western

目的蛋白的含量只要达到皮克级别就能检测到～一般为纳克量～如果说上样体积～体积要根据梳子大小来定～普通的小胶一般为10ul～20ul体积～

用植物细胞做western blot 首先液氮保存叶片样品，用的时候研磨粉碎，再用蛋白提取液浸泡离心取上清 上清样品可以先去做定量检测 之后在样品中加上样缓冲液就可以进行western blot检测了

根据你的样品,要检测的蛋白等来决定 一般蛋白浓度在20ug - 80ug 不等 marker的话2-5ul足够了.

做贼瞒不得乡里，偷食瞒不得舌齿。

主要是两点不同：抽提方法不同。利用不同的抽提试剂或方法，分离不同的组分用于检测，可以有助于提高检测灵敏度。使用的内参会有所不同，因为蛋白分布位置和特性不同，选用传统的胞内蛋白内参可能不能真实反应样品制备过程中的蛋白得率，所以膜蛋白和核蛋白的内参需要分别再选取。

Western blot 与 Western blotting 是一样的 都是指蛋白质印迹法，具体怎么用好像也没有什么强制的要求，可以写成 Western blot 也可以写成Western blotting。简单一点写成 Western 也没有关系，或者缩写成 WB 也可以

理论上Western blot的抗体是可以用来免疫沉淀的但是免疫沉淀是在相对较弱的变形条件下进行抗原和抗体的识别，这时候蛋白质还保留着大部分的三级结构。如果用单抗IP有可能不能识别起有效的抗原决定簇位点而Western blot则是在变性条件下进行的，抗原决定簇都已经暴露，所以比较容易被单抗所识别所以用Western blot的抗体来做免疫沉淀有较大失败的可能性

western blot实验都需要的基础仪器有：电泳仪，制胶板，电泳槽，湿转的转膜槽或者半干转仪，脱色摇床，暗室，X光片，红外灯，成像仪，一些基础耗材和试剂等基本上生化实验室要做western blot还是很容易的

正常表达量的蛋白上20ug足够了对于过表达的蛋白，10ug也够了一般上样浓度调整到1ug/ul，这样可以保证上样体积不会太大超过孔的体积而溢出。

在做westernblot实验中，会用到固相载体（如nc膜，pvdf膜），在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。封闭液封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。【摘自网络】

原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体（一抗）结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物，再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。

western blot操作流程如下：1、收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。2、电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制。SDS-PAGE凝胶（分离胶及浓缩胶）可以参考一些文献资料进行配制。(2) 样品处理。在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。3、转膜(Transfer)（1）我们推荐在Western实验中选用PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纤维素膜比较脆，在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA。（2）在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。 转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春 。

westernblot原理及过程如下：Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。

[u02c8westu0259n] [u02c8pi:pl] 精锐五角场英语组

Nowadays , western festivals are so hot in China .The festivals mainly incorporate Christmas Day , Valentine"s Day , April Fool"s Day ,etc . When these festivals come along , many young people become quite exuberant .They exchanges gifts with classmates , friends , colleagues , valentines. They chat , sing , and laugh happily .And they go to the pubs and restaurants . When Christmas falls , there are a variety of decorates such as Christmas trees , miscellaneous toys , vermilion hats , little candies , elaborate cards , blessings, ribbons and festoons in various stores , the campuses , offices , houses, etc . And on Valentine"s Day , the streets are stuffed with cerise roses . People send boxes of chocolates, diamond rings , and write love poems to the their beloved . And they sit drinking the grape wine in the bar and kissed each other on the streets . To cut long story short , many young people are really fascinated by the western festivals . While some stress is actually necessary for you to function at your best, too much takes a mental and physical toll. it"s necessary to learn to manage stress levels to prevent anxiety, depression and other conditions.You can turn bad stress into something positive, to energize your life and advance your goals. Just follow these steps:write down everything you have to do when you"re feeling overwhelmed; concentrate on one task at a time; manage your energies wisely, prioritize your workload and put in less effort for low-priority jobs, and avoid expending energy on unimportant tasks; Take small breaks during work; exercise regularly to maintain your health and release stress, or take up a hobby. Don"t push your self too hard, cause healthy is much important than anything.望采纳 呵呵

My favorite western holiday. My Favorite western holiday is Halloween! It"s on the

1.pizza（泛指披萨不可数）2.B【上文提到过什么东西了，才用none】比如：Are there any pencils in your bag？——None求采纳！谢谢【俊狼猎英】

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巴黎哪里火车站呀？巴黎好几个火车站，你查一下地铁吧，巴黎去哪儿都可以地铁，方便。

westlife是来自爱尔兰的合唱团，由shane kian nicky bryan mark五位优秀的年轻人组成。早在1998年，boyzone的经济人louis walsh发现shane、mark、与kian共组的6人体，他决定继bz后再组一个团，在都柏林办微试，找到nick和bryan，重新整合成5人组合。walsh找ronan来为他们上"艺人养成课"，原本取名westside并且已经累积相当人气，但是因为美国有一个同名团，为了避免纠纷，也为了将来进军美国，在1999年正式改名为westlife。当时的westlife在1998年底为11月加入偶像杂志的巡回演唱会(smash hits road show)，也和师傅boyzone五年前一样，获得该杂志「best new act award最佳演出新人奖」。 Westlife的前身可以说是IOU，由其成员Shane和Mark先后认识了Kian，Nicky和Bryan后组队，Westlife的成名可谓英格兰岛上的又一传奇，他们以清纯的外表和抒情流行的演唱风格，一经出道就夺取了千百万欧陆少年的心，其势头不可阻挡，就连外来的成功组合Back Btreet Boys和N"SYNC等等都难以招架。成为续take that和boyzone以来又一支令人疯狂热爱的男孩组合。

My faVorite western holidays is Christmas ,let me tell you someting about it.On December 25, people around the world celebrate the birth of Jesus Christ. Some people celebrate by giving gifts. Children may be thanking Santa Claus for new toys. They may also be going to church with their families. Christmas has so many traditions and symbols associated with it, that it"s hard to determine exactly how it came to be the celebration it is todayAh! Christmas morning! Children like to wake up early while it"s still dark and sneak into the living room to check the presents----find any with their name on it, shake them to guess what"s inside, and then maybe they"ll go back to bed and pretend they are still asleep when their parents come to wake them with a "Merry Christmas!"All in all,I like Christmas best

非常好的酒店，特别是服务非常好。早晚有车接送去展馆，还能接送机。甚至班车已开走的情况下，该酒店老总亲自开车送我到展馆，非常感动。另外，酒店装潢及卫浴都不错，按照四星的标准来做。非常温馨。电视频道也比较齐全。

楼主可以自己先写然后再让大家改嘛.

Chinese Food Vs Western Food"When you are in Rome, do what the Romans do" - this saying applies to food in Shanghai as well. According to my personal experience, to have Chinese food in Shanghai is much nicer and cheaper than to have Western style food.We went to a Chinese Seafood restaurant just outside of Xintiandi Friday night. The food was very nice - fresh and delicate. We had some cod with crab meat, prawn rolls, chicken soup, fish soup and a Chinese vegetable dish. The total price was RMB190. We were so stuffed and satisfied after dinner. ( We didn"t have any alcohol because the Chinese tea was very nice.)The next morning (Saturday) I was craving for Banana Pancakes,so we decided to go to Xintiandi again to try our luck. Fortunately it didn"t take us long to find a place in Xintiandi serving Banana pancakes and other western style breakfast. We ordered a Banana Pancake and a big breakfast. The drinks were free. The pancakes weren"t very nice because they were made too thick and heavy and the flour they use wasn"t too good either. Brad didn"t like his big breakfast much either. When we asked for the bill, it was RMB150.Comparing the previous night"s Chinese dinner with the western style breakfast, we realised that going to a nice Chinese restaurant in Shanghai, you can get much better value and food than going to a western style restaurant . The food in those western restaurants always taste a bit funny ( un-genuine); it is like they are trying to cook to the western standard, but they just don"t get some easy secrets of cooking. ( The chefs are normally Chinese to save cost.)When I was in Sydney, I sometimes went to China Town to have some Chinese food. However I was never really happy with the Chinese food there - they just don"t taste right!So I suggest, when you are in one country, just go to the local restaurants. That"s part of the fun of travelling, isn"t it?

所有这一切意味着什么，我们的文化走向一个新的方式开展业务，特别是其重要的业务。其话语的性质变化之间的界线是什么商业和什么是不是越来越难看到日新月异。u2022祭司和总统，我们的医生和律师我们的教育工作者，和新的scasters需要担心的不是满足他们的纪律要求比好的技巧的要求。u2022hadirving柏林改变了他的著名歌曲标题一个字，他会一直为预言，但更简洁，作为上。他只需要写：没有但演艺事业。

下面的解释，很对！哈哈

1、指示剂，方便观察电泳进行的程度；2、密度大，携带你的样本沉到孔的底部；3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态

经济 文化 制度 的差异

好抗体