ELISA实验原理

elisa实验原理是由于抗原、抗体的反应在一种固相载体—聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。elisa的实验步骤用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤，后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

Elisa法有间接ELISA和直接ELISA两种类型。其中，直接ELISA又分为竞争ELISA和非竞争ELISA两种。其原理均基于抗体与其对应的抗原之间的特异性结合，利用这一结合来检测样品中是否含有特定的抗原。以下是详细介绍：一、间接ELISA1.反应过程：先将被检测的抗原加到已涂有抗原的孔中，再加入未标记的特异性抗体与之结合，再加入与该次结合相应标记的二抗与上一步结合。2.原理：在检测过程中，第一次特异性抗体与抗原结合生成免疫复合物，随后加入待检测物质，其抗原结合剩余的空位，再加入第二抗体，二抗与第一次抗体产生的免疫复合物进行结合。二、非竞争ELISA1.反应过程：首先，在已经涂有抗原的孔板上加入待测的标本及一定量的酶标记抗体（例如辣根过氧化物酶标记抗体HRP），待测标本与孔中存在的抗原发生特异性反应形成抗原抗体复合物，此时酶标记抗体与复合物发生反应，余下的两种非结合状态被洗掉后再倒入颜色原液（如TMB）加速发色。2.原理：测定样品中特定分子含量的方法。标记的抗体对于待分析化合物极为特异，混合了待检测的样品后，抗体就会挑选出待测分子，从而获得分子的半定量信息。三、竞争ELISA1.反应过程：竞争ELISA先将受试物和固相相应抗体预先结合，再加入试样，与固相抗体竞争，并排开式吸附于固相抗体，结合非酶标抗体的辣根过氧化物酶HRP再次孵育，最后进行洗涤与溶胀反应。2.原理：根据待测物和内部参比物竞争抗体上的空间亲和力大小使得不同的化合物具有不同的结合力，利用这一特性来进行分析或检测的方法。被抗体固定在孔板中，样品中的待检测物在抗体的作用下结合到固相上。随后加入标记的待检测物和特异性未标记的二抗与前面的待检测物竞争结合。用酶标仪读出吸光度数据得到待检测物含量。

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到?>聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。分类方法夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为：将具有专一性的抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结；洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结；洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。间接法间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为：将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原；加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结；洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结；洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来；洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。

看看百度文库里面这文章 ELISA的原理和类型，讲的很清楚了

正相反。一般酶和抗体是化学键连接的。阳性对照中，抗体和抗原结合导致抗体的固定化（也就是说结合到板子上了），与抗体连接的酶就一并固定化了，所以再往酶标板中加入底物，酶就发挥作用显色了。阴性对照中，抗原没有，所以抗体不能固定化，随之没有酶的固定化，所以加入底物不显色。

ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。

（1）酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。（2）夹心法（sandwichassay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。间接法（indirecrELISA）常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体），再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体），经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。（3）BAS-ELISA：近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素（avidin）分子可以结合4个生物素分子（biotin）。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统（biotinavidinsystem-ELISA,BAS-ELISA），它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

基本原理是把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面，测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与固相载体上的抗原抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例，经洗涤去除反应中的其他物质，加入酶反应底物后，底物即被固相载体上的酶催化成为有色产物，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。

免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。HBsAg试剂特点（检测模式：临床抗体夹心法）：包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性（99。98%）提高检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说（PEI）HBsAg标准品,对ad标准品的灵敏度为0。05ng/ml对ay标准品灵敏度为0。025ng/mlELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在长:450nm具体的你也可以咨询上海信帆生物处测量O.D。值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准,O.D。值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

我是从事食品安全检测elisa的工程师，这个问题是要打好多的字才能解释清楚，我尽力吧，希望能采纳：1.我们常用的食品安全检测elisa原理有直接法、间接法（一步法、二步法）。对于使用哪种方法，是经过多次研发调试得出的，要考虑线性、变异、检测限等等。2.根据你说的应该是间接二步法，实验过程是：加标准品/样本——加一抗——反应——甩出、洗板——加酶标二抗——反应——甩出、洗板——加显色液——反应——加终止液——检测。3.第一个问题：看的是液体的颜色，颜色深含量少，颜色浅含量高，一般是用酶标仪，双波长检测。4.第二个问题：实验用的抗体分为单抗和多抗，通常将待检测物认为是抗原，如果直接使用酶标抗体对抗原进行检测，难以保证实验的检测限及控制变异，并且实验的可重复性不好，当然随着研发的推进，将来可能会有更加便捷的检测方法。

竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原，其原理为：将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上，检测时加入待测样本，使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合。然后加入HRP酶标记的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体结合，由于酶标板上固著的抗体数量有限，因此当样本中抗原的量越多，则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少，两种抗原竞争结合包被抗体，所以称为竞争法。接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，当样本中抗原量越多，代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少，显色也就越浅。百特纯大分子Meretciel的测激素的ELISA试剂盒有些就是竞争法的。夹心法又叫双抗夹心法，用于检测较大分子的抗原或抗体，又分为：双抗体夹心法，用于检抗原；和双抗原夹心法用于检抗体。以双抗体夹心法为主，下面以双抗体夹心法为例讲解原理（双抗原夹心法类似）：首先将具有专一性之抗体包被（coating）于酶标板上，检测时加入待测样本，样本中若含有待测抗原，则会与酶标板上包被的抗体专一性结合，然后加入另一种针对待检抗原的抗体，通常称为检测抗体，包被抗体和检测抗体将抗原夹在中间所以叫双抗夹心。检测抗体通常带有HRP酶标记，接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，样本中抗原量越多则显色越深。现在很多ELISA试剂盒生产厂家比如：优尔生和百特纯大分子Meretciel将生物素-亲和素放大系统引入双抗夹心法，也就是在检测抗体上标记生物素，然后加入HRP酶标记的亲和素（或链亲和素），利用亲和素可以和生物素分子紧密结合的特性，将HRP酶连接到检抗上，接着加入底物显色。也有引入二抗的，如下图，检测抗体不标记，再加入HRP标记的二抗与检测抗体结合

将抗原包被于固相载体，加入待测血清后，如其中含有相应抗体，可与包被抗原结合。洗去不参与反应的无关蛋白成分后，再加入酶标记的第二抗体或酶标记抗原，使与待测抗体反应，在固相载体上形成抗原一待测抗体一酶标记抗抗体或抗原一待测抗体一酶标记抗原的复合物。待加入底物后，酶催化底物，产生呈色物质。根据着色深浅，可判定待测抗体的有无及含量。如检测IgM类抗体，可用抗u03bc链抗体包被固相载体，再依次加入待测血清、抗原、酶标记的针对抗原的特异抗体。如检测抗原，可采用抗原捕获(双抗体夹心)ELISA。除此之外，ELISA还有很多其他的演变方法，如竞争抑制法等。

enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文PolymeaseChainReaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方.聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

(1)基本原理：把抗原在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品和酶标记物按一定程序反应形成复合物，并加入酶作用的底物;反应终止时，根据定性或定量分析有色产物的量来确定待检样品中的抗体的含量。(2)试验步骤：抗原包被→洗涤封闭→加待检血清（同时设立阴阳性对照）→反应一定时间→洗涤→加酶标二抗→反应一定时间→洗涤→加底物溶液→反应一定时间→终止反应→判定结果(3)结果判定：肉眼观察或仪器测定，可以阳性与阴性表示结果、以P/N比值表示结果、以终点滴度表示结果或以标准曲线进行定量测定。

缺点：1只是诊断的辅助手段，特异性和灵敏性有待提高。 2操作过程有些繁琐，反应血药时间，不能一蹴而就。

液相阻断ELISA其实就是将抗体（兔抗血清）包被在ELISA板中,于此同时将待检血清做几个稀释度和已知抗原在反应板中反应；4°过夜,然后将ELISA板中包被的抗体弃掉,洗板；将反应板中一定量的反应液加入ELISA板中,37°1h；然后弃液,洗板,加入一定量的一抗（豚鼠抗血清）,与所剩抗原结合,37°1h；然后弃液,洗板,加入一定量的酶标二抗（兔抗豚鼠血清+酶标记物）,37°1h；然后弃液,洗板,加入配好的显色液,37°显色10-20分钟左右,加入终止液读数.

酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。1971年Engvall和Perlmann发表了该方法用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。间接法测抗体（indirect elisa）间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

　　均相酶免疫测定技术　　以标记抗体检测标本中的抗原为例，按照简单的形式在试剂抗体过量的情况下进行：　　Ab*+Ag—Ab*Ag+Ab*　　如在抗原抗体反应后Ab*Ag中的标记物“*”失去其特性，例如酶失去其活性，则不需要进行Ab*Ag与Ab*的分离，可以直接测定游离的Ab*量，从而间接推算出标本中的Ag含量，这种方法称为均相酶免疫测定。　　均相酶免疫测定的测定对象为小分子抗原或半抗原，主要用于药物测定。均相酶免疫测定的测定模式为竞争抑制法，酶标记的是待测抗原，检测试剂中尚有针对待测抗原的抗体和酶的底物。与抗体结合的酶就失去其活力，因此在反应中无需分离结合的酶与游离的酶即可进行测定。其反应过程与一般的生化测定无异，因此可直接用自动生化分析仪进行测定。均相酶免疫测定主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种。　　异相酶免疫测定技术　　酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原为主要试剂进行检测的方法，是标记免疫技术的一种，1966年Nakene和Pierce利用酶使底物显色的作用而得到与荧光抗体技术相似的结果，20世纪70年代初，酶标抗体技术开始应用于免疫测定，其后得到迅速发展。近年来标记免疫技术飞速发展，应用不同标记物，根据不同原理、不同技术建立起来的检测方法层出不穷。　　酶免疫测定(enzymeimmunoassay，EIA)是以酶作为标记物的免疫测定方法，利用酶的高效催化作用提高检测的敏感度。根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物，酶免疫测定可分为均相(homogenous)和异相(heterogenous)两种类型。　　相对于均相酶免疫测定技术，异相酶免疫测定在医学检验应用更为广泛，其反应过程中需经过结合标记物和游离标记物的分离才能进行测定。分离的方法主要借助固相载体，即将一种反应物固定在固相载体上，当另一种反应物与之结合后，可通过洗涤、离心等方法令其与液相中的其他物质分离，此类反应亦称为固相酶免疫测定。Engvall和Perimann于20世纪70年代初首先建立这种方法，称之为ELISA。所谓的免疫吸附剂指的是吸附在固相载体上的免疫活性物质ELISA在临床及科研中应用极为广泛，已成为固相酶免疫测定的代名词。　　固相酶免疫测定方法　　固相酶免疫测定主要是指ELISA，其基本原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面(包被)，并保持其免疫活性；用酶标记(另一种)抗原或抗体，保留其免疫活性和酶活性；在测定时，把待测标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应；用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例；加入酶反应的底物后，底物被酶催化显色，故可根据颜色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，具有放大反应的效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。根据测定对象的不同，ELISA有多种反应类型。

包被板上的成分有很强的阴离子吸附功能，包被液的PH为9.6，可以使被包被的蛋白质为碱性，因此可以牢固吸附在包被孔中

原理是把抗原（或抗体）结合到固相载体上。Elisa是酶联免疫吸附测定的英文，能够通过抗原抗体相结合进行免疫反应测定的一种方法。检测hbcab和hbeab的方法原理是把抗原（或抗体）结合到固相载体上，并将抗原（或抗体）与某种酶连接成酶标记。

ELISA双抗体夹心法 原理 ELISA双抗体夹心法(enzymelinkedimmunosorbentassay——sandwichtechnique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。生物帮有相关介绍。组织染料http://product.bio1000.com/100066/

原理：利用抗原能吸附到固相载体表面的特性，使抗原抗体反应在固相载体表面进行的免疫酶技术，从而简化了抗原抗体结合物分离的手续。基本步骤：1包被：既是把抗原或抗体吸附到固相反应板上；2抗原抗体反应；3酶促反应。

原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速，定性或者定量甚至定位的特点。ELISA可用于测定抗原，也可以测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：1、固相的抗原或抗体；2、酶标记的抗原或抗体；3、酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法。扩展资料在ELISA实验方法中，比较常见的方法有双抗体夹心法，竞争法，间接法，双抗原夹心法，捕获法。双抗体夹心法，其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。参考资料来源： 东莞市疾病预防控制中心—常用ELISA实验原理

和western相同 抗体标记蛋白 然后显色

（1）酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。（2）夹心法（sandwichassay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。　　间接法（indirecrELISA）常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体），再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体），经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。（3）BAS-ELISA：近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素（avidin）分子可以结合4个生物素分子（biotin）。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统（biotinavidinsystem-ELISA,BAS-ELISA），它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

上海科艾博生物（COIBO）科技生物学检测试剂盒、进口常规生化试剂、抗体、化学试剂、药典级试剂、标准品、血清等产品，覆盖分子生物学、生物化学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物制药与诊断试剂从大的方面说ELISA属于酶免疫技术。 免疫酶技术是将酶作为标记物，标记抗体或抗原后，与相应的抗原或抗体发生反应，通过标记酶相应底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量的检测依据。目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验（ELISA），如果要分类的话，它属于异相固相酶免疫技术。所谓异相是指在检测时不需要将酶标记抗原抗体和游离抗原抗体分开，所谓固相就是指的ELISA的96孔板固相载体了。看下面均相酶免疫测定的原理图：ELISA的主要原理很简单，有这么三个， 1、包被 抗原或者抗体能以物理性吸附于固相载体表面，可能原理是蛋白质和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原抗体反应等免疫活性； 2、标记 抗原或者抗体可通过共价键与酶连接成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特点； 3、显色 酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者抗体结合后，也被固定在固相载体上，加入酶的底物之后可出现显色反应，根据反应的颜色深浅可计算抗原或者抗体的相对含量。ELISA 实验设计根据检测对象的不同，我分别给童鞋们介绍抗原的检测方法设计和抗体的检测方法设计。抗原的检测设计 1、双抗夹心法 针对至少2个抗原决定簇的多价抗原。首先介绍一下抗原决定簇，抗原决定簇就是决定抗原性的特殊化学基团，也叫抗原表位，理论上一个抗原决定簇能诱导产生一种单克隆抗体（可能有童鞋又要问单克隆抗体是神马东东了，以后介绍啊）。由6－12氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列（线性表位）组成或由不连续的蛋白质三维结构（构象表位）组成。临床上具有2个抗原决定簇的多价抗原有很多，比较常见有HBsAg、AFP、HCG等大分子抗原。检测步骤也简单，就是包被、洗涤、加样、洗涤、加样、洗涤、显色。具体说来是先将纯化的相应抗体包被在固相载体上，再加入待测样品，若其中含有待测抗原就会与固相抗体结合，洗掉杂质后，再加入酶标记的检测抗体进行反应，洗掉多于的酶标抗体后，加入底物显色，显色与否以及颜色的深浅就代表了待测抗原是否存在以及相对含量了，简单吧。对于双抗夹心法检测大分子抗原要注意几点，1.固相抗体和酶标检测抗体一定是分别针对待测抗原的两个不同抗原决定簇，不然两个抗体就会为争同一个决定簇而打架，会出现假阴性的不良结果；2.如果检测的样本是血清，就要注意风湿病患者体内内风湿因子RF这种奇葩异种抗体的存在，它能够神奇地结合固相抗体和检测抗体，造成假阳性的不良结果；3.包被的固相抗体含量一定是高于样品中的抗原含量，不然检测到的含量会比实际含量低；4.如果有童鞋想高端省事一些，将待测样品与酶标检测抗体同时加入固相载体，在酶标检测抗体高于样品中的待测抗原的情况下，会出现假阴性结果，这种现象书本叫钩状效应。 2、竞争法 针对小分子抗原。这种方法也可以用于大分子抗原，只是相对双抗夹心法这种强悍的策略，竞争法完全没有优势，所以竞争法只在检测小分子这个边缘地带发挥余热了。临床上主要用于T3、T4、孕酮等激素以及药物等。检测步骤与双抗夹心法更简单，包被、洗涤、加样、洗涤、显色，少了一步加样的过程，但是设计上复杂一些，首先将纯化的相应抗体包被在固相载体上，然后每组样本需要分两组，一组同时加入事先混匀好的酶标检测抗原和样本的混合物，一组只加入酶标记抗原，两组颜色只差便是待测抗原的含量，有点晕啊。对于竞争法也需要注意一点，酶标记抗原和待测样本一定要事先混匀好，然后同时加入固相载体，不然会造成不公平竞争，检测出现偏差；抗体的检测设计 就方法来说，有间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法四种设计。 1、 间接法，这个是检测抗体最常用也最简单的方法。操作步骤与双抗夹心一样，只是包被是纯化的相应抗原而不是抗体了，加入样品后洗涤，再加入的酶标记抗抗体，然后显色，颜色深浅与样品中待测抗体的浓度正相关。这个间接法的原理和步骤与双抗夹心一样一样的，为了区分就把包被抗原检测抗体叫做间接法了，以此类推，之前的双抗夹心法也可以叫做直接法，命名其实就是这么回事，规则多了就容易让人糊涂。间接法也有一些自己的特点，1.酶标记抗抗体可选择性检测抗体的亚型，可用于鉴别感染时期，如果是IgM那么提示感染早期；2.酶标抗抗体检测抗体特异性不高，容易产生假阳性，如果封闭不完全，可出现全板阳性，挺吓人的。临床上常用该方法检测抗HCV抗体、抗HEV抗体、抗CMV抗体、抗HSV抗体、抗沙眼衣原体抗体等等。2、 双抗原夹心法，这个完全是山寨双抗夹心法的。原理和步骤也与双抗夹心一样一样的，与间接法相比，具有优越的灵敏度和特异性，但不是很常用，因为就目前的技术条件，想得到能用于ELISA检测的纯化抗原还是有一定的难度。临床上常用于检测HIV抗体初筛，TP抗体和抗HBs抗体等，这些检测对特异性和灵敏度，准确性都要求特别高。3、 竞争法，和检测抗原设计的竞争法完全一致，临床上用的不多，我仔细总结了一下两个很具有代表性的，也各具特点。1、抗HBc抗体，检测方法与抗原相同，包被抗原之后，分两组，一组加入预先混匀的酶标抗体和待测样品，一组只加入酶标抗体，两组的显色之差可代表待测抗体的相对含量，需注意的是待测抗体与酶标抗体是同一物质；2、抗HBe抗体检测，方法与抗原竞争法设计稍有区别，包被的抗HBe抗体后，检测也分两组，一组先加入酶标HBeAg再立即加入待测样品，一组只加酶标HBeAg，两组显色之差代表待测抗体的相对含量，这种设计中包被抗体和待测抗体是同一物质。值得注意的是混合组不是事先混匀再加入，而是先加入待测抗体后再加入酶标抗原。所有的这些复杂的注意事项确实很容易把人搞晕，但是童鞋们只需要记住一条，竞争很残酷，我们就要想尽一切办法保证竞争的公平性，这样就不会错。4、 捕获法，这种方法比较少用，由于具有识别抗体类型的优点，仅用于需要早期诊断的急性感染或者具有爆发性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。原理还是逃不脱经典的双抗夹心，具体方法是先包被能识别抗体类别的抗抗体，洗涤后加样品，再洗涤，加酶标记抗原，洗涤后显色，这些步骤闭上眼睛都能写出来。最后说两句，与抗原检测不同，抗体检测的设计不是根据抗体的结构特点了，这么多种设计方法，童鞋们用的时候就会选择障碍了，掌握2个原则，1.实验要求，如果需要特异性和准确性特别高，那肯定是双抗原夹心法，要求马马虎虎，那就间接法，如果要明确抗体类型，最好的选择就是捕获法了；2.实验成本，与纯化抗体不一样，有时候想要获得纯化的抗原是非常困难的，更别说两种不同的纯化抗原了，所以双抗原夹心法临床上用的并不多。ABS-ELISA顺便说一下ABS-ELISA设计，其实是和上面说的一样的，通过亲和素-生物素系统（ABS）方法显色反应，增加检测灵敏度而已，但是增加操作步骤与实验成本，而且现在单克隆抗体的技术越见成熟，抗体特异性和亲和力大大提高，灵敏度已经不是问题，所以这些次等装备已经不常用。结果判定最后和童鞋说说ELISA结果判定，分定性和定量两种。对于定性试验，参比阴、阳性对照的吸光度，以P/N或者S/CO比值形式报告。1. P/N比值是指（待测样本-空白对照）/（阴性样本-空白对照），一般以P/N≥2.1判为阳性，或许求知欲旺盛的童鞋会问，那么竞争法用P/N比值怎么判，呵呵，这里先不说，卖个乖，你可以百度或者私信我啊；2. S/CO比值，S是待测样本吸光度值，CO为CUT-OFF值，通常取值阴性对照平均值的2.1倍。S/CO比值≥1为阳性，竞争法S/CO比值≤1为阳性。定量检测没有什么可说的，老老实实做标准曲线，既锻炼实验操作能力，又可作为实验内部参照。 记得有这么个规定，定性检测不能目测判断，要凭借酶标仪检测，定量要在每次实验都得与待测样本相同实验条件下绘制标准曲线，有一难度，但是为了对实验负责，你就从了吧。

原理LISA 的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。加入酶标记的抗原或抗体，通过反应也结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。特点某些分泌型蛋白，用siRNA 干扰后可以用ELISA 进行检测。ELISA法酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html

elisa双抗体夹心法原理elisa双抗体夹心法(enzymelinkedimmunosorbentassay——sandwichtechnique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。生物帮有相关介绍。编码rnahttp://doc.bio1000.com/show-3399.html

正相反。一般酶和抗体是化学键连接的。阳性对照中，抗体和抗原结合导致抗体的固定化（也就是说结合到板子上了），与抗体连接的酶就一并固定化了，所以再往酶标板中加入底物，酶就发挥作用显色了。阴性对照中，抗原没有，所以抗体不能固定化，随之没有酶的固定化，所以加入底物不显色。

把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面，测定时将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物，反应结束时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例，洗涤除去反应液中其他物质，加u03bb酶反应底物后，底物即被固相载体上的酶催化变为有色产物，通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中被测物质含量。

1.直接法（directelisa） 将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。2.间接法（indirectelisa） 此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。缺陷：交互反响发作的机率较高。3.双抗体夹心法（sandwichelisa） 被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。4.竞争法（competitiveelisa） 样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。bim试剂盒为您提供！

①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA双抗体夹心法 原理 ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html

没学过

抗体 抗原 抗体 显色 就这么简单

你是不是说的这个血清HIV-1抗体检测：第一代试剂：使用HIV全病毒裂解物为抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。如日本富士公司生产的HIV-PA试剂。第二代试剂：使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原，产品为单一目的基因而非多样性抗原混合，特异性高于第一代试剂。第三代试剂：使用合成多肽HIV抗原（少数用重组抗原），应用双抗原（或双抗体）夹心法原理检测HIV抗体（或抗原）。由于标记HIV抗原可同时检测血清中HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。第四代试剂：此类试剂在第三代试剂盒基础上，将针对P24抗原的抗体与HIV-1抗原一起包被固相载体，可同时检测HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体和P24抗。ELISA已经发展到第四代，敏感度几乎100%特异度99.7%以上，在方法学上，不但检测血液，也可检测唾液与尿液，有常规的方法也有快速的方法。可以一滴血一分钟即出现反应。

血凝抑制试验有血凝素(HA)的病毒能凝集人或动物红细胞，称为血凝现象，血凝现象能被相应抗体抑制称为血凝抑制试验，一种测定抗原或抗体的技术。即加入特异性抗体或特异性抗原后，使原有的血凝反应被抑制。正常值试验后的结果呈阴性。临床意义异常结果：相应抗体与病毒结合后，阻止病毒表面HA与红细胞结合，常用于正粘病毒、副粘病毒及黄病毒等的辅助诊断、流行病调查，也可用于鉴定病毒型与亚型。需要检查的人群：新生儿和孕妇者有需要，和带有相关病毒的患者，以做医疗的测定。酶联免疫吸附剂测定酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验，本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。

不同厂家生产的仪器功能都会有区别，可以根据自己的需求选择合适的

在进行ELISA实验时，为了获得更加精确的浓度检测结果，需要控制实验中液体的移动速度，而拍干水可以有效地帮助控制液体的流动速度，从而获得更加准确的实验结果。因此，在进行ELISA实验中，拍干水是一个非常重要的步骤。

目的探讨温度、孵育时间、振荡对ELISA法检测HBsAg的影响,以期进一步优化检测条件。方法采用HBsAg含量约为1ng/mL的血清标本,在4种不同条件(37℃振荡、37℃不振荡、25℃室温震荡、25℃室温不振荡)下的3个不同反应时间(10、20、30min)测定HBsAg,记录吸光度值。结果除10min37℃不振荡和25℃不振荡差异无统计学意义(P0.05)外,其余各组差异都有统计学意义(P0.05)。结论37℃振荡20min为ELISA检测HBsAg的较佳条件。

口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测方法检测针对病毒衣壳蛋白的抗体，可用于不同动物免疫效果的评估工作。其原理是先将待检血清与一定量抗原结合，占据抗原位点，然后再用已知量的阳性血清与抗原结合，最后通过检测抗原结合阳性血清的多少反推出待检血清中特异性抗体的数量，由于该试验使用酶标抗体不受待检血清来源动物种类的影响，所以适应于各种动物（猪、牛、羊）血清的检测。

酶联免疫法是将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法。1971年瑞典学者Engvall和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。酶标抗体标记效果测定：测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。扩展资料：酶联免疫法基本原理①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物（显色剂）。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。参考资料：百度百科—酶联免疫法

抗体通常是结合在固相载体上，抗原与固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是抗原蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的相互作用。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等地影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。

这是我们试剂盒上的说明书：采用间接ELISA方法检测：用包被抗原为合成多肽抗原和基因工程抗原（包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原）。待测样本加入已包被抗原的反应孔内孵育，若标本中含有抗HCV抗体，则该抗体与微孔内抗原形成抗原抗体复合物，加入酶结合物，经孵育后，酶结合物连接至抗原抗体复合物上，在TMB底物参与反应的情况下产生显色反应。

当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc 　　ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 http://www.shjmsj.com/

包被抗原后加入待测抗体，反应后洗板，加入酶标二抗，反应后再洗板，加入底物显色。间接Elisa方法主要用来检测抗体，例如我们对动物进行免疫后要检测抗血清的效价的话，就可以用间接Elisa方法来测。

【答案】：B在双抗体夹心法测抗原时，针对抗原两个不同决定簇的单抗分别做固相和酶标，测定时标本和酶标同时加入的技术为双位点一步法，此示意图即为该原理。

临床上用ELISA测HBsAg的原理是（） A.双抗体夹心法B.间接法C.双抗原夹心法D.竞争法E.捕获法正确答案：A

直接法——检测Ag将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量。优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。缺点：实验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。 间接法——检测Ab用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标二抗，加底物显色。优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。缺点：交互反应发生的机率较高。 双抗体夹心法——检测Ag将已知抗体连接在固相载体上，待测抗原与抗体结合后再与酶标二抗结合，形成抗体-待测抗原-酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测抗原成正比。适用于某些大分子的具有至少双表位的抗原，而不能用于小分子半抗原的检测。优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。暂时就补充这么些，你也可以问问中洪博元的技术人员还有哪些好方法。