A short history of western painting 全文概括

western读音：英 ["westu0259n]美 ["westu0259rn]。adj. 西方的；西洋的；西部的。n. 西方人；西部片；西部小说。How does Chinese chess differ from western chess?象棋和西洋棋有什么不同?I"d love to,but I don"t know much about Western music.我倒想去，但我对西洋音乐了解不多。用法：western的意思是“西方的,西部的,在西方的,在西部的”,指世界或一国之西,也可指某地属于或在西部,有时大写。western在句中主要用作定语,偶尔也可用作表语。western无比较级和最高级。western, west这两个词都可作“在西方的,西部的”解。其区别在于:west重点在于形容方位或指从西方来的; western则指从某一固定点看西方,也可指从某物、某地朝西方看。

做western条带老是出现反白可能的原因是化学发光是个耗能过程，局部能量消耗过大，导致能量不足，也就发不出光了，所以条带反白。降低一抗、二抗浓度，蛋白上样量也可以降低。

western转膜胶的方向是向上转移。Western转膜胶在使用时需要注意其转移方向，转移方向是从胶膜底部向上转移。原因是Western转膜胶的背面覆盖有一层底纸，用于保护胶膜和保持其粘性。在使用时，需要将底纸撕下，将Western转膜胶贴在待转印的蛋白质膜上，然后用适当的条件进行转印。转移过程中，蛋白质会被吸附在Western转膜胶上，并随着胶膜的剥离而转移到目标膜上。因此，转移的方向应该是从胶膜底部向上，以保证转印的效果和成功率。

膜上有蛋白缺损点，不用蛋白封蛋白缺损点容易出现非特异染色。也可用BSA封，效果并不比脱脂奶粉好。脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜，避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。

变为west，南方。

Western Blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。它是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。Western Blot的应用检测材料或药物对某个信号通路上蛋白靶点的影响：肝癌是最常见的原发性癌症之一，仍是全球第六大癌症相关死亡原因。多靶点药物，如索拉非尼(SOR)，是肝癌治疗的主要抑制剂；然而较差的水溶性、缺乏选择性和明显的耐药性，使其应用受到限制。上海理工大学李钰皓副教授研究团队用铋基介孔纳米材料(NBOF)负载SOR，然后用聚乙二醇和叶酸偶联物(P-FA)包覆，形成了NBOF@SOR-P-FA纳米载体体系。该系统通过将化疗和放射治疗相结合，实现了显著增强的抗癌效果。

跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀，造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡，造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰，造成条带迁移率不统一另外上样量过大，被其他泳道挤压也有可能

西部片的国语词典是：一种具有特色的美国电影类型。内容多描写美国西部开发时期，牛仔拓荒冒险的故事。词语翻译英语Western(film)_德语Western(S)_法语western(film)_。西部片的国语词典是：一种具有特色的美国电影类型。内容多描写美国西部开发时期，牛仔拓荒冒险的故事。词语翻译英语Western(film)_德语Western(S)_法语western(film)_。注音是：ㄒ一ㄅㄨ_ㄆ一ㄢ_。词性是：名词。拼音是：xībùpiàn。结构是：西(独体结构)部(左右结构)片(独体结构)。西部片的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、词语解释【点此查看计划详细内容】西部片也被称作牛仔片(cowboymovie)，是以美国西部大开发为背景的影片的统称。二、网络解释西部片西部片，也被称作牛仔片(cowboymovie)，它与喜剧片相比较符号特征十分明显：那个可以看得到地平线的蛮荒原野，那个具有传奇色彩的牛仔形象和那个跃马驰骋持枪格斗的激烈场面等等。西部片作为好莱坞电影特殊的类型片，其深层的符号和象征是关于美国人开发西部的史诗般的神化。影片多取材于西部文学和民间传说，并将文学语言的想象幅度与电影画面的幻觉幅度结合起来。西部片的神化，并不是再现历史的真实写照，而是创造着一种理想的道德规范，去反映美国人的民族性格和精神倾向。关于西部片的单词western关于西部片的成语按部就队片甲不还分别部居片甲不回片接寸附半部论语按部就班片长薄技条贯部分关于西部片的词语条贯部分千部一腔半部论语按部就班两部鼓吹打成一片十部从事分别部居片甲不回片甲不还关于西部片的造句1、西部片还包含许多子类型，如史诗西部片、枪战片、西部歌舞片和少量西部喜剧片。2、恩怨情天是赫本赫本拍过的唯一一部西部片，赫本试图尝试不同的风格，扮演了一个印第安少女。3、我看了许多部电影，尤其喜欢西部片。4、他演过电视剧，犯罪连续剧，惊悚片，西部片，恐怖片，科幻片，音乐剧。5、此地的影片千篇一律：有战争片、西部片和侦探片。点此查看更多关于西部片的详细信息

wb内参是Western Blotting实验内部参照。蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。内部参照，一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。内参的作用是校正蛋白样品定量以及上样过程中的误差，保证实验结果的准确性。作为空白对照，检测WB过程中蛋白转膜是否完全以及发光显色体系是否正常。

西xī方向，太阳落下的一边，与“东”相对：西面。西晒。西域。西方。西席。西宫事物的样式或方法属于西方的：西学。西画。西餐。西医姓westWestern中东笔画数：6；部首：_；笔顺编号：125351笔画顺序：横竖折撇折横详解:西xī【动】同本义〖perch〗西,鸟在巢上,象形。《说文》棹歌惊起乱西禽,女伴各归南浦。《敦煌曲子词集》又如:西迟往西走;向西去〖gotowest〗西通巴蜀。《三国志·诸葛亮传》何时复西归。《乐府诗集·长歌行》从小丘西行唐·柳宗元《至小丘西小石潭记》西出阳关无故人。唐·王维《送元二使安西》又如:西上;西驾;西夕西xī【名】方位词。日落的方向,西方〖west〗日在西方而鸟栖,故因以为东西之西。《说文》王用享于西山。《易·随》宅西。《书·尧典》以白琥礼西方。《周礼·大宗伯》赵王因起兵南戍韩梁之西边。《战国策·赵策一》故有东宫、有西宫、有南宫、有北宫,异居而同财,有余则归之宗,不足则资之宗。《仪礼·丧服》又如:西班;各奔西东;西帮;西都;西裔;西牛贺洲古称西边的邻国〖westernneighbouringstate〗越山千万云门绝,西僧貌古还名月。唐·皎然《寄题云门寺梵月无侧房》又如:西僧;西人现代我国称欧美为“西洋”或“泰西”,简称“西”〖Western;Occidental〗初中西不睦,地方官出示,禁止华人受雇外洋,供其服役。清·夏燮《粤民义师记》又如:西珠;西番柿子西天的简称。佛经中指佛祖所在之处为极乐世界,也叫“西天”〖WesternParadise〗。如:西土;西方净土复姓。如:西乞;西王;西宫;西郭西安Xī"ān〖Xi"an〗陕西省省会。位于关中平原中部渭河南岸,市区面积861平方公里,市区人口220万。是中国六大古都之一,古迹有半坡遗址、碑林、大雁塔等,陇海铁路从该市经过,它是中国西北经济文化中心,机械、纺织工业占突出地位西安事变Xī"ānShìbiàn〖Xi"anIncident〗亦称“双十二事变”。1936年12月12日,张学良、杨虎城在西安为逼蒋联共抗日而拘捕蒋介石,实行的一次“兵谏”西半球xībànqiú〖westernhemisphere〗把地球垂直分成两半,其中大部分位于大西洋西面并包括南、北美洲和小陆块的那个半球西北xīběi〖northwest〗方位名,介于西和北之间。特指中国西北部泰山西北。清·姚鼐《登泰山记》西北风xīběifēng〖northwesterly;northwestwind〗从西北吹来的风西伯利亚Xībólìyà〖Siberia〗俄罗斯境内介于乌拉尔山脉和太平洋岸之间的亚洲北部地区,北起北冰洋,南抵哈萨克丘陵,面积1300万平方公里西餐xīcān〖Western-stylefood〗欧美西方人烹调制作的或按西式烹调法制作的饮食。进餐方式一般也按西方人的习惯西沉xīchén〖sink〗从天空向地平线降落太阳已西沉,黑夜即将降临西方xīfāng〖west〗∶西边或西边的地方〖West〗∶指位于西半、北半球的国家。指欧美各国西方国家xīfāngguójiā〖theWest〗欧洲和美洲的非共产主义国家就西方国家提出的裁军建议举行讨论西非Xīfēi〖WestAfrica〗非洲几内亚北部湾地区,通常不包括摩洛哥、阿尔及利亚和突尼斯西风xīfēng〖westerly〗∶从西方吹来的风温带的盛行西风〖westwind〗指秋风比喻腐朽没落的力量或气势西服xīfú〖western-styleclothes〗西洋人穿的衣服样式;亦特指男子的西式上衣、背心和裤子西宫xīgōng〖westernpalace〗中国封建时代妃嫔住的地方。借指妃嫔西瓜xīguā〖watermelon〗一种一年生蔓生藤本植物,开淡黄色的花,叶有5-7个深裂片,为热带非洲原产,现已广泛栽培西汉Xī-hàn〖theWesternHanDynasty〗∶中国于公元前206年公元24年的朝代,为刘邦所建,建都长安亦称“前汉”〖theMilkyWay〗∶天河。即银河月还西汉,霞临东沼。王勃《七日赋》西河Xīhé〖WesternRiver〗古地区名,春秋时指卫国的沿黄河地区,在卫之西境战国时魏国黄河以西之地,今陕西东部黄河西岸的一段西河大鼓xīhé-dàgǔ〖afolkartform〗曲艺的一种。近代由冀中的弦子书和木板大鼓发展而成。唱腔依冀中语音,属板腔体结构。一人站唱,左手敲铜片,右手击书鼓,另有三弦、四胡伴奏。中长篇鼓书曲目丰富,以说为主,短段以唱为主西红柿xīhóngshì〖tomato〗番茄的别称西后Xīhòu〖EmpressDowagerCi西安〗西宫慈禧太后。满族。叶赫那拉氏。清末同治、光绪两朝的实际统治者上畏西后,不敢行其志。清·梁启超《谭嗣同传》西葫芦xīhúlu〖cocozelle;pumpkin;summersquash〗一种光滑的圆柱形夏季葫芦,墨绿色,通常有浅绿到黄色的条纹或斑点和白到淡绿色的坚实肉质西湖XīHú〖theWestLake〗湖名。在浙江省杭州市区以西,三面环山,周长15公里,被孤山、白堤、苏堤分隔为外西湖、里西湖、后西湖、小南湖和岳湖西化xīhuà〖westernize〗使符合西方标准或西方文化;成为符合西方标准或西方文化的状态西化xīhuà〖westernization〗指仿效欧美的制度、生活方式、语言文字等西画xīhuà〖westernpainting〗指“西洋画”西江XīJiāng〖XijiangRiver〗珠江的最大支流,发源于云南,到广西梧州后称西江,全长2129公里西晋Xījìn〖theWesternJinDynasty〗中国于公元265-317年的朝代,司马炎所建,建都洛阳西经xījīng〖westlongitude〗处在0°经线以西的经度或经线。参看“经度”、“经线”美国处在西经位置上西历xīlì〖thewesternorGregorianCalendar〗即公历,也称阳历,是国际通用历法西门xīmén〖westerndoor〗∶位于城墙西方的门复姓西南xīnán〖southwest〗∶西南方其西南诸峰。宋·欧阳修《醉翁亭记》;向西向南潭西南而望。唐·柳宗元《至小丘西小石潭记》〖SouthwestChina〗∶指我国西南地区,包括四川、云南、贵州、西藏等省区西欧Xī"ōu〖WesternEurope〗西部欧洲,指英国、法国、爱尔兰、摩纳哥、比利时、荷兰、卢森堡等国广义上指除了东欧国家以外的欧洲国家西皮xīpí〖西安pi,oneofthetwochieftypesofmusicintraditionalChineseoperas〗用胡琴伴奏的戏曲声腔之一西人xīrén〖westerner〗西洋人,指欧美各国的人西人长火器。清·徐珂《清稗类钞·战事类》西戎Xīróng〖Xirongnationality〗我国古代对西北少数民族的总称西沙群岛XīshāQúndǎo〖XishaIslands〗中国南海四大群岛之一,位于海南岛西南约330公里,由30多个岛屿组成,最大的永兴岛,面积1.85平方公里西晒xīshài〖facingwest〗指房屋朝西的门窗午后受阳光照射,屋里炎热西施Xīshī〖XiShi,famousChinesebeautyinancientChina〗亦称“西子”,春秋末年越国苎罗人,为春秋时越王勾践献给吴王夫差的美女,后人用以代称美女西市xīshì〖aplacewhereasentenceofdeathwascarriedinthecapitalofancientChina〗旧时京城行刑的场所西市待命。清·方苞《狱中杂记》西式xīshì〖westernstyle〗西洋人用的东西的样式西天xītiān〖India〗∶中国古代对印度的称谓,因为印度古称天竺,在中国西南方向,故略称西天;所谓“西天取经”即指去印度取经〖WesternParadise〗〖佛〗∶指极乐世界如不到西天,不得真经,即死也不敢回国。《西游记》西王母Xīwángmǔ〖XiWangMu〗中国古代神话中的女神,住在昆仑山的瑶池,她园子里的蟠桃,人吃了能长生不老。通称“王母娘娘”西西里Xīxīlǐ〖Sicily〗地中海最大的岛屿西席xīxí〖familytutor〗西宾旧时家塾教师或幕友的代称故师曰西席。《称谓录》思忖多时,忽然想起廉家西席一事。《镜花缘》西夏Xī西安à〖theXiXiaDynasty;theWesternXiaregime〗公元1038年党项族在今中国宁夏、陕西北部、甘肃西北部、青海东北部和内蒙古西部建立的政权,1227年为元灭西洋Xīyáng〖theWest;theWesternWorld〗指西方的欧美各国所货西洋珠。明·崔铣《记王忠肃公翱三事》西洋画家。蔡元培《图画》西洋之图画西洋画xīyánghuà〖westernpainting〗按西洋方法画的各种画。可根据工具、材料不同,分铅笔画、油画、木炭画、水彩画、水粉画等。简称“西画”西洋景xīyángjǐng〖peepshow〗一种民间娱乐装置,是若干幅可以左右推动的画片,观众从透镜看放大的画面。画片多是西洋景物西洋参xīyángshēn〖rootofAmericanginseng〗中药名。别名洋参。为五加科植物西洋参的根。主产美国、加拿大及法国西药xīyào〖westernmedicine〗即西医用的药物,一般用化学合成方法制成或从天然产物提制而成;包括阿司匹林、青霉素、止痛片等西医xīyī〖Westernmedicine〗∶指西方传入中国的医学〖adoctortrainedinWesternmedicine〗∶用这种医学理论和技术治病的医生西游记Xīyóujì〖Recordofajourneytothewest〗长篇章回小说,明吴承恩著。宋元时期,唐僧到印度取经的故事在民间广泛流传,并不断加进神怪色彩,吴承恩根据这些传说加工成一部神话小说,描写唐僧赴西天取经途中,弟子孙悟空降妖除怪,战胜艰险,到达西天取回真经的故事西语xīyǔ〖Westernlanguages〗欧洲和美洲各国说的语言的通称西语研究中心西域xīyù〖WesternRegions〗汉代以后对今玉门关以西的新疆及中亚细亚等地区的总称西域书,泛指有关佛教的著作西苑Xīyuàn〖threeseasinBeijing〗即北京的三海深居西苑。清·张廷玉《明史》西乐xīyuè〖westernmusic〗泛指欧洲、美洲各国的音乐西岳Xīyuè〖HuashanMountain〗华山的别名西崽xīzǎi〖ahouseboyor“boy”intheemploymentofforeignersinChina〗旧时对欧美侨民在中国的洋行、餐馆等雇用的中国男仆的轻视称呼十分找不着,我叫他带一个西崽来。《二十年目睹之怪现状》西藏Xīzàng〖Xizang;Tibet〗全称“西藏自治区”,中国西南部的民族自治区,面积120多万平方公里,人口189万,位于“世界屋脊”青藏高原上,平均海拔4000米以上,区内有大小湖泊千余个,雅鲁藏布江水力资源丰富,雅鲁藏布江谷地为经济发达地区,经济以畜牧为主,牦牛为主要畜种,交通以公路为主,是中国的经济落后地区西装xīzhuāng〖western-styleclothes〗见“西服”出处:[①]［xī］［《__》先稽切，平_，心。］“_1”的今字。“_”的古字。鸟类止息。谓人游息。参见“西_”。方位词。日落的方向，西方。往西走；向西去。副词。向西；往西。指西方国家。春秋时晋指秦。宋代指西夏。参见“西人”。近代指欧美各国。参见“西人”。指西天。信奉佛教净土宗者，指《阿弥陀经》所说西方极乐世界。古县名。故址在今甘肃省天水市西南。姓。明有西鸣岐。【申集下】【_字部】西；康熙笔画：6；页码：页1128第10〔古文〕??【唐_】先稽切【集_】【__】【正_】先_切，?音粞。【_篇】金方也。【_文】_在巢上也。日在西方而_栖，故因以__西之西篆。文作?，象形也。【前_·律_志】少_者西方，西_也。___落物，於__秋。【尚_·大_】西方者何，_方也。或曰_方，__之方也。_者，_人之貌。又地名。【__·地理志】西郡。【__】唐置西州。又姓。【通志·氏族略】西氏。【姓苑】西_豹之後，改_西。又【集_】相咨切，音私。_同。又【篇海】_前切，音先。【前_·郊祀歌】象_瑜，白集西，食甘露，__泉。【後_·_壹_·___】幸_大_，我矜我_。昔_我南，今振我西。又【__】斯人切，叶音辛。【王延_·__光殿_】?醴__於__，甘露被宇而下臻。朱桂黝_於南北，芝_阿那於_西。又【_篇】乙却切，音_。平量也。又【__】籀文作?。○按《玉篇》等_西字另一部。今从《字_》《正字通》附入_部。考_：〔【前_·郊祀志】象_瑜，白集西，食甘露，__泉。〕_按郊祀志_此文，_照原_改郊祀歌。【卷十二】【西部】编号：7672西，[先稽切]，_在巢上。象形。日在西方而__，故因以__西之西。凡西之_皆从西。古文西。西或从木、妻。_文西。

Best Western是世界上最大的酒店品牌之一，拥有超过4000家酒店和度假村。该品牌在全球范围内拥有广泛的覆盖率，但是在美国是最受欢迎的。据统计，Best Western在美国有超过2000家酒店，遍布全国各地。其中最多的城市是拉斯维加斯，该城市拥有30多家Best Western酒店，这些酒店位于市中心、赌场区和机场附近。其次是洛杉矶，这个大城市拥有超过20家Best Western酒店，分布在市中心、好莱坞和圣塔莫妮卡等地。此外，纽约市、芝加哥和迈阿密等大城市也拥有不少Best Western酒店。总的来说，Best Western在美国的覆盖范围非常广泛，无论是商务旅行还是休闲旅行，都可以找到适合自己的酒店。

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1、美国西部指美国西部各州，城市包括：波特兰、洛杉矶、旧金山、奥克兰、长滩、萨克拉门、西雅图，圣迭戈，奥克兰，休斯敦，达拉斯，丹佛等。2、美国西部（英语：WesternUnitedStates）泛指美国西部各州。美国西部包括：亚利桑那州、科罗拉多州、加利福尼亚州、新墨西哥州、内华达州、犹他州、蒙大拿州、怀俄明州、爱达荷州、俄勒冈州、华盛顿州、阿拉斯加州。3、领土来源：由于美国自建国以来疆域多次向西扩展，因此美国西部的定义也随着时代而变化。一般多以密西西比河作为美国东西部的分界线。如果采用广义的定义，美国西部占去了美国一半以上的领土。美国西部包括了自路易斯安那购地中获得的土地、1818年自英国获得的土地、德克萨斯加入美国时的土地、1846年自英国获得的土地、1848年墨西哥割让予美国的土地及盖兹登购地中获得的土地。

原因是：考马斯亮蓝是一种高度水溶性的染料，容易在水中溶解和扩散，因此，如果在染色过程中使用过多的染料或者染色时间过长，染料会进一步渗透到纤维素内部，使得染色效果更加牢固，难以脱色。

west[英] [west][美] [wu025bst]n.西，西部，西方adj.在西方的；西部的；朝西的；（风）来自西面的adv.向西，朝西；自西方；向西方western[英] [u02c8westu0259n][美] [u02c8wu025bstu0259n]adj.西方的；欧美的n.西部电影，西部小说；西方人为你解答，敬请采纳，如果本题还有疑问请追问，Good luck!

处理western blot 照片和其他照片没什么不一样主要就是要把一些过深的背景去除掉，仅仅保留条带就可以了（千万不要伪造条带，学术造假很容易被查出来的）photoshop中有图像选项，其下拉菜单中有调整选项，由该选项可以拉出数个选项，其中一项是曲线，会出现一个对话框，该对话框的下部有三个并排的图标，分别表示将图像背景加深、适中、及变浅。将鼠标点击一下变浅的图标，再到图像的空白区域点一下就行了

西方的餐馆

WESTERN UNION是一种近乎实时到帐的快速汇款方式。在中国，只有农业银行和邮局与西联公司签订了合作协议，也就是说，在中国，想要办理此项业务，只可以去这两个地方办理。在国外，比如加拿大，美国，在超级市场里面就设有兑付地点，很方便。如果你想往国外汇钱，你只需要拿着你的身份证（最好带一份复印件，否则排半天队，叫你去复印，很麻烦的）和美金就可以了。（西联只可以汇美金）当然，你要让对方告诉你它的收款地点，和与他的身份证件相符的名字的正确拼法。地点有的国家要求很详细，有的国家，比如美国，只要具体到州就可以。当然，由于中国现在是外汇管制国家，不允许不受限制的汇出汇款，故一般以2000美元为限。如果是学费，境外援助等有证明的，可以要求西联公司给与授权。需要用美元缴纳手续费，由于速度较快，手续费较高。但不是以汇款金额作为费率的正比，当工作人员入机后，机器会自动反显手续费得金额。完成后，工作人员会返回你一联汇款单，上面有一个十位数的监控号，把它提供给收款人，提示收款就可以了。

因为转膜的时候时间比较长，在电场的作用下，系统会发热，发热以后会造成样品的降解，导致后续实验当中检测失败。所以不光转膜，有很多过夜的抗体孵育工作，都是在4c条件下进行的，最大限度的保证样品的完整性。

western 确实是形容词，不过，英语可以用形容词来充当名词，表示那一类的人或物。the Western 可以表示整个西方国家，也可以表示 西方人。其他例子： the young 年轻人 the old 老年人。western 和 young， old 一样，有大写和不大写的时候。也不是什么时候都大写的。 大写，是因为专指西方人，或西方国家。

SDS-PAGE主要是依据蛋白质分子量的大小对其进行区分的。条带很多条。而蛋白质印记则往往一条泳道上只有一条。有空再给你好好看看。。。

1、丙烯酰胺和N，N"-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N"-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。2、十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。3、分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中，用约48ml1mol/LHCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备，再用HCL调节PH值，而不用Tris-CL。5、TEMED原溶液N，N，N"N"四甲基乙二胺催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合。PH太低时，聚合反应受到抑制。10%(w/v)过硫酸胺溶液。提供两种丙稀酰胺聚合所必须的自由基。去离子水配制数ml，临用前配制.6、SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.80.5mol/LTris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。7、Tris-甘氨酸电泳缓冲液:30.3gTris，188g甘氨酸，10gSDS，用蒸馏水溶解至1000ml，得0.25mol/LTris-1.92mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释10倍。8、转移缓冲液：配制1L转移缓冲液，需称取2.9g甘氨酸、5.8gTris碱、0.37gSDS，并加入200ml甲醇，加水至总量1L。9、丽春红染液储存液：丽春红S2g三氯乙酸30g磺基水杨酸30g加水至100ml用时上述储存液稀释10倍即成丽春红S使用液。使用后应予以废弃。10、脱脂奶粉5%(w/v)。11、NaN30.02%叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、过氧化物酶标记的第二抗体。15、NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。17、100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。18、100mmol/LNaCl。19、50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/LEDTA。

southern：用DNA作为探针杂交DNA。检测目标DNA的存在与否northern：用DNA或RNA探针杂交RNA。检测目标RNA的存在与否western：用抗体和目的蛋白结合进行杂交。检测目标蛋白的存在与否。没有eastern杂交。少数人提议将IEF胶(即等电聚焦电泳)中的蛋白质转印到膜上的技术称为Eastern-blotting，但这一建议并未被广泛接受。

一般来说用于western的抗体识别的是氨基酸序列特异性，也就是5－6个氨基酸吧,变性后，蛋白质的空间结构改变了，但其一级结构是不会改变的；而可用于ELISA的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。所以最好是根据抗体说明书来确定。SDS在WB中除了上述所说的外，另外一项就是低浓度的SDS有蛋白促溶的作用，能够稳定抗体，并且作为表面活性剂能够使NC膜充分的浸润，这根洗衣粉的道理差不多。

转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。 在做Western blot实验中，会用到固相载体(如NC膜，PVDF膜)，在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。 蛋白塞进了表面的很多洞洞里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。 扩展资料： 封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合，以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上，填补和覆盖蛋白结合位点以避免非特异性结合。同样，这两种作用使封闭液中的蛋白能够狠牢固结合在空白位置上，这样抗体蛋白就不会被非特异性的吸附到膜上，而只会跟特异性蛋白结合。 封闭液应封闭所有的未结合位点而不替换表面上的靶蛋白，不结合靶蛋白表位，也不与抗体或检测试剂有交叉反应。 转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。

western读音：英 ["westu0259n]美 ["westu0259rn]。adj. 西方的；西洋的；西部的。n. 西方人；西部片；西部小说。1、How does Chinese chess differ from western chess?象棋和西洋棋有什么不同?2、I"d love to,but I don"t know much about Western music.我倒想去，但我对西洋音乐了解不多。3、The Western Hemisphere refers to North and South America.西半球是指南北美洲。用法：western的意思是“西方的,西部的,在西方的,在西部的”,指世界或一国之西,也可指某地属于或在西部,有时大写。western在句中主要用作定语,偶尔也可用作表语。western无比较级和最高级。western, west这两个词都可作“在西方的,西部的”解。其区别在于:west重点在于形容方位或指从西方来的; western则指从某一固定点看西方,也可指从某物、某地朝西方看。

印迹的解释[print] 痕迹;踪迹 成长 道路上留下的印迹 详细解释 痕迹，踪迹。 老舍 《 骆驼 祥子》 二十：“看着这些印迹，他想起 东西 ，想起人，梦似的都不见了。” 李瑛 《＜诗选＞自序》 ：“现在所编的这个选本，我也有意识地 尽量 保留了……我成长的道路的印迹。” 词语分解 印的解释 印 ì 图章，戳记：印章。印玺。 印记 。印把子（亦喻政权）。 痕迹：手印。指印。印子（a.痕迹；b． * 的一种，全称“印印钱”）。 用油墨、染料之类把文字或图画留在纸、布、 器皿 等材料上：印刷。排印。印 迹的解释 迹 ì 脚印：踪迹。 足迹 。血迹。笔迹。 物体遗留下的印痕：印迹。 前人遗留下的事物：古迹。实迹。 追寻踪迹：“汉求 将军 急，迹且至臣家”。 据实迹考知：“迹汉 功臣 ，亦皆割符世爵”。 笔画数：； 部首 ：

句首时，w大写

western blot实验都需要的基础仪器有：电泳仪，制胶板，电泳槽，湿转的转膜槽或者半干转仪，脱色摇床，暗室，X光片，红外灯，成像仪，一些基础耗材和试剂等基本上生化实验室要做western blot还是很容易的

需要加beta-actin的一抗，beta-actin分子量42，如果您的蛋白也是差不多大小，那么需要上两次样品，分别做您的目的蛋白和beta-actin，当然您如果做熟练了也可以上一次样，先做目的抗体，压片后strip膜再做beta-actin。如果您的目的蛋白在其他位置，那更方便，上一次样，封闭后把膜裁开，分别加您的目的蛋白一抗和beta-actin的一抗。

western blot湿转时，恒压和恒流都是可以的恒流的话可以250~270mA，100分钟恒压的话可以100V， 60分钟遇到分子量较大的蛋白，可以适当提高电压和电流，或者转膜时间

推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100mL）。拓展：一、牛血清白蛋白(BSA)，又称第五组分，是牛血清中的一种白蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性。二、用途说明1、 在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，减轻不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性的。2 、ELISA中也常常用到，比如封闭液，样本稀释液，酶结合物稀释液都可以用BSA。3、生化研究，遗传工程和药物研究。

条带分析最好使用其它更为专业的软件（比如nebular提供的Labworks，Quantity one等），但是对于Western这种简单的条带，IPP完全可以分析，只是复杂一点：1 选用指标为IOD，故首先将系统的灰度设定改过来，（改为0 白，255黑） 2 确定背景的灰度（在背景区域选择一个AOI） 3 Histogram显示，平均灰度为66；所以，要通过Operation的功能，将待分析的所有膜照片的背景均加或减到某一固定值（由自己确定，方法见以前的介绍） 4 通过Operation处理后，在Segmentation下，确定阳性区域的范围（所有的图像都应该统一；我选择的是0-98） 5 选择Transparent on white,Create preview image 6 注意新生成的图片不是灰度图，还要经过转换 7 自由AOI，勾画出大概的轮廓即可 8 Histogram，Sum值即为需要的阳性区域IOD 9 改变区域大小，Sum值变化不大（原因为白色背景的IOD均为0） 10 其他条带也通过类似的方法分析；最后求出阳性区域IOD与内参IOD的比值，用于统计学分析。整个分析的关键在于背景灰度的统一与分割时的一点小技巧；如果没有经过Segmentation而直接用自由AOI主观地确定条带的边界，是不可取的。

免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确。但是在组织定位上不如免疫组化

vector那一列是对照，Flag-那一列是样品。随着时间的变化，在对照和样品间蛋白表达量的变化。其中alpha-tublin是内参，表示在样品和对照间，其他无关蛋白的量并不随着时间点不同产生变化，所以如果有不同，就是由于时间造成的。

封闭非特异性结合位点，让一抗、二抗只跟特异性位点结合，最终才不失实验的意义啊！实验利用一抗特异性结合我们所需半定量测定的蛋白，二抗带显影（荧光、ECL、放射性核素等)根据条带的粗细判断异性蛋白的含量，故只能称作半定量。

荧光western blot注意事项抗体浓度应当优化，在几种不同稀释度的抗体中孵育膜。选择信噪比最高的稀释度。从化学发光转到荧光检测时，一抗浓度应当增加许多封闭液都成功用于荧光检测。建议使用5% 酪蛋白、最多5%的脱脂奶粉，或最多3% BSA，溶于TBST中。缓冲液中的颗粒可能停留在膜上，并造成荧光假象。只使用高质量的试剂，并对所有缓冲液过滤灭菌。使用钝的镊子从边缘操作。避免划破膜或弄皱，这会在荧光检测时造成假象。使用铅笔来标记膜，因为许多墨水都会发出荧光。溴酚蓝会发出荧光。确保染料与样品已分开，切掉凝胶上包含染料的部分，或省掉样品缓冲液中的溴酚蓝。无需在暗处开展免疫检测；正常的室内灯光不会使荧光标记的抗体发生光漂白。在处理膜时，使用无粉末的手套，以避免膜上出现假象或指纹。

1. western blot每孔上样总量15-50ug大部分蛋白能做出来，跟蛋白质表达量、分子量、抗体效价都密切相关。2. 组织一般取200mg，匀浆后蛋白常能得到几百ug，跑十块胶足够。

blotting转膜一般采用“滤纸-凝胶-膜-滤纸”夹心法，凝胶靠近负极，膜靠近正极。因为蛋白上结合有sds，因而带负电，在电流的作用下会从负极向正极运动，从而转移到膜上。

包括SDS，巯基乙醇等。蛋白质解螺旋，变成线性，不是包裹蛋白。

这就好比你把鸡蛋放到98度的水里放了一个小时，而且鸡蛋还加了LOADING BUFFER。当然我个人没做过WESTERN，也不知道PROTOCOL是怎么写的，不过我想，这个蛋白你只能碰碰运气了。蛋白可能已经断了，不知道抗体还能不能找到蛋白。GOOD LUCK。

跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀，造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡，造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰，造成条带迁移率不统一另外上样量过大，被其他泳道挤压也有可能

描述有问题。抗体检测的是抗原，所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照，比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达，甚至它的变化（比如对某个细胞因子的反应），这时β-Actin起到几个作用：1、如果目的蛋白检测不到而且β-Actin也检测不到，那么你的体系有问题，因为β-Actin是看家基因编码的，理论上是100％检测到的；2、如果目的蛋白检测不到但β-Actin检测到，说明目的蛋白没有表达或者量很低；3、作为看家基因，β-Actin被认为表达水平不受其它因素影响，是比较稳定的。当细胞接受细胞因子刺激后，目的蛋白的量在参考β-Actin的量后可能发生变化，这时β-Actin还起到一个半定量的作用。所谓内参就是内部参照的意思。－－Western的抗体通常分为一抗和二抗，一抗结合目的蛋白，这是Western变化最多的地方；二抗则比较通用，商品很成熟，二抗带有荧光或者酶标记，它是结合一抗的，但却是得到结果的重要试剂。这种方法属于间接标记。Western很少有直接标记的方法。

一张膜上可以分别贴不同的抗体～一次一种抗体然后二抗显色～显色后PBST／TBST清洗～然后可以贴下一种抗体～之所以不能同时贴多种抗体是因为：1、不同抗体必须不同种属～否则不知道二抗识别的是哪个～2、一抗一般昂贵需要回收～掺入其他抗体没办法再次利用～

小梅

大鼠灌注取脑；用途：；1.用于常规HE染色，免疫组化分析；2.冰冻切片可以不做脑组织固定；3.不可用于westernblot和PCR；4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作；原理：；心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织；必要性：；1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易；2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤；3.脑内血液大鼠灌注取脑用途：用于常规HE染色，免疫组化分析。2.冰冻切片可以不做脑组织固定。3.不可用于western blot和PCR。4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。原理：心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。必要性：1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：流程：1) 麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.具体过程：大鼠经深度麻醉后，固定于自制的木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。Tips：1.多聚甲醛的配置：一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶装灌注液。同时配好输液器备用。3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔麻醉动物。4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用一血管钳夹持剑突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏，直视下穿刺针左心室心尖处，用血管钳固定。5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排液的有效观察指标。6.继续用4%多聚甲醛灌流250ml固定。7.后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。补充：还有一种省时省剂的方法。夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省试剂。先灌注生理盐水约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。

western用在人名、地名、其他特殊名称以及在句首时需要大写。 western：adj.西方的;向西的;西部的； n.(描写19世纪美国西部，尤指有关牛仔生活的)西部电影，西部小说 扩展资料 　　White has always been a symbol of purity in Western cultures. 　　在西方文化中，白色一向象征纯洁。 　　The music was a hybrid of Western pop and traditional folk song. 　　这种音乐融合了西方流行音乐和传统民歌。 　　A fence divides off the western side of the grounds. 　　篱笆把庭院的西面隔开。

互联网上几乎可以搜集到所有WesternBlot的中英文资料，仅供实验参考，可以根据自己实验的实际情况进行调整。 这里提供一种：1）按厂商的使用指南用两块干净的玻璃，平板和0.75mm垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层，并固定在灌胶支架上。2）按表7.1配制分离胶液体并脱气，然后加入10%的过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌混匀。表7.1 聚丙烯酰胺分离胶的配制试剂成分 配制不同浓度分离胶所需试剂(ml)5% 8% 10% 12% 15%Acry:Bis (30:0.8) 2.50 4.00 5.00 6.00 7.504×Tris·Cl/SDS, pH8.8 3.75 3.75 3.75 3.75 3.75H2O 8.75 7.25 6.25 5.25 3.7510%过硫酸铵 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05TEMED 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01按所需分离的蛋白质分子大小选择合适的丙烯酰胺百分比浓度，一般地，5%的凝胶可用于60～200kDa的SDS变性蛋白质分子的分离，10%用于16～70kDa，15%用于12～45kDa。3）用一根巴斯德吸管立即将分离胶液体沿夹层中一条垫片的边缘加入于玻璃平板夹层中，至凝胶约5cm高为止。样品体积少于10μl不需灌制积层胶。4）用另一根巴斯德吸管，先从一边的垫片，再从另一边垫片往夹层的液面顶部缓缓加入一层水饱和异丁醇（厚约1cm）。让凝胶在室温聚合30min。聚合后，可见在顶层异丁醇与凝胶的界面间有一清晰的折光线，胶的聚合失败往往问题在于过硫酸按或TEMED，或两者都有。5)倾去顶层的异丁醇，并以1×Tris-Cl/SDS, pH8.8缓冲液冲洗凝胶的顶部表面,尽量用吸水纸吸干。6)按表7.2配制积层胶液体，用吸管将液体沿一条垫片加入到玻璃平板夹层，直至夹层的顶部。表7.2 聚丙烯酰胺积层胶的配制GEL%（3.9%) Total (10.05ml)Acry:Bis(30:0.8) 1.30 ml4×Tris·Cl/SDS, pH6.8 2.50 mlH2O 6.10 ml10%过硫酸铵 0.05 mlTEMED 0.01 ml7)将0.75mm厚的梳子插入夹层的积层胶液体中，必要时，再补加积层胶液体充盈剩余空间。让积层胶室温聚合30min。8)在具螺口盖的微量离心管中，用2×SDS加样缓冲液按1:1(v/v)稀释待测蛋白质样品，于100℃煮沸5-10min。如样品是蛋白质沉淀物，加入50～100μl 1×SDS加样缓冲液溶解之，并同样在100℃煮沸5-10min。按供应商的使用指南用2×SDS加样缓冲液溶解蛋白质分子量标准混合物。对于0.3cm宽的加样孔，推荐加样体积以不超过20μl 为宜。用考马斯亮蓝染色法显迹，成分很复杂的蛋白质混合物需加25～50μg，而样品中只有一种或不多的几种蛋白的话，只需1～10μg蛋白量。采用银染显迹时，样品用量可减小10～100倍（按样品的复杂程度在小于20μl的体积溶有0.01～0.5ng蛋白样品不等）。2×SDS加样缓冲液(loading buffer)配制：成　分 体积 (ml)0.5M Tris·Cl (pH6.8) 12.520%SDS 11.5Glycerin 102% Blue-Bromo-phenol 2.5β-mercaptoethanol * 5.0加H2O至总体积50 ml，分装*β-mercaptoethanol 在临用前加入。9）小心拔出梳子，避免撕裂聚丙烯酰胺凝胶加样孔。取出梳子后，以1×SDS电泳电泳缓冲液冲洗加祥孔，并以此缓冲液充满之。10）按厂商指南将凝胶板固定到电泳装置的上缓冲液室（上槽），同时往下缓冲液室（下槽）加入推荐量的1×SDS电泳缓冲液。11）将固定于上槽的凝胶板放入下槽中，并往上槽加入部分电泳缓冲液至刚好淹没凝胶的加样孔。12）用带平嘴针头的50μl注射器将同样浓度的蛋白质样品等体积加入到样品孔中，小心加样使样品在孔的底部成一薄层，对照孔加入蛋白质分子量标准样品，如有空置的加样孔，须加等体积的空白1×SDS样品缓冲液，以防相邻泳道样品的扩散。13)再往上槽加入余下的1×SDS电泳缓冲液。此操作缓慢小心，以防冲起样品孔中的样品。14）连接电源，对于0.75mm厚的垂直板电泳，先在60V下电泳至溴酚蓝染料从积层胶进入分离胶，再将电压调至120V继续电泳至溴酚蓝到达凝胶底部为止。15）关闭电源并撤去连接的导线，弃去电泳缓冲液。连同上槽一起将凝胶夹层取出。16）将凝胶定位以便识别加样的顺序，将凝胶板从上槽解离出来，放在一叠吸水纸或纸巾上。17）小心将封边的垫片抽出一半，并以此为杠杆橇起上面的玻璃平板，使凝胶暴露出来。18）小心从下面的玻璃平板上移出凝胶，在凝胶的一角切去一小块以便在染色及干胶后仍能认出加样次序，接着就可进行蛋白质的检测。19)转膜将凝胶面与负极相连，硝酸纤维素膜与正极相连。（100V，1小时）要放于4℃。英文1. For transfer of proteins smaller than 20 kDa, transfer proteins from gel to PVDF (polyvinylidene difluoride) membrane at 1Amp constant current for 45 mins or equivalent (250mAmp for 3 hours or 500mAmp for 90 minutes) in transfer buffer (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH).2. For transfer of proteins smaller than 120 kDa, transfer proteins from gel to PVDF membrane at 1Amp constant current for 1 hour or equivalent (250mAmp for 4 hours or 500mAmp for 2 hours) in transfer buffer (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH).3. For proteins larger than 120kDa, transfer to PVDF membrane at 1Amp constant current for 90 minutes or equivalent (250mAmp for 6 hours or 500mAmp for 3 hours) in transfer buffer + SDS (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH, 0.05% SDS).4. For Proteins larger than 250kDa, transfer to PVDF membrane at 1Amp constant current for 1 hour and 45 minutes or equivalent (500mAmp for 3.5 hours) in transfer buffer + SDS (25mM Tris, 190mM glycine, 20% MeOH, 0.05% SDS).Add transfer (or CAPS) buffer to the transfer unit according to manufacturer1s directions. Transfer over night with a setting of 20V / 40 mA or for 3 hours at 70V/160 mA. The transfer process needs to take place under cold temperatures to prevent the gel from sticking to the membrane. This can be accomplished either by using a water cooling core in the transfer unit or placing the entire unit at 4?. Please follow the manufacturer1s recommendations20)、清洗将硝酸纤维素膜放入1X TBST中清洗3次，每次5分钟。摇床摇动。（这步忘了！）21)、封闭1. Remove the blot from the transfer apparatus or staining tray and immediately place into blocking buffer (1% BSA, 10mM Tris pH 7.5, 100mM NaCl, 0.1% Tween 20).2. Incubate the blot for 1 hour at 37℃, 2 hours at room temperature, or overnight at 4℃.22)、一抗孵育一抗用TBST1:1000稀释，将硝酸纤维素膜放入其中，37℃孵育1.5小时，(或4℃过夜)摇床摇动。Probe with primary antibody in TTBS/1% NFDM for 1 hr. at room temperature. Primary antibody should be diluted as specified on product data sheets. If these values are not available, use the following guidelines for initial experiments: apply antisera or ascites at 1:500 to 1:5,000, apply purified primary antibodies at a concentration of 1 ug/ml.23)、清洗将硝酸纤维素膜放入1X TBST中清洗3次，每次5分钟。24)、二抗孵育二抗用TBST1:8000稀释，将硝酸纤维素膜放入其中，37℃孵育1小时，摇床摇动。25)、清洗同22，之后，用1X TBS在清洗2次，每次5分钟，以洗去膜上的Tween 20，因为它可以阻碍底物的沉积。26)、显色按如下配方配制显色液：1mL水+1滴（大约50微升）试剂A(之后混匀)+1滴试剂B+1滴试剂C将硝酸纤维素膜放入其中孵育，一旦显色，立即放入去离子水中终止反应。

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