荧光定量pcr原理

PCR原理三步骤 变性-退火-延伸。双链DNA在90～95℃变性，变为DNA单练，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸进行复制。

所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。其原理是在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

PCR是用来获取大量DNA片段的，恒温就是保持在一定的温度下。

荧光定量PCR原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值。荧光域值（threshold）是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍，即threshold。Ct 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。Ct值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值如下图所示。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。荧光定量检测荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。

qpcr原理是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流。应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。由于qPCR是实时定量检测致病病原体基因核酸，因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。扩展资料实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性最好的定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。参考资料来源：百度百科-QPCR

PCR的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5"-3")的方向合成互补链。PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。扩展资料标准的PCR过程分为三步：1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。

聚合酶链式反应（英文全称：Polymerase Chain Reaction）,聚合酶链式反应 简称PCR.聚合酶链式反应（PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点.它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术. 编辑本段发展简史 　　人类对于核酸的研究已经有100多年的历史.20世纪60年代末70年代初,人们致力于研究基因的体外分离技术.但是,由于核酸的含量较少,一定程度上限制了DNA的体外操作.Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想.但是,当时的基因序列分析方法尚未成熟,对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未发现,寡核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段,这种想法似乎没有任何实际意义. 　　1985年,美国科学家Kary Mullis在高速公路的启发下,经过两年的努力,发明了PCR技术,并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文.从此,PCR技术得到了生命科学界的普遍认同,Kary Mullis也因此而获得1993年的诺贝尔化学奖. 　　但是,最初的PCR技术相当不成熟,在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看不中用”的实验室技术.1988年初,Keohanog通过对所使用的酶的改进,提高了扩增的真实性.而后,Saiki等人又在黄石公园从生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶,使得PCR技术的扩增效率大大提高.也正是由于此酶的发现使得PCR技术得到了广泛地应用,使该技术成为遗传与分子生物学 分析的根本性基石.在以后的几十年里,PCR方法被不断改进：它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片段.到目前为止,PCR技术已有十几种之多,例如,将PCR与反转录酶结合,成为反转录PCR,将PCR与抗体等相结合就成为免疫PCR等. 编辑本段技术原理 　　DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径.双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝.在聚合酶链式反应 实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链.因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制. 　　但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展.发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床. 编辑本段工作原理 　　类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火（复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时聚合酶链式反应 间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板.每完成一个循环需2～4分钟,2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍. 编辑本段反应特点 　　特异性强 　　PCR反应的特异性决定因素为： 　　①引物与模板DNA特异正确的结合； 　　②碱基配对原则； 　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性； 　　④靶基因的特异性与保守性. 　　其中引物与模板的正确结合是关键.引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的.聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合（复性）可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度.再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高. 　　灵敏度高 　　PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=10-6）水平.能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU（空斑形成单位）；在细菌学中最小检出率为3个细菌. 　　简便、快速 　　PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2～4 小时完成扩增反应.扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广. 　　对标本的纯度要求低 　　不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板.可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测. 编辑本段反应五要素 　　参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 　　引物：引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增. 　　设计引物应遵循以下原则： 　　①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右. 　　②引物扩增跨度：以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段. 　　③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带.ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列. 　　④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3"端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带. 　　⑤引物3"端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败. 　　⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处. 　　⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性.引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会. 编辑本段反应体系与反应条件 　　标准的PCR反应体系： 　　10×扩增缓冲液10ul 　　4种dNTP混合物各200umol/L 　　引物各10～100pmol 　　模板DNA0.1～2ug 　　TaqDNA聚合酶2.5u 　　Mg2+1.5mmol/L 　　加双或三蒸水至100ul 　　PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+) 编辑本段PCR反应条件的选择 　　PCR反应条件为温度、时间和循环次数. 　　温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点.在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至40 ～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸.对于较短靶基因（长度为100～300bp时）可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸（此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性）. 　　①变性温度与时间：变性温度低,解链不完全是导致PCR失败的最主要原因.一般情况下,93℃～94℃min足以使模板DNA变性,若低于93℃则需延长时间,但温度不能过高,因为高温环境对酶的活性有影响.此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性,就会导致PCR失败. 　　②退火（复性）温度与时间：退火温度是影响PCR特异性的较重要因素.变性后温度快速冷却至40℃～60℃,可使引物和模板发生结合.由于模板DNA 比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞.退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度.对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想.引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度： 　　Tm值（解链温度）=4(G+C)+2(A+T) 　　复性温度=Tm值-(5～10℃） 　　在Tm值允许范围内, 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合, 提高PCR反应的特异性.复性时间一般为30～60sec,足以使引物与模板之间完全结合. 　　③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性： 　　70～80℃ 150核苷酸/S/酶分子 　　70℃ 60核苷酸/S/酶分子 　　55℃ 24核苷酸/S/酶分子 　　高于90℃时, DNA合成几乎不能进行. 　　PCR反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合.PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够 的.3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10Kb需延伸至15min.延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现.对低浓度模板的扩增,延伸时间要稍长些. 编辑本段酶及其浓度 　　目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶.催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U（指总反应体积为100ul时）,浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少. 　　dNTP的质量与浓度　dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系,dNTP粉呈颗粒状,如保存不当易变性失去生物学活性.dNTP溶液呈酸性,使用时应配成高浓度后,以1M NaOH或1M Tris.HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5,小量分装, -20℃冰冻保存.多次冻融会使dNTP降解.在PCR反应中,dNTP应为50～200umol/L,尤其是注意4种dNTP的浓度要相等（ 等摩尔配制）,如其中任何一种浓度不同于其它几种时（偏高或偏低）,就会引起错配.浓度过低又会降低PCR产物的产量.dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低. 　　模板（靶基因）核酸　模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本.SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀； 蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀核酸.提取的核酸即可作为模板用于PCR反应.一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR扩增.RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法,要防止RNase降解RNA. 　　Mg2+浓度　Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响,在一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为200umol/L时,Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜.Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少. 编辑本段工作步骤 　　PCR反应的基本过程 标准的PCR过程分为三步（如图所示）： 　　1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下, 　　氢键断裂,形成单链DNA 　　2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低,引物与 　　DNA模板结合,形成局部双链. 　　3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活 　　性）的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延 　　伸,合成与模板互补的DNA链. 　　每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍. 　　现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度. 编辑本段循环参数 　　1、预变性（Initial denaturation）． 　　模板DNA完全变性对PCR能否成功至关重要,一般95℃加热3-5分钟. 　　2、引物退火（Primer annealing） 　　退火温度一般需要凭实验（经验）决定. 　　退火温度对PCR的特异性有较大影响. 　　3、引物延伸 　　引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）. 　　延伸时间随扩增片段长短及所使用Taq酶的扩增效率而定. 　　4、循环中的变性步骤 　　循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性： 　　变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败. 　　5、循环数 　　大多数PCR含25-35循环,过多易产生非特异扩增. 　　6、最后延伸 　　在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟．使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链. 　　PCR-PCR常见问题 编辑本段电泳检测时间 　　一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失. 　　假阴性,不出现扩增条带 　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 　　模板：①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模 板核酸变性不彻底.在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处 理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改. 　　酶失活：需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性.需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭. 　　引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因.有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度 高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为：①选定一个好的引物合成单 位.②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决.如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度.③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效.④引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等. 　　Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特 异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带. 　　反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul.或100ul,应用多 大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败. 编辑本段物理原因 　　变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性；退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率.有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一. 　　靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某 段缺失使引物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的.假阳性出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高.引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列.靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性.需重新设计引物. 　　靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性.这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒.所用离心管及样进枪头等均应一次性使用.必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸.二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性.可互相拼接,与引物互补后,可扩增出PCR产物,而导致假阳性的产生,可用巢式PCR方法来减轻或消除. 　　出现非特异性扩增带 　　PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有：必要时重新设计引 物.减低酶量或调换另一来源的酶.降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数.适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性,65℃左右退火与延伸）. 　　出现片状拖带或涂抹带 　　PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带.其原因往往由于酶量过多或酶的质量 差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起.其对策有：减少酶量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.适当降低Mg2+浓 度.增加模板量,减少循环次数. 编辑本段克隆PCR产物 　　1）克隆PCR产物的最优条件是什么? 　　最佳插入片段：载体比需实验确定.1：1（插入片段：载体）常为最佳比,摩尔数比1：8或8：1也行.应测定比值范围.连接用5ul 2X连接液,50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶,插入片段共10ul.室温保温1小时,或4℃过夜.在这2种温度下,缺T-凸出端的载体会自连,产生蓝斑.室温保温1小时能满足大多数克隆要求,为提高连接效率,需4℃过夜. 　　2)PCR产物是否需要用凝胶纯化? 　　如凝胶分析扩增产物只有一条带,不需要用凝胶纯化.如可见其他杂带,可能是积累了大量引物的二聚体.少量的引物二聚体的摩尔数也很高,这会产生高比例的带有引物二聚体的克隆,而非目的插入片段.为此需在克隆前做凝胶纯化. 　　3）如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验? 　　A）涂布未转化的感受态细胞. 　　如有菌落,表明氨苄失效,或污染上带有氨苄抗型的质粒,或产生氨苄抗型的菌落. 　　B）转化完整质粒,计算菌落生长数,测定转化效率. 　　例如,将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化.用SOC稀释到1000ul后,用100ul铺板.培养过夜,产生1000个菌落.转化率为：产生菌落的总数/铺板DNA的总量. 　　铺板DNA的总量是转化反应所用的量除以稀释倍数.具体而言转化用10ng DNA,用SOC稀释到1000u后含10 ng DNA,用1/10铺板,共用1 ng DNA.转化率为： 　　1000克隆X10（3次方） ng /铺板1 ng DNA ug=10（6次方）cfu/ ug 　　转化pGEM-T应用10（8次方）cfu/ ug感受态细胞 　　如没有菌落或少有菌落,感受态细胞的转化率太低. 　　C）如用pGEM-T正对照,或PCR产物,产生>20-40蓝斑（用指定步骤10（8次方）cfu/ ug感受态细胞）,表明载体失去T.可能是连接酶污染了核酸酶.T4 DNA连接酶（M1801,M1804,M1794）质量标准好无核酸酶污染,不应用其它来源的T4 DNA连接酶替换. 　　D）用pGEM-T或pGEM-T Easy载体,连接pGEM-T正对照,转化高频率感受态细胞（10（8次方）cfu/ug）,按照指定的实验步骤,可得100个菌落,其中60%应为白斑,如产生>20-40蓝斑,没有菌落或少有菌落,连接有问题. 　　4）对照实验结果好,却没有回收到目的片段,实验出了什么问题? 　　A）连接用室温保温1小时,能满足大多数克隆,为提高效率,需4℃过夜. 　　B）插入片段带有污染,使3`-T缺失,或抑制连接,抑制转化.为此,将插入片段和pGEM-T正对照混合,再连接.如降低了对照的菌落数,插入片段需纯化,或重新制备.如产生大量的蓝斑,插入片段污染有核酸酶,使pGEM-T或pGEM-T Easy载体3`-T缺失. 　　C）插入片段不适于连接.用凝胶纯化的插入片段,因受UV过度照射,时有发生.UV过度照射会产生嘧啶二聚体,不利于连接,DNA必需重新纯化. 　　D）带有修复功能的耐热DNA聚合酶的扩增产物末端无A,后者是pGEM-T或pGEM-T Easy载体克隆所需.加Taq DNA聚合酶和核苷酸可在末端加A.详情查pGEM-T pGEM-T Easy载体技术资料（TM042）. 　　E）高度重复序列可能会不稳定,在扩增中产生缺失和重排,如发现插入片段高频率地产生缺失和重排,需用重组缺陷大肠杆菌菌株,如SURE细胞. 编辑本段PCR反应的分类 SOEing-PCR（重叠PCR） 　　重叠区扩增基因拼接法,是基于普通PCR 技术衍生出的一种基因融合和定点突变的有效方法.众所周知,由于引物只需要与模板有效结合,尤其是5"端序列不必与模板完全配对,因此扩增引物的5"端可以添加一种甚至是两种酶切位点,以便于后期克隆.SOEing 法正是利用这一特点,向两个独立基因掺入一段新的序列以达到两个基因出现一个重叠区的目的,3"端的结合使基因融合或定点突变得以实现. RT-PCR（逆转录PCR） 　　RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR）,是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.

聚合酶链反应（PCR）的基本原理是一种酶促合成反应。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下，在DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增延伸。试验先通过加热变性，使DNA双螺旋的氢链断裂，解离成单链DNA；然后通过退火，突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链；然后再在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸底物和镁离子存在的条件下，在聚合酶催化下，以引物为起始点，使DNA链延伸。扩展资料：PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5"-3")的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。反应特点：特异性强；灵敏度高；简便、快速；纯度要求低。参考资料：叶顺章. 聚合酶链反应在性病诊断中的应用[J]. 中华皮肤科杂志, 1996(3):147-148.百度百科-聚合酶链式反应

PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物. PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物 PCR扩增仪 延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段. 在环境检测中,靶核酸序列往往存在于—个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个基因,杂交就显得不敏感.使用PCR技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构.PCR技术常与其他技术结合起来使用,如RT-PCR、竞争PCR、槽式PCR、RAPf)、ARDRA等.

不用较这个真,懂的原理就行了.本质上一样的.

PCR产物的电泳检测时间 　　一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失. PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 酶切分析： 根据PCR产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究. 　　分子杂交：分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据,也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法. 　　Southern印迹杂交： 在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针,与PCR产物杂交.此法既可作特异性鉴定,又可以提高检测PCR产物的灵敏度,还可知其分子量及条带形状,主要用于科研. 　　斑点杂交： 将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上,再用内部寡核苷酸探针杂交,观察有无着色斑点,主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析. 　　氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀 核酸.提取的核酸即可作为模板用于PCR反应.一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR扩增.RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法,要防止RNase降解RNA. 温度与时间的设置： 　　基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点.在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90～95℃变性,再迅速冷却至40 ～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸.对于较短靶基因(长度为100～300bp时)可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸(此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性). 实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一.因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： 1. 戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套； 2. 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染； 3. 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底.若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； 4. 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度； 5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管； 6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性； 7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器.如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区； 8. 重复实验,验证结果,慎下结论.

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“麻辣小龙虾”，也称“麻小”，是我们中国人极为喜欢的一种美食。那么“麻辣小龙虾”用英文怎么说呢？ 一提到“龙虾”，相信大家脑子蹦出来的单词一定是lobster，但是其实lobster指的是那种海里的大龙虾，“小龙虾”的英文是crayfish，或者逼格高一点就叫做Chinese freshwater crayfish。 “麻辣小龙虾”就翻译成hot and spicy crayfish，或者简单一点就叫spicy crayfish。有道词典上查到的一个比较实用的例句： 里面可以学到不少有用的翻译：

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xiao long xia

摘要：肿瘤（Tumor）是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。那么肿瘤坏死因子是什么？你知道多少呢？下面小编从TNF基因特点、TNF蛋白特性、TNF受体1.1TNF-R的分型以及NF的生物学等多个要点为大家详细解析。一起来了解下吧！肿瘤坏死因子是什么你知道多少别名恶液质素（Cachectin）巨噬细胞毒素（Macrophagecytotoxin）坏死素（Necrosin）细胞毒素(Cytotoxin)肿瘤坏死因子α(Tumournecrosisfactor-α)出血因子(Hemorrhagicfactor)巨噬细胞毒性因子(Macrophagecytotoxicfactor)分化诱导因子(Differentiation-inducingfactor)来源巨噬细胞(Macrophages)自然杀伤细胞(Naturalkillercells)T淋巴细胞(T-lymphoblastoidCells)B淋巴细胞(B-lymphoblastoidCells)肥大细胞(Mastcells)成纤维细胞(Fibroblasts)平滑肌细胞(Smoothmusclecells)乳腺肿瘤细胞(Breasttumorcells)卵巢肿瘤细胞(Ovariantumourcells)星形胶质细胞(Astrocytes)L-929细胞(L-929cells)枯氏细胞(Kupffer"scells)上皮细胞(Epidermalcells)颗粒细胞（Granulosacells）TNF基因特点人类TNF-α基因于1985年成功克隆，定位于6p21.4，长约3.6kbp，有4个外显子和3个内含子，与主要组织相容性复合体（MHC）基因紧密连锁位于HLA-B和HLA-C2位点之间的MHC3类基因区内，由TNFA和TNFB组成，分别编码TNFα和TNFβ。位于启动子区238位和308位存在单核苷酸多态性，被认为可调节TNF的转录水平，与慢性乙肝、自身免疫性疾病、胰岛素抵抗、肿瘤等多种疾病的易感性相关。TNF基因编码的mRNA约1.7kbp，在其3`非翻译区有一段许多细胞因子都具有的保守TTATTTAT序列（AU富含元件，ARE）。佛波酯是TNF的诱导剂，能通过靠近启动子区TATAA框的一小段序列诱导TNF的转录。TNF蛋白特性1人TNF-α前体由233个氨基酸组成（26kDa），其中包含由76个氨基酸残基组成的信号肽，在TNF转化酶TACE的作用下，切除信号肽，形成成熟的157个氨基酸残基的TNF-α（17kDa）。由于没有蛋氨酸残基，故不存在糖基化位点，其中第69位和101位两个半胱氨酸形成分子内二硫键。人类TNF-α与小鼠TNF-α有79%氨基酸组成同源性，TNF-α的生物学作用似无明显的种属特异性。最近有人报道通过基因工程技术表达了N端少2个氨基酸（Val、Arg）的155氨基酸人TNF-α，具有更好的生物学活性和抗肿瘤效应。此外，还有用基因工程方法，将TNF-α分子氨基端7个氨基酸残基缺失，再将8Pro、9Ser和10Asp改为8Arg、9Lys和10Arg，或者再同时将157Leu改为157Phe，改构后的TNF-α比天然TNF体外杀伤L929细胞的活性增加1000倍左右，在体内肿瘤出血坏死效应也明显增加。TNF-α和β发挥生物学效应的天然形式是同源的三聚体。2人类TNF-β分子由205个氨基酸残基组成，含34氨基酸残基的信号肽，成熟型TNF-β分子为171个氨基酸残基，分子量25kDa。3人类TNF-β与TNF-α其DNA同源序列达56%，氨基酸水平上同源性为36%。应用X射线晶体衍射技术证明，TNF是由三个相同的单体亚单位组成的致密三聚体，单体亚单位呈楔形，由β片层折叠形成β夹心结构(β-Sandwichstructure)。TNF受体1.1TNF-R的分型TNFR可分为两型Ⅰ型TNF-R（又称TNFR1、CD120a、p55），439氨基酸残基，55kDa，其对应的mRNA有4.5Kbp，可表达于所有类型的细胞上，在溶细胞活性上起主要作用。Ⅱ型TNFR（又称TNFR2、CD120b、p75）426氨基酸残基，75kDa，其对应的mRNA有3Kbp，仅表达于免疫和内皮细胞上，与信号传递和T细胞增殖有关。1.2TNFR的结构功能特点两型TNFR都为糖蛋白，均包括胞膜外区、跨膜区和胞内区三个部分，胞外区有28%的同源，但在胞浆区无同源性，可能与介导不同的信号转导途径有关。多项研究证实，肿瘤坏死因子主要通过与TNF-R1作用而发挥生物活性。TNF蛋白与TNF-R1胞外区相结合诱导TNF-R1聚集和释放死亡结构域沉默子（SODD），随后TRADD与TNF-R1中的死亡结构域结合招募更多的接头蛋白，例如RIP，TRAF-2和FADD等。这些接头蛋白再招募其它参与信号转导的重要蛋白而发挥作用。目前对TNF-R2的结构和功能了解并不多，不过它缺乏死亡结构域，因此不能促进细胞凋亡过程。然而，TNF-R2可以通过活化NF-κB和JNK通路或者抑制TRAF-2干扰程序性细胞死亡（PCD）。1.3TNFR的分布TNFR存在于多种正常及肿瘤细胞表面，一般每个细胞受体数目在500~5000/细胞，如ME-800肿瘤细胞系TNFR约2000/细胞，Kd为2×10-10M。不同细胞表面TNFR的数目和亲和力似乎与细胞对TNF-α的敏感性并不平行。1.4可溶性TNFRTNF结合蛋白（TNF-BP）是TNFR的可溶性形式，有sTNFRⅠ(TNF-BPⅠ)和sTNFRⅡ(TNF-BPⅡ)两种。一般认为sTNFR具有局限TNF活性，或稳定TNF的作用，在细胞因子网络中有重要的调节作用。Seckiner1988年发现发热患者尿中有TNF抑制物，分子量为33kDa。Olsson1989年在慢性肾功能不全患者血和尿中也发现有TNF-BP。TNF-BP可与TNF特异结合，抑制TNF活性，如抑制其细胞毒活性和诱导IL-1产生，可促进皮下接种MethA病毒的生长，可能为肿瘤逃逸宿主抗肿瘤的机制之一。正常人血清中TNF-BP为1~2ng/ml，也可见于正常妊娠尿中。炎症、内毒素血症、脑膜炎双球菌感染、SLE、HIV感染、肾功能不全时以及肿瘤时可升高。可溶性TNFR可有效地减轻佐剂性关节炎的病理改变以及败血症休克。TNF受体超家族目前，研究人员已经证实肿瘤坏死因子蛋白同系物超家族存在着29个不同的受体（图1）。这些受体可以被分为三个主要群体：第一类受体是在胞质尾区包含死亡结构域（DD）。通过配体与相应的包含死亡结构域的受体结合可以招募胞内含有死亡结构域的受体，例如Fas相关死亡结构域蛋白（FADD/MORT1）和TNF受体相关的死亡结构域蛋白（TRADD），它们一起构成了所谓的死亡诱导信号复合物（DISC）。这些分子导致caspase活化，诱导细胞凋亡，但也可以招募TNF受体相关因子（TRAF）的家庭成员。第二类受体在胞质尾区包含一个或多个TRAF相互作用基序（TIM）。激活此类受体可以直接募集TRAF家族成员，最终激活多个信号转导通路的关键分子，如丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）（如c-JunN末端激酶JNK），P38（P38MAPK），细胞外信号调节激酶（ERK），核因子kappa-B抑制物激酶（IKK）和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）。第三类受体不包含功能性细胞内信号结构域或者基序。虽然这些“诱饵”受体并不参与细胞内信号传导，它可以与其它两组的受体竞争性的与相应配体结合。NF的生物学活性TNF-α和TNF-β的生物学作用极为相似，这可能与分子结构的相似性和受体的同一性有关。但在某些生物学作用方面也有不同之处。1.1杀伤或抑制肿瘤细胞TNF在体内、体外均能杀死某些肿瘤细胞，或抑制增殖作用。肿瘤细胞株对TNF-α敏感性有很大的差异，TNF-α对极少数肿瘤细胞甚至有刺激作用。用放线菌素D、丝裂霉素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞（如小鼠成纤维细胞株L929）可明显增TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。体内肿瘤对TNF-α的反应也有很大的差异，与其体外细胞株对TNF-α的敏感性并不平行。同一细胞系可能有敏感株和抵抗株如L929-S和L929-R。此外，靶细胞内源性TNF的表达可能会使细胞抵抗外源性TNF的细胞毒作用，因此通过诱导或抑制内源性TNF的表达可改变细胞对外源性TNF的敏感性。巨噬细胞结合型TNF可能参与对靶细胞的杀伤作用。TNF杀伤肿瘤的机理还不十分清楚，与补体或穿孔素杀伤细胞相比，TNF杀伤细胞没有穿孔现象，而且杀伤过程相对比较缓慢。TNF杀伤肿瘤组织细胞可能与以下机理有关。1.1.1直接杀伤或抑制作用。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。也有认为TNF激活磷脂酶A2，释放超氧化物而引起DNA断裂，磷脂酶A2抑制剂可降低TNF的抗病效应。TNF可或改变靶细胞糖代谢，使细胞内pH降低，导致细胞死亡。1.1.2通过TNF对机体免疫功能的调节作用，促进T细胞及其它杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤。1.1.3TNF作用于血管内皮细胞，损伤内皮细胞或导致血管功能紊乱，使血管损伤和血栓形成，造成肿瘤组织的局部血流阻断而发生出血、缺氧坏死。1.2提高中性粒细胞的吞噬能力，增加过氧化物阴离子产生，增强ADCC功能，刺激细胞脱颗粒和分泌髓过氧化物酶。TNF预先与内皮细胞培养可使其增加MHCⅠ类抗原、ICAM-1的表达，IL-1、GM-CSF和IL-8的分泌，并促进中性粒细胞粘附到内皮细胞上，从而刺激机体局部炎症反应，TNF-α的这种诱导作用要比TNF-β为强。TNF刺激单核细胞和巨噬细胞分泌IL-1，并调节MHCⅡ类抗原的表达。1.3抗感染：如抑制疟原虫生长，抑制病毒复制（如腺病毒Ⅱ型、胞疹病毒Ⅱ型），抑制病毒蛋白合成、病毒颗粒的产生和感染性，并可杀伤病毒感染细胞。TNF抗病毒机理不十分清楚。1.4TNF是一种内源性热原质，引起发热，并诱导肝细胞急性期蛋白的合成。TNF引起发热可能是通过直接刺激下丘脑提问调节中枢和刺激巨噬细胞释放IL-1而引起，还可通过IL-1、TNF-α刺激其它细胞产生IL-6。1.5促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化，如促进髓样白血病细胞ML-1、单核细胞白血病细胞U937、早幼粒白血病细胞HL60的分化，机理不清楚。TGF-β可抑制TNF-α多种生物学活性，但不一致TNF-α对髓样白血病细胞分化的诱导作用，甚至还有协同效应。1.6促进细胞增殖和分化：TNF促进T细胞MHCⅠ类抗原表达，增强IL-2依赖的胸腺细胞、T细胞增殖能力，促进IL-2、CSF和IFN-γ等淋巴因子差生，增强有丝分裂原或外来抗原刺激B细胞的增殖和Ig分泌。TNF-α对某些肿瘤细胞具有生长因子样作用，并协同EGF、PDGF和胰岛素的促增殖作用，促进EGF受体表达。TNF也可促进c-myc和c-fos等与细胞增殖密切相关原癌基因的表达，引起细胞周期有G0期向G1期转变。最近报道TNF-β（LT）是EB病毒转化淋巴母细胞的自分泌生长因子，抗LT抗体、sTNFR以及TNF-α能一直EB病毒转化淋巴细胞的增殖。IL-1、IFN-γ和GM-CSF对TNF的生物学作用有明显的增强作用，可能与增加细胞TNF受体的表达有关。已报道一种抗TNF-α单克隆抗体，可模拟TNF-α的某些生物学作用，这种现象在其它因子中还尚未见到。NF与临床1.1肿瘤治疗中的应用TNF在人、鼠肿瘤细胞株或原代培养的人癌细胞中，以及荷瘤裸鼠中都表现出杀瘤或抑瘤作用和免疫调节活性。应用TNF在治疗肿瘤等方面大多尚处于临床试验阶段，其也可与IL-2联合治疗肿瘤，目前认为全身用药的疗效不及局部用药，后者如病灶内注射，局部浓度高且副作用也较轻。近年来已采用TNF基因治疗开始对黑色素瘤等肿瘤进行临床验证。另外，TNF胸膜内给药，可以使转移性胃癌和乳腺癌病人的胸水中的癌细胞显著减少甚至完全消失。2003年，国内也是世界上第一例突变体新型人重组肿瘤坏死因子（nrhTNF）获得批准生产。1.2感染性休克目前认为革兰氏阴性杆菌或脑膜炎球菌引起的弥漫性血管内凝血、中毒性休克是由于细菌内毒素刺激机体产生过量TNF-α，引起发热，心脏、肾上腺严重损害，呼吸循环衰竭，甚至引起死亡，其TNF水平与病死率正相关。其发病机理可能是TNF刺激内皮细胞，导致炎症、组织损伤和凝血。TNF也是急性肝坏死的重要因素。病毒性暴发型肝衰竭外周血细胞诱生TNF，IL-1活性升高，且与病情程度相关。目前有关TNF介导内毒素性休克的机理还不很清楚。有认为TNF能促进吞噬细胞和内皮细胞产生IL-1和白三烯，导致DIC和内毒素休克。TNF抗体（抗血清或单克隆抗体）在小鼠、家兔和狒狒体内均有效地阻止致死性内毒素休克的发生。1.3恶液质TNF-α又称恶液素，可诱发机体发生恶液质。1.4TNF与病原的关系TNF还具有类似IFN抗病毒作用，阻止病毒早期蛋白质的合成，从而抑制病毒的复制，并与IFN-α和IFN-γ协同抗病毒作用。另一方面，TNF诱导HIV-1基因在T细胞中表达。TNF在HIV感染的CD4+细胞中活化或诱导NF-Κb，NF-κB结合于HIV的长末端重复序列（LTR）的增强子部位，活化HIV基因，可能与艾滋病发病有关。艾滋病患者单核细胞TNF-α产生增加，血清中TNF-α水平升高。此外，TNF还表现出抗菌和抗疟疾的功效。1.5与风湿性关节炎的关系在类风湿性关节炎病人的关节滑液中可以检测到TNF，认为其与关节炎的发病有关。多种抗炎药物可以降低TNF的产生。目前已有TNF的拮抗剂上市，如：依那西普（etanercept），可用于活动性类风湿关节、活动性强直性脊柱炎等的治疗。

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我是苏教的。。

据说到目前为止有500多种，有以下这么多，可能不全，请见谅：哺乳类（Mammals）： 獭狸 Nutria (Myocastor coypus)海狸鼠科 麝鼠 Musk rat (Ondatra zibethicus)鼠科 褐家鼠 Brown rat (Rattus norvegicus)鼠科 鸟类（Birds）： 小葵花凤头鹦鹉 Sulphur-crested cockatoo (Cacatua sulpurea)鹦鹉科 虹彩吸蜜鹦鹉Rainbow lorikeet (Trichoglossus haematotus)鹦鹉科 加拿大鹅 Canada goose (Anser canadensis)鸭科 爬行类（Reptiles）： 巴西龟(Trachemys scripta elegans)泽龟科 两栖类Amphibians: 牛蛙Bull frog (Rana catesbeiana)蛙科 鱼类（Fishes）： 鳙 Bighead (Aristichthys nobilis)鲤科 鰕虎鱼 Gobies (Gobiidae)鰕虎鱼科 麦穗鱼 Topmouth Gudgeon (Pseudorasbora parva)鲤科 食蚊鱼Mosquito fish (Gambusia affinis)花鳉科 胎鳉 Livebearers (Poeciliidae)胎鳉科 鲈Perch (Perca fluviatilus)鲈科 鲢Silver carp (Hypophthalmichthys molitrix)鲤科 甲壳类（Crustaceans）： 克氏螯虾 Crayfish (Procambius clarkii)龙虾科 软体动物Mollusks: 福寿螺 Amazonian snail (pomacea canaliculata)苹果螺科 明线瓶螺(pomacea lineata)苹果螺科 厚壳明线瓶螺(pomacea insularum)苹果螺科 非洲大蜗牛 Giant Africa snail (Achatina fulica)玛瑙螺科 昆虫（Insects）： 白蚁 (Termite)白蚁科 松突圆蚧 Pine Scale (Hemiberlesia pitysophila)盾蚧科 美国白蛾 Fall webworm, American White Moth (Hyphantria cunea)灯蛾科 蔗扁蛾 Banana moth (Opogona sacchari)螟蛾科 湿地松粉蚧 Loblolly pine mealybug (Oracella acuta)粉蚧科 美洲斑潜蝇 Vegetable Leaf Miner (Liriomyza sativae)潜蝇科 稻水象甲 American rice water weevil (Lissorhoptrus oryzophilus)象甲科 美洲大蠊 American Cockroach (Periplaneta americana)蜚蠊科 德国小蠊 German Cockroach (Blattella germanica)蜚蠊科 苹果棉蚜 Woolly Apple Aphid (Eriosoma lanigerum)棉蚜科 葡萄根虫 Grape Root Louse (Phylloxera vitifolii) 线虫Nematode: 松材线虫 North American pinewood nematode (Bursaphelenchus xylophilus)滑刃总科 真菌（Fungi） 甘薯长喙壳菌 Black Spot (Ceratocystis fimbriata) 野生动物疾病Wildlife Diseases: 鲑鱼传染性胰脏坏死病 Infectious Pancreatic Necrosis Virus in trout (IPNV) 植物（Plants）： 土荆芥 Mexican Tea (Chenopodium ambrosioides)藜科 水花生 Alligator weed (Alternanthera philoxeroides)苋科 刺花莲子草 Spingflower Alternanthera (Alternanthera pungens)苋科 西番莲(Passiflora coerulea) 西番莲科 仙人掌 Cacti (Cactaceae)仙人掌科 假连翘Golden Dewdrop (Duranta repens)马鞭草科 刺茄 Love Apple (Solanum aculeatissimum)茄科 美洲车前 Plantaiga (Plantaginaceae)车前科 异檐花 Venus" Looking-glass (Triodanis)桔梗科 藿香蓟Tropic Ageratum (Ageratum conyzoides)菊科 豚草 Ragweed (Ambrosia)菊科 一年蓬 Daisy Fleabane (Erigeron annuus)菊科 紫茎泽兰 Crofton weed (Eupatorium adenophorum)菊科 薇甘菊 South American Climber (Mikania micrantha)菊科 北美一枝黄 Tall goldenrod (Solidago altissma)菊科 大米草 Common cordgrass (Spartina anglica)菊科 毒麦 Darnel ryegrass (Lolium temulentum)菊科 水葫芦 Water hyacinth (Eichhornia crassipes)雨久花科 五爪金龙Palmate-leaved Morning Glory (Ipomoea cairica)旋花科 红瓜Ivygourd (Coccinia cordifolia)葫芦科 马缨丹Common Lantana (Lantana camara)马鞭草科 五叶地锦Virginia Creeper (Parthenocissus quinquefolia)葡萄科 三裂蟛蜞菊 花猫爪藤Common Cat"s Claw Vine (Macfadyena unguis-cati)紫葳科 三裂蟛蜞菊Trilobe Wedelia (Wedelia trilobata)菊科 蓖麻Castor-oil Plant (Ricinus communis)大戟科 银胶菊Common Parthenium (Parthenium hysterophorus)菊科 心叶落葵薯 Madeira Vine (Anredera cordifolia) 黄花草木樨 Yellow Sweetclover (Melilotus officinalis)豆科 白香草木樨White Sweetclover (Melilotus albus)豆科 棒叶景天Tubeleaf Kalanchce (Kalanchoe tubifolia)景天科 蔓马缨丹Weeping Lantana (Lantana montevidensis)马鞭草科 假韭Oleanderleaf Nothoscordum (Nothoscordum gracile)石蒜科 苇状羊茅Tall Fescue (Festuca arundinacea)禾本科 大花老鸦嘴 Blue Trumpet Vine (Thunbergia graniflora)爵床科 飞机草 Odor Eupatorium (Eupatorium odoratum)菊科 单刺仙人掌Prickly Pear (Opuntia monacantha)仙人掌科 赛葵Coromandel Coast Falsemallow (Malvastrum coromandelianum)锦葵科 梯牧草Timothy (Phleum pratense)禾本科 地毯草Carpetgrass (Axonopus compressus)禾本科 节节草Ramose Scouring Rush (Equisetum ramosissimum)禾本科 毛花雀稗Caterpillar Grass (Paspalum dilatatum)禾本科 铺地狼尾草West African Pennisetum (Pennisetum clandestinum)禾本科 莠狗尾草Knotroot Bristlegrass (Setaria geniculata)禾本科 苏丹草Sudangrass (Sorghum sudanense)禾本科 多花黑麦草Italian Ryegrass (Lolium multiflorum)禾本科 球茎大麦Bulbous Barley (Hordeum bulbosum)禾本科 紫花苜蓿Alfalfa (Medicago sativa)豆科 熊耳草Mexican Ageratum (Ageratum houstonianum) 蛇目菊Tinctorial Coreopsis (Coreopsis tinctoria)菊科 大花金鸡菊Lance Coreopsis (Coreopsis lanceolata)菊科 矢车菊Corntfower (Centaurea cyanus)菊科 万寿菊Aztec Marigold (Tagetes erecta)菊科 裂叶牵牛Whiteedge Morning Glory (Ipomoea nil)旋花科 圆叶牵牛Common Morning Glory (Ipomoea purpurea)旋花科 紫茉莉Four-o"clock (Mirabilis jalapa)紫茉莉科 含羞草Pink Woodsorrel (Mimosa pudica)豆科 铜锤草Corymb Wood Sorrel (Oxalis corymbosa)禾本科 大麻Hemp (Cannabis indica)大麻科 含羞草决明Sensitiveplant-like Senna (Cassia mimosoides)豆科 决明Sickle Senna (Cassia tora)豆科 土人参Panicled Fameflower (Talinum paniculatum)马齿觅科 望江南Coffee Senna (Cassia occidentalis)蕨类 美洲商陆Common Pokeweed (Phytolacca americana)商陆科 野茼蒿Hawksbeard Velvetplant (Crassocephalum crepidioides)茼蒿科 菊苣Common Chicory (Cichorium intybus)菊科

三．力学成就 《考工记·轮人篇》在论述车轮制造时，以受力、运动和不同接触地面的影响等因素出发，在讲到轮子的形状与运动快慢之间的关系时说：“凡察车之道……不微至，无以为速也”。“微至”是指轮和地面的接触面积少。就是说，车轮与地面接触少，就容易转得快。那么，怎样才能达到“微至”呢？它接着指出：“欲其微至也，无所取之，取之圜（圆）。”即要尽量把轮子做成理想圆。这是在实践中对滚动物体的滚动速度与滚动物体的接触面积大小有关的经验总结，是符合近代摩擦理论的。在论述如何检验轮子各部分是否做得均匀时，它说：“楺辐必齐，平沈（沉）必均。”“水之以视（视）其平沈之均也。”这里水之，即浸入水中，如果“平沈”即浮沉相同，则轮子各部分必定是均匀的，就符合制作轮子的要求了。这是浮力原理在制造轮子中的应用。在论述到轮子大小对拉力（牛或马）的影响时，它说：轮太矮，马就老在上坡一样。从现在力学知识看，当轮太低时，辕与地面成一角度，马除了要克服运动阻力外，要承受部分重力，因此马总象上坡一样费劲。这是实践中对斜面受力的一种极好的分析。 《考工记》还分析了与弹道有关的技术。它在《矢人篇》中说：“水之以辩其阴阳，以设其比，夹其比以设其羽，参分其羽，以设其刃，则虽有疾风，亦弗之能惮矣。”这就是说，为了要使箭在飞行中保持稳定，采取了把箭上的羽毛按一定比例对称地安排，然后加上箭头，则在飞行中就不怕风的影响了。接着又说：“前弱则俛（俯），后弱则翔（仰），中弱则纡（纡絗旋转之意），中强则扬。”“羽丰则迟，羽杀则。”这说明了箭杆如果前轻后重，或前重后轻，都会影响飞行的高度；中间轻重配置不当，会影响飞行的稳定性；羽毛太多，则飞行速度慢。而羽毛太少，则箭容易落向旁侧，射不到目的物。 《考工记》最早作出了关于物体惯性的论述。在《辀人篇》中说：“劝登马力，马力既竭，辀尤能一取焉”。意思是说，马拉车的时候，马已停止用力了，但车还能前进一段路程，这里指出了物体的一种基本属性——惯性，这也是世界上对惯性现象的最早论述。 东汉王充在对物体的运动进行了仔细观察的基础上，在《论衡》中指出了人的视觉，在观察物体的运动快慢时会造成错觉的原因和如何量度物体运动的快慢。他在《论衡》中说：“天行已疾，人去高远，视之若迟。盖望远物者，动若不动，行若不行；何以验之？乘船江海之中，顺风而驱，近岸则行疾，远岸则行迟，船行一实也，或疾或迟，远近之视使之然也。”说明是由于观察者离运动物体远近不同，因而感到它的快慢也就不同了的道理。这也说明王充已知道了视角差对于观察物体运动快慢的影响。在关于运动的快慢上，又说“日昼行千里，夜行千里，麒麟昼日亦行千里，然则日行舒疾与麒麟之步相类似也。”意思是太阳和麒麟在日间运动的快慢相比是一样的，说明已有了现代物理学中“速率”概念之萌芽。 关于力和运动的关系，王充说：“是故车行于陆，船行于沟，其满而重者行迟，空而轻者行疾，”“任重，其进取疾速，难矣。”又说“古之多力者，身能负荷千钧。乎能决角伸钩，使之自举。不能离地。”显然已不仅知道在外力的作用下，若外力大小一定，则物体越重，要它开始运动，或使之运动状态发生变化就越难。这显然是现在称之为牛顿第二运动定律的萌芽，而且还认识到内力不能改变物体运动状态这一事实。 漏水运转浑天仪和候风地动仪，是东汉张衡（公元78—139年）根据物理的力学原理先后制成的。它们分别在天象和地震观察上发挥了作用。漏水运转浑天仪是一台自动测示天象的仪器，它以一空心铜球表示天球，天球画有星座和黄道、赤道，紧附在天球外的有地平环和子午环等，天球可以支架在子午环上绕天轴转动。另外把计量时间的漏壶与浑象联系起来，即利用漏壶的等时性，以漏壶漏出的水为原动力，再通过浑象内部装置的齿轮等使传动和控制设备，以使浑象每日均匀地绕天轴旋一周从而达到自动地、近似正确地演示天象的目的。候风地动仪以精钢制成，形似酒尊，里面均匀排列八根“都柱”——上粗下细的立柱。由于都柱重心高，当地面一有震动，就极容易向震动方向倒下。尊外相应地设置八条口含小铜球的龙，每个龙头下面都有一只蟾蜍，昂首张口（见插页图5）。当某一都柱倒下时，就带动了连接的龙，使龙口张开，所含的铜球落下到其下面的蟾蜍口中。因此观察落下的铜球的方位，就可判断地震发生的方向。　　在运动的相对性概念方面，晋天文学家束皙（261～303年）说过：“乘船以涉水，水去而船不徙矣”（《隋书·天文志》）；晋葛洪（283～363年），号抱朴子，在其著作《抱朴子·内篇·塞难》中说：“游云西行，而谓月之东驰。”《晋书卷十一天文志》更将这一相对运动的思想用于解释天体运行：“天旁转如推磨而左行，日月右行，随天左转，故日月实东行，而天牵之以西没。譬之蚁行磨石之上，磨左旋而蚁右去，磨疾而蚁迟，故不得不随磨以左回焉。”有极大价值的是至少成书于东汉时代的《尚书纬·考灵曜》（著者不详，收入明代孙毅编纂的《古微书》卷一《尚书纬》），该书在提出“地有四游，冬至地上行北而西三万里，夏至地下行南而东三万里，春秋二分是其中矣”的同时，提出了著名论断：“地恒动而人不知，譬如闭舟而行，不觉舟之运也。”这种对运动相对性的观点，《考灵曜》比伽利略的《对话》至少早约1500年。此观点说明我国古代物理思想达到过的高度。

小龙虾的英语是“Crawfish”或者“Crayfish”。这两个单词都可以表示小龙虾，但在不同的国家或地区使用的频率有所不同。Crawfish是在美国南部地区使用的术语，特别是在路易斯安那州，是当地的一道传统美食。Crawfish一般指的是淡水龙虾，与海洋龙虾不同。Crawfish是“Crayfish”和“Crawdad”的变体，是英语中常用的术语之一。Crayfish是在英国和澳大利亚等地区使用的术语，也可以表示小龙虾。Crayfish是一种淡水甲壳类动物，分布在全球各地的河流和湖泊中。Crayfish是一种非常受欢迎的食品，可以用许多不同的方式烹制。总之，小龙虾的英语是“Crawfish”或者“Crayfish”。这两个单词在不同的国家或地区使用的频率有所不同，但都可以表示小龙虾这种淡水甲壳类动物。如果你想要品尝美味的小龙虾，可以在美国南部地区寻找Crawfish，或者在英国和澳大利亚等地区寻找Crayfish。

[CLASSIC] 股骨头坏死（avascular necrosis of the femoral head）是指股骨头血液供应不足导致骨组织死亡的情况。股骨头坏死的治疗方法取决于病情的严重程度和患者的个体情况。以下是一些常见的治疗选项：1. 非手术治疗：对于早期和轻度病例，非手术治疗可能有助于减轻症状和促进自愈。这包括休息、减轻股骨头的负荷、物理疗法、药物治疗（如非甾体消炎药）和骨密度保护药物等。2. 手术治疗：对于病情较重或进展迅速的患者，手术治疗可能是必要的。常见的手术选项包括股骨头减压术、股骨头保留手术（如骨移植、骨头修复）、人工关节置换等。手术的目标是减轻疼痛、恢复关节功能，并防止进一步的骨坏死。3. 干细胞治疗：近年来，干细胞治疗被认为是一种潜在的治疗方法。干细胞可以通过促进新血管生成和骨组织修复来帮助股骨头坏死的康复。然而，干细胞治疗仍处于研究阶段，需要更多的临床研究来评估其疗效和安全性。重要的是，股骨头坏死的治疗需要根据个体情况进行个体化的评估和制定治疗方案。建议您咨询专业的医生或骨科专家，他们可以根据您的具体情况和病情严重程度，为您提供更准确和个体化的治疗建议。及早诊断和治疗可以提高治疗效果和预后。

大部分戴森吸尘器的积尘盒可以用水洗，但是在清洗之前，需要将积尘盒内的灰尘倒掉，避免积尘盒内的灰尘粘在盒子上，难以清洗干净。需要注意不要让电机部分接触水。如果积尘盒上带有电机部分，需要将电机部分拆下来，然后再清洗积尘盒。清洗时最好使用温水，可以加入一些中性的清洁剂或肥皂，但是避免使用强酸强碱的清洁剂，清洗完毕后，需要将积尘盒晾干即可。

龙虾（学名：Palinuridae）是节肢动物门甲壳纲十足目龙虾科4个属19种龙虾的通称。又名大虾、龙头虾、虾魁、海虾等。它头胸部较粗大，外壳坚硬，色彩斑斓，腹部短小，体长一般在20厘米～40厘米之间，重0.5公斤上下，无螯，是虾类中最大的一类。最重的能达到5公斤以上，人称龙虾虎。体呈粗圆筒状，背腹稍平扁，头胸甲发达，坚厚多棘，前缘中央有一对强大的眼上棘，具封闭的鳃室。主要分布于热带海域，是名贵海产品。中国已发现8种，以淡水龙虾产量较大。2014年9月，日本三重县鸟羽市答志岛出现一只雌雄同体的龙虾。其左半身是红褐色，右半身是黑色。中文学名：龙虾别称：大虾、龙头虾、虾魁、海虾、虾王界：动物界门：节肢动物门亚门：甲壳亚门纲：软甲纲目：十足目亚目：无螯亚目科：龙虾科属：12属种：60种原产地：地在中南美洲和墨西哥东北部地区命名时间：Latreille, 1802英文名：Palinuridae；lobster分享形态特征龙虾制作图册 4张龙虾，原产地在中、南美洲和墨西哥东北部地区。中国分布现状：已扩展至安徽、湖北、上海、江苏、香港、台湾等地，形成数量庞大的自然种群。龙虾的头胸部较粗大，外壳坚硬，色彩斑斓，腹部短小，体长一般在20厘米-40厘米之间，重0.5公斤上下，是虾类中最大的一类。最重的能达到5公斤以上，人称龙虾虎。体呈粗圆筒状，背腹稍平扁，头胸甲发达，坚厚多棘，前缘中央有一对强大的眼上棘，具封闭的鳃室。腹部较短而粗，后部向腹面卷曲，尾扇宽短。龙虾有坚硬、分节的外骨骼。胸博具五对足其中一或多对常变形为螯，一侧的螯通常大于对侧者。眼位于可活动的眼柄上。有两对长触角。腹部形长，有多对游泳足，尾呈鳍状，用以游，尾部和腹部的弯曲活动可推展身体前进。生活习性生存环境螫虾的适应能力很强，从调查情况看，无论湖泊、河流、池棘刺龙虾塘、水渠、水田均能生存，甚至在一些鱼类难以存活的水体也能存活。龙虾对水体溶氧的适应能力很强，在水体缺氧的环境下它不但可以爬上岸来，而且可以借助水中的飘浮植物或水草将身体侧卧于水面，利用身体一侧的鳃呼吸以维持生存。

高声喊叫振幅较大,声波能量较大,容易引起与积雪的共振,发生雪崩

魔鬼鱼manta有毒的魟鱼要怎么处理?红鱼虽然能吃，但是尾刺有毒。如果误食或刺伤受伤害的部位会强力的疼痛或抽搐、血压下降。如不立刻采取措施，还可能致人死亡。红鱼处理时需切半除内脏和尾巴，同时去掉嘴的硬部分，清洗干净后，在通风的背阴地晒于2至3天左右。Tips:虹鱼毒腺只是后面的一根尾骨哟~但处理魟鱼时仍要做好防护。魟鱼小知识红鱼又称魔鬼鱼，种类繁多，属于软骨鱼类的亚目，是在中生代的侏罗纪(约1.8亿年~1.4亿年前）出现的鲨的同类，喜欢藏身在海底沙地。红鱼活动力不强，深度在5~100公尺间。身体扁平，略呈圆形或菱形，软骨无鳞、胸鳍发达、尾呈鞭状，有毒刺，只有少数种类具有食用值。魟鱼分几种?有六个科158种。除了“深水尾虹”科台湾没有外，其他五个科台湾都有，五种里有四种还是台湾发现的。“红”科，尾细长没有尾鳍:“扁魟”科有背鳍和尾鳍;“燕虹”科体盘特别宽，尾巴很短;“扁虹”科头部明显鼓起来比体盘高，使眼睛和喷水孔变成长在头两侧，胸鳍只延伸到眼的后面还有体型很大的牛鼻和魔鳐类。魟鱼竟然是鲨鱼的近亲?据说1亿8千年前，魟鱼还是鲨鱼的同类。但为了适应海底生活，它们长期将身体藏在海底沙地里，便慢慢进化而成。红鱼和鲨鱼都属于软骨鱼，它们都有着相同的牙齿、皮肤、电感应器。牙齿不会因为年龄的原因停止生长。齿状盾鳞的特殊皮肤上布满了神经未梢。头部都有电感应器可以感受到微小的电场，甚至是藏在沙子里的鱼的心跳哦。浑身是宝的魟鱼魟鱼肉咸甘，补气。尾部小毒、性寒，但是对于中枢神经和心脏友好，清热、化结、除症。尾刺研末对胃癌、食道癌、肺癌、乳腺炎、咽喉炎、疟疾、牙痛、魟鱼尾刺刺伤人群友好。肝可制作鱼肝油，煮食能治夜盲症哟~魟鱼的吃法酒槽红鱼步骤一:起锅热油、放姜蒜煸香，加入酒糟，盖锅盖上气。步骤二:倒入鱼，生抽、糖、洋葱，盖锅盖上气后小火，中途轻轻搅拌一下，煮到鱼变色就差不多了。Tips:注意不要煮过了，否则鱼肉会散掉哦~

crayfish Ok？

A、小孔成像是光沿直线传播形成的，不是折射现象，所以此选项不符合题意； B、放大镜是凸透镜，是光的折射现象的应用，所以此选项符合题意； C、天鹅在水中形成倒影是由于光的反射形成的，所以此选项符合题意； D、潜望镜的光学元件是平面镜，它是光的反射现象的应用，所以此选项符合题意； 故选B．

只能帮你找到这些入侵动物了哺乳类（Mammals）： 獭狸 Nutria (Myocastor coypus) 麝鼠 Musk rat (Ondatra zibethicus) 褐家鼠 Brown rat (Rattus norvegicus) 鸟类（Birds）： 小葵花凤头鹦鹉 Sulphur-crested cockatoo (Cacatua sulpurea) 虹彩吸蜜鹦鹉Rainbow lorikeet (Trichoglossus haematotus) 加拿大鹅 Canada goose (Anser canadensis) 爬行类（Reptiles）： 巴西龟(Trachemys scripta elegans) 两栖类Amphibians: 牛蛙Bull frog (Rana catesbeiana) 鱼类（Fishes）： 鳙 Bighead (Aristichthys nobilis) 鰕虎鱼 Gobies (Gobiidae) 麦穗鱼 Topmouth Gudgeon (Pseudorasbora parva) 食蚊鱼Mosquito fish (Gambusia affinis) 胎鳉 Livebearers (Poeciliidae) 鲈Perch (Perca fluviatilus) 鲢Silver carp (Hypophthalmichthys molitrix) 甲壳类（Crustaceans）： 克氏螯虾 Crayfish (Procambius clarkii) 软体动物Mollusks: 福寿螺 Amazonian snail (Ampullaria gigas) 非洲大蜗牛 Giant Africa snail (Achatina fulica) 昆虫（Insects）： 白蚁 (Termite) 松突圆蚧 Pine Scale (Hemiberlesia pitysophila) 美国白蛾 Fall webworm, American White Moth (Hyphantria cunea) 蔗扁蛾 Banana moth (Opogona sacchari) 湿地松粉蚧 Loblolly pine mealybug (Oracella acuta) 美洲斑潜蝇 Vegetable Leaf Miner (Liriomyza sativae) 稻水象 American rice water weevil (Lissorhoptrus oryzophilus) 美洲大蠊 American Cockroach (Periplaneta americana) 德国小蠊 German Cockroach (Blattella germanica) 苹果棉蚜 Woolly Apple Aphid (Eriosoma lanigerum) 葡萄根虫 Grape Root Louse (Phylloxera vitifolii) 线虫Nematode: 松材线虫 North American pinewood nematode (Bursaphelenchus xylophilus) 真菌（Fungi） 甘薯长喙壳菌 Black Spot (Ceratocystis fimbriata) 野生动物疾病Wildlife Diseases: 鲑鱼传染性胰脏坏死病 Infectious Pancreatic Necrosis Virus in trout (IPNV)

有用的，现在都是智能化时代，有一个吸尘器真的要为妈妈省很多力

问题一：细胞因子主要有哪几类,简述其功能 ① 白细胞介素（interleukin，IL）――促进胸腺细胞、T细胞活化、增殖和分化；增强Tc和NK细胞的杀伤活性；引起发热，参与炎症反应； *** 造血功能；促进免疫应答； ② 干扰素（interferon，IFN）――是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗穿毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力； ③ 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）――杀伤或抑制肿瘤细胞（直接杀伤或抑制作用、通过TNF对机体免疫功能的调节作用，促进T细胞及其它杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤、TNF作用于血管内皮细胞，损伤内皮细胞或导致血管功能紊乱，使血管损伤和血栓形成，造成肿瘤组织的局部血流阻断而发生出血、缺氧坏死）；提高中性粒细胞的吞噬能力，增加过氧化物阴离子产生，增强ADCC功能， *** 细胞脱颗粒和分泌髓过氧化物酶；抗感染；TNF是一种内源性热原质，引起发热，并诱导肝细胞急性期蛋白的合成；促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化，如促进髓样白血病细胞ML-1、单核细胞白血病细胞U937、早幼粒白血病细胞HL60的分化，机理不清楚；促进细胞增殖和分化； ④ 集落 *** 因子（colonystimulating factor，CSF）――集落 *** 因子是指能够 *** 多能造血干细胞和不同发育分化，阶段造血干细胞增殖分化在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。主要包括：干细胞生成因子（SCF）多能集落 *** 因子（IL-3）、巨噬细胞集落 *** 因子（M-CSF）、粒细胞集落 *** 因子（G-CSF）、粒细胞-巨噬细胞集落 *** 因子（GM-CSF）和促红细胞生成素（EPO）。上述集落 *** 因子除具有 *** 不同发育分化阶段造血干细胞增生分化的功能外，其中有些还能促进或增强巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬杀伤功能； ⑤ 趋化性细胞因子（chemokine）――趋化性细胞因子是一类重要的免疫调节因子,为介绍有关趋化性细胞因子/趋化性细胞因子受体在抗肿瘤免疫反应和自身免疫性疾病中所起的重要作用,以及特异性趋化性细胞因子受体阻断剂的应用研究新进展.趋化性细胞因子与趋化性细胞因子受体的相互作用是IL-12诱导的抗肿瘤T细胞向肿瘤局部浸润的必备因素之一, 当运用CCR5的特异性阻断剂TAK-779时,几乎完全阻断了IL-12的抗肿瘤作用； ⑥ 转化生长因子（transforming growth factor，TGF）――转化生长因子-β(TGF-β)是一类多功能的多肽类生长因子，对细胞的增殖与分化、细胞外基质的产生、血管的生成、细胞凋亡及机体免疫系统均起着重要的调节作用。TGF-β与多种人类疾病相关； ⑦ 生长因子（growth factor，GF）――生长因子对人体的作用：1、对骨骼系统的作用：促进生成大量的成骨细胞、抑制破骨细胞。治疗骨质酥松、股骨头坏死、关节炎、风湿病和因钙缺乏导致的疾病。 2、对消化系统的作用：加强胃肠功能，促进消化酶的分解，增进食欲，治疗慢性胃炎。 3、对血液系统的作用：加强骨髓造血功能，促进干细胞生成，进而生成大量红细胞和白细胞。加强左心室厚度，增强心肌弹性力，高效治疗心脏病。有效清除血液中低密度蛋白，防止在血管壁沉积，治疗血栓。 4、对呼吸系统的作用：加强肺部细胞功能，修正气血屏障，消除肺部毒素，治疗肺气肿、肺供养不足和呼吸系统疾病。 5、对内分泌系统的作用：促进人体荷尔蒙......>> 问题二：细胞因子有哪些种类？ 摘要： 所谓细胞因子是指由免疫细胞(单核细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(如血管内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞)等经 *** 而合成、分泌的一类具有多种生物学活性多肽或蛋白质。 所谓细胞因子是指由免疫细胞(单核细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)和某些非免疫细胞(如血管内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞)等经 *** 而合成、分泌的一类具有多种生物学活性多肽或蛋白质。这些细胞抚子分为几个大的家族，临床上常用的可以用于肿瘤治疗领域的有白细胞介素类(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、造血因子和各种细胞生长因子等。从治疗目的讲，这些细胞因子可以用于血液肿瘤如白血病、淋巴瘤的治疗以及一些实体肿瘤的治疗，如恶性黑色素瘤、肾癌等。从辅助治疗角度来讲，这些细胞因子可以用于治疗由于化疗、放疗而造成的一些不良反应、并发症的治疗。例如，患者在接受化疗时往往会造成造血抑制，通过应用一些造血 *** 因子可以加速患者的造血功能恢复，尽快脱离危险并进入下一周期的治疗 问题三：细胞因子有哪些主要的生物学功能 细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞(如血管内皮细胞，表皮细胞和成纤维细胞等)经 *** 而合成分泌的一类小分子量可溶性蛋白或蛋白多肽。 细胞因子的种类： 白细胞介素(ILS)干扰素(IFN)肿瘤坏死因子(TNF)集落 *** 因子(CSF)趋化因子(chemokines)生长因子(GF) 细胞因子的主要生物学作用： ① 抗感染和抗肿瘤作用。②免疫调节作用。③参与细胞凋亡。④ *** 造血细胞增殖，分化。⑤促进各种细胞的生长和分化⑥参与和调节炎症反应。⑦细胞因子异常可导致疾病的发生。⑧参与神经-内分泌-免疫网络。 问题四：什么是体液因子？和细胞因子有什么区别和联系？ 体液因子 1．心钠肽和脑钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP and brain natriuretic peptide，BNP）正常情况下，ANP主要储存于心房，心室肌内也有少量表达。当心房压力增高，房壁受牵引时，ANP分泌增加，其生理作用为扩张血管，增加排钠，对抗肾上腺素、肾素-血管紧张素等的水、钠潴留效应。正常人BNP主要储存于心室肌内，其分泌量亦随心室充盈压的高低变化，BNF的生理作用与ANP相似。心力衰竭时，心室壁张力增加，心室肌内不仅BNP分泌增加，ANP的分泌也明显增加，使血浆中ANP及BNP水平升高，其增高的程度与心衰的严重程度呈正相关。为此，血浆ANP及BNF水平可作为评定心衰的进程和判断预后的指标。 心衰状态下，循环中的ANP及。BNP降解很快，且其生理效应明显减弱，即使输注外源性ANP亦难以达到排钠、利尿降低血管阻力的有益作用。新近研究开发的重组人BNP（Nesiritide）临床应用，可发挥排钠、利尿、扩管等改善 心衰的有益作用。 2．精氨酸加压素（arginine vasopressin，AVP）由垂体分泌，具有抗利尿和周围血管收缩的生理作用。对维持血浆渗透压起关键作用。AVP的释放受心房牵张受体（atrial STretch receptors）的调控。心力衰竭时心房牵张受体的敏感性下降，使AVP的释放不能受到相应的抑制，而使血浆AVP水平升高，继而水的潴留增加；同时其周围血管的收缩作用又使心脏后负荷增加；对于心衰早期，AVP的效应有一定的代偿作用，而长期的AVP增加，其负面效应将使心力衰竭进一步恶化。 3．内皮素（endothelin）是由血管内皮释放的肽类物质，具有很强的收缩血管的作用。心力衰竭时，受血管活性物质如去甲。肾上腺素、血管紧张素、血栓素等的影响，血浆内皮素水平升高，且直接与肺动脉压力特别是肺血管阻力升高相关。除血流动力学效应外，内皮素还可导致细胞肥大增生，参与心脏重塑过程。目前，实验研究已证实内皮素受体拮抗剂bosentan可以对抗内皮素的血流动力学效应并减轻心肌肥厚，明显改善慢性心衰动物的近期及远期预后。临床应用内皮素受体拮抗剂初步显示可改善心衰患者的血流动力学效应。 细胞因子（cytokine，CK）是免疫原、丝裂原或其他 *** 剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落 *** 因子、趋化因子、生长因子等。众多细胞因子在体内通过旁分泌、自分泌或内分泌等方式发挥作用，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种生理特性，形成了十分复杂的细胞因子调节网络，参与人体多种重要的生理功能。 细胞免疫和体液免疫的过程 当外源性抗原进入机体后，很快（数分钟）就会被APC在感染或炎症局部摄取，然后在细胞内降解抗原并将其加工处理成抗原多肽片段，再以抗原肽-MHC复合物的形式表达于细胞表面（此过程称为抗原处理，约需3 h）。当APC与T细胞接触时，抗原肽-MHC复合物被T细胞的受体识别，从而将信息传递给T细胞，引起T细胞活化（此过程称为抗原递呈）。活化的T细胞通过分泌淋巴因子来进一步活化B细胞以产生抗体或活化其他T细胞以引起细胞免疫反应。可以说，抗原识别过程实质上是携带抗原肽-MHC复合物的APC“寻找”抗原特异性初始T细胞的过程；初始T多由树突状细胞活化，效应T细胞和记忆细胞识别多种APC递呈的抗原。 1 ......>> 问题五：细胞因子的分类及生物学活性有哪些 细胞因子的种类:*按其产生细胞的来源分为淋巴因子和单核因子两类。*按其功能分为白细胞介素、干扰素、集落 *** 因子、肿瘤坏死因子和生长因子五类。 生物学活性主要有:抗感染、抗肿瘤。如干扰素和肿瘤坏死因子。 望采纳 问题六：淋巴因子与细胞因子有什么区别 淋巴因子是细胞因子的一种，即大类跟小分类的区别，是免疫系统的重要部分。具体直接百科“淋巴因子”就知道了。

猫耳三大虚拟男团分别是：1. LASER：由顾子尧、林致、乔殊、夏予扬四位成员组成。2. MANTA：由柏闻、江恪、季少一、许向安、许向宁五位成员组成。3. Kaleido：由陆思恒、许向安、许向宁、张思睿、陈俊豪、林嘉树、傅泽六位成员组成。希望以上信息对您有帮助。

neighbor的中文释义：1、当词性为名词时，意为邻居；邻人；邻近的人；人；世人。2、当词性为形容词时，意为邻近的。3、当词性为动词时，意为友好；毗邻而居；邻接；位于…的附近；邻接。4、当用作人名时，可翻译为、（Neighbor）人名；（英）内伯。neighbor的读法：的英式发音为[u02c8neu026abu0259(r)]；美式发音为[u02c8neu026abu0259r]。相关词组：1、My neighbor上一篇；下一篇。2、Neighbor Discovery邻居发现；邻居发现协议；为邻域发现；分为邻域发现。3、nearest-neighbor近邻；这段邻；最近邻体法；近优性。4、Neighbor Relations左邻右舍；邻里之间关系好。5、Neighbor table邻居表；邻接表；邻近表。双语例句：1、And he said unto him,"Who is my neighbor?"同时他对他说：“我的邻居是谁？”2、My neighbor is a doctor.我的邻居是个医生。3、Do not defraud your neighbor or rob him.不可欺骗你的邻舍，也不可抢劫他。4、A neighbor,Julie Brown,saw it all happen.邻居朱莉·布朗目睹了这一切。5、I went to our next-door neighbor,Mr.Smith.我去找了我们的邻居史密斯先生。6、For instance,my neighbor is a master carpenter.例如，我的邻居是个木工大师。7、Is a nearby neighbor better than a faraway cousin?近邻比远亲好吗？8、I had a neighbor who worked as a documentary cameraman.我曾经有一个从事纪录片摄影师工作的邻居。9、Could you love your neighbor as yourself and deceive him?你会像爱自己那样爱邻居，而且还欺骗他吗？10、It was his neighbor,a young Divine,who lived on the same floor.他的邻居是一位年轻的牧师，与他住在同一层楼。

辅助性T细胞（ helper Tcell)，简称Th 细胞，能分泌多种 细胞因子。根据其分泌的细胞因子的不同可分为Th0、Th1、Th2 和Th3 四个亚型。百特纯Meretciel的ELISA试剂盒可测细胞因子。其中，Th1细胞参与 细胞免疫和迟发性超敏性炎症反应；Th2可辅助B细胞分化为抗体分泌细胞，参与体液 免疫应答。Th1细胞主要分泌白细胞介素2( interleukin 2,IL-2)，干扰素γ( interferon gamma,IFN-γ)，干扰素a(interferon alpha,IFN-a)，肿瘤坏死因子β( tumor necrosis factor beta,TNF-β)等， Th2细胞主要分泌白细胞介素-4（IL-4）,白细胞介素-5（IL-5）,白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）等。 Th2细胞分泌的细胞因子中IL-4能抑制Th1细胞活化、增殖,IL-10抑制Th0细胞向Th1细胞分化及细胞因子产生。因此IL-4和IL-10能抑制th1细胞因子产生而下调细胞免疫功能。

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1746年4月春光明媚的一天、巴黎的市民穿红戴绿、扶老携幼，从四面八方向"巴黎圣母院"教堂前的广场赶去，去观看一场神奇的科学表演。 下午3时，教堂正门台阶上临时搭起的观礼台上，坐满了达官显贵和皇室人员，四周彩旗飘扬，鼓乐齐鸣。表演开始了，为首的神父--巴黎实验物理学校教师诺雷走向观礼台，鞠躬致礼后，让700名修道士手拉手地围成一个直径约270米的半圆圈，他走到圆圈的中心，将一只银光闪闪的玻璃瓶高高举起，大声说："这瓶子就是这几个月来人们热衷于议论的莱顿瓶，现在我将使各位大人亲眼目睹它的神威。"接着，他令助手拿来摩擦起电机，手摇把柄，向莱顿瓶充电。然后，他让排头的修道士手捧玻璃瓶，再令排尾的修道上用手去握住莱顿瓶中央金属棒引出的导线，就在修道士握住这导线的瞬间，蓦然一声"噼啪"响，700多名修道上同时像触电一样，跳了起来，一个个吓得面如土色。这一触目惊心的场面，使所有的观众都惊得目瞪口呆：小小的玻璃瓶，哪来这么巨大的威力，真是不可思议！ "这威力并不是来自瓶子，而是这莱顿瓶里储藏的电。电将是未来世界的主宰。"诺雷教师讲起了莱顿瓶的发明故事来。

My DreamsWhen you are asked "what"s your dream?"Some one may reply with an answer that my dream"s to be a policeman,some one may give an answer that my dream is that I can enter into the space and land on the Mars.Maybe some others may reply like this,"my dream is being a middle school teacher.However,my dream is to be a nurse. As we all know,nurse is the angel,for nurses who have a kindly heart are quite popular with people.First of all,nurse can give you best love and care,so we can aslo say"nurse is the sister."Secondly,we can even say nurses as modle of purity,as the wight coat they dress.The third one but not the last is that nurses have characters of hero.Nearly every war of anti-disease,nurses are in front of the war. Therefore,nurses repressed me very much,so I want to be a nurse and do the holy work.