western

可能的原因有， maker加的量少，半干法转膜的时候转缓液加多了，maker没有保存好，如长期放在室温分解了，也可能是跑电泳的胶的问题。跑胶的时候电压越小条带相对弥散些，不过还不至于maker不清楚。

首先要明白，marker和内参不是一种东西。Marker是用来标定蛋白或者DNA大小的。内参对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。pcr产物检测一般marker就可以了。不用内参。western一般全都要用。免疫组化检测蛋白偏重于蛋白在细胞及组织中的表达分布，定量较为不精确。所以要根据你实验的目的选择实验方法。

在Western实验中，蛋白Marker可以监控蛋白质在SDS-PAGE中的迁移，监控蛋白的转膜效率，确定蛋白分子量大小。选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必备条件之一。蛋白Marker分为两种：一种是未预染的Marker，即宽分子量蛋白标准，高分子量蛋白标准及低分子量蛋白标准；另一种是预染的Marker，即单色预染和多色预染。 一、未预染蛋白Marker 未预染的蛋白Marker是最简单，也是最准确的一种，由于没有附带染料分子或者标记大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数选用预混合的marker，方便不同大小蛋白的比较。 二、预染蛋白Marker 预染蛋白Marker是一些纯化较好的蛋白混合物，通过与染料共价偶联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染Marker的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时，电泳后，以及转膜后检测电泳情况和估计迁移率。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价偶联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白。 同科生物现货供应即用型的蛋白Marker，无需煮沸可以直接上样，而且条带尖锐，颜色稳定，转膜效率高。

歌曲名:Hey Mamma歌手:Westernhagen (Wea)专辑:WesternhagenCam"ron - Hey MaHey ma, what"s up, lets slide, all right, all rightAnd we gon get it on tonightYou smoke, I smoke, I drink, me too, well goodCause we gon get high tonightGot drops, got Coups, got Trucks, got juice, all rightCause we gon take a ride tonightSo ma, what"s up, let"s slide, all right, all rightAnd we gon get it on tonightYo, Now I was downtown clubbin", ladies nightSeen shorty she was crazy rightAnd I approach baby likeMa, What"s your age and type?She looked at me and said use a baby rightI told her, I"m 18 and live a crazy lifePlus I"ll tell you what the 80"s likeAnd I know what ladies likeNeed a man that"s polite, listens and takes adviceI could be all three, plus I can lay the pipeCome with me come stay the nightShe looked at me laughin", like boy your game is tightI"m laughin" back like show you rightGet in the CarAnd don"t touch nothing Sit in the carLet discuss Somethin"Either we lovin" or I"ll see you tommorowNow we speeding up the WestsideHand creepin" up her left side, I"m ready to do itReady to bone, ready for dome55th exit, damn, damn, already we homeNow let"s get it onNow That I got a girl, my Ex wanna holla and spitTold me to acknowledge her quickShe like Cam stop frontin"On that Dave Hollister TipCome over lets swallow and sipI"m like momma that"s itI promise you dick, usually have a problem with chicksThey all say I"m rotten and richBut not her, booby"s realHigh heel dooby feel, plus got them Gucci nails, uhYou a cutie still, and this my down girl tooAin"t no groupie dealWe left the movies with Uzies, Suzuki wheels,To the Jocose, I tell you my booby"s realI mean she do be winning, luey spinninGo to the crib she got the Gucci linen"I see booby grinningShe looked and said Cam, I know that you be sinningNaw, I"m a changed man, look at the range maimI got a whole new game planLooked and said that"s nothing but game CamShe was right; she was up in the Range manDroped her off at the L, now I"m flippin" the cellThat"s right I had to call up LYou L, what up, I hit, what else, plus dome, say wordAnd we got it on tonighthttp://music.baidu.com/song/7403567

western显色的方法主要有以下几种：i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物荧光ECFiv.底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。

a short history of western painting翻译 艺术是受一个民族的风俗和信仰影响。西方艺术风格经历了多次变革。因为西方艺术多种多样，在短短的一篇课文里不可能进行全面的描述。因此，本书只谈及从公元六世纪开始以来最重要的几种艺术风格。 中世纪(5到15世纪)在中世纪时期,画家的主要目的是把宗教主题表现出来。这一时期传统的艺术家无意于如实地展现自然和人物。这时的典型绘画充满了宗教的特征，体现出了对上帝的爱戴和敬重。但是，13世纪时绘画观念在改变是显而易见的，像乔托这样的画家开始以一种更现实的方式来画宗教场景。文艺复兴时期（15世纪到16世纪）在文艺复兴时期,新的思想和价值观逐渐取代了中世纪的思想和价值观。人们开始较少关注宗教主题而采取一种更人性化的生活态度。同时画家们回到罗马、希腊的古典艺术理念上。他们力争如实画出人物和自然。富人们想拥有自己的艺术品，这样就可以装饰自己的高级宫殿和豪宅。他们出价聘请著名艺术家不仅让他们画他们的活动和成就，还要他们画自己的肖像、房子和所有物。 在此期间，最重要的发现之一就是如何用透视法来画出事务。这一手法是1428年由马萨乔第一次使用的。当人们第一次看到他的画时，还以为是透过墙上的小洞来观看真实的场景，并对此深信不疑。如果没有发现透视法，就没有人能画出如此逼真的画。巧合的是，这一时期油画颜料也得到了发展，使得绘画的色彩看上去更丰富、更深沉。没有新的颜料和新的手法，我们就不能看到很多使这一时期著名的杰作。印象派(19世纪后期到20世纪初期)19世纪后期，欧洲发生了巨大的变化，从以农业为主的社会转变成了以工业为主的社会。许多人从农村迁入到新城市。有许多新发明和社会变革。这些变革也自然地促成了新的绘画风格。在那些突破传统画法的画家中有生活和工作在法国巴黎的印象派画家。印象派画家是第一批室外写景的画家。他们急切地想把一天中不同时间投射到物体上的光线和阴影呈现出来。然而由于自然光的变化很快，印象派画家们必须很快地作画，因此，他们的画就不像以前那些画家们的画那样细致了。起初，很多人不喜欢这种画法，甚至还怒不可遏。他们说这些画家作画时漫不经心，粗枝大叶，而他们的作品更是荒谬可笑。 现代艺术(20世纪到今天) 在印象派作品的创建初期，他们是存在着争议的，但是如今已经被人们接受而成为我们现在所说的“现代艺术”的始祖了。这是因为印象派鼓励画家用一种崭新的视角看待他们的环境。如今，现代艺术风格有好几十种，然而如果没有印象派，那么这许多不同的风格也许就不可能存在。一方面，有些现代艺术是抽象的，也就是说，画家并不打算把我们眼睛看到的东西如实地画出来，而是集中展现物体的某些品质特征，用色彩、线条和形状把它们呈现出来。而另一方面，有些现代派的艺术作品却是那么真实，看上去就像是照片。这些风格如此不同。谁能预言将来会有什么样的绘画风格？

方便观察电泳进行情况，确定电泳结束时间

前者

三一西大学是一所教会成立的私立大学，校训是Turris Fortis Deus Noster。像所有加拿大的大学一样，这个校训也是拉丁文的，翻译成英文则是：A Mighty Fortress is Our God。如果用中文表达，可以是“上帝是我们的避难所”或者是“上帝是我们的坚固保障”。多说一句，三一西大学不在温哥华市，而是在大温哥华地区的兰里，那地方离温哥华不近。但是三一西大学在列治文有一个分校区，列治文倒是紧邻温哥华。

大鼠灌注取脑；用途：；1.用于常规HE染色，免疫组化分析；2.冰冻切片可以不做脑组织固定；3.不可用于westernblot和PCR；4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作；原理：；心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织；必要性：；1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易；2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤；3.脑内血液大鼠灌注取脑用途：1.用于常规HE染色，免疫组化分析。2.冰冻切片可以不做脑组织固定。3.不可用于western blot和PCR。4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1) 麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶装灌注液。同时配好输液器备用。3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射麻醉动物。4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用一血管钳夹持剑突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏，直视下穿刺针左心室心尖处，用血管钳固定。5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的有效观察指标。6.继续用4%多聚甲醛灌流250ml固定。7.后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。补充：还有一种省时省剂的方法。夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省试剂。先灌注生理盐水约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。

没学过

后者是西联汇款我做过。就是提供给客户正确的姓名和卡号。千万要注意姓名，我上次和客户说的很清楚姓和名了，结果他还是把姓和名搞错了。导致最后我们第一次没有成功，后面又重新办理了一次。

西联汇款嘛？就在沙湾路和北二环交接处的邮政营业厅就有西联汇款估计成都大的邮政营业厅都有把

中国有资金限制吗？

中国光大银行、中国邮政储蓄银行、中国建设银行、浙江稠州商业银行、吉林银行、哈尔滨银行、福建海峡银行、烟台银行、龙江银行、温州银行、徽商银行、浦发银行。西联汇款是国际汇款公司（WesternUnion）的简称，是世界上领先的特快汇款公司，迄今已有150年的历史，它拥有全球最大最先进的电子汇兑金融网络，代理网点遍布全球近200个国家和地区，数量达135000多个，且不断增加中。

WU是和农业银行联合的，所以如果国内有亲人的话可以去农行取出之后再汇入你的账号。routing number是接收银行的银行代码，可以打电话去银行查询。

你有机会通过西联银行支付？

你好。很高兴为你解答。可以通过Western Union business solutions 公对公 付款 ，也没像西联客服说的什么一定要再WU开户才行 ，已经到账了，第二个工作日早上就到账，确实比之前汇款快多了 ，主要是客户这样付款我这边全额到账了 ，一分不少 。

用西联主要考虑网点多，客户能比较方便办理，而从收款方看，费用全在客户出。理论上只要告诉客户你的名字即可：firstname：你的名，lastname：你的姓当然你应该首先查询你周围是否有网点，银行或者邮政储蓄。西联比较方便的是在大城市和乡镇都有比较好的覆盖，主要是邮局现在分布很广，而且邮局都是全年上班，非常方便。我以邮政储蓄领取为例说明，有两个方式：第一种方式.单据很复杂，就好开卡一样有好几联要填写。好像我记得一张是个人信息，另一张是收汇单而且有地址等信息，比如国家，州，街道等。我第一次取是叫客户给我完整的信息填写后再取钱的。但从第二个方式看，应该需要确认的信息也只有第二个方式那些必须的信息。这种方式只适合临时收汇，因为耽误太多时间。不会填单找工作人员。第二个方式：办理一张取外汇用的绿卡，一般第一次去工作人员会推荐你办这个卡，他们也不想麻烦。这样取汇时填的是一种简易的单据叫：中国邮政储蓄银行国际汇款快速服务信息确认单。必须填写的栏位是：1.发汇人的firstname和lastname，注意要和发汇时系统录入一致，包括录入错误，都是无法取到款的，工作人员只会告诉你对方信息有误，请你核对再来。这里的信息不用管对方的真实姓名，只是与系统必须一致。比如有些人有填middlename，不管他写在前面，还是后面，你都必须按他当时发汇时录入的一致，系统才认。2.mtcn，汇票号码。10位数字。3.汇出国家4.币别5.金额6.收款人姓名，按西方习惯另外就提供身份证，和那张绿卡。绿卡其实就是记录了你的个人信息。因为国家对这个东西管制比较严格，在以前。以及找工作人员给你复印一张专用的身份证复印件签字即可。如果对方有测试问题，必须填写测试答案。问你取外汇还是人民币，看你自己决定。邮局是可以取美金和人民币，最近听说开通了欧元外汇。具体可以咨询。当然取外币需要存在银行要本外币一本通才可以吧。具体咨询银行。打麻烦的地方主要是名字上，拼写错误，或者写颠倒了。或者是对方记得自己的名字没错，但是录入系统时有录入错误。这个需要对方自己去核实再告诉你。我就遇到过一个客户把姓和中间名写在姓一栏，但是第二个词拼写错误。他靠记忆告诉我是没错，但是上网站查就是错误提示。而且在西联美国页面，因为它只校验两个词，所以ok。而切换到china就发生错误提示，拨打客服热线，工作人员跟我首先确认mtcn，会告诉我已经ok。然后确认收款人拼写，最后确认发汇人姓名拼写。遇到拼写错误，他告诉我有错，请联系客户核实。

手续费肯定是要收的，但是西联汇款的手续费用是汇款时一次性收费。具体怎么收费你可以去你汇款的银行网点查询关于汇款手续费问题，当然也可以打电话问西联汇款的客服。

　　直接去国内的六大银行，都有西联的办理点，办一个账号就OK了，相当于办张银行卡！其他操作模式按照规矩来

1） 到相应的西联代理点，填写汇款表单： 填写汇款表单，提供由政府发行的身份证明。 2） 支付汇款手续费： 将要汇出的款额连同必要的服务费用一起交给代理点。 3） 签名并接收收据： 确认收据上的所有信息均无误之后，需要签署一张收据。收据所打印的内容之一是汇款监控号码(MTCN)。可使用MTCN联机（在网上）跟踪汇款的状态 。 4） 通知收款人（国内的商户）： 国外的客户将支付的信息告诉国内商家， 如汇款人姓名、汇款金额、汇款监控号码（MTCN）和汇款国家/地区。 5） 款项的跟踪。： 国外的客户可以到西联的主页上，进入跟踪的页面。然后输入汇款人姓名和汇款监控码(MTCN）来跟踪汇款的状态。

西联和TT汇款性质差不多的，没有任何约束！

西联（western union，西联国际汇款公司）的商业解决方案。

Western Union 是一家美国公司，全球国家之间汇款都可以即时到账的。收款人凭身份证及一组10位数密码可以在合作金融机关提领，手续费超低。在中国也有合作的金融机关，如邮局、建行、农行、光大银行及许多地方性的银行；但是妙就妙在，笔者曾经为了一个美国汇来的区区1000元美金，跑遍了它网页上的合作金融机关、再打电话到Western Union在中国上海的总部，由服务人员提供的北京网点照着去，也被告知“尚未有如此服务”至今尚未解决。为何国际通行的服务到了此地就变了味道，耐人寻思。

西联汇款的英文就是WESTERNUNION！就好比中国的英文是china一样。如果办理业务可以直接去西联就可以了，这个汇款主要针对往国外汇款的！

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这是western union.全球最快的汇款方式,只是手续费比较高.中文名是"西联汇款”,国内邮局和农行可以办理.我在巴基斯坦工作,偶尔回国时老板会从巴基斯坦给我用西联汇款,我可以很快从任何一个城市取.他那边需要填写你的名字和地址,然后还有一个监控号码(control number),相当于密码,他得到后告诉你.取钱时带上身份证,有时还得要身份证复印件.可以取人民币或美元.但是有几个问题得注意下:1. 如果数量比较大,西联汇款手续费太高,最好选银行转帐方式,像常用的工商银行,这边用渣打转.2. 名字用拼音写,但是注意顺序.有一次别人把我的名和姓写反了,邮局不给取,后来打电话给巴基斯坦的汇款人修改以后才取到.3. 地址不用很详细,写明城市就行了.

没有关系的,你只要给他一个地址,到时候客户给钱的时候,客户给你一个码,你就可以去领取啦.

western union西部联盟；西联汇款；西联国际汇款公司；西联公司例句1.How much money can I send by Western Union?通过西联汇款方式我可以寄多少钱？2.We also accept payment using Western Union or wire transfer.我们也接受使用西联汇款或电汇付款。3.First, I must tell you we only accept western union!首先我必须要告诉你，我们只接受西联！4.You are to make the payment Via Western Union Transfer or Money Gram to this office.您将通过西部联盟调动或金钱克付付款给这个办公室。5.well babe i just got back from the western union and sent you a thousand dollars.以及贝贝我刚回来的西部联盟，并送你一千元。

是“西部联盟电报公司”的意思

随意 泡一会用stripping buffer洗就行了

如果是PVDF膜就没事，你扫描了么？有时候膜干了条带更清楚。如果是硝酸纤维素膜就有点麻烦，因为干了一碰就碎，不知道你是不是用拍照的。

请问你再生后封闭了吗？如果没封闭直接孵育其他抗体很有可能出现高背景。这张膜恐怕不能再用了。

西方国家自从进入了第二十一个世纪以来就开始不断的不断缩小，而且他们的波动也带来了问题。

给了！给您说得很

一个是西北方，西北方的。可以做名次和形容词。 一个是来自西北方的，在西北部的，纯属形容词。比较下northwest part of China 和 northwestern people in China

The University of SheffieldWestern BankSheffield S10 2TNUKWestern Bank 是路名，也是学校一个图书馆的名字，也是当地（学校旁边）的一个公园的名字，中文翻译：西岸

western的读音是：英["west?n]。western的读音是：英["west?n]。western的详尽释义是adj.(形容词)西方的，欧美的，西方国家的西部的西洋的西的，向西的，朝西的，在西的美国西部的从西吹来的，从西方来的西欧的日落西山的衰颓的《西部日报》西方教会的。western名词:westernness。一、详尽释义点此查看western的详细内容adj.(形容词)西方的，欧美的，西方国家的西部的西洋的西的，向西的，朝西的，在西的美国西部的从西吹来的，从西方来的西欧的日落西山的衰颓的《西部日报》西方教会的n.(名词)西方人，西洋人，欧美国家的人，西欧人西部小说西部地区的人，西部人西部电影，（美国）西部片二、英英释义Noun:a film about life in the western United States during the period of exploration and developmenta sandwich made from a western omeletAdjective:relating to or characteristic of the western parts of the world or the West as opposed to the eastern or oriental parts;"the Western world""Western thought""Western thought"of or characteristic of regions of the United States west of the Mississippi River;"a Western ranch"lying toward or situated in the west;"our company"s western office"of wind; from the west三、词典解释1.西方的;西部的;来自西部的Western means in or from the west of a region, state, or country.e.g. ...hand-made rugs fromWestern and Central Asia.来自西亚和中亚的手工小地毯e.g. ...Moi University, inwestern Kenya.位于肯尼亚西部的莫恩大学2.(来自)西方国家的Western is used to describe things, people, ideas, or ways of life that come from or are associated with the United States, Canada, and the countries of Western, Northern, and Southern Europe.e.g. Mexico had the support of the bigwestern governments...墨西哥拥有西方大国的支持。e.g. Those statements have never been reported in theWestern media.那些言论似乎从来没有被西方媒体报道过。3.(关于19世纪美国西部生活，尤指牛仔生活的)西部电影(或小说)Awestern is a book or film about life in the west of America in the nineteenth century, especially the lives of cowboys.四、例句Britain has allied itself with other western powers for trade and defence.英国与其他西方强国结成了贸易及防御联盟。Silk handkerchiefs embroidered by hand sell well in the Western market.手绣的丝制手帕在西方市场销路很好。America is a western country.美国是一个西方国家。How does Chinese chess differ from western chess?象棋和西洋棋有什么不同?I"d love to,but I don"t know much about Western music.我倒想去，但我对西洋音乐了解不多。The western part of America was lawless 200 years ago.二百年前，美国西部是没有法纪的。I"ll emigrate to the western woods.我要移居到西部的丛林里去。Alaska is at the western extremityof North America.阿拉斯加在北美西部的尽头。India is a mysterious land in the mind of Western.在西方人的心目中，印度是一片神秘的土地。They Filmed a Western on location in the Mexican desert.他们在墨西哥沙漠外景地拍摄一部西部片。The Virginian opens up a new field in American western literature.牛仔西部小说由此迈出了美国西部文学发展史上的重要一步。五、常见句型用作形容词(adj.)用作定语～+ n.Kate"s house was on the western outskirts of the town.凯特的家在该城的西郊。He is wearing a western style suit.他穿着一套西式服装。The region covers the Southern two-thirds of Brazil and Western Bolivia.这一地区覆盖了巴西南部三分之二的土地面积和西玻利维亚。When we are in Russia,England is a western country.当我们在俄国的时候,英国是一个西方的国家。用作表语S+be+～+ prep .-phraseThis philosophy is western in origin.这种哲学起源于西方。六、词汇搭配用作形容词 (adj.)～+名词western Australia西澳大利亚the western nations西方国家七、词语用法adj.(形容词)western的意思是“西方的,西部的,在西方的,在西部的”,指世界或一国之西,也可指某地属于或在西部,有时大写。western在句中主要用作定语,偶尔也可用作表语。western无比较级和最高级。western的相关近义词Hesperian、occidentalwestern的相关反义词easternwestern的相关临近词westerner、wester、westerns、westernly、westernize、westernise、westernism、Western Xia、westernised、Western bug、Western Sag、Western Cao点此查看更多关于western的详细信息

west和western区别：west重点在于形容方位或指从西方来的；western的意思是“西方的，西部的，在西方的，在西部的”，指世界或一国之西，也可指某地属于或在西部。 扩展资料 west和western区别：west重点在于形容方位或指从西方来的；western的意思是“西方的，西部的`，在西方的，在西部的”，指世界或一国之西，也可指某地属于或在西部。

western读作英[u02c8westu0259n]美[u02c8westu0259rn]。Western，英语单词，名词、形容词，作名词的意思是“西方人；西部片，西部小说；人名；(英)韦斯顿”，作形容词的意思是“西方的，西部的；有西方特征的”。短语搭配：Western Province西部省 ; 西方省 ; 所罗门群岛西部省。western的双语例句：1、Western firms do this too, but not to the same degree.西方公司也会这么做，但是不会做到这种程度。2、As one western banker in China says: “You have to be in this market.正如一位驻中国的西方银行家所言：“你必须留在这个市场。3、He will not be Eastern, he will not be Western, or he will be both together.他不会是东方人，他不会是西方人，或者他将两者兼具。

后者

west重点在于形容方位或指从西方来的。 western的意思是“西方的，西部的，在西方的，在西部的”，指世界或一国之西，也可指某地属于或在西部。 扩展资料 　　west和western区别： 　　词义广泛性不一样 　　1、west 　　1）n. 西；西方；西部 　　2）adj. 西方的`；朝西的 　　3）adv. 在西方；向西方；自西方 　　2、western 　　1）adj. 西方的，西部的；有西方特征的 　　2）n. 西方人；西部片，西部小说 　　词汇搭配不一样 　　1、west 　　1）n the west 在西方，在西方（国家） 　　2）west of 在…以西 　　3）west lake 杭州西湖 　　2、western 　　1）Western China 中国西部 ; 西部地区 ; 中国西部地区 ; 西部 　　2）Western Ghats 西高止山脉 ; 西南方的西高止 ; 西卡特山脉 　　3）Western Regions 西域 ; 西部地区 ; 西部

是western peoplewest和western的区别：读音不同、意思不同、用法不同读音不同.west读音：英 [west] 美 [west] .western读音：英 [_west_n] 美 [_west_rn] 意思不同.west释义：n.西;西方;西方(与东方国家相对照的欧洲和北美);美国西部adj.西方的;向西的;西部的;西风的;西方吹来的adv.向西;朝西.western释义：adj.西方的;向西的;西部的;西方国家的;(尤指)欧美的n.(描写19世纪美国西部，尤指有关牛仔生活的)西部电影，西部小说用法不同west用法：west用作名词的意思是“西，西部，西方”，是与east相对的方向，通常只用作单数形式，其前需加定冠词the。west也可表示“国家的西部”，通常只用作单数形式，其前需加定冠词the，首字母常大写。.western用法：western的意思是“西方的，西部的，在西方的，在西部的”，指世界或一国之西，也可指某地属于或在西部，有时大写。western在句中主要用作定语，偶尔也可用作表语。western无比较级和最高级。

你好。是western countries， western-------表示“方向”。 Western-------与宗教或意。。。识。。。形。。。态。。。。。有关的 （不好意思，百度对这些字眼太敏感了）

1.你的loading buffer 是不是有沉淀2.胶如果是自己做的，看做胶的试剂以及操作有没有问题3.电泳的时候，胶有没放平

条带分析最好使用其它更为专业的软件（比如nebular提供的Labworks，Quantity one等），但是对于Western这种简单的条带，IPP完全可以分析，只是复杂一点：1 选用指标为IOD，故首先将系统的灰度设定改过来，（改为0 白，255黑）2 确定背景的灰度（在背景区域选择一个AOI） 3 Histogram显示，平均灰度为66；所以，要通过Operation的功能，将待分析的所有膜照片的背景均加或减到某一固定值（由自己确定，方法见以前的介绍） 4 通过Operation处理后，在Segmentation下，确定阳性区域的范围（所有的图像都应该统一；我选择的是0-98） 5 选择Transparent on white,Create preview image 6 注意新生成的图片不是灰度图，还要经过转换 7 自由AOI，勾画出大概的轮廓即可 8 Histogram，Sum值即为需要的阳性区域IOD 9 改变区域大小，Sum值变化不大（原因为白色背景的IOD均为0） 10 其他条带也通过类似的方法分析；最后求出阳性区域IOD与内参IOD的比值，用于统计学分析。整个分析的关键在于背景灰度的统一与分割时的一点小技巧；如果没有经过Segmentation而直接用自由AOI主观地确定条带的边界，是不可取的。

1、Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用下，由大到小的进行排列，利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体（一抗）特异性识别并与之结合。在此基础上，酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗，通过与底物反应显色来观察目的蛋白。 Westernblot显色的方法主要有以下几种：（1）放射自显影，（2）底物化学发光ECL，（3）底物荧光ECF，（4）底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。大部分Westernblot显色底物是化学发光底物，发表文章通常也是用底物化学发光ECL 2、目的蛋白信号弱或无 在Westernblot发光检测中常见的问题之一就是目的蛋白信号弱或无。首先考虑是否转膜不充分/过转，如果是，则要优化转膜条件；其次，在转膜合适的前提下考虑是否抗体-抗原敏感性过低，也可能是底物HRP或底物活性降低，可以通过加大上样量/提高抗体浓度/使用敏感底物/延长压片时间解决。凝胶太厚，曝光时间短也会使蛋白信号降低，因此，要延长转膜时间和胶片的曝光时间。 3、非特性条带 非特异性条带与抗体交叉反应有关。单抗比多抗特异性好，纯度高，另外适当稀释一抗/二抗浓度，也是有必要的。如果样本在处理过程中发生降解，则样本处理时加入蛋白抑制剂在冰上操作。 4、显影后膜上条带处变为黄色或白色 可能是HRP过高导致的敏感性或背景太高，应降低抗体浓度。 5、条带内无显影的白点 一般是与转膜和显影的操作有关，转膜前尽量将膜平衡，并注意胶和膜之间避免气泡，显影时膜与X光片间也应避免气泡。 6、存在散在小圆斑 是牛奶封闭液中的杂质颗粒导致，解决此类问题可提前配置好封闭液于4度保存，使用时勿混匀，仅用上层。 7、Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因？ Western Blot“淬灭”的原因主要在两方面：含HRP的抗体和发光试剂。由于长期应用某种发光试剂，人们多注意了抗体，不知道发光试剂其实也会对实验结果造成重大影响。对抗体方面来说，可以采用适当降低抗体的浓度，发光实验时快速操作来解决“淬灭”的问题；对发光试剂来说，可以选用发光稳定的发光试剂来解决“淬灭”的问题。 8、Western Blot背景太高 背景深是在Western blot发光检测中最常见的问题，造成背景深的原因很多。第一，封闭的问题，封闭条件一般为5%牛奶或BAS室温封闭2-4h，但最好4度过夜；实际上牛奶对于多数抗体来说效果不错，但二抗与牛奶可能有交叉反应，因此洗涤很重要。另外BSA蛋白单一，可降低因牛奶其他成分引起的背景。第二，TBST洗脱不彻底也会导致背景深，适当增加洗脱时间、次数、用量可以减轻背景颜色，有时候膜没有完全均匀的浸润也是原因之一。第三，条带背景深也与曝光时间有关，曝光时间超过半小时出现背景是很正常的，所以可以的话建议曝光1-10min。第四，抗体浓度太高也会导致背景高，建议实验前进行检测。 9、Western blot 中Tween-20的作用是什么？应该怎么用？ Tween-20是一种非离子型表面活性剂。用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。Western blot的操作流程中大部分都用到TBST洗液，而且还是封闭，一抗二抗孵育这种比较关键的步骤。通常Tween-20作为一种非离子型表面活性剂，效果和SDS、BSA作用差不多。由于膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时可使用Tween20清除去污剂，而且浓度不要超过0.3%（0.05%效果最好），如果牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。Tween-20是我们用TBST的时候Tween-20得用量是0.5ml/L，不加SDS。 10、出现变形条带 凝胶存在气泡或是杂质、电流不稳定、凝胶冷切不均匀。制胶器具和电泳槽保持干净，换新的电解液，保证材料无污染，制胶过程中清除气泡。如电泳槽老化建议换新。尽量选择中间孔加入样品，避免两端上样。

westerns作电影在句子中需要大写，western用在人名、地名、其他特殊名称以及在句首时需要大写。重点词汇：westerns英释义：n.西部片（western的复数形式）；美国西部地区的人；西部电影或小说。短语：spaghetti westerns意大利西部片；意大利式西部片；通心粉西部片。词语使用变化：adj.（形容词）。1、western的意思是“西方的，西部的，在西方的，在西部的”，指世界或一国之西，也可指某地属于或在西部，有时大写。2、western在句中主要用作定语，偶尔也可用作表语。3、western无比较级和最高级。

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法，建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术，是一种用酶标记抗原或抗体的方法。由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来。 ELISA试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 ELISA基本原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 ELISA基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，基本原理有三条： （1） 抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2） 抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3） 酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。 在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感，且更为实用的免疫酶技术。　　免疫组织化学的全过程包括：1.抗原的提取与纯化；2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体；4.标本的制备；5.免疫细胞化学反应以及呈色反应；6.观察结果。免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescentantibodytechnique）。

1、Tween-20是一种非离子型表面活性剂。用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。2、Tween-20有复性抗原的作用，可提高特异性的识别能力。在做western blot时，用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标位、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。3、Tween20清除去污剂，而且浓度不要超过0.3%（0.05%效果最好），如果牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。Tween-20是我们用TBST的时候Tween-20的用量是0.5ml/L，不加SDS。扩展资料Western Blot一般指蛋白质印迹法它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。参考资料来源：百度百科：蛋白质印迹法（Western Blot）参考资料来源：百度百科：Tween20

一、Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 ：原因分析 解决办法 1.一抗和二抗失效 1. 更换抗体；选择现用现配的工作液2.一抗和二抗不匹配 2. 更换为同种同属的同亚型的抗体底物3.发光液失效 3. 更换新的发光液4.抗体染色不充分 4. 增加抗体浓度；延长孵育时间5.被测样品中不含有目的蛋白质或者目的 蛋白质含量太低 5. 设置阳性对照。确定标本中是否含有目的蛋白质；增加样品 的上样量。6. 溶液中有辣根过氧化物酶的抑制剂 6.用透析和超滤除去所用溶液中如叠氮化钠之类的抑制剂7.抗体活力降低 7.在抗体活力保存时间内使用抗体；工作液现用现配二、WB出现白斑是因为转膜过程有气泡存在；或者抗体的分布不均匀，孵育抗体时要使用摇床。三、剪好的PVDF膜在使用前需要甲醇里泡1-2min，在零度的转膜液中孵育3-5min。四、一抗与二抗的专一性识别检测，就是蛋白质-蛋白质相互作用检测，方法很多，免疫共沉淀、Pull down、MADLI-MS、能量转移、分子筛层析等。

互联网上几乎可以搜集到所有WesternBlot的中英文资料，仅供实验参考，可以根据自己实验的实际情况进行调整。 这里提供一种：1）按厂商的使用指南用两块干净的玻璃，平板和0.75mm垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层，并固定在灌胶支架上。2）按表7.1配制分离胶液体并脱气，然后加入10%的过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌混匀。表7.1 聚丙烯酰胺分离胶的配制试剂成分 配制不同浓度分离胶所需试剂(ml)5% 8% 10% 12% 15%Acry:Bis (30:0.8) 2.50 4.00 5.00 6.00 7.504×Tris·Cl/SDS, pH8.8 3.75 3.75 3.75 3.75 3.75H2O 8.75 7.25 6.25 5.25 3.7510%过硫酸铵 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05TEMED 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01按所需分离的蛋白质分子大小选择合适的丙烯酰胺百分比浓度，一般地，5%的凝胶可用于60～200kDa的SDS变性蛋白质分子的分离，10%用于16～70kDa，15%用于12～45kDa。3）用一根巴斯德吸管立即将分离胶液体沿夹层中一条垫片的边缘加入于玻璃平板夹层中，至凝胶约5cm高为止。样品体积少于10μl不需灌制积层胶。4）用另一根巴斯德吸管，先从一边的垫片，再从另一边垫片往夹层的液面顶部缓缓加入一层水饱和异丁醇（厚约1cm）。让凝胶在室温聚合30min。聚合后，可见在顶层异丁醇与凝胶的界面间有一清晰的折光线，胶的聚合失败往往问题在于过硫酸按或TEMED，或两者都有。5)倾去顶层的异丁醇，并以1×Tris-Cl/SDS, pH8.8缓冲液冲洗凝胶的顶部表面,尽量用吸水纸吸干。6)按表7.2配制积层胶液体，用吸管将液体沿一条垫片加入到玻璃平板夹层，直至夹层的顶部。表7.2 聚丙烯酰胺积层胶的配制GEL%（3.9%) Total (10.05ml)Acry:Bis(30:0.8) 1.30 ml4×Tris·Cl/SDS, pH6.8 2.50 mlH2O 6.10 ml10%过硫酸铵 0.05 mlTEMED 0.01 ml7)将0.75mm厚的梳子插入夹层的积层胶液体中，必要时，再补加积层胶液体充盈剩余空间。让积层胶室温聚合30min。8)在具螺口盖的微量离心管中，用2×SDS加样缓冲液按1:1(v/v)稀释待测蛋白质样品，于100℃煮沸5-10min。如样品是蛋白质沉淀物，加入50～100μl 1×SDS加样缓冲液溶解之，并同样在100℃煮沸5-10min。按供应商的使用指南用2×SDS加样缓冲液溶解蛋白质分子量标准混合物。对于0.3cm宽的加样孔，推荐加样体积以不超过20μl 为宜。用考马斯亮蓝染色法显迹，成分很复杂的蛋白质混合物需加25～50μg，而样品中只有一种或不多的几种蛋白的话，只需1～10μg蛋白量。采用银染显迹时，样品用量可减小10～100倍（按样品的复杂程度在小于20μl的体积溶有0.01～0.5ng蛋白样品不等）。2×SDS加样缓冲液(loading buffer)配制：成　分 体积 (ml)0.5M Tris·Cl (pH6.8) 12.520%SDS 11.5Glycerin 102% Blue-Bromo-phenol 2.5β-mercaptoethanol * 5.0加H2O至总体积50 ml，分装*β-mercaptoethanol 在临用前加入。9）小心拔出梳子，避免撕裂聚丙烯酰胺凝胶加样孔。取出梳子后，以1×SDS电泳电泳缓冲液冲洗加祥孔，并以此缓冲液充满之。10）按厂商指南将凝胶板固定到电泳装置的上缓冲液室（上槽），同时往下缓冲液室（下槽）加入推荐量的1×SDS电泳缓冲液。11）将固定于上槽的凝胶板放入下槽中，并往上槽加入部分电泳缓冲液至刚好淹没凝胶的加样孔。12）用带平嘴针头的50μl注射器将同样浓度的蛋白质样品等体积加入到样品孔中，小心加样使样品在孔的底部成一薄层，对照孔加入蛋白质分子量标准样品，如有空置的加样孔，须加等体积的空白1×SDS样品缓冲液，以防相邻泳道样品的扩散。13)再往上槽加入余下的1×SDS电泳缓冲液。此操作缓慢小心，以防冲起样品孔中的样品。14）连接电源，对于0.75mm厚的垂直板电泳，先在60V下电泳至溴酚蓝染料从积层胶进入分离胶，再将电压调至120V继续电泳至溴酚蓝到达凝胶底部为止。15）关闭电源并撤去连接的导线，弃去电泳缓冲液。连同上槽一起将凝胶夹层取出。16）将凝胶定位以便识别加样的顺序，将凝胶板从上槽解离出来，放在一叠吸水纸或纸巾上。17）小心将封边的垫片抽出一半，并以此为杠杆橇起上面的玻璃平板，使凝胶暴露出来。18）小心从下面的玻璃平板上移出凝胶，在凝胶的一角切去一小块以便在染色及干胶后仍能认出加样次序，接着就可进行蛋白质的检测。19)转膜将凝胶面与负极相连，硝酸纤维素膜与正极相连。（100V，1小时）要放于4℃。英文1. For transfer of proteins smaller than 20 kDa, transfer proteins from gel to PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane at 1Amp constant current for 45 mins or equivalent (250mAmp for 3 hours or 500mAmp for 90 minutes) in transfer buffer (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH).2. For transfer of proteins smaller than 120 kDa, transfer proteins from gel to PVDF membrane at 1Amp constant current for 1 hour or equivalent (250mAmp for 4 hours or 500mAmp for 2 hours) in transfer buffer (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH).3. For proteins larger than 120kDa, transfer to PVDF membrane at 1Amp constant current for 90 minutes or equivalent (250mAmp for 6 hours or 500mAmp for 3 hours) in transfer buffer + SDS (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH, 0.05% SDS).4. For Proteins larger than 250kDa, transfer to PVDF membrane at 1Amp constant current for 1 hour and 45 minutes or equivalent (500mAmp for 3.5 hours) in transfer buffer + SDS (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH, 0.05% SDS).Add transfer (or CAPS) buffer to the transfer unit according to manufacturer1s directions. Transfer over night with a setting of 20V / 40 mA or for 3 hours at 70V/160 mA. The transfer process needs to take place under cold temperatures to prevent the gel from sticking to the membrane. This can be accomplished either by using a water cooling core in the transfer unit or placing the entire unit at 4?. Please follow the manufacturer1s recommendations20)、清洗将硝酸纤维素膜放入1X TBST中清洗3次，每次5分钟。摇床摇动。（这步忘了！）21)、封闭1. Remove the blot from the transfer apparatus or staining tray and immediately place into blocking buffer (1% BSA, 10mM Tris pH 7.5, 100mM NaCl, 0.1% Tween 20).2. Incubate the blot for 1 hour at 37℃, 2 hours at room temperature, or overnight at 4℃.22)、一抗孵育一抗用TBST1:1000稀释，将硝酸纤维素膜放入其中，37℃孵育1.5小时，(或4℃过夜)摇床摇动。Probe with primary antibody in TTBS/1% NFDM for 1 hr. at room temperature. Primary antibody should be diluted as specified on product data sheets. If these values are not available, use the following guidelines for initial experiments: apply antisera or ascites at 1:500 to 1:5,000, apply purified primary antibodies at a concentration of 1 ug/ml.23)、清洗将硝酸纤维素膜放入1X TBST中清洗3次，每次5分钟。24)、二抗孵育二抗用TBST1:8000稀释，将硝酸纤维素膜放入其中，37℃孵育1小时，摇床摇动。25)、清洗同22，之后，用1X TBS在清洗2次，每次5分钟，以洗去膜上的Tween 20，因为它可以阻碍底物的沉积。26)、显色按如下配方配制显色液：1mL水+1滴（大约50微升）试剂A(之后混匀)+1滴试剂B+1滴试剂C将硝酸纤维素膜放入其中孵育，一旦显色，立即放入去离子水中终止反应。

western用在人名、地名、其他特殊名称以及在句首时需要大写。 western：adj.西方的;向西的;西部的； n.(描写19世纪美国西部，尤指有关牛仔生活的)西部电影，西部小说 扩展资料 　　White has always been a symbol of purity in Western cultures. 　　在西方文化中，白色一向象征纯洁。 　　The music was a hybrid of Western pop and traditional folk song. 　　这种音乐融合了西方流行音乐和传统民歌。 　　A fence divides off the western side of the grounds. 　　篱笆把庭院的西面隔开。

大鼠灌注取脑；用途：；1.用于常规HE染色，免疫组化分析；2.冰冻切片可以不做脑组织固定；3.不可用于westernblot和PCR；4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作；原理：；心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织；必要性：；1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易；2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤；3.脑内血液大鼠灌注取脑用途：用于常规HE染色，免疫组化分析。2.冰冻切片可以不做脑组织固定。3.不可用于western blot和PCR。4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1) 麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶装灌注液。同时配好输液器备用。3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔麻醉动物。4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用一血管钳夹持剑突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏，直视下穿刺针左心室心尖处，用血管钳固定。5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排液的有效观察指标。6.继续用4%多聚甲醛灌流250ml固定。7.后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。补充：还有一种省时省剂的方法。夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省试剂。先灌注生理盐水约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。

小梅

一张膜上可以分别贴不同的抗体～一次一种抗体然后二抗显色～显色后PBST／TBST清洗～然后可以贴下一种抗体～之所以不能同时贴多种抗体是因为：1、不同抗体必须不同种属～否则不知道二抗识别的是哪个～2、一抗一般昂贵需要回收～掺入其他抗体没办法再次利用～

描述有问题。抗体检测的是抗原，所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照，比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达，甚至它的变化（比如对某个细胞因子的反应），这时β-Actin起到几个作用：1、如果目的蛋白检测不到而且β-Actin也检测不到，那么你的体系有问题，因为β-Actin是看家基因编码的，理论上是100％检测到的；2、如果目的蛋白检测不到但β-Actin检测到，说明目的蛋白没有表达或者量很低；3、作为看家基因，β-Actin被认为表达水平不受其它因素影响，是比较稳定的。当细胞接受细胞因子刺激后，目的蛋白的量在参考β-Actin的量后可能发生变化，这时β-Actin还起到一个半定量的作用。所谓内参就是内部参照的意思。－－Western的抗体通常分为一抗和二抗，一抗结合目的蛋白，这是Western变化最多的地方；二抗则比较通用，商品很成熟，二抗带有荧光或者酶标记，它是结合一抗的，但却是得到结果的重要试剂。这种方法属于间接标记。Western很少有直接标记的方法。

跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀，造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡，造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰，造成条带迁移率不统一另外上样量过大，被其他泳道挤压也有可能

这就好比你把鸡蛋放到98度的水里放了一个小时，而且鸡蛋还加了LOADING BUFFER。当然我个人没做过WESTERN，也不知道PROTOCOL是怎么写的，不过我想，这个蛋白你只能碰碰运气了。蛋白可能已经断了，不知道抗体还能不能找到蛋白。GOOD LUCK。

包括SDS，巯基乙醇等。蛋白质解螺旋，变成线性，不是包裹蛋白。

blotting转膜一般采用“滤纸-凝胶-膜-滤纸”夹心法，凝胶靠近负极，膜靠近正极。因为蛋白上结合有sds，因而带负电，在电流的作用下会从负极向正极运动，从而转移到膜上。

1. western blot每孔上样总量15-50ug大部分蛋白能做出来，跟蛋白质表达量、分子量、抗体效价都密切相关。2. 组织一般取200mg，匀浆后蛋白常能得到几百ug，跑十块胶足够。

荧光western blot注意事项抗体浓度应当优化，在几种不同稀释度的抗体中孵育膜。选择信噪比最高的稀释度。从化学发光转到荧光检测时，一抗浓度应当增加许多封闭液都成功用于荧光检测。建议使用5% 酪蛋白、最多5%的脱脂奶粉，或最多3% BSA，溶于TBST中。缓冲液中的颗粒可能停留在膜上，并造成荧光假象。只使用高质量的试剂，并对所有缓冲液过滤灭菌。使用钝的镊子从边缘操作。避免划破膜或弄皱，这会在荧光检测时造成假象。使用铅笔来标记膜，因为许多墨水都会发出荧光。溴酚蓝会发出荧光。确保染料与样品已分开，切掉凝胶上包含染料的部分，或省掉样品缓冲液中的溴酚蓝。无需在暗处开展免疫检测；正常的室内灯光不会使荧光标记的抗体发生光漂白。在处理膜时，使用无粉末的手套，以避免膜上出现假象或指纹。

封闭非特异性结合位点，让一抗、二抗只跟特异性位点结合，最终才不失实验的意义啊！实验利用一抗特异性结合我们所需半定量测定的蛋白，二抗带显影（荧光、ECL、放射性核素等)根据条带的粗细判断异性蛋白的含量，故只能称作半定量。

vector那一列是对照，Flag-那一列是样品。随着时间的变化，在对照和样品间蛋白表达量的变化。其中alpha-tublin是内参，表示在样品和对照间，其他无关蛋白的量并不随着时间点不同产生变化，所以如果有不同，就是由于时间造成的。

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化

条带分析最好使用其它更为专业的软件（比如nebular提供的Labworks，Quantity one等），但是对于Western这种简单的条带，IPP完全可以分析，只是复杂一点：1 选用指标为IOD，故首先将系统的灰度设定改过来，（改为0 白，255黑） 2 确定背景的灰度（在背景区域选择一个AOI） 3 Histogram显示，平均灰度为66；所以，要通过Operation的功能，将待分析的所有膜照片的背景均加或减到某一固定值（由自己确定，方法见以前的介绍） 4 通过Operation处理后，在Segmentation下，确定阳性区域的范围（所有的图像都应该统一；我选择的是0-98） 5 选择Transparent on white,Create preview image 6 注意新生成的图片不是灰度图，还要经过转换 7 自由AOI，勾画出大概的轮廓即可 8 Histogram，Sum值即为需要的阳性区域IOD 9 改变区域大小，Sum值变化不大（原因为白色背景的IOD均为0） 10 其他条带也通过类似的方法分析；最后求出阳性区域IOD与内参IOD的比值，用于统计学分析。整个分析的关键在于背景灰度的统一与分割时的一点小技巧；如果没有经过Segmentation而直接用自由AOI主观地确定条带的边界，是不可取的。

推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100mL）。拓展：一、牛血清白蛋白(BSA)，又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性。二、用途说明1、 在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，减轻不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性的。2 、ELISA中也常常用到，比如封闭液，样本稀释液，酶结合物稀释液都可以用BSA。3、生化研究，遗传工程和药物研究。

western blot湿转时，恒压和恒流都是可以的恒流的话可以250~270mA，100分钟恒压的话可以100V， 60分钟遇到分子量较大的蛋白，可以适当提高电压和电流，或者转膜时间

需要加beta-actin的一抗，beta-actin分子量42，如果您的蛋白也是差不多大小，那么需要上两次样品，分别做您的目的蛋白和beta-actin，当然您如果做熟练了也可以上一次样，先做目的抗体，压片后strip膜再做beta-actin。如果您的目的蛋白在其他位置，那更方便，上一次样，封闭后把膜裁开，分别加您的目的蛋白一抗和beta-actin的一抗。

western blot实验都需要的基础仪器有：电泳仪，制胶板，电泳槽，湿转的转膜槽或者半干转仪，脱色摇床，暗室，X光片，红外灯，成像仪，一些基础耗材和试剂等基本上生化实验室要做western blot还是很容易的

句首时，w大写

印迹的解释[print] 痕迹;踪迹 成长 道路上留下的印迹 详细解释 痕迹，踪迹。 老舍 《 骆驼 祥子》 二十：“看着这些印迹，他想起 东西 ，想起人，梦似的都不见了。” 李瑛 《＜诗选＞自序》 ：“现在所编的这个选本，我也有意识地 尽量 保留了……我成长的道路的印迹。” 词语分解 印的解释 印 ì 图章，戳记：印章。印玺。 印记 。印把子（亦喻政权）。 痕迹：手印。指印。印子（a.痕迹；b． * 的一种，全称“印印钱”）。 用油墨、染料之类把文字或图画留在纸、布、 器皿 等材料上：印刷。排印。印 迹的解释 迹 ì 脚印：踪迹。 足迹 。血迹。笔迹。 物体遗留下的印痕：印迹。 前人遗留下的事物：古迹。实迹。 追寻踪迹：“汉求 将军 急，迹且至臣家”。 据实迹考知：“迹汉 功臣 ，亦皆割符世爵”。 笔画数：； 部首 ：

western读音：英 ["westu0259n]美 ["westu0259rn]。adj. 西方的；西洋的；西部的。n. 西方人；西部片；西部小说。1、How does Chinese chess differ from western chess?象棋和西洋棋有什么不同?2、I"d love to,but I don"t know much about Western music.我倒想去，但我对西洋音乐了解不多。3、The Western Hemisphere refers to North and South America.西半球是指南北美洲。用法：western的意思是“西方的,西部的,在西方的,在西部的”,指世界或一国之西,也可指某地属于或在西部,有时大写。western在句中主要用作定语,偶尔也可用作表语。western无比较级和最高级。western, west这两个词都可作“在西方的,西部的”解。其区别在于:west重点在于形容方位或指从西方来的; western则指从某一固定点看西方,也可指从某物、某地朝西方看。

转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。 在做Western blot实验中，会用到固相载体(如NC膜，PVDF膜)，在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。 蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。 扩展资料： 封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上，填补和覆盖蛋白结合位点以避免非特异性结合。同样，这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。 封闭液应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。 转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。

一般来说用于western的抗体识别的是氨基酸序列特异性，也就是5－6个氨基酸吧,变性后，蛋白质的空间结构改变了，但其一级结构是不会改变的；而可用于ELISA的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。所以最好是根据抗体说明书来确定。SDS在WB中除了上述所说的外，另外一项就是低浓度的SDS有蛋白促溶的作用，能够稳定抗体，并且作为表面活性剂能够使NC膜充分的浸润，这根洗衣粉的道理差不多。

southern：用DNA作为探针杂交DNA。检测目标DNA的存在与否northern：用DNA或RNA探针杂交RNA。检测目标RNA的存在与否western：用抗体和目的蛋白结合进行杂交。检测目标蛋白的存在与否。没有eastern杂交。少数人提议将IEF胶(即等电聚焦电泳)中的蛋白质转印到膜上的技术称为Eastern-blotting，但这一建议并未被广泛接受。

1、丙烯酰胺和N，N"-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N"-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。3、分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml1mol/LHCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris-CL。5、TEMED原溶液N，N，N"N"四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.6、SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.80.5mol/LTris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。7、Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/LTris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释10倍。8、转移缓冲液：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37gSDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。9、丽春红染液储存液：丽春红S2g三氯乙酸30g磺基水杨酸30g加水至100ml用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。10、脱脂奶粉5%(w/v)。11、NaN30.02%叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、过氧化物酶标记的第二抗体。15、NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。17、100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。18、100mmol/LNaCl。19、50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/LEDTA。

SDS-PAGE主要是依据蛋白质分子量的大小对其进行区分的。条带很多条。而蛋白质印记则往往一条泳道上只有一条。有空再给你好好看看。。。