同性,因此,德育具有历史继承性。   (二)学校德育   学校德育是各个社会共有的教育、经济、文化活动,具有鲜明的社会性。学校德育的历史悠久并与人类社会共始终。同时,学校德育还具有历史性,会随着社会的发展变化而发展变化,并在阶级和民族存在的社会中具有强烈的阶级性。   需要特别指出的是:在学校德育的   历史发展过程中,不同的历史时期,不同的民族、社会、乃至国家,在学校德育的目标、原理、原则、内容和方法等方面均存有一定的稳定性、连续性与相互之间一定程度的共同性。学校德育同时还具有承接历史的继承性与超越地域的全球性特征。   (三)小学德育   小学德育是学校德育的组成部分之一,它是针对儿童的思想品德所进行的教育活动。具体说来,小学德育应是教育者根据一定社会或阶级的要求,并根据儿童的生理与心理发展特点对儿童在政治、思想与道德等方面进行有目的、有计划、有系统的教育与训练,以使其形成初步的政治理想、思想观点与良好道德行为习惯的教育活动。   相对于学校德育的其他组成部分(如中学德育、大学德育),小学德育具有鲜明的特点,这些特点具体表现为:①小学德育的基础性。基本道德是对个体生活提出的基础性的道德要求,小学德育的主要任务就是对儿童进行最基础的道德启蒙教育,以形成小学生初步的政治理想、思想观点和良好的道德行为习惯,因此,小学德育具有基础性。②小学德育的奠基性。就民族国家与社会来讲,德育是提高全民族思想道德素质的基础,是培养造就中华人民共和国合格公民的起点。就个人来讲,小学德育对儿童未来人生的走向起着决定作用。因此,小学德育具有显著的奠基性。   (四)小学德育的构成   我国小学德育主要由以下三部分构成:   1.道德教育   道德教育是指培养学生逐渐形成符合社会大多数人的利益和社会公德所需要的道德意识和道德行为的教育。例如,对学生进行团结友爱、乐于助人、克己自律、文明礼貌等方面的教育。道德教育要以政治教育、思想教育为导向,而政治教育、思想教育又要以道德教育为基础。在小学阶段,政治和思想教育应渗透在道德教育中,重点是培养学生形成良好的道德意识和行为。引导小学生逐步理解与领会社会主义的道德理想与道德行为规范,初步理解人与人之间应具备的道德关系,养成良好的道德行为习惯。   2.政治教育   政治教育是对学生进行政治方向、政治立场、政治态度的教育。例如,培养学生热爱中国共产党、热爱社会主义祖国的情感,拥护中国共产党领导的立场和态度,拥护党和国家的基本路线、方针和政策,树立为社会主义现代化而奋斗的志向等。引导学生逐步理解与领会坚持社会主义道路,坚持共产党的领导的正确性与必要性,逐步形成爱憎分明的政治态度和立场。   3.思想教育   思想教育是指培养学生具有正确的思想观点的教育。例如,对学生进行科学的世界观的教育,正确的人生观的教育,培养学生的阶级观点、劳动观点、群众观点、集体观点。同时,对学生还应加强法治意识、民主意识、竞争意识、主体意识、责任意识、合作意识等方面的教育。引导学生逐步理解与领会世界、社会与人生的丰富性与复杂性,教导学生学会思考,并在教育者的引导之下,逐步形成正确的人生观和科学的世界观。在上述三者之中,它们相互联系、相互促进又相互区别,无论是道德教育、政治教育还是思想教育,它们都有其自身的特点与规律,不可等同,更不可以其中之一而代替其他。政治、思想教育是目标,是方向,它完成的是儿童发展的定向性任务,而道德教育则是基础,是关键,它完成的是教人做“人”的思想与行为上的准备。离开了道德上的准备,政治与思想均将失于空洞,甚至虚伪,进而发展出道德上的双面人格。   此外,根据社会条件与环境的变化以及小学生的具体情况,教育者常常结合德育对学生进行一定的心理健康教育、法制教育与自我管理素质等方面的教育,但要将其作为学校德育的固定的、系统的研究对象与实施内容还将有待于理论界的深入研究与探讨。
2023-08-16 00:46:211

摩托罗拉razr5G什么时候开售?

9月10日晚,摩托罗拉razr5G正式在国内发布,推出8GB+256GB版本,售价12499元。摩托罗拉razr5G将于9月10日21:00开启预约,并将于9月15日10:00正式开售。razr5G手机内屏采用了一块6.2英寸的OLED屏幕,搭配一块2.7英寸全功能OLED外屏。双屏双视界的设计,同时手机内屏采用的是21:9影院级超宽屏幕,支持DCI-P3广色域,无论是看大片、玩游戏、读小说,都能让人拥有一种沉浸式的感官体验。全功能的外屏上,会显示时间、日期、天气、来电与微信通知等常用的信息。用户可直接在外屏上接打电话、查看和回复微信、添加联系人等。用户还能添加常用APP至外屏,添加后可直接在外屏上进行操作,无需每次都打开内屏,交互更高效。razr5G搭载高通骁龙765G芯片,辅以8GB运存和256GB机身存储。该机内置2800毫安时容量电池,支持15W快充。同时,razr5G支持9个5G频段和24个4G全球频段,保证国内国外上网体验。
2023-08-16 00:46:201

轮胎的OWL是什么意思

凸白字。 就是外观能看到白色字体,不是全黑的
2023-08-16 00:46:192

感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理

perfect
2023-08-16 00:46:172

通信原理ssb调制。。

观察课本讲调制部分的频谱搬移图,你会发现,双边带调制后,下边带实际上是由信号频谱中负频率部分平移过去的。语音信号最低频率是300,但它与负频率之间间隔是600,调制后上下边带间隔就是600了。 讲信号的带宽时,不考虑负频率,负频率没有实际意义,仅是数学推导的结果。但讲调制、频谱搬移时,负频率部分右移后就成了下边带,需要考虑。
2023-08-16 00:46:171

双学位选第二专业选英语,能学到东西吗,要跟着考专四专八啊?

英语这个东西不是很适合作为第二专业,因为想多学一门外语其实并不需要第二专业这个东西,专四专八虽然不是完全没有技术含量,但可以替代它的证书实在太多太多。
2023-08-16 00:46:142

Moto Razr 奢华金 版曝光:有 it’毫无疑问 数码家电将在中国上市

要说这几年最流行的手机形态,折叠屏绝对是第一名。此前,联想 s Moto正式推出首款折叠屏手机Moto Razr。但与众不同的是,Moto Razr采用了类似于a 翻盖手机 。折叠后,机身不仅长度减少,屏幕也几乎没有折痕。这种新机器首先在美国发布。发布之初,只有黑色版本。最近又爆料大神曝光了两张Moto Razr金色版的照片。看来Moto Razr至少有了一个全新的针对中国市场的配色。此前,联想集团执行副总裁、中国区总裁刘军表示,Moto Razr将于今年第二季度末在中国市场发布。不仅如此,刘军还透露,国行版Moto Razr可能会有一些调整,比如增加对5G的支持。新款Moto Razr的外屏尺寸为2.7英寸,扩展后的屏幕尺寸为6.2英寸,与目前的智能手机非常相似。配置方面,Moto Razr搭载高通骁龙710处理器,6GB 128GB存储,2510mAh电池。至于国行版本的价格,肯定会过万。王者之心2点击试玩
2023-08-16 00:46:131

owl有几个技术转移中心,各有所长

3个。owl有3个技术转移中心,各有所长。OWL是W3C开发的一种在DAML+OIL的基础上进行改进的语义描述语言。OWL具备能扩展下一代互联网的标记工具的能力,提供诸如更精确的网页搜索代理和知识管理等先进的服务。OWL主要是帮助计算机来处理信息和理解信息,因此,它提供了更多具有形式语义的词汇,使用OWL语言的计算机的可理解性要远强于XML,RDF和RDFS等。
2023-08-16 00:46:101

小学教师资格考试教育心理学历年模拟题

2017年小学教师资格考试教育心理学历年模拟题   一、单项选择题(在每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的,请将其代码填写在括号内。错选、多选或未选均无分。本大题共20小题,每小题2分,共40分)   1.首创全身松弛训练法的心理学家是( )。   A.斯金纳   B.巴甫洛夫   C.艾里斯   D.雅格布松   2.激发、维持和指引个体学习活动的心理动因或内部动力称为( )。   A.学习需要   B.学习期待   C.学习动机   D.学习态度   3.教一学过程的三种过程是( )。   A.学习过程、教学过程和评价/反思过程   B.学习过程、教学过程和互动过程   C.学习过程、教学过程和思考过程   D.学习过程、教学过程和管理过程   4.人们对自己能否成功地从事某_成就行为的主观判断称为( )。   A.自我期待感   B.自我归因感   C.自我预期感   D.自我效能感   5.对物体的知觉倾向于以外部参照作为信息加工的依据的认知方式属于( )。   A.冲动型   B.沉思型   C.场独立型   D.场依存型   6.创造性思维的三个主要特点是( )。   A.独创性、流畅性、新颖性   B.独创性、流畅性、变通性   C.流畅性、变通性、新颖性   D.流畅性、灵活性、变通性   7.下列属于影响迁移的个人因素有( )。   A.认知结构和态度   B.年龄和学习材料   C.智力和学习环境   D.学习目标和态度   8.在智力技能形成的过程中,依据智力活动的实践模式,以展开的、外显的方式付诸实施的阶段是( )。   A.操作方向   B.原型操作   C.原型内化   D.原型定向   9.教师在板书时,要求尽量用白色粉笔,所依据的感知规律是( )。   A.强度律   B.活动律   C.组合律   D.差异律   10.美国心理学家布鲁纳认为学习的实质在于( )。   A.构造一种完形   B.形成刺激与反应间的联结   C.主动地构建认知方式   D.对环境条件的认知   11.关于程序性知识,下列说法正确的有( )。   A.激活速度较慢   B.通过观察行为测量   C.不发出行为指令   D.提取需有意识搜寻   12.下列不属于元认知策略的一项是( )。   A.计划策略   B.学习策略   C.监控策略   D.调节策略   13.心理辅导的目标有两个,一是学会调试,二是( )。   A.行为矫正   B.学会适应   C.寻求发展   D.克服障碍   14.通过求诊者的观察和模仿来矫正其适应不良行为与神经症反应的方法是( )。   A.行为塑造法   B.自我控制法   C.强化法   D.示范法   15.基于某种特定的标准来评价学生对与教学密切联系的具体知识和技能的掌握程度的评价方式称为( )。   A.常模参照评价   B.正式评价   C.标准参照评价   D.非正式评价   16.课堂气氛也会使许多学生追求某种行为方式,从而导致学生问发生( )。   A.连锁性感染   B.互相监督   C.互相帮助   D.遵守纪律   17.以下不属于教师教学能力的是( )。   A.教学认知能力   B.教学操作能力   C.自我反省能力   D.教学监控能力   18.提问者要求列举砖头的各种用途。可能的答案是:作建筑材料;当打人的武器;代替直尺画线;可以垫高等。这种寻求答案的思维方式是( )。   A.聚合思维   B.直觉思维   C.抽象思维   D.发散思维   19.美国心理学家桑代克针对形式训练说,提出了迁移的( )。   A.关系转换说   B.学习定势说   C.相同要素说   D.概括化理论   20.形象联想的学习策略属于( )。   A.精细加工策略   B.组织策略   C.复述策略   D.问题解决策略   二、填空题(请在每小题的空格中填上正确的答案。错填、不填均无分。本大题共20个空。每空1分,共20分)   21.动机产生的外在条件是_____。   22.根据学习动机的动力来源,可以把学习动机分为_____和_____。   23.依据反映活动的形式,知识可以分为_____和_____。   24.从迁移的角度看,合理编排教学内容的标准就是使教材达到_____、_____和_____。25.知识学习过程一般包括_____、_____和_____三个阶段。   26.动机性遗忘理论最早由_____提出。   27.心理辅导中人际关系的主要特点是_____、_____、真诚与同感。   28.现有的心理评估手段的两种基础参考架构分别是_____和_____ 。   29.行为演练的基本方法包括_____、_____和_____。   30.以与客观威胁不相适应的焦虑反应为特征的神经症称为_____。   三、简答题(本大题共5小题,每小题6分,共30分)   31.简述阿特金森的成就动机理论。   32.运用头脑风暴训练法训练学生的思维所应遵循的原则有哪些?   33.如何分析学生的性格特征?   34.学生道德情感的培养途径和方法主要有哪些?   35.举例说明影响问题解决的因素。   四、论述题(10分)   36.联系实际说明学习教育心理学的意义。   参考答案及解析:   一、单项选择题   1.D【解析】心理学家雅格布松首创全身松弛训练法。   2.C【解析】学习动机是指激发、维持和指引个体学习活动的心理动因或者说是内部动力。   3.A【解析】教一学过程的三个过程是学习过程、教学过程、评价/反思过程。   4.D【解析】自我效能感是指人们对自己能否成功地从事某一成就行为的主观判断。   5.D【解析】场依存型的认知方式是指对物体的知觉倾向于以外部参照作为信息加工的依据。   6.B【解析】创造性思维的三个主要特点是独创性、流畅性和变通性。   7.A【解析】影响迁移的个人因素为认知结构和态度。   8.B【解析】智力技能形成的过程中,依据智力活动的实践模式,以展开的、外显的方式付诸实施的阶段是原型操作。   9.D【解析】教师在板书时,要求尽量用白色粉笔,所依据的感知规律是差异律。   10.C【解析】美国心理学家布鲁纳认为学习的实质在于主动地构建认知方式。   11.B【解析】程序性知识需要是指可操作性的指示,它贮存了一系列的以“如果u2026u2026则u2026u2026”形成编码的规则。只有通过一定观察行为测量,才能够产生程序性知识。   12.B【解析】元认知策略包括计划策略、监控策略和调节策略。   13.C【解析】心理辅导的目标有两个:一是学会调试,二是寻求发展。   14.D【解析】示范法是指通过求诊者的观察和模仿来矫正其适应不良行为与神经症反应的方法。   15.C【解析】标准参照评价是基于某种特定的标准来评价学生对与教学密切联系的具体知识和技能的掌握程度的评价方式。   16.A【解析】课堂氛围也会使许多学生追求某种行为方式,从而可能会导致学生间发生连锁性感染。   17.C【解析】教师的教学能力包括教学认知能力、教学监控能力和教学操作能力。   18.D【解析】发散思维又叫求异思维、辐射思维、开放思维等,是一种不依常规、寻求变异、从多方面探索答案的思维方式。   19.C【解析】美国心理学家桑代克针对形式训练说,提出了迁移的相同要素说。   20.A【解析】形象联想的学习策略属于精细加工策略。   二、填空题   21.诱因   22.内部学习动机,外部学习动机   23.陈述性知识,程序性知识   24.结构化,一体化,网络化   25.知识理解,知识保持,知识应用   26.弗洛伊德   27.积极关注,尊重   28.健康模式,疾病模式   29.全身松弛训练,系统脱敏法,肯定性训练   30.焦虑症   三、简答题   31.【答案要点】(1)阿特金森是成就动机理论的主要代表人物。(2)他把个体的成就动机分成两类:一类是力求成功的动机,另一类是避免失败的动机。力求成功者的目的是获取成就,所以他们会选择既存在成功可能性又有足够挑战性的中等难度的任务;当他们面对完全不可能成功或稳操胜券的任务时,动机水平反而会下降。相反,避免失败者则倾向于选择非常容易或非常困难的任务,因为选择容易的任务可以保证成功,使自己免遭失败;而选择极其困难的任务,即使失败,也可以找到适当的借口,得到自己和他人的原谅,从而减少失败感。(3)在教育实践中,对力求成功者,应通过给予新颖且有一定难度的任务、安排竞争的情境、严格评定分数等方式来激起其学习动机;而对于避免失败者,则要安排少竞争或竞争性不强的情境,如果取得成功则要及时表扬给予强化,评定分数时要求稍稍放宽些,并尽量避免在公众场合下指责其错误。   32.【答案要点】头脑风暴训练法就是通过集体讨论,使思维相互撞击,迸发火花,达到集思广益的效果。应用头脑风暴训练法时,要遵循以下四条基本原则:   (1)让参与者畅所欲言,对所提出的方案暂不作评价或判断。   (2)鼓励标新立异、与众不同的观点。   (3)以获得方案的数量而非质量为目的,即鼓励提出多种想法,多多益善。   (4)鼓励提出改进意见或补充意见。   33.【答案要点】性格是指个体在生活过程中形成的对现实的稳固的态度以及与之相适应的习惯化的行为方式。性格具有直接的社会意义,是人格的核心。性格是有差异的,主要表现在特征差异和类型差异两方面。   (1)性格的特征差异。主要表现在以下四个方面:①对现实态度的性格特征;②性格的理智特征;③性格的情绪特征;④性格的意志特征。   (2)性格的类型差异。性格类型是指在一类人身上所共有的性格特征的独特结合。依据不同的划分标准,性格有不同类型。常见的分类学说有向性说和独立顺从说。依据个人心理活动的倾向性,可以把人的性格分为外倾型与内倾型两类;依据一个人独立或顺从的程度,可把人的性格分为独立型和顺从型。   34.【答案要点】学生道德情感的培养途径和方法有:   (1)丰富学生有关的道德观念,并使这种道德观念与各种情绪体验结合起来。   (2)利用具体生动的形象引起学生道德情感的共鸣。   (3)在具体情感的基础上阐明道德概念、道德理论,使学生的道德体验不断概括、不断深化。   (4)在道德情感的培养中,教师要注意培养学生善于调控自己情绪的能力,要注意在培养品德时出现的情绪障碍,并设法加以消除。   35.【答案要点】影响问题解决的主要因素包括:   (1)问题的特征。个体解决有关问题时,常常受到问题的`类型、呈现的方式等因素的影响。   (2)已有的知识经验。已有经验的质与量都影响着问题解决。与问题解决有关的经验越多,解决该问题的可能性也就越大。   (3)定势与功能固着。定势影响问题解决。功能固着也可以看作是一种定势,即从物体的正常功能的角度来考虑问题的定势。当在某种情形下需要利用物体的某一潜在功能来解决问题时,功能固着可能起到阻碍的作用。   (4)原型启发与联想。原型启发是指从其他事物中看出了解决问题的途径和方法。原型是指对解决问题起启发作用的事物。   (5)情感与动机状态。一般说来,积极的情绪有利于问题的解决,而消极的情绪会干扰问题的解决。动机是促使人解决问题的动力。没有解决问题的动机,不可能有解决问题的行为,问题当然不可能解决。   (6)个性因素。个性因素对解决问题也有重要影响。实验表明:一个人是否善于解决问题,与他的灵活性、首创性和自信心等个性心理品质相联系。此外,个体的智力水平、认知风格和世界观等也影响着问题解决的方向和效果。   四、论述题   36.【答案要点】学习教育心理学的意义可以分为理论意义和实践意义。   理论意义包括:   (1)教育心理学所揭示的心理学规律充实了普通心理学的一般理论。   (2)教育心理学的研究对教育学(特别是教学论、课程论和德育论)的理论发展起重要作用。   (3)教育心理学对人类学习过程的了解还将为人工智能的发展提供有益的理论指导。   教育心理学对教育实践具有描述、解释、预测和控制的作用,其实践意义包括:   (1)帮助教师准确地了解问题,为教师了解学生学习困难的成因提供多种方法。学生学习困难的原因是多方面的,通过教育心理学的学习,可以为教师全面了解学生的情况提供依据。   (2)有助于教师准确地了解学生,因材施教,有的放矢。学生原有水平是达到教学目标的出发点和教学依据,教育心理学可以提供教师了解学生已有知识、经验和水平的方法,从而有针对性地采取措施,有的放矢,因材施教。   (3)有助于教师对教育现象形成新的科学认识。   (4)为实际教学提供科学的理论指导。教育心理学为实际教学提供了一般性的原则或技术。教师可结合实际教学将这些原则转变为具体的教学程序或活动。   (5)帮助教师预测并干预学生。利用教育心理学原理,教师不仅可以正确分析、了解学生,而且还可以采取相应的干预措施,达到预期的效果。   (6)帮助教师结合实际教学进行研究。教育心理学不仅为实际教育活动提供一般性的理论指导,还可以帮助教师进行教学研究。 ;
2023-08-16 00:46:081

质粒的提取原理

质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外,质粒DNA上携带了部分的基因信息,经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中,质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。 从宿主细胞中提取质粒DNA,是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤:培养细菌使质粒扩增,收集和裂解细菌,分离和纯化质粒DNA。 在质粒提取过程中,由于机械力、酸碱度、试剂等的原因,可能使质粒DNA链发生断裂。所以,多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒:共价闭合环状DNA(cccDNA): 质粒的两条链没有断裂;超螺旋开环DNA(ocDNA): 质粒的一条链断裂;松弛的环状分子线形DNA(lDNA): 质粒的两条链均断裂;线性分子质粒DNA的分子构型 。 质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为:松弛线性的DNA; 松弛开环的OC构型; 超螺旋的SC构型。由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭,因此,在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色。 道中的SC DNA走在最前沿,OC DNA则位于凝胶的最后边;道中的L DNA 是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的,它在凝胶中的位置介于OC DNA 和 SC DNA 之间。 二、质粒提取方法 质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯仿裂解法。跟据不同的实验目的和仪器设备择取不同的实验方案。 (一) 碱裂解法: 此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下: 1. 接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。 2. 37℃振荡培养过夜。 3. 取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。 4. 加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。 5. 加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),轻轻翻转混匀,置于冰浴5 min 。 6. 加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc,pH4.8),轻轻翻转混匀,置于冰浴5 min 。 7. 以10,000rpm离心20min,取上清液于另一新Ep管 8. 加入等体积的异戊醇,混匀后于0℃静置10min。 9. 再以10,000rpm离心20min,弃上清。 10. 用70%乙醇0.5ml洗涤一次,抽干所有液体。 11. 待沉淀干燥后,溶于0.05mlTE缓冲液中 (二) 煮沸法: 1. 将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000g离心30秒。 2. 弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。 3. 将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中,涡旋混匀。 4. 加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。 5. 将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。 6. 用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。 7. 用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。 8. 取20ml进行电泳检查。 (三) 酚氯仿裂解法: 1. 从琼脂平板上挑取转化菌阳性克隆,接种到标准LB培养液中(含有卡那霉素30 μg/mL)摇菌12 h;收集1.5 mL菌液,8000 g/min离心3 min,弃上清,沉淀加入200 μL TE,充分混匀;加入400 μL酚氯仿(1∶1体积)混合液,剧烈振动10 s,混匀;12 000 g/min离心5 min,1 mL胰岛素注射针收集上清,尽量避免吸入蛋白沉淀层;上清经国产0。22 μm针式滤器过滤1次;向过滤上清液内加入2倍体积无水乙醇,振荡10 s,12 000 g/min离心5 min;沉淀溶于20 μL的RTE溶液中,37℃水浴。 2. 按PstI内切酶说明书进行酶切反应(37℃,1 h)。 酶切产物10 μL,10 g/L琼脂糖凝胶电泳。 3. PCR引物根据参考文献〔1〕设计,预计扩增产物片断大小为714 bp。 4. 常规制备感受态菌E。coli DH5a,提取质粒DNA常规转化感受态,涂于含有卡那霉素(30 μ/mL)LB培养平板中,37℃培养,15 h后观察筛选克隆情况。 三、质粒提取常见问题 (一) 溶液I—溶菌液: 溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。 EDTA:1. 螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);2. EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。 (二) 溶液II-NaOH-SDS液: NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。 SDS:SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:1. 溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。2. 解聚细胞中的核蛋白。3. SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。 (三) 溶液III--3mol/L NaAc(pH4.8)溶液: NaAc的水溶液呈碱性,为了调节pH至4.8,必须加入大量的冰醋酸。所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液,调回pH至中性,使变性的质粒DNA能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合,后者是因为钠盐与SDS-蛋白复合物作用后,能形成较小的钠盐形式复合物,使沉淀更完全。 (四) 为什么用无水乙醇沉淀DNA? 用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。 (五) 在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1~0.25mol/L? 在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。 (六) 加核糖核酸酶降解核糖核酸后,为什么再要用SDS与KAc来处理? 加进去的RNase本身是一种蛋白质,为了纯化DNA,又必须去除之,加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀,再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物,使沉淀更加完全。也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到较好效果。 (七) 为什么在保存或抽提DNA过程中,一般采用TE缓冲液? 在基因操作实验中,选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH),可作DNA的保存液,但在转化实验时,磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀;在DNA反应时,不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同,有的要求高离子浓度,有的则要求低盐浓度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统,由于缓冲液是TrisH+/Tris,不存在金属离子的干扰作用,故在提取或保存DNA时,大都采用Tris-HCl系统,而TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性。 (八) 如何选择聚乙二醇(6000)的浓度来沉淀DNA? 采用PEG(6000)沉淀DNA,大小不同的DNA分子所用的PEG的浓度也不同,PEG的浓度低,选择性沉淀DNA分子量大,大分子所需PEG的浓度只需1%左右,小分子所需PEG浓度高达20%。本实验选择性沉淀4.3kb的pBR322质粒DNA,每毫升加入0.4毫升的30% PEG,其最终PEG浓度为12%。PEG选择性沉淀DNA的分辨率大约100bp。 (九) 抽提DNA去除蛋白质时,怎样使用酚与氯仿较好? 酞与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性。经过离心,变性蛋白质的密度比水的密度为大,因而与水相分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大,保留在最下层。 作为表面变性的酚与氯仿,在去除蛋白质的作用中,各有利弊,酚的变性作用大,但酚与水相有一定程度的互溶,大约10%~15%的水溶解在酚相中,因而损失了这部分水相中的DNA,而氯仿的变性作用不如酚效果好,但氯仿与水不相混溶,不会带走DNA。所以在抽提过程中,混合使用酚与氯仿效果最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚,由于酚与氯仿是互溶的,可用氯仿第二次变性蛋白质,此时一起将酚带走。也可以在第二次抽提时,将酚与氯仿混合(1:1)使用。 (十) 为什么用酚与氯仿抽提DNA时,还要加少量的异戊酵? 在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊酵为24:1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25:24:1(不必先配制,可在临用前把一份酚加一份24:1的氯仿与异戊醇即成),同时异戊醇有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。 (十一) 为什么要用pH8的Tris水溶液饱和酚?呈粉红色的酚可否使用?如何保存酚不被空气氧化? 因为酚与水有一定的互溶,苯酚用水饱和的目的是使其抽提DNA过程中,不致吸收样品中含有DNA的水分,减少DNA的损失。用Tris调节至pH为8是因为DNA在此条件下比较稳定。在中性或碱性条件下(pH5~7),RNA比DNA更容易游离到水相,所以可获得RNA含量较少的DNA样品。 保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色的,这样的酚容易降解DNA,一般不可以便用。为了防止酚的氧化,可加入疏基乙醇和8-羟基喹琳至终浓度为0.1%。8-羟基喹琳是带有淡黄色的固体粉末,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性,它是金属离子的弱螯合剂。用Tris pH8.0水溶液饱和后的酚,最好分装在棕色小试剂瓶里,上面盖一层Tris水溶液或TE缓冲液,隔绝空气,以装满盖紧盖子为宜,如有可能,可充氮气,防止与空气接触而被氧化。平时保存在4℃或-20℃冰箱中,使用时,打开盖子吸取后迅速加盖,这样可使酚不变质,可用数月。 (十二) 未提出质粒或质粒得率较低? 1. 大肠杆菌老化 请涂布平板培养后,重新挑选新菌落进行液体培养。 2. 质粒拷贝数低 由于低使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低,可更换具有相同功能的高拷 贝数载体。 3. 菌体中无质粒 有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在,经多次转接后有可能造成质粒丢失。 例如,柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定,因此不要频繁转接,每次接种时 应接种单菌落。另外,检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。 4. 碱裂解不充分 使用过多菌体培养液,会导致菌体裂解不充分,可减少菌体用量或增加溶液P1、 P2和P3的用量。对低拷贝数质粒,提取时,可加倍使用溶液P1、P2和P3,可能 有助于增加质粒提取量和质粒质量。 5. 溶液使用不当 溶液P2、P3在温度较低时可能出现浑浊,应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的 溶液,才能使用。 6. 吸附柱过载 不同产品中吸附柱吸附能力不同,如果需要提取的质粒量很大,请分多次提取。若 用富集培养基,例如TB 或2×YT,菌液体积必须减少;若质粒或宿主菌是非常高 的拷贝数或生长率,则需调整LB培养液体积。 7. 质粒未全部溶解(尤其质粒较大时) 洗脱溶解质粒时,可适当加温或延长溶解时间。 8. 乙醇残留 漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体,树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂,再加 入洗脱缓冲液。 9. 洗脱液加入位置不正确 洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱 效率。 10. 洗脱液不合适 DNA只在低盐溶液中才能被洗脱,如洗脱缓冲液EB (10 mM Tris?Cl, pH 8.5) 或水。洗脱效率取决于pH值。最大洗脱效率在pH7.0-8.5间。当用水洗脱时确保 其pH值在此范围内,如果pH过低可能导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱 缓冲液加热至60℃后使用有利于提高洗脱效率。 11. 洗脱体积太小 洗脱体积对回收率有一定影响。随着洗脱体积的增大回收率增高,但产品浓度降 低。为了得到较高的回收率可以增大洗脱体积。 12. 洗脱时间过短 洗脱时间对回收率也会有一定影响。洗脱时放置一分钟可达到较好的效果。 (十三) 质粒纯度不高? 1. 混有蛋白 不要使用过多菌体。溶液P1、P2、P3处理并离心后溶液应为澄清的,如果还混有 微小蛋白悬浮物,可再次离心去除后再进行下一步骤。 2. 混有RNA RNase A处理不彻底,请减少菌体用量或加入溶液P3之后室温放置一段时间。如 果溶液P1已保存6个月以上,请在溶液P1中添加RNase A。 3. 混有基因组DNA 加入溶液P2和P3后应温和混匀,如果剧烈振荡,可能把基因组DNA剪切成碎片从 而混杂在质粒中。如果加入溶液P2后过于粘稠,无法温和混匀,请减少菌体用 量。细菌培养时间过长会导致细胞和DNA的降解,不要超过16 小时。 4. P3溶液加入时间过长 P3溶液加入后,放置时间不要太长,否则有可能会产生小片段DNA污染。 5. 含大量核酸酶的宿主菌 宿主菌含大量核酸酶,在质粒提取过程中降解质粒DNA,影响提取质粒DNA的完 整性,最好选用不含核酸酶的大肠杆菌宿主菌,如DH5α和Top10。 6. 裂解时间过长 加入溶液P2后裂解时间不应超过5分钟。 7. 质粒的二聚体和多聚体形式 质粒复制过程中形成的,与宿主菌相关,电泳可检测出。
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一看个标题就知道系来看女人啦。。。
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