western

western 确实是形容词，不过，英语可以用形容词来充当名词，表示那一类的人或物。the Western 可以表示整个西方国家，也可以表示 西方人。其他例子： the young 年轻人 the old 老年人。western 和 young， old 一样，有大写和不大写的时候。也不是什么时候都大写的。 大写，是因为专指西方人，或西方国家。

因为转膜的时候时间比较长，在电场的作用下，系统会发热，发热以后会造成样品的降解，导致后续实验当中检测失败。所以不光转膜，有很多过夜的抗体孵育工作，都是在4c条件下进行的，最大限度的保证样品的完整性。

WESTERN UNION是一种近乎实时到帐的快速汇款方式。在中国，只有农业银行和邮局与西联公司签订了合作协议，也就是说，在中国，想要办理此项业务，只可以去这两个地方办理。在国外，比如加拿大，美国，在超级市场里面就设有兑付地点，很方便。如果你想往国外汇钱，你只需要拿着你的身份证（最好带一份复印件，否则排半天队，叫你去复印，很麻烦的）和美金就可以了。（西联只可以汇美金）当然，你要让对方告诉你它的收款地点，和与他的身份证件相符的名字的正确拼法。地点有的国家要求很详细，有的国家，比如美国，只要具体到州就可以。当然，由于中国现在是外汇管制国家，不允许不受限制的汇出汇款，故一般以2000美元为限。如果是学费，境外援助等有证明的，可以要求西联公司给与授权。需要用美元缴纳手续费，由于速度较快，手续费较高。但不是以汇款金额作为费率的正比，当工作人员入机后，机器会自动反显手续费得金额。完成后，工作人员会返回你一联汇款单，上面有一个十位数的监控号，把它提供给收款人，提示收款就可以了。

西方的餐馆

west[英] [west][美] [wu025bst]n.西，西部，西方adj.在西方的；西部的；朝西的；（风）来自西面的adv.向西，朝西；自西方；向西方western[英] [u02c8westu0259n][美] [u02c8wu025bstu0259n]adj.西方的；欧美的n.西部电影，西部小说；西方人为你解答，敬请采纳，如果本题还有疑问请追问，Good luck!

能。根据查询中国科学网站得知，westerngard规则可以通过单值质控图进行简单的数据分析和显示，具有低的假失控或假报警概率(1%或更小)，且联合规则的假失控概率也很低，可以显示多批号的质控图。

相信大家正在使用的硬盘中就有西部数据的产品。本周西部数据将正式宣布完成对闪存厂商闪迪SanDisk的并购。双方最初交易价格约为190亿美元，因并购者之一紫光股份在2月份对西数15%股份的收购，导致最终交易价格降低了15%左右，也就是160亿美元左右。据AnandTech报道，西部数据已正式完成对SanDisk的收购。继对全球第三大闪存制造商的收购案后，这家美国计算机数据存储公司有望成为全球最大的存储解决方案提供商之一。西部数据首席执行官SteveMilligan将继续担任CEO，SanDisk公司联合创始人、总裁兼首席执行官SanjayMehrotra将出任西部数据董事会成员。据AnandTech报告，西数公司将控制40%的机械盘市场、10%左右的SSD市场及相当大份额的NAND闪存市场。然而对于存储商之间的挑战，各个新晋的存储巨头也在崭露头角，时代在进步，存储技术也不断完善，巨头亦将面临许多挑战。若不对其产品线进行精简，将很难保持在东芝、希捷、三星、英特尔、EMC、HPE等友商的竞争上游。

Best Western是世界上最大的酒店品牌之一，拥有超过4000家酒店和度假村。该品牌在全球范围内拥有广泛的覆盖率，但是在美国是最受欢迎的。据统计，Best Western在美国有超过2000家酒店，遍布全国各地。其中最多的城市是拉斯维加斯，该城市拥有30多家Best Western酒店，这些酒店位于市中心、赌场区和机场附近。其次是洛杉矶，这个大城市拥有超过20家Best Western酒店，分布在市中心、好莱坞和圣塔莫妮卡等地。此外，纽约市、芝加哥和迈阿密等大城市也拥有不少Best Western酒店。总的来说，Best Western在美国的覆盖范围非常广泛，无论是商务旅行还是休闲旅行，都可以找到适合自己的酒店。

跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀，造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡，造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰，造成条带迁移率不统一另外上样量过大，被其他泳道挤压也有可能

变为west，南方。

膜上有蛋白缺损点，不用蛋白封蛋白缺损点容易出现非特异染色。也可用BSA封，效果并不比脱脂奶粉好。脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜，避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。

western转膜胶的方向是向上转移。Western转膜胶在使用时需要注意其转移方向，转移方向是从胶膜底部向上转移。原因是Western转膜胶的背面覆盖有一层底纸，用于保护胶膜和保持其粘性。在使用时，需要将底纸撕下，将Western转膜胶贴在待转印的蛋白质膜上，然后用适当的条件进行转印。转移过程中，蛋白质会被吸附在Western转膜胶上，并随着胶膜的剥离而转移到目标膜上。因此，转移的方向应该是从胶膜底部向上，以保证转印的效果和成功率。

做western条带老是出现反白可能的原因是化学发光是个耗能过程，局部能量消耗过大，导致能量不足，也就发不出光了，所以条带反白。降低一抗、二抗浓度，蛋白上样量也可以降低。

western读音：英 ["westu0259n]美 ["westu0259rn]。adj. 西方的；西洋的；西部的。n. 西方人；西部片；西部小说。How does Chinese chess differ from western chess?象棋和西洋棋有什么不同?I"d love to,but I don"t know much about Western music.我倒想去，但我对西洋音乐了解不多。用法：western的意思是“西方的,西部的,在西方的,在西部的”,指世界或一国之西,也可指某地属于或在西部,有时大写。western在句中主要用作定语,偶尔也可用作表语。western无比较级和最高级。western, west这两个词都可作“在西方的,西部的”解。其区别在于:west重点在于形容方位或指从西方来的; western则指从某一固定点看西方,也可指从某物、某地朝西方看。

高级游客 级 酒店Located on the border of Kentucky and Illinois, guests staying at the Best Western Paducah Inn can visit Metropolis, the official Home of Superman. Stay at this recently renovated Paducah, Kentucky hotel and enjoy convenient access to Paducah International Raceway and so much more. Enjoy the stunning natural surroundings at Kentucky Lake, Lake Barkley and Kentucky Lake Dam or delight in the area"s rich history at the National Quilt Museum, Railroad Museum, Whitehaven Mansion and Historic Downtown Paducah. Want in on the area"s action? Harrah"s Casino, Carson Four Rivers Center, McCracken County Fairgrounds, Corvettes on the River and Paducah International Raceway are close by. Indulge in some retail therapy at Kentucky Oaks Mall it"s just seven miles away from this Paducah KY hotel. Other favorite area attractions include Drake Creek Golf Club, Kingsway Skateland, Calvert City Race Track, Western Waterlands and the Challenger Center for Space Science Education. Those in the area for work will love that this Paducah hotel provides just a short commute to so many of the area"s businesses, including Lourdes Hospital, Honeywell"s Metropolis Works Plant, and the CocaCola plant. Barkley Regional Airport is just 15 miles away, allowing for stressfree travel.You"ll feel like you never left home when you stay in these newly renovated, clean rooms at this awardwinning Paducah hotel. Our accommodations ensure a comfortable stay, as we offer free wireless Internet access, a coffee maker, a microwave, a refrigerator, satellite television and much more. Before heading out for a big day, fuel up with our complimentary full hot breakfast. Unwind or play in our seasonal outdoor pool. Be sure to also take advantage of the guest laundry, free parking and exercise facilities during your stay.飞猪上还可以查看更多有关于BEST WESTERN PADUCAH INN的介绍和玩法还有周边的景点

which do you prefer western food or chinese food?why 翻译：你更喜欢西方食物还是中国的食物?为什么? 我的回答：I prefer chinese food China is very famous for its food in the world.In the north of China,people eat a lot of noodles and dumplings.In the south of China,people eat a lot of rice and seafood.Chinese food is good in color,flavor and taste.They are very delicious .So I like it very much. 翻译如下： 我更喜欢中国食物 中国的食物在世界上很出名.在中国的北方,人们吃大量的面条和饺子.在中国的南方,人吃了大量的大米和海鲜.中国食品的色、 香、 味俱全.他们非常可口.所以我很喜欢它. 科技英语强手团

Chinese food: noodles, milk, dumplings, tea Western food: hamburger, donut, French fries, pizza, milk

L/C:信用证付款;D/A:承兑交单;D/P:见单付款;T/T:电汇;下面两个具体就不清楚了,应该不是付款方式.

Western Union是西联汇款，MoneyGram是速汇金。都是国际汇款服务商，区别在于西联汇款支持网点较多、手续费稍高，但是可以在线查看汇款状态；速汇金不能在线查看汇款状态，网上查询合作银行网点也不方便（都是英文）。其实区别不大，到账速度都很快，基本是即时到账。纯手工，望采纳。

L/C在目前的贸易中使用的比较多一些。说有利，关键是不好比较，比如T/T，如果全部货款做前T/T，当然对卖方有利。但从对买卖双方都比较公平的角度来说，使用信用证较好，而且对卖方较有利。

西部数据，硬盘品牌，还可以

does 在这里代替的是前文中的receives

这是英语。 意思是 西方人

vector那一列是对照，Flag-那一列是样品。随着时间的变化，在对照和样品间蛋白表达量的变化。其中alpha-tublin是内参，表示在样品和对照间，其他无关蛋白的量并不随着时间点不同产生变化，所以如果有不同，就是由于时间造成的。

make one*s way 艰难前行；排除困难前进 back into 返回进入到。句子意思；

The culture of food and dining in the West is a little different from that in China. The proper western dinner at a fine restaurant is one of manners, focusing on conversation. You are expected to have knowledge of table manners such as what folk or knife to use as these are essential in western dining. The meal would consist of several courses including a soup or salad, an appetizer, the main dish, and a dessert. The atmosphere will be filled with light music that would only serve as background as people converse with each other. The decorations are usually sparse and are only meant to highlight the atmosphere that is being created by the music. This type of dining is different from the dining experience in most restaurants in China. However, with the increase in internationalism, more restaurants are opening which reflect the more western dining style. The Chinese people, now more affluent and knowledgeable about international customs, are beginning to join in this dining experience. This is not to say that people have given up the deep richness in culture that Chinese food represents. It only means that more choices and tastes are becoming available to population. This represents a significant improvement as it will change the perception that the height of western dining is fast food. As cultural communication expands, knowledge of western food will improve.

PayPal ebay的网络银行国际间的贸易用这个E-Gold 网络银行 这个不用做国际间贸易Wired Transfer电汇Check支票Moneybookers网络银行

西方的方法..

使用stripping buffer 可以去除一抗和二抗，然后可以重新利用膜。我用stripping buffer之后还是做同一种抗体，只不过根据ECL效果调整抗体浓度。和重新跑胶、转膜相比，呵呵，能节省点时间。由于重复使用，蛋白信号会有一定减弱，所以我一般用三次，感觉还可以。网上很多配方，可以自己配的。

常用的抗体公司一般有Santa cruz，sigma，abcam。可以比较一下各公司的抗体浓度，来源，单抗还是多抗，是否纯化，等等。 个人觉得，抗体浓度高的比较好，经过纯化的多抗比较好。还可以查一下文献里都用什么。

首先应参考说明书上的规定 实验后若信号强且背景黑 则需要降低浓度

第一 电泳80V，和120V不是用一定的时间，得注意目的蛋白跑到了哪里，万一跑脱了呢第二 如果不知道胶上的具体情况，可以加标记第三 上样量应该不是问题，只是想问问你用的梳子是几个槽的，怎么能加到80ul以上仅供参考

这个需要自己摸索,每个公司和每个蛋白都不一样,我的做法,先从1:500开始,如果在其他条件都没问题得情况下（比如上样量、二抗背景）,如果荧光很强,你可以稀释,如果条带淡或者白板,那么你就得增加,比如1:100.一般CST1:500就可以了.Abcam的我用到1:100

　　Deep in the Amazon forest, thousands of people still live in isolation from the rest of the world.　　In a recent press release, the Brazilian government confirmed the existence of another isolated tribe of about 200 people living in the Vale do Javari reservation. The 200 people living in the Vale do Javari reservation. The reservation, located near the Peruvian border, is about the size of Portugal. At least another 14 isolated tribes, with a total population of about 2000, call the area home.　　The newly observed group lives on four large straw-roofed buildings and grows corn, peanut and other crops.　　Brazil"s National Indian Foundation (BNTF) first noticed the reservation in the forest using satellite maps, but it wasn"t until April that an airplane expedition was able to confirm the tribe"s existence. “The work of finding and protecting isolated groups is part of Brazilian public policy,” said the BNIF officer for Vale do Javari, Fabricio Amorim. “To confirm something like this takes years of hard work.”　　BNIF estimates there are 68 isolated tribes living in the Amazon. The organization uses airplanes to avoid disturbing the tribes through personal contact, but that doesn"t mean others are so respectful of their right to privacy.　　Illegal fishing, woodcutting and hunting bring people into the protected area. Oil exploration on the Peruvian side of the border is another threat. All kinds of criminals also invade the lands of the local groups, said Amorim. The outsiders can damage the land and influence the cultures of indigenous(土著的)peoples. They can also bring diseases which can wipe out the whole population that still lack even basic antibiotics(抗生素).　　Brazil"s indigenous peoples won the legal right to their traditional lands in Brazil"s 1988 Constitution, which stated that all indigenous lands shall be divided and turned over to tribes within five years. Indigenous groups now control 11 percent of Brazil"s territory, including 22 percent of the Amazon.　　Allowing indigenous groups the right homelands is not just a matter of human rights. The rest of the world can benefit from their knowledge. Mark Plotkin has spent years living with the people of the Amazon and learning from their traditional healers. In his lecture, he pointed out that many useful materials and knowledge, including numerous drugs, can be gained from listening to the indigenous groups of the Amazon. Besides this, they are also more effective at protecting the land, and less expensive, than hired rangers(护林人).　　1.The underlined word in the first paragraph probably means “a state of ”.　　A．separation　　　　B．interaction　　　　C．satisfaction　　　　D．excitement　　　　2.From the passage we can learn that the tribes in the Amazon forest .　　A．only live on a reservation designated for them　　　　B．prefer straw-roofed buildings to wooden ones　　　　C．keep contact with the outside world through airplanes　　　　D．have the legal right to the land they live on　　　　3.Which of the following is TRUE according to Amorim?　　A．Privacy violation is common among the Amazon tribes.　　　　B．The laws dividing the lands of the tribes are far from enough.　　　　C．Modern civilization endangers the tribes and their cultures.　　　　D．It is hard to make public policy to protect primitive tribes.　　　　4.The last paragraph is mainly about .　　A．the lost human rights of the indigenous peoples　　　　B．the benefits of protecting the primitive tribes　　　　C．the value of traditional healing　　　　D．the indigenous peoples as guardians of the Amazon forest　　　　1.A　　2.D　　3.C　　4.B　　【解析】　　试题分析：　　1.A 推理题。根据本句Deep in the Amazon forest, thousands of people still live in isolation from the rest of the world.说明这些人住在亚马逊雨林的深处，与世隔绝。故该词指隔开，故A正确。　　2.D 细节题。根据倒数第二段第1,2行Brazil"s indigenous peoples won the legal right to their traditional lands in Brazil"s 1988 Constitution,说明这些人有合法权利住在他们生活的土地上。　　3.C 推理题。根据文章倒数第三段Illegal fishing, woodcutting and hunting bring people into the protected area. Oil exploration on the Peruvian side of the border is another threat. All kinds of criminals also invade the lands of the local groups, said Amorim. The outsiders can damage the land and influence the cultures of indigenous(土著的)peoples说明新世界的文明正在慢慢侵蚀这些土著居民的生活和文化。　　4.B 主旨大意题。文章主要讲述的是要保护那些原始的土著居民。特别在最后一段中还提出了这样做很多的好处。　　考点：考查新闻类阅读

手译的,I am a driver on a western highway 我是西部高速公路上的司机From the mountains and to the sea 从山上到海边And there"s a song on the western highway 有一首歌流传在西部公路Saying I will be free 说我将自由The sky is fading to the color of the valley 天空的颜色消退到像山谷的色彩一样Dust of angels, and dust of dreams 天使的尘土，梦想的尘土Your city lights will shine until tomorrow 你的城市灯光会一直照到明天And I will not be here 但我不会在这cho: Your light is brighter than 你的光比Anything I"ve ever seen 所有我见过的光都要亮I hear your voice on every station 我在每一站都听到你的声音Singin" out of your dream 唱出你的梦By the roadside the trees are shiverin" 在满栽颤抖的树的路边Black and silver in the cool night air 在冰凉的夜空中黑而闪亮And under the moonlight hear a song you"re singin" 在月光下我听到你的歌唱Sayin" I will meet you there 说我会那里等你[repeat Chorus] Here I am on the road again 我又在路上了The song began and then in the end 歌儿开始又结束I"ll be standin" by the sea 我站在海边I am a driver on a western highway 我是西部公路上的司机From the mountains and to the sea 从山上到海边And there"s a song on the western highway 在西部公路上流传着一首歌Sayin" I will be free.诉说着我会自由

Western效果还不错，因为它的背景信号弱，检测灵敏度低，所以扫描出来的图都是比较漂亮的。用的二抗其实也不算很贵，只是比普通的会贵一些，但是推荐稀释15000-20000倍，而普通的是稀释5000，所以这样算下来会比普通的更便宜些，具体价格你可以找国内的公司询一下价格。另外值得一提的是，用Odyssey系统的话，不需要买发光检测试剂盒(这个还是非常贵的)。所以，Odyssey还是可以考虑考虑的。

western，指地球意义上的，整体上的，（位于）西部的欧洲，也可以说东方的中国west 指有参照物的，比如自己或者国家，中国的西方（向），

Bio-rad化学发光成像系统操作规程： 一．目的 为规范Bio-rad化学发光成像系统的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保Bio-rad化学发光成像系统正常运转，特制定本程序。 二．适用范围 本程序适用于Bio-rad化学发光成像系统操作。 三．责任 1. 本程序的实施者为Bio-rad化学发光成像系统操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由Bio-rad化学发光成像系统操作者负责。 四．内容 1. 打开成像仪器电源，将样品放入工作台。 2. 双击桌面上图标，打开Quantity One 软件，或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入。 3. 从File下拉菜单中选择ChemiDox XRS，打开图像采集窗口。 4. Select Application 选择相关应用： a UV Transillumination 透射UV：针对DNA EB胶或其他荧光； b White Transillumination 透射白光：针对透光样品如蛋白凝胶，X-光片； c White Epillumination 侧面白光：针对不透光样品或蛋白凝胶； d Chemiluminescnece 化学发光，不打开任何光源。 5. 单击Live/Focus按钮，激活实时调节功能，此功能有三个上下键按钮：IRIS（光圈），ZOOM（缩放），FOCUS（聚焦），可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节，调节步骤： a调节IRIS至适合大小； b点ZOOM将胶适当放大； c调节FOCUS至图像最清晰。 6. 如是DNA EB胶或其他荧光，单击Auto Expose，系统将自动选择曝光时间成像，如不满意，单击Manual Expose，并输入曝光时间（秒），图像满意后保存。如是蛋白凝胶，接第5步骤直接将清晰的图像保存即可；如是化学发光样品，将滤光片位置换到Chemi位（仪器上方右侧），将光圈开到最大，输入Manual Expose时间，可对化学发光的弱信号进行长时间累积如30min，或单击Live Acquire 进行多帧图像实时采集，在对话框内定义曝光时间长短，采集几帧图像，在采集的多帧图像中选取满意的保存。五．注意事项：1. 请勿将潮湿样品长期放在暗箱内，以防腐蚀滤光片，更不要将液体溅到暗箱底板上，以免烧坏主板。2.使用后将平台擦干净，以防有水损坏CCD；切胶时在平台上垫上保鲜膜，以防划损平台。3.仪器使用完后请及时关闭电源，特别是ChemiDox XRS的CCD电源。4.只有在进行化学发光实验时才需要提前打开冷CCD预热30min再使用，其他操作无需预热。请勿使用控制成像仪的电脑上网，也不要自行重装电脑操作系统或给操作系

我不是大人，我是三年级学生。

Western blot 与 Western blotting 是一样的 都是指蛋白质印迹法，具体怎么用好像也没有什么强制的要求，可以写成 Western blot 也可以写成Western blotting。简单一点写成 Western 也没有关系，或者缩写成 WB 也可以

看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品. 如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了,如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子. Western-blot的理论检出限很低,可以低至皮克级,但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素.

电泳后会显示一个条带,这个散开的条带可以： 1 在SDS-PAGE中监测蛋白的迁移； 2 确认转膜效率； 3 根据marker的条带估计分子量； 4 确定目的蛋白位置.

做WESTERN BLOT，根据不同的样品并没有最佳封闭的严格标准常用封闭做法有1%BSA 溶解在1xTBST中常温封闭2小时，或者4度封闭过夜5%的脱脂奶粉溶解在PBS中37度封闭2小时，或者室温封闭过夜具体要结合自己的WESTERN BLOT实验做调整

蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。以Yrdimes半干转印槽为例，将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后，与胶块一起夹到转印槽内，通电进行电转印。一般来说湿转相对半干转印速度上要慢，设备成本上半干转印槽也相对更贵。通常小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。

RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、ECL发光检测液、预染蛋白Marker、Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)-HRP、脱脂奶粉、PBS缓冲液、SDS上样缓冲液、电泳缓冲液、转膜缓冲液、TBST缓冲液、PVDF膜。。。等等太多了。一个Western blot试剂盒足以了，Elabscience WB试剂盒一个全搞定，你可以了解下。

一，蛋白质变性的定义　　蛋白质变性（proteindenaturation）：蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，这种现象称为蛋白质变性。二，蛋白质变性的原因　　变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热、紫外线及x射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等.盐对蛋白质的作用表现为盐析即在蛋白质中加人大量中性盐以破坏蛋白质的胶体性，使蛋白质从水溶隆中沉淀析出，其实质是破坏蛋白质胶体的水化膜豆腐制作利用的就是盐（石膏和盐卤等）使蛋白质变性的作用。在豆浆中加人氯化镁或硫酸钙．豆浆在70"c以上即可凝固。腌咸鸭蛋，也是盐使蛋白质变性的典型例子。盐对蛋白和蛋黄所表现的作用并不相同，食盐可以使蛋白的豁度逐渐降低而变稀，却使蛋黄的豁度逐渐增加。而变稠凝固，即使蛋黄中的脂肪逐渐集聚在蛋的中心，从而使蛋黄出油。盐的存在还可使蛋白质的热变隆速度加快。蒸蛋羹，如果不加盐蛋不易蒸好。因为未加盐，蛋白质变性的速度较慢，同时不容易凝固。煮肉汤、炖肉，通常要后加盐，原因就是一开始加盐会使肉表面蛋白质迅速变性凝固，蛋白质凝固时在肉表面形成一层保护膜，既不利于热的渗透，也不利于含氮物的浸出。烹鱼时，先用盐码味，使鱼体表面的水分渗出，加热时蛋白质变性的速度就会加决，鱼不易碎．也有利于咸味的渗透。而面团中加人少量盐，则可使面团筋力增强。

做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量，没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话，至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液（即10微升上样）根据这个数量级，结合western blot结果进行调整即可确认做western blot需要多少细胞

western blot被称作半定量因为它一般被用来测相对值，即实验组的蛋白表达相对于对照组增加或减少了多少。定量分析的话则是得出一个绝对的量

western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量化不外乎是在肉眼可见的基础上在给出一个数值的参考而已。所以说western blot结果的分析是一个主观性比较强而且需要综合考虑的过程

转膜转过去了吧，估计你得好好调整转膜时间，9Kda蛋白转膜估计你用跑50Kda 的时间的1/4-1/3时间就差不多了。 再者 丽春红然不出来，并不代表做不出来。丽春红的灵敏度有限~~~

1L DDW，Tris 7-9 12.14g，NaCL 87.7g，加盐酸调整PH-7.5，（如制备0.2%TBS/tween，再加20mg tween20，混匀即可）定容10L。 要注意PH值，很重要的。可以储存备用。

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。 所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。 western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。 western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化

western blot实验都需要的基础仪器有：电泳仪，制胶板，电泳槽，湿转的转膜槽或者半干转仪，脱色摇床，暗室，X光片，红外灯，成像仪，一些基础耗材和试剂等基本上生化实验室要做western blot还是很容易的

去买试剂盒，详情参见试剂盒内说明书。基本步骤参见《分子克隆》

酶联免疫吸附实验(ELISA) ，蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot都是抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。原理都是靠免疫学的抗原抗体结合，二抗上带酶，通过与底色反应显色。区别的话WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。WB只能用抗体去检测你的蛋白样品。ELISA可以固定抗原也可以固定抗体。WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。

蛋白免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上， 用得最多的材料是硝酸纤维素膜(NC 膜)和 PVDF 膜， 蛋白转移的方法多用电泳转移 （转移电泳） ，它又有半干法和湿法之分，现在大多用湿法。第三步是用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。免疫检测的方法可以是直接的和间接的。现在多用间接免疫酶标的方法，在用特异性的第一抗体杂交结合后，再用酶标的第二抗体（碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗第一抗体的抗体）杂交结合，再加酶的底物显色或者通过膜上的颜色或 X 光底片上暴光的条带来显示抗原的存在。该技术被广泛应用于蛋白表达水平的检测中。

westernblot中蛋白样品调节浓度有很多方法先检测出各个蛋白样品的浓度，根据体积通过不同单位的Loadingbuffer将样品稀释成不同的体积，即可以保证各个蛋白样品浓度一致或者在样品裂解的时候，用裂解液或者PBS去稀释蛋白样品，达到调节浓度的目的

你是不是发了两次问啊？

westernblot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。

看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品。如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了，如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子。Western-blot的理论检出限很低，可以低至皮克级，但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素。

第一： 要配制小分子胶。这个配方你去查一下应该可以查的到。我们实验室只有手写版，没有电子版。不过我们老早貌似也是从文章上面抄下来的。小分子胶有三层。 第二：小于20KD的话建议选择0.2um的 硝酸纤维素膜进行转膜。其余都是一样的。

在做Western blot实验中，会用到固相载体（如NC膜，PVDF膜），在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。封闭液封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。【摘自网络】

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量化不外乎是在肉眼可见的基础上在给出一个数值的参考而已。所以说western blot结果的分析是一个主观性比较强而且需要综合考虑的过程

Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。　　蛋白质分析中应用的W estern杂交法与DNA分析应用的Southern杂交法相似，均是把电流分离的组分从凝胶转移至一种固相支持体，并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。　　对于蛋白质来说，通常使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于，它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上，随后用和灵敏检测系统相偶联的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而又无需像免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时，Westernblot法极为有用。此外，由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行，因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。

如果蛋白表达的改变在蛋白水平，而非在RNA或者DNA水平，比如蛋白修饰，用Southern印迹杂交或Northern杂交方法是检测不出来的，此时用western blot就可以。另外，大多数的功能都是在蛋白水平才有意义。而且western blot的检测相对更为准确。

原理WesternBlot与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。操作步骤（一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000g离心15min。取上清液作为样品。（二）电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。（三）转移：（半干式转移）1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次。2、膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中10min。3、转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2，转移1.5hr。转移结束后，断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化

免疫组化的蛋白是具有空间构想的立体结构～而western的蛋白都是经过变性处理及线性结构～所以抗体有时不能通用～

原理 Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。分类 Western Blot显色的方法主要有以下几种： i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。其他 值得一提的是，western blot 这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来类似的出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。

什么是Westernblot法：Westernblot法是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术，可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性，是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。 Westernblot法应用：Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 蛋白质分析中应用的Western杂交法与DNA分析应用的Southern杂交法相似，均是把电流分离的组分从凝胶转移至一种固相支持体，并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。 对于蛋白质来说，通常使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于，它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上，随后用和灵敏检测系统相偶联的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而又无需俊免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时，Westernblot法极为有用。此外，由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行，因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。 伯乐生命bio-rad Trans-Blot 转印槽是一种多功能仪器，适用于多种Westernblot法应用。多组参数灵活可设，可调节的电压设置（从30V的过夜转印到到 200 V的1 小时快速实验）。电极间距设置为8cm可用于标准转印，设置为4cm用于高强度转印。采用特级冷却芯和水循环冷却装置来调节温度－是天然酶（4°C）或高强度转印的理想选择，随着转印时间增加（多达24小时），不会引起缓冲液耗竭。

Western blot(也称为蛋白质免疫印迹)是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留下与目标蛋白质结合的抗体,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。相关如下：原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体（一抗）结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。

蛋白质印迹（免疫印迹试验）即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981所著《析物化》（Analytical Biochemistry）首称Western Blot蛋白免疫印迹（Western Blot）电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量，没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话，至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液（即10微升上样）根据这个数量级，结合western blot结果进行调整即可确认做western blot需要多少细胞

0.2 左右能看到

做westernblot不需要纯化蛋白的选择高特异性选择性的一抗，可以识别并结合目的蛋白，其他杂蛋白不和一抗结合，这样即使样品中目的蛋白纯度很低，最后印染出来的依然是单一条带的目的蛋白。

前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。

需要根据胶的大小及孔道大小决定上样量的体积～蛋白量的话，western的检出限达到皮克级别～目的蛋白几纳克即可～总蛋白量几百纳克即可～

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化