IEF是什么?

服装品牌。IEF爱依服创立于2004年，是一家年轻时尚、充满朝气与个性的服饰连锁品牌，以经营18-38岁“欧日韩”等潮流服饰为主营，并兼营各类时尚鞋帽、时装包、皮带、各类服装配饰等。该服装品牌都抖音上有自己的官方账户来卖货。

国际能源论坛，简称IEF，2000年前被称为“国际能源会议”，是在全球范围内能源生产国与消费国定期举办的一个重要的能源对话会，为各国在非正式场合讨论能源问题提供平台，以便在各主要能源生产国和消费国间建立信任、信息交流和加深对潜在的、具有世界性影响的能源问题的理解。近年来，IEF越来越多地探讨石油天然气发展中全球共同面对的问题。根据会议制定的程序，IEF每年召开一次，每次持续2～3天，会议地点设在同意主办论坛的国家，东道国应在上一次会议上表达主办的愿望，并为来自世界不同地区的能源工业领袖们提供就预先选择的三个现实问题发表意见的机会。

爱依服既有加盟店还有直营店。IEF爱依服是一家年轻、时尚、充满朝气与个性的服饰品牌，主要经营18-38岁“欧日韩”等潮流服饰兼营各类时尚鞋帽、时装包、皮带以及各类服装配饰等。丰富的产品、自由的配搭、时尚的色彩，让女性朋友在不同的场合，可以充分享受时尚活力、轻松自信的穿衣乐趣。目前IEF爱依服已经形成三种经营模式：直营模式、加盟模式、电商模式。三类模式相互促进，协调发展。自创立以来，IEF爱依服始终专注于新潮时尚服装行业，以更前卫、更时尚、更休闲的手法，诠释个性、时尚文化，用截然不同的语言呈现品牌的独特魅力！爱依服加盟所具备的优势：一、直接利用连锁总部所拥有的连锁系统、商标、管理、产品、技术，比自己去独创事业在时间上、资金上与精神上都减轻不少负担。对于完全没有生意经验的人来说，可以在较短的时间内入行直至成为行家。二、为了提高整个连锁企业的商誉，爱依服连锁总部都会随时开发或引进或采购独创性、高附加价值的商品，以产品差异化来竞争对手，连锁加盟店直接享受这种好处。三、由于连锁总部统筹出台广告宣传、节日促销、门店让利等活动，使加盟店在营销上能略胜一筹。四、连锁系统良好的商誉，等于给顾客吃下了定心丸，客户对于新开张的店或是不熟悉的店都会有亲切感。五、开张前的职前训练等装备工作，都可由爱依服连锁总部获得协助;开张后还会定期有人来做各项指导。六、自己独创生意，如果出现竞争对手，只有孤军奋战来应对，加盟店则有连锁总部为后盾，可为支援。七、自行创业则必须自己决定开店场所，而自己对该地点的好坏，往往没有信心;爱依服加盟店则可以有连锁总部咨询，帮助选到较好的店址。

该找个媒体曝光一下爱依服，上班老是加班不说老是想着法扣钱，辞职也要扣钱，五百一千都是随主管、店长瞎扣，公司没有一点规章制度

IEF测量蛋白质等电点操作时应注意如下：蛋白质的双向电泳的向为等电聚焦（Isoelectrofocusing，IEF），根据蛋白质的等电点不同进行分离，第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后，可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。需要注意：1、一向聚焦与二向电泳之间需要平衡，时间视蛋白质的性质而定，一般为10min，多不超过15min。2、过量的上样量会引起双向图形畸形，特别在一向聚焦时，当样品浓度超过5mg时，则蛋白质凝聚和沉淀，使二向时产生水平和垂直条纹。3、含尿素的试剂均应避免过高的温度处理，一般不要超过30℃，否则尿素分解产生异硫氰酸盐会引起羧基甲酰化而导致电荷不均一性。4、向中过量的去污剂会严重影响双向电泳图谱，因此聚焦完毕进行平衡前，用双蒸馏水冲洗胶条，以除去残留的去污剂。5、双向电泳中双向凝胶间的界面紧密接触非常重要，如果接触不好或者两者之间留有气泡，则导致转移时分子扩散。等电聚焦的优点：等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。电聚焦的优点：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄。由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离；可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达0.01pH 单位。

IE联邦快递优先服务，时效比较快些，相对来说价格也比普通的高一些。 IEF指的是联邦快递经济服务，时效与IE相比较要慢些，但相对而言价格要便宜。其实，说到底就是时效和价格的区别一个时效快价格高；一个时效慢价格低。

很不错的，IEF是一家年轻时尚，充满朝气与个性的服饰连锁机构

爱依服是中档档次。爱依服商贸有限公司创始于2004年，是一家多元化生态发展的集生产、销售于一体的时装品牌公司。公司旗下拥有IEF爱依服，IEF爱依服童装，古缇莉三大品牌，各品牌针对差异化的细分市场，来满足消费群体的多元需求。爱依服属于中档档次的品牌。是一家年轻时尚，充满朝气与个性的服饰连锁机构。爱依服的衣服特点爱依服品牌主营欧日韩潮流服饰，定位于18岁到38岁的年轻女性消费者。在这里，消费者们可以选购各种各样的时尚鞋帽、服装、皮带、配饰和包包，用多变的色彩彰显出自己的活力、自信。爱依服属于中档档次的品牌。爱依服成立于2004年，品牌隶属广东爱依服商贸有限公司，是一家年轻时尚，充满朝气与个性的服饰连锁机构。同时也是一家集生产、销售、售后服务等于一体的时装公司。公司旗下拥有IEF爱依服，IEF爱依服童装，古缇莉三大品牌。

电话投诉等等。向有关部门投诉，EF爱依服为厦门农和服饰有限公司（以下简称：“我司”）旗下著名服装品牌，近日我司发现市场上出现未经我司授权或许可擅自使用“IEF”、“爱依服”商标或使用包括“爱依服”在内的名称进行工商登记注册等侵权行为，为了维护公平正当的市场环境，保护我司及广大消费者、加盟合作伙伴的合法权益，现我司在此郑重声明如下：一、广东爱依服商贸有限公司为“IEF”、“爱依服”商标的独占使用许可权人，其他各方未经许可不得使用“IEF”、“爱依服”商标；二、目前IEF爱依服品牌已形成三类经营模式：直营模式、加盟模式、电商模式，广大消费者和加盟合作伙伴可通过官方网站确认经我司合法授权品牌店铺的具体信息，或联系我司进行咨询，请勿轻信非我司官方平台发放的任何消息；三、我司现严正声明：广州爱依服服装有限公司、爱依服装贸易（广州）有限公司、广州爱依服饰有限公司、广州市爱依服装有限公司、深圳市爱依服饰有限公司、安徽爱依服装有限公司、天津爱依服饰有限公司均与我司无任何合作关系或从属关系；任何第三方未经我司许可在公司名称或商业行为中使用“爱依服”名称、商标或品牌标识等行为，我司将通过法律途径展开维权行动。有效方法，打电话12345，北京市政府热线，比12315有用（我先在12315平台上投诉的，但是短信说要6天处理时长，所以又打了市政府热线），12345打进去的电话都会登记再让相关部门处理，后面还有回访，比12315效率高。打市政府热线后没几天，京东工商部就打电话来说愿意退款，等待处理。结果一等又是半个多月，客服专员31477真的LJ，就是不处理问题不跟进，不管你这边多急，他那边就是等，永远的等（因为太不负责，以至于我到现在都记得他的工号）。之前一直打的京东客服95618，我打了绝对不下2次电话，我敢说9%的客服并不会给你处理问题，他们永远就是我帮你留言或者转达，但是挂了电话啥也没干。后来又打京东消费者维权电话（4667733）把专员投诉了，专员才给回电了一下，然后就没有然后了。没办法，我又一边等一边想办法，最后又打了京东消费者维权电话，打了好多次，终于有一个客服帮我解决了问题。

handkerchief n.手帕； kerchief n. 头巾,围巾,手帕； lief ad. 欣喜,自愿； mischief n. 损害,伤害,淘气,恶作剧,灾祸； neckerchief n. 围巾，颈巾； relief n.宽慰；欣慰； thief n.窃贼，偷窃犯； unbelief n. 不信,疑惑,不信仰 扩展资料 　　其他单词： 　　belief n.相信；信念；信仰 　　brief a.简短的；短暂的 　　chief n.首长，头子 　　debrief v. 向...询问情况，汇报情况 　　disbelief n. 不信仰,不信,怀疑 　　fief n. 封地，活动范围 　　grief n.悲哀，悲痛，悲伤

可以。只要合同中没有对离职有相关规定就可以，进行正常的招聘就行。IEF以经营18-38岁“欧、日、韩”等潮流服饰为主营。并兼营各类时尚鞋帽，时装包，皮带，各类服装配饰等。IEF服装分为两大风格类别：欧美自由风，日韩淑女风。爱衣服品牌优势：时尚格调、风尚潮流、魅力经典、IEF致力给消费者完美精致，时尚典雅的穿衣体验。流线型剪裁、精致车工、以传承的精巧技艺对每个细节和步骤都讲究完美，保障对品质的追求。18-38岁对时尚有着比较高的追求，有一定的生活品味，对生活内涵有着独特见解的时尚女性

三维B超IEF左室内见一强回声光点,跟什么有关? 病情分析：你好这个胎儿发育过程中的心室内的“强光点”可能会随着胎儿的发育而消失, 指导意见：但如果同时存在心脏畸形,就要除外是否有染色体异常,建议遵医嘱定期孕检,严密观察胎儿的发育. 如果你对这个答案有什么疑问,请追问, 另外如果你觉得我的回答对你有所帮助,请千万别忘记采纳哟!

作用原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，它有两种形式，一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质在电泳中保持完整的状态，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。 而SDS-PAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。

艾哲是广州天琦服装有限公司旗下的女装品牌，价格不贵，普遍是100到300

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分类: 社会民生 >> 军事 解析: 电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度（或迁移率）来表 示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下电泳的速度。电泳技术以支持物分纸电泳，醋酸纤维素薄膜电泳，淀粉凝胶电泳，琼 脂（糖）凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。经凝胶形状分有水平平板电泳，园盘柱 状电泳及垂直平板电泳。 用支持体的电泳技术： 1.纸上电泳 2.醋酸纤维薄膜电泳3.薄层电泳 4.非凝胶性支持体区带电泳 （支持体有：淀粉，纤维素粉，玻璃粉，硅胶等) 5.凝胶支持体区带电泳 ①淀粉液 ②聚丙烯酰胺凝胶 ③琼脂（糖）凝胶 不用支持体的电泳技术： 1.Tiselius或微量电泳 2.显微电泳 3.等电点聚焦电泳技术 4.等速电泳技术 5.密度梯度电泳 电泳技术的应用 在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳（electropho-resis）。1809年俄国物理学家Peнce首先发现了电泳现象，但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分离蛋白质的界面电泳（boundary electrophoresis）之后，电泳技术才开始应用。本世纪60-70年代，当滤纸、聚丙烯酰胺凝胶等介质相继引入电泳以来，电泳技术得以迅速发展。丰富多彩的电泳形式使其应用十分广泛。电泳技术除了用于小分子物质的分离分析外，最主要用于蛋白质、核酸、酶，甚至病毒与细胞的研究。由于某些电泳法设备简单，操作方便，具有高分辨率及选择性特点，已成为医学检验中常用的技术。 一、电泳技术的基本原理和分类 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。 F＝QE 质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即： F′＝6πrην 式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时： F＝F′即QE＝6πrην 上式交换后可写成 ν/E的含意为单位电场强度下的移动速度，里可用迁移率μ表示，即 从上式可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。 自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。 二、影响电泳迁移率的因素 ⒈电场强度 电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。当电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。电压在500V以上，电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。 ⒉溶液的pH值溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（-COOH），又有碱性基团（-NH2）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点（isoelctric point，pI）。若溶液pH处于等电点酸侧，即pH＜pl，则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动。若溶液pH处于等电点碱侧，即pH＞pl，则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。 ⒊溶液的离子强度电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。其原因是带电质点吸引相反符合的离子聚集其周围，形成一个与运动质点符合相反的离子氛（ionic atmosphere），离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。可用离子强度I表示。 式中S表示溶液中离子种类，Ci和Zi分别表示每种离子的摩尔浓度与化合价。最常用I值在0.02-0.2之间。 ⒋电渗在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（electro-o *** osis）。其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电。如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH-带负电荷，与纸接触的水溶液因产生H3O+，带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速度要快，若质点原来移向正极，表现速度比其固有速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。 三、电泳分析常用方法 （一）醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。 ⒈材料与试剂醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液，浓度在0.05-0.09mol/L。 ⒉操作要点 ⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。 ⑵加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白质的常规电泳分析，每cm加样线不超过1μl，相当于60-80μg的蛋白质。 ⑶电泳：可在室温下进行。电压为25V/cm，电流为0.4-0.6mA/cm宽。 ⑷染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。 ⑸脱色与透明：对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是5％醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。 （二）凝胶电泳 以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广，介绍如下： ⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与 *** 白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。 ⒉琼脂糖凝胶电泳分离核酸的基本技术在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中，DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比；分子构型也对迁移率有影响，如共价闭环DNA＞直线DNA＞开环双链DNA。当凝胶浓度太高时，凝胶孔径变小，环状DNA（球形）不能进入胶中，相对迁移率为0，而同等大小的直线DNA（刚性棒状）可以按长轴方向前移，相对迁移率大于0。 ⑴设备与试剂：琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶，而且制胶与加样都比较方便，故应用比较广泛。核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有TBE（0.08mol/l Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/l EDTA）和THE（0.04mol/l Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸钠，0.0018mol/l EDTA）。 ⑵凝胶制备：用上述缓冲液配制0.5％-0.8％琼脂糖凝胶溶液，沸水浴或微波炉加热使之融化，冷至55℃时加入溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5μg/ml，然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中，厚度依样品浓度而定。注胶时，梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脱凝固后，取出梳子，加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。 ⑶样品制备与加样：溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料（0.025％溴酚蓝或桔黄橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使样品集中，每齿孔可加样5-10μg。 ⑷电泳：一般电压为5-15V/cm。对大分子的分离可用电压5V/cm。电泳过程最好在低温条件下进行。 ⑸样品回收：电泳结束后在紫外灯下观察样品的分离情况，对需要的DNA分子或特殊片段可从电泳后的凝胶中以不同的方法进行回收，如电泳洗脱法：在紫外灯下切取含核酸区带的凝胶，将其装入透析袋（内含适量新鲜电泳缓冲液），扎紧透析袋后，平放在水平型电泳槽两电极之间的浅层缓冲液中，100V电泳2-3小时，然后正负电极交换，反向电泳2分钟，使透析袋上的DNA释放出来。吸出含DNA的溶液，进行酚抽提、乙醇沉淀等步骤即可完成样品的回收。 其它还有低融点琼脂糖法、醋酸铵溶液浸出法、冷冻挤压法等，但各种方法都仅仅有利于小分子量DNA片段（＜1kb）的回收，随着DNA分子量的增大，回收量显著下降。 （三）等电聚焦电泳技术 等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。 ⒈IEF的基本原理在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动，直至某一pH位点时失去电荷而停止移动，此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点（pl）。同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它们的等电点上聚焦为止。可见在该方法中，等电点是蛋白质组分的特性量度，将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中，在电场内经过一定时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上，形成分离的蛋白质区带。 ⒉pH梯度的组成pH梯度的组成方式有二种，一种是人工pH梯度，由于其不稳定，重复性差，现已不再使用。另一种是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物，在正极端吸入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在负极端引入碱液，如氢氧化钠、氨水等。电泳开始前两性电解质的混合物pH为一均值，即各段介质中的pH相等，用pH0表示。电泳开始后，混合物中pH最低的分子，带负电荷最多，pI1为其等电点，向正极移动速度最快，当移动到正极附近的酸液界面时，pH突然下降，甚至接近或稍低于PI1，这一分子不再向前移动而停留在此区域内。由于两性电解质具有一定的缓冲能力，使其周围一定的区域内介质的pH保持在它的等电点范围。pH稍高的第二种两性电解质，其等电点为pI2，也移向正极，由于pI2＞pI1，因此定位于第一种两性电解质之后，这样，经过一定时间后，具有不同等电点的两性电解质按各自的等电点依次排列，形成了从正极到负极等电点递增，由低到高的线性pH梯度，如图16-3所示。 ⒊两性电解质载体与支持介质理想的两性电解质载体应在pI处有足够的缓冲能力及电导，前者保证pH梯度的稳定，后者允许一定的电流通过。不同pI的两性电解质应有相似的电导系数从而使整个体系的电导均匀。两性电解质的分子量要小，易于应用分子筛或透析方法将其与被分离的高分子物质分开，而且不应与被分离物质发生反应或使之变性。 图16－3 pH梯度形成示意图 常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等，其中聚丙烯酰胺凝胶为最常应用。 电泳后，不可用染色剂直接染色，因为常用的蛋白质染色剂也能和两性电解质结合，因此应先将凝胶浸泡在5％的三氯醋酸中去除两性电解质，然后再以适当的方法染色。 （四）其他电泳技术 ⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/Sd S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋白质变性和肽链舒展。 IEF电泳结束后，将圆柱形凝胶在SDS-PAGE所应用的样品处理液（内含SDS、β-巯基乙醇）中振荡平衡，然后包埋在SDS-PAGE的凝胶板上端，即可进行第二向电泳。 IEF/ SDS-PAGE双向电泳对蛋白质（包括核糖体蛋白、组蛋白等）的分离是极为精细的，因此特别适合于分离细菌或细胞中复杂的蛋白质组分。 ⒉毛细管电泳 Neuhoff等人于1973年建立了毛细管均一浓度和梯度浓度凝胶用来分析微量蛋白质的方法，即微柱胶电泳，均一浓度的凝胶是将毛细管浸入凝胶混合液中，使凝胶充满总体积的2/3左右，然后将其揿入约厚2mm的代用粘土垫上，封闭管底，用一支直径比盛凝胶的毛细管更细的硬质玻璃毛细管吸水铺在凝胶上。聚合后，除去水层并用毛细管加蛋白质溶液（0.1-1.0μl，浓度为1-3mg/ml）于凝胶上，毛细管的空隙用电极缓冲液注满，切除插入粘土部分，即可电泳。 毛细管电泳分析仪的诞生，特别是美国生物系统公司的高效电泳色谱仪为DNA片段、蛋白质及多肽等生物大分子的分离、回收提供了快速、有效的途径。高效电泳色谱法是将凝胶电泳解析度和快速液相色谱技术溶为一体，在从凝胶中洗脱样品时，连续的洗脱液流载着分离好的成分，通过一个连机检测器，将结果显示并打印记录。高效电泳色谱法既具有凝胶电泳固有的高分辨率，生物相容性的优点，又可方便地连续洗脱样品。

艾格Etam、歌莉娅Gloria、Only女装、茵曼、红袖Hopeshow、哥弟、太平鸟、37°Love、千百惠、锦瑟

可以电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πrην可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。影响电泳迁移率的因素⒈电场强度 电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。当电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。电压在500V以上，电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。⒉溶液的pH值 溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（-COOH），又有碱性基团（-NH2）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点（isoelctric point，pI）。若溶液pH处于等电点酸侧，即pH＜pl，则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动。若溶液pH处于等电点碱侧，即pH＞pl，则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。⒊溶液的离子强度 电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。其原因是带电质点吸引相反符合的离子聚集其周围，形成一个与运动质点符合相反的离子氛（ionic atmosphere），离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。可用离子强度I表示。⒋电渗 在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（electro-osmosis）。其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电。如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH-带负电荷，与纸接触的水溶液因产生H3O+，带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速度要快，若质点原来移向正极，表现速度比其固有速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。电泳分析常用方法（一）醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5μg的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存。⒈材料与试剂 醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为pH8.6的巴比妥缓冲液，浓度在0.05-0.09mol/L。⒉操作要点⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。⑵加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白质的常规电泳分析，每cm加样线不超过1μl，相当于60-80μg的蛋白质。⑶电泳：可在室温下进行。电压为25V/cm，电流为0.4-0.6mA/cm宽。⑷染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。⑸脱色与透明：对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是5％醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。（二）凝胶电泳以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广，介绍如下：⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述 琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。⒉琼脂糖凝胶电泳分离核酸的基本技术 在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中，DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比；分子构型也对迁移率有影响，如共价闭环DNA＞直线DNA＞开环双链DNA。当凝胶浓度太高时，凝胶孔径变小，环状DNA（球形）不能进入胶中，相对迁移率为0，而同等大小的直线DNA（刚性棒状）可以按长轴方向前移，相对迁移率大于0。⑴设备与试剂：琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶，而且制胶与加样都比较方便，故应用比较广泛。核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有TBE（0.08mol/L Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸钠，0.0018mol/L EDTA）。⑵凝胶制备：用上述缓冲液配制0.5％-0.8％琼脂糖凝胶溶液，沸水浴或微波炉加热使之融化，冷至55℃时加入溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5μg/ml，然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中，厚度依样品浓度而定。注胶时，梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脱凝固后，取出梳子，加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。⑶样品制备与加样：溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料（0.025％溴酚蓝或桔黄橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使样品集中，每齿孔可加样5-10μg。⑷电泳：一般电压为5-15V/cm。对大分子的分离可用电压5V/cm。电泳过程最好在低温条件下进行。⑸样品回收：电泳结束后在紫外灯下观察样品的分离情况，对需要的DNA分子或特殊片段可从电泳后的凝胶中以不同的方法进行回收，如电泳洗脱法：在紫外灯下切取含核酸区带的凝胶，将其装入透析袋（内含适量新鲜电泳缓冲液），扎紧透析袋后，平放在水平型电泳槽两电极之间的浅层缓冲液中，100V电泳2-3小时，然后正负电极交换，反向电泳2分钟，使透析袋上的DNA释放出来。吸出含DNA的溶液，进行酚抽提、乙醇沉淀等步骤即可完成样品的回收。其它还有低融点琼脂糖法、醋酸铵溶液浸出法、冷冻挤压法等，但各种方法都仅仅有利于小分子量DNA片段（＜1kb）的回收，随着DNA分子量的增大，回收量显著下降。（三）等电聚焦电泳技术等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子带负电荷向阳极移动，直至某一pH位点时失去电荷而停止移动，此处介质的pH恰好等于聚焦蛋白质分子的等电点（pl）。同理，位于酸性区域的蛋白质分子带正电荷向阴极移动，直到它们的等电点上聚焦为止。可见在该方法中，等电点是蛋白质组分的特性量度，将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH梯度的凝胶介质中，在电场内经过一定时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上，形成分离的蛋白质区带。⒉pH梯度的组成 pH梯度的组成方式有二种，一种是人工pH梯度，由于其不稳定，重复性差，现已不再使用。另一种是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物，在正极端吸入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在负极端引入碱液，如氢氧化钠、氨水等。电泳开始前两性电解质的混合物pH为一均值，即各段介质中的pH相等，用pH0表示。电泳开始后，混合物中pH最低的分子，带负电荷最多，pI1为其等电点，向正极移动速度最快，当移动到正极附近的酸液界面时，pH突然下降，甚至接近或稍低于PI1，这一分子不再向前移动而停留在此区域内。由于两性电解质具有一定的缓冲能力，使其周围一定的区域内介质的pH保持在它的等电点范围。pH稍高的第二种两性电解质，其等电点为pI2，也移向正极，由于pI2＞pI1，因此定位于第一种两性电解质之后，这样，经过一定时间后，具有不同等电点的两性电解质按各自的等电点依次排列，形成了从正极到负极等电点递增，由低到高的线性pH梯度，如图16-3所示。⒊两性电解质载体与支持介质 理想的两性电解质载体应在pI处有足够的缓冲能力及电导，前者保证pH梯度的稳定，后者允许一定的电流通过。不同pI的两性电解质应有相似的电导系数从而使整个体系的电导均匀。两性电解质的分子量要小，易于应用分子筛或透析方法将其与被分离的高分子物质分开，而且不应与被分离物质发生反应或使之变性。常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等，其中聚丙烯酰胺凝胶为最常应用。电泳后，不可用染色剂直接染色，因为常用的蛋白质染色剂也能和两性电解质结合，因此应先将凝胶浸泡在5％的三氯醋酸中去除两性电解质，然后再以适当的方法染色。（四）其他电泳技术⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法 1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋白质变性和肽链舒展。IEF电泳结束后，将圆柱形凝胶在SDS-PAGE所应用的样品处理液（内含SDS、β-巯基乙醇）中振荡平衡，然后包埋在SDS-PAGE的凝胶板上端，即可进行第二向电泳。IEF/ SDS-PAGE双向电泳对蛋白质（包括核糖体蛋白、组蛋白等）的分离是极为精细的，因此特别适合于分离细菌或细胞中复杂的蛋白质组分。⒉毛细管电泳 Neuhoff等人于1973年建立了毛细管均一浓度和梯度浓度凝胶用来分析微量蛋白质的方法，即微柱胶电泳，均一浓度的凝胶是将毛细管浸入凝胶混合液中，使凝胶充满总体积的2/3左右，然后将其揿入约厚2mm的代用粘土垫上，封闭管底，用一支直径比盛凝胶的毛细管更细的硬质玻璃毛细管吸水铺在凝胶上。聚合后，除去水层并用毛细管加蛋白质溶液（0.1-1.0μl，浓度为1-3mg/ml）于凝胶上，毛细管的空隙用电极缓冲液注满，切除插入粘土部分，即可电泳。目前毛细管电泳分析仪的诞生，特别是美国生物系统公司的高效电泳色谱仪为DNA片段、蛋白质及多肽等生物大分子的分离、回收提供了快速、有效的途径。高效电泳色谱法是将凝胶电泳解析度和快速液相色谱技术溶为一体，在从凝胶中洗脱样品时，连续的洗脱液流载着分离好的成分，通过一个连机检测器，将结果显示并打印记录。高效电泳色谱法既具有凝胶电泳固有的高分辨率，生物相容性的优点，又可方便地连续洗脱样品。各电泳法，除另有规定外，照下述方法操作。一、纸电泳法 1.仪器装置 包括电泳室及直流电源两部分。 常用的水平式电泳室装置如图，包括两个电泳槽A和一个可以密封的玻璃(或相应材料)盖B；两侧的电泳槽均用有机玻璃（或相应材料）板C分成两部分；外格装有铂电极(直径0.5～0.8cm)D；里格为可放滤纸E的有机玻璃电泳槽架F，此架可从槽中取出；两侧电泳槽A内的铂电极D经隔离导线穿过槽壁与外接电泳仪电源相连。 电源为具有稳压器的直流电源，常压电泳一般在100～500V，高压电泳一般在500～10 000V。2. 操作法 (1) 电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液(pH3.0) 取枸橼酸 (C6H8O7·H2O)39.04g与枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g，加水4000ml，使溶解。 (2) 滤纸 取色谱滤纸置1mol/L甲酸溶液中浸泡过夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干，备用。可按需要裁成长27cm、宽18cm的滤纸，或根据电泳室的大小裁剪，并在距长度方向一端5～8cm处划一起始线，每隔2.5～3cm处做一记号备点样用。 (3) 点样 有湿点法和干点法。湿点法是将裁好的滤纸全部浸入枸橼酸盐缓冲液(pH3.0)中，湿润后，取出，用滤纸吸干多余的缓冲液，置电泳槽架上，使起始线靠近阴极端，将滤纸两端浸入缓冲液中，然后用微量注射器精密点加供试品溶液，每点10μl,共3点，并留2个空白位置。 干点法是将供试品溶液点于滤纸上，吹干、再点，反复数次，直至点完规定量的供试品溶液，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处最后喷湿，本法适用于稀的供试品溶液。 (4) 电泳 于电泳槽中加入适量电泳缓冲液,浸没铂电极，接通电泳仪稳压电源挡,调整电压梯度为18～20V/cm，电泳约1小时45分钟，取出,立即吹干,置紫外光灯(254nm)下检视，用铅笔划出紫色斑点的位置。 (5) 含量测定 剪下供试品斑点和与斑点位置面积相近的空白滤纸，剪成细条，分别置试管中，各精密加入0.01mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，放置1小时，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，也可用自然沉降或离心法倾取上清液，按各药品项下的规定测定吸收度，并按吸收系数计算含量。二、醋酸纤维素薄膜电泳法 1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂 (1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加水溶解使成1000ml。 (2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。 (3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混匀。 (4) 透明液 取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。 3.操作法 (1) 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm的膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 点样与电泳 于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl,在10～12V/cm电位梯度下电泳。电泳区带距离以4～5cm为宜。 (3) 染色 电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。 (4) 透明 将洗净并完全干后的膜条浸于透明液中10～15分钟，取出平铺于洁净的玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光度计上测定和作标本长期保存。 (5) 含量测定 未经透明处理的醋酸纤维素薄膜电泳图可按各药品项下规定的方法测定，一般采用洗脱法或扫描法，测定各蛋白质组分的相对百分含量。 洗脱法 将洗净的膜条用滤纸吸干，剪下供试品溶液各电泳图谱的电泳区带，分别浸于1.6％的氢氧化钠溶液中，振摇数次，至洗脱完全， 于一定波长下测定吸收度。同时剪取与供试品膜条相应的无蛋白部位，同法操作作对照。先计算吸收值总和，再计算各蛋白组分所占百分率。 扫描法 将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪通过反射 （未透明薄膜） 或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，横坐标为膜条的长度，纵坐标为吸收度，计算各蛋白组分的百分含量。亦可用微机处理积分计算。三、琼脂糖凝胶电泳法 1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂 (1) 醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH至3.0，再加水至1000ml。 (2) 甲苯胺蓝溶液 取甲苯胺蓝0.1g，加水100ml使溶解。 3.操作法 (1)制胶 取琼脂糖约0.2g，加水10ml，置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)10ml，混匀，趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻璃板上，厚度约3mm，静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层，即得。 (2) 标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下规定配制。 (3) 点样与电泳 在电泳槽内加入醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0),将凝胶板置于电泳槽架上，经滤纸桥浸入缓冲液。于凝胶板负极端分别点样1μl，立即接通电源，在电压梯度约30V/cm，电流强度1～2mA/cm的条件下，电泳约20分钟，关闭电源。 (4) 染色与脱色 取下凝胶板，用甲苯胺蓝溶液染色，用水洗去多余的染色液至背景无色为止。四、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 1.仪器装置 通常由稳流电泳仪和圆盘或平板电泳槽组成。其电泳室有上、下两槽,每个槽中都有固定的铂电极，铂电极经隔离电线接于电泳仪稳流挡上。2.试剂 (1)溶液A 取三羟甲基氨基甲烷36.6g，四甲基乙二胺0.23ml,加0.1mol/L盐酸溶液48ml，再加水溶解并稀释至100ml,置棕色瓶内，在冰箱中保存。 (2)溶液B 取丙烯酰胺30.0g、次甲基双丙烯酰胺0.74g，加水溶解并稀释至100ml,滤过，置棕色瓶内，在冰箱中保存。 (3)电极缓冲液(pH8.3) 取三羟甲基氨基甲烷6g、甘氨酸28.8g,加水溶解并稀释至1000ml，置冰箱中保存，用前稀释10倍。 (4)溴酚蓝指示液 取溴酚蓝0.1g,加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml与90％乙醇5ml,微热使溶解，加20％乙醇制成250ml。 (5)染色液 取0.25％(W/V)考马斯亮蓝G<[250]>溶液2.5ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。 (6)稀染色液 取上述染色液2ml，加12.5％(W/V)三氯醋酸溶液至10ml。 (7)脱色液 7％醋酸溶液。3.操作法 (1)制胶 取溶液A2ml，溶液B5.4ml，加尿素2.9g使溶解，再加水4ml，混匀，抽气赶去溶液中气泡， 加0.56％过硫酸铵溶液2ml，混匀制成胶液，立即用装有长针头的注射器或细滴管将胶液沿管壁加至底端有橡皮塞的小玻璃管(10×0.5cm)中,使胶层高度达6～7cm, 然后徐徐滴加水少量，使覆盖胶面，管底气泡必须赶走，静置约30分钟，待出现明显界面时即聚合完毕，吸去水层。 (2)标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下的规定。 (3)电泳 将已制好的凝胶玻璃管装入圆盘电泳槽内，每管加供试品或标准品溶液50～100μl，为防止扩散可加甘油或40％蔗糖溶液1～2滴及0.04％溴酚蓝指示液1滴,也可直接在上槽缓冲液中加0.04％溴酚蓝指示液数滴，玻璃管的上部用电极缓冲液充满，上端接负极、下端接正极。调节起始电流使每管为1mA，数分钟后，加大电流使每管为2～3mA，当溴酚蓝指示液移至距玻璃管底部1cm处，关闭电源。 (4)染色和脱色 电泳完毕，用装有长针头并吸满水的注射器,自胶管底部沿胶管壁将水压入，胶条即从管内滑出，将胶条浸入稀染色液过夜或用染色液浸泡10～30分钟，以水漂洗干净，再用脱色液脱色至无蛋白区带凝胶的底色透明为止。 (5)结果判断 将胶条置灯下观察，根据供试品与标准品的色带位置和色泽深浅程度进行判断。 相对迁移率 供试品和标准品的电泳区带有时可用相对迁移率(R"<[m]>)进行比较。其计算式如下： 进胶端到供试品或标准品区带的距离 相对迁移率(R"<[m]>)＝——进胶端到溴酚蓝区带的距离 扫描 将清晰的胶条置双波长薄层扫描仪或凝胶电泳扫描仪中扫描并积分，由各组分的峰面积计算百分含量。五、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白分子量,是根据大多数蛋白都能与阳离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物,使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不同蛋白分子的电荷效应,使蛋白分子相对迁移率(R"<[m]>)的大小完全取决于分子量的高低，因此可从已知分子量的标准蛋白的对数和相对迁移率所作的标准曲线中求出供试品的分子量。1.仪器装置 除另有规定外，同聚丙烯酰胺凝胶电泳。2.试剂 (1)丙烯酰胺液溶 称取丙烯酰胺22.2g与双丙烯酰胺0.6g， 溶于100ml水中，贮于褐色瓶中低温保存。 (2) 凝胶缓冲液 称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)8.82g 、磷酸氢二钠(Na2HPO4 ·12H2O)51.55g与十二烷基硫酸钠2.0g，加水至1000ml(若有沉淀析出,可加温至37℃溶解)。 (3)电泳缓冲液 将凝胶缓冲液稀释1倍。 (4)染色液 称取25mg考马斯亮蓝R<[250]>,溶于57％乙醇与9.2％醋酸混合液100ml中。 (5)脱色液 取无水乙醇75ml，加冰醋酸50ml，用水稀释至1000ml。3.操作法 除下列规定外，其他均同聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (1)制胶 用丙烯酰胺溶液－凝胶缓冲液－水－1.6％过硫酸铵溶液-四甲基乙二胺(需冷却)(10.1∶15.0∶3.4∶1.5∶0.045) 配制而成。 (2)标准蛋白溶液及供试品溶液的制备 取标准蛋白，加水制成每1ml中含2～5mg的溶液，与水解液(取尿素21.6g和十二烷基硫酸钠0.04g，溶于40ml水中)1∶3混合，置冰箱中过夜。供试品照上述方法配制。 (3)电泳 调节电流使每管为8mA。4.相对迁移率和分子量计算 将电泳脱色后的区带用卡尺或用扫描定位法测量染料移动的距离、染色前胶条长度、蛋白移动距离和脱色后的胶条长度。按下式计算相对迁移率： 蛋白移动的距离 染色前的胶条长度 相对迁移率(R"<[m]>)＝———×——— 脱色后的胶条长度 染料移动的前沿距离 以R"<[m]>为横坐标,已知分子量标准蛋白的对数为纵坐标,在半对数坐标纸上绘图,由标准曲线中查出供试品分子量。

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1申请条件：Marie Curie冠名的资助主要关注其中的两个：Marie Curie International Incoming Fellowships (以下简称IIF)和Marie Curie Intra-European Fellowships for Career Development (以下简称IEF)。前一个针对身处欧盟以外的申请者，后一个针对身处欧盟的申请者，这两个fellowship申请的过程几乎相同，都需要至少四年的研究经历或者具有博士学位，也可以说就是一个博士后的资助。但是两者都不限国籍（不是欧盟的也可以），资助时间都是最多24个月，申请时需要找到一个欧盟范围内的host，你的工作将在那儿开展。研究的内容则不限，不论哲学、社会科学、自然科学都可以，只要你让欧盟相信值得资助你。IIF除了资助你在欧盟的工作外，还可以涵盖你从欧盟回国后最多一年的工资（当然，根据当地的生活水平有一个修正）。2详细步骤：一 准备proposalIIF和IEF的申请一年一次，一般从3月份开始到8月截至，年底知道结果，第二年开始办理正式合同，加上签证什么的，一般从申请到开始工作至少要一年，因此要提前做好准备。建议你先要找一个host，可以是欧盟内部的大学或研究所甚至公司的研究人员，也就是老板，你的研究计划将在那儿开展，至于idea可以是自己的，也可是老板的，或者你们共同的。但最好是自己的，这样更加锻炼自己。先和未来的老板联系，说你想到他/她那儿干活，想申请IIF或者IEF，你在欧盟外就选择IIF，已经在欧盟了就选择IEF。和老板商量敲定要做什么后，就可以开始准备proposal了。可从网上的申请向导获取更多细节信息。其中，你需要准备三部分材料，part A，part B和推荐信。前两者是必须的，推荐信则不是，且最多可以有三封。A部分由四个表格组成，主要是一些大概的信息，包括你和host的情况，比较容易，照着填就可以了。B部分是最重要的部分，包括六个部分：B1 SCIENTIFIC AND TECHNOLOGICAL QUALITY（你的idea的细节）B2 TRAINING（你能得到的锻炼）B3 RESEARCHER（你自己的情况）B4 IMPLEMENTATION（idea如何实现）B5 IMPACT（你的idea对科学和欧盟的贡献）B6 ETHICAL ISSUES（伦理道德上的问题）申请向导中对每个部分的内容有详细的介绍和规定，照着准备就行了。你能不能得到资助几乎就看B部分了！二上传proposal现在整个过程都可以在网上进行，首先你需要到申请一个帐号，进去后填上相关的信息，就可以在线填PART A了，然后上传你的PART B（只能是PDF格式）。但推荐信不能自己上传，你需要填上推荐人的电子邮件，你的推荐人会收到一封电子邮件，只要照着邮件的内容做，由推荐人自己上传推荐信。在截至日期之前，PART A和B的内容都可以修改。截至日期之后，就以最后一次修改的内容为准。三 等待结果截至日期之后你的proposal会送给专家进行评审，根据PART B的前五个部分分别打分，分数从0到5分。判据 权重（%） 及格分S&T Quality 25 3Training 15 3Researcher 25 4Implementation 15 没有Impact 20 没有可以看到前三者有及格分，如果任何一项低于此就会出局。最后算出总分，排出所有申请者的名次，根据预算的情况决定哪些可以受到资助，平均成功几率在25%-30%之间。祝你好运！

Lucifer，一位被人们称为“恶魔”的与 Fov、 Sweet. gostop齐名的鬼王；一位与 Moon携手创造 MYM辉煌的UDer。曾经的他夺得过ESWC 2006全球总冠军；帮助 MYM登上WC3L冠军宝座；帮助韩国走向SW冠军。虽然最近的糟糕战绩让他跌入低谷，但他仍然值得所有玩家的尊敬。让我们一同走入 Lucifer的世界，感受这位世界顶尖职业选手的职业生涯的快乐与艰辛。 Lucifer--堕落天使的名字，可是在MYM] Lucifer却象是一个神圣天使，凌驾于WAR3之上。　　同样来自韩国，同样也是世界的三大鬼王之一，lucifer却有着很不相同的气质：成熟的外表下，掩藏不住的是来自内心最深处的爆发。一次次的死亡三连击，让每一位与其交战的选手都胆战心惊。　　WCG的失利没有让Lucifer感到丝毫动摇，练习，还是练习，为了心中的那个理想，他在努力着，终于在获得了ESWC冠军以后，他的时代已经来临了。此后Lucifer便一发不可收拾，连夺PPS中韩对抗冠军以及IEST全球总决赛的亚军，成为了最近一年表现最出色的UD选手之一。Lucifer个人资料：名字：Jae Wook NOH（鲁宰旭）年龄：20出生日期：1986年8月19日城市：首尔国籍： 韩国 主要大赛成绩:[2002] ITV War3 League 8强 [2003] ITV War3 Ranking match 16强 [2003.7] HP ongamenet War3 League 8强 [2003.8] Sonogong FrozenThrone League 16强 [2003.9] Suma War3 ProteamLeague 季军 [2004.2] Ongamenet FrozenThrone League 8强 [2004.7] WEG第一赛季 8强 [2004.8] WCG 韩国预选赛第4 [2004.8] CNGL 冠军 [2005.1] PL5 30强 [2005.2] XP Special League 季军 [2005.6] ingame.Warcraft-Cup#9 SpringSeason 冠军 [2005.6] ingame.Warcraft-Cup#10 SpringSeason 冠军 [2005.7] ingame.Warcraft-Cup #2 Summer 2005 冠军 [2005.7] ingame.Warcraft-Cup #1 Summer 2005 冠军 [2005.7] MWL 1 (8th Place) [2005.8] ingame.Warcraft-Cup #6 Summer 2005 冠军 [2005.8] CKCG 2005 8强 [2005.12] ingame.Warcraft-Cup #9 FallSeason2005 冠军 [2005.12] WEG 第三赛季总决赛 季军 [2005.12] inCup Fall 第六赛季 冠军 [2006.1] StarsWars 2 韩国团体冠军 [2006.2] inCup Winter 第四赛季 冠军 [2006.3] Trans-Athlantic Showdown 2ON2 冠军（与MYM]Moon搭档） [2006.4] ingame.Warcraft-Cup 线下总决赛 冠军 [2006.4] ingame.Warcraft-Cup 第十赛季 冠军 [2006.5] V-Sports All-Stars 锦标赛 第4 [2006.6] MIL 亚军 [2006.6] WC3L 第九赛季 MYM团体冠军 [2006.7] ESWC 2006世界总决赛 冠军 [2006.7] ingame.Warcraft-Cup 第十赛季 冠军 [2006.7] InCup 2on2 #11 冠军（与MYM]Moon搭档） [2006.8] WCG 韩国预选赛 季军 [2006.8] NGL-ONE 线下总决赛 MYM团体冠军 [2006.9] IEF 2006 8强 [2006.12] 中韩对抗赛 冠军 [2006.12] IEST 2006 季军 [2007.1] All Stars Series 亚军 [2007.1] Battle.net Global Ladder Season IV Finals 亚军 [2007.1] WC3L 第十赛季 MYM团体亚军 [2007.3] Kespa杯 亚军 [2007.4] NGL-ONE 线下总决赛2006/2007 MYM团体亚军 [2007.4] NSL 季军 Lucifer个人喜好：喜欢吃的食物：任何食物除了kimchi（一种韩国泡菜）喜欢看的电影：蝙蝠侠喜欢的歌曲：hm, EVE"S SONG（韩国歌曲）喜欢的书：任何书！ 喜欢的人：喜欢所有MYM的队友们喜爱的运动：足球喜爱的游戏：War3欣赏的选手：MYM的所有队友们和Lyn各个种族所喜爱的单位：NE：小精灵ORC：咕噜兵HUM：大法师UD：死亡骑士喜欢玩的地图：所有喜爱的车：法拉利喜爱的国家：韩国最喜欢的英雄：死亡骑士最喜欢杀死的英雄：剑圣最喜欢的种族：UD婚姻状况：未婚第一次玩的RTS类游戏：忘记了，总之不是SC 喜欢的单位：憎恶不喜欢的事：没有什么不喜欢的最喜欢的片段和女演员：Giselle Bündchen / Nicole Kidman最喜欢的演员：Brad Pitt

中国星际第一人 个人简介 姓名： 罗贤 中国星际争霸选手 星际ID： LX 生日： 1984年9月7日 星龄： 4年（其间间断无数次） 擅长种族：Protoss 偶像： Nal_Ra , Reach , Kingdom 个人荣誉: 04 CEG武汉赛区亚军 04 CEG联赛团体季军 05 湖北电子竞技大赛 亚军 05 CKCG武汉赛区 冠军 05“世纪杯”电子竞技大赛 冠军 05 CKCG中韩对抗赛 8强 05 CGEL绿色动力杯湖北赛区 冠军 05 VS金币电子竞技大赛全国 亚军 06 WCG沈阳赛区 亚军 06 WCG中国赛区总决赛 冠军 06 WCG世界总决赛 殿军 06 PLU星际第一人争霸战 冠军 06 CEG西安站 冠军 06 GOC联赛全国总决赛 冠军 07 NeoStarLeague 冠军 07 G联赛第一季线上 冠军 07 PGL职业选手联赛第一季 殿军 07 IEF2007大连赛区 冠军 07 IEF2007中国总决赛 冠军 07 IEF2007世界总决赛 殿军 07 WCG外卡赛 亚军 07 WCG中国区决赛 殿军 07 PLU SSL3 冠军 07 G联赛第二季线上 冠军 07 G联赛第二季线下 冠军 07 G联赛第三季线上 亚军 07 G联赛第三季线下 亚军 07 CEG全国电子竞技锦标赛 冠军 07 PGL职业选手联赛第二赛季 冠军 07 WGT沈阳赛区 冠军 07 WGT全国总决赛 冠军 07 CEG武汉站 季军 07 CEG长春站 亚军 07 CEG绍兴站 冠军 08 WCG外卡赛 亚军 08 WCG中国区中决赛 亚军 08 世界传统体育运动会 季军 08 CEG北京站 亚军 08 WGT全国总决赛 亚军 08 CEG全国电子竞标赛 亚军 08 pgl职业选手第三赛季 季军 08 G联赛第二赛季 亚军 08 PLU SSL5 亚军 LX在CKCG2005中一战成名，WCG2006横扫super 66等众高手成为了中国区冠军，更是在WCG2006世界总决赛中取的了第四的好成绩。在接下来的时间里，也希望他能更加强大，也希望各位支持他。 关于罗贤： 罗贤的BLOG： http://blog.sina.com.cn/u/1231425652 百度贴吧： http://post.baidu.com/f?kw=%C2%DE%CF%CD麻烦采纳，谢谢!

1.就是被alone光环咒死的，只要alone没了，super就能成为第一位中国得到WCG冠军的人。2.永远打不过tossgirl的男人2004 CEG湖南赛区亚军2004 国家队选拔赛亚军2004 中韩对抗赛击败韩国天王BOXER2004 CEG全国电子竞技联赛冠军2005 CKCG广州赛区冠军2005 PLU3中国星际个人联赛冠军2005 PLU4中国星际个人联赛冠军2005 PLU5中国星际个人联赛冠军2006 WCG北京赛区亚军2006 IEF北京赛区亚军2006 CEG全国电子竞技运动会北京站冠军2006 CEG全国电子竞技运动会广州站亚军2006 联想IEST湖南赛区冠军2006 联想IEST全国总决赛亚军2006 联想IEST全球总决赛亚军2006 星际第一人站 亚军2007 IEF北京赛区冠军2007 WCG成都赛区亚军2007 CEG西安站冠军2007 CEG绍兴站季军2008 WCG外卡赛冠军2008 WGT武汉赛区冠军2008 【星际十年SSL4ever】之 第四届“超级对战”中国星际超级联赛 super&rushgoon 季军2008 G联赛08第一赛季 季军2008 电竞国家队选拔赛星际比赛 亚军2009 WCG武汉赛区 冠军2009 IEF武汉赛区 冠军2009 PCGA衡阳站 冠军2009 PCGA全国总决赛 亚军2009 G联赛08第三赛季 亚军2009 G联赛第七赛季 季军2009 星际第一人站 八强2010 WCG外卡赛 亚军

　　EHOME (LD)中国 Dota EHOME战队　　2007年10月份，EHOME俱乐部将国内顶尖DotA队伍HtmL战队收至麾下，成立EHOME.DotA分队。这支队伍获得了2007年国内90%的赛事冠军。其成员为：万宁"mN"、黄翔"longdd"、张文立"GK"、王晓宁"amei"、房甍"SatXIII_"、易熙文"IsuN"。在取得IEF2007网吧赛总决赛冠军后，SatXIII_离队，原IfNt核心队员胡天澍"Soulk"、原GL核心邹倚天"820"加盟。新阵容先后获得了IEF国际大师赛亚军、CDL季后赛总决赛冠军等成绩。为了追求更好的赛训成绩，俱乐部安排队员统一线下集训，因此队伍人员调整。mN、amei、IsuN暂停活动，Soulk加盟线上队伍[GOW]，而原GL战队主力成员董灿"dclxjdc"、张知严 "Shasha"和原oNce战队核心伍声"2009_"加盟。新阵容在PGL2008第三赛季总决赛中从败者组中杀出以2:0翻盘获得冠军。5月份，原GL战队核心康钊"Snoy"加盟EHOME担任教练，无疑使这支队伍更让人期待。目前队伍已在2008年北京训练基地（北京中关村E空间游戏体验中心）展开集训，备战各大赛事，向世界冠军发起冲击。　　主要成绩：　　WGT2007中国总决赛　　CNBN杯DotA联赛　　AACC全国电子竞技大赛　　第一届CETC电子竞技大赛　　英特尔IEF2007全国网吧赛总决赛　　ADC中国区　　英特尔IEF2007国际大师赛　　PGL2008 第三赛季DotA全明星邀请赛　　WCG2008北京赛区　　现役阵容：　　董灿"dclxjdc"（队长）　　黄翔"longdd"　　张文立"GK"　　张知严 "Shasha"　　伍声"2009_"　　康钊"Snoy"（教练）　　曾效力队员：　　万宁"mN"　　王晓宁"amei"　　房甍"SatXIII_"　　易熙文"IsuN"　　胡天澍"Soulk"　　邹倚天"820"　　张堃"xt_xxx"　　陈瀚"bubble"Ronaldo　　In the end　　Xwkkx　　Ehome在08过后 G联赛输给7L以后 Sony GK DC离队 队伍重组 招来了Xwkkx In the end Ronaldo（上海马超） 不过成绩并不理想 ACG失败 WCG北京赛区输给大学队伍SMTH未能出线 所以除了357 820以外的3位队员只能遭遇踢队 目前DC归队当教练 GK也回来了 前7L著名队员DGC强势加盟 目前所有人正期待第5人的出现 希望EHOME能有好的发展　　现役阵容　　EHOME.GK　　EHOME.820　　EHOME.357　　EHOME.DGC　　EHOME.Xwkkx

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姓名： 罗贤 星际ID： =PNZ=Legend)L.x 生日： 1984年9月7日 星龄： 4年（其间间断无数次） 擅长种族：Protoss 偶像： Nal_Ra , Reach , Kingdom 个人荣誉:04 CEG武汉赛区亚军04 CEG联赛团体季军05 湖北电子竞技大赛 亚军05 CKCG武汉赛区 冠军05“世纪杯”电子竞技大赛 冠军05 CKCG中韩对抗赛 8强05 CGEL绿色动力杯湖北赛区 冠军05 VS金币电子竞技大赛全国 亚军06 WCG沈阳赛区 亚军06 WCG中国赛区总决赛 冠军06 WCG世界总决赛 殿军06 PLU星际第一人争霸战 冠军06 CEG西安站 冠军06 GOC联赛全国总决赛 冠军07 NeoStarLeague 冠军07 G联赛第一季线上 冠军07 PGL职业选手联赛第一季 殿军07 IEF2007大连赛区 冠军07 IEF2007中国总决赛 冠军07 IEF2007世界总决赛 殿军07 WCG中国区决赛 殿军07 SSL 对抗赛 冠军07 G联赛第二季线上 冠军07 G联赛第二季线下 冠军07 CEG全国电子竞技锦标赛 冠军07 PGL职业选手联赛第二赛季 冠军07 WGT沈阳赛区 冠军07 WGT全国总决赛 冠军07 CEG武汉站 季军07 CEG长春站 亚军07 CEG绍兴站 冠军

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大 和 田 南 那 Nana Owada出自日剧：水 手 服 僵尸 (2014)怎么多人问 啊 采纳谢谢

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好用又实惠的洗地机推荐！家用洗地机是现代家庭清洁的必备工具之一，它能够快速、高效地清洁地面，让家庭环境更加整洁、卫生。随着科技的不断进步，家用洗地机的功能和性能也越来越强大，市场上的选择也越来越多样化。但是，如何选择一款适合自己家庭需求的洗地机却是让人头痛的问题。本文将为大家推荐几款性价比高、功能强大的洗地机，帮助大家轻松选购适合自己家庭的洗地机。一、洗地机能够清洁什么？①可以清洁各种硬地面，如瓷砖、木地板、大理石、地毯等。②它可以清洁地面上的灰尘、烟灰、沙子、污垢、饮料洒出的痕迹、沙发垢尘，甚至可以清洁瓷砖缝隙中的污垢等。③能够边拖地边除菌，家里有宠物或者是有小孩的使用能够更加安心！二、好用的洗地机推荐！1、希亦T800洗地机推荐指数：u2b50 u2b50 u2b50 u2b50 u2b50清水箱大小：1000ml污水箱大小：1000ml吸力：16000pa电池续航：50分钟长续航是否有自清洁：是是否有电解水除菌：是参考价格：2599元CEYEE希亦T800洗地机是一款备受好评的高性价比洗地机，被誉为高级洗地机代表品牌。它的深度清洁力非常强，深受生活达人、精致宝妈和养宠达人的喜爱。这款洗地机售价仅仅2000多元，但是它的深度清洁能力、操作易用性和用料都对标国际大牌。CEYEE希亦洗地机采用了多项黑科技，如Y-PIN深度清洁系统、超能气泡清洁技术、CNC轻音技术等，为消费者带来极致的家居清洁体验。它能够实现16000Pa的澎湃吸力，以及地刷转速达到550转/分钟，通过活性氧+电解水的双重杀菌，具备更深层次杀菌消毒，其中包含杀灭三大类致病菌。有小孩子的家庭非常适合，地面实习除菌消毒，家长也能更放心！机身采用了“超纤维PBT滚刷”，对于风干化的顽固污渍起到强有力的清洁效果。0.001cm全面贴边的设计对于墙缝等死角更是一步到位。清、污水箱容量一致为1000ml，220平大户型房屋面积清洁也能搞定。此外，CEYEE希亦还提供专业的一对一使用服务分析对接，支持七天试用，质保期也是洗地机行业中比较长的，两年之内出现质量问题都可以免费换新。如果是对于清洁要求比较高并且家庭有老人小孩的，直接推荐这款，综合性价比非常高！2、就选X200洗地机推荐指数：u2b50u2b50u2b50清水箱大小：800ml污水箱大小：800ml吸力：11000pa电池续航：40分钟长续航是否有自清洁：是是否有电解水除菌：是参考价格：4500元评价：采用臭氧杀菌的方式，机身内置臭氧发生器，开机自动启动，有效覆盖范围更广，除菌效果更加明显，同时可以减少滚刷管道和污水箱的异味产生。55°C的热风烘干技术，滚刷和管道上的水和细菌都可以迅速消失，再也不用担心滚刷发霉、产生异味或细菌。该洗地机配备自动适应重心手柄和双驱动双滚刷，可前后推拉自如，拖一遍相当于抵两遍的清洁效果显著。超贴边设计使其可以深入吸尘，并清除缝隙边角的灰尘。不足之处可能是由于前刷缺乏设计，针织物或纤维材料会缠住它，因此少量头发可能会缠绕在前滚刷上，需要手动二次处理一下。3、鲨客SNC-E2 洗地机推荐指数：u2b50u2b50u2b50清水箱大小：500ml污水箱大小：520ml吸力：12000pa电池续航：28分钟长续航是否有自清洁：是是否有电解水除菌：是洗地机参考价格：5599元评价：鲨客E2洗地机拥有四种清洁模式，分别是智能模式、除菌模式、吸水模式、强力模式，可以轻松过驾驭家庭卫生清洁。它的自清洁功能为一键式操作，可以自动洗刷和管道，洗地时更易保持清洁。50度立体烘风技术可让滚刷自动烘干，保持干爽，除菌性能更加耐用，并有效避免潮湿和异味，延长滚刷使用寿命。使用全水路添加氧化锌和银离子的长效抗菌技术，即使反复清洗，也能依然有效地抗菌，让清洁更为彻底，地面也能拖得干净无异味。但是，它的性价比相对较低，使用后地砖或木板地面容易残留水渍。4、必胜 5.0洗地机推荐指数：u2b50u2b50u2b50u2b50清水箱大小：600ml污水箱大小：380ml吸力：9500pa电池续航：30分钟长续航是否有自清洁：是是否有电解水除菌：/洗地机参考价格：4359元评价：这款必胜洗地机设计独特，与传统的洗地机有所不同。它的机身不仅外形时尚，而且相对轻便，女性用户也能轻松使用。此外，它还支持加入50°C的热水进行清洁，能够快速溶解地板上的油脂和污渍，让清洁更加轻松。不同于其他洗地机，必胜洗地机提供三种不同的滚刷配置，可根据不同的清洁场景选择不同的滚刷，让清洁更加专业。机身提供9500pa的吸力，能够轻松清理干垃圾和湿垃圾，但对于大颗粒的垃圾可能有些吃力。水箱方面，它采用了600ml的清水箱和380ml的污水箱设计，适合小户型房屋面积的清洁，但对于大户型房屋的用户需要慎重考虑。

演员：大和田南那 Nana Owada——日剧——《水手服僵尸》 (2014)又名: Sailor Zombie

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IEM里约Major挑战者组，今日另一场0-2组的对决来到Cloud9对阵Imperial，一边是急需一场胜利重振士气的年轻人，一边是希望在家乡人面前走得更远的最后一舞。 两张图Cloud9都在前期大劣势的情况下奋起直追，将比赛拖入加时。期间sh1ro表现出强劲的个人能力，多次挽救队伍于水火。最终C9 2-0击败Imperial，保留晋级希望。后者也只能接受0-3就近回家的结局。 Cloud9 2-0 Imperial(Overpass 19-16;Vertigo 22-19) 地图BP： 图一：Overpass 图一是Imperial主动选择的Overpass，Cloud9先做进攻方。开局HObbit和sh1ro各收两人帮助队伍赢下手枪局，把握住手枪局获胜优势的Cloud9率先取得5-0的比分。随后Imperial开始自己的控图节奏，fer的突破和chelo的发挥帮助巴西人开始追分。半场结束，Cloud9凭借sh1ro的大狙稳住局面获得9-6的领先。 来到下半场，chelo的三杀为巴西人进一步缩小比分差距。坐镇主场的Imperial在现场观众的欢呼声中手感越打越热，boltz和chelo接连在B点打出连杀，FalleN的大狙也在提供稳定击杀，一举反超比分的他们率先拿到赛点，但是Cloud9这边也展现出强大的韧性，强行将比赛拖入了加时。加时赛中后来居上的Cloud9没有给对手机会，19-15赢下图一。 图二：Vertigo 来到了Cloud9的选图Vertigo，Imperial先做防守方。赢下手枪局的他们继续开局优势，进入长枪局后fer接连在A点拿到首杀，帮助巴西人一路拿分取得10-1的领先。Cloud9直到在上半场的最后才凭借HObbit和Ax1Le的关键击杀追回些比分，半场结束，Cloud9 5-10落后。来到下半场，Imperial中路夹B拿下手枪局，但是刚枪局Ax1Le的车王1v2残局帮助Cloud9及时止损。 随后Imperial坚持对Cloud9的B点进行一波流，气势正盛的他们就是利用枪械优势和Cloud9打人换人，并一举拿下赛点。面对巨大的比分差距，Cloud9冷静下来慢慢调整，打完了B区的突袭战，双方来到了A坡拉扯战，这就是Cloud9的主场。面对Imperial坚持不懈的攻A，sh1ro连续用大狙打出多杀帮助Cloud9连拿数个赛点，再次将比赛拖入加时。而在双加时大战中，sh1ro依旧保持了爆棚的状态，化身为所向披靡的战神。最终Cloud9 22-19击败Imperial，保留了晋级希望。

第二话 火龙 猴子和牛第十九话 changeling第二十一话 幽鬼的支配者 第二十二话 露西. 哈特菲利娅第二十三话 15分钟第二十四话 为了不看见那眼泪第二十五话 雨中绽放的花第二十六话 炎之翼第二十九话 我的决意第三十话 下一代 第三十一话 回不了天空的星星 第三十二话 星灵王 第五十八话 星灵合战

演员：大和田南那 Nana Owada[MV] AKB48 - Party is over

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