蓝白斑筛选过程中，T载体:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物，连接条件4度过夜过更长，643bp的没出现假阳性

是重组子筛选的一种方法，一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点，可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时。α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。扩展资料：蓝白斑筛选原理一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

利用乳糖操纵子系统。野生型埃希氏大肠菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后，突变型大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断，无法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能对无色化合物X-gal进行切割，菌落呈白色。一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

载体pGEMZ在β-半乳糖苷酶（lacZ）的α-肽编码区内具有多克隆区域。在重组质粒中插入片段使α-肽失活，可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。不带有插入片段的载体，表达有功能的β-半乳糖苷酶，所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因，导致内源α-肽失活。载体pGEMZ或其它含lacZ基因的α-肽互补细菌，具有β-半乳糖苷酶的ω片段，所得功能β-半乳糖苷酶（α-肽加ω片段）将底物X-Gal转化为有颜色的产物，得到蓝色菌落。在载体pGEMZ的多克隆区域，克隆上插入片段导致α-肽编码区的破坏，使β-半乳糖苷酶失活，得到白色菌落。α-肽编码区读码框内小的插入片段产生浅兰色菌落，因β-半乳糖苷酶只是部分失活。重组质粒转化到合适的菌株中（JM109， DH5α），然后涂布到含0.5mMIPTG, 40ug/mlX-Gal指示平板上。可将50ul的X-Gal和100 ulIPTG贮液直接加入到平板中，扩散到整个平板中，在37oC保温30分钟使液体扩散。IPTG溶于水中，贮液浓度为100mM，X- Gal溶于DMF，贮液浓度为50mg/ml。IPTG和X- Gal需分装后保存在-20 oC，可保存2-4个月　　重组质粒转化宿主细胞后，还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其α肽链的DNA序列，此结构称为lac Z′基因。Lac Z′基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段（146个氨基酸）。宿主和质粒编码的片段各自都不具有酶活性，但它们可以通过片段互补的机制形成具有功能活性的β半乳糖苷酶分子。Lac Z′基因编码的α肽链与失去了正常氨基端的β半乳糖苷酶突变体互补，这种现象称为α互补。由α互补而形成的有功能活性的β半乳糖苷酶，可以用X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）显色出来，它能将无色的化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝。因此，任何携带着lac Z′基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后，便会产生出有功能活性的β半乳糖苷酶，在IPTG（异丙基硫代β-D-半乳糖苷）诱导后，在含有X-gal的培养基平板上形成蓝色菌落。而当有外源DNA片段插入到位于lac Z′中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。

在这之前先说一下做蓝白斑筛选必备条件（1）首先定义 LacZ：B(beta,打不出来，下同)-半乳糖苷酶 LacZ"：含有B-半乳糖苷酶的启动子和5‘端的编码的a肽链。 那么LacZ"是没有功能的（是指能表达没有功能的蛋白质），只有和失去正常氨基端（5"端）的B-半乳糖苷酶重新互补形成完整的B-半乳糖苷酶后才具有功能，它能将底物Xgal（5-溴-4-氯-3吲哚-B-半乳糖苷）水解，形成一种蓝色化合物，菌落呈蓝色；其靠近5‘端有多克隆位点，当插入外源目的基因后将会影响该基因的功能，导致无法形成完整功能的B-半乳糖苷酶而不能水解IPTG底物，菌落呈白色。 通俗易懂的说法就是LacZ"是左半边，失去正常氨基端（5"端）的B-半乳糖苷酶是右半边，组合在一块形成有功能的酶。（2）明白以上这点，我们再往下说。 1.一般来说，做蓝白斑，质粒载体上有LacZ" 2.Lac I，是LacZ"的抑制基因，表达的阻遏蛋白和LacZ"上的操作子区结合将会阻遏LacZ"基因的表达，当有诱导物，IPTG（异丙基-B-D-硫代半乳糖苷）与阻遏蛋白结合后，将使阻遏蛋白脱离操作子，从而使LacZ"正常表达。 3.抗药基因，如Amp，用于筛除未将载体转入了的宿主细胞，这是前提，否则鉴定是没有意义的 4.而宿主应该具备的条件是具有失去正常氨基端（5"端）的B-半乳糖苷酶的一种突变体，即前文说的右半边（3）步骤如下： 1.将目的基因插入LacZ"靠近5‘端有多克隆位点，是否成功插入有待蓝白斑筛选鉴定。 2.通过一定的方法，如CaCl2诱导法将目的基因转入宿主菌（失去正常氨基端（5"端）的B-半乳糖苷酶的一种突变体） 3.将宿主菌至于含有IPTG，Xgal，以及抗生素Amp固体培养基中培养 4.形成白色菌斑，说明目的基因插入了多克隆位点，导致LacZ"的基因功能受到影响，与失去正常氨基端（5"端）的B-半乳糖苷酶组合后不能水解Xgal，菌落呈白色。形成蓝色菌斑，说明目的基因没有成功插入多克隆位点，LacZ"功能正常，与失去正常氨基端（5"端）的B-半乳糖苷酶组合后能水解Xgal，生成蓝色化合物，菌斑呈蓝色。 5.这里不存在由于质粒未能成功转入宿主而导致的Xgal不水解形成白色菌落的可能，因为未能成功导入质粒的宿主菌将会因为缺乏Amp抗性而被杀死。

在重组质粒表达的实验中，蓝白班筛选是要检测重组质粒是否表达，而氨苄的加入主要是为了防止培养过程中染菌。对于半乳糖苷酶活性筛选，首先重组质粒所选的质粒与野生型（感受态）不同，上面有多克隆位点，蛋白标签，和多对操纵子、启动子，其中就包括乳糖操纵子。当培养液中加入IPTG，IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白从DNA上脱离，激活半乳糖苷酶的表达。因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能。这个是蓝白斑筛选的主要原理。结果中白斑表示重组质粒表达的菌体，蓝斑表示未表达。至于氨苄筛选，通常不会利用氨苄抗性进行筛选，因为感受态中是否有氨苄抗性基因很不确定，无法得到准确的结果

二者相同。细菌的篮白斑筛选又称α互补法，是根据组织化学的原理来筛选重组体的方法。α互补可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。

gbghbgf

载体上的是β-半乳糖苷酶基因（lacZ），他能使细菌表达β-半乳糖苷酶，该酶可以将X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖）降解，产生显色底物，然后我们就能看到蓝色斑。

IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性，当pUC系列的载体DNA（或其他带有lacZ 基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。此外，它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。乳糖不是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质，半乳糖才是。

选择正确的斑点：在开始蓝白斑筛选之前，第一步就是选择正确的斑点，这些斑点会最大化图案细节，使其更加清晰。1、选择正确的斑点：在开始蓝白斑筛选之前，第一步就是选择正确的斑点，这些斑点会最大化图案细节，使其更加清晰。2、调整斑点大小：在确定斑点位置后，接下来就要调整斑点的大小，以使图案更加清楚可见。3、调整斑点强度：根据需要，可以调整斑点的强度，以突出图案中的重要信息。4、选择颜色模式：最后，在图像完成编辑后，选择适合图像的颜色模式，以更好的表现出图像的效果。

把一个病毒基因组DNA克隆到pUC18载体中，将转化子在含有X-gal的氨苄青霉素培养皿上涂板。检测质粒中插入片段的大小时，为什么蓝色菌落质粒中含有约60bp非常小的插入片段，而白色克隆的质粒没有任何插入片段？

（1）目的基因A的获取，方法有：①化学合成法：用于已知序列，或可推导出序列的基因②从基因组DNA中获取③从cDNA文库中获取④聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因（2）选择合适的克隆载体（3）将外源基因与载体的连接（4）重组DNA导入受体菌（5）对重组体的筛选 重组DNA导入受体菌后，经过培养使其大量繁殖，再设法将含有目的基因的菌落区分鉴定出来，这一过程即为筛选（screening）或选择（selection）。（6）克隆基因的表达（7）表达蛋白的筛选：蓝白斑筛选法等。

可以通过筛选标记，如通过表达载体里面的抗性或蓝白斑来筛选转基因植物可以通过表型或表达产物来鉴定，还可以通过提取基因进行RT-PCR鉴定，通过western blotting 免疫杂交，组织免疫或显色等来鉴定

我们一般做克隆载体的构建是不用蓝白斑筛选的，很麻烦，而且结果不一定正确，其实只要目的片段连入了克隆载体，就可以得到最终的结果，我们做蓝白斑也不做对照的，结果一样可以得到

白色和蓝色。蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。白色菌落为DNA重组子，蓝色菌落为空载体。

1.蓝白斑筛选中，白斑是插入外源片段的2.菌落pcr假阳性的产生有很多原因：a引物设计特异性不好b挑取菌落的时候非单克隆c可能沾到未分解的外源片段（菌液pcr要比菌落pcr靠谱一些）

加入卡那抗生素，是因为菌带有卡那抗性，防止杂菌生长；IPTG是诱导剂，一般还应该加入X-gal，通常用作蓝白斑筛选。

大体分为一下几步：1.设计目的片段引物（含限制性酶切位点，要求：表达载体上有而目的片段上没有的酶切位点）2.PCR扩增片段3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接，通过蓝白斑筛选，提质粒并酶切鉴定；将正确连接的克隆载体重组质粒酶切，回收目的片段4.目的片段与表达载体连接5.转化到DH5a等克隆菌株，通过抗生素筛选，鉴定表达重组质粒。6.测序检测7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株8.表达

PCR单链构象多态性分析变性梯度凝胶电泳双链构象多态分析法变性- 高压液相色谱分析特异性等位基因扩增化学裂解错配碱基法

百度百科曰：lacz"中包括：一段β-半乳糖苷酶的启动子；编码α肽链的区段；一个多克隆位点(MCS)。为什么不能没lacz：1.MCS位于编码α肽链的区段中，是外源DNA的选择性插入位点。2. 缺陷株基因组无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶。不过当菌体中含有带lacz"的质粒后，质粒lacz"基因编码的α肽链和菌株基因组表达的N端缺陷的β-半乳糖苷酶突变体互补，具有与完整β-半乳糖苷酶相同的作用X-gal生成蓝色物质的能力，这种现象即α-互补。即，篮斑出现在含空质粒的菌里。重组质粒把lacz破坏了，就没有把xgal切成蓝色物质的能力了。

1.先了解工程基本建设情况：都有什么工作内容，大概的工作进度什么的。 2.从进入现场的第一天起就要记一个自己的施工日记，我说的具体点就是每天都发生

如果你的意思是如何对插入片段/基因筛选的话，可以考虑使用有LacZ/蓝白斑筛选性质的载体。如果没有合适的载体可以用菌落PCR的方法，设计PCR引物在载体插入位点2边各约100bp以内（常用引物的多克隆位点两侧一般有通用引物区域），在转化之后的培养基上挑取单克隆少量菌体为模版进行PCR，如果包含长入片段则PCR产物大小为引物距插入位点的距离加上插入片段的大小，否则则只有小于200bp的载体自连扩增片断

搜一下：培养基中添加的氨苄青霉素，x-gal和iptg分别起什么作用

先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化，容易连接片段（也就是效率较高），因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确（商业化的缘故），因此测序也方便一些。更重要的是，T载体往往设计了蓝白斑筛选的功能，插入片段的载体会呈现白色，这样也容易区分验证，不用每个单菌落都拿去做colony PCR或提质粒酶切验证。当然也不是绝对的，我们实验室就经常直接把片段酶切后连接表达载体，不经过T载体这一步，其实影响并不大。如果你的情况比较特殊（比如片段较大，或是对应的表达载体拷贝数较低等），可以考虑连接T载体，不然的话不是非常必要。

1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F"[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验 基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1

最常见的就是蓝白斑筛选，详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm方法很多，除蓝白斑筛选外，像菌落PCR验证：详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm从细菌里提取质粒后双酶切验证：用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切，电泳，观察条带是否和重组之前，目的基因电泳时条带所处的位置一致。测序验证：送测序公司

在进行蓝白斑筛选的时候，出现了两个奇怪现象：一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点，看起来不像是细菌。不知道是什么原因，我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的，应该没有杂菌的。

白色菌落是所要的，蓝色是没有插入外源片段的细菌

将载体转入大肠杆菌，在含有Amp的培养基上培养，蓝白斑筛选阳性克隆，再提取质粒DNA，PCR检测就可以了。

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入

蓝白斑筛选利用的是乳糖操纵子系统。野生大肠杆菌具有完整的乳糖操纵子系统，能把 x-gal变成蓝色。实验室用做转化用的大肠杆菌缺乏乳糖操纵子系统中的lac-Z基因。这个基因被普遍设计在了各种各样的载体上，并且在lac-Z基因编码区中间涉及了多克隆位点，以供外源基因插入。而外源基因的插入又会导致Lac-Z基因被破坏。因此，没有受到质粒转入的感受态菌会被抗生素杀死，得到了空质粒的大肠杆菌不会被杀死，而且能够将 x-gal变成蓝色。只有得到了具有插入片段的质粒的大肠杆菌不会被抗生素杀死，且不能分解X-gal，于是长出白斑。

利用乳糖操纵子系统。野生型埃希氏大肠菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后，突变型大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断，无法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能对无色化合物X-gal进行切割，菌落呈白色。一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。野生型大肠杆菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后，突变型大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断，无法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能对无色化合物X-gal进行切割，菌落呈白色。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，主要为α-互补与抗生素基因。蓝白斑筛选在指示培养基上，未转化质粒的菌落因无抗生素抗性而不能生长，重组质粒的菌落是白色的，非重组质粒的菌落是蓝色的，以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法。一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子 。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

楼上的复制粘贴就算了吧 你说说你自己写出来的东西你自己说的明白吗？真是给组织增加困难

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，如a-互补 、抗生素基因等。蓝白斑筛选是在指示培养基上，重组质粒的菌落是白色的，非重组质粒的菌落是蓝色的，以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法 。

、 蓝白色斑点筛选是重组体筛选的一种方法，是根据载体的遗传特性来筛选重组体，主要包括基因互补和抗生素基因。2、 白点被屏蔽在指示介质上。未转化质粒的菌落不能生长，因为它没有抗生素抗性。重组质粒菌落为白色，非重组质粒菌落为蓝色。直接筛选重组克隆的方法是基于不同的颜色。关于简述蓝白斑筛选的原理是什么，简述蓝白斑筛选的原理的介绍到此结束，希望对大家有所帮助。

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ls正解

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

这个是蓝白斑筛选试验。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组质粒的筛选方法。野生型大肠杆菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛选的最直观有效的方法。

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的dna的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（mcs），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacz基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的lacz+细菌在诱导剂iptg的作用下，在生色底物x-gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源dna插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

这个是蓝白斑筛选试验。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

楼上说的是假阴性吧

提高筛选的成功率首先要注意无菌操作，不要人工引入额外的杂菌，有条件的话全程应该在超净台中进行。然后就是按照目标菌种的特性，引入一些营养缺陷，或者抗生素，进行涂板挑选。一般的菌株都会有某种抗性基因，以供加入对应的抗生素进行筛选。另外一种比较简单易用，效果十分可靠的筛选方法是蓝白斑筛选：蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。------------------------------------------至于首先进行摇瓶培养，如果你的目标菌种含量不是实在太少，少到随机取来涂板的100微升中一个都没有，长不出菌落的话，没有这个必要。因为摇瓶的时候不同的细菌会产生竞争，而科研涉及到的一些特化菌株或者转化过的工程菌株生存能力不如野生细菌，往往会反而被淘汰......如果目的菌株实在太少，少到没法铺板那自然只好先用过量充足的培养基摇一下，这是没有办法的情况

你挑的白斑，检测阳性，你凭什么说它是假阳性。提醒你注意一下，白斑是有插入片段的，蓝斑是空载体。

野生型埃希氏大肠菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后，突变型大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断，无法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能对无色化合物X-gal进行切割，菌落呈白色。一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

最常见的就是蓝白斑筛选,详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm 方法很多,除蓝白斑筛选外,像 菌落PCR验证：详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm 从细菌里提取质粒后双酶切验证：用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切,电泳,观察条带是否和重组之前,目的基因电泳时条带所处的位置一致. 测序验证：送测序公司

在进行蓝白斑筛选的时候，出现了两个奇怪现象：一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点，看起来不像是细菌。不知道是什么原因，我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的，应该没有杂菌的。