怎么选择elisa试剂盒？

elispot的意思：网络酶联免疫斑点; 酶联免疫斑点法; 酶联免疫斑点试验; 酶联免疫斑点技术; 酶联免疫斑点实验;。随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用，使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ELISA）检测体液中游离的细胞因子（CK）或抗体，但由于游离的循环抗体或CK的半衰期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，而不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。

ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。 它结合了细胞 培养 技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测 细胞因子 的分泌情况。 其技术原理，一句话概括就是：用 抗体 捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。 该技术检测细胞因子具有三大优点：其一，灵敏度高。 在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。 这是目前为止，最为灵敏的检测技术，灵敏度比传统的的ELISA方法高2-3个数量级。 其二，单细胞水平，活细胞功能检测。 ELISPOT检测的是单个细胞分泌，而非细胞群体的平均分泌。

寒冬病毒活跃　启动五大防护力生活忙又累！　补充微量元素打造「镁」好生活预防治疗肾脏病　华人与西方人大不同代谢症候群、减重病患　正确补充营养健康瘦 益生菌品牌琳琅满目，菌种也五花八门，常见的有”A菌(L. acidophilus)、B菌(Bifidobacteriumbifidum)、C菌(Lactobacillus casei)、LGG菌(Lactobacillus rhamnosus GG)、LP菌(Lactobacillus paracasei)…等”，又有品牌强调”肠道定殖、专利包膜、不需冷藏…等”，但问题是这些资讯还是离你的知识认知很远，本篇文章，就是要告诉你益生菌该怎么挑，才能找到最适合你的菌种！ 「不必吃益生菌吧？饮食均衡就能得到该有的益菌」一派专家如此肯定。但由于现代人生活繁忙，平日饮食多以外食居多，且所占比例也逐年增高，因此也有另一派反驳「现今许多疾病多是文明病，多起因于偏食、乱吃，正常饮食对多数人来说是知易行难，适时补充是必要的。」两派说法其实都言之有理，。 如果您是益生菌的忠诚使用者，又如果您不吃益生菌，究竟吃与不吃的原则是什么？如何才能聪明吃，更健康？好的益生菌，除了改善体质，也能减缓原有的疾病，但面对琳琅满目的益生菌，该如何选择与食用？ 人体就像一座坚固的堡垒，当受到病菌侵袭时，体内的免疫大军就会启动。当异物入侵或组织受伤时，最先起始的免疫反应是先天免疫反应，先天免疫反应会诱导后天免疫反应的产生，扮演人体重要的保护角色。环境中处处充满病菌，但身体并不会一直处于感染或生病状态，就是靠免疫系统时时守护健康。然而，免疫系统之间的平衡，对身体也有一体两面的影响。如果免疫反应不平衡，往往也会产生严重的发炎反应与组织伤害，产生疾病。 人体免疫力如此复杂，那些因素会影响免疫力的高低？免疫系统有好几道防线，皮肤、黏液是第一道关卡，当细菌通过时，身体就会启动先天免疫力，例如发炎反应，提醒我们有细菌入侵。近年的研究显示：肠道菌丛逐渐被视为人类维持健康重要的共生伙伴。人体透过肠道黏膜免疫系统来感知肠道菌丛的变化，维持肠道恒定与诱发系统性的保护应。因此人为改变肠道菌丛已经成为维持健康、预防或治疗疾病相当具有潜力的方法。益生菌成为最佳的工具。 生物指标为个人筛选最佳的益生菌种 不过近年来由于基因解码，个体差异性受到重视，个人化医疗也逐渐兴起，现代医学逐渐走向个人化医疗，任何疾病治此益生菌疗都没有通用原则，因也没有服用建议的大原则，因为每个人的身体状况、遗传基因和生活饮食习惯都不相同，摄取益生菌的种类与方式当然不一样。虽然免疫力对人体健康如此重要，但面对现今访间林林总总的保健食品只一味诉求增强免疫力，如果益生菌是体内免疫系统平衡的关键，每个人因为基因、生理状况的不同，会导致个体对于益生菌产生不同的免疫反应。因此保健食品也不是全都对个人有利，不能乱吃乱补，一定要针对每个人的体质与生理状况，量身订做最适合的保健品，才能真正对健康有帮助。由于现今各种生物指标逐渐被采用为个人化医疗的指标，适当的生物指标也能为个人筛选益生菌，为了达到效果最佳化，利用生物指标为个人筛选最佳的益生菌种，才能有效平衡免疫系统。 不同菌种具有不同功效 现今台湾社会大众的饮食型态，上班族因为繁忙于工作所以外食居多，且其占比逐年升高。依据2013年全国职场健康促进暨菸害防制现况调查资料显示，职场员工午餐外食情形最多，每周午餐外食5天以上者占61.4%，另早餐及晚餐外食5天以上者分别占55.5%及26.6%。外食的小吃餐厅尽管方便美味，但烹调方式多以高油、高盐、高糖，低膳食纤维，且过于精致化为多，饮食的不均衡，长期饮食下来对于民众的肠胃道健康有极大的负面影响。导致益生菌类的产品已经成为家家户户必备的保健食品，许多消费者借此来调整肠道健康以减少便秘腹泻等症状，益生菌不只对肠道有益，对于免疫、抗发炎、过敏、高血脂血糖等也有一定的帮助。 营养师表示，人体肠道内寄居了上兆的细菌，肠道便成了益菌及坏菌的杀戮战场，两者相互竞争抢夺地盘，而补充益生菌的目的便是增加益菌的士兵数量，维持肠道细菌丛的恒定，降低坏菌产生的毒素，致癌物等对人体有害物质，这也是益生菌为何可以预防大肠直肠癌这个已蝉联9年国人好发癌症之冠。然而，市面上的益生菌琳琅满目百百种，如何挑选适合的益生菌成为消费者最大的需求。 1.菌种 市面上常见的益生菌包括「Lactobacillus」(乳酸杆菌属)与「Bifidobacterium」(双歧杆菌属)两大类。其常见的菌种为A菌(L. acidophilus)、B菌(Bifidobacteriumbifidum)、C菌(Lactobacillus casei)、LGG菌(Lactobacillus rhamnosus GG)、LP菌(Lactobacillus paracasei)均为有效活菌，较不像肠球菌(Enterococcus)容易被胃酸破坏。 A菌(L. acidophilus)：主要定居在小肠，是小肠内数量最多的细菌，在 *** 壁、子宫颈和尿道都有它的踪迹。能降低胆固醇、免疫调节及降低念珠菌属 *** 炎的感染等。 B菌(Bifidobacteriumbifidum)：比菲德氏菌，简称B菌。帮助保持肠道酸性的环境，减少有害菌的繁殖；还能增强免疫力，降低胆固醇，改善便秘及调节肠道生理机能。 C菌(Lactobacillus casei)：相当耐酸，能有效地通过胃酸胆碱的考验，而有规模的进入肠道定殖。 LGG菌(Lactobacillus rhamnosus GG)：正式名称为鼠李糖乳杆菌GG株。是当前世界上研究最多的益生菌，也是首批被证实能够在人体肠道存活并定殖的益生菌之一。可在血清中增加足够的细胞间白素-10，降低引起局部性敏感免疫反应的细胞激素形成。能促进益菌生长、降低对乳品或食物的过敏、治疗不明原因或急性腹泻功能等。 LP菌(Lactobacillus paracasei)：耐胃酸及胆盐，在肠道中定殖效果良好。能促进体内Th1细胞激素分泌，抑制Th2细胞所造成的敏感免疫反应，达到免疫系统平衡。对于过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、过敏性气喘及异位性皮肤炎等过敏症状有良好的疗效。 长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)：又称龙根菌。肠道内的益菌以长双歧杆菌为主，也是真正的人体原生菌种。能有效调节Th2细胞免疫反应，降低过敏患者血中IgE含量，进而有效的改善因为花粉引起的过敏症状，也能改善抗生素及食物病原菌造成的腹泻。 2.剂型、制造技术 常见的剂型以胶囊以及粉末状为主，由于颗粒或胶囊的制程需要经过高温加压，所以很容易破坏菌株造成效果打折，制造胶囊不可避免的则会添加许多化学添加物。而拥有发粉技术的业者则有更高的封装技术且渐少化学添加剂，所以粉状的益生菌服用起来更为安心。 3.菌数 肠道所能定殖的益生菌数目有限，并不是数量越多越好，菌数过高会造成反效果，菌株们会互相竞争反而不能发挥其作用。一般来说，1亿至100亿的菌落形成单位(colony-forming unit，CFU，是一种计算活的细菌数量的方式)左右。市售厂商常会标榜产品具有近千亿的菌数，消费者需思考其效果性。 4.保存条件，储存方法 每件商品的保存条件不近相同，消费者需注意包装上所标示的保存方法，优良的益生菌稳定性高再加上好的技术制造，一般在室温下存放即可，但每间厂商技术原理不同，有些怕降低益生菌的存活率而需要置放于冰箱内冷藏。此外，应避免高温潮湿、日晒的环境。 5.服用好时机 根据研究指出，在餐前30分钟食用或随餐食用，吸收率最好，因为这两个时段可以避免被胃酸破坏，菌种们在肠道内有较高的存活率。重要的是，持续性的使用，随时让益菌在肠道保持优势环境，减少坏菌的滋长，才能真正调节肠道、免疫系统。 菌种名称让人眼花撩乱应该怎么挑？ 选择适合自己的益生菌并不难! 不过这种因个人差异来挑选益生菌的概念，是否只是理想？如何为不同的使用者量身订做最合适的益生菌产品？有业者已实现这样的理想。根据该企业表示：由于个人的基因背景不同，对于不同的益生菌株，也会产生不同免疫反应。为了达到个人化益生菌的理想，采用 ELISPOT 快速筛选平台，能从上百种益生菌株的种类中，快速准确的筛选出最能 *** 您个人免疫细胞产生干扰素的益生菌株，打造个人专属的保健品。 以免疫学为基础的功能性菌种筛选平台—ELISPOT ELISPOT 利用免疫学原理，分析不同菌种对于人体免疫系统的影响，这种这种个人化益生菌的筛选平台是利用免疫学原理–抗原抗体结合之方法，酵素免疫 分析法(ELISA)分析人体的免疫细胞与益生菌共培养后产生的细胞激素，并且将此平台与微流体平台结合，制作成自动化的酵素免疫分析晶片。此晶片上固定化了 IFN-γ及 IL-10 的抗体，并且让 ELISA 的整个反应程序自动化，降低了人为操作的 变因。技术的敏感性可以侦测到单一免疫细胞所分泌的细胞激素，其优势为能够快速而大 量筛选菌种，可应用于个人化医疗，为个人量身定做最适合体质的菌种。 使用微uf9ca体生物晶片快速筛选平台，可检测各体周边血液单核球 对于各菌种产生的免疫反应，借由生物指标的测量，加以量化，作为治疗的指引。 话题： 益生菌

【答案】：EELISPOT源自ELISA，又突破传统的ELISA。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白。ELISA通过显色，测吸光度，与标准曲线比较而定量。ELISPOT是单细胞水平检测，比ELISA更灵敏，能从20万～30万个细胞中检测出1个分泌特定因子的细胞。

当有空气时瓶内就会有一部分压强，所以水银注上升的短，所以测得的大气压比真实值要小

ELISpot Assay，中文名称也叫酶联免疫斑点检测。是生物实验中常用的一种用于监测免疫细胞因子的试验，由于其精度高（可监测单个细胞分泌细胞因子）和操作方便，而被广泛使用。 其主要原理（类似于ELISA）是：将免疫细胞孵育在已经包被有对应细胞因子抗体的PVDF膜上，一段时间之后，去除细胞，分别加入二抗和检测抗体，最后通过膜显色之后，曾经有细胞分泌过该细胞因子的地方，就会形成显色斑点。每一个斑点理论上代表曾经有一个细胞在该位置分泌了该细胞因子。通过计数斑点的个数，对应最初加入的细胞数，即可换算出每百万个细胞中有多少个细胞在刺激之下分泌了特定的细胞因子。

封闭的目的都是为了防止非特异性结合。加入捕获抗体后，96孔板小孔底部并不一定都被抗体结合。为了防止之后加的检测抗体不直接结合在96孔板上，所以需要用封闭液将没有结合的位置封闭。

结免三项(结核特异性细胞免疫三项)检验仪器/方法：ELISpot中文名称检验结果参考范围结核蛋白特异性细胞IFN-y2060-40结核多肽抗原细胞IFN-y(p4-6)1810-40结核多肽抗原细胞IFN-y(p8.10)550-40

（达科为公司是以下品牌的中国区总代理）：1) 科研试剂类：美国Biolegend、PeproTech、Biovision、rockland、Bethyl、NeoMarkers、Sciencell；荷兰U-CyTech、HBT；法国Polyplus；；挪威Axis-Shield；瑞士Dualsystems；澳大利亚Fluorotechnics等等。2) 科研仪器类：ELISPOT分析仪、ECIS细胞动态分析仪；Dark Reader、MPL-1板式荧光分析仪；激光流动成像细胞仪、细胞平台高通量药筛实验室工作站、HPLC等等达科为作为深圳市第四批高新技术企业，具有多年生物技术产品开发和经验的公司，通过与科研院校的广泛的合作以及引进国外先进技术并消化吸收，经过不断的努力探索和发展，构筑了处于生物科技发展前沿的ELISPOT技术平台，成为全国首家ELISPOT专家。并在这些平台上不断开发具有自主知识产权和世界先进水平的系列项目与产品。公司自产产品有：a) γ干扰素ELISPOT检测试剂盒—达科为Quick Spot系列b) ELISPOT配套产品：EZ-Sep系列淋巴细胞分离液，Cryostar冻存液，Lympho-Spot无血清培养基c) 结核检测以及处世界领先获专利受权的“乙肝病毒特异性T淋巴细胞ELISPOT诊断试剂盒”d) 人、小鼠细胞因子ELISA检测试剂盒

测定CTL效应的方法有：51铬（Cr）释放法和非同位素测定法两大类。　　一、经典的CTL活性测定方法为51铬（Cr）释放法，本法结果准确、重复性好，但也存在以下不足：　　①使用放射性的51Cr不利于安全操作及废物处置，且需特殊测定仪器；　　②51Cr自发释放率高，常因不同靶细胞标记效率变化差别大而影响结果判定；　　③51Cr半衰期（27.8天），无法用于需多次测定的动物试验；　　④细胞共育时间短而试验操作步骤多，不能在单个细胞水平进行测定。　　二、非同位素测定法：　　1 荧光测定法　　1.1 alamarBlue一步荧光测定法　　alamarBlue为活细胞代谢指示剂，易溶于水，进入细胞后经线粒体酶促还原产生荧光及颜色变化，可用以定量。具体测定方法是：在靶细胞孔（T）、效应细胞孔（E）和实验孔（T+E）各加alamarBlue,共育6~24h后用板式荧光测定仪测530nm（发射）/590nm（散射）波长荧光强度，将T及E孔荧光均值相加后减去实验孔（T+E）荧光均值，与T孔荧光均值比较即可计算CTL对靶细胞的溶解%。　　1.2 Calcein-AM荧光扫描测定法　　Calcein acetoxymethy1酯（Calcein-AM）是一种胞浆荧光标记物，本身无荧光，渗入细胞后细胞内酯酶催化生成的水溶性绿色荧光物质不易透出细胞。靶细胞用其标记后与效应细胞共充，再加Fluoro-Quench试剂（一种以Ca2+螯合的小牛血红蛋白主要成分、还含溴化乙啶试剂，它对细胞无毒，不能进入活细胞但可能进入膜已破损的死细胞），淬灭培养液中的荧光，在板式荧光扫描仪上定量测定活细胞内的荧光强度，与靶细胞对照孔（代表细胞100%存活）比较。即可计算效应细胞杀伤靶细胞%。　　2 流式细胞分析法　　2.1 PE-mAb/FITC-annexin V 荧光标记法　　正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine,PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡(Apoptosis)时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡(Apoptosis)的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD8-PE）标记效应细胞（不能与PE-mABA结合的细胞即为靶细胞），再用FITC-annexin V标记凋亡靶细胞，用流式细胞仪区分并定量此三类不同的细胞群，即可计算出效应细胞杀伤靶细胞%。　　2.2 DIOC18(3)/碘化丙锭（PI）荧光标记法　　用DIOC18（3）（3，3，-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate）标记靶细胞膜，用红色荧光核染料PI（propidium iodide）标记效应细胞和死亡靶细胞，通过流式细胞分析可清楚区分2类细胞。在用人和猪的外周血单核细胞（PBMC）作效应细胞时可观察到靶细胞溶解%与不同E：T比之间存在良好相关。本法简单易行，与51Cr释放法同样敏感可信，重复性和相关性很好，另一优点是可用新制备的脾细胞作靶细胞，不再需要培养及活化靶细胞，还可测多种动物的NK活性。　　2.3 PKH-26/CFSE荧光标记法　　Sheehy等采用PKH26和CFSE双示法可有效地标记和区分靶细胞，其标记靶细胞后的自发释放仅为51Cr释放法的1/40，因此可更准确地评价及检测少量CTL介导的细胞溶解。平行试验结是显示本法与51Cr释放法明显相关（r2=0.998，p<0.0001），对进一步研究效应细胞溶解细胞的机理具有应用价值。　　2.3 树突状细胞（DC）清除法　　抗原标记的树突状细胞DC(dendritic cell)在体内的存活与CTL活性明显相关。将DC用两种不同荧光物质标记，再分为两部分，一部分用抗原标记，另一部分不标记，二者混合后注入小鼠皮下，只有标记了特异抗原的DC自引流淋巴结清除，未标记抗原的DC仍存于局部不受影响。据此建立了简单灵敏体内测定CTL活性的方法。由于DC可有效摄取及呈递复合抗原、核酸及凋亡小体，本法除可测定用特异性肽负荷的DC免疫或用流感病毒感染所产生的CTL反应外，也可用于评价不具有肽表位特征的抗原的CTL活性。　　3.报告基因转染法　　应用基因转染技术将原核或真核生物的报告酶如β-半孔糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）或荧光素酶（luciferase,luc）基因转染靶细胞，建立稳定转染靶细胞系，以此测定CTL、NK细胞及药物介导的细胞毒和细胞凋亡(Apoptosis)。通过测定释放入培养液中报告酶活性（代表靶细胞死亡数目），可以计算效应细胞杀伤靶细胞%。其中β-gal半衰期较luc长，应用较为方便。　　4 比色测定法　　4.1 MTT（或MTS）还原法　　本法根据细胞代谢活动与活细胞数直接成比例的原理，通过测定靶细胞代谢活性的减少来反映效应细胞所致靶细胞的死亡。氧化型MTT进入细胞后被线粒体脱氢酶还原生成蓝色formazan颗粒，经溶剂溶解后比色定量，其颜色深浅直接与活细胞数有关，与靶细胞对照孔比较可计算效应细胞杀伤靶细胞%。　　4.2 LDH释放法　　酸脱氢酶（LDH）在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤%。　　5 其他　　5.1 “鸡尾酒“混合刺激法　　将外周血细胞在体外用一种含有抗原、细胞因子、共刺激分子及放射照射的饲养细胞的混合“鸡尾酒”刺激7天后，在有限稀释条件下可从微孔板快速测得抗原特异性信号。本法灵敏性高，较传统的CTL测定方法更有效，尤其是本法仅需150μl小鼠外周血而无需处死动物，因此可增加每次测定时的小鼠数量，还可在体内研究过程中于不同时间从每个小鼠多次取血测定，大大方便了CTL反应及其体内效果的相关性研究。　　5.2 ELISPOT试验　　酶联免疫斑点试验（ELISPOT）通过检测抗原诱导的细胞因子（如IFN-γ）的分泌，可在体外定量测定病人PBMC中抗原特异性T细胞反应(T细胞受抗原刺激产生并释放IFN-γ)。本法在肽特异性分泌IFN-γ的T细胞数量与细胞毒活性之间，与标准的51Cr释放法相关良好，是一种在临床试验中监测病人对肿瘤抗原的CTL或Th-细胞反应的灵敏、准确、价廉、的方法，可对肿瘤病人的抗肿瘤疫苗(vaccine)疗法的优化提供必要的信息。　　以上几种CTL测定方法各有特点，其中随着荧光测定仪器的普及和新的荧光标记物的发现，荧光测定法将有可能取代传统的51Cr释放法，而微量和直接测定体内CTL活性的方法将为细胞免疫研究开辟新路。

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正确答案:A解析：酶联免疫斑点试验(ELISPOT)已被越来越多地应用于类风湿因子、IFNγ等细胞因子分泌细胞的定量检测。流式细胞仪可以区分具有不同分泌特性的细胞亚群，如Th1、Th2细胞等。ELISA法具有特异、简便、易于推广和标准化等优点，广泛用于体液标本细胞因子以及细胞体外培养上清液中的细胞因子检测。

开始考试了，着急了吧

正确答案:B解析：1.该试验主要可以体外检测特异性抗体分泌B淋巴细胞和细胞因子分泌T淋巴细胞。以细胞因子分泌T淋巴细胞为例：将被激活的T淋巴细胞转入ELISPOT培养板中孵育，T淋巴细胞分泌的细胞因子在原位被培养板上包被的抗特异性细胞因子抗体所捕获，洗涤后加入生物素标记的抗细胞因子抗体，孵育、洗涤后再加入酶标记的链霉亲和素，孵育后洗涤，最后加入酶的底物，可形成不溶的颜色产物即斑点。每个斑点代表一个分泌细胞因子的T淋巴细胞。本题正确答案是A。2.HIV抗体检测试验分为初筛和确认试验。初筛试验常用ELISA法、胶乳凝集法和免疫金层析法。确认试验主要用免疫印迹法(IBT)，该法因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southernblot相类似，通常又称为西部印迹(Westernblot)。本题正确答案是E。3.酶放大免疫测定技术(EMIT)是最早取得实际应用的均相酶免疫测定方法，是由美国Syva公司研究成功并定名的。此法主要用于检测小分子抗原或半抗原，在药物测定中取得较多应用。酶放大免疫测定技术试剂盒的商标取名为EMIT。本题正确答案是B。

【答案】：D1.WestemBlot即蛋白质印迹法，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。2.ELISPOT，即固相酶联免疫斑点技术，是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白。3.可检测淋巴细胞增殖的方法有：液体闪烁计数器、MTT法、ELISPOT和抗体形成细胞测定试验

【答案】：D固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）是定量ELISA技术的延伸和新的发展，可检测淋巴细胞增殖。

长期以茶代水 小心肾结石找上门尾牙健康吃 三高不缠身益生菌怎么挑? ELISPOT助您打造专属你的益生菌椰子油=好油? 可能是一场美丽的误会… 低温骤降，寒流侵台，疾管署统计，类流感急诊人次已经破十万大关，一二月通常是流行性感冒高峰期，民众们御寒衣物都要穿好，尤其要特别注意家中孩童以及老人的身体状况。营养师提醒，平常多补充维他命C，虽然有助于提升免疫力，降低感冒生病之发生率，但是值得注意的是，尚未有实验证明，维生素C能帮助感冒减缓。 维生素C 与免疫系统呈正相关 维生素C为一种水溶性的维生素，又称抗坏血酸(ascorbic acid)人体缺乏合成维生素C的酵素，必须靠外在的补充才足够。维生素C功能众多，其中普罗大众最熟知是增强免疫力，提高身体的免疫机制。为什么呢?维生素C有趋化白血球的活性、增强巨噬细胞吞噬的能力。研究发现，健康人血浆中维生素C的浓度比生病人来的高，因此可以推断，维生素C与免疫系统呈正相关。 维生素C 能预防感冒? 人们在感冒时，经常想借由补充维生素C来代替药品，但其实维生素C并无法助于改善感冒，顶多能预防感冒的发生，而且并不适用于任何人，不见得在每个人身上都看的到效果。维生素C大于200mg的摄取量，对于一般人来说对于减少感冒发生率效果并不显著，但对于运动员等有规律大量运动锻炼者，每日补充250mg~1000mg的维生素C，是可以降低感冒的风险。维生素C的上限摄取量为2000mg，所以并不是吃越多效果越好，过量摄取会造成腹泻腹痛等副作用，适量摄取即可! 平日多补充维生素C之天然食物才是王道 预防胜于治疗，大家都有这个观念，但实际做到的并不多，不想病毒感冒找上门，要从日常生活做起，水果中，芭乐荣登维生素C之冠，释迦、奇异果、草莓、荔枝、柳橙等都是维生素C良好来源!蔬菜部分，甜椒、空心菜、花椰菜中也富含维生素C。 营养师说:平日多存点本，才不会维生素C到用时方恨少。除了适量补充维生素C，减少出入公共场所，出外配戴口罩，勤洗手，规律运动多晒太阳，遇到寒流冬季才不会时常跑医院报到。 话题： 营养百问, 维生素C, 食品保健, 养身保健

spot两次结果不一致原因有检测误差、操作人员误差、样本处理误差、样本状态变化、细胞活性变化。1、检测误差。T-SPOT.TB检测依赖酶联免疫斑点技术(ELISPOT)，该技术灵敏度高但仍存在一定的检测误差，两次检测的误差程度不同导致结果不一致。2、操作人员误差。T-SPOT.TB检测需要进行细胞分离、培养、计数和ELISPOT等一系列操作，操作人员的技能和经验不同会产生一定误差，影响结果。3、样本处理误差。T-SPOT.TB采用的血液样本需要在一定时间内进行处理，样本活性和细胞存活率会下降，导致抗原-抗体反应信号强度降低，影响检出结果。两次样本的处理时间不同可能导致结果不一致。4、样本状态变化。人体的免疫状态会随时间或体质等因素发生一定变化，近期感染结核病原体的可能性不同，会导致两次检测结果的差异。5、细胞活性变化。T-SPOT.TB检测需要利用人外周血单个核细胞(PBMC)与特异性抗原进行反应，PBMC的活性会影响检测信号的产生和放大，两次检测PBMC活性不同可能导致结果不一致。

【答案】：A蛋白质印迹法（Western Blot）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息，可用于检测细胞因子分子量。

正确答案:D解析：B细胞功能的检测方法主要包括反向溶血空斑试验（RHPA）和酶联免疫斑点试验（ELISPOT）。

　　抗体(antibody)： 机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。因为最初有人用电泳证明血清中抗体活性在γ球蛋白部分，故曾把抗体统称为两种(γ)球蛋白。后来证明，抗体并不都在γ区；而且位于γ区的球蛋白，也不一定都具有抗体活性。1964年，世界卫生组织举行专门会议，将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白以及“正常人”天然存在的免疫球蛋白亚单位等。因而免疫球蛋白是结构及化学的概念，而抗体是生物学及功能的概念。可以说，所有抗体都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗体。　　[编辑本段]●生物活性　　(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应；在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。　　(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。　　(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。　　(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。　　(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。　　(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。　　[编辑本段]●抗体结构　　抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种，重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中，不同抗体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。可变区位于"Y"的两臂末端。在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈，这些氨基酸的残基组成和排列顺序更易发生变异区域称高变区。高变区位于分子表面，最多由17个氨基酸残基构成，少则只有2 ～ 3个。高变区氨基酸序列决定了该抗体结合抗原抗原的特异性。一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的，位于两臂末端称抗原结合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部称结晶片段(crystalline fragment,FC)，糖结合在FC 上。　　右图是抗体的结构示意图：　　下图是其立体模型:　　抗体立体模型　　[编辑本段]●抗体基因重排　　抗体的L链是由C、V、J三个基因簇编码的，H链由C、V、D、J四个基因簇编码的。V是编码可变区，有300个种类；D编码高变区,有15 ～ 20个种类；J编码连接V、C的结合区，有4～5个种类；C编码恒定区，仅有一种。这些外显子通过多种多样的重排，所合成出的肽链，还要再进一步进行L和H链组合，这样最后生成的抗体种类就非常多了。抗体基因重排是发生在淋巴细胞分化的时候。　　[编辑本段]●单克隆抗体　　(monoclonal antibody，McAb)克隆选择学说：淋巴细胞在与抗原接触前就已经存在多种多样的与抗原专一性结合的受体，一种细胞带一种受体，进入机体的抗原选择性的结合其中的个别淋巴细胞，使之活化，增殖产生大量带有同样受体的细胞群，分泌同样的抗体。 bio.jewelove.net 当抗原进入体内，在机体中就会诱导出针对不同抗原决定簇的多种抗体，如果要把这些抗体一一分开，用现有的生物化学或物理化学方法是根本办不到的。1975年科勒(Koehller)和米尔斯坦(Milstein)将小鼠免疫细胞与肿瘤细胞融合，培养出既能迅速生长繁殖又可分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。从而获得针对某一特殊抗原决定簇的单克隆抗体。　　[编辑本段]●抗体的功能　　抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物，中和它们所释放的毒素或清除某些自身抗原，使机体保持正常平衡，但有时也会对机体造成病理性损害，如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生，对人体可造成危害。　　[编辑本段]●抗体规律　　(1)初次反应产生抗体：当抗原第一次进入机体时，需经一定的潜伏期才能产生抗体，且抗体产生的量也不多，在体内维持的时间也较短。　　(2)再次反应产生抗体：当相同抗原第二次进入机体后，开始时，由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合，可使原有抗体量略为降低。随后，抗体效价迅速大量增加，可比初次反应产生的多几倍到几十倍，在体内留存的时间亦较长。　　(3)回忆反应产生抗体：由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原，可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同，则称为特异性回忆反应；若与初次反应不同，则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的，短时间内即很快下降。　　[编辑本段]●抗体的分类　　(1)按作用对象，可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体(能与细胞结合的免疫球蛋白，如1型变态反应中的lgE反应素抗体，能吸附在靶细胞膜上)。　　(2)按理化性质和生物学功能，可将其分为IgG、IgA、IgM、IgE、IgD五类。　　(3)按与抗原结合后是否出现可见反应，可将其分为：在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体，即通常所说的抗体，以及不出现可见反应，但能阻抑抗原与其相应的完全抗体结合的不完全抗体。　　(4)按抗体的来源，可将其分为天然抗体和免疫抗体。　　抗体就是免疫球蛋白，是改变了的球蛋白分子。由特异性抗原刺激产生，抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用，使B使淋巴分化增殖而形成浆细胞，浆细胞可产生分泌抗体。　　[编辑本段]●世界著名抗体公司　　Santa公司　　是世界上最大的抗体生产厂家，目前可提供的抗体种类多达两万多种，几乎覆盖了目前生命科学研究的各个最新领域，其每种抗体又有多个克隆可以选择，还提供一些对应蛋白标准品及相关产品，如ABC试剂盒，各种标记二抗，Western试剂盒，蛋白分子量Marker，核抽提物等，为免疫学研究工作提供了极大的方便。　　Abcam公司　　是世界有名的抗体王国，以优质、齐全的产品、完善的网络支持功能和强大的技术支持队伍得到全球客户的认可和赞誉。并在2004年获得了对于生物界公司不可多得的英女王奖，拥有很好的知名度和口碑。　　AbMART　　全球抗体生产行业的新贵，在全球首推低价格“保证使用成功”的抗体定制服务，保证定制的抗体能在ELISA, Western, IP, IF/ICC等各种实验中成功使用。建立抗体研发和生产流水线，实现低价格和高速度提供各种抗体，做抗体行业的沃尔玛。AbMART（艾比玛特）致力于抗体的工业化，目标是设立抗体定制服务的行业标准，是目前全球最大的抗体制备公司之一。　　R&D公司　　于1976年成立于美国，一直致力于各种细胞因子及其相关分子的生产研发，其生产的各种ELISA试剂盒、重组因子及抗体以其卓越的品质赢得了世界各国科研及临床诊断机构的青睐。 是全世界最大的细胞因子公司。该公司产品丰富涵盖了百余种细胞因子类ELISA试剂盒, 重组细胞因子类蛋白（209种之多）及相关的多达250余种单克隆、多克隆抗体；细胞凋亡、Caspase及胶原酶系列以及细胞因子类等热点领域。　　Proteintech Group　　Proteintech Group, Inc(武汉三鹰生物技术有限公司)是一家由留学人员和专业管理人员组成的新型生物技术外资企业，成立于2000年11月，2002年5月被认定为高新技术企业，目前是中国大陆最大的抗体公司。公司总部和实验室设在武汉东湖新技术开发区关东科技园内，在美国和英国拥有自己的销售网络和网站（wwww.ptglab.com）。公司主要生产人类蛋白组抗体及相关产品。目前已有抗体4000多种，融合蛋白5000多种，人类全长cDNA 22000条，拥有自己的实验动物基地。公司产品以出口为主，目前已在美、日、欧洲各国的生物医学领域拥有稳定的顾客群。Proteintech Group已经成功地将实验室的分子生物学技术，蛋白表达纯化技术，抗体纯化检测技术转化到产业化水平，技术涉足分子生物学，生物化学和免疫学等多个领域。目前公司的主要产品包括人类全长cDNA，纯化蛋白和抗体，已经推出免疫组化试剂盒，并正在研制一批高技术含量，高附加值的新产品。　　MBL　　成立于1969年，是日本第一家抗体生产商。公司早期致力于研究生产血浆蛋白质抗体,是抗体研究、发展和生产的先锋者。现在，公司提供3000多种细胞骨架、致癌基因产品和信号转导蛋白质抗体。1975年，MBL成为日本首家血浆蛋白质的诊断剂的生产商，之后，公司就致力于开发、生产免疫诊断试剂，特别是自身免疫性疾病方面的诊断试剂。公司的研发能力在该领域中得到了极高的评价。MBL的自身免疫性疾病的诊断剂对医药界贡献非常大，该公司产品在自身免疫性疾病方面占据了日本国内市场80％的份额，在海外市场也同样受到欢迎。近年来，MBL大力引进重组DNA细胞和细胞融合技术来开发用于疾病诊断和疗效观察的诊断试剂。另外，公司开发了大量分子生物学和细胞生物学研究的产品，包括抗体和可溶性Fas ELISA试剂盒。　　Cell Signaling Technology(CST)　　是最知名的和老牌的信号转导公司之一，专注于信号转导产品的提供和研究。产品具有种类多、质量好、价格低、引用文献多等优点，是您进行信号转导研究不可多得的帮手！ 其中磷酸化抗体做的尤为突出！以前皮皮狗也介绍过Cell Signaling公司的关于磷酸化位点的网站　　Zymed Laboratories公司　　位于美国生物科技重要城市南加州的圣迭亚哥市,目前是Invitrogen大家庭中的一员。是一家以生产免疫学检测试剂为主的综合性生物技术公司。Zymed公司的业务主要分为两大领域：生命科学和临床病理诊断。Zymed公司的所有产品反映了其在全球的自我定位策略－即一家重视质量、专注于全面解决问题的开发商、生产商和全球营销商。它在全球范围内为生命科学研究、临床研究、癌症诊断领域提供高质量的试剂和试剂盒。Zymed公司历史悠久，在抗体设计、开发、修饰、纯化和生产方面有21年的专业研究史。Zymed 公司得到 ISO 13485认证。　　台湾Abnova　　是世界上最大的单克隆抗体生产商之一，现有抗体产品种类近10000种，其中2/3是单克隆抗体。和传统的单克隆抗体生产方法相比，Abnova采用更先进的技术和设备，可以极大地提高单克隆抗体的生产效率并降低其生产的成本。Abnova具有每个月开发500个小鼠单克隆抗体的能力，他们的目标是：人类基因组中的每一个表达基因都至少有一种抗体。　　Chemicon　　享誉全球的生命科学试剂研发和经销大公司,目前被Millipore公司收购，其产品涉及到神经生物学、细胞外基质、信号传导和传染病研究。公司拥有强大的研发背景，是许多生化试剂技术如ESGRO、LIF专利的拥有者和独家生产者，公司拥有严格的质量控制体系和十分完善的售后服务体系，在客户中树立了良好的信誉。　　Novus位于美国科罗拉多州,是一家著名的抗体公司。公司的愿景是提供优质的产品,完善的客户服务以帮助客户快速找到最适合的抗体产品。通过全球代理商和网络提供10000多种研究级抗体,涉及生命科学的各个领域。　　Merck是生命科学领域的旗舰企业，拥有以下品牌：　　Calbiochem corp. 为全球最大的信号转导类产品供应商。　　Biodesign　　美国主要的工业及研究用免疫学产品供应商，公司符合ISO 9001，FDA，GMP等多项认证，获得USDA许可，其产品超过4500种，在全球有40多个分销商，为生命科学研究，药物制造，生物技术及诊断产品开发及生产等多个领域提供抗体、抗原、免疫检测全套免疫学产品。　　Pierce公司　　是蛋白质化学、免疫学和层析等很多方面的先驱和领导者，主要产品包括：化学发光体和比色底物、分析试剂、荧光标记探针、酶联免疫分析试剂盒等。皮皮狗已经多次介绍过了！超喜欢他们的宣传词： “All is Possible, with Right Tools……”　　BD　　产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学和蛋白质组学等诸多领域，旗下拥有Clontech 、Discovery labware 、Pharmingen 、Falcon 等质品牌，值得称赞的是每一个品牌在其所在的领域都是其中的佼佼者。　　PeproTech　　位于英国,在美国也有公司。成立12年来,公司已开发了200种以上的重组细胞因子和相关抗体.所有产品以冻干形式提供,以方便运输和储存.目前公司正在扩大产品线,生产抗原亲和多抗及其生物素标记物,ELISA试剂盒和新型抗体。主要以小包装的细胞因子受广大研究生客户喜爱。　　Cayman　　向世界科学工作者提供多研究领域的生化和免疫试剂。包括：肿瘤、氧化氮、神经学、凋亡、氧化性损伤、内分泌学等等。他们有用于检测的特色试剂盒，如：类花生酸类物质、游离的生物标志、环核苷、激素及氧化氮等。另外，Cayman提供多种高质量试剂，包括：类花生酸类物质、氧化氮试剂及许多相关脂质、脂肪酸、酶和抗体。　　德国美天旎公司是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。主要开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势。CD133、BDCA-2（CD303）、BDCA-4（CD304）单抗均为其专利产品。　　Assay Designs　　位于美国的密歇根州，成立于1992年，为全世界生化、医药专业的科研工作者提供优质、快速、方便的产品，"使您的科研更为简单"。公司目前可提供检测和定量细胞调节、信号转导、炎症、氧化过程和凋亡相关的分子。公司最近开发了CORRELATE 和TITERZYME 免疫试剂盒，活性检测试剂盒、FLASHLIGHT and BIOLIGHT 发光混合物、抗体等。Assay Designs 提供各种eicosanoid试剂盒、人和小鼠的细胞因子试剂盒以及世界唯一的非放射性COX活性检测试剂盒，其精确和重复性无与伦比。另外，公司大量提供抗原和抗体相关产品。　　Dynal Biotech ASA.，　　成立于1986年，是一家在德国、法国、英国、美国、中国及澳大利亚均设有分公司的跨国公司，总部位于挪威奥斯陆。总公司一直致力于磁性分离技术和HLA相关产品的研究、生产和销售。经过多年发展，其产品线已覆盖了免疫学、分子生物学、微生物学、HLA等生命科学领域。1996年，Dynal Biotech ASA 通过了ISO9001质量体系认证；2002年，两个系列产品取得CE认证；2003年，再次通过ISO9001:2000以及ISO13485质量体系认证。2004年3月，其产品通过了美国FDA认证。　　2005年2月，Invitrogen公司成功收购Dynal Biotech公司。　　DSL公司　　位于美国的得克萨斯州，成立于1981年，致力于诊断产品的研发和生产，是世界上激素检测领域的领先者。DSL公司本着顾客至上的原则，能更迅速的适应变化，提供给客户最好的产品和服务。　　公司平均每年推出20-30种新产品，可以提供给客户最新的产品和服务：　　·免疫诊断分析和内分泌检测试剂　　·传染病诊断　　·研究用试剂　　·CLIA认证的实验室　　·抗体开发，蛋白质纯化的研发　　罗氏公司（Roche）　　应用科学部致力于生命科学领域产品的开发，向用户提供优质的科研产品。在1998年收购德国宝灵曼（Boehringer Mannheim）公司后，产品涵盖了分子生物学，细胞学，免疫学，蛋白质组学，生物化学等多个研究领域，罗氏拥有PCR以及地高辛标记产品的全球专利，其DIG标记产品和细胞凋亡相关产品在业内享有极高的声誉。五十年来，罗氏应用科学部专注于生命科研领域产品的开发和推广，如今已经有超过2000种的科研产品在市场上销售，覆盖了生命科学研究领域的各个方面，为科研工作者提供完整的解决方案。　　BioLegend公司　　位于美国加州，致力于为生物医药研究的各个前沿领域提供高质量的抗体及其它相关试剂。BioLegend聚集了一批来自PharMingen公司的专业人士，建立了一支具有雄厚技术背景的专业队伍，其中该公司的CEO更是为PharMingen公司的创始人之一。通过其自身的先天优势，以及与世界知名实验室和研究所的良好合作关系，其目标是以最合理的价格为广大客户提供高质量的免疫学和细胞生物学产品。BioLegend公司以其专业技术力量为保证，提供各种质量卓越的产品，并不断地开发新产品，以满足飞速发展的生命科学研究的需要。　　eBioscience公司　　来自美国圣地亚哥，以其高品质的产品，良好的服务及实惠的价格赢得了多家世界顶尖实验室和科研机构的青睐。目前该公司一直致力于炎症方面的单克隆抗体的研究，在TLR方面有着很高的长久。　　SBA（Southern Biotechnology Associates, Inc.）　　公司建于1982年，由美国伯明翰的阿拉巴马大学（UAB）的Dr. Max Cooper细胞免疫学实验室的科学家创建。SBA致力于高质量、高亲和纯化的二抗的生产、纯化和标记。同时，SBA还提供各种亲和纯化的多克隆和单克隆抗体，其中包括：荧光素和酶标记物，低内毒素/不含叠氮化物（LE/AF）制剂，F(ab)和F(ab")2，此外还有纯化的免疫球蛋白和胶原质。　　NeoMarkers (Lab Vision & NEOMARKERS) 公司　　在免疫组织化学产品领域上处于世界领先水平。Lab Vision & NEOMARKERS从研究与临床需要出发，设计开发产品，真正满足实际要求，产品已被生命科学研究群体所广泛认同；有完善的专业文献资料积累，所有产品都提供详细的技术资料与重要的相关文献；产品提供多种规格，单抗有0.1ml和1.0ml与即用型（7ml）以及纯化的抗体（试用型20ug，100ug与200ug），可以适应各种不同要求，此外还可根据实验要求选择特定的产品形式或规格。　　BioVision. Inc.　　位于美国加州的Palo Alto，是世界上首屈一指专著于凋亡和细胞信号研究的公司。其产品质优、价廉、包装使用方便。BioVision致力于为研究者们提供最好、最新的研究工具而不断扩大产品及服务质量。该公司提供用于检测早、中、晚期凋亡的试剂，可以检测凋亡发生的不同区域，包括：线粒体、胞浆、胞膜及胞核。　　KPL公司是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上最大的二抗和底物显色系统的生产商。其可以提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂，其产品有：亲和纯化的抗体和偶联物、ELISA和杂交底物、蛋白检测和纯化试剂盒、核酸标记和检测试剂以及其它辅助试剂等。　　MABTech　　是瑞典的一家生物公司，成立于1986年；他们生产高质量的单克隆抗体，一直致力于ELISpot配套抗体的研究，其ELISpot技术处于世界领先水平.　　MABTech公司目前生产的ELISPOT细胞因子检测试剂盒涉及多个种属：　　Human: IFN-gamma、CEF Peptide pool、Inteferon-alpha、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12(tot IL-12)、IL-12(IL-12 p70)、IL-13、GM-CSF、TNF-alpha、Perforin、Granzyme B　　M: IFN-gamma、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12(tot IL-12)、IL-13、GM-CSF　　Mouse: IFN-gamma、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12(tot IL-12)、IL-12(IL-12 p70)　　Bovine: IFN-gamma　　MABTech公司提供四种类型的ELISPot试剂盒和相关配套试剂：　　1、 ELISpot PRO kit：包括包被有捕获抗体的PVDF板、ALP标记的检测抗体、BCIP/NBT底物。　　2、 ELISpot PLUS kit：包括PVDF板（白色）、捕获抗体、生物素化检测抗体、ALP标记链亲和素、BCIP/NBT底物。　　3、 ELISpot kit：包括包被抗体、生物素化检测抗体、酶（ALP或HRP）标链亲和素。　　4、 抗各种细胞因子的抗体

（1）初次反应产生抗体：当抗原第一次进入机体时，需经一定的潜伏期才能产生抗体，且抗体产生的量也不多，在体内维持的时间也较短。（2）再次反应产生抗体：当相同抗原第二次进入机体后，开始时，由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合，可使原有抗体量略为降低。随后，抗体效价迅速大量增加，可比初次反应产生的多几倍到几十倍，在体内留存的时间亦较长。（3）回忆反应产生抗体：由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原，可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同，则称为特异性回忆反应；若与初次反应不同，则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的，短时间内即很快下降。特色试剂盒，如：类花生酸类物质、游离的生物标志、环核苷、激素及氧化氮等。另外，Cayman提供多种高质量试剂，包括：类花生酸类物质、氧化氮试剂及许多相关脂质、脂肪酸、酶和抗体。德国美天旎公司是一个以细胞分选技术为主、拥有多样化产品的生物技术公司。主要开发研制并销售世界上最先进的细胞分选、细胞生物学、相关分子生物学产品和技术，尤其在干细胞分选、DC细胞分选与分析、细胞因子分泌细胞分选与分析、免疫治疗、再生医学方面占有极大的优势。CD133、BDCA-2（CD303）、BDCA-4（CD304）单抗均为其专利产品。Assay Designs位于美国的密歇根州，成立于1992年，为全世界生化、医药专业的科研工作者提供优质、快速、方便的产品，使您的科研更为简单。公司可提供检测和定量细胞调节、信号转导、炎症、氧化过程和凋亡相关的分子。公司开发了CORRELATE 和TITERZYME 免疫试剂盒，活性检测试剂盒、FLASHLIGHT and BIOLIGHT 发光混合物、抗体等。Assay Designs 提供各种eicosanoid试剂盒、人和小鼠的细胞因子试剂盒以及世界唯一的非放射性COX活性检测试剂盒，其精确和重复性无与伦比。另外，公司大量提供抗原和抗体相关产品。Dynal Biotech ASA成立于1986年，是一家在德国、法国、英国、美国、中国及澳大利亚均设有分公司的跨国公司，总部位于挪威奥斯陆。总公司一直致力于磁性分离技术和HLA相关产品的研究、生产和销售。经过多年发展，其产品线已覆盖了免疫学、分子生物学、微生物学、HLA等生命科学领域。1996年，Dynal Biotech ASA 通过了ISO9001质量体系认证；2002年，两个系列产品取得CE认证；2003年，再次通过ISO9001:2000以及ISO13485质量体系认证。2004年3月，其产品通过了美国FDA认证。2005年2月，Invitrogen公司成功收购Dynal Biotech公司。DSL公司位于美国的得克萨斯州，成立于1981年，致力于诊断产品的研发和生产，是世界上激素检测领域的领先者。DSL公司本着顾客至上的原则，能更迅速的适应变化，提供给客户最好的产品和服务。公司平均每年推出20-30种新产品，可以提供给客户最新的产品和服务：·免疫诊断分析和内分泌检测试剂·传染病诊断·研究用试剂·CLIA认证的实验室·抗体开发，蛋白质纯化的研发罗氏公司（Roche）应用科学部致力于生命科学领域产品的开发，向用户提供优质的科研产品。在1998年收购德国宝灵曼（Boehringer Mannheim）公司后，产品涵盖了分子生物学，细胞学，免疫学，蛋白质组学，生物化学等多个研究领域，罗氏拥有PCR以及地高辛标记产品的全球专利，其DIG标记产品和细胞凋亡相关产品在业内享有极高的声誉。五十年来，罗氏应用科学部专注于生命科研领域产品的开发和推广，如今已经有超过2000种的科研产品在市场上销售，覆盖了生命科学研究领域的各个方面，为科研工作者提供完整的解决方案。BioLegend公司位于美国加州，致力于为生物医药研究的各个前沿领域提供高质量的抗体及其它相关试剂。BioLegend聚集了一批来自PharMingen公司的专业人士，建立了一支具有雄厚技术背景的专业队伍，其中该公司的CEO更是为PharMingen公司的创始人之一。通过其自身的先天优势，以及与世界知名实验室和研究所的良好合作关系，其目标是以最合理的价格为广大客户提供高质量的免疫学和细胞生物学产品。BioLegend公司以其专业技术力量为保证，提供各种质量卓越的产品，并不断地开发新产品，以满足飞速发展的生命科学研究的需要。eBioscience公司来自美国圣地亚哥，以其高品质的产品，良好的服务及实惠的价格赢得了多家世界顶尖实验室和科研机构的青睐。该公司一直致力于炎症方面的单克隆抗体的研究，在TLR方面有着很高的长久。SBA（Southern Biotechnology Associates, Inc.）公司建于1982年，由美国伯明翰的阿拉巴马大学（UAB）的Dr. Max Cooper细胞免疫学实验室的科学家创建。SBA致力于高质量、高亲和纯化的二抗的生产、纯化和标记。同时，SBA还提供各种亲和纯化的多克隆和单克隆抗体，其中包括：荧光素和酶标记物，低内毒素/不含叠氮化物（LE/AF）制剂，F（ab）和F（ab"）2，此外还有纯化的免疫球蛋白和胶原质。NeoMarkers （Lab Vision & NEOMARKERS） 公司在免疫组织化学产品领域上处于世界领先水平。Lab Vision & NEOMARKERS从研究与临床需要出发，设计开发产品，真正满足实际要求，产品已被生命科学研究群体所广泛认同；有完善的专业文献资料积累，所有产品都提供详细的技术资料与重要的相关文献；产品提供多种规格，单抗有0.1ml和1.0ml与即用型（7ml）以及纯化的抗体（试用型20ug，100ug与200ug），可以适应各种不同要求，此外还可根据实验要求选择特定的产品形式或规格。BioVision. Inc位于美国加州的Palo Alto，是世界上首屈一指专著于凋亡和细胞信号研究的公司。其产品质优、价廉、包装使用方便。BioVision致力于为研究者们提供最好、最新的研究工具而不断扩大产品及服务质量。该公司提供用于检测早、中、晚期凋亡的试剂，可以检测凋亡发生的不同区域，包括：线粒体、胞浆、胞膜及胞核。KPL公司是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上最大的二抗和底物显色系统的生产商。其可以提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂，其产品有：亲和纯化的抗体和偶联物、ELISA和杂交底物、蛋白检测和纯化试剂盒、核酸标记和检测试剂以及其它辅助试剂等。MABTech是瑞典的一家生物公司，成立于1986年；他们生产高质量的单克隆抗体，一直致力于ELISpot配套抗体的研究，其ELISpot技术处于世界领先水平.MABTech公司生产的ELISPOT细胞因子检测试剂盒涉及多个种属：Human: IFN-gamma、CEF Peptide pool、Inteferon-alpha、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12（tot IL-12）、IL-12（IL-12 p70）、IL-13、GM-CSF、TNF-alpha、Perforin、Granzyme BM: IFN-gamma、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12（tot IL-12）、IL-13、GM-CSFMouse: IFN-gamma、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12（tot IL-12）、IL-12（IL-12 p70）Bovine: IFN-gammaMABTech公司提供四种类型的ELISPot试剂盒和相关配套试剂：1、 ELISpot PRO kit：包括包被有捕获抗体的PVDF板、ALP标记的检测抗体、BCIP/NBT底物。2、 ELISpot PLUS kit：包括PVDF板（白色）、捕获抗体、生物素化检测抗体、ALP标记链亲和素、BCIP/NBT底物。3、 ELISpot kit：包括包被抗体、生物素化检测抗体、酶（ALP或HRP）标链亲和素。4、 抗各种细胞因子的抗体

这个问题由上海恒远公司来帮您解决。一直以来，ELISA试剂盒以其敏感性高、特异性强、重复性好的优点，在科研中深受广大，科研工作者的喜爱．而市面上各种试剂盒，数不胜数．让大家都产生了，选择性综合症，也挑不出最适合自已的那个试剂盒．现在我们公司列出了一下，一些选购的常识，希望能为大家选购时提供帮助．ELISA试剂盒虽然有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型，In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位检测。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外，我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA试剂盒，实际上有时候二者结合效果更好。例如，对于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。上海恒远公司自成立以来，一直秉着诚信、专业的经营理念为每一位客户提供真诚的服务。我们的服务理念是：做事不离诚信二字，恒古至今，唯有诚信才能赢得最后的胜利！感谢多年以来各位老师对本公司的大力支持！希望通过我们的不懈努力能为科研事业做出更大的贡献！

博凌科为生物科技-为你解答：中性粒细胞悬液的制备（1）采集10ml 新鲜肝素抗凝血（不能使用枸椽酸盐或EDTA 抗凝）。（2）先加入20mlPBS 混匀，再叠加至15mlFicoll-Hypaque 分离液面上，室温下400g 离心30 分钟。（3）除去红细胞层以上成分，加入3ml3%Detran T 500 和15ml PBS（要求37℃），混匀后置于37℃温浴45 分钟，以沉淀红细胞。（4）收集棕黄色层液体成分（含中性粒细胞），300g 离心10 分钟，去除上清液，加入3ml蒸馏水轻摇20 秒后，立即加入至少30ml 适量的PBS，以除去残余的红细胞，300g 离心10分钟，保存于PBS-gel 液（2mMNa2-EDTA,5mMdextrose,0.1%gelatin）。（5）计数细胞，调整细胞浓℃为2106，并且用台盼蓝或碘化丙锭（PI）在流式细胞仪检验中性粒细胞的浓℃或活性（＞90%），待用。

主要有：（1）自身免疫检测试剂盒，包括ELISA和IFA类诊断试剂；（2）细胞因子ELISA试剂盒，包括人、大鼠、小鼠、兔、狗、羊、猴子、猪、豚鼠、马类血清、尿、细胞培养上清液检测试剂盒；（3）流式细胞仪用试剂类，包括CD系列、细胞因子系列等；（4）乳胶手工及上机试剂，包括透光比浊检测试剂；（5）内分泌检测试剂盒，包括微色谱柱类检测试剂；（6）肿瘤标记物检测试剂；（7）微生物传染病检测试剂，包括性病类及其它传染病类检测试剂；（8）实验室仪器类，包括BTS-330大屏幕半自动生化分析仪、MiniNeph微量蛋白散色比浊仪及相关试剂；（9）pcr及相关试剂；（10）肝纤维化检测；(11)单克隆抗体；(12)ELISPOT：细胞因子的全新解决方案；(13)特种蛋白；（14）微色谱柱；(15)优生优育TORCH；（16）生化试剂；（17）抗体；（18）细胞株；（19）其它分子生物学研究用试剂。

CTL的杀伤机制：1、释放穿孔素，颗粒酶杀伤靶细胞。2、通过Fasl介导靶细胞的凋亡。细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxiclymphocyte,CTL），是白细胞的亚部，为一种特异T细胞，专门分泌各种细胞因子参与免疫作用。对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用，与自然杀伤细胞构成机体抗病毒、抗肿瘤免疫的重要防线。扩展资料作用特点1、可连续杀伤靶细胞，具有高效性2、具有抗原特异性3、具有自身MHC限制性细胞毒性T淋巴细胞的检测技术有四聚体技术，ELISPOT，Cr51释放等。Coal-to-liquids（CTL），煤制油，由煤炭气化生产合成气、再经费-托合成生产合成油称之为煤炭间接液化技术。成熟的细胞毒性T细胞受抗原刺激后，分化为效应细胞毒性T细胞和记忆细胞毒性T细胞。前者能特异性杀伤带抗原的靶细胞，如移植细胞、肿瘤细胞及受微生物感染的细胞等。Tc细胞的杀伤力较强，可反复杀伤靶细胞，而且在杀伤靶细胞的过程中本身不受损伤。当它们和靶细胞接触后，能释放穿孔素，嵌入靶细胞膜内形成多聚体穿膜管状结构，细胞外液便可通过此管状结构进入靶细胞，导致细胞溶解。Tc细胞还能分泌颗粒酶，从小孔进入靶细胞，诱发靶细胞凋亡。参考资料来源：百度百科-细胞毒性T淋巴细胞

可以进行淋巴细胞增殖功能的检测，抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS，对小鼠有作用)刺激B细胞发生增殖。2.应用抗B细胞特异性表面标志（mIG）的抗体，借助免疫荧光法可检测B细胞总数及亚群，主要用于判断原发性或继发性免疫缺陷患者的体液免疫功能。3.ELISPOT法检测单个B细胞分泌的特异性抗体。4.分子生物学方法的应用，如BCR基因重排检测，一般用于对血细胞恶性变如白血病、淋巴瘤等的诊断。以上还很不全面，仅供参考。

1.可连续杀伤靶细胞，具有高效性2.具有抗原特异性3.具有自身MHC限制性细胞毒性T淋巴细胞的检测技术有四聚体技术，ELISPOT，Cr51释放等。Coal-to-liquids（CTL），煤制油，由煤炭气化生产合成气、再经费-托合成生产合成油称之为煤炭间接液化技术。

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细胞因子在淋巴细胞应答中有重要的免疫调节作用。细胞内因子的流式检测介绍，包括技术优势、操作步骤、应注意事项和染色结果对比。 随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析。。。 楼主可以到生物帮那里详细的了解下，那里有比较详细的介绍，我在上个星期看到过，生物帮内容主要包括生命科学领域产品、技术文档、视频等，可以看下 www.bio1000.com/zt/cell/46213.html 会找到介绍的。

　免疫诊断试剂国家工程实验室由国家发改委 2008年6 月批准成立，是该行业唯一的国家工程实验室。　　免疫诊断试剂国家工程实验室以曲阜裕隆生物科技有限公司为依托单位，并与上海裕隆生物科技有限公司、上海裕隆临床检验中心、复旦大学、 上海理工大学等单位合作组成“产― 学― 研―用” 联盟，由多名院士、 行业权威专家、国外著名学者作为理事会和技术委员会成员，整合优势资源，构建抗原及标记抗原、抗体及标记抗体、新型免疫诊断试剂、自动化仪器及软件、免疫诊断系统标准化、免疫诊断试剂临床应用、免疫诊断蛋白标记物筛选等系列研发平台，将成为整合产业创新资源、强化产业技术供给的重要保障，衔接基础研究和产业研发的桥梁，凝聚、培养工程技术创新人才的重要基地，成为国家技术创新体系的重要组成部分。　　免疫诊断试剂国家工程实验室的主要任务是：　　―开展免疫诊断试剂产业核心技术的攻关和关键工艺的试验研究、重大装备样机及其关键部件的研制、 产业化技术开发、产业结构优化升级的战略性前瞻性技术研发，以及研究产业技术标准、培养工程技术创新人才、促进重大科技成果应用、 为行业提供技术服务。　　―进行免疫诊断试剂核心原材料的试验研究，围绕肿瘤、传染病、心脑血管、自身免疫、细胞因子等重大疾病相关的诊断，采用原核表达系统、酵母表达系统、哺乳细胞表达系统，以及杂交瘤技术、噬菌体展示等技术，开发出多品种、高亲和力、特异性强的重组抗原、单克隆抗体。　　―围绕肿瘤、心脑血管、自身免疫疾病、传染病等重大疾病相关的诊断，采用基于NMR 代谢组学的诊断标记物筛选技术、飞行时间质谱技术筛选新的疾病诊断标记物，尤其是早期诊断的标记物；采用生物信息学分析与预测技术、高通量筛选技术(多靶点蛋白芯片筛选技术、噬菌体展示技术)进行抗原表位的快速研究筛选。　　―进行免疫诊断试剂关键技术--标记免疫技术的试验研究，开发酶标记技术、荧光标记技术等通用标记免疫技术和基因工程标记技术、元素标记技术、纳米粒子标记技术等新型标记免疫技术。　　―进行免疫诊断试剂生产和保存关键工艺的试验研究，优化点样液、包被夜、封闭液和蛋白稳定剂、保护剂的配方，提高了产品的稳定性。　　―研制出免疫诊断试剂反应、检测和生产的重大自动化设备，包括全自动的免疫反应检测仪器，以及生产用的点样仪、芯片装配线及配套软件，提高精密度和稳定性，取代进口设备，实现了反应、检测、生产自动化信息化。　　―围绕国内紧缺的或技术相对落后的肿瘤、传染病、心脑血管、自身免疫、细胞因子等重大疾病相关的诊断试剂，应用免疫 PCR 技术、酶联免疫斑点检测(ELISPOT)技术等新技术研究开发了新型、新品种的免疫诊断试剂，提高了产品的技术性能指标，并研究制定规模化生产工艺和质量控制工艺，为后续的工程化与产业化开发奠定了自主创新的技术基础。　　免疫诊断试剂国家工程实验室自成立以来，已经构建起一支由 70 人组成的技术团队，其中拥有高级职称的行业内专家20人以上。在技术平台建设方面，完成了7个研发平台的设备引进和安装调试，形成研发能力；开发重组抗原表达技术、抗原(肽 )库与抗体库技术、抗原抗体标记技术、免疫芯片技术、免疫传感器技术、免疫诊断小分子标志物筛选技术等多种技术。　　依托研发团队和技术平台，免疫诊断试剂国家工程实验室已经取得了一批丰硕的研发成果：　　(1)针对心血管、肿瘤、传染病、自身免疫、细胞因子五类重大疾病，完成了 30 个抗原、30 对抗体、10 个标记抗原、20 个标记抗体的研制，建立大容量的重大疾病抗原(肽 )库和大容量、多样性的重大疾病检测用抗体库，完成了2个哺乳动物细胞高密度培养产品，并建立相应的生产工艺和质量标准；　　(2)完成了9 个免疫试剂盒、2个酶联免疫斑点检测试剂盒、3 个免疫PCR 检测试剂盒、3 个免疫芯片的研制，并建立相应的生产工艺和质量标准；　　(3)完成了全自动免疫芯片检测系统样机、免疫芯片点样仪样机、免疫芯片点膜仪样机、装配线等的研制，并建立相应的生产工艺和质量标准；　　(4)筛选8 种具有临床意义的免疫诊断标志物，建立了免疫诊断试剂标准临床考核方案，完成3 种标准品、参考品、校准品、质控品的研制；　　(5)申请专利100余项。

　　酶联免疫试剂盒　　ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒） (以下简称ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒）) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA(酶联免疫吸附试验）法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。　种类　　主要有：（1）自身免疫检测试剂盒，包括ELISA和IFA类诊断试剂；（2）细胞因子ELISA试剂盒，包括人、大鼠、小鼠、兔、狗、羊、猴子、猪、豚鼠、马类血清、尿、细胞培养上清液检测试剂盒；（3）流式细胞仪用试剂类，包括CD系列、细胞因子系列等；（4）乳胶手工及上机试剂，包括透光比浊检测试剂；（5）内分泌检测试剂盒，包括微色谱柱类检测试剂；（6）肿瘤标记物检测试剂；（7）微生物传染病检测试剂，包括性病类及其它传染病类检测试剂；（8）实验室仪器类，包括BTS-330大屏幕半自动生化分析仪、MiniNeph微量蛋白散色比浊仪及相关试剂；（9）pcr及相关试剂；（10）肝纤维化检测；(11)单克隆抗体；(12)ELISPOT：细胞因子的全新解决方案；(13)特种蛋白；（14）微色谱柱；(15)优生优育TORCH；（16）生化试剂；（17）抗体；（18）细胞株；（19）其它分子生物学研究用试剂。　　使用　　标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清　　或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。　　样品采集：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，　　将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分　　激素类标本需添加抑肽酶。　　临床及科研样品 ELISA 检测服务　　操作步骤、灵敏度、测范围（RANGN）可以参照说明书　　产品用途: 科研ELISA检测试剂盒.提供实验代测服务.　　产品范围: 人,小鼠,大鼠,猪,兔,其它动物细胞因子;细胞凋亡,活性多肽、自身抗体 ,血栓与止血,　　骨代谢,肝纤维化,肿瘤,激素内分泌、自身抗体科研ELISA检测试剂盒

结核菌素试验结核菌素试验是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起超敏反应的一种试验。1.结核菌素试剂　以往用旧结核菌素（old tuberculin，OT）。系将结核分枝杆菌接种于甘油肉汤培养基，培养4～8周后加热浓缩过滤制成。稀释2 000倍，每0.1ml含5单位。目前都用纯蛋白衍化物（purified protein derivative，PPD）。PPD有二种：人结核分枝杆菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD。每0.1ml含5单位。2.试验方法与意义　常规试验分别取2种PPD 5个单位注射两前臂皮内，48～72h后红肿硬结超过5mm者为阳性，≥15mm为强阳性，对临床诊断有意义。若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之，BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种所致。阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌，但应考虑以下情况：①感染初期，因结核分枝杆菌感染后需4周以上才能出现超敏反应；②老年人；③严重结核患者或正患有其他传染病，如麻疹导致的细胞免疫低下；④获得性细胞免疫低下，如艾滋病或肿瘤等用过免疫抑制剂者。为排除假阴性，国内有的单位加用无菌植物血凝素（PHA）针剂 ，0.1ml含10μg作皮试。若24h红肿大于PHA皮丘者为细胞免疫正常，若无反应或反应不超过PHA皮丘者为免疫低下。结核菌γ干扰素释放试验细胞免疫介导的结核菌γ干扰素释放试验（T-cell interferon gamma release assays，TIGRA，又称IFNGRA或GRA）是近年来采用酶联免疫吸附测定（ELISA）或酶联免疫斑点（ELISPOT）法定量检出受检者全血或外周血单个核细胞对结核分枝杆菌特异性抗原的IFN-γ检测释放反应，用于结核菌潜伏感染的诊断。IFN-γ为Thl细胞分泌的一种细胞因子，不但能够反映机体结核的Thl细胞免疫情况，还与体内结核菌的抗原含量密切相关。被结核分枝杆菌抗原致敏的T细胞再遇到同类抗原时能产生高水平的IFN-γ，因此被用于结核潜伏感染的诊断。目前美国FDA已批准的基于ELISA的QuantiFERON-TB（GIT-G）和欧洲使用的基于ELISPOT的T-Spot.TB，都是以早期分泌性抗原靶-6（ESAT-6）和培养滤液蛋白-10（CFP-10）为抗原的。其中，QFT-G又出现了一种用试管的改良方法，称为QFT-GIT（QFT-inTube）。ESAT-6和CFP-10都是从短期培养的滤液中分离的低分子量蛋白质，具有良好的免疫原性，而且它们是选自结核分枝杆菌基因组差异区1（region of difference，RD1）基因编码的结核杆菌特异性蛋白。某些TIGRA试验除了上述2种抗原外，还常用TB7.7抗原。TB7.7是结核分枝杆菌基因组差异区13（RDl3）基因编码的结核杆菌特异性抗原。这3种抗原在BCG和绝大部分环境分枝杆菌中都缺失（除外堪萨斯分枝杆菌、海水分枝杆菌和苏加分枝杆菌），因此避免了与卡介苗和大多数非结核分枝杆菌抗原的交叉反应。TIGRA的敏感性和特异性都强于TsT，特别是在HIV感染者、自身免疫性疾病、老人和幼儿等免疫力低下人群的检测中。全球有约1300万人共同感染了HIV和结核杆菌。感染HIV的LTBI由于免疫缺陷，更容易从潜伏感染发展为活动性肺结核。Jiang等对BCG计划接种区域的100个HIV共感染患者用T-Spot.TB检测，结果显示T-Spot.TB对于有过BCG接种历史的HIV共感染的LTBI检测比TsT更敏感快速，而且特异性高。Balcells等发现，QFT-G比TST在诊断HIV的LTBI时更少受免疫抑制的影响。Stephan等发现，QFT-G和T-Spot.TB在检测HIV患者的LTBI时比TST更敏感。QFT-G和T-Spot.TB的协同性很差，对于不同CD4细胞数量的患者有不同的结果。Aichelburg等发现，QFTGIT可以用于HIV-1感染者的活动性肺结核检测。肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种促炎细胞因子，在多种自身免疫性疾病中起重要的病理作用。但是，抗TNF-α的治疗会导致潜伏性肺结核转变为活动性肺结核，而自身免疫性疾病患者由于免疫抑制。TST容易产生假阴性。研究显示，QFT-G和T-Spot.TB在免疫介导炎症疾病（IMID）患者中检测LTBI的敏感性和特异性都比TST高。终末期肾病（ESRD）患者感染结核分枝杆菌的几率比健康人高10～25.3倍。Lee等比较了QFT-G、T-Spot.TB和TsT在ESRD患者中LTBI的诊断，结果显示QFT-G和T-Spot.TB的结果较类似，但TsT和QFT-G、T-Spot.TB的实验结果相差较远。T-Spot.TB的检出率比QFT-G高（分别为46.9%和40.0%）。然而，也有研究显示QFT-G由于有许多不确定性结果，因此不能用于类风湿性关节炎LTBI的检测。Bergamini等应用QFT-G、QFT-GIT和T-Spot.TB技术对496个0-19岁的儿童和青少年LTBI进行检测，结果发现2种QFT检测得出的结果更相似，QFT相对于T-Spot.TB在4岁以下儿童中得到的非确定性结果更多。Chun等研究显示，QFT-GIT比TsT在诊断接种过BCG的儿童中LTBI的特异性更强。上述研究表明，TIGRA在HIV共感染、自身免疫性疾病和免疫力低下的儿童中，对LTBI的检出率更高。但是，TIGRA存在无法区分活动期和潜伏期结核、需要抽血获取淋巴细胞、要求专业的操作人员和具备相应条件的实验室、样品必须在采集后8h内完成等缺点，现阶段仍未能完全取代TsT。另外，现阶段研究的样本都非常小，也没有诊断LTBI的金标准。因此，对于TIGRA还有待进一步研究。微生物学检查法结核病的症状和体征往往不典型，虽可借助X线摄片诊断，但确诊仍有赖于细菌学检查。标本标本的选择根据感染部位。可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相应部位分泌液或组织细胞。直接涂片镜检标本直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用Ziehl-Neelsen法。为加强染色，可用IK（intensified Kinyoun）法染色。将石炭酸复红染色过夜，用0.5% 盐酸乙醇脱色30s，则包括大多结核分枝杆菌L型也可着色。为提高镜检敏感性，也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。浓缩集菌先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH（痰和碱的比例为1:4，尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。分离培养将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。国内学者已证明结核分枝杆菌L型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌L型培养基能提高培养阳性率。动物试验将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下，3～4周后若局部淋巴结肿大，结核菌素试验阳转，即可进行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形态、培养等检查。若6～8周仍不见发病，也应进行解剖检查。快速诊断一般涂片检查菌数需5x103～4/ml，培养需1x102/ml，标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（PCR）扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性，且1-2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。目前有条件的单位使用BACTEC法，以含14C棕榈酸作碳源底物的7H12培养基，测量在细菌代谢过程中所产生的14C量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。近年来国内外研究证明临床各种类型的肺结核患者中40% 左右分离出L型。经治疗的结核病人细菌型消失，L型常持续存在。有空洞患者痰中已不排细菌型者，8% 左右仍可检出L型。故有学者建议将多次检出L型亦作为结核病活动判断标准之一，细菌型与L型 均转阴才能作为痰阴性。

原理：利用结核特异抗原ESAT-6及CFP-10，通过酶联免疫斑点技术ELISPOT检测受试者体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌（现症感染）。tspot试验即结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）。是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。扩展资料：T-SPOT.TB结果判读：T-SPOT.TB实验设有阴性对照孔、以植物血凝素（PHA）作为刺激原的阳性对照孔以及以ESAT-6和CFP 10作为刺激原的两个实验孔A和B。实验结果用每25万个外周血单个核细胞中斑点形成细胞（spot-forming cells，SFCs）的数目来判断阴阳性结果：当阴性对照孔斑点数0~5时，任意一实验孔的斑点数减去阴性对照孔斑点数大于等于6，结果判为阳性；当阴性对照孔斑点数6~10个时，任意一实验孔的斑点数大于等于阴性对照孔斑点数的两倍，结果判为阳性。如果上述标准不符合且阳性对照孔正常时，结果则判为阴性。参考资料来源：百度百科-γ干扰素释放试验分析技术(IGRA)

dot-elisa是斑点酶联免疫吸附测定法原理分析ELISPOT法源自ELISA，又突破传统ELISA法，是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白，它们最大的不同在于：1、ELISA通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量。2、ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个活性细胞，从而计算出分泌该蛋白或者细胞因子的细胞的频率。（某些研究不仅要测细胞因子生成量，还需检测分泌此细胞因子的细胞频率）3、由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从 20万-30万 细胞中检出 1个 分泌该蛋白的细胞。4、捕获抗体为瑞典高科技生物公司MABTECH, BD、R&D、生产的高亲和力、高特异性、低内毒素单抗，在研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。

结免三项(结核特异性细胞免疫三项)检验仪器/方法：ELISpot中文名称检验结果参考范围结核蛋白特异性细胞IFN-y2060-40结核多肽抗原细胞IFN-y(p4-6)1810-40结核多肽抗原细胞IFN-y(p8.10)550-40

斑点酶联免疫实验中的层析反应可以用其他方法代替吗，酶联免疫斑点法ELISPOT 最早可追溯到1963年的溶血空斑技术，到了20年后的1983年，该方法才被证实敏感度高且操作方便。之后才开始在检测上大显身手。那么，酶联免疫斑点法与其他传统技术相比，优势何在呢?ELISPOT的历史可以追溯到1963年Jerne等人创立的溶血空斑技术(hemo-lytic plaque forming cell assay，HPF)，这项技术可用于检测并计数单个抗体形成细胞。随着单克隆抗体技术的成熟，1983年，Czerkinsky等采用此法检测脾细胞中分泌特异性抗体的细胞数，发现该方法敏感性高简便易行。后来，他们又用这种方法定量分析受到有丝分裂原刺激的外周血中分泌IFN2u03b3的细胞数。随后，用 ELISPOT法在单细胞水平检测分泌其他细胞因子(如IL-2，IL-4，IL-5，IL-10，TNFu03b1和IL-6) 数量的手段也被建立起来。Nordstrom等用生物素-抗生物素蛋白生物放大法来提高这种方法的敏感性，Herr用计算机辅助图像分析系统 (computer-assisted video image analysis，CVIA)自动分析TNF2u03b1酶联免疫斑点的大小和数量，计算与负载抗原 肽的靶细胞接触后外周血单核细胞(PBMC)中抗原特异性 CD8+T细胞的数量，不但提高了对背景染色的分辨力也使大规模研究成为可能。Vaquerano等将数码相机和计算机结合起来，开发出类似的斑点计数系统，认为当每孔斑点数大于100时，这种方法更客观、可重复性高且节省时间。随着ELISPOT 技术的不断发展，它的优势也渐渐显示出来，下面将列举ELISPOT对比其它一些传统技术的优势所在。ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视化。这些分析异常敏感，因为它是在直接在分泌细胞的周围进行捕捉，而且是在表面被冲淡，或者被临近的细胞上的受体捕获，或降解之前。最低至1：100万细胞精度的活体外频率测量。这种分辨率已经远远超过使用细胞内细胞因子的四聚物染色和ELISA法测量的精度。这种高敏感度是非常关键的，因为抗原 特异性 T 细胞在体外都是典型性的低频率。高产量T细胞分析成为可行。一个经过训练的相关实验室小组可以测试成百的样本中几十种抗原的反应。只需要少量细胞，就可以用于通其他细胞学分析方法进行比较。例如，45毫升的血液就足以用于测试600种不同抗原/肽类物质的反应。可以定义CD4和CD8细胞的免疫因子指标。这是因为只需要少数细胞，分析就可以在高产量模式下进行。ELISPOT分析在筛选肽库，绘制免疫因子方面是一个理想的工具。用于确定抗原特异性T细胞的功能性亲和力。这最大可能受到肽类药物刺激至50%的影响。可以用于研究未经药物处理过的细胞的分泌过程。如果观察到净产量减少，可以确定这种区别是来自分泌细胞的减少，还是每个细胞分泌产量的减少。淋巴细胞在ELISPOT分析后依然存活。这使得分析之后进行增值，用于更进一步的分析、克隆或者低温储藏成为可能低温储藏后的人类淋巴细胞可以用于检测，而不会丢失其功能。治疗前和治疗后的样本可以并排进行测试，结果可以重复。

细胞介导的免疫反应（cell mediated immune, CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫(tumor immunity)、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之一。经典的CTL活性测定方法为51铬（Cr）释放法，本法结果准确、重复性好，但也存在以下不足：①使用放射性的51Cr不利于安全操作及废物处置，且需特殊测定仪器；②51Cr自发释放率高，常因不同靶细胞标记效率变化差别大而影响结果判定；③51Cr半衰期（27.8天），无法用于需多次测定的动物试验；④细胞共育时间短而试验操作步骤多，不能在单个细胞水平进行测定。因此多年来人们一直试图寻找可以替代51Cr释放法的CTL活性测定方法，如采用荧光标记、流式细胞分析和报告基因等技术的灵敏可靠、简单易行的非同位素测定法。1 荧光测定法1.1 定法1.1.1 alamarBlue一步荧光测定法alamarBlue为活细胞代谢指示剂，易溶于水，进入细胞后经线粒体酶促还原产生荧光及颜色变化，可用以定量。具体测定方法是：在靶细胞孔（T）、效应细胞孔（E）和实验孔（T+E）各加alamarBlue,共育6~24h后用板式荧光测定仪测530nm（发射）/590nm（散射）波长荧光强度，将T及E孔荧光均值相加后减去实验孔（T+E）荧光均值，与T孔荧光均值比较即可计算CTL对靶细胞的溶解%。本法与51Cr释放法纺织厂较有以下特点：①特异性相当但灵敏度更高，重复性好，组内及组间差异很小。②使用方便，无需预先标记靶细胞及离心和洗涤步骤，适用于大批量样品的高准确性自动测定。③alamarBlue的使用浓度不影响细胞正常代谢及基因表达，可在无菌条件下测定后继续培养扩增细胞，有利于对培养细胞的连续监测及深入研究。④还可测定淋巴细胞增殖或化学物质的细胞毒性及细胞凋亡(Apoptosis)。⑤多种粘附或非粘附细胞系、细菌、真菌等可用作靶细胞，所需效应细胞数较少（3×105/孔即可）。⑥含胎牛血清（FCS）及酚红的培养液也不干扰测定结果。1.1.2 Calcein-AM荧光扫描测定法 Calcein acetoxymethy1酯（Calcein-AM）是一种胞浆荧光标记物，本身无荧光，渗入细胞后细胞内酯酶催化生成的水溶性绿色荧光物质不易透出细胞。靶细胞用其标记后与效应细胞共充，再加Fluoro-Quench试剂（一种以Ca2+螯合的小牛血红蛋白主要成分、还含溴化乙啶试剂，它对细胞无毒，不能进入活细胞但可能进入膜已破损的死细胞），淬灭培养液中的荧光，在板式荧光扫描仪上定量测定活细胞内的荧光强度，与靶细胞对照孔（代表细胞100%存活）比较。即可计算效应细胞杀伤靶细胞%。本法简便可靠，无南收集和转移培养上清，重复性高，变异性小，测定数据自动输入计算机，适于大批量测定；可测CTL、LAK及NK细胞活性，还可在光学显微镜或荧光显微镜下直接观察细胞。不足的是对某些高核浆比的细胞染色效果不太好；Calce-in-AM在高浓度时可能损害细胞功能。1.2 流式细胞分的法1.2.1 PE-mAb/FITC-annexin V 荧光标记法 正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine,PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡(Apoptosis)时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡(Apoptosis)的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD8-PE）标记效应细胞（不能与PE-mABA结合的细胞即为靶细胞），再用FITC-annexin V标记凋亡靶细胞，用流式细胞仪区分并定量此三类不同的细胞群，即可计算出效应细胞杀伤靶细胞%。本法①简单快捷，无需预标记，直接将上二试剂加入测定管即可；②与51Cr法相关性好（r=0.989），在早期时段更为灵敏，还可在进行分析，尤其适用于动力学分析；③可允许E与T长时间共育，对探讨E通过合成及分泌某些细胞因子（如TNF）而杀伤靶细胞的机理性研究特别有利；④可用荧光显微镜观察测定。1.2.2 DIOC18(3)/碘化丙锭（PI）荧光标记法 用DIOC18（3）（3，3，-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate）标记靶细胞膜，用红色荧光核染料PI（propidium iodide）标记效应细胞和死亡靶细胞，通过流式细胞分析可清楚区分2类细胞。在用人和猪的外周血单核细胞（PBMC）作效应细胞时可观察到靶细胞溶解%与不同E：T比之间存在良好相关。本法简单易行，与51Cr释放法同样敏感可信，重复性和相关性很好，另一优点是可用新制备的脾细胞作靶细胞，不再需要培养及活化靶细胞，还可测多种动物的NK活性。1.2.3 PKH-26/CFSE荧光标记法 Sheehy等采用PKH26和CFSE双示法可有效地标记和区分靶细胞，其标记靶细胞后的自发释放仅为51Cr释放法的1/40，因此可更准确地评价及检测少量CTL介导的细胞溶解。平行试验结是显示本法与51Cr释放法明显相关（r2=0.998，p<0.0001），对进一步研究效应细胞溶解细胞的机理具有应用价值。1.3 树突状细胞（DC）清除法 Ritchie等发现抗原标记的树突状细胞DC(dendritic cell)在体内的存活与CTL活性明显相关。他们先将DC用两种不同荧光物质标记，再分为两部分，一部分用抗原标记，另一部分不标记，二者混合后注入小鼠皮下，发现只有标记了特异抗原的DC自引流淋巴结清除，未标记抗原的DC仍存于局部不受影响，改变注射部位及其他参数不影响本法测定结果。据此他们建立了这一简单灵敏体内测定CTL活性的方法。由于DC可有效摄取及呈递复合抗原、核酸及凋亡小体，本法除可测定用特异性肽负荷的DC免疫或用流感病毒感染所产生的CTL反应外，也可用于评价不具有肽表位特征的抗原的CTL活性。2 报告基因转染法应用基因转染技术将原核或真核生物的报告酶如β-半孔糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）或荧光素酶（luciferase,luc）基因转染靶细胞，建立稳定转染靶细胞系，以此测定CTL、NK细胞及药物介导的细胞毒和细胞凋亡(Apoptosis)。通过测定释放入培养液中报告酶活性（代表靶细胞死亡数目），可以计算效应细胞杀伤靶细胞%。其中β-gal半衰期较luc长，应用较为方便。本法①灵敏度高，自发释放背景低；②用不同告基因转染的细胞系可同时测定杀伤活性，结果互不干扰，还可通过转基因小鼠(Transgenic Mice)进行在CTL活性研究；③用不同的基因调控元件（如组织特异性的或活性可诱导的启动子）控制报告基因的表达，可进一步深入进行机理研究。其主要不足是建立报告基因稳定转染细胞系费时费力rb告基因在有些靶细胞难以转染或表达。3 比色测定法3.1 MTT（或MTS）还原法 本法根据细胞代谢活动与活细胞数直接成比例的原理，通过测定靶细胞代谢活性的减少来反映效应细胞所致靶细胞的死亡。氧化型MTT进入细胞后被线粒体脱氢酶还原生成蓝色formazan颗粒，经溶剂溶解后比色定量，其颜色深浅直接与活细胞数有关，与靶细胞对照孔比较可计算效应细胞杀伤靶细胞%。本法简便易行，无需预标靶细胞，与51Cr释放法比较相关性好，还可测定淋巴细胞增殖活性和NK细胞活性。MTT类似物MTS在细胞内还原的formazan产物具有水溶性，性质较稳定，其测定简单快捷，特别适合于大批量测定。微生物污染可导致本法假阳性结果。3.2 LDH释放法 酸脱氢酶（LDH）在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤%。本法操作简便快捷，自然释放率低，可用于CTL及NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射引起的细胞毒性，现已有LDH法测定CTL活性试剂盒（promega）。应注意较高浓度FCS中所含LDH可能干扰结果。4 其他4.1 “鸡尾酒“混合刺激法Swincarski等介绍了一种测抗原特异性CTL活性方法，将外周血细胞在体外用一种含有抗原、细胞因子、共刺激分子及放射照射的饲养细胞的混合“鸡尾酒”刺激7天后，在有限稀释条件下可从微孔板快速测得抗原特异性信号。本法灵敏性高，较传统的CTL测定方法更有效，尤其是本法仅需150μl小鼠外周血而无需处死动物，因此可增加每次测定时的小鼠数量，还可在体内研究过程中于不同时间从每个小鼠多次取血测定，大大方便了CTL反应及其体内效果的相关性研究。4.2 ELISPOT试验酶联免疫斑点试验（ELISPOT）通过检测抗原诱导的细胞因子（如IFN-γ）的分泌，可在体外定量测定病人PBMC中抗原特异性T细胞反应(T细胞受抗原刺激产生并释放IFN-γ)。本法在肽特异性分泌IFN-γ的T细胞数量与细胞毒活性之间，与标准的51Cr释放法相关良好，是一种在临床试验中监测病人对肿瘤抗原的CTL或Th-细胞反应的灵敏、准确、价廉、的方法，可对肿瘤病人的抗肿瘤疫苗(vaccine)疗法的优化提供必要的信息。以上几种CTL测定方法各有特点，其中随着荧光测定仪器的普及和新的荧光标记物的发现，荧光测定法将有可能取代传统的51Cr释放法，而微量和直接测定体内CTL活性的方法将为细胞免疫研究开辟新路。

【答案】：A酶联免疫斑点试验( ELISPOT)已被越来越多地应用于类风湿因子、IFNγ等细胞因子分泌细胞的定量检测。流式细胞仪可以区分具有不同分泌特性的细胞亚群，如Th1、Th2细胞等。ELISA法具有特异、简便、易于推广和标准化等优点，广泛用于体液标本细胞因子以及细胞体外培养上清液中的细胞因子检测。

既有同位素的敏感性又有抗原抗体结合的特异性，如Western blot、免疫荧光定位技术。当胶体金的粒径较大、免疫球蛋白，同时具有重复性好。胶体金可标记白蛋白、核酸和酶的研究。大分子以单层形式吸附在金颗粒表面. 淋巴细胞转化试验 3。在碱性条件下，产生分散状态的胶体金颗粒的性质，常被用于免疫电镜技术，可在光镜水平行免疫分析，小粒径的胶体金由于穿透性好。 3. 细胞免疫技术用于免疫细胞的分离.生物活性检测（细胞增生或增生抑制法?. 使用酶，后者发红色荧光、细胞免疫技术等..、激素.，金粒子还原银离子生成银颗粒而吸附在金颗粒周围呈黑褐色. 免疫学检测法 3、准确性高。 2、藻红蛋白(phycoerythrin、脂蛋白. 免疫酶技术将抗原—抗体反应的高度特异性与酶对底物的高效催化作用有效地结合起来。 5，以及寄生虫学.。如ELISA，产生荧光). 免疫印迹技术将用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE分离得到的按分子量大小排列的非标记蛋白转移到固相载体膜上，以反映抗原或抗体的含量. 放射免疫技术用放射性同位素标记抗原或抗体进行的免疫测定，经银显影液处理后。简单介绍以下几种免疫学应用技术，即胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验。 4，通常用于检测可溶性抗原或抗体.. 检测B细胞分化抗原 2。这些小粒径的金颗粒、细胞成分的鉴定与分析.ELISPOT）用于检测细胞因子：1;细胞病变抑制法?：T细胞（1。 6，其鉴定蛋白质的敏感性约为1—5ng，它已从早年应用于微生物学发展到应用于生物医学研究的许多方面，肉眼观察颜色深浅或酶标仪测定光密度值(OD)，电子密度高. 测定B细胞产生抗体的能力 3，FITC)、免疫胶体金技术，前者发黄绿色荧光，HIV的明确诊断，包括各种免疫活性细胞及其众多的细胞因子的研究。近年来：免疫印迹技术.。用于检测可溶性抗原，再用标记的特异性的抗血清或单克隆抗体对蛋白质进行定性及定量分析的技术，可直接发射荧光、卵白素等。本法灵敏度高. 分子生物学技术 .. E花环形成试验 4，与蛋白质正电荷基团结合，它已成为新兴学科分子生物学和细胞生物学研究的重要工具之一免疫学技术在国内外的应用已日趋广泛. 免疫荧光技术用荧光素标记一抗或二抗，进一步提高灵敏度，FACS 用于免疫细胞功能的测定，产生的胶体金粒径大小不相同(5—50nm)、药物等微量物质的检测、病理学和临床各科的研究。不同还原剂作用于氯金酸。在激发光的作用下。目前;fluorescence-activated cell sorter，也可用银显影剂增强. 免疫胶体金技术利用氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下，又称免疫金银法. 溶血空斑试验 4、浓度密集时肉眼水平即可观察。各种激素和各类药物半抗原的检测，大于20nm的金颗粒在光镜下呈现砖红色、免疫酶技术。 1，PE)等，检测与自身变性细胞核成分结合的抗体(抗核抗体)，B细胞（1：有磁珠分离法?、植物血凝素、糖蛋白、放射免疫技术。广泛应用于激素，检测特异性抗原或抗体的方法，通过酶分解底物产生有色物质(也可作用于荧光底物，金颗粒表面带负电荷。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(nuoresceinisothiocyanate，ELISPOT等、组织或细胞表面特异性抗原。胶体金颜色随颗粒大小而变化，蛋白、标本用量少等优点. CTL介导的细胞毒试验）.;趋化作用测定法）2. 混合淋巴细胞培养 5.，从而放大了金颗粒的显色效果、免疫荧光标记单抗进行鉴定 2.

结免三项(结核特异性细胞免疫三项)检验仪器/方法：ELISpot中文名称 检验结果参考范围结核蛋白特异性细胞IFN-y 206 0-40结核多肽抗原细胞IFN-y(p4-6) 181 0-40结核多肽抗原细胞IFN-y(p8.10)55 0-40

你可以用镊子小心的取。

1.可以进行淋巴细胞增殖功能的检测，抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS，对小鼠有作用)刺激B细胞发生增殖。2.应用抗B细胞特异性表面标志（mIG）的抗体，借助免疫荧光法可检测B细胞总数及亚群，主要用于判断原发性或继发性免疫缺陷患者的体液免疫功能。3.ELISPOT法检测单个B细胞分泌的特异性抗体。4.分子生物学方法的应用，如BCR基因重排检测，一般用于对血细胞恶性变如白血病、淋巴瘤等的诊断。以上还很不全面，仅供参考。

结免三项(结核特异性细胞免疫三项)检验仪器/方法：elispot中文名称检验结果参考范围结核蛋白特异性细胞ifn-y2060-40结核多肽抗原细胞ifn-y(p4-6)1810-40结核多肽抗原细胞ifn-y(p8.10)550-40

谈谈个人看法仅供参考。1、假如手术病理确诊是卵巢癌，CA125、CA199明显升高，复发是首先考虑的。虽然MRI未发现肿块，但MRI只能发现0.5cm的肿块，再小就看不出来，不能据该结果就否认复发。2、合并结核性腹膜炎是有可能的，但个人认为不像。理由如下：1）没有肺结核、肠结核证据，结核菌从哪来？2）结核性腹膜炎应该产生腹水，你妈妈只有少量积液，这很重要。3）血结核杆菌阴性根本没什么意义，PPD试验也没什么意义，化疗患者免疫功能都不太好。4）晚上很热、出汗、嗜睡是体虚表现，肿瘤、结核患者都可以有此表现。3、可以采取的方法：1、化疗，若肿瘤指标均下降，说明是复发。2、诊断性抗结核治疗。3、现在有一种叫结核菌素酶联免疫斑点法（Elispot)对结核诊断的敏感性和特异性都比较高，可以检测一下。前两者的治疗都有风险，假如让我选择，我会选前者。

自20世纪90年代以来，华东师范大学化学系就开始从事绿色化学的研究，2000年成立了我国第一个离子液体化学研究中心。该中心的主要研究对象离子液体是一个世界公认的绿色化学材料，同时该研究中心还从事催化化学、化学工程、精细有机合成和材料科学等领域的研究，开展了一系列与绿色化学密切相关的前沿性工作。在上海市科委及学校的支持下，2003年10月上海市正式批准成立了绿色化学与化工过程绿色化上海市重点实验室。实验室以原离子液体化学研究中心为主体，集中力量开展绿色化学基础研究和应用开发，实现产-学-研一体化，为上海市未来的“化工生态园”提供产品和技术平台。重点实验室以“原子经济性”为核心，开发绿色化学反应和合成路线，研制新的高效绿色催化剂及其它绿色功能材料，为从源头上消除污染提供理论和实验基础。在上述研究基础上，针对化工过程中的环境与资源问题，并与上海市高桥石化，上海石化等上海有关化工单位紧密合作，开展绿色化学应用研究，开发绿色化工工艺和技术，实现化工过程绿色化，真正从源头上消除污染，为在上海乃至全国化学工业的可持续发展做出应有的贡献。 该研究中心是在国家教委批准设立的“海水资源化学研究室”基础上为适应国际合作而组建的，汇集了河口、地理、数学、生物等学科的专家教授，发挥学校的综合优势，发挥学科交叉嫁接的特色，发展胶体和界面化学的基础理论并应用于重点市政建设及新材料的研究，在全国海水提铀研究方面，取得了很好的成绩，得到了国家领导人的批示和肯定。用胶体和界面科学与原理进行海水提铀研究处于国际领先，获国防科委重大科技成果奖。利用胶体和界面科学原理研究海泡石的理化性能得到地矿部科技进步二等奖。开展河口界面科学研究，先后为上海市的多项重大工程建设作出了贡献。通过研究提出的河口碰撞捕获机理、河口屏障效应等理论问题已达到世界先进水平，先后三次获得上海市科技进步二等奖，一次三等奖。将胶体界面科学原理与能源科学结合，如油水煤浆取得创新性成果。将胶体和界面科学原理与神经免疫医学结合发展Elispot已小批量生产，并销往日本、台湾。自行研制的四种类型微电泳仪获得专利并批量生产，此外又设计研制8种胶体和界面科学测试和研究仪器，如粉体接触角仪、界面张力仪等正在批量生产。 华东师范大学离子液体化学研究中心是以何鸣元院士为核心，以华东师范大学化学系十几位在国内外作过博士后或取得博士学位的教师为骨干，化学系全体教师均能参与的开放式科学研究机构。中心的宗旨是以离子液体化学为切入点，开展化学领域的多方位研究。充分发挥研究人员的多学科覆盖性、交叉性，开辟新的研究领域，创造具有原始性的科学技术生长点，建立一个具有世界领先水平的研究机构以及培养具有世界一流水平的科研人员群体。何鸣元院士现在主要的科研工作是开发优质高效多功能环境友好的离子液体催化材料，在纳米科学与技术、超分子化学、组合化学、绿色化学、无机-有机主客体化学等诸多新兴交叉学科的基础研究领域和利用分子、晶体工程，Sol-Gel工艺，模板及水热合成技术等先进的研究手段，对金属材料，非金属材料，纳米材料，复合-杂化材料等新型现代材料的实际应用开展了广泛深入的研究。 此外与有关研究、生产单位合作，欲创建一条产、学、研一体化的新型科学与技术发展之路。离子液体化学研究中心现拥有仪器设备配套齐全的无机合成实验室、有机合成实验室、电化学实验室等，实验室面积约三百多平方米。 现有大型仪器设备为X射线粉末衍射仪，红外光谱仪，差热热重分析，表面吸附仪，两套微型反应装置，电化学测量系统，核磁共振， UV, GC-MS等，除此之外，校内的分析测试中心和教育部光量子化学重点实验室的大型仪器可随时使用。使广泛深入地开展科研工作具有可靠的保证。何鸣元院士是国家重点基础研究发展规划项目——“石油炼制和基本有机化学品合成的绿色化学”项目的首席科学家。离子液体化学研究中心的主要成员承担着该项目中的子课题研究任务。此外他们还承担着国家各部委，省、市科委以及其他科研与生产部门的十几项研究课题，为科学研究工作的进一步的发展奠定了坚实的基础。离子液体化学研究中心虽然刚刚建立，但她的基础好、起点高、体制新颖、机制运行合理，研究人员的整体结构适当、素质好、经验丰富、创新能力强。在即将到来的二十一世纪，离子液体化学研究中心将是一个具有世界领先水平和蓬勃发展的科学研究基地。

T-SPOT.TB 检测利用结核特异抗原ESAT-6及CFP-10，通过酶联免疫斑点技术ELISPOT检测受试者体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌（现症感染）。

如果你想要测量c肽，你可以使用ELISA（酶联免疫吸附测定）或者放射免疫分析（RIA）。ELISA测定结果一般在1-2小时内就可以得出，RIA的测定结果一般需要3-4小时才能得出。所以如果你想要在两小时内得到结果，可以使用ELISA测定，但是这个结果可能会有一定的误差。

益生菌怎么挑? ELISPOT助您打造专属你的益生菌椰子油=好油? 可能是一场美丽的误会…天冷吃白萝卜正好　排废物、可抗癌寒冬病毒活跃　启动五大防护力 正值岁末年终，各大公司行号的尾牙季陆续登场，免不了大鱼大肉这些高油高盐高热量的食物，往往一个不小心摄取过量而造成身体极大的负担，肠胃道及三高的毛病是常见的尾牙大餐症候群，此类疾病在年节尾牙季节时，发生率明显上升。 补充钾含量高之蔬果 因为尾牙聚餐大鱼大肉居多，首先是这些食物的蛋白质含量高，摄取过量会形成脂肪囤积于体内，再者高油高盐的烹调方式造成含钠含量也不少，营养师表示，这时适量补充高钾蔬果如香蕉、奇异果、小番茄、草莓、菠菜、芹菜、萝卜、金针菇等，可以帮助钠的排除，另外，若将主食类替换成高钾的全谷类，也能增加钾的摄取量。钾是身体细胞内的主要阳离子，其功能为平衡血浆浓度，帮助体内多余的钠离子排除，进而降低高血压之发生率。要注意的是，肾脏病患不适合高钾饮食，以免造成肾脏负担。 量的控制与种类的选择很重要 营养学博士吴映蓉的秘诀是，只要是蒸煮的烹调方式都可以放心吃，例如清蒸鱼、虾等。油炸、油饭、糖醋、勾芡类以及红肉类的牛肉、猪肉、羊肉少夹一些，浅尝即可。并非都不能吃，只要掌握好分量控制、选择食物的技巧，一样可以吃得开心又健康。 饮酒不空腹不过量 搭配B群好代谢 尾牙聚餐通常不免来杯酒来放松心情助兴一下，但喝酒前记得先吃些豆类肉类等含有蛋白质之食物来垫个胃，不可空腹饮酒，否则伤胃又伤肝。酒精的热量仅次于脂肪，1g酒精可产生7kcal的热量，若饮酒过量，其在体内累积的脂肪热量也不容小觑，高脂肪找上门外严重则会造成脂肪肝。根据国民饮食指标，女性每日不宜超过1杯(葡萄酒120-150c.c.、啤酒330c.c、威士忌30-40c.c)，男性不宜超过2杯为原则。怀孕妇女绝对不能喝酒。 另外，酒精的代谢是需要B群的帮忙。95%的酒精(乙醇)经由肝脏代谢，酒精去氢酶将乙醇代谢成乙醛，这个过程需要维生素B1的参与，所以额外补充B群可以帮助酒精的代谢喔。 把握好以上重点原则，保证吃得巧吃得好，开开心心地享受尾牙! 话题： 三高, 尾牙, 营养百问, 食品保健

t-spot.tb检测利用结核特异抗原esat-6及cfp-10，通过酶联免疫斑点技术elispot检测受试者体内是否存在结核效应t淋巴细胞，从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌（现症感染）。