以E.coli为例,表达载体比克隆载体多了那些功能原件,各有什么生物学功能

（1）若要构建重组质粒，一般要用同一种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接．因此在目的基因和质粒上必须存在同一种限制酶的切割位点，需要对目的基因进行测序，以确定选用何种酶．限制酶的作用的部位是磷酸二酯键．
（2）若用EcoRI酶对目的基因和质粒进行酶切，再用DNA连接酶处理，则由两个DNA片段连接形成的产物有3种：重组质粒、目的基因与目的基因连接物、载体和载体连接物．由于EcoRI酶的识别位点刚好在四环素抗性基因上，因此重组质粒中，该抗性基因已经被破坏，而目的基因与目的基因连接物上没有该基因，只有载体和载体连接物上把两个切割后的四环素抗性基因进行拼接形成两个完整的四环素抗性基因．
（3）为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用EcoRI和BamHI两种酶同时切割目的基因和质粒．由于这两种酶能切割形成不同的黏性末端，使得目的基因与目的基因、载体和载体之间无法连接，而目的基因和质粒却能够连接．
（4）核糖体由蛋白质和rRNA构成，可以利用酶的专一性用蛋白酶将蛋白质水解，从而提纯rRNA，A正确；无水乙醇可以溶解所有光合色素，没有利用生物分子间的特异性结合，B错误；分子杂交手段是利用了碱基互补配对的原则，C正确；抑制成熟基因的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA之间发生了碱基互补配对，也利用了分子间特异性结合，D正确．
（5）从变异的角度看，基因工程的原理是基因重组；而植物细胞杂交的原理是染色体变异．
故答案为：
（1）限制性DNA内切酶 磷酸二酯键
（2）3 载体和载体连接物
（3）EcoRI、BamHI
（4）ACD
（5）基因重组染色体变异

点评：
本题考点： 基因工程的应用．

考点点评： 本题围绕分子间的特异性结合的性质，综合考查了基因工程、基因结构、酶的作用特性等知识，本题难度适中，主要考查对教材的熟悉程度及对生物术语的规范运用．

（1）由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRI酶的切割位点，所以用此酶切割后产生相同的黏性末端．这样，具有相同黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接，从而产生3种连接产物，目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物，所以要进行分离纯化．
（2）由于将细胞放入含四环素的培养基，要将存活tct^R 为四环素抗性基因结构要保持完整，用EcoRI酶切后再用连接酶连接的三种产物只有载体-载体连接物基因结构保持完整．
（3）防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，需要有两种限制酶，而amp^R为青霉素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点，结构不能被破坏，故选择EcoRⅠ和BamHⅠ这两种限制酶．
故答案为：
（1）目的基因-载体连接物载体-载体连接物目的基因-目的基因连接物分离纯化
（2）载体-载体连接物
（3）EcoRⅠ和BamHⅠ

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 学生基因工程工具原理的应用理解不到位，特别是2种工具酶与获取目的基因和表达载体之间的联系与拓展．

（1）用EcoRI酶切出的目的基因和质粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA连接酶，则可出现3种连接结果，即目的基因自身连接形成的连接物，载体自身连接形成的连接物和重组质粒，要通过筛选、纯化才能选出符合要求的DNA．
（2）载体自身形成的连接物能重新形成完整的tet^R基因，具有抗四环素的特点，其他连接物中tet^R基因被限制性内切酶破坏，不再具有抗四环素的特点；在整个操作过程中，amp^R基因保持完整，载体（质粒）自身连接形成的连接物和目的基因-载体连接物（重组质粒）都具有抗青霉素的特性．
（3）RNA聚合酶与相关基因的启动子结合，完成的是转录过程，转录的产物是mRNA．
（4）将含有目的基因的靶DNA片段和载体分别用两个不同的限制性内切酶切割，使两种DNA片段自身的5′和3′黏性末端不同，但二者相同末端又互补，这明显减少靶DNA片段和载体自身环化与串连，使外源DNA片段能正确插入载体启动子下游．在本题中目的基因两端有EcoRI酶切点和BamHI酶切点，在质粒载体上也有这两种酶的切点，所以可以用这两种酶切出非同源性互补末端来阻止其他连接．
（5）由以上分析可知：a是转录过程，b是逆转录过程．逆转录过程需以mRNA为模板，脱氧核苷酸为原料合成DNA，该过程还需要的条件是ATP、逆转录酶、DNA聚合酶等．
（6）获取目的基因的方法有：依据蛋白质的氨基酸序列推测出DNA序列后人工合成、从基因文库中获取．
（7）在基因工程的检测目的基因是否转录形成mRNA，用的分子杂交技术；检测目的基因是否翻译形成蛋白质，用的是抗原-抗体杂交法．
故答案：（1）3
（2）目的基因-载体连接物、载体-载体连接物
（3）mRNA
（4）EcoRI和BamHI
（5）转录 逆转录 脱氧核苷酸 逆转录酶
（6）限制酶切法（依据蛋白质的氨基酸序列推测出DN序列后人工合成、从基因文库中获取）
（7）分子杂交 抗原-抗体杂交反应

点评：
本题考点： 基因工程的应用．

考点点评： 本题结合流程图和质粒示意图，考查基因工程的相关知识，意在考查考生的识记能力和识图能力；能理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，解决生物学问题的能力．

（1）限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生相同黏性末端的限制酶．
（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用Ca²⁺处理大肠杆菌，使大肠杆菌变成感受态细胞，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为DNA分子杂交技术．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用抗原-抗体杂交技术．
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体的DNA上．
（4）人的基因在细菌体内能表达，说明人和细菌共用一套密码子．
故答案为：
（1）平　相同　
（2）RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质　Ca²⁺　DNA分子杂交技术　人胰岛素　 抗原-抗体杂交技术
（3）T-DNA　染色体的DNA
（4）共用一套密码子

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了基因工程的相关知识，要求考生能够识记限制酶的作用特点和作用结果；识记启动子的功能；识记目的基因分子水平上检测的方法；识记农杆菌转化法的相关过程等，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．