基因表达载体中含有启动子和内含子,错在哪?

①基因表达载体的构建是基因工程的核心内容，一个表达载体的组成，除了目的基因外，还有启动子、终止子和标记基因等，故①错误；
②启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始，故②正确；
③终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束，故③正确；
④由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的，故④错误．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因表达载体的构建，可以通过理解记忆的方法平时加以训练，解题的关键是掌握教材知识．

A、甲表示启动子，位于基因的首段，它是RNA聚合酶识别和结合的位点，A错误；
B、乙表示终止子，不是终止密码子，B错误；
C、丙表示抗性基因，其作用是筛选含有重组质粒的受体细胞，C错误；
D、复制原点的存在有利于目的基因在宿主细胞内扩增，D正确．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作步骤，尤其是基因表达载体的构建过程，掌握基因表达载体的组成部分及各部分的功能，能结合所学的知识准确判断各选项．

A、基因表达载体使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用，是基因工程的核心，A正确；
B、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因，B正确；
C、目的基因主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子，C正确；
D、由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的，D错误．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因表达载体的构建，意在考查学生的识记和理解能力，属于中档题．

（1）培育转基因奶牛时，根据基因的选择性表达原理，需要在生长激素编码序列前插入乳腺蛋白基因的启动子，使生长激素编码序列只在乳腺组织细胞中表达．构建的基因表达载体导入动物受精卵常用显微注射技术．
（2）因为基因中启动子的碱基序列不能被转录，所以由基因表达产物无法推知启动子碱基序列．
（3）含有目的基因的外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、MboⅠ、HindⅢ的识别序列和切割位点，但是用限制酶HindⅢ、MboⅠ和HindⅢ切割都会破坏目的基因，所以过程①应选择限制酶BamHⅠ．而限制酶BamHⅠ和MboⅠ的识别序列相同，所以过程③中要将基因表达载体中的目的基因切开，应选择位于目的基因上的另一个限制酶HindⅢ．过程④表示采用PCR技术体外扩增目的基因的过程，该过程在高温条件下进行，因此需要使用耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）．
（4）过程④中可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物进行扩增．PCR技术应用的原理是DNA复制．
故答案为：
（1）乳腺蛋白基因显微注射
（2）基因中启动子的碱基序列不能被转录
（3）Bam HⅠHindⅢ热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
（4）引物DNA双链复制

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合克隆启动子的流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能正确分析图解，并从中获取有效信息准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查．

A、基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，A正确；
B、不同基因表达载体的构建过程不一定相同，B错误；
C、启动子位于基因编码区的上游，是RNA聚合酶识别和结合的部位，但不能叫起始密码子，因为密码子位于RNA上，C错误；
D、抗生素抗性基因作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因，D正确．
故选：BC．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合基因表达载体的模式图，考查基因工程的原理及技术，要求学生识记基因工程的原理、工具、操作步骤及应用，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查．

A、构建基因表达载体需要限制酶和DNA连接酶，A正确；
B、抗生素抗性基因可作为标记基因，便于筛选，B正确；
D、基因表达载体的构建过程在体外进行，C正确；
D、启动子位于目的基因的首端，是启动转录的一段DNA，D错误．
故选：D．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具和操作步骤，掌握各操作步骤中的相关细节，能运用所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记层次的考查．

（1）启动子的作用是驱动基因，促进基因表达．
（2）将目的基因导入植物受体细胞时，一般采用农杆菌转化法，选择Ti质粒做运载体；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞时常有感受态细胞法，即用CaCl₂溶液处理微生物细胞，使其成为感受态细胞，便于吸收周围环境中游离的DNA分子．
（3）动物细胞培养的适宜pH呈弱碱性，这会导致胃蛋白酶变性失活，因此动物细胞培养中需要使用胰蛋白酶而不是胃蛋白酶处理分裂能力旺盛的组织或器官．细胞培养时培养液中一般需加入动物血清，因为血清可以补充合成培养基中缺乏的物质（如促细胞生长因子等）．
（4）胚胎分割所得后代遗传物质相同，因此该技术可视为无性生殖．胚胎分割的分数越多，操作的难度越大，移植的成功率也越低，因此同卵多胎成功的概率极低．
故答案为：
（1）驱动基因
（2）农杆菌转化 Ti质粒 显微注射 CaCl₂
（3）分裂 动物细胞培养的适宜pH呈弱碱性，会导致胃蛋白酶变性失活 血清可以补充合成培养基中缺乏的物质（如促细胞生长因子等）
（4）无性 胚胎分割的分数越多，操作的难度越大，移植的成功率也越低

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术；胚胎分割移植．

考点点评： 本题考查基因工程、动物细胞培养和胚胎分割等知识，要求考生识记基因工程的操作步骤及相关细节；识记动物细胞培养的具体过程及条件；识记胚胎分割技术的特点及存在问题，能结合所学的知识准确答题．

A、启动子是基因表达载体的组成成分，A正确；
B、终止密码子是mRNA上的碱基，终止翻译的作用，B错误；
C、标记基因是基因表达载体的组成成分，C正确；
D、复制原点是基因表达载体的组成成分，D正确．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题主要考查学生对知识的记忆和理解的能力．基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤．

A、基因表达载体构建过程中需要限制酶和DNA连接酶两种工具酶的协助，A正确；
B、基因工程的操作中基因表达载体构建是在体外条件下进行的，B错误；
C、抗生素抗性基因或荧光标记基因可作为标记基因，便于目的基因的筛选，C正确；
D、基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因、标记基因，其中启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的末端，D正确．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了基因表达载体构建的相关知识，意在考查学生的识记和理解能力，属于中档题．

（1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是GATTC--．过程③表示切割后的目的基因和质粒发生重组，该过程需要DNA连接酶．
（2）目的基因的扩增可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键，设计引物对的依据绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列．
（3）①根据题意可知，绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp）．图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），说明5300bp的DNA条带是原质粒中切去部分片段的质粒；而目的基因也用这两种酶进行切割，因此形成的重组质粒上仍然存在这两种酶的识别位点．则重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为5300bp（质粒）和720bp（目的基因）的片段条带．
②质粒有5369个碱基对，质粒经BamHI单酶切后碱基长度不变．而重组质粒的长度=5300+720=6020kb，用BamHI单酶切割长度也不变．由于电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关，因此电泳后重组质粒在图2中质粒之上．
（4）由于该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，而导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长，因此用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞不能成功．
故答案为：
（1）GATTC--DNA连接酶
（2）绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列
（3）①5300bp720bp
②如右图

（4）不能成功，导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查了基因工程的相关知识，意在考查考生的分析能力和理解应用能力，难度适中．考生要明确基因工程的工具酶的作用以及PCR技术中引物的特点；能够从题干获取有效解题信息；在目的基因筛选时不能仅仅根据标记基因鉴定．

复制原点处比较容易打开双链，说明此处的结构不是很稳定．由于A与T配对时形成两个氢键，而C与G配对时形成三个氢键，所以双链容易打开的部位A与T的比例较高．
故选：A．

点评：
本题考点： A:基因工程的原理及技术 B:DNA分子结构的主要特点

考点点评： 本题考查DNA分子结构稳定性，意在考查考生识记和理解所列知识点的能力．