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免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。 所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。 western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。 western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化
westernblot原理及过程
westernblot原理及过程如下：Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。2023-07-15 12:49:211
western blot操作流程
western blot操作流程如下：1、收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。2、电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制。SDS-PAGE凝胶（分离胶及浓缩胶）可以参考一些文献资料进行配制。(2) 样品处理。在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。3、转膜(Transfer)（1）我们推荐在Western实验中选用PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纤维素膜比较脆，在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA。（2）在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。 转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准，通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春 。2023-07-15 12:49:421
western blot 的工作原理
原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体（一抗）结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物，再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。2023-07-15 12:50:532
western blot中封闭起什么作用
在做westernblot实验中，会用到固相载体（如nc膜，pvdf膜），在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。封闭液封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。【摘自网络】2023-07-15 12:51:072
Western-blot实验中,蛋白上样一般多少含量
正常表达量的蛋白上20ug足够了对于过表达的蛋白，10ug也够了一般上样浓度调整到1ug/ul，这样可以保证上样体积不会太大超过孔的体积而溢出。2023-07-15 12:51:172
western blot实验都需要哪些仪器
western blot实验都需要的基础仪器有：电泳仪，制胶板，电泳槽，湿转的转膜槽或者半干转仪，脱色摇床，暗室，X光片，红外灯，成像仪，一些基础耗材和试剂等基本上生化实验室要做western blot还是很容易的2023-07-15 12:51:271
western blot 的抗体能用于免疫沉淀吗
理论上Western blot的抗体是可以用来免疫沉淀的但是免疫沉淀是在相对较弱的变形条件下进行抗原和抗体的识别，这时候蛋白质还保留着大部分的三级结构。如果用单抗IP有可能不能识别起有效的抗原决定簇位点而Western blot则是在变性条件下进行的，抗原决定簇都已经暴露，所以比较容易被单抗所识别所以用Western blot的抗体来做免疫沉淀有较大失败的可能性2023-07-15 12:51:491
Western blot 与Western blotting一样吗一个小白的提问
Western blot 与 Western blotting 是一样的 都是指蛋白质印迹法，具体怎么用好像也没有什么强制的要求，可以写成 Western blot 也可以写成Western blotting。简单一点写成 Western 也没有关系，或者缩写成 WB 也可以2023-07-15 12:51:561
膜蛋白和核蛋白做western blot有什么不同
主要是两点不同：抽提方法不同。利用不同的抽提试剂或方法，分离不同的组分用于检测，可以有助于提高检测灵敏度。使用的内参会有所不同，因为蛋白分布位置和特性不同，选用传统的胞内蛋白内参可能不能真实反应样品制备过程中的蛋白得率，所以膜蛋白和核蛋白的内参需要分别再选取。2023-07-15 12:52:032
western blot实验都需要哪些仪器
做贼瞒不得乡里，偷食瞒不得舌齿。2023-07-15 12:52:222
请问做western blot技术跑蛋白EPCR的分子量是多少
1. western blot每孔上样总量15-50ug大部分蛋白能做出来，跟蛋白质表达量、分子量、抗体效价都密切相关。 2. 组织一般取200mg，匀浆后蛋白常能得到几百ug，跑十块胶足够。2023-07-15 12:52:311
western blot时每个孔道到一般加多少样品蛋白溶液和Mark,样品蛋白浓度是多少?
根据你的样品,要检测的蛋白等来决定 一般蛋白浓度在20ug - 80ug 不等 marker的话2-5ul足够了.2023-07-15 12:52:381
用肝组织怎么做western blot
用植物细胞做western blot 首先液氮保存叶片样品，用的时候研磨粉碎，再用蛋白提取液浸泡离心取上清 上清样品可以先去做定量检测 之后在样品中加上样缓冲液就可以进行western blot检测了2023-07-15 12:52:571
做Western blot 一般需要多少上样量
目的蛋白的含量只要达到皮克级别就能检测到～一般为纳克量～如果说上样体积～体积要根据梳子大小来定～普通的小胶一般为10ul～20ul体积～2023-07-15 12:53:062
免疫组化和western blot的区别
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化2023-07-15 12:53:171
做Western blot 一般需要多少上样量
需要根据胶的大小及孔道大小决定上样量的体积～蛋白量的话，western的检出限达到皮克级别～目的蛋白几纳克即可～总蛋白量几百纳克即可～2023-07-15 12:53:261
SDS-PAGE和Western blot 有什么不同
前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。2023-07-15 12:53:331
western blot试验tbst可以回收吗
做westernblot不需要纯化蛋白的选择高特异性选择性的一抗，可以识别并结合目的蛋白，其他杂蛋白不和一抗结合，这样即使样品中目的蛋白纯度很低，最后印染出来的依然是单一条带的目的蛋白。2023-07-15 12:53:412
western blot时每个孔道到一般加多少样品蛋白溶液和Mark,样品蛋白浓度是多少?
0.2 左右能看到2023-07-15 12:53:513
请教：用培养的细胞做western
做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量，没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话，至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液（即10微升上样）根据这个数量级，结合western blot结果进行调整即可确认做western blot需要多少细胞2023-07-15 12:54:001
检测蛋白质表达量的实验方法有哪些，western-blotting的原理，方法
蛋白质印迹（免疫印迹试验）即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981所著《析物化》（Analytical Biochemistry）首称Western Blot蛋白免疫印迹（Western Blot）电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面2023-07-15 12:54:091
western blot原理
Western blot(也称为蛋白质免疫印迹)是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留下与目标蛋白质结合的抗体,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。相关如下：原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体（一抗）结合。由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。2023-07-15 12:54:312
什么是Westernblot法及Westernblot法应用
什么是Westernblot法：Westernblot法是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术，可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性，是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。 Westernblot法应用：Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 蛋白质分析中应用的Western杂交法与DNA分析应用的Southern杂交法相似，均是把电流分离的组分从凝胶转移至一种固相支持体，并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。 对于蛋白质来说，通常使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于，它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上，随后用和灵敏检测系统相偶联的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而又无需俊免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时，Westernblot法极为有用。此外，由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行，因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。 伯乐生命bio-rad Trans-Blot 转印槽是一种多功能仪器，适用于多种Westernblot法应用。多组参数灵活可设，可调节的电压设置（从30V的过夜转印到到 200 V的1 小时快速实验）。电极间距设置为8cm可用于标准转印，设置为4cm用于高强度转印。采用特级冷却芯和水循环冷却装置来调节温度－是天然酶（4°C）或高强度转印的理想选择，随着转印时间增加（多达24小时），不会引起缓冲液耗竭。2023-07-15 12:55:151
western blot 的原理及操作步骤、应用有哪些?
原理 Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。分类 Western Blot显色的方法主要有以下几种： i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。其他 值得一提的是，western blot 这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来类似的出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。2023-07-15 12:55:252
免疫组化和western blot的区别
免疫组化的蛋白是具有空间构想的立体结构～而western的蛋白都是经过变性处理及线性结构～所以抗体有时不能通用～2023-07-15 12:55:351
免疫组化和 western blot 有什么区别
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化2023-07-15 12:55:512
westernblot的原理及操作步骤，应用有哪些
原理WesternBlot与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。操作步骤（一）蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000g离心15min。取上清液作为样品。（二）电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。（三）转移：（半干式转移）1、电泳结束后将胶条割至合适大小，用转膜缓冲液平衡，5min×3次。2、膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，浸入转膜缓冲液中10min。3、转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压500g重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2，转移1.5hr。转移结束后，断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。2023-07-15 12:56:072
我想知道Western Blot技术的应用及意义是什么
如果蛋白表达的改变在蛋白水平，而非在RNA或者DNA水平，比如蛋白修饰，用Southern印迹杂交或Northern杂交方法是检测不出来的，此时用western blot就可以。另外，大多数的功能都是在蛋白水平才有意义。而且western blot的检测相对更为准确。2023-07-15 12:56:162
Westernblot法的Westernblot法应用
Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 蛋白质分析中应用的W estern杂交法与DNA分析应用的Southern杂交法相似，均是把电流分离的组分从凝胶转移至一种固相支持体，并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。 对于蛋白质来说，通常使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于，它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上，随后用和灵敏检测系统相偶联的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而又无需像免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时，Westernblot法极为有用。此外，由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行，因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。2023-07-15 12:56:351
western blot结果怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量化不外乎是在肉眼可见的基础上在给出一个数值的参考而已。所以说western blot结果的分析是一个主观性比较强而且需要综合考虑的过程2023-07-15 12:56:501
Western Blotting是什么
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。2023-07-15 12:56:593
western blot中封闭起什么作用
在做Western blot实验中，会用到固相载体（如NC膜，PVDF膜），在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，同样以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有”封闭“的说法。同样这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固的结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。封闭液封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。【摘自网络】2023-07-15 12:57:071
请教western blot膜再生strip的原理
1。stripping buffer 含有适量的sds，在低ph值或适当的温度下，可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开。2。完全可以用同一种抗体再杂交一次。我的经验是同一张膜stipping3次就差不多了，而且用同一种一抗，信号强度是一次比一次递减的。2023-07-15 12:57:152
如何做好westernblot
第一： 要配制小分子胶。这个配方你去查一下应该可以查的到。我们实验室只有手写版，没有电子版。不过我们老早貌似也是从文章上面抄下来的。小分子胶有三层。 第二：小于20KD的话建议选择0.2um的 硝酸纤维素膜进行转膜。其余都是一样的。2023-07-15 12:57:221
Western-blot实验中，蛋白上样一般多少含量
看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品。如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了，如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子。Western-blot的理论检出限很低，可以低至皮克级，但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素。2023-07-15 12:57:311
western blot怎么做定量分析
westernblot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。2023-07-15 12:57:411
- 免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。westernblot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。westernblot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化2023-07-15 12:57:501
western blot中目的蛋白分子量
你是不是发了两次问啊？2023-07-15 12:58:122
SDS-PAGE和Western blot 有什么不同
SDS:十二烷基硫酸钠 一种表面活性剂 PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳 用于分离蛋白质和寡糖核苷酸2023-07-15 12:58:221
处理western blot 蛋白图怎样处理
westernblot中蛋白样品调节浓度有很多方法先检测出各个蛋白样品的浓度，根据体积通过不同单位的Loadingbuffer将样品稀释成不同的体积，即可以保证各个蛋白样品浓度一致或者在样品裂解的时候，用裂解液或者PBS去稀释蛋白样品，达到调节浓度的目的2023-07-15 12:58:291
western blot的实验原理(详细的)
蛋白免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上， 用得最多的材料是硝酸纤维素膜(NC 膜)和 PVDF 膜， 蛋白转移的方法多用电泳转移 （转移电泳） ，它又有半干法和湿法之分，现在大多用湿法。第三步是用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。免疫检测的方法可以是直接的和间接的。现在多用间接免疫酶标的方法，在用特异性的第一抗体杂交结合后，再用酶标的第二抗体（碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗第一抗体的抗体）杂交结合，再加酶的底物显色或者通过膜上的颜色或 X 光底片上暴光的条带来显示抗原的存在。该技术被广泛应用于蛋白表达水平的检测中。2023-07-15 12:58:392
免疫组化和 western blot 有什么区别
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。2023-07-15 12:58:491
免疫印迹与elisa和western blot有什么区别，似乎原理差别不大，谁能细致说说
酶联免疫吸附实验(ELISA) ，蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot都是抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。原理都是靠免疫学的抗原抗体结合，二抗上带酶，通过与底色反应显色。区别的话WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。WB只能用抗体去检测你的蛋白样品。ELISA可以固定抗原也可以固定抗体。WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而Elisa无能为力，一锅端了。2023-07-15 12:59:072
western blot 具体操作步骤
去买试剂盒，详情参见试剂盒内说明书。基本步骤参见《分子克隆》2023-07-15 12:59:362
求助做western需要哪些仪器设备
western blot实验都需要的基础仪器有：电泳仪，制胶板，电泳槽，湿转的转膜槽或者半干转仪，脱色摇床，暗室，X光片，红外灯，成像仪，一些基础耗材和试剂等基本上生化实验室要做western blot还是很容易的2023-07-15 12:59:441
WESTERN BLOT 中的TBST是怎么配的呢？谢谢啦？
1L DDW，Tris 7-9 12.14g，NaCL 87.7g，加盐酸调整PH-7.5，（如制备0.2%TBS/tween，再加20mg tween20，混匀即可）定容10L。 要注意PH值，很重要的。可以储存备用。2023-07-15 13:00:032
关于小分子蛋白的Western-blot问题，实验时的胶浓度，电压，转膜条件等等
转膜转过去了吧，估计你得好好调整转膜时间，9Kda蛋白转膜估计你用跑50Kda 的时间的1/4-1/3时间就差不多了。 再者 丽春红然不出来，并不代表做不出来。丽春红的灵敏度有限~~~2023-07-15 13:00:262
western blot结果应怎么分析
western blot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带，有无条带就是一个定性的结果，这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。然后就是有条带之后，各个条带灰度值的分析，而对其灰度值的量化不外乎是在肉眼可见的基础上在给出一个数值的参考而已。所以说western blot结果的分析是一个主观性比较强而且需要综合考虑的过程2023-07-15 13:00:351
Western blot 结果为什么叫半定量?具体有什么意义
western blot被称作半定量因为它一般被用来测相对值，即实验组的蛋白表达相对于对照组增加或减少了多少。定量分析的话则是得出一个绝对的量2023-07-15 13:00:571
做western blot 需多少心肌组织
做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量，没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话，至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液（即10微升上样）根据这个数量级，结合western blot结果进行调整即可确认做western blot需要多少细胞2023-07-15 13:01:041