酵母双杂交技术和免疫工共沉淀技术在研究蛋白质相互作用方面的优缺点的比较

酵母双杂交法的原理：典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用， 启动它所调节的基因的转录。扩展资料：酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用， 具有高度敏感性。主要是由于：1、采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。2、信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。3、杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强， 后者又与启动子DNA结合， 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。4、通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。同时， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。在研究蛋白质的结构功能特点、作用方式过程中，有时还要通过突变、加抑制剂等手段破坏蛋白质间的相互作用。针对实际工作中的这种需要,Vidal等人发展了所谓的逆双杂交系统（reverse two-hybrid system）。这项技术的关键是报道基因URA3的引入。URA3基因在这里起到了反选择的作用，它编码的酶是尿嘧啶合成的关键酶。参考资料来源：百度百科——酵母双杂交

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开，仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达，其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。例如GAL4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequence)， 而GAL4-ad没有。因此，在GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆来自SV40的T-抗原的一段序列作为核定位的序列。最常用的是酵母细胞， 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点:〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的DNA－结合结构域(如GAL4-bd， LexA-bd)； 另一个基因融合到转录激活结构域(如GAL4-ad， VP16)。激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中，蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达(如lacZ)，从而可分析蛋白间的结合作用。

酵母单杂交系统和双杂交系统是两种常用的蛋白质相互作用检测方法，它们的主要区别在于检测的原理和应用范围不同。酵母单杂交系统Y1H（Yeast One Hybrid System）用于发现DNA序列与转录因子结合的技术。该系统通过将感兴趣的DNA序列插入到启动子上游的启动子活化区域AD（Activation Domain）所编码的报告基因前，使报告基因在转录因子的作用下表达，从而实现对转录因子与DNA结合的检测。因此，酵母单杂交系统主要用于发现转录因子与DNA结合的相互作用。双杂交系统Y2H（Yeast Two Hybrid System）是用于发现蛋白质相互作用的技术。利用了生物体细胞内天然存在的转录激活因子与其相应的DNA结合区域之间的非共价作用来实现识别蛋白质相互作用的目的。该系统通过将感兴趣的蛋白质分别与DNA绑定域（DNA-BD）和活化域AD融合，使其在约束条件下相互结合形成蛋白质复合物，并驱动酵母细胞中的报告基因的表达。因此，双杂交系统主要用于发现蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系。酵母单杂交系统和双杂交系统的原理和应用范围存在明显的差异，需要根据具体的研究课题选择合适的技术来完成实验。

最近在做龙须菜高温胁迫表达cDNA文库的构建，选择的是CaM做诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM，利用SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，搜集了部分资料找到了一份比较全的酵母双杂交实验操作步骤。一.酵母双杂交系统的原理酵母的转录激活因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成，N端有一个由147个氨基酸组成的DNA结合域(DNA binding domain,BD)，C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域(transcription activation domain,AD)。BD可以和上游激活序列(upstream activating sequence，UAS)结合，而AD则能激活UAS下游的基因进行转录。但是，单独的BD或AD不能激活基因转录，它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。酵母双杂交系统主要利用酵母的GAL4的这个特性通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来研究活细胞内蛋白质的相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因敏感地检测到。酵母双杂交技术不仅应用于哺乳动物蛋白质之间的相互作用研究，还可以用来研究高等植物蛋白质之间的相互作用。……详细资料请参考：on http://www.bio1000.com/experiment/protein/353667.html

区别如下：酵母单杂交技术是1993年由酵母双杂交技术发展而来的，其基本原理为：真核 生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由一个 DNA 特异性结合功 能域和一个或多个其他调控蛋白相互作用

酵母双杂交中，在双缺板上生长而在四缺板上不生长的原因是：1. 转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因，因此在两缺板子上能生长。2. 如果两个蛋白能互作，报告基因被激活，所以能在三缺或四缺板子上生长。3. 如果不能互作，则不会在四缺板上生长。以上是关于酵母双杂交中在双缺板上长而在四缺板上不长的原因，希望对您有所帮助。

酵母双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。如果诱饵蛋白和靶蛋白能够相互作用，那么GAL4 DNA 结合结构域和GAL4激活结构域就会相互作用，从而激活lacZ报道基因的表达。所以我们可以通过转化的酵母的表型来确定诱饵蛋白和靶蛋白是否有相互作用。可以在生物帮（www.bio1000.com）查生物方面技术文档。

作用相同，原理不同。1、相同点：酵母双杂交技术和荧光共振能量转移技术都能够用于分析蛋白质分子间是否相互作用。2、不同点：酵母双杂交技术原理是酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。荧光共振能量转移技术的原理是采用物理方法去检测分子间的相互作用。

GST亲和层析和GST Pull-down方法此方法的基本原理是：利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。在病毒受体研究中，融合蛋白通常设计为病毒吸附蛋白（VAP）。这方面成功的例子有HBV[28]。具体做法如下：将GST-融合探针蛋白（VAP）和GTH-Sepharose制成亲和层析柱，然后待分析的蛋白质混合液流经亲和层析柱，梯度洗脱，分离、收集各蛋白组分，这称为GST亲和柱层析（GST affinity column chromatography）。如果一开始待检蛋白就和GST- 融合探针蛋白与GTH-Sepharose一起共同孵育，经离心收集洗脱复合物和洗涤后，再加入过量GTH获得相互作用蛋白的复合物，那么这种方法则称为GST pull down。GST亲和层析及相应的GST Pull-down方法的优点是敏感，对混合物中的所有蛋白均“一视同仁”，也可用于受体功能的鉴定。缺点是GST有可能影响融合蛋白的空间结构，另外，蛋白质浓度对实验也有一定影响。3.6 酵母双杂交技术许多真核生物的转录激活因子通常具有两个可独立存在的结构域，即DNA结合域（BD）与转录激活域（AD）。这两个结构域各具功能，互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域。不同来源的激活因子的BD区与AD结合后则可特异地激活被BD结合的基因表达。基于这个原理，人们将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用就会使AD与BD形成完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用.酵母双杂交系统由三个部分组成：①与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白（bait）；②AD融合的蛋白表达载体，其表达的蛋白称靶蛋白（prey）；③带有一个或多个报告基因的宿主菌株。常用的报告基因有HIS3、URA3、LacZ和ADE2等。而菌株则具有相应的营养缺陷型。双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营养标记基因，有利于杂交质粒的鉴定与分离。根据目前通用系统中BD来源主要分为GAL4系统和LexA系统。后者因BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。近年来，开始出现了应用酵母双杂交技术进行病毒受体研究的成功报告，如麻疹病毒的绒猴细胞受体[30]。李凌云等构建了表达“猎物”（prey）蛋白的质粒和表达病毒VAP“诱饵”（bait）蛋白的质粒，然后共转染同一酵母细胞，利用已建立的易感细胞cDNA文库，筛到了阳性克隆。酵母双杂交技术的优点是灵敏度高，特异性较好，缺点是容易出现假阳性和假阴性，而且对蛋白质在细胞中的定位有要求。为了克服上述缺点，人们进一步优化出所谓“双筛选系统”，即蛋白质相互作用必须同时激活两个以上报道基因，具有两种以上的相应表型才算是真的阳性结果。另外，人们也改造了酵母双杂交系统所用的载体系统，将在细胞浆内发生的蛋白质相互作用转移到细胞膜上进行，以此来更容易地筛选膜蛋白受体，如Ras recruitment system（RRS）。

酵母双杂交系统的建立主要是为了研究蛋白质之间的相互作用。以下是关于酵母双杂交系统中二缺、三缺、四缺的作用：1. 二缺系统（二元缺失系统）主要用于检测蛋白质的相互作用。2. 三缺系统（三元缺失系统）通常用于研究基因重组的机理。3. 四缺系统（四元缺失系统）常用于研究基因邻接检测以及构建不同基因之间在空间上的位置关系。上述信息仅供参考，具体实验设计和方法还需要根据具体实验情况进行调整和优化。同时，实验结果也可能受到实验条件、实验操作等因素的影响，因此需要谨慎对待实验结果，并采用多种方法进行验证。

酵母双杂交法的原理: 典型的真核生物转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域:

http://www.wjgnet.com/1009-3079/11/450.asp

与题目不符，但希望能作为参考 一、实验原理酵母菌的生活史属于双单性类型，它们的单倍体细胞和二倍体细胞一般都能进行无限制的分裂。以单倍体细胞为主的酵母菌称为单倍体酵母，例如粟酒裂殖酵母（Schizosaccharamycespombe）。以二倍体细胞为主的酵母菌称为二倍体酵母，如啤酒酵母（又称面包酵母，Saccharomycescerevisiae）。这两种酵母常用作遗传学研究的材料，而啤酒酵母在酿酒工业和食品工业中又有很大的应用价值。本实验用异宗配合型的啤酒酵母的单倍体菌株进行杂交实验。任何一株酵母菌，如果使二倍体的营养细胞处于形成孢子的条件下，都会发生减数分裂，生成四分体和子囊。每个子囊孢子具有四分子核，正常情况下子囊中有4个子囊孢子，其中有2个a和2个α，a和α表示两种相对的接合型。具有这两种接合型的子囊孢子萌发生长成单倍体的菌株，不同接合型的单倍体菌株细胞接合生成二倍体菌株。具有这样生活史的酵母菌称为异宗配合型酵母。异宗配合型啤酒醇母的生活史见图11－1。单倍体菌株分属a和α两种接合型，是受一对等位基因a和α控制的，这对等位基因的座位在第三连锁群靠近着丝粒的地方。在光学显微镜下观察酵母的染色体是十分困难的，但借助于电子显微镜，对酵母菌的细胞学已了解得较多了。现已知啤酒酵母具有17个连锁群（n=17）。两个属于不同接合型的营养缺陷型的酵母单倍体菌株，在基本培养基上都不能形成菌落。当它们杂交形成二倍体杂种细胞，就能在基本培养基上生长。二倍体杂种细胞在形成子囊孢子过程中，发生染色体重组，而使产生的子囊孢子出现重组性状。二、实验目的通过酵母菌杂交实验了解异宗配合型啤酒酵母的生活史和基因自由组合定律，掌握酵母菌杂交的基本方法。三、实验材料1.啤酒酵母单倍体腺嘌呤缺陷型（ade-），接合型为a；2.啤酒酵母单倍体组氨酸缺陷型（Hisl-），接合型为α。四、实验器具和药品1.用具：试管，离心管，离心机，吸管，培养皿，三角烧瓶，涂布棒，石英砂。2.药品：生理盐水（0.85克NaCl溶于100毫升蒸馏水中，15磅压力下消毒15分钟），纤维素酶或蜗牛酶。3.培养基：（1）完全液体培养基：蛋白胨2克，酵母浸母汁1克，葡萄糖2克，水100毫升，pH6.0，8磅压力下灭菌30分钟。（2）完全固体培养基：在完全液体培养基中加2％琼脂。（3）基本液体培养基：葡萄糖10克，（NH4）2SO41克，K2HPO40.125克，KH2PO40.875克，KI*母液1毫升，MgSO4·7H2O0.5克，CaCl2·2H2O0.1克，NaCl0.1克，微量元素母液**1毫升，维生素母液***1毫升，水1000毫升，pH5.3，8磅压力下灭菌30分钟。*KI母液：10毫克KI于100毫升水中。**微量元素母液：H3PO41毫克，ZnSO4·7H2O7毫克，CuSO4·5H2O1毫克，CoCl2·6H2O5毫克，水100毫升。***维生素母液：烟碱酸40毫克，维生素B140毫克，肌醇200毫克，核黄素20毫克，对-氨基苯甲酸20毫克，吡哆醇40毫克，泛酸40毫克，生物素0.2毫克，水100毫升。（4）基本固体培养基：在基本液体培养基中加2％琼脂。（5）产孢子培养基：CH3COONa8.2克，KCl1.86克，吡哆酵母液*1毫升，泛酸母液**1毫升，生物素母液***1毫升，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。*吡哆醇母液：20毫克吡哆醇/100毫升水。**泛酸母液：20毫克泛酸/100毫升。***生物素母液：2毫克生物素/100毫升。（6）补充培养基：a.基本固体培养基100毫升加组氨酸3.5毫克。b.基本固体培养基100毫升加腺嘌呤3毫克。五、实验步骤1.取盛有完全固体培养基斜面的试管4支。把ade-和Hisl-两菌种各接种在二支斜面上。30℃温箱中培养24小时。2.用5毫升生理盐水洗下一支ade-斜面上的菌，再倒入另一支ade-试管中，洗下的菌最后倒入无菌离心管中。另取5毫升生理盐水洗下Hisl-二支试管斜面的菌，倒入无菌离心管中。这样制成的菌液，浓度约108/毫升。3.两亲本菌液各吸0.5毫升，放入5毫升完全液体培养基中，30℃静止培养2小时。4.离心（3000转/分，3分钟），30℃静止培养半小时。5.倒去上清液，打匀管底菌块，再加入6毫升新鲜完全液体培养基，30℃培养过夜。6.离心，倒去上清液。再加6毫升新鲜完全液体培养基，洗一次，离心，倒去上清液。7.将离心管中的沉淀菌接种在产孢子培养基斜面上，30℃培养2—3天。在显微镜下观察杂交后形成的子囊，可见其中有4个子囊孢子。8.测定子囊孢子的表型推断其基因型：（l）在长有子囊的斜面上加基本培养液2毫升，用接种环将子囊刮下，倒入无菌离心管中。（2）在55°—60℃的恒温水浴中加热15分钟，杀死酵母菌的营养体，即单倍体细胞。离心，倒去上清液，加生理盐水到原体积，形成子囊悬液。（3）把孢子悬液倒入消毒过的盛有石英砂的三角烧瓶中，振荡5分钟，使子囊孢子散出，成为子囊孢子悬液。（4）取打散的子囊孢子悬液0.1毫升涂布在完全培养基培养皿上，30℃培养48小时。（5）影印培养：以上面的培养皿为原始培养皿，依次影印：a.基本培养基；b.腺嘌呤补充培养基；c.组氨酸补充培养基；d.完全培养基。30℃培养48小时。（6）生长谱鉴定：a.从原始培养皿上挑取各个已经初步鉴定的菌落，接种在完全培养基斜面上。同时接种在有5ml液体完全培养基的离心管中，30℃培养48小时。b.离心（3000转/分，3分钟。），倒去上清液，打匀沉淀，然后离心洗涤三次，最后加生理盐水至原体积。C.吸取菌液0.1毫升，移至灭过菌的空培养皿中。然后倒入融化后冷至40°—50℃的固体基本培养基，摇匀，待凝。各做1皿。d.在每一培养皿的皿底划分四格，两格放少量组氨酸结晶粉末，另两格放少量腺嘌呤的结晶粉末。然后放到30℃温箱培养48小时。e.观察生长情况，营养缺陷型菌株会在所需物质的周围长出来。如需要两种物质，就只能在两种物质都扩散到的地方生长。操作步骤见图11-2。9.实验步骤说明：（1）步骤3—6，是为了用营养丰富的培养基培养好的新鲜细胞，并使不同接合型的细胞充分接触，形成合子，为产生孢子创造条件。（2）步骤7中，由于酵母在产孢子培养基上不会增殖，所以要求接种足够多的细胞，使杂交形成的子囊不至于过少。（3）步骤8（3），要从子囊中取得子囊孢子，也可用蜗牛酶充分处理子囊后，用超声波处理使子囊孢子充分分散。蜗牛酶处理温度为30°—37℃，15—30分钟。没有蜗牛酶，用石英砂振荡，也能使子囊壳破碎，散出子囊孢子。（4）酵母菌是单细胞真菌，不形成菌丝，所以在步骤8（5）中可采用影印方法。六、实验结果1.影印结果：能生长用“＋”表示，不能生长用“—”表示，并计算菌落数。2.生长谱鉴定：3.影印与生长谱鉴定结果相比较，看结论是否一致。4.实验结果说明：本实验用的啤酒酵母营养缺陷型单倍体菌株，有关的ade和Hisl基因属于不同的连锁群，是两对基因的自由组合。因此在实验结果中，单倍体基因型的比例应为＋＋∶ade-∶Hisl-∶ade-Hisl-＝1∶1∶1∶1。单倍体菌株的表型比也应为1∶1∶1∶1。表型分离比直接反映了基因型的分离比。

原理 酵母单杂交（yeast one hybrid）是在酵母双杂交的基础上发展起来的技术，主要用于研究蛋白质和DNA元件之间的相互作用。 真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因子通常由一个DNA特异性结合功能域和一个或多个其他调控蛋白相互作用的激活功能域组成，即DNA结合结构域（DNA-bindingdomain BD）和转录激活结构域（activationdomain，AD）。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羟基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点（UGS），而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFⅡD相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。据此，我们可以将GAL4的DNA结合结构域置换为转录因子编码基因，将顺形作用元件与基本启动子（minimal promoter, Pmin）和报告基因连接。只要转录因子能与目的DNA元件相互作用，即可通过转录激活结构域激活RNA聚合酶，启动子下游报告基因的转录。

不是酵母双杂交技术的基本原理1989年,Song和Field建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白间相互作用的遗传系统。

我觉得首先从他的来源、组成、功能和特性上考虑，比艾滋病TAT蛋白和酵母双杂交GAL4等。

PCR分子克隆核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳测序DNA,RNA 提取转化外源DNA体外转录、逆转录cDNA文库构建原位杂交、酵母双杂交、差减杂交、扣除杂交蓝白斑筛选、抗生素筛选 基因工程技术大部分都是依据分子生物学原理设计出来的.

酵母单杂交pabai可以不用线性化载体酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来，通过对报告基因的表型检测，分析DNA与蛋白之间的相互作用，以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性，现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转录因子。酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理，克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法。其理论基础是：许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成，因此可构建各种基因与AD的融合表达载体，在酵母中表达为融合蛋白时，根据报道基因的表达情况，便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。理论上，在单杂交检测中，任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白。

通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。由于DNA一般都以双链形式存在，因此在进行分子杂交时，应先将双链DNA分子解聚成为单链，这一过程称为变性，一般通过加热或提高pH值来实现。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。用分子杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针，再与另一种核酸单链进行分子杂交。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的，探针与靶序列在溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体。该法很慢、费力且不精确，但它开拓了核酸杂交技术的研究。Bolton等1962年设计了第一种简单的固相杂交方法，称为DNA-琼脂技术。变性DNA固定在琼脂中，DNA不能复性，但能与其它互补核酸序列杂交。典型的反应是用放射性标记的短DAN或RNA分子与胶中DNA杂交过夜，然后将胶置于柱中进行漂洗，去除游离探针，在高温、低盐条件下将结合的探针洗脱，洗脱液的放射性与结合的探针量呈正比。该法尤其适用于过量探针的饱和杂交实验。60年代末，Britten等设计了另一种分析细胞基因组的方法。该法是研究液相中DNA的复性以比较不同来源核酸的复杂度，典型的方法是：从不同生物体（细菌、酵母、鱼和哺乳动物等）内分离DNA，用水压器剪切成长约450核苷酸（nt）的片段。剪切的DNA液（含0.12mol/L磷酸盐缓冲液或0.18mol/L Na+），经煮沸使dsDNA热变性成 ssDNA。然后冷至约60℃，在此温度孵育过程中，测定溶液一定时间内的UV260nm的吸光度（减色效应）来监测互补链的复性程度。通常该实验可比较不同来源生物DNA的复性速率，并可建立序列复杂度与动力学复杂度间的关系。60年代中期Nygaard 等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素（NC）膜上的DNA序列奠定了基础。如Brown等应用这一技术评估了爪蟾rRNA基因的拷贝数。RNA在代谢过程中被3H尿嘧啶标记，并在过量的情况下与膜上固定的基因组DNA杂交，继而用RNase处理，消化非特异性结合的RNA。漂洗后计数以测定杂交探针的量。通过计算与已知量DNA杂交的RNA量即可评估rRNA基因数。由于当时缺乏特异探针，这种方法不能用于研究其它特异基因的表达，这些早期过量探针膜杂交试验实际上是现代膜杂交实验的基础。进入70年代早期，许多重要的发展促进了核酸杂交技术的进展。例如，对特异基因转录产物的分析和对动力学杂交实验又有兴趣。固相化的Poly U –Sepharose和寡（dT）-纤维素使人们能从总RNA中分离Poly A+ RNA。用mRNA的经纯化技术可从网织红细胞总RNA中制备α-和β-珠蛋白mRNA混合物。这些珠蛋白mRNA首次被用于合成特异的探针以分析珠蛋白基因的表达。由于制备cDNA探针很繁琐，所获得cDNA的长度和纯度也不稳定。所以寻求新的探针来源是使分子杂交技术进一步推广的基础。70年代末期到80年代早期，分子生物学技术有了突破性进展，限制性内切酶的发展和应用使分子克隆成为可能。各种载体系统的诞生，尤其是质粒和噬菌体DAN载体的构建，使特异性DNA探针的来源变得十分丰富。人们可以从基因组DNA文库和cDNA文库中获得特定基因克隆，只需培养细菌，便可提取大量的探针DNA。迄今为止，已克隆和定性了许多特异DNA探针。由于固相化学技术和核酸自动合成仪的诞生，现在可常规制备18～100个碱基的寡核苷酸探针。应用限制酶和Southern印迹技术，用数微克DNA就可分析特异基因。特异DNA或RNA序列的量和大小均可用Southern印迹和Northern印迹来测定 ，与以前的技术相比，大大提高了杂交水平和可信度。尽管取得了上述重大进展，但分子杂交技术在临床实用中仍存在不少问题，必须提高检测单拷贝基因的敏感性，用非放射性物质代替放射性同位素标记探针以及简化实验操作和缩短杂交时间，这样，就需要在以下三方面着手研究：第一，完善非放射性标记探针；第二，靶序列和探针的扩增以及信号的放大；第三，发展简单的杂交方式，只有这样，才能使DNA探针实验做到简便、快速、低廉和安全。

高考一轮复习必修二基础知识点背诵版1、遗传的基本规律(1)基因的分离定律 ①豌豆做材料的优点：（1）豌豆能够严格进行自花授粉，而且是闭花授粉，自然条件下能保持纯种。（2）品种之间具有易区分的性状。②人工杂交试验过程：去雄（留下雌蕊）→套袋（防干扰）→人工传粉③一对相对性状的遗传现象：具有一对相对性状的纯合亲本杂交，后代表现为一种表现型，F1代自交，F2代中出现性状分离，分离比为3：1。 ④基因分离定律的实质：在杂合子的细胞中，位于一对同源染色体上的等位基因，具有一定的独立性，生物体在进行减数分裂时，等位基因会随同源染色体的分开而分离，分别进入到两个配子中，独立地随配子遗传给后代。(2)基因的自由组合定律①两对等位基因控制的两对相对性状的遗传现象：具有两对相对性状的纯合子亲本杂交后，产生的F1自交，后代出现四种表现型，比例为9：3：3：1。四种表现型中各有一种纯合子，分别在子二代占1/16，共占4/16；双显性个体比例占9/16；双隐性个体比例占1/16；单杂合子占2/16×4=8/16；双杂合子占4/16；亲本类型比例各占9/16、1/16；重组类型比例各占3/16、3/16②基因的自由组合定律的实质：位于非同源染色体上的非等位基因的分离或组合是互不干扰的。在进行减数分裂形成配子的过程中，同源染色体上的等位基因彼此分离，同时非同源染色体上的非等位基因自由组合。③运用基因的自由组合定律的原理培育新品种的方法：优良性状分别在不同的品种中，先进行杂交，从中选择出符合需要的，再进行连续自交即可获得纯合的优良品种。记忆点：1．基因分离定律：具有一对相对性状的两个生物纯本杂交时，子一代只表现出显性性状；子二代出现了性状分离现象，并且显性性状与隐性性状的数量比接近于3：1。2．基因分离定律的实质是：在杂合子的细胞中，位于一对同源染色体，具有一定的独立性，生物体在进行减数分裂形成配子时，等位基因会随着的分开而分离，分别进入到两个配子中，独立地随配子遗传给后代。3．基因型是性状表现的内存因素，而表现型则是基因型的表现形式。表现型=基因型+环境条件。4．基因自由组合定律的实质是：位于非同源染色体上的非等位基因的分离或组合是互不干扰的。在进行减数分裂形成配子的过程中，同源染色体上的等位基因彼此分离，同时非同源染色体上的非等位基因自由组合。在基因的自由组合定律的范围内，有n对等位基因的个体产生的配子最多可能有2n种。2、 细胞增殖(1) 细胞周期：指连续分裂的细胞，从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时为止。(2)有丝分裂：　　分裂间期的最大特点：完成DNA分子的复制和有关蛋白质的合成 分裂期染色体的主要变化为：前期出现；中期清晰、排列；后期分裂；末期消失。特别注意后期由于着丝点分裂，染色体数目暂时加倍。动植物细胞有丝分裂的差异：a.前期纺锤体形成方式不同；b.末期细胞质分裂方式不同。(3)减数分裂： 　 对象：有性生殖的生物　　时期：原始生殖细胞形成成熟的生殖细胞　　特点：染色体只复制一次，细胞连续分裂两次　　结果：新产生的生殖细胞中染色体数比原始生殖细胞减少一半。　　精子和卵细胞形成过程中染色体的主要变化：减数第一次分裂间期染色体复制，前期同源染色体联会形成四分体（非姐妹染色体单体之间常出现交叉互换），中期同源染色体排列在赤道板上，后期同源染色体分离同时非同源染色体自由组合；减数第二次分裂前期染色体散乱地分布于细胞中，中期染色体的着丝点排列在赤道板上，后期染色体的着丝点分裂染色体单体分离。　 有丝分裂和减数分裂的图形的鉴别：（检索表以二倍体生物为例）　 1.1细胞中没有同源染色体……减数第二次分裂　 1.2细胞中有同源染色体　　 2.1有同源染色体联会、形成四分体、排列于赤道板或相互分离……减数第一次分裂2.2同源染色体没有上述特殊行为……有丝分裂　记忆点：1.减数分裂的结果是，新产生的生殖细胞中的染色体数目比原始的生殖细胞的减少了一半。2.减数分裂过程中联会的同源染色体彼此分开，说明染色体具一定的独立性；同源的两个染色体移向哪一极是随机的，则不同对的染色体（非同源染色体）间可进行自由组合。 3.减数分裂过程中染色体数目的减半发生在减数第一次分裂中。4．一个精原细胞经过减数分裂，形成四个精细胞，精细胞再经过复杂的变化形成精子。5． 一个卵原细胞经过减数分裂，只形成一个卵细胞。 6． 对于进行有性生殖的生物来说，减数分裂和受精作用对于维持每种生物前后代体细胞中染色体数目的恒定，对于生物的遗传和变异，都是十分重要的3、性别决定与伴性遗传(1)XY型的性别决定方式：雌性体内具有一对同型的性染色体（XX），雄性体内具有一对异型的性染色体（XY）。减数分裂形成精子时，产生了含有X染色体的精子和含有Y染色体的精子。雌性只产生了一种含X染色体的卵细胞。受精作用发生时，X精子和Y精子与卵细胞结合的机会均等，所以后代中出生雄性和雌性的机会均等，比例为1：1。(2)伴X隐性遗传的特点（如色盲、血友病、果蝇眼色、女娄菜叶形等遗传）①男性患者多于女性患者 ②属于交叉遗传（隔代遗传）即外公→女儿→外孙③女性患者，其父亲和儿子都是患者；男性患病，其母、女至少为携带者（3）X染色体上隐性遗传（如抗VD佝偻病、钟摆型眼球震颤） ①女性患者多于男性患者。②具有世代连续现象。 ③男性患者，其母亲和女儿一定是患者。（4）Y染色体上遗传（如外耳道多毛症） 致病基因为父传子、子传孙、具有世代连续性，也称限雄遗传。（5）伴性遗传与基因的分离定律之间的关系：伴性遗传的基因在性染色体上，性染色体也是一对同源染色体，伴性遗传从本质上说符合基因的分离定律。记忆点：1．生物体细胞中的染色体可以分为两类：常染色体和性染色体。生物的性别决定方式主要有两种：一种是XY型，另一种是ZW型。2．伴性遗传的特点：（1）伴X染色体隐性遗传的特点： 男性患者多于女性患者；具有隔代遗传现象（由于致病基因在X染色体上，一般是男性通过女儿传给外孙）；女性患者的父亲和儿子一定是患者，反之，男性患者一定是其母亲传给致病基因。 （2）伴X染色体显性遗传的特点：女性患者多于男性患者，大多具有世代连续性即代代都有患者，男性患者的母亲和女儿一定是患者。 （3）伴Y染色体遗传的特点： 患者全部为男性；致病基因父传子，子传孙（限雄遗传）。4、基因的本质(1)DNA是主要的遗传物质 ① 生物的遗传物质：在整个生物界中绝大多数生物是以DNA作为遗传物质的。有DNA的生物（细胞结构的生物和DNA病毒），DNA就是遗传物质；只有少数病毒（如艾滋病毒、SARS病毒、禽流感病毒等）没有DNA，只有RNA，RNA才是遗传物质。 ②证明DNA是遗传物质的实验设计思想：设法把DNA和蛋白质分开，单独地、直接地去观察DNA的作用。(2)DNA分子的结构和复制 ①DNA分子的结构 a.基本组成单位：脱氧核苷酸（由磷酸、脱氧核糖和碱基组成）。 b.脱氧核苷酸长链：由脱氧核苷酸按一定的顺序聚合而成c.平面结构： d.空间结构：规则的双螺旋结构。 e.结构特点：多样性、特异性和稳定性。②DNA的复制a.时间：有丝分裂间期或减数第一次分裂间期 b .特点：边解旋边复制；半保留复制。 c.条件：模板（DNA分子的两条链）、原料（四种游离的脱氧核苷酸）、酶（解旋酶，DNA聚合酶，DNA连接酶等），能量（ATP） d.结果：通过复制产生了与模板DNA一样的DNA分子。 e.意义：通过复制将遗传信息传递给后代，保持了遗传信息的连续性。 (3)基因的结构及表达 ①基因的概念：基因是具有遗传效应的DNA分子片段，基因在染色体上呈线性排列。 ②基因控制蛋白质合成的过程： 转录：以DNA的一条链为模板通过碱基互补配对原则形成信使RNA的过程。翻译：在核糖体中以信使RNA为模板，以转运RNA为运载工具合成具有一定氨基酸排列顺序的蛋白质分子记忆点：1．DNA是使R型细菌产生稳定的遗传变化的物质，而噬菌体的各种性状也是通过DNA传递给后代的，这两个实验证明了DNA 是遗传物质。2．一切生物的遗传物质都是核酸。细胞内既含DNA又含RNA和只含DNA的生物遗传物质是DNA，少数病毒的遗传物质是RNA。由于绝大多数的生物的遗传物质是DNA，所以DNA是主要的遗传物质。 3．碱基对排列顺序的千变万化，构成了DNA分子的多样性，而碱基对的特定的排列顺序，又构成了每一个DNA分子的特异性。这从分子水平说明了生物体具有多样性和特异性的原因。 4．遗传信息的传递是通过DNA分子的复制来完成的。基因的表达是通过DNA控制蛋白质的合成来实现的。5．DNA分子独特的双螺旋结构为复制提供了精确的模板；通过碱基互补配对，保证了复制能够准确地进行。在两条互补链中 的比例互为倒数关系。在整个DNA分子中，嘌呤碱基之和=嘧啶碱基之和。整个DNA分子中， 与分子内每一条链上的该比例相同。6．子代与亲代在性状上相似，是由于子代获得了亲代复制的一份DNA的缘故。 7．基因是有遗传效应的DNA片段，基因在染色体上呈直线排列，染色体是基因的载体。 8．由于不同基因的脱氧核苷酸的排列顺序（碱基顺序）不同，因此，不同的基因含有不同的遗传信息。（即：基因的脱氧核苷酸的排列顺序就代表遗传信息）。9．DNA分子的脱氧核苷酸的排列顺序决定了信使RNA中核糖核苷酸的排列顺序，信使RNA中核糖核苷酸的排列顺序又决定了氨基酸的排列顺序，氨基酸的排列顺序最终决定了蛋白质的结构和功能的特异性，从而使生物体表现出各种遗传特性。基因控制蛋白质的合成时：基因的碱基数：mRNA上的碱基数：氨基酸数=6：3：1。氨基酸的密码子是信使RNA上三个相邻的碱基，不是转运RNA上的碱基。转录和翻译过程中严格遵循碱基互补配对原则。注意：配对时，在RNA上A对应的是U。10．生物的一切遗传性状都是受基因控制的。一些基因是通过控制酶的合成来控制代谢过程；基因控制性状的另一种情况，是通过控制蛋白质分子的结构来直接影响性状。5、生物的变异(1 )基因突变 ①基因突变的概念：由于DNA分子中发生碱基对的增添、缺失或改变，而引起的基因结构的改变。 ②基因突变的特点： a.基因突变在生物界中普遍存在 b.基因突变是随机发生的 c.基因突变的频率是很低的 d.大多数基因突变对生物体是有害的 e.基因突变是不定向的 ③基因突变的意义：生物变异的根本来源，为生物进化提供了最初的原材料。 ④基因突变的类型：自然突变、诱发突变 ⑤人工诱变在育种中的应用：通过人工诱变可以提高变异的频率，可以大幅度地改良生物的性状。(2) 染色体变异 ①染色体结构的变异：缺失、增添、倒位、易位。如：猫叫综合征。②染色体数目的变异：包括细胞内的个别染色体增加或减少和以染色体组的形式成倍地增加减少。③染色体组特点：a、一个染色体组中不含同源染色体 b、一个染色体组中所含的染色体形态、大小和功能各不相同 c、一个染色体组中含有控制生物性状的一整套基因 ④二倍体或多倍体：由受精卵发育成的个体，体细胞中含几个染色体组就是几倍体；由未受精的生殖细胞（精子或卵细胞）发育成的个体均为单倍体（可能有1个或多个染色体组）。⑤人工诱导多倍体的方法：用秋水仙素处理萌发的种子和幼苗。原理：当秋水仙素作用于正在分裂的细胞时，能够抑制细胞分裂前期纺锤体形成，导致染色体不分离，从而引起细胞内染色体数目加倍。⑥多倍体植株特征：茎杆粗壮，叶片、果实和种子都比较大，糖类和蛋白质等营养物质的含量都有所增加。⑦单倍体植株特征：植株长得弱小而且高度不育。单倍体植株获得方法：花药离休培养。单倍体育种的意义：明显缩短育种年限（只需二年）。记忆点：1．染色体组是细胞中的一组非同源染色体，它们在形态和功能上各不相同，但是携带者控制一种生物生长发育、遗传和变异的全部信息，这样的一组染色体叫染色体组。2．可遗传变异是遗传物质发生了改变，包括基因突变、基因重组和染色体变异。基因突变最大的特点是产生新的基因。它是染色体的某个位点上的基因的改变。基因突变既普遍存在，又是随机发生的，且突变率低，大多对生物体有害，突变不定向。基因突变是生物变异的根本来源，为生物进化提供了最初的原材料。基因重组是生物体原有基因的重新组合，并没产生新基因，只是通过杂交等使本不在同一个体中的基因重组合进入一个个体。通过有性生殖过程实现的基因重组，为生物变异提供了极其丰富的来源。这是形成生物多样性的重要原因之一，对于生物进化具有十分重要的意义。上述二种变异用显微镜是看不到的，而染色体变异就是染色体的结构和数目发生改变，显微镜可以明显看到。这是与前二者的最重要差别。其变化涉及到染色体的改变。如结构改变，个别数目及整倍改变，其中整倍改变在实际生活中具有重要意义，从而引伸出一系列概念和类型，如：染色体组、二倍体、多倍体、单倍体及多倍体育种等。 6、 人类遗传病与优生（1）优生的措施：禁止近亲结婚、进行遗传咨询、提倡适龄生育、产前诊断。（2）禁止近亲结婚的原因：近亲结婚的夫妇从共同祖先那里继承同一种致病基因的机会大大增加，所生子女患隐性遗传病的概率大大增加。记忆点：1. 多指、并指、软骨发育不全是单基因的常染色体显性遗传病；抗维生素D佝偻病是单基因的X染色体显性遗传病；白化病、苯丙酮尿症、先天性聋哑是单基因的常染色体隐性遗传病；进行性肌营养不良、红绿色盲、血友病是单基因的X染色体隐性遗传病；唇裂、无脑儿、原发性高血压、青少年型糖尿病等属于对基因遗传病；另外染色体遗传病中常染色体病有21三体综合症、猫叫综合症等；性染色体病有性腺发育不良等。7、细胞质遗传①细胞质遗传的特点：母系遗传（原因：受精卵中的细胞质几乎全部来自母细胞）；后代没有一定的分离比（原因：生殖细胞在减数分裂时，细胞质中的遗传物质随机地、不均等地分配到子细胞中去）。②细胞质遗传的物质基础：在细胞质内存在着DNA分子，这些DNA分子主要位于线粒体和叶绿体中，可以控制一些性状。记忆点：1.卵细胞中含有大量的细胞质，而精子中只含有极少量的细胞质，这就是说受精卵中的细胞质几乎全部来自卵细胞，这样，受细胞质内遗传物质控制的性状实际上是由卵细胞传给子代，因此子代总表现出母本的性状。2．细胞质遗传的主要特点是：母系遗传；后代不出现一定的分离比。细胞质遗传特点形成的原因：受精卵中的细胞质几乎全部来自卵细胞；减数分裂时，细胞质中的遗传物质随机地、不均等地分配到卵细胞中。细胞质遗传的物质基础是：叶绿体、线粒体等细胞质结构中的DNA。3．细胞核遗传和细胞质遗传各自都有相对的独立性。这是因为，尽管在细胞质中找不到染色体一样的结构，但质基因和核基因一样，可以自我复制，可以通过转录和翻译控制蛋白质的合成，也就是说，都具有稳定性、连续性、变异性和独立性。但细胞核遗传和细胞质遗传又相互影响，很多情况是核质互作的结果。8、基因工程简介(1)基因工程的概念标准概念：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组细胞在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。通俗概念：按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 (2)基因操作的工具 A．基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶）。 ①分布：主要在微生物中。 ②作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 ③结果：产生黏性未端（碱基互补配对）。 B．基因的针线——DNA连接酶。 ①连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。 ②结果：两个相同的黏性未端的连接。 C．基困的运输工具——运载体 ①作用：将外源基因送入受体细胞。 ②具备的条件：a、能在宿主细胞内复制并稳定地保存。b、 具有多个限制酶切点。c、有某些标记基因。 ③种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 ④质粒的特点：质粒是基因工程中最常用的运载体。(3)基因操作的基本步骤 A．提取目的基因 目的基因概念：人们所需要的特定基因，如人的胰岛素基因、抗虫基因、抗病基因、干扰素基因等。 提取途径：B．目的基因与运载体结合 用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒DNA（运载体），使其产生相同的黏性末端，将切割下的目的基因与切割后的质粒混合，并加入适量的DNA连接酶，使之形成重组DNA分子（重组质粒） C．将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞 D．目的基因检测与表达 检测方法如：质粒中有抗菌素抗性基因的大肠杆菌细胞放入到相应的抗菌素中，如果正常生长，说明细胞中含有重组质粒。 表达：受体细胞表现出特定性状，说明目的基因完成了表达过程。如：抗虫棉基因导入棉细胞后，棉铃虫食用棉的叶片时被杀死；胰岛素基因导入大肠杆菌后能合成出胰岛素等。 (4)基因工程的成果和发展前景 A．基因工程与医药卫生B．基因工程与农牧业、食品工业 C．基因工程与环境保护记忆点：1. 作为运载体必须具备的特点是：能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选。质粒是基因工程最常用的运载体，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是能够自主复制的很小的环状DNA分子。2．基因工程的一般步骤包括：①提取目的基因 ②目的基因与运载体结合 ③将目的基因导入受体细胞 ④目的基因的检测和表达。3.重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。4.区别和理解常用的运载体和常用的受体细胞，目前常用的运载体有：质粒、噬菌体、动植物病毒等，目前常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。5.基因诊断是用放射性同位素、荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本的遗传信息，达到检测疾病的目的。6.基因治疗是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。9 、生物的进化（1）自然选择学说内容是：过度繁殖、生存斗争、遗传变异、适者生存。（2）物种：指分布在一定的自然区域，具有一定的形态结构和生理功能，而且在自然状态下能够相互交配和繁殖，并能产生出可育后代的一群个体。种群：是指生活在同一地点的同种生物的一群个体。种群的基因库：一个种群的全部个体所含有的全部基因。（3）现代生物进化理论的基本观点：种群是生物进化的基本单位，生物进化的实质在于种群基因频率的改变。突变和基因重组、自然选择及隔离是物种形成过程的三个基本环节，通过它们的综合作用，种群产生分化，最终导致新物种的形成。（4）突变和基因重组产生生物进化的原材料，自然选择使种群的基因频率定向改变并决定生物进化的方向，隔离是新物种形成的必要条件（生殖隔离的形成标志着新物种的形成）。现代生物进化理论的基础：自然选择学说。记忆点：1．生物进化的过程实质上就是种群基因频率发生变化的过程。2．以自然选择学说为核心的现代生物进化理论，其基本观点是：种群是生物进化的基本单位，生物进化的实质在于种群基因频率的改变。突变和基因重组、自然选择及隔离是物种形成过程的三个基本环节，通过它们的综合作用，种群产生分化，最终导致新物种的形成。3. 隔离就是指同一物种不同种群间的个体，在自然条件下基因不能自由交流的现象。包括地理隔离和生殖隔离。其作用就是阻断种群间的基因交流，使种群的基因频率在自然选择中向不同方向发展，是物种形成的必要条件和重要环节。4．物种形成与生物进化的区别：生物进化是指同种生物的发展变化，时间可长可短，性状变化程度不一，任何基因频率的改变，不论其变化大小如何，都属进化的范围，物种的形成必须是当基因频率的改变在突破种的界限形成生殖隔离时，方可成立。5.生物体的每一个细胞都有含有该物种的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。6.在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织器官，这是基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果。

说的是 遗传于变异

双螺旋模型的意义，不仅意味着探明了DNA分子的结构，更重要的是它还提示了DNA的复制机制：由于腺膘呤总是与胸腺嘧啶配对、鸟膘呤总是与胞嘧啶配对，这说明两条链的碱基顺序是彼此互补的，只要确定了其中一条链的碱基顺序，另一条链的碱基顺序也就确定了。因此，只需以其中的一条链为模版，即可合成复制出另一条链。 它的成功测定，开创了现代生物学的新时代．具体的资料请到：http://baike.baidu.com/view/217753.htm

网页链接Tn5转座酶建库原理

太专业了很麻烦,目前技术不成熟

不同的下游实验对于DNA结构的完整性有所区别。 如PCR、Southern杂交这一类实验基本保证所需片段的完整，而二代测序实验为了获得全面的序列信息对DNA的完整性要求更高。 去除对下游实验中酶分子有抑制作用的有机溶剂和高浓度金属离子 将蛋白质、多糖、多酚等生物大分子的污染降到最低 去除其他核酸（如RNA对后续实验的影响） 血液、动物组织、培养细胞、鼠尾等 特点：细胞数量较多、样本成分相对单一 血清、血浆、鼻咽拭子、痰液、支气管/肺泡灌洗液、腹水、病毒、粪便、FFPE样本等 特点：细胞数量少、样本成分复杂 普通植物：拟南芥、小麦、玉米、水稻等 特点：存在细胞壁这样的保护结构、细胞内部还有液泡、叶绿体等细胞器成分相对复杂 多糖多酚类植物：水果果肉、植物种子等 特点：多糖与核酸理化性质一致、多酚氧化后易于核酸结合，影响DNA的提取 细菌:革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌等）、革兰氏阴性菌（大肠杆菌等） 特点：有细胞壁，有的细菌还有鞭毛和荚膜 真菌：酵母、真菌菌丝等 特点：存在以多糖为主要成分的细胞壁、细胞内部成分相对复杂 新鲜样本中受到内源性核酸酶影响相对最小，得到DNA质量相对更好。 投入过多样本，后续样本裂解不充分从而影响DNA提取情况，还会引入过多杂质及内源性核酸酶。 对于含有多糖多酚等次生代谢产物的衰老叶片可在4℃黑暗环境下饥饿1-2天；进行低温或冷冻保存可以避免内源性DNA酶对样本中的DNA进行一个降解。 -20℃短期保存（1-3个月），-70℃长期保存；福尔马林固定时间8-24h内为宜，样本存放时间不宜超过1年；FFPE样本保存温度4℃，建议不超过3年。 长时间使用福尔马林进行固定，里面有效成分甲醛会引起生物大分子之间形成广泛的亚甲基交联桥使DNA分子脆性增加，在剪切力的作用下，DNA分子容易断裂，同时DNA与蛋白质之间经广泛交联之后，可形成牢固的复合物，这样也阻止蛋白酶对组织的消化，从而影响DNA的提取。 可使用不同抗凝剂的抗凝管进行采集和保存；避免反复冻融，4℃短期保存3-4天，-20℃下可最多保存2年，-70℃下长期保存：全血、白细胞、血凝块、血清或血浆。 液氮研磨或匀浆 液氮研磨（最推荐） 研磨充分又保证样本处于低温条件下避免DNA降解 DNA存在于含有细胞核的白细胞中，而大量存在的红细胞会引入更多杂质和核酸酶，所以需要提前使用红细胞裂解液对红细胞进行去除。 贴壁细胞胰酶消化处理再做收集 悬浮细胞只要离心弃上清 溶菌酶破壁处理 如金黄色葡萄球菌加入一定量的溶菌酶在37℃条件下孵育30min就可完成破壁的处理 酶解破壁或液氮冻融或超声裂解法 脱蜡处理（二甲苯或矿物油类的物质进行脱蜡处理） CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，可以溶解细胞膜，与核酸结合形成在高盐环境下可溶的复合物。 1.Tris-Hcl (PH8.0) 提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏 2.EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性 3.Nacl提供一个高盐环境，使DNA充分溶解于液相中 4.CTAB裂解细胞，与核酸结合形成在高盐环境下可溶的复合物 SDS法（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子去垢剂，高温（55-60℃）裂解细胞，蛋白变性，染色体离析，在高盐环境下或降低温度后蛋白、多糖等结合形成的复合物沉淀，释放核酸。 在氢氧化钠（PH12-12.6碱性环境）和去污剂SDS的作用下细胞破裂，细菌蛋白质和染色体DNA变性，双链DNA氢键断裂，DNA变性。加入酸性高盐缓冲液后PH恢复中性，共价闭合环状质粒DNA复性速度快于线性的染色体DNA。细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物被SDS包盖。之后复合物沉淀下来，质粒DNA留在上清中。 含有Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中加热至100℃使细菌裂解。通过加热破坏细菌外壁的同时有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA变性。温度下降后，闭环DNA形成超螺旋分子，离心时留在上清中。 酚/氯仿抽提去除蛋白质，之后使用乙醇或异丙醇沉淀DNA 通过离心柱上的吸附膜，特异性吸附DNA 通过磁珠表面修饰（硅基质）从而特异性吸附核酸 检测原理：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，最大吸收波长是260nm。 优点：操作简便、迅速 缺点：无法区分DNA、RNA、降解核酸、游离核苷酸及其他杂质，易得到浓度虚高值 常见仪器：Nanodrop、Onedrop 检测原理：采用荧光染料与特异的靶分子结合后发出荧光，仪器接收荧光值转化为浓度数据。 优点：灵敏度较高，操作简便 缺点：成本高，价格较贵；无法直接区分降解核酸 OD260：核酸的吸光度 OD280：蛋白质的吸光度 OD260/OD280 =1.7-1.9 说明纯度很好 OD260/OD280 <1.7 表明可能有蛋白质残留 OD260/OD280 >1.9 表明DNA可能存在部分降解，建议进行完整度检测或存在RNA残留 判断有无RNA、蛋白残留。1%-2%琼脂糖，上样1-3ul 判断DNA有无降解。1%-2%琼脂糖，上样1-3ul 通过胶图中DNA条带情况来判断 完整的基因组DNA条带单一且明亮，无任何拖尾或弥散。 出现不同程度的降解，胶图中可看到不同程度的拖尾或弥散。降解越严重弥散越亮，片段大小会越小。 保存形式：建议分装保存，避免DNA反复冻融，影响DNA的完整性。 保存液： 短期保存：对下游实验中离子浓度要求比较高的——PH为弱碱性的无菌水。 对离子浓度要求不高的——TE缓冲液（Tris、EDTA）。 长期保存：乙醇。 保存温度：-20℃/-80℃下可长期保存，4℃下保存时间最好不超过14天。 1.尽可能选择新鲜的样本，减少内源酶的作用 2.样本起始投入量不要超过所用方法的起始量标准 3.样本保存时尽可能的避免反复冻融 4.选择合适的处理方式并进行充分的样本前处理 5.前处理结束后在样本解冻前添加裂解液 6.需对样本进行充分裂解 7.正确添加所需试剂种类及使用量，样本量增加时裂解液也需成倍增加 8.对得到的DNA产物进行分装保存，避免反复冻融且保存时间不易太久 1.事先了解好提取样本中DNA含量水平 2.样本中发生DNA的降解，产量也会有所下降 3.选择合适的前处理及裂解方式（如延长裂解和沉淀DNA的时间等），并尽可能的将样本中的DNA完全释放出来 4.使用柱式试剂盒对DNA产物洗脱的时候，要尽可能的覆盖整个吸附膜；进行二次洗脱也可增加产量 5.使用沉淀法提取DNA时，可以在沉淀之前加入1/10体积的醋酸钠（PH5.2）有助于DNA沉淀 1.样本投入量不要太多，投入太多杂质也多以及后续裂解也不完全 2.样本应进行充分裂解，特别是对于一些比较复杂、含有较多杂质（多糖、多酚等）的样本需进行特殊处理 3.RNA残留：使用RNase对RNA进行处理，处理时间不宜太短（5min左右） 4.蛋白残留：使用蛋白变性剂或蛋白酶K 沉淀法分层吸取上清(DNA)时注意不要吸到下层沉淀蛋白 1.抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇，抗坏血酸，半胱氨酸，二硫苏糖醇等 2.加入易与酚类结合的试剂：如PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合 1.高盐法：用高浓度的Na+、K+改变多糖的溶解特性，使其脱离水相进入有机相，然后用酚仿抽提去除 2.低浓度乙醇和醋酸钾溶液可以共同沉淀多糖 3.PVP/PVPP类物质对多糖的去除也有一定作用 1.质粒拷贝数 低拷贝质粒：pBR322、pACYC及其衍生载体、pSC101及其衍生载体、SuperCos、pWE15等 高拷贝质粒：pTZ、pUC、pBS、pGM-T等 低拷贝质粒适当增加样本投入量 2.菌种问题：保存时间、抗性筛选 如保存时间过久，提取质粒之前，这个质粒已经丢失，这种情况可选择活化，涂布平板培养后，重新挑选新的菌落来进行液体培养 3.选择合适的前处理及裂解方式，并尽可能的将样本中的DNA完全释放出来 4.使用柱式试剂盒对DNA产物洗脱的时候，要尽可能的覆盖整个吸附膜；进行二次洗脱也可增加产量 1.菌种收集时间 对于老旧菌种所含有的开环质粒的量明显高于属于对数生长期的菌种的。根据使用菌种生长情况找到对数生长期。一般来说对数生长期是生长速率常数最大，细胞分裂所用的代时最短的时候就是对数生长期。 2.胞内酶含量很高的宿主菌 先去除胞内酶，再提取质粒 3.变性裂解的时间不宜过长，也会对质粒完整性造成影响 4.碱裂解法加入中和液后操作应该轻柔(裂解时间不宜超过5min） 杂质有3种 1.RNA残留 使用RNase对RNA进行消化处理 2.基因组DNA残留 温和操作 在裂解或中和过程中，操作过于剧烈而导致基因组DNA的断裂 3.蛋白残留 使用蛋白变性剂或蛋白酶K进行消化 碱裂解法将中和后的体系置于4℃一段时间，使蛋白质残留沉淀下来更少 中和均匀彻底，将蛋白与试剂充分融合

（一） 基因工程与医药卫生1． 生产基因工程药品（1） 用基因工程方法生产的“工程菌”可以高效率地生产出高质量，低成本的药品。①用大肠杆菌生产的胰岛素：治疗糖尿病的特效药。②用大肠杆菌及酵母菌生产的干扰素：抗病毒的特效药。其化学本质为糖蛋白。③乙肝疫苗：将乙肝病毒中的有关基因分离出来，引入细菌的细胞中，再采用发酵的方法，或者引入哺乳动物的细胞中，再采用细胞培养的方法，就能让细菌或哺乳动物的细胞生产出大量的疫苗。（2）我过自行生产的几种基因工程药品：白细胞介素-2，干扰素，乙肝疫苗。人生长激素等。2．用于基因诊断和基因治疗（1）基因诊断：①概念：用放射性同位素（如32P），荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本的遗传信息，达到检测疾病的目的。②DNA探针：是单链的。作用是从基因文库中准确地提取出目的基因。由于DNA双链的核苷酸序列是彼此互补的，当DNA分子杂交时首先将双链DNA加热或升高PH值，使双链解开，根据所需的核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链，并用同位素标记，即成为探针。用这一探针查基因文库中已变性的DNA 片段，如果有一个DNA片段能和探针片段互补结合而合成双链（分子杂交），说明这一片段即含有所需的基因。③原理：DNA分子杂交。④优点：快速简便。⑤实例：用β-珠蛋白的DNA探针可以检测出镰刀状细胞贫血症，用苯丙氨酸羟化酶基因探针可以检测出苯丙酮尿症，用白血病患者细胞中分离出的癌基因制备的DNA探针，可以用来检测白血病。（2）基因治疗：把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。目前作到的只是引入外源基因使其表达，以补充缺失的或失去正常功能的酶，而不能作到用正常基因去替换突变的基因。（二）基因工程与农牧业，食品工业1．农业方面：（1）通过基因工程技术获得高产，稳产和具有优良品质的农作物。（2）用基因工程的方法培育出具有各种抗拟性的作物新品种。如抗虫，抗病毒，抗除草剂，抗盐碱，抗干旱，抗高温等。2．牧业方面：利用基因工程技术培育具有抗病能力，高产仔率，高产奶率和高质量皮毛的动物等3．食品工业：开辟新的食物来源。用微生物来生产人类所需要的营养物质。（三）基因工程与环境保护1．环境检测：如用DNA探针可以检测饮用水中病毒的含量，特点是快速，灵敏，精确。2．环境净化：科学家用基因工程的方法培育出了能同时分解四种烃类化合物的“超级细菌”以及“吞噬”汞和降解土壤中DDT的细菌，还有能够净化镉污染的植物等。

微生物分类微生物的分类依据· 形态特征（1）个体形态　镜检细胞形状、大小、排列，革兰氏染色反应，运动性，鞭毛位置、数目，芽孢有无、形状和部位，荚膜，细胞内含物；放线菌和真菌的菌丝结构，孢子丝、孢子囊或孢子穗的形状和结构，孢子的形状、大小、颜色及表面特征等。培养特征1）在固体培养基平板上的菌落（colony）和斜面上的菌苔（lawn）性状（形状、光泽、透明度、颜色、质地等）；2）在半固体培养基中穿刺接种培养的生长情况；3）在液体培养基中混浊程度，液面有无菌膜、菌环，管底有无絮状沉淀，培养液颜色等。· 生理生化特征（1）能量代谢　利用光能还是化学能；（2）对O2的要求　专性好氧、微需氧、兼性厌氧及专性厌氧等；（2）营养和代谢特性　所需碳源、氮源的种类，有无特殊营养需要，存在的酶的种类等。· 生态习性生长温度，酸碱度，嗜盐性，致病性，寄生、共生关系等。· 血清学反应用已知菌种、型或菌株制成抗血清，然后根据它们与待鉴定微生物是否发生特异性的血清学反应，来确定未知菌种、型或菌株。· 噬菌反应菌体的寄生有专一性，在有敏感菌的平板上产生噬菌斑，斑的形状和大小可作为鉴定的依据；在液体培养中，噬菌体的侵染液由混浊变为澄清。噬菌体寄生的专业性有差别，寄生范围广的谓多价噬菌体，能侵染同一属的多种细菌；单价噬菌体只侵染同一种的细菌；极端专业化的噬菌体甚至只对同一种菌的某一菌株有侵染力，故可寻找适当专化的噬菌体作为鉴定各种细菌的生物试剂。· 细胞壁成分革兰氏阳性细菌的细胞壁含肽聚糖多，脂类少。革兰阴性细菌与之相反。链霉菌属（Streptomyces）的细胞壁含丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸和2，6-氨基庚二酸，而含有阿拉伯糖是诺卡氏菌属（Nocardia）的特征。霉菌细胞壁则主要含几丁质。· 红外吸收光谱利用红外吸收谱技术测定微生物细胞的化学成分，了解微生物的化学性质，作为分类依据之一。· GC含量生物遗传的物质基础是核酸，核酸组成上的异同反映生物之间的亲缘关系。就一种生物的DNA来说，它的碱基排列顺序是固定的。测定四种碱基中鸟嘌呤（G）和胞密啶（C）所占的摩尔百分比，就可了解各种微生物DNA分子不同源性程度。亲缘关系接近的微生物，它们的G+G含量相同或近似的两种微生物，不一定紧密相关，因为它们的DNA的四个碱基的排列顺序不一定相同。· DNA杂合率要判断微生物之间的亲缘关系，须比较它们的DNA的碱基顺序，最常用的方法是DNA杂合法。其基本原理是DNA解链的可逆性和碱基配对的专一性。提取DNA并使之解链，再使互补的碱基重新配对结合成双链。根据能生成双链的情况，可测知杂合率。杂合率越高，表示两个DNA之间碱基顺序的相似越高，它们间的亲缘关系也就越近。· 核糖体核糖酸（rRNA ）相关度在DNA相关度低的菌株之间，rRNA同源性能显示它们的亲缘关系。Rrna-DNA分子杂交试验可测定Rrna的相关度，揭示Rrna 的同源性。· rRNA的碱基顺序RNA的碱基顺序由DNA转录来的，故完全具有相对应的关系。提取并分离细菌内标记的16SrRNA,以核糖核酸消化，可获得各种寡核苷酸，测定这些寡核苷酸上的碱基顺序，可作为细菌分类学的一种标记。核糖体蛋白的组成分析分离被测细菌的30S和50S核糖体蛋白亚单位，比较其中所含核糖体蛋白的种类及其含量，可将被鉴定的菌株分为若干类群，并绘制系统发生图。微生物的分类系统这里仅简述原核微生物和真核微生物的分纲体系。· 原核生物界（Procaryotae）（1） 光能营养原核生物门Ⅰ 蓝绿光合细菌纲（蓝细菌类）Ⅱ 红色光合细菌纲Ⅲ 绿色光合细菌纲（2）化能营养原核生物门Ⅰ 细菌纲Ⅱ 立克次氏体纲Ⅲ 柔膜体纲Ⅳ 古细菌纲· 真核微生物（Eucaryotic microbes）真核策生物主要包括各类真菌，还有粘菌等。真菌划分各能分类单位的基本原则是以形态特征为主，生理生化、细胞化学和生态等特征为辅。丝状真菌主要根据其孢子产生的方法和孢子本身的特征，以及培养特征来划分各级的分类单位。一些病原真菌的鉴定，寄生和症状也可作为参考依据。真菌可分以下四纲：Ⅰ 藻状菌纲　菌丝体无分隔，含多个核。有性繁殖形成卵孢子或接合孢子。Ⅱ 子囊菌纲　菌丝体有分隔，有性阶段形成子囊孢子。Ⅲ 担子菌纲　菌丝体有分隔，有性阶段形成担孢子。Ⅳ 半知菌纲　包括一切只发现无性世代未发现有性阶段的真菌。粘菌也可分为四纲，即Ⅰ 网粘菌纲　自细胞两端各自伸出长的粘丝并接连形成粘质的网络——假原质团。Ⅱ 集胞粘菌纲　分泌集胞粘菌素，形成假原质团。Ⅲ 粘菌纲　形成原质团，腐生性自由生活。Ⅳ 根肿病菌纲　形成原质团，专性寄生。亦有将之归于真菌类。

http://wenku.baidu.com/view/b68b4b2d453610661ed9f4a8.html?st=1http://wenku.baidu.com/view/4bcfb095dd88d0d233d46a23.html?st=1两个地理综合

一 、植物的生殖 1．有性生殖:由受精卵发育成新个体的生殖方式.例如：种子繁殖（通过开花、传粉并结出果实，由果实中的种子来繁殖后代。）（胚珠中的卵细胞与花粉中的精子结合成受精卵→胚→种子） 2．无性生殖:不经过两性生殖细胞结合,由母体直接产生新个体。3．嫁接的关键:接穗与砧木的形成层紧密结合,以确保成活. 二 昆虫的生殖和发育 1．完全变态: 在由受精卵发育成新个体的过程中, 幼虫与成体的结构和生活习性差异很大,这种发育过程叫变态发育. 卵→幼虫→蛹→成虫。举例：家蚕、蜜蜂、蝶、蛾、蝇、蚊 2．不完全变态:卵→若虫→成虫。举例：蝗虫、蝉、蟋蟀、蝼蛄、螳螂 三 两栖动物的生殖和发育 1．变态发育:卵→蝌蚪→幼蛙→成蛙 2．特点：卵生，体外受精。 四、鸟的生殖和发育 1．过程:筑巢、求偶、交配、产卵、孵卵、育雏几个阶段。 2．特点：卵生 体内受精 3．鸟卵的结构：一个卵黄就是一个卵细胞。胚盘里面含有细胞核。卵壳和壳膜——保护作用，卵白——营养和保护作用，卵黄——营养作用。胚盘——胚胎发育的场所。 第二章 生物的遗传和变异 • 遗传：是指亲子间的相似性。 • 变异：是指子代和亲代个体间的差异。 一、 基因控制生物的性状 1 生物的性状:生物的形态结构特征、生理特征、行为方式. 2 相对性状：同一种生物同一性状的不同表现形式。 3 基因控制生物的性状。例：转基因超级鼠和小鼠。 4 生物遗传下来的是基因而不是性状。 二、基因在亲子代间的传递 1．基因：是染色体上具有控制生物性状的DNA 片段。 2．DNA：是主要的遗传物质，呈双螺旋结构。 3．染色体 ：细胞核内能被碱性染料染成深色的物质。 4．基因经精子或卵细胞传递。精子和卵细胞是基因在亲子间传递的“桥梁”。 • 每一种生物细胞内的染色体的形态和数目都是一定的。 • 在生物的体细胞中染色体是成对存在的，基因也是成对存在的，分别位于成对的染色体上。 • 在形成精子或卵细胞的细胞分裂中，染色体都要减少一半。 三 基因的显性和隐性 1． 相对性状有显性性状和隐性性状。杂交一代中表现的是显性性状。 2． 隐性性状基因组成为:dd 显性性状基因组称为：DD或 Dd 3． 我国婚姻法规定：直系血亲和三代以内的旁系血亲之间禁止结婚． 4． 如果一个家族中曾经有过某种遗传病，或是携带有致病基因，其后代携带该致病基因的可能性就大．如果有血缘关系的后代之间再婚配生育，这种病的机会就会增加． 四 人的性别遗传 1． 每个正常人的体细胞中都有23对染色体．（男：44+XY 女：44+XX） 2． 其中22对男女都一样，叫常染色体，有一对男女不一样，叫性染色体．男性为XY，女性为XX． 五 生物的变异 1．生物性状的变异是普遍存在的。变异首先决定于遗传物质基础的不同，其次与环境也有关系。因此有可遗传的变异和不遗传的变异。 2．人类应用遗传变异原理培育新品种例子：人工选择、杂交育种、太空育种（基因突变） 第三章 生物的进化 一、地球上生命的起源 1．多数学者认为:原始大气中的无机物到有机物, 再到原始生命,这一过程是在原始地球上进行 2．原始地球条件:高温、高压、紫外线以及雷电、原始海洋、无氧气 3．蛋白质、核酸是生命中重要的物质 二、生物进化的历程 1．比较法:根据一定的标准，把彼此有某种联系的事物加以对照，确定它们的相同和不同之处。 2．化石：是生物的遗体、遗物或生活痕迹，由于种种原因被埋藏在地层中，经过若干万年的复杂变化系形成的。例如：始祖鸟化石（古代爬行动物→古代鸟类） 3．生物进化的总体趋势：简单到复杂，低等到高等，水生到陆生 三、生物进化的原因 1．模拟保护色的形成过程：动物在适应环境过程中所表现的一个方面，是自然选择的结果 2．自然选择：生物通过生存斗争，适者生存，不适者被淘汰。 3．过程： 过度繁殖 生存斗争 遗传变异 适者生存 4．意义：生物通过遗传、变异、自然选择而不断进化。 第八单元 第一章 传染病和免疫 一、传染病及其预防 1． 病原体：引起传染病的细菌、病毒、和寄生虫等生物。 2．传染病流行的基本环节： 传染源 传播途径 易感人群 3．传染病的预防措施： 控制传染源 切断传播途径 保护易感人群 二 免疫与计划免疫 1．人体的三道防线: • 第一道：皮肤和黏膜 • 第二道：体液中的杀菌物质和吞噬细胞 • 第三道：免疫器官和免疫细胞 2．抗体：病原体侵入人体后，刺激了淋巴细胞，淋巴细胞就会产生一种抵抗该病原体的特殊蛋白质． 3．抗原：引起人体产生抗体的物质（如病原体等） 4．免疫：最初指人体对病原体的抵抗力． 现指是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别自己和非己成分，从而破坏和排斥人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体健康． 5．疫苗：通常是用杀死的或减毒的病原体制成的生物制品，接种于人体后，可产生相应的抗体． 6．计划免疫、意义： 第二章 用药和急救 安全用药 处方药（R） 非处方药（OTC） 1． 说出一些常用药物的名称和作用。例如：牛黄解毒片可用于咽喉肿痛、口舌生疮等疾病的治疗。新速效感冒片可用于伤风引起的鼻塞、咽喉痛、头痛发烧等疾病的治疗。 2． 概述安全用药的常识。——分析药品标签包含的信息。药物的主要成分、适应症、用法与用量、药品规格、注意事项、生产日期和有效期等。 4．120急救 5．人工呼吸 6．胸外心脏挤压 7．出血和止血：外出血，内出血，毛细血管出血、静脉出血和动脉出血。 第三章 了解自己 增进健康 一、评价自己的健康状况 1．健康是指一种身体上、心理上和社会适应方面的良好状态． 2。保持愉快的心情：心情愉快是青少年心理健康的核心。 二、调节自己的情绪 方法：转移注意力；选择合适的方式宣泄烦恼；自我安慰 二、选择健康的生活方式 1．生活方式对健康的影响：慢性、非传染性疾病除了受遗传因素和环境的影响外，还与个人的生活方式有关，不健康的生活方式加速这些疾病的发生和发展。 2．探究酒精或烟草浸出液对水蚤心率的影响：低浓度的酒精（0。25%）对水蚤的心率有促进作用，高浓度的酒精对水蚤的心率有抑制作用。 3．酗酒对人体健康的危害：酒精会损害人的心脏和血管，酗酒会全使脑处于过度兴奋或麻痹状态，引进神经衰弱和智力减退，长期酗酒，会造成酒精中毒，饮酒过多，还会有生命危险。 4．吸烟对人体健康的危害：烟草燃烧时，烟雾中的有害物质如尼古丁、焦油等有害物质进入人体，对人体的神经系统造成损害，使人的记忆力和注意力降低，同时还诱发多种呼吸系统疾病，如慢性支气管炎，肺癌等。 5．毒品的危害：会损害人的神经系统，降低人体免疫功能，使心肺受损，呼吸麻痹，甚至死亡。 回答者： lyx_smile - 二级 2010-10-14 22:31 http://www.pep.com.cn/czsw/jshzhx/shtjj/zhtfx/八年级上册生物期末复习 1、 目前己知的动物大约有150万种，这些动物可以分为两大类：一类是脊椎动物，它们的体内有脊柱；另一类是无脊椎动物，它们的体内没有脊柱。 2、 生物的多样性：1、种类的多样性；2、生活环境的多样性；3、00运动方式的多样性。 3、 鱼之所以能在水里生活，两个特点是至关重要的：（1）能靠游泳老获取食物和防御敌害；（2）能在水中呼吸。 4、 鱼可以在克服水中阻力的结构：流线形（梭子形）身体；身体表面分泌粘液。 5、 鱼在游泳时，靠躯干部有尾部的左右摆动产生前进的动力，靠背鳍、胸鳍、腹鳍、臀鳍来保持平衡，靠尾鳍保持前进的方向。 6、 在难以直接拿研究对象做实验时，有时用模型来做实验，即模仿实验对象制作模型，或者模仿实验的某些条件进行实验，这样的实验叫做模拟实验。 7、 各种鳍在运动中起到辅助协调的作用。 8、 鳃是鱼的呼吸器官。 9、 鳃中含有丰富的毛细血管，因此鳃是鲜红色的。 10、 鳃丝又多又细，是为了扩大与水接触的面积，有利于充分进行气体交换。鳃不容易吸收空气中的氧，鱼离开水后，鳃丝相互覆盖，减小了与空气接触面积，不能从空气中得到足够的氧气，因此缺氧而死。 11、 鱼鳃对水中呼吸至关重要的特点：鳃丝鲜红，含丰富毛细血管；鳃丝又多又细。 12、 水从鱼口流入，从鳃盖后缘流出。 13、 流出鱼鳃的水中，氧气减少了，二氧化碳增多了。 14、 气体交换 水中O2——鳃丝的毛细血管中 鳃丝中Co2—水中 15、 鱼的主要特征：体表常常有鳞，用鳃呼吸，通过尾部的摆动和鳍的协调作用游泳。 16、 有口无肛门，食物从口进入消化腔，消化后的食物残渣仍由口排出体外，这些动物称为腔肠动物。 17、 身体柔软靠贝壳来保护身体的动物，称为软体动物。 18、 体表长有质地较硬的甲的动物，叫做甲壳动物。甲壳动物用鳃呼吸。 19、 腔肠动物、软体动物、甲壳动物都是无脊椎动物。 20、 水中各种生物都是水域生态系统的重要组成部分，它们之间通过食物链和食物网，形成紧密而复杂的联系，同时又都受水域环境的影响，其种类的变化和数量的消长都会影响到人类的生活。 21、 与水域环境相比，陆地环境要复杂得多。（1）比较干燥；（2）昼夜温差大；（3）缺少水中的浮力；（4）有气态的氧；（5）陆地环境复杂多变。 22、 陆地生活的动物对环境的适应：1、一般都有防止水分散失的结构；2、不受水的浮力作用，一般都具有支持躯体和运动的器官，用于爬行、行走、跳跃、奔跑、攀援等多种运动方式，以便觅食和避敌；2、一般具有能在空气中呼吸的、位于身体内部的各种呼吸器官，比如气管和肺；4、普遍具有发达的感觉器官和神经系统，能够对多变的环境及时做出反应。 23、 环节动物不是软体动物，环节动物是无脊椎动物。 24、 身体由许多彼此相似的环状体节构成的动物称为环节动物。 25、 蚯蚓生活在富含腐殖质的湿润的土壤中，因为蚯蚓是冷血动物，温度变化不大，适合蚯蚓生活。 26、 身体分节可以使蚯蚓的躯体运动灵活。 27、 蚯蚓靠肌肉的收缩和舒张，刚毛的支撑和固定运动。 28、 蚯蚓没有专门的呼吸系统，蚯蚓的呼吸要靠能分泌黏液、始终保持湿润的体壁来完成。蚯蚓的体壁密布毛细血管，空气中的氧气先溶解在体表黏液里，然后渗进体壁，再进入体壁的毛细血管中。体内的二氧化碳也经体壁的毛细血管由体表排出。 29、 蚯蚓不能保持恒定的体温，只能生活在温度变化不太大的土壤深层。 30、 恒温动物比不恒温动物较高等，更能适应环境，有利于进行正常的新陈代谢。 31、 兔的体温恒定，不仅靠体表的毛，还需发达的神经系统，循环系统，呼吸系统共同协调。 32、 兔的后肢较长，前肢较短，后肢肌肉发达，适于跳跃。 33、 门齿——切断食物 犬齿——撕裂食物 臼齿——磨碎食物 34、 兔的心脏和肺的结构及部位与人体的相似，这说明了人与兔的分类很接近，同属哺乳动物。 35、 食性 植食性（如兔） 肉食性（如狼） 杂食性（如人） 36、 盲肠主要用于消化纤维，草食性动物盲肠发达。 37、 兔的牙齿分化为门齿和臼齿，门齿适于切断植物纤维，臼齿适于磨碎食物。兔的消化道上有发达的盲肠，这些都是与它们吃植物的生活习性相适应的。 38、 兔有发达的大脑及遍布全身的神经，有发达的四肢，使它们能够灵敏地感知外界环境的变化，迅速作出相应的反应。 39、 哺乳动物是最高等的动物，是脊椎动物，种类很多，地球上大约有4000多种，除极个别种类外，都具有体表被毛、胎生、哺乳等特征（其他特征：心脏四腔，用肺呼吸，体温恒定，属恒温动物，牙齿有门齿、犬齿、臼齿的分化） 40、 世界上的鸟有9000多种。 41、 鸟的外形呈流线形，减少飞行时空气的阻力。 42、 鸟的羽毛分正羽和绒羽（有保暖作用），正羽有羽轴，翼呈扇形，可增大与空气接触的面积，便于扇动空气而飞行。 43、 鸟的胸肌发达，附于龙骨突，利于扇动空气而飞行。 44、 鸟的骨骼中空，轻而坚固，胸骨突出，有龙骨突的结构，便于发达的胸肌附于胸骨（龙骨突），减轻重量，利于飞行。 45、 鸟类消化特点：1、食量大，消化能力强，满足飞行时能量的消化；2、粪便不贮存，减轻体重，利于飞行；3、直肠短，排便频繁。 46、 鸟的心脏发达，工作能力强，血液输送氧气的能力强，有利于飞行。 47、 鸟的身体里有发达的气囊（不是呼吸器官），辅助肺进行呼吸，满足飞行时氧气的需要。 48、 鸟的全身都是为飞行而设计。 49、 恒温动物 哺乳动物 鸟类 50、 鸟类的体表被覆羽毛，前肢变成翼，具有迅速飞翔的能力，身体内有气囊辅助肺呼吸，体温高而恒定。 51、 昆虫是种类最多的一类动物，已知的种类超过100万种（占动物种类的4/5），昆虫有三对足，能爬行；有的昆虫的足特化成跳跃足，能跳跃；大多数昆虫都有翅，能飞行。昆虫是无脊椎动物中惟一会飞的动物。 52、 昆虫的翅与鸟翼结构不同，但就适于飞行来看都有这些共同点：都有利于飞行的扇形结构，这些结构的运行都是由肌肉的收缩和舒张引起的，都可以在空气中产生向上的升力和前进的动力，相对身体来说，都有轻、面积大的特点，利于扇动空气而飞行。 53、 翅对昆虫生活和分布的重要意义：有利于取食，逃避敌害，扩大活动和分布范围，有利于寻偶交配，寻找适宜的产卵场所。 54、 昆虫的外部特征：昆虫的身体分为头、胸、腹三部分，运动器官——翅和足都生在胸部。胸部有发达的肌肉，附在外骨骼上，外骨骼是覆盖在昆虫身体表面的坚韧的外壳（会发生蜕皮），有保护和支持内部柔软器官、防止体内水分蒸发的作用。 55、 昆虫在分类上属于节肢动物，节肢动物除昆虫外，还有蜘蛛、蜈蚣、虾、蟹等，它们的共同特点是：身体由很多体节构成；体表有外骨骼；足和触角分节。 56、 幼体生活在水中，用鳃呼吸，经过变态发育，此后营水陆两栖生活，用肺呼吸，同时用皮肤辅助呼吸，这样的动物叫做两栖动物。 57、 动物的行为依赖于一定的身体结构。 58、 哺乳动物的运动系统是由骨骼和肌肉（骨、骨骼肌（运动肌肉）、骨与骨之间的连接（如关节））组成的。 59、 运动系统由骨、骨骼肌和骨连接（如关节）组成。 60、 人有206块骨 颅骨、胸骨、肋骨（不能活动） 躯干骨（半活动） 四肢骨（能活动） 能活动的骨连结（关节） 61、 人有26块脊椎骨（半活动骨连结） 62、 关节结构：关节头、关节囊、关节腔（有滑液，使关节活动灵活）、关节窝、关节软骨（缓冲作用）。 关节囊 关节头 关节腔 关节软骨 关节窝 63、 关节在运动中起支点作用，是骨绕着转动的点。 64、 人体主要的关节：上肢 肩关节 下肢 髋关节 肘关节 膝关节 腕关节 踝关节 指关节 趾关节 65、 所有脊椎动物都有关节。 66、 运动时，肘关节、髋关节、膝关节、踝关节容易受伤。 67、 如何在运动中保护关节：一、运动前做好充分的准备运动；二、运动强度应适当；三、佩戴护腕和护膝。 68、 骨骼肌（是器官）中间较粗的部分叫肌腹，两端较细的呈乳白色的部分叫肌腱。 69、 骨骼肌有受刺激而收缩的特性。 70、 为什么骨骼肌能牵动骨：当骨骼肌受神经传来的刺激收缩时，就会牵动骨绕关节活动，于是躯体就会产生运动。 71、 与骨相连的肌肉总是由两组肌肉相互配合活动的。 72、 人全身有六百多块骨骼肌，双臂自然下垂时，肱二头肌和肱三头肌都舒张。 73、 屈肘时，肱二头肌收缩，肱三头肌舒张；伸肘时，肱三头肌收缩，肱二头肌舒张。 74、 当然，运动并不是仅靠运动系统来完成的，它需要神经系统的控制和调节，它需要能量的供应，因此还需要消化系统、呼吸系统、循环系统等系统的配合。 75、 一句话概括骨、关节、肌肉在运动中的作用：骨骼肌收缩，牵动骨绕着关节活动，于是躯体就产生运动。 76、 动物的行为多种多样，从行为获得的途径来看，动物的行为大致可以分为两大类，一类是动物生来就有的，由动物体内的遗传物质所决定的行为，称为先天性行为；另一类是在遗传因素的基础上，通环境因素的作用，由生活经验和学习而获得的行为，称为学习行为。 77、 有很多行为是先天性行为和学习行为二者结合的结果，如鸟的迁徙。 78、 先天性行为是动物生存的最基本条件，学习行为使动物更能适应多变的环境，更好地生存。 79、 动物越高等，学习能力越强，越能适应复杂环境。同样，环境越复杂，要学习的行为越多。 80、 先天性行为有很大局限性，如果一种生物只有先天性行为而没有学习行为，就会被自然淘汰。 81、 对一个人来说，技能的训练和知识的学习是与大脑的发育阶段相适应的，一旦错过学习的关键时期就很难弥补。 82、 社会行为的特征：1、群体内部往往形成一定的组织；2、成员之间有明确的分工；3、有的群体中还形成等级。 83、 群体中根据个体大小、力量强弱、健康状况和凶猛程度的不同，排成等级制度。 84、 “首领”优先享有食物和配偶，优先选择筑巢场地，其他成员会对它做出表示顺从的姿态，对它的攻击不敢还击，也负责指挥整个社群的行动。 85、 动物的动作、声音和气味等都可以起传递信息的作用。 86、 社会行为对动物生存的意义：靠群体的力量往往更易获得食物和战胜天敌的侵袭，能有效保证物种的繁衍，使群体更好地适应环境，维持个体和种族的生活。 87、 在自然界，生物之间的信息交流是普遍存在的（人有人言，兽有兽语）。正是由于物质流、能量流和信息流的存在，使生物之间的联系错综复杂，“牵一发而动全身”，生物与环境才成为统一的整体。 88、 食物链和食物网中的各种生物之间存在着相互依赖、相互制约的关系。在生态系统中各种生物的数量和所占在比例总是维持在相对稳定的状态，这种现象就叫生态平衡。 89、 动物在自然界中的作用：1、动物在维持生态平衡中起着重要作用；2、动物可以促进生态系统的物质循环；3、帮助植物传粉、传播种子；4、生物防治。 90、 生物防治就是利用生物来防治病虫害。除以虫治虫外，还有以鸟治虫、以菌治虫等。 91、 动物在人们生活中的作用：含有丰富的营养物质，供人们食用；在医药保健方面发挥作用；在观赏、娱乐方面，文学艺术方面有一定的形象；人们在生活中用来比喻一些形象或某些特点；动物传播给人类一些疾病（害处）。 92、 在生态系统中，各种生物的数量和所占的比例总是维持在相对稳定的状态。 93、 现在科学家正在研究利用生物（如动物）做“生产车间”，生产人类所需的某些物质，这就是生物反应器。 94、 生物反应器的好处：可以节省建设厂房和购买仪器设备的费用，可以减少复杂的生产程序和环境污染。 95、 科学家通过对生物的认真观察和研究，模仿生物的某些结构和功能来发明创造各种仪器设备，这就是仿生。 96.一个细菌或真菌繁殖后形成的肉眼可见的集合体称为菌落。 97.细菌的菌落比较小，表面或光滑黏稠，或粗糙干燥真菌的菌落一般比细菌菌落大几倍到几十倍。霉菌形成的菌落常呈绒毛状，絮状或蜘蛛网状，有时还能呈现红、褐、绿、黑等不同的颜色。 98.从菌落的形态、大小和颜色，可以大致区分细菌和真菌，以及它们的不同种类。 99.菌落常用来作为菌种鉴定的重要依据。 100.培养细菌或真菌的一般方法：①配制含有营养物质的营养基。②培养基进行高温灭菌冷却。③将少量细菌或真菌放在培养基上（此过程叫接种）。④培养皿放在保持恒定温度的培养箱中（也可以放在室内温暖的地方）进行培养。 101.细菌和真菌是生物圈中广泛分布的生物。 102.细菌和真菌的生存也需要一定的条件。如需要水分、适宜的温度、一定的生存空间，还有有机物。 103.经过严格高温霉菌的环境不可能有细菌和真菌。 104.乳酸菌只有在无氧的条件下才能把有机物分解成乳酸。 105.所有的细菌都是单细胞生物。 106.有些细菌互相连接成团或长链，但每个细菌也是独立的生活的。 107.细胞结构示意图： 108.营养方式分为自养和异养，细菌和真菌的营养方式都为异养，异养又分为腐生和寄生。 109.有些细菌生长发育后期，个体缩小、细胞壁增厚，形成芽孢。芽孢是细菌的休眠体，对不良环境有较强的抵抗能力。小而轻还可以随风飘散各处，落在适当环境中，又能萌发成细菌。细菌快速繁殖和形成芽孢的特性使它们无处不在。（细菌分裂速度极快） 110.酵母菌为单细胞真菌。霉菌、食用菌、大型真菌为多细胞真菌。 111. 112.真菌的细胞中都没有叶绿体，进行孢子生殖。 113.酵母菌为出芽生殖。 114.青霉：孢子青绿色，排列呈扫帚状。营养方式为异养。 115.曲霉：孢子有多种颜色，排列呈放射状。营养方式为异养。 116.引起食物发霉的真菌为霉菌。 细菌 真菌 相 同 点 细胞中没有叶绿体，利用现成的有机物（异养）。 不 同 点 单细胞，没有成形的细胞核，分裂生殖。 既有单细胞种类也有多细胞种类，细胞内有真正的细胞核，多数为孢子生殖。 117.比较真菌与细菌： 118.细菌和真菌在自然界中的作用：（1）参与物质循环；（2）引起动、植物患病（3）与动物共生。 119.大多数细菌和真菌是生态系统中的分解者。 120.在自然界的物质循环中，细菌和真菌把动植物的遗体分解成二氧化碳、水和无机盐，这些物质有能被植物吸收和利用，进而制造有机物。可见 细菌和真菌对于自然界中二氧化碳等物质的循环起着重要的作用。 121.细菌和真菌中有一些种类营寄生生活，它们从活的动植物体和人体吸收营养物质，导致动植物和人患不同疾病。 122.共同生活在一起，相互依赖，彼此有利，一旦分开，两者都不能独立生活，这种现象叫做共生。（一旦分开，可以独立生活，叫做共栖） 123.寄生（往往有害）；共生（互利）。 124.酵母菌发酵状态： 有机物 酵母菌 二氧化碳+水+能量（多） [多用于做面包] 有机物 酵母菌 二氧化碳+酒精+水+能量（少） [用于酿酒] 125.发酵：微生物的无氧呼吸（也称作呼吸作用） 126.食物的腐败主要是由细菌和真菌引起的，这些细菌和真菌可从食品中获得有机物，并在食品中生长和繁殖，导致食品的腐烂，因此食品保存中一个重要问题就是防腐。防止食物腐败所依据的主要原理是把食品内的新军和真菌杀死或抑制它们生长和繁殖。 127.有些真菌可以产生杀死某些致病细菌的物质，这些物质称为抗生素（抗菌素）。 128.科学家还能用现代技术手段，把其他生物的某种基因转入一些细菌内部，只这些细菌能够生产药品（用细菌做生物反应器）。 129.1928年，英国细菌学家弗莱明发明抗生素。 130.生物分类的意义：了解生物的多样性，保护生物的多样性，使每个物种在生物分类上的位置一目了然，同时也进一步明确生物之间的亲缘关系。 131.生物分类主要是根据生物的相似程度（形态结构、内部构造、生理功能）把生物划分为种和属等不同的等级。分类的基本单位是种。 132.在被子植物中，花、果实和种子往往作为分类的重要依据。 133.每个界分为六个更小的等级，它们从从大到小依次是：界、门、纲、目、科、属、种。 134.两种生物之间共有的分类单位越多，它们的亲缘关系越近。 135.纲 < 亚门 < 门 136.分类登记越高，射干内务体间的差异越大，共同特征越少，所含生物数量越多。 137.生物多样性的内在形式是基因的多样式，外在形式是种类的多样性。 138.我国是裸子植物最丰富的国家，被称为“裸子植物的故乡”。 139.生物的各种特征是由基因控制的 140.生态系统的多阳性受到破坏就会导致生物种类的多样性和基因的多样性丧失。 141.自然条件下，平均2000年一种鸟类灭绝。平均8000年一种哺乳动物灭绝。 142.造成生物多样性面临威胁的原因有（1）生存环境改变和破坏；（2）掠夺式的开发利用；（3）环境污染；（4）生物入侵。 143.为保护生物多样性，相关的法律有《环境保护法》、《海洋环境保护法》、《森林法》、《草原法》、《渔业法》、《野生动物保护法》、《水土保护法》。（每个法律前要加“中华人民共和国”） 144.建立自然保护区分为：就地保护和圈地保护。 145.森林是全球50%~90%的陆生生物的家园。 146.珙桐是被子植物。银杉是裸子植物。

中国的高科技有哪些？ 高铁技术、飞机DSI进气技术、飞机隐形涂料技术、造船技术、超级计算机、载人深水潜航器技术、全球卫星定位技术、卫星发射技术、量子通信技术、电磁炮技术、激光对抗技术 现代高科技都有哪些 高能物理方面建立了自己的高能物理研究基地，有了最适合粲粒子物理能区工作的正负电子对撞机，在海拔5500米的甘巴拉山装置了超高能乳胶室，获得了反西格马负超子的发现、粒子物理的层子模型和赝矢量流部分守恒定律以及涛子质量的标定等成就。 在核物理方面，建成了1.5米重离子加速器，开展了低能重离子核物理研究，首次合成超铀元素锎等。此外还建造了1.5兆电子伏直线感应加速器、同步辐射装置、同位素分离器、受控核聚变装置和扫描隧道显微镜等科学研究设备以及大口径反光望远镜、太阳磁场望远镜、13.7毫米波射电望远镜、氢原子钟等天文仪器。 高科技有哪些 中国基础科学研究在经费十分困难的条件下仍有许多进展，在高能物理方面建立了自己的高能物理研究基地，有了最适合粲粒子物理能区工作的正负电子对撞机，在海拔5500米的甘巴拉山装置了超高能乳胶室，获得了反西格马负超子的发现、粒子物理的层子模型和赝矢量流部分守恒定律以及涛子质量的标定等成就。 在核物理方面，建成了1.5米重离子加速器，开展了低能重离子核物理研究，首次合成超铀元素锎等。此外还建造了1.5兆电子伏直线感应加速器、同步辐射装置、同位素分离器、受控核聚变装置和扫描隧道显微镜等科学研究设备以及大口径反光望远镜、太阳磁场望远镜、13.7毫米波射电望远镜、氢原子钟等天文仪器。 在基础研究领域取得了不少重要成果，如数理领域的哥德巴赫猜想、有限元法的标准算法、数学定理的机器证明、微分动力系统稳定性、分子轨道图形理论方法、暖云降水理论、地球内核旋转稍快的发现，生命科学领域的牛胰岛素合成、酵母丙氨酸转移核糖核酸合成、胰岛素三维结构与功能关系的研究、蛋白质功能基因的修饰、水稻基因物理图谱，还有彗星和小行星的发现、准晶体的发现、澄江化石群等古动植物化石的发现，在生物固氮和光合作用研究、东亚大气环流研究、古气候和古新星研究、黄河探源、雅鲁藏布江探险以及南极和北极的考察等方面都有众多收获。 技术进步的重要标志在于掌握高技术的能力。中国科学家和工程师掌握了制造原子弹、氢弹 、核发电和核辐射等核技术以及发射远程运载火箭、各种用途的人造地球卫星乃至宇宙飞船的技术，制造的电子计算机有10亿次巨型机、千万次向量机。数百万次超小型机以及曙光1号和曙光1000等高性能并行机，发展了时态逻辑语言、汉字语言信息处理系统、汉语语文转换系统等软件系统，研制了中文智能接口和高密度信息贮存装置，在量子计算和量子通讯方面也有了量子避错原理和量子隐形态实验可喜的进展。 在激光技术方面我们研制出“神光”等高功率的激光装置、半导体量子陷阱激光器、自由电子激光装置和1.35微米半导体激光器等激光系统并掌握了高速光导纤维通信技术。独创的双离子束外延机、3微米集成电路工艺的突破以及核工业机器人、六维机器人、爬壁机器人等多种机器人的制造和6000米水下机器人探海实验成功，代表了我们在精密制造方面的进步。 在生物技术方面，玉米和大豆的固氮、抗虫棉花、基因工程疫苗、试管婴儿和试管羊、人类基因在植物中的表达和高等动物克隆等生物技术成绩斐然。材料科学方面，高温超导体材料和纳米材料、高性能固体推进料、非线性晶体和激光晶体等的研究都取得可喜成就。 在技术科学方面还有复式燃烧理论、叶轮机械三元流动理论、冷压状态方程、齿轮动态整体误差理论、非线性系统的最优控制等有影响的理论成果。 工程方面的进步突出地表现在大型设备的制造能力上，中国已能制造12.5万千瓦双水内冷汽轮发电机组、17.5万千瓦低水头发电机组、50万千瓦高压输变电设备、200吨级电渣重熔炉、1.5万吨涤纶拉丝设备、24万吨尿素生产、30万吨合成氨设备、1000万吨级露天采矿设备 。 武汉和南京的长江大桥、长江葛洲坝和黄河小浪底两大水利枢纽以及正在兴建的三峡工程代表了桥梁和水坝的建设能力，万吨级巨轮、运7客机、高速公路建设和火车提速表现了交通运输方面的进展。 大庆油田的成功开发充分显示了中国自力更生方针的力量，喷气纺纱、合成橡胶表现了吸收和创新技术的能力。 农业进步的科学技术的贡献已经达到35%，在良种推广和耕作制度的改革方面进展巨大。籼型杂交水稻、鲁棉1号棉花、铁丰1......现在有什么高科技？ 高科技不是指机器而指的人的脑子，因为所谓的高科技是当时相比较而言，人们在不断的创新、改变高科技和减掉一些不必要的麻烦而已，人的脑子是无法创新和改变的所以说脑子是机器代替不了的。 高新科技有哪些 按照国家有关规定，高新技术范围如下： （一）微电子科学和电子信息技术。 （二）空间科学和航空航天技术。 （三）光电子科学和光机电一体化技术。 （四）生命科学和生物工程技术。 （五）材料科学和新材料技术。 （六）能源科学和新能源、高效节能技术。 （七）生态科学和环境保护技术。 （八）地球科学和海洋工程技术 （九）基本物质科学和辐射技术 （九）基本物质科学和辐射技术。 （十）医药科学和生物海学工程。 （十一）其它在传统产业基础上应用的新工艺、新技术。 最新高科技产品有哪些？ 一节5号电池能用20年 下面熬汤，利用熬汤产生的蒸汽，再放锅煮饭，饭的上面还能放锅做菜。昨日高交会上，一款高压节能原味锅吸引了不少市民的目光。这种锅采用的是特级不锈钢制作多层套接，当底层汤锅中的水分经加热后，产生大量的高温水蒸汽，再由特殊的气孔设计及不锈钢的导热保温特性，使蒸汽形成强大压力气流，迅速进入各层达到快速烹饪的效果。 “15分钟时间可以煮饭还能做出9道菜，蒸煮食物可节约70%%以上的时间及能源！”不过，据介绍，这种锅可不便宜，市场售价最高的达2000元。 手电筒不用电池，“摇啊摇啊”就摇亮。昨日，深圳某科技公司一款手电筒在高交会上引起不小轰动。记者看到，这款手电筒通体透明，里面没有电池，摇一摇，打开手电筒开关，手电筒就亮了。 “摇10下，这种手电筒就可用一天。”据现场一人士介绍，用时轻轻前后摇动电筒，1—2分钟便可产生电能，产生的电能可以用4个小时。当电量用完后，再摇一摇，手电筒就又“来电”。 这种手电筒可反复使用5000次，使用期长达9—10年。这究竟是什么原理？该人士解释，这是电池感应原理，照明“灯泡”为晶体管。 开车，最怕的就是光线时强时弱，不过高交会亮相的一款名叫晶望镜的产品可谓爱车“墨镜”。 这种爱车“墨镜”其实就是汽车遮阳板的升级换代产品。晶望镜用液晶制成，是具有11层复杂构造的智能变光系统，它能根据外界光线强弱在0.15秒内瞬间自动变色，能有效防止眩光，过滤有害光。 据介绍，驾车者还可根据外界光线强度及个人习惯，事先任意设定液晶视窗初始色度。 一般的电热毯本身有电流通过，不安全！昨日记者在高交会现场看到，北京一家公司推出的电热毯宣称不带电。 这种电热毯采用的是电子制冷芯片，不用任何冷热剂，通上直流电12伏就可达到制冷制热的效果。这种电热毯采用先进传导技术，本身没有电流通过，在使用过程中绝对安全可靠。 这种电热毯不仅能制热，还能当“凉席”，电热毯有个开关，红灯亮开始加热，绿灯亮就是制冷。据介绍，这种产品今年将在我市上饥。 “只用了10分钟，满头的白发就恢复了原有的乌黑。”昨日，来高交会参观的刘先生赶紧掏出100元购买了一瓶神奇的摩丝。记者注意到，这家位于展厅一楼的参展商展出的快速黑发摩丝引起了在场数百位参观者围观。 据参展商介绍，这种产品没有掺杂任何毒素，使用者只需将摩丝挤在梳子上，像平时梳头一样梳理一下，等上10分钟再清洗后，自己想要的发型颜色就出来了，每套价格也只需100元。 相貌平平的一节电池其使用寿命竟长达20年，而且在零下40度还能正常工作。昨日，深圳来渝参加高交会的一参展商以色列TADIRAM电池立刻引起了众多参观者的兴趣。据参展商介绍，一节这样的5号电池使用放电量可达5安培，每节电池价格要70—80元。 一块看似普通的投影屏幕，上面却有类似电脑操作界面的标志，点击这些标志和使用鼠标一样，除了显示投影文字和图表，老师在这块投影屏幕上还可以用一支专用笔直接写字，标识重点等。高交会上，沙区科委推出的这块神奇互动屏幕引来了大量观众围观。 据了解，这种投影屏幕相当于黑板和普通投影屏结合，老师可以用粗细两种电子笔迹标明重点和进行观点阐释。使用这种互动屏幕教学，老师学生都可以告别粉笔灰了。屏幕还可以自动录音、自动录屏，所有教学内容不会因为“擦黑板”而遗失，教学轻松多了。... 高科技有什么坏处? 世上之事，必有其两面性！只是其选择权在你的心中！高科技让人类的文明更深层次的发展，但是其也带来了许多负面影响！既然你能提出来！说明你正准备资料与他人辩论！其实，例子是数不胜数的，没有了汽车，就会大幅度减少车祸的死亡率！没有了电脑，就没了网络盗窃和许多为网络而痴迷的失足人群！没有了火药，就最大限度地减少了战争的伤亡率！没有了音响，就尽可能地降低了噪音的分贝！*****但我个人建议你，看到高科技优异的一面。 现在生活中的高科技有哪些 最出名的当然是联想的笔记本啦！联想笔记本是指联想集团生产的便携手提电脑。 2004年12月联想现场宣布以12.5亿美金收购IBM个人电脑业务，包括台式机、笔记本及个人产品研发和采购。其中6.5亿美元联想以现金形式支付。联想控股在集团占有45％股份，IBM占18.5%。联想未来5年使用IBM品牌，所有关于think的商标及技术。 在联想收购IBM个人电脑业务之后，由于之前IBM电脑遍布世界，所以联想也借此大举进军国际市场，并取得了比较满意的成绩。尤其是联想的笔记本业务，由于继承了前IBM广受好评的Think Pad系列笔记本，在世界笔记本市场，也占有一席之地。目前联想已成为全球前4大PC厂商。 [编辑本段]【产品应用】 联想作为国际奥委会全球合作伙伴，联想以先进和卓越的产品、技术和服务，为2008北京奥运打造了稳定的信息系统，成功支持2008北京奥运的顺利运行。 联想为2008北京奥运提供了30000件台式电脑、笔记本、服务器、桌面打印机、显示器等计算设备，并派出了一支580余人的联想奥运技术团队，坚守在各个奥运IT技术岗位。联想在奥运期间开设了7家联想网吧，为各国运动员、教练员、官员提供信息服务，助力各国媒体的新闻报道。联想在奥运期间为全球媒体提供多品牌电脑维修服务计划，一支40人的联想国际化服务团队全力保障全球2万多名媒体记者的笔记本电脑等IT设备正常运行。 联想信息技术和产品全面支持了奥运运营的各个层面：计时计分系统，赛场成绩系统、评论员信息系统，到信息分发系统；从比赛管理系统，人员安排和调度系统、审查系统，到认证制证系统；从交通系统到组委会信息系统等，都在联想设备上圆满运行。 国际奥委会主席罗格表示：“作为第一次服务奥运的中国企业，联想的表现让我们非常的满意，同时也非常欣喜。我们感谢联想为奥运会所做出的贡献。 ” [编辑本段]【区域平台】 打字不易，如满意，望采纳。 哪些行业与高科技有关 各行业都有高科技的身影啊,看你指的高科技是什么意思啊,叮高新电子生物农业工业畜牧业科技中的那类啊, 未来有哪些高科技？ 增强现实： 这项技术的发展大家有目共睹——谷歌眼镜，相关手机应用等等。各种产品应用杂乱繁多，但也充满了商机。 物联网：这个想法早就有了，但是最近才被大家所关注。通过云端来连接我们的所有机器——这并不仅限于我们的计算机、手机和平板电脑，还有冰箱、远程遥控装置、咖啡机等等。连100元都不用，大多数产品就能被连接到互联网上。但是由于物联网管理平台的不完善，使得这些产品并没有被大量的用于生活中。我们终将找到方法，来管理并且使用这些联系智能设备和生活用品、家俱的网络。这将是一个化零为整的过程——想要开发出一个成功的软件或平台需要花费大量的心血来整合且兼容不同的设备、平台和制造商。不少公司都有机会在云储存和数据管理的市场闯出一片天地。无线供电：在我们生活中电线、电缆和需要电线才能充上电的设备还是太多了！这些电线电缆在未来都可以被淘汰了，现在的公司、市场是时候跨出这一步了。无线充电技术已经实现了，虽然我不太清楚这一技术有些什么利弊，但大多数人都忽视了这一巨大机遇。网络传媒大 *** ：众所周知，许多传统媒体和新媒体公司都在努力地将线上关注度转化为利润。然而，人们不愿意去为大量不同的内容而零零散散的花费不少钱，付费专区这一模式能为这样的人群提供不小的便利。很有可能，在未来某一家公司，从各大报社、杂志社以不高的价钱买下一部分文章的版权，并且把这些文章放在网上呈现给用户。用户有机会以相对低价的年费来获取上百家报社的文章——比如用户可以花上几百元来买下一年的浏览权，或是以买点券卡的形式，来浏览这些出版社的文章。甚至某一利润分享机制会被用于解决如何在出版社、传媒公司之间分配利润。这个点子更像一个商业想法而非对未来的预测，而且在不少传媒领域已有先例（如BMG音乐俱乐部），从而解决了网络媒体的利润分配难题。（译者注：现在已有很多公司做到这一点了，国外有Spotify和Netflix，国内也有各大音乐和视频网站）5-7年间石墨烯：在所有纳米材料中，石墨烯最轻巧且最坚硬。只要我们有技术将石墨烯结合在其他材料里，人类就能打开进入新世界的大门。音频挖掘和语音识别、分析：Siri仍然很糟糕，但她将变得更聪明。手机支付：在美国，手机付款系统竟然还没普及，这太不可思议了。随着智能手机的普及，用现有的或是一种全新的电子货币来取代现金付款是大势所趋。现在确实有不少的手机付款体系，但是他们无一不是基于信用卡或是银行存款。我们需要的是一种新的付款系统，至今还没有一种全球化、并且足以取代现有货币体系的交易系统。随着新的付款体系的到来，一大批传统广告也会被取代。网络授课和网络合作教育机构：这将会渐渐地流行起来。提供大众教育的教育部门和教育系统已经非常的脆弱。现在能看到他被慢慢取代的趋势，被淘汰只是时间问题了，我对此已迫不及待。将来的线上教育系统不仅会更高效，性价比也会很高，让普通百姓节省大量的金钱和时间，但这也会成为提高国土安全性的催化剂。我希望让全国人民，包括最贫穷的区域，连接上高速宽带网络享受线上教育。大约7到10年后外层空间商业运输：现在，要是你想向太空中发射些什么，你需要提前六年预约，并且花费令人咋舌。随着发射到太空中的东西越来越多，比如商业太空航行，愈来愈多的人造卫星等等。在未来的五到十年，我预计像外层空间发送飞行器的时间和金钱成本将大大降低，外层空间运输公司也将会逐渐增加。外层空间管理及规范：现有的领空管理范围大概在离地20英里，在此之上，仍是大荒野。是谁管理者在太空中的飞船、卫星等等东西呢？每个国家都在管理著自家的飞行器，在加州范登堡空军基地的联合太空运行基地，24小时控......

高考理综网也有哦。

1. 高中生物多选题 答案可能是ABC 首先，这个研究成功点是生物组织培养，成年猪的动脉血管细胞，是一个成熟的动物体细胞。高中学过，动物体细胞不像植物体细胞那样具有全能性，但是动物体细胞的细胞核具有全能性。所以这个实验的思路，应该是将成年猪的动脉血管细胞的细胞核取出，放入“去核卵细胞中”（B选项正确），进行融合（或激活），形成一个新的具有分化功能的卵细胞（细胞核是猪动脉血管细胞核）。再将这个卵细胞放入新型生物反应器中，让其分化，从一个细胞变成多个细胞，进而变成组织（新的动脉血管）。其实这个过程就是和多利羊的过程相类似，所以应该属于“克隆”的过程（选项A），关键是激发猪动脉血管细胞核的全能性。个人认为C选项也正确。动物细胞只有细胞核具有全能性，成熟的动物细胞本身（成年猪动脉血管细胞）不具有发育成血管的可能。所以感觉D选项不完全正确。 能够确定的是AB一定对，C勉勉强强算对。 也有考虑不去不全面的地方，请指正。2. 高中生物多项选择题一道,24题,每一项都要详细解释 选：C.某同学感冒发热39°C伴随有轻度腹泻，可能是被病原体感染了，机体在免疫过程中，代谢活动比原来加强，消耗的能量增加，产热增加，甲状腺激素可加速体内物质的氧化分解，提高神经系统的兴奋性等作用。 A错：呼吸、心跳加快，是正确的。发烧是影响稳态的一个条件，发烧时机体会调动相应机制维持稳态的平衡，并不意味着发烧必然破坏稳定状态，所以不能说发烧是稳态失衡的表现。 B错：体温升高不等同于环境温度升高，你发过高热，体会过吧，汗液分泌开始是不是不会增多的，可能还发冷，但一测体温就高了。发了汗，体温就降了D错：人体供能先是糖类，所以糖元分解增强，以后脂肪分泌加快，再后来，蛋白质会分解增多，才有尿素合成增多。 3. 我要十道生物题选择题带答案 1一盆兰花，一只盛有浓NaOH溶液的烧杯，一只老鼠密封在一个透明的玻璃罩内。 将此装置放在阳光下，不一会，老鼠死了。引起老鼠死亡的原因是（ D） A。 装置内只有空气，没有食物，老鼠饥饿而死 B。 老鼠不能适应兰花的浓烈香味而死亡 C。 NaOH有强烈的腐蚀性，老鼠受腐蚀而死亡 D。 由于NaOH吸收了CO2，兰花不能进行光合作用，老鼠因缺氧而死 日啖荔枝三百颗，不辞长作岭南人，这是苏东坡的著名诗句。 产于我国南方的荔枝很甜，是因为其果肉细胞内糖分含量很高。这些糖分存在于果肉细胞的（C） A。 细胞质内 B细胞核中 C液泡中 D叶绿体 有经验的果农，在果树开花季节往往在果园放养蜜蜂，其目的是（B） A。 帮助消灭果树的害虫 B帮助果树进行传粉C。 促进和延长花的开放 D *** 子房快速发育。用下列四台显微镜观察洋葱表皮细胞，视野中细胞数目最多的是（A） A。 目镜5*和物镜8 * B目镜10*和物镜40*C 目镜15*和物镜 10* D目镜15*和物镜40*下列各项中，你认为属于激素调节的是 C A.食物误入气管引起剧烈咳嗽 B.看到酸杏流唾液 C.男同学在青春期喉结突出 D.强光射来时，迅速闭眼过去航海的水手容易得坏血病，是因为在长期的航海过程中不易得到新鲜的蔬菜水果，新鲜的蔬菜水果中富含（C） A、维生素A B、维生素B C、维生素C D、维生素D豌豆的高茎为显性基因（用D表示），矮茎为隐性基因（用d表示），下列亲本组合中可能出现矮茎的是（ B ） A、DD和Dd B、Dd和Dd C、DD和dd D、DD和DD 储存粮食时，为了降低其呼吸作用，应保持的条件是D A。 潮湿，适当增加氧气浓度 B。 潮湿，适当增加二氧化碳浓度 C。干燥，适当增加氧气浓度 D。 干燥，适当增加二氧化碳浓度在呼吸过程的哪一环节。 使动脉血变成了静脉血D A肺的通气 B。 肺泡内的气体交换 C。 气体在血液中的运输 D。 组织里的气体交换 关于人类生殖和发育过程的叙述，错误的是（C ） A.人体的生长发育开始于受精卵 B.胎儿通过胎盘、脐带从母体的血液里获得氧气和营养物质 C.身高和体重的迅速增加是青春期发育最突出的特征 D.第二性征是在性激素的作用下出现的。 4. 初一生物选择题50道,包括答案 1、栖息地的__和__是威胁生物生存的关键因素。目前，全球人口数量__，人类对自然资源的__及__，是破坏各种生物栖息地的主要因素。 2、每当秋末冬至，杨柳落叶，而松柏葱绿，这说明__。 （落叶树和针叶树都适应寒冷的环境） 3、如是秋天开花的菊花在“五一”开花，应____。 （增加黑暗时间） 4、限制生物在海洋中的分布，但不限制生物在陆地上分布的非生物因素是__、__。 （光、氧气） 5、生物与环境的关系是___。 （生物与环境互相作用） 6、影响植物蒸腾作用的因素，说出四个。 7、蒸腾作用的意义（三条）。 8、检测金鱼藻是否进行光合作用，最简单的方法是测定_ ___。 （氧气的释放） 9、不能进行光合作用的细胞是___。 （叶表皮细胞） 10、植物的呼吸作用的概念：细胞内__在__的参与下被分解成__和__，同时释放__的过程。 （有机物 氧 二氧化碳 水 能量） 火焰者/ty/炫 19:06:47 1、栖息地的__和__是威胁生物生存的关键因素。目前，全球人口数量__，人类对自然资源的__及__，是破坏各种生物栖息地的主要因素。 2、每当秋末冬至，杨柳落叶，而松柏葱绿，这说明__。 （落叶树和针叶树都适应寒冷的环境） 3、如是秋天开花的菊花在“五一”开花，应____。 （增加黑暗时间） 4、限制生物在海洋中的分布，但不限制生物在陆地上分布的非生物因素是__、__。 （光、氧气） 5、生物与环境的关系是___。 （生物与环境互相作用） 6、影响植物蒸腾作用的因素，说出四个。 7、蒸腾作用的意义（三条）。 8、检测金鱼藻是否进行光合作用，最简单的方法是测定_ ___。 （氧气的释放） 9、不能进行光合作用的细胞是___。 （叶表皮细胞） 10、植物的呼吸作用的概念：细胞内__在__的参与下被分解成__和__，同时释放__的过程。 （有机物 氧 二氧化碳 水 能量） 先给你十道题 5. 高一生物多项选择题 1下列有关生物模叙述正确的是： A膜的组成成份可以从内质网膜转移到高尔基体莫，再转移到细胞膜中 B各种生物莫的化学组成和结构相似 C生物莫是对体内所有莫结构的统称 D生物莫既各司其职，又相互协作，共同完成细胞的生理功能。 2绿色植物在暗室中长时间生活可以消耗的物质是： A 葡萄糖 B ATP C CO2 D O2 3让一只老鼠吸收含有放射性的氧（18O2）.让老鼠体内产生的物质不可能出现标记氧原子的是： A 丙酮酸 B CO2 C 水 D葡萄糖 4下列对酶特征妙叙正确的是：A活细胞产生的，具有催化作用的绝大多数蛋白质少数是RNA B酶的催化效率很高 C 一种酶只能催化一种或者一类反应 D酶在催化反应中本身也发生了反应 答案： 1 ABD C：生物膜应该是细胞内膜系统的统称，而不是体内 2 ABD 长时间的话无法进行光合作用，不能固定二氧化碳，但还有呼吸作用，所以会消耗ATP、葡萄糖、氧气 3AD O2在有氧呼吸第三阶段和[H]结合生成水 此水又参与有氧呼吸第二阶段三羧酸循环，生成C18O2 4 ABC 酶是催化剂当然反应不掉啦~ 6. 快 1.用32P标记一个DNA分子的两条链，让该DNA分子在31P的培养液中连续复制4次，则含32P的子代DNA分子个数是 A.1 B. 2 C.8 D.162.下列关于高等动物受精卵的叙述错误的是A.形成受精卵过程的实质是 *** 和卵细胞的核融合B.分裂方式是有丝分裂，DNA复制一次细胞分裂一次C.父本和母本对受精卵（子代）的遗传贡献完全相同D.受精卵中的染色体数与本物种体细胞中的染色体数一致3.普通小麦体细胞中有6个染色体组，用小麦的花粉培育成单倍体植株，单倍体植株体细胞 中的染色体组数是A.1个 B.2个 C.3个 D.6个4.细胞中的葡萄糖只有通过有氧呼吸才能产生的是A.丙酮酸 B.CO2 C.H2O D.ATP5.有关细胞膜的叙述中，最能体现细胞膜结构特点的是 A.选择透过性 B.主动运输 C.保护作用 D.内吞和外排6.为了促进根细胞对土壤溶液中矿质营养元素的吸收，生产中常用的有效措施是 A.适量施肥 B.适时摘心 C.适时松土 D.适时浇灌7.DNA分子上的某个基因片段含有1800对碱基，由它控制合成的蛋白质分子最多含有的氨基酸数为A.1800 B.900 C.600 D.3008.下列哪一组实验材料最适合探究不同温度对酶活性的影响 A.H2O2、过氧化氢酶 B.淀粉、淀粉酶C.A、B两项均合适 D.A、B两项均不合适9.小麦高秆（D）对矮秆（d）为显性.抗病（T）对易感病（t）为显性，两对基因可以自由组合。 用纯种的高秆抗病和矮秆易感病作亲本，F2中选育出矮秆抗病类型，其中能稳定遗传的概率为A.1/16 B.3/16 C.2/3 D.1/310.用纯种黄色圆粒豌豆（YYRR）和纯种绿色皱粒豌豆（yyrr）作亲本进行杂交，F1再进行自交，则F2中表现型与F1表现型相同的个体占总数的A.1/16 B.3/16 C.6/16 D.9/1611.与大棚种植蔬菜相关的措施及分析中，正确的是 A.是用农家肥，可提高大棚中Co2的浓度B. 加大蔬菜的种植密度，可不断提高蔬菜的产量C. 阴雨天适当提高大鹏内温度，可明显增加有机物的积累量D.用红色塑料薄膜代替五色塑料薄膜，可提高素菜的光合作用速率答案 DNA复制为半保留复制..一条双链复制后， 该双链的媒体条单链都组成子链， 所以只有一个DNA被32P标记， 所以只有两条单链有32P， 所以无论复制几次都好， 只有2个子代DNA有32P2. C..母本还贡献了细胞质DNA， 而父本没有3. C 单倍体的发育起点是配子..这个小麦体细胞有6个染色体组， 所以配子有3个染色体组， 所以单倍体植株有3个染色体组4. C 有氧呼吸和无氧呼吸第一阶段都产生丙酮酸， 并伴随有ATP生成 有氧呼吸肯定有二氧化碳产生， 而无氧呼吸中的酒精发酵也有二氧化碳产生.. 而水， 只是在有氧呼吸的第三阶段产生， 无氧呼吸不产生5. D 细胞膜的结构特点是具有一定的流动性， 功能特点才是选择透过性.. D选项中的内吞外排， 则体现了细胞膜的流动性6. C吧.. 对矿质离子的吸收是主动运输， 所以松土有助於有氧呼吸， 有助於产生能量， 有助于主动运输..7. C 1800对碱基， 转录出的mRNA有1800个碱基， 因为密码子有3个， 所以翻译出的蛋白质有600个氨基酸（不考虑终止密码子）8. B A选项中， 温度除了影响酶的活性外， 也影响了过氧化氢的分解速率..9. A F1的基因型是DdTt， 而要选择的是ddTT.. 由Dd产生dd 的几率是1/4， 有Tt产生TT几率是1/4， 所以是1/16 这题可用棋盘法..10. D F1 基因型是YyRr， 表现性是黄色圆粒豌豆.. 所以F2中的黄色圆粒豌豆是Y_R_， 由性状分离比得 9/16 具体是（3/4）*(3/4)=(9/16)11. A.. 农家肥中含有有机物， 在分解者分解作用下， 会产生二氧化碳 应合理密植， 该选项不科学 温度升高， 使呼吸作用强度变大， 消耗更多有机物 红色塑料膜可让红色透过， 无色塑料膜让五种颜色通过..光和色素可吸收蓝紫光和红光， 因此用无色塑料可是光和色素吸收更多光能。 7. 高中生物选择题的几种基本类型 高中生物选择题解题方法1排除法排除法即根据题干所给出的条件和提出的问题，将供选答案中不合理的答案逐个排除，余下的就是正确答案，这种方法适合于多种形式的选择题。 例1：下列哪一种生物的代谢类型在进化上有可能发生在能进行原始光合作用的生物之前（）a.红色硫细菌b.硝化细菌c.酵母菌d.蓝藻解析：原始光合作用之前的生物代谢类型为异养厌氧型。选项a的红色硫细菌高中教材没有提及，学生很可能会感到有些生疏；而其它3个选项的生物代谢类型学生则较为熟悉，因此可用排除法来解答此题。 选项b的硝化细菌为自养需氧型；选项c的酵母菌为异养兼性厌氧型；选项d的蓝藻为自养需氧型。由此可排除选项bcd，正确答案为a。 例2：下面关于减数分裂的叙述，正确的一组是（）①生物在生殖过程中都要进行减数分裂；②同源染色体的彼此分离发生在减数第二次分裂；③次级精母细胞中不存在同源染色体；④减数分裂过程中染色体的数目和dna分子的含量变化完全相同；⑤正常的减数分裂过程中，非同源染色体之间是自由结合的；⑥减数分裂过程中，四分体的数目和同源染色体的对数相等。a.①③⑤b.②④⑥c.②③⑥d.③⑤⑥解析：根据所学知识，很容易判断①错，这就排除选项a；②错，又排除选项bc。 正确答案为d。高中生物选择题解题方法2比较法生物学的很多概念生理过程相近但并不相同，通过比较法即可判断出其中的细微差别，解决问题时便能明辨对错，得出正确答案。 例3：在诱变育种的过程中，秋水仙素的作用是（）a.促使基因中遗传信息改变b.促使基因序列的改变c.抑制纺锤体的形成d.抑制dna的复制解析：诱变育种的原理是基因突变，秋水仙素既可以诱发基因突变，也可以诱发染色体变异。诱发基因突变促使了基因中的遗传信息改变，即促使基因中碱基的序列改变，包括碱基对的增添缺失等；而不是促使基因序列的改变。 诱发染色体变异是抑制纺锤体的形成，也促使了基因中遗传信息的改变。正确答案a。 例4：下列有关胚乳的发育的叙述，正确的一组是（）①由两个极核一个 *** 结合后发育而来；②受精后经较长时间休眠再发育；③受精后不经休眠就开始发育；④双子叶植物无胚乳，不存在胚乳发育问题；⑤种子形成初期都有胚乳，有些植物在胚乳形成以后营养被子叶吸收a.①②⑤b.①③④c.①③⑤d.①②④解析：由题不难看出②③，④⑤均相互对立，比较②③知③对；比较④⑤知⑤对。正确答案为c。 高中生物选择题解题方法3图示法有些试题的已知条件中，涉及的要素或环节较多，并且这些要素或环节之间的关系复杂，难以让人全面准确的把握。如果能将其转化成图解，就可以将已知条件涉及的各种要素或环节以及它们之间的相互关系显示的一目了然，解题时就不会由于没有思路而束手无策。 例5：已知dna的一条链中a+g/t+c=0.4，上述比例在其互补链和整个dna分子中分别是（）a.0.4和0.6b.2.5和1.0c.0.4和0.4d.0.6和1.0解析：（1）先根据题意画出图示，并标上符合已知条件的特殊值。410︹︹---a--g-----t---c-----已知单链---t--c-----a---g----互补单链（2）由图示可求出互补单链的t+c=4,a+g=10，则互补单链的a+g/t+c=10/4=2.5(3)因为整个dna分子中遵守碱基互补配对原则，即a=t,g=c，所以整个dna分子中a+g/t+c=1。 因此，正确答案为b。例6：某牛群中，基因型为aa的个体体色为红褐色；aa的个体体色为红色；aa的个体雄牛为红褐色，雌牛为红色。 一头红褐色的母牛生了一头红色小牛，这头红色小牛的性别应该是（）a.雄b.雌c.两性畸形d.无法确定解析：有很多同学在解答这道试题时，由于理不清头绪而无从着手。如果能首先将已知条件转化成图解，再根据图解就很容易解答这道试题。 已知条件可以转化以下两幅图解：图解1：基因型aaaaaa表现型红褐色红褐色红色红色性别雄或雌雄雌雄或雌图解2:p红褐色母牛（aa）雄牛f1红色小牛因此，正确答案为b。高中生物选择题解题方法4综合分析法对于一些不易直接判断出正确答案的选择题，常需要进行细致的分析严谨的推理正确的判断才可能得出正确答案，这种方法即称为综合分析法。 解答复杂的选择题多用此法。例7：在某色盲男孩的父母祖父母外祖父母中，除祖父是色盲外，其他人色觉均正常，这个男孩的色盲基因来自（）a.祖父b.祖母c.外祖父d.外祖母解析：色盲是隐性伴性遗传病，假设色盲男孩的基因型为xby，根据伴性遗传交叉遗传的特点，该男孩的色盲基因来自母亲，据其母亲色觉正常，可知母亲的基因型为xbxb，又根据外祖父色觉正常（无色盲基因），可知母亲的致病基因来自外祖母。 正确答案为d。

原核表达系统 表达调控方式 组成型,诱导型 表达产物定位 分泌型,不分泌型(细胞内,细胞膜,周质空间) 产物纯化方式 是否融合蛋白,是否一步亲和纯化 产物溶解状况 可溶,包含体,分泌型 在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌)，通过IPTG诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物，而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点：如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控，有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用，过量表达可能导致非生理反应，目的蛋白常以包涵体形式表达，导致产物纯化困难；而且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性较低 为克服上述不足，许多学者将原核基因调控系统引入真核基因调控领域，其优点是 ①根据原核生物蛋白与靶DNA间作用的高度特异性设计，而靶DNA与真核基因调控序列基本无同源性，故不存在基因的非特异性激活或抑制 ②能诱导基因高效表达，可达105倍，为其他系统所不及； ③能严格调控基因表达，即不仅可控制基因表达的“开关”，还可人为地调控基因表达量 因此，利用真核表达系统来表达目的蛋白越来越受到重视。目前，基因工程研究中常用的真核表达系统有酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。2RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。 RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆转录和PCR在同时为逆转录和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶，至少具有以下三种活性：1、 依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链2、 Rnase水解活性：水解RNA杂合体中的RNA3、 依赖DNA的DNA聚合酶活性：以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA 用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。实验方法如下http://show.bioon.com/protocol/smallclass.asp?typeid=1724&newstype=RT-PCR3 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。许多细菌除了染色体外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)（补充：部分质粒为RNA）。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进细菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。 目前，已发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的0.5%～3%。根据相对分子质量的大小，大致上可以把质粒分成大小两类：较大一类的相对分子质量是40×106以上，较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质，可以把质粒分为两类：一类是严紧型质粒，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细胞内只有1～2个质粒；另一类是松弛型质粒，当染色体复制停止后仍然能继续复制，每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关，某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型，而在变形杆菌内则属松弛型。 在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体，如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr)，并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点，不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切点，就会使抗四环素基因失活。这时，含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素，但对四环素敏感。没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素，而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似，只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对)。4 基因诊断（gene diagnosis）是以探测基因的存在，分析基因的类型和缺陷及其表达功能是否正常，从而达到诊断疾病的一种方法。它是继形态学、生物化学和免疫学诊断之后的第四代诊断技术，它的诞生与发展得益于分子生物学理论和技术的迅速发展。 常用基因诊断技术： 一、Southern印迹法（Southern blot） 基本原理是：硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强，当电泳后凝胶经过DNA变性处理，覆以上述滤膜，再于其上方压上多层干燥的吸水纸，借助它对深盐溶液的上吸作用，凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的DNA，将原位地固定于膜上。 当含有特定基因片段已原位转移到膜上后，即可与同位素标记了的探针进行杂交，并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行，袋内放置上述杂交滤膜，加入含有变性后探针的杂交溶液后，在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜上的单链基因DNA分子按碱基到互补原理充分结合。结合是特异的，例如只有β珠蛋白基因DNA才能结合上β珠蛋白的探针。杂交后，洗去膜上的未组合的探针，将Ⅹ线胶片覆于膜上，在暗盒中日光进行放射自显影。结合了同位素标记探针的DNA片段所在部位将显示黑色的杂交带，基因的缺失或突变则可能导致带的缺失或位置改变。 二、聚合酶链反应 近年来，基因分析和基因工程技术有了革命性的突破，这主要归功于聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）的发展和应用。应用PCR技术可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小时内体外扩增数十万至百万倍。扩增的片段可以直接通过电泳观察，也可用于进一步的分析。这样，少量的单拷贝基因不需通过同位素提高其敏感性来观察，而通过扩增至百万倍后直接观察到，而且原先需要一、二周才能作出的诊断可以缩短至数小时。 三、扩增片段长度多态性 小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后电泳来检出，并用于致病基因的连锁分析，这种诊断方法称为扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP）连锁分析法。PCR扩增后，产物即等位片段之间的差别有时只有几个核苷酸，故需用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鉴定。此法多用于突变性质不明的连锁分析. 四、等位基因的特异寡核苷酸探针诊断法 当基因的突变部位和性质已完全明了时，可以合成等基因特异的寡核苷酸探针（allele-specific oligonucleotide,ASO）用同位素或非同位素标记进行诊断。探针通常为长20bp左右的核苷酸。用于探测点突变时一般需要合成两种探针，与正常基因序列完全一致，能与之稳定地杂交，但不能与突变基因序列杂交；另一种与突变基因序列一致，能与突变基因序列稳定杂交，但不能与正常基因序列稳定杂交，这样，就可以把只有一个碱基发生了突变的基因区别开来. PCR可结合ASO，即PCR－ASO技术，即先将含有突变点的基因有关片段进行体外扩增，然后再与ASO探针作点杂交，这样大大简化了方法，节约了时间，而且只要极少量的基因组DNA就可进行。 五、单链构象多态性诊断法 单链构象多态性（signle strand conformation polymorphism,SSCP）是指单链DNA由于碱基序列的不同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同，从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查基因突变时，通常在疑有突变的DNA片段附近设计一对引物进行PCR扩增，然后将扩增物用甲酰胺等变性，并在聚丙烯酰胺凝胶中电泳，突变所引起的DNA构象差异将表现为电泳带位置的差异，从而可据之作出诊断。

就利用AD和BD之间的位置接近，能够是某一报告基因激活而表现出某一特性而得到鉴定。 将检测蛋白结合到AD上，诱饵蛋白结合到BD上，如果检测蛋白与诱饵蛋白结合则AD和BD靠近，从而使BD结合到UAS上，AD结合到转录起始位点，使报告基因激活，显现出一些特性，而使人能够通过这些特性判断这两种蛋白有无结合能力。若无此特性出现则无结合力。

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开，仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。中文名酵母双杂交系统原理类型系统原理 如GAL4英文DNA-activating domain快速导航优点应用二类载体酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达，其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。例如GAL4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequence)， 而GAL4-ad没有。因此，在GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆来自SV40的T-抗原的一段序列作为核定位的序列。优点双杂交系统的另一个重要的元件是报道株。报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞。最常用的是酵母细胞， 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点:〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的DNA－结合结构域(如GAL4-bd， LexA-bd)； 另一个基因融合到转录激活结构域(如GAL4-ad， VP16)。激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中，蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达(如lacZ)，从而可分析蛋白间的结合作用。应用酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用，具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强，后者又与启动子DNA结合， 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。 同时， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开，仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。

双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。80年代的工作表明，转录激活因子在结构上是组件式的（modular）, 即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成, 其中有DNA结合结构域（DNA binding domain，简称为BD）和转录激活结构域（activation domain，简称为AD），它们是转录激活因子发挥功能所必需的。前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游，转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，启动它所调节的基因的转录。两个结构域不但可在其连接区适当部位打开， 仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。单独的BD虽然能和启动子结合，但是不能激活转录。而不同转录激活因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性激活结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并激活转录。主要有二类载体： a 含DNA -binding domain的载体； b 含DNA-activating domain的载体。一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的DNA－结合结构域(如GAL4-bd， LexA-bd）； 另一个蛋白的基因融合到转录激活结构域（如GAL4-ad， VP16）。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达， 其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。例如GAL4-bd具有核定位序列（nuclear-localization sequence）， 而GAL4-ad没有。因此， 在GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆来自SV40的T-抗原的一段序列作为核定位的序列。目前研究中常用binding-domain基因有：GAL4（1-147）; LexA (E coli转录抑制因子）的DNA-bd编码序列。常用的activating-domain基因有：GAL4（768-881）和疱疹病毒VP16的编码序列等。双杂交系统的另一个重要的元件是报道株。报道株指经改造的、含报道基因（reporter gene）的重组质粒的宿主细胞。最常用的是酵母细胞， 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点： 〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中， 蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达（如lacZ）， 从而可分析蛋白间的结合作用。酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用， 具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强， 后者又与启动子DNA结合， 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。同时， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。

酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达，其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。例如GAL4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequence)， 而GAL4-ad没有。因此，在GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆来自SV40的T-抗原的一段序列作为核定位的序列。

酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来，通过对报告基因的表型检测，分析DNA与蛋白之间的相互作用，以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性，现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转录因子。酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理，克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法。其理论基础是：许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成，因此可构建各种基因与AD的融合表达载体，在酵母中表达为融合蛋白时，根据报道基因的表达情况，便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。理论上，在单杂交检测中，任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白。

与题目不符，但希望能作为参考 一、实验原理酵母菌的生活史属于双单性类型，它们的单倍体细胞和二倍体细胞一般都能进行无限制的分裂。以单倍体细胞为主的酵母菌称为单倍体酵母，例如粟酒裂殖酵母（Schizosaccharamycespombe）。以二倍体细胞为主的酵母菌称为二倍体酵母，如啤酒酵母（又称面包酵母，Saccharomycescerevisiae）。这两种酵母常用作遗传学研究的材料，而啤酒酵母在酿酒工业和食品工业中又有很大的应用价值。本实验用异宗配合型的啤酒酵母的单倍体菌株进行杂交实验。任何一株酵母菌，如果使二倍体的营养细胞处于形成孢子的条件下，都会发生减数分裂，生成四分体和子囊。每个子囊孢子具有四分子核，正常情况下子囊中有4个子囊孢子，其中有2个a和2个α，a和α表示两种相对的接合型。具有这两种接合型的子囊孢子萌发生长成单倍体的菌株，不同接合型的单倍体菌株细胞接合生成二倍体菌株。具有这样生活史的酵母菌称为异宗配合型酵母。异宗配合型啤酒醇母的生活史见图11－1。单倍体菌株分属a和α两种接合型，是受一对等位基因a和α控制的，这对等位基因的座位在第三连锁群靠近着丝粒的地方。在光学显微镜下观察酵母的染色体是十分困难的，但借助于电子显微镜，对酵母菌的细胞学已了解得较多了。现已知啤酒酵母具有17个连锁群（n=17）。两个属于不同接合型的营养缺陷型的酵母单倍体菌株，在基本培养基上都不能形成菌落。当它们杂交形成二倍体杂种细胞，就能在基本培养基上生长。二倍体杂种细胞在形成子囊孢子过程中，发生染色体重组，而使产生的子囊孢子出现重组性状。二、实验目的通过酵母菌杂交实验了解异宗配合型啤酒酵母的生活史和基因自由组合定律，掌握酵母菌杂交的基本方法。三、实验材料1.啤酒酵母单倍体腺嘌呤缺陷型（ade-），接合型为a；2.啤酒酵母单倍体组氨酸缺陷型（Hisl-），接合型为α。四、实验器具和药品1.用具：试管，离心管，离心机，吸管，培养皿，三角烧瓶，涂布棒，石英砂。2.药品：生理盐水（0.85克NaCl溶于100毫升蒸馏水中，15磅压力下消毒15分钟），纤维素酶或蜗牛酶。3.培养基：（1）完全液体培养基：蛋白胨2克，酵母浸母汁1克，葡萄糖2克，水100毫升，pH6.0，8磅压力下灭菌30分钟。（2）完全固体培养基：在完全液体培养基中加2％琼脂。（3）基本液体培养基：葡萄糖10克，（NH4）2SO41克，K2HPO40.125克，KH2PO40.875克，KI*母液1毫升，MgSO4·7H2O0.5克，CaCl2·2H2O0.1克，NaCl0.1克，微量元素母液**1毫升，维生素母液***1毫升，水1000毫升，pH5.3，8磅压力下灭菌30分钟。*KI母液：10毫克KI于100毫升水中。**微量元素母液：H3PO41毫克，ZnSO4·7H2O7毫克，CuSO4·5H2O1毫克，CoCl2·6H2O5毫克，水100毫升。***维生素母液：烟碱酸40毫克，维生素B140毫克，肌醇200毫克，核黄素20毫克，对-氨基苯甲酸20毫克，吡哆醇40毫克，泛酸40毫克，生物素0.2毫克，水100毫升。（4）基本固体培养基：在基本液体培养基中加2％琼脂。（5）产孢子培养基：CH3COONa8.2克，KCl1.86克，吡哆酵母液*1毫升，泛酸母液**1毫升，生物素母液***1毫升，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。*吡哆醇母液：20毫克吡哆醇/100毫升水。**泛酸母液：20毫克泛酸/100毫升。***生物素母液：2毫克生物素/100毫升。（6）补充培养基：a.基本固体培养基100毫升加组氨酸3.5毫克。b.基本固体培养基100毫升加腺嘌呤3毫克。五、实验步骤1.取盛有完全固体培养基斜面的试管4支。把ade-和Hisl-两菌种各接种在二支斜面上。30℃温箱中培养24小时。2.用5毫升生理盐水洗下一支ade-斜面上的菌，再倒入另一支ade-试管中，洗下的菌最后倒入无菌离心管中。另取5毫升生理盐水洗下Hisl-二支试管斜面的菌，倒入无菌离心管中。这样制成的菌液，浓度约108/毫升。3.两亲本菌液各吸0.5毫升，放入5毫升完全液体培养基中，30℃静止培养2小时。4.离心（3000转/分，3分钟），30℃静止培养半小时。5.倒去上清液，打匀管底菌块，再加入6毫升新鲜完全液体培养基，30℃培养过夜。6.离心，倒去上清液。再加6毫升新鲜完全液体培养基，洗一次，离心，倒去上清液。7.将离心管中的沉淀菌接种在产孢子培养基斜面上，30℃培养2—3天。在显微镜下观察杂交后形成的子囊，可见其中有4个子囊孢子。8.测定子囊孢子的表型推断其基因型：（l）在长有子囊的斜面上加基本培养液2毫升，用接种环将子囊刮下，倒入无菌离心管中。（2）在55°—60℃的恒温水浴中加热15分钟，杀死酵母菌的营养体，即单倍体细胞。离心，倒去上清液，加生理盐水到原体积，形成子囊悬液。（3）把孢子悬液倒入消毒过的盛有石英砂的三角烧瓶中，振荡5分钟，使子囊孢子散出，成为子囊孢子悬液。（4）取打散的子囊孢子悬液0.1毫升涂布在完全培养基培养皿上，30℃培养48小时。（5）影印培养：以上面的培养皿为原始培养皿，依次影印：a.基本培养基；b.腺嘌呤补充培养基；c.组氨酸补充培养基；d.完全培养基。30℃培养48小时。（6）生长谱鉴定：a.从原始培养皿上挑取各个已经初步鉴定的菌落，接种在完全培养基斜面上。同时接种在有5ml液体完全培养基的离心管中，30℃培养48小时。b.离心（3000转/分，3分钟。），倒去上清液，打匀沉淀，然后离心洗涤三次，最后加生理盐水至原体积。C.吸取菌液0.1毫升，移至灭过菌的空培养皿中。然后倒入融化后冷至40°—50℃的固体基本培养基，摇匀，待凝。各做1皿。d.在每一培养皿的皿底划分四格，两格放少量组氨酸结晶粉末，另两格放少量腺嘌呤的结晶粉末。然后放到30℃温箱培养48小时。e.观察生长情况，营养缺陷型菌株会在所需物质的周围长出来。如需要两种物质，就只能在两种物质都扩散到的地方生长。操作步骤见图11-2。9.实验步骤说明：（1）步骤3—6，是为了用营养丰富的培养基培养好的新鲜细胞，并使不同接合型的细胞充分接触，形成合子，为产生孢子创造条件。（2）步骤7中，由于酵母在产孢子培养基上不会增殖，所以要求接种足够多的细胞，使杂交形成的子囊不至于过少。（3）步骤8（3），要从子囊中取得子囊孢子，也可用蜗牛酶充分处理子囊后，用超声波处理使子囊孢子充分分散。蜗牛酶处理温度为30°—37℃，15—30分钟。没有蜗牛酶，用石英砂振荡，也能使子囊壳破碎，散出子囊孢子。（4）酵母菌是单细胞真菌，不形成菌丝，所以在步骤8（5）中可采用影印方法。六、实验结果1.影印结果：能生长用“＋”表示，不能生长用“—”表示，并计算菌落数。2.生长谱鉴定：3.影印与生长谱鉴定结果相比较，看结论是否一致。4.实验结果说明：本实验用的啤酒酵母营养缺陷型单倍体菌株，有关的ade和Hisl基因属于不同的连锁群，是两对基因的自由组合。因此在实验结果中，单倍体基因型的比例应为＋＋∶ade-∶Hisl-∶ade-Hisl-＝1∶1∶1∶1。单倍体菌株的表型比也应为1∶1∶1∶1。表型分离比直接反映了基因型的分离比。

题目太大了

初中生物知识点总结第一单元：生物和生物圈1、科学探究一般包括的环节：提出问题、作出假设、制定计划、实施计划、得出结论、表达交流2、生物的特征 1)生物的生活需要营养：绝大多数植物通过光合作用制造有机物（自养）；动物则从外界获取现成的营养（异养）。2）生物能进行呼吸。3）生物能排出身体内的废物。动物排出废物的方式：出汗、呼出气体、排尿。植物排出废物的方式：落叶。4）生物能对外界刺激做出反应——应激性。例：斑马发现敌害后迅速奔逃。含羞草对刺激的反应。5）生物能生长和繁殖。6）除病毒以外，生物都是由细胞构成的。3、生物圈的范围：大气圈的底部、水圈的大部和岩石圈的表面。4、生物圈为生物的生存提供的基本条件：营养物质、阳光、空气和水、适宜的温度和一定的生存空间。5、影响生物的生存的环境因素：6、生物对环境的适应和影响：7、生态系统的概念和组成 概念：在一定地域内生物与环境所形成的统一整体叫做生态系统。 组成：包括生物部分和非生物部分。生物部分包括生产者、消费者和分解者。非生物部分包括阳光、水、空气、温度等8、食物链和食物网：9、列举不同的生态系统：森林生态系统、草原生态系统、海洋生态系统、淡水生态系统、农田生态系统等，生物圈是最大的生态系统。第二单元10、利用显微镜观察装片11、细胞是生物生命活动的基本结构和功能单位。12、植物细胞特有的结构：细胞壁、叶绿体和液泡。 13、洋葱表皮细胞装片的制作和观察14、口腔上皮细胞装片的制作和观察15、细胞膜的功能：让有用的物质进入细胞，把其他物质挡在细胞外面，同时，还能把细胞内产生的废物排到细胞外。16、线粒体和叶绿体是细胞里的能量转换器17、细胞核在生物遗传中的作用18、细胞通过分裂产生新细胞：分裂时，细胞核先由一个分成两个，随后，细胞质分成两份，每份各含有一个细胞核。最后，在原来的细胞的中央，形成新的细胞膜，植物细胞还形成新的细胞壁。于是，一个细胞就分裂成为两个细胞。19、细胞分化形成组织。20、人体的结构层次：细胞→组织→器官→系统→人体21、植物体的结构层次：细胞→组织→器官→植物体（植物体无系统）22、绿色开花植物的六大器官：根、茎、叶（属于营养器官）、花、果实、种子（属于生殖器官）23、只有一个细胞的生物体酵母菌、草履虫、衣藻、眼虫、变形虫等都是单细胞生物，能独立生活，有一切生理活动。 赤潮形成的原因：水体富营养化，单细胞生物大量繁殖。24、病毒的形态结构和生命活动的特点 （1）种类：按寄生细胞分为动物病毒、植物病毒和细菌病毒（噬菌体） （2）结构：有蛋白质外壳和遗传物质（核酸）组成。没有细胞结构。 生活：必须寄生在活细胞中。第三单元27、区分常见的藻类、苔藓和蕨类植物。28、区分常见的裸子植物和被子植物29、种子的主要结构（菜豆种子和玉米种子的异同点） 相同点 不同点菜豆种子 有种皮和胚 无胚乳，营养物质贮藏在子叶里。子叶两片。玉米种子 有种皮和胚 有胚乳，营养物质贮藏在胚乳里。子叶一片。在玉米剖面上滴一滴碘液，胚乳被染成蓝色30、种子萌发的条件31、种子萌发的过程：先吸收水分（运输营养物质的需要），胚根突破种皮，形成根，胚轴伸长，胚芽发育成茎和叶。32、植株的生长：33、桃花的结构：花柄、萼片、花瓣、雌蕊（柱头、花柱、子房）、雄蕊（花药、花丝）。34、果实和种子的形成35、根适于吸水的特点：根吸水的部位主要是根尖的成熟区。成熟区生有大量的根毛。导管的功能：运输水分和无机盐。 水是由导管从下往上运输，营养物质由筛管从上往下运输。36、蒸腾作用：气孔是植物蒸腾失水的门户，也是气体交换的窗口。气孔由一对保卫细胞组成。 蒸腾作用的意义：促进植物体对水分的吸收；促进植物体对水分和无机盐的运输；降温。37、光合作用：38、植物的呼吸作用第四单元39 现代类人猿和人类的共同祖先是森林古猿。40男性和女性生殖系统的结构和功能男性：睾丸——产生精子，分泌雄性激素女性：卵巢——产生卵细胞，分泌雌性激素 子宫——胚胎发育的场所，胎儿与母体物质交换的场所是胎盘 输卵管——受精的场所41青春期的身体变化（1）身高突增，神经系统以及心脏和肺等器官功能也明显增强。（2）性器官迅速发育：男孩出现遗精，女孩会来月经。42人体需要的主要营养物质六类营养物质：糖类、脂肪、蛋白质、水、无机盐和维生素。44人体消化系统的组成：45食物的消化和营养物质的吸收过程口腔 糖类开始消化的地方 唾液淀粉酶胃 蛋白质开始消化的地方 胃蛋白酶小肠 糖类、蛋白质、脂肪都能消化 消化糖类、脂肪、蛋白质的酶46关注食品安全。47人体呼吸系统的组成呼吸系统由呼吸道和肺组成的。47．肺泡与血液的气体交换：48血液的成分和功能49三种血管的结构和功能血管种类 概念和功能 管壁动脉 送血离心 管壁厚，弹性大，管内血液流速快静脉 送血回心 管壁薄，弹性小，管内血液流慢毛细血管 连通于最少的动脉与静脉之间的血管，血液和细胞间物质交换的场所 管壁薄，由一层上皮细胞构成，管内血液流速最慢50心脏的结构和功能（P68图）51人体的体循环和肺循环（P70图）52区别动脉血和静脉血53输血、血型和无偿献血54人体泌尿系统的组成：肾脏（产生尿液）、输尿管、膀胱（暂存尿液）、尿道55尿液的形成和排出过程。56.眼球的结构和视觉的形成:57.神经系统的组成和功能：神经元是构成神经系统的结构和功能的基本单位，具有接受刺激、产生兴奋、传导兴奋的作用。58.神经调节的基本方式和反射弧的结构： 神经调节的基本方式是反射。反射的结构基础是反射弧，59.人体内几种激素的作用：外分泌腺：有导管 唾液腺、汗腺内分泌腺：直接进入血液循环 垂体、甲状腺、胸腺、胰岛和性腺（2）激素：由内分泌腺的腺细胞所分泌的，对身体有特殊调节作用的微量化学物质。内分泌腺 分泌激素 作用 症状甲状腺 甲状腺激素 中枢神经系统的发育和功能，提高神经系统的兴奋性。 呆小症、甲亢、地方性甲状腺肿垂体 生长激素 促进骨的发育，调节生长发育。 侏儒症、巨人症和肢端肥大症胰岛 胰岛素 调节糖代谢，降低血糖浓度。 糖尿病、低血糖症状60.人类活动对生物的影响：（1）乱砍滥伐，开垦草原，使生态环境遭受严重破坏，水土流失加重，还会引起沙尘暴。（2）空气污染会形成酸雨。（3）水污染会破坏水域生态系统。（4）外来物种入侵会严重危害本地生物。（5）人类活动也会改善生态环境。第五单元动物按有无脊柱，可分为脊椎动物和无脊椎动物两大类。动物已知150万种，其中昆虫100万多种，是种类最多的类群。61. 鱼类：靠尾部的摆动和鳍的协调游泳，躯干部和尾部的摆动产生前进的动力，胸鳍、腹鳍和背鳍维持鱼的平衡，尾鳍控制运动的方向；鳃是鱼的呼吸器官，鳃丝密布毛细血管，可吸收溶解在水中的氧气。卵生。变温动物。 腔肠动物：有口无肛门。如：海葵、海蜇、珊瑚虫等 软体动物：身体柔软靠贝壳来保护。如：章鱼、乌贼、河蚌、田螺等甲壳动物：体表长有较硬的甲。如：虾、蟹、水蚤等62. 蚯蚓：1、生活在富含腐殖质的湿润的土壤中。2、以植物枯叶、朽根等为食。3、通过肌肉和刚毛的配合使身体蠕动（在粗糙纸上比玻璃板运动快）；身体分节使躯体的运动更灵活。4、靠可以分泌黏液、始终保持湿润的体壁来呼吸。5、是环节动物，此类还有沙蚕、水蛭等63.哺乳动物的主要特征：体表被毛；牙齿有门齿、犬齿、臼齿的分化；体腔内有膈；用肺呼吸；心脏有四腔；体温恒定；大脑发达；多为胎生、哺乳。兔与植食性相适应的特点：门齿（切断食物）、臼齿（磨碎食物）发达，无犬齿（撕裂食物），盲肠发达。64.空中飞行的动物：65. 骨胳肌的结构和特性：66.按照行为的获得方式可分为动物的先天性行为和学习行为：67.动物在自然界中的作用：第六单元68.细菌的形态结构和生殖方式69.霉菌和蘑菇的营养方式：细胞内没有叶绿体，利用现成有机物，从中获得生命活动所需要的物质和能量。70.细菌和真菌的区别：细菌体内没有成形细胞核真菌：细胞内有真正的细胞核，孢子生殖。71.细菌和真菌在物质循环中的作用72．微生物与人类生活：73 植物分类比较形态结构，被子植物中，花、果实、种子是重要依据。动物分类比较形态结构、生理功能。74、分类单位：界、门、纲、目、科、属、种。基本单位：种。分类单位越大，包含生物类别越多，生物间的相似程度越低、亲缘关系越远；分类单位越小，则相反。75、生物的多样性包括生物种类的多样性、基因的多样性（一个物种是一个基因库）和生态系统的多样性。种类多样性的实质是基因的多样性。我国是裸子植物的故乡。苔藓、蕨类、种子植物居世界第三位。76、生物多样性面临威胁的原因：滥砍乱伐、滥捕乱杀、环境污染、外来物种的入侵等。最有效措施是建立自然保护区。77、保护生物的栖息环境，保护生态系统的多样性，是保护生物多样性的根本措施，建立自然保护区是保护生物多样性最为有效的措施。第七单元 生物圈中生命的延续和发展 第一章 生物的生殖和发育 一、 植物的无性生殖和有性生殖二、 昆虫的生殖和发育1．完全变态: 在由受精卵发育成新个体的过程中, 幼虫与成体的结构和生活习性差异很大,这种发育过程叫完全变态发育. 卵→幼虫→蛹→成虫。举例：家蚕、蜜蜂、蝶、蛾、蝇、蚊2．不完全变态:卵→若虫→成虫。举例：蝗虫、蝉、蟋蟀、蝼蛄、螳螂三、 两栖动物的生殖和发育过程1、青蛙发育过程：雄蛙鸣叫→雌雄蛙抱对→蛙的卵块（体外受精）→蝌蚪→青蛙2、青蛙发育的四个时期：受精卵、蝌蚪、幼蛙、成蛙。3、青蛙的幼体生活在水中，用鳃呼吸，成体生活在陆地，也能生活在水中，用肺呼吸，兼用皮肤辅助呼吸。导致两栖动物分布范围和种类少的原因是：两栖动物的生殖和幼体发育必须生活在水中，幼体经变态发育才能上陆。4、环境变化对两栖动物繁衍的影响：导致两栖动物生殖和繁育能力下降。出现畸形蛙的原因：水受到污染。四、鸟类的生殖和发育过程1、鸟卵的结构：胚盘里面含有细胞核。卵壳和壳膜——保护作用，卵白——营养和保护作用，卵黄——营养作用。胚盘——胚胎发育的场所。卵黄、卵黄膜、胚盘是一个卵细胞。2、鸟类的生殖和发育过程：求偶、交配、筑巢、产卵、孵卵、育雏。第二章 生物的遗传和变异一、基因控制生物的性状1、遗传是指亲子间的相似性，变异是指亲子间和子代间的差异。生物的遗传和变异是通过生殖和发育而实现的；2、性状：生物的形态结构、生理特征和行为方式。人体常见的遗传性状：耳垂、舌头、眼皮、鼻尖、大拇指、酒窝。3 基因控制生物的性状。例：转基因超级鼠和小鼠。4 生物遗传下来的是基因而不是性状。5、 染色体、DNA和基因的关系：基因是染色体上能够控制生物性状的DNA片断，DAN上有许多基因。在生物的体细胞（除生殖细胞外的细胞中）中，染色体成对存在，基因也是成对存在的。二、生殖过程中染色体的变化三、基因在亲子代间的传递基因经精子或卵细胞传递。精子和卵细胞是基因在亲子间传递的“桥梁”。亲代的基因通过生殖活动传给子代的。子代体细胞中的每一对染色体，都是一条来自父亲，一条来自母亲。由于基因在染色体上，因此，后代就具有了父母双方的遗传物质。四、基因的显性和隐性1、 相对性状有显性和隐性之分。2、隐性性状基因组成为:dd 显性性状基因组称为：DD或 Dd4．我国婚姻法规定：直系血亲和三代以内的旁系血亲之间禁止结婚。因为这样，后代换遗传病的几率加大。五、人的性别遗传 1、人类的性别，一般是由性染色体决定的。性染色体有X染色体和Y染色体，一对性染色体为XX时为女性，一对性染色体为XY时为男性。2、女性排出一个含X染色体的卵细胞。精子的性染色体有两种，一种是含X染色体的，一种是含Y染色体的。它们与卵细胞结合的机会均等。因此生男生女机会均等。六、生物的变异1．生物性状的变异是普遍存在的。变异首先决定于遗传物质基础的不同，其次与环境也有关系。因此有可遗传的变异和不遗传的变异。2．人类应用遗传变异原理培育新品种例子：人工选择、杂交育种、太空育种（基因突变）第三章 生物的进化一、地球上生命的起源：了解生物进化的主要历程和总趋势1、植物进化的历程原始藻类?→原始藓类→原始蕨类→原始种子植物（先裸子植物后被子植物）2、动物进化的历程原始单细胞动物→原始无脊椎动物（腔肠、扁形、线形、环节、软体、节肢）→古代的鱼类→两栖类→爬行类→鸟类、哺乳类3、生物进化的总体趋势，是由简单到复杂、由低等到高等、由水生到陆生。三、生物进化的原因达尔文的自然选择学说：过度繁殖、生存斗争、遗传变异、适者生存第八单元一、传染病1、引起传染病的病原体有：细菌、病毒、寄生虫等传染病具有传染性、流行性2、传染病流行的三个基本环节（1）传染源 指能够散播病原体的人或动物；（2）传播途径 如空气传播、饮食传播、生物媒介传播、接触传播等；（3）易感人群 指对某种传染病缺乏免疫力而容易感染该病的人群。二、免疫1．人体的三道防线:2．抗体：病原体侵入人体后，刺激淋巴细胞产生的一种抵抗该病原体的特殊蛋白质。3．抗原：引起人体产生抗体的物质（如病原体等）4.特异性免疫与非特异性免疫非特异性免疫（先天性免疫）：生来就有的，对多种病原体发挥作用，如人体第一、二道防线特异性免疫（后天性免疫）：生活中逐渐建立的，针对某种特定病原体发挥作用，如人体第三道防线5．免疫的功能：识别、监视、自我稳定三、安全用药常识（1）安全用药是指根据病情需要，在选择药物的品种、剂量和服用时间等方面都恰到好处，充分发挥药物的最佳效果，尽量避免药物对人体所产生的不良反应或危害。（2）药物可以分为处方药和非处方药。非处方药简称为OTC，适于消费者容易自我诊断、自我治疗的小伤小病。（3）使用任何药物之前，都应该仔细阅读使用说明，了解药物的主要成分、适应症、用法和用量、药品规格、注意事项、生产日期和有效期等，以确保用药安全。4．120急救 5．人工呼吸 6．人工胸外心脏挤压7．出血和止血：外出血，内出血，四、健康一、评价自己的健康状况1．健康是指一种身体上、心理上和社会适应方面的良好状态．2．保持愉快的心情：心情愉快是青少年心理健康的核心。二、调节自己情绪的方法：转移注意力；选择合适的方式宣泄烦恼；自我安慰二、选择健康的生活方式 1．生活方式对健康的影响：慢性、非传染性疾病除了受遗传因素和环境的影响外，还与个人的生活方式有关，不健康的生活方式加速这些疾病的发生和发展。2．探究酒精或烟草浸出液对水蚤心率的影响：低浓度的酒精（<0.25%）对水蚤的心率有促进作用，高浓度的酒精对水蚤的心率有抑制作用。烟草浸出液对水蚤的心率有促进作用。3．酗酒对人体健康的危害：酒精会损害人的心脏和血管，酗酒会全使脑处于过度兴奋或麻痹状态，引进神经衰弱和智力减退，长期酗酒，会造成酒精中毒，饮酒过多，还会有生命危险。4．吸烟对人体健康的危害：烟草燃烧时，烟雾中的有害物质如尼古丁、焦油等有害物质进入人体，对人体的神经系统造成损害，使人的记忆力和注意力降低，同时还诱发多种呼吸系统疾病，如慢性支气管炎，肺癌等。5．毒品的危害：会损害人的神经系统，降低人体免疫功能，使心肺受损，呼吸麻痹，甚至死亡。

1、应激性、反射、适应性和遗传性应激性是生物受到刺激时在短时间内完成的某种生理活动，事适应性的一种表现形式，表述的时过程，其结果是生物适应环境。如果是在神经系统参与下完成的应激性，则称反射，否则不叫反射，可见，反射是应激性的一种形式。适应性是指生物的形态结构和功能与环境相适合的现象，表述的是结果。如变色龙进入草丛种体色与青草一致，是应激性属于适应性；而蝗虫的体色与青草一致则只是适应性不是应激性。决定生物性行为特征的是遗传性。2、生长和发育生长是指细胞同化作用大于异化作用时，细胞数目增多，体积增大的“量变”过程。发育是指细胞通过分化，形成新的组织、器官、系统，最终成为性成熟的个体的“质变”过程。大量元素和基本元素、主要元素 从含量上看，如果含量占生物体总重量的万分之一以上的为大量元素，如C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg等。从对生物体的作用上看，在这些大量元素中，C是最基本元素，C、H、O、N是基本元素，C、H、O、N、P、S是主要元素，生物体的大部分有机物是由这六种元素组成的。3、主要能源、重要能源和直接能源糖类是生物体进行生命活动的主要能源；葡萄糖是重要能源，因为多糖、二糖要水解成葡萄糖后才能进入氧化分解过程，并且葡萄糖比它们容易运输。所有能量只有转化为ATP后才能被机体利用，所以，ATP被称为直接能源。4、细胞膜的结构特点和功能特性构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质分子大都是可以运动的，使细胞形成具有一定流动性的结构特点。水分子和细胞需要的离子、小分子能通过细胞膜，其他的则不能，这种功能特性就是选择通过性。5、染色质和染色体、染色单体染色质是细胞在分裂间期核内的细丝状物质（主要成分是DNA和蛋白质），有利于DNA分子的复制。染色体是细胞分裂期染色质高度螺旋化后的柱状或杆状结构，有利于染色体的平均分配。分裂间期复制的染色体与原染色体由一个共同的着丝点连接，形成两条姐妹染色单体，同属于一条染色体（如右图）。6、原核生物、原生生物、真核生物由原核（无成形的细胞核）细胞构成的生物称原核生物，有细菌（如各种球菌、杆菌、螺旋菌）、支原体、衣原体、立克次氏体、放线菌、蓝藻（如念珠藻、色球藻、螺旋藻）等。全身只由一个真核细胞组成的生物称原生生物，有草履虫、眼虫、变形虫、裸藻等。由真核细胞构成的生物统称为真核生物，有真菌（如酵母菌、根霉、蘑菇）、藻类（如团藻、衣藻、海带）以及全部高等动植物。7、半透膜和选择透过性膜半透膜是物理性质的膜，一般无生物活性，只允许小分子物质通过，不允许大分子物质通过。选择透过性膜具有生物活性，允许细胞需要的小分子通过，细胞不需要的离子、小分子、大分子物质都不能通过。8、原生质层和原生质原生质层是指具有大液泡的植物细胞的细胞膜、液泡膜以及两膜之间的细胞质，不包括细胞核与细胞液。原生质是指细胞内全部生命物质，包括细胞的膜、质、核。植物细胞除细胞壁外，均属于原生质。9、赤道板和细胞板赤道板是细胞中央与纺锤体的中轴垂直的一个平面，是想象出的结构。细胞板上在有丝分裂末期，在赤道板位置出现的实际存在的结构，它向四周扩展形成新的细胞壁。10、着丝粒和着丝点着丝粒是把姐妹染色单体连在一起的结构。着丝点则是指该结构上被纺锤丝连接的位置。11、细胞分裂和细胞分化细胞通过分裂使数目增多，故细胞分裂是“量变”的过程，刚分裂出的细胞在形态、结构和生理功能上都相似。细胞分化是在分裂的基础上同源细胞在形态、结构和生理功能上形成稳定的差异的过程。12、生长素和生长激素生长素是由植物生长旺盛处产生的，具有促进细胞纵向伸长，使植物生长作用的吲哚乙酸。生长激素是由动物垂体产生的，具有促进蛋白质合成和骨生长作用的蛋白质。13、生长素促进生长和促进扦插枝条生根促进生长是指促进植物细胞纵向伸长，不能使细胞数目增多。促进扦插枝条生根是指不但刺激不定根的生长，而且能刺激枝条一端生出许多不定根来。14、向性运动和感性运动向性运动是植物体受单一方向的刺激而引起的定向运动，分向光性、向水性等。感性运动是植物受植物体不定向刺激而引起的不定向运动，分感夜运动、感震运动等。如含羞草小叶感震而闭合。15、酶、激素、维生素酶大机体所有活细胞都产生的，具有催化作用的蛋白质或RNA。激素是机体某些细胞产生的，对生物体的正常生理活动起调节控制作用的蛋白质、类固醇化合物或脂肪酸化合物。维生素主要是从事物中获得的，对维持人体正常生长发育、物质代谢起调节作用的一类小分子有机物。16、内分泌腺和外分泌腺内分泌腺又称无管腺，腺体的分泌物（激素）直接进入腺体内的毛细血管随血液循环进入身体各处发挥作用。外分泌腺又称有管腺，腺体的分泌物一般由导管运输到身体的一定部位发挥作用。17、神经元、神经纤维和神经神经元即神经细胞，由突起（分树突和轴突）和细胞体组成。神经纤维是指神经元的轴突包括套在其外的髓鞘或感觉神经元的长树突。多条神经元由纤维结成束，外面包着结缔组织膜就构成一条神经。18、孢子和配子孢子是进行孢子生殖的生物（如蘑菇、根霉）经有丝分裂产生的生殖细胞，无“性”的分化，也不需两两结合，在适宜条件下单个孢子即可发育为一个新个体。配子是进行有性生殖的生物经减数分裂产生生殖细胞，有“性”的分化，一般需两两结合后才能发育为一个新个体。19、芽和芽体芽是植物茎上某些细胞分化产生的，与母体的形态、结构均不同，不能称为“小植株”。芽体是某些植物（如水螅、酵母菌）在较好条件时由母体一定部位生出的“小生物体”，与母体发形态、结构均相同，脱落后可直接成长为新个体。20、极核和极体极核是指植物胚珠内的胚囊中央的两个核，是伴随卵细胞形成的，受精后最终发育为胚乳。极体是动物体内通过减数分裂伴随卵细胞形成的，最终退化消失。"21、胚囊和囊胚胚囊是被子植物胚珠的重要部分，位于胚珠中心，呈膨大的囊状结构，内含七个细胞（如极核、卵细胞）。囊胚是动物个体发育中，受精卵的一个发育阶段（时期），内含囊胚腔。胚孔和珠孔 胚孔上高等动物在胚胎发育过程中，原肠胚外面生有的小孔，与原肠腔相通。珠孔是指被子植物的珠被围成后而形成的小孔。22、直系血亲和旁系血亲直系血亲是指与本人有直接血缘关系的人，是纵向关系，如（外）祖父母、父母、子女、（外）孙子（女）……旁系血亲是指与本人有间接血缘关系的人，是横向关系，如叔伯（姑姨舅）、（表）兄弟姐妹、侄子（女）23、先天性疾病和遗传病先天性疾病是指生下来就有的疾病，包括遗传病和先天性畸形。遗传病是指遗传物质改变引起的疾病，是先天性疾病的一种。24、基因频率和基因型频率基因频率是指某种基因在某个种群中出现的比例。基因型频率是指群体中某一个体的任何一个基因所占的百分率。25、保护色、警戒色和拟态保护色是指动物具有与栖息环境色彩相似的体色，可避免被对方发现。警戒色是指与栖息环境背景差异很大的色彩或斑纹，有意引起对方注意。拟态是某些生物形成的外表形态或色泽斑与其他生物或非生物异常相似的现象，可避免被对方发现。26、种群、物种、群落和生态系统种群是在一定区域内同种生物个体的总和。物种是分布在不同区域的同种生物的不同种群的总和。群落是由不同生物组成的不同种群的总和。生态系统是生物群落和无机环境的总和。27、生物富集作用和富营养化生物富集作用的污染物主要是重金属或农药,污染对象是水体、土壤,后果是在生物体内积累并造成危害。富营养化的污染物主要是富含N、P等矿质元素的污水,污染对象是流动缓慢的水体,后果是水质恶化,溶氧减少,有毒产物增加,鱼、虾等死亡。遗传必背考点一、显、隐性的判断：①性状分离，分离出的性状为隐性性状；②杂交：两相对性状的个体杂交；③随机交配的群体中，显性性状》隐性性状；④假设推导：假设某表型为显性，按题干的给出的杂交组合逐代推导，看是否符合；再设该表型为隐性，推导，看是否符合；最后做出判断；二、纯合子杂合子的判断：①测交：若只有一种表型出现，则为纯合子（体）；若出现两种比例相同的表现型，则为杂合体；②自交：若出现性状分离，则为杂合子；不出现（或者稳定遗传），则为纯合子；注意：若是动物实验材料，材料适合的时候选择测交；若是植物实验材料，适合的方法是测交和自交，但是最简单的方法为自交；三、基因分离定律和自由组合定律的验证：①测交：选择杂合（或者双杂合）的个体与隐性个体杂交，若子代出现1:1（或者1:1:1:1），则符合；反之，不符合；②自交：杂合（或者双杂合）的个体自交，若子代出现3:1（1:2:1）或者9:3:3:1（其他的变式也可），则符合；否则，不符合；③通过鉴定配子的种类也可以；如：花粉鉴定；再如：通过观察雄峰的表型及比例推测蜂王产生的卵细胞的种类进而验证是否符合分离定律。四、自交和自由（随机）交配的相关计算：①自交：只要确定一方的基因型，另一方的出现概率为“1”（只要带一个系数即可）；②自由交配：推荐使用分别求出双亲产生的配子的种类及比例，再进行雌雄配子的自由结合得出子代（若双亲都有多种可能的基因型，要讲各自的系数相乘）。注意：若对自交或者自由交配的后代进行了相应表型的选择之后，注意子代相应比例的改变。五、遗传现象中的“特殊遗传”：①不完全显性：如Aa表型介于AA和aa之间的现象。判断的依据可以根据分离比1:2:1变化推导得知；②复等位基因：一对相对性状受受两个以上的等位基因控制（但每个个体依然只含其中的两个）的现象，先根据题干给出的信息确定出不同表型的基因型，再答题。③一对相对性状受两对或者多对等位基因控制的现象；⑤致死现象，如某基因纯合时胚胎致死，可以根据子代的分离比的偏离情况分析得出，注意该种情况下得到的子代比例的变化。抑或是发育到某阶段才会出现的致死现象，计算时注意相应比例的变化；六、遗传图解的规范书写：书写要求：①亲代的表现型、基因型；②配子的基因型种类；③子代的基因型、表现型（包括特殊情况的指明）、比例；④基因型的规范书写：常染色体上的、X染色体上的（包括同源或者非同源区段）（前常后X），要用题干中提到的字母，不可随意代替；⑤相关符号的正确书写。七、常染色体和X染色体上的基因控制的性状遗传的区分和判断：①据子代相应表型在雌雄中的比例是否完全相同判断；②正反交的结果是否相同，相同则为常染色体上，不同则为X染色体上；③根据规律判断，即伴性遗传存在女患其父、子必患；男患其母、女必患等等特点；④设计杂交组合根据子代情况判断：八、“乘法原理”解决自由组合类的问题：解题思路：对于多对等位基因或者多对相对性状类的遗传问题，先用分离定律单独分析每一对的情况，之后运用“乘法原理”对两种或者多种同时出现的情况进行整合。九、染色体数、型异常的配子（或者个体）的产生情况分析：结合遗传的细胞学基础部分内容，通过减数分裂过程分析着手，运用简图展现过程。几种常见的来源：①减数第一次分裂四分体时期的同源染色体的非姐妹染色单体间交叉互换；②减数第一次分裂后期之后，某同源染色体未分离，移向某一极；③减数第二次分裂后期之后，由姐妹染色单体发展形成的两条染色体未分离，移向同一极；（注意：在分析某异常配子形成时，②与③一般不同时考虑）十、遗传系谱图类题目的分析思路与考查类型归纳：遗传系谱图是遗传学中的一个重点内容、也是公认的难点，平时练习时要多注意归纳总结，概括出此类题试题的规律和解题思路，从而可以达到从容应对。1、人类遗传病的类型及特点：遗传方式典型病例遗传特点概括口诀①常染色体隐性如白化病先天性聋哑①隔代发病②患者为隐性纯合体③患者男性、女性相等无中生有，女儿患病②常染色体显性如多指症软骨发育不全①代代发病②正常人为隐性纯合体③患者男性、女性相等有中生无，孩子正常③X染色体隐性如血友病/红绿色盲①隔代发病，②交叉遗传③患者男性多于女性女患其父、子必患④X染色体显性如抗VD佝偻病钟摆型眼球震颤①代代都有发病②交叉遗传③患者女性多于男性男患其母、女必患⑤Y染色体遗传如外耳道多毛症①家族全部男性患病②无女性患者③只传男，不传女父患子必患2、遗传方式的推导方法2．1、判断显隐性遗传：①先找典型特征：隐性—父母不患病而孩子患病，即“无中生有为隐性”。显性—父母患病孩子不患病，即“有中生无为显性”。②没有典型性特征：则两种均有可能。其中代代发病一般最可能为显性，隔代发病最可能为隐性。2．2．确定遗传病是常染色体遗传病还是X染色体遗传病①先找典型特征：隐性，女患其父、子必患；显性，男患其母、女必患。只要找到正常的就只能为常染色体上的。没有则两种均有可能②没有典型特征：若两种都符合，则：男女发病率不同为伴X遗传。男女发病率相同为常染色体遗传。③如果按以上方式推导，几种假设都符合，则几种都有可能。还可以选择假设--推导的方法（反证法）：先假设在X染色体上，代入进行推导，若不符合，则在常染色体上；若符合再假设在常染色体上，一般都是符合的，则两种情况都可能不能确定，此时只有结合题干的相关信息进一步的预测或确定。3、子代某表现型概率的计算①多对性状同时考查，单独考虑每一对的情况；②确定亲代的基因型的种类和比例；（结合亲本的性状，联系亲本的“上代”、“同代”、“下代”的情况去综合考虑亲本的可能基因型，时刻注意比例的变化。）③运用相乘、相加得出子代的表现型或者基因型情况。

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 i 。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列，　并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游，　转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用，　启动它所调节的基因的转录。二个结构域不但可在其连接区适当部位打开， 仍具有各自的功能。而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用。酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白－蛋白的相互作用。主要有二类载体: a 含DNA -binding domain的载体; b 含DNA-activating domain的载体。上述二类载体在构建融合基因时， 测试蛋白基因与结构域基因必须在阅读框内融合。融合基因在报告株中表达， 其表达产物只有定位于核内才能驱动报告基因的转录。例如GAL4-bd具有核定位序列(nuclear-localization sequence)， 而GAL4-ad没有。因此， 在GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆来自SV40的T-抗原的一段序列作为核定位的序列。目前研究中常用binding-domain基因有： GAL4(1-147); LexA (E coli转录抑制因子)的DNA-bd编码序列。常用的activating-domain基因有： GAL4(768-881)和疱疹病毒VP16的编码序列等。　　双杂交系统的另一个重要的元件是报道株。报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞。最常用的是酵母细胞， 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点: 〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的DNA－结合结构域(如GAL4-bd， LexA-bd)； 另一个基因融合到转录激活结构域(如GAL4-ad， VP16)。激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中， 蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达(如lacZ)， 从而可分析蛋白间的结合作用。　　酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用， 具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而增强， 后者又与启动子DNA结合， 此三元复合体使其中各组分的结合趋于稳定。④通过mRNA产生多种稳定的酶使信号放大。 同时， 酵母表型， X-Gal及HIS3蛋白表达等检测方法均很敏感。

双杂交系统的另一个重要的元件是报道株。报道株指经改造的、含报道基因(reporter gene)的重组质粒的宿主细胞。最常用的是酵母细胞， 酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点:〈1〉 易于转化、便于回收扩增质粒。〈2〉具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因。〈3〉酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合。一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的DNA－结合结构域(如GAL4-bd， LexA-bd)； 另一个基因融合到转录激活结构域(如GAL4-ad， VP16)。激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中，蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达(如lacZ)，从而可分析蛋白间的结合作用。

酵母双杂交系统应用中常遇到的问题一是假阳性较多，二是转化效率偏低。所谓假阳性就是：在待研究的两个蛋白间没有发生相互作用的情况下，报告基因被激活。主要原因是由于BD融合诱饵蛋白有单独激活作用，或者这种融合蛋白的激活作用被外来蛋白激活。另外AD融合靶蛋白如果有DNA的特异性结合，则也可单独激活报告基因的表达。因此，为排除假阳性就需要作严格的对照试验。应对诱饵和靶蛋白分别作单独激活报告基因的鉴定。目前几个公司推出的酵母双杂系统都采用了多个报告基因，且每个报告基因的上游调控区各不相同，这可减少大量的假阳性。另外，报告基因通常整合到染色体上，可以使基因表达水平稳定，消除了由于质粒拷贝数变化引起基因表达水平波动而造成的假阳性。即使根据严格的对照实验证明确实发生了蛋白间的相互作用，还应对以下方面进行分析：（1）这种相互作用是否会在细胞内自然发生，即这一对蛋白在细胞的正常生命活动中是否会在同一时间表达且定位在同一区域。（2）某些蛋白如是依赖于遍在蛋白的蛋白酶解途径的成员，它们具有普遍的蛋白间的相互作用的能力。（3）一些实际上没有任何相互作用的但有相同的模体（motif）如两个亲a-螺旋的蛋白质间可以发生相互作用。十年来，酵母双杂交技术一直在消除假阳性方面不断改进，并且已取得较好的效果〔2，3〕。在酵母双杂交的应用中有时也会遇到假阴性现象。所谓假阴性，即两个蛋白本应发生相互作用，但报告基因不表达或表达程度甚低以至于检测不出来〔4〕。造成假阴性的原因主要有两 方面：一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的载体。二是蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感的菌株及多拷贝载体。目前假阴性现象虽不是实验中的主要问题，但也应予以重视。转化效率是酵母双杂交文库筛选时成败的关键之一，特别是对低丰度cDNA库进行筛选时，必须提高转化效率。转化时可采用共转化或依次转化，相比之下共转化省时省力。更重要的是如果单独转化会发生融合表达蛋白对酵母细胞的毒性时，共转化则可以减弱或消除这种毒性。一种更有效的方法是将诱饵蛋白载体与靶蛋白载体分别转入不同接合型的单倍体酵母中，通过两种接合型单倍体细胞的杂交将诱饵蛋白与靶蛋白带入同一个二倍体细胞。目前很多机构建立了大量的cDNA文库和基因组文库，但这些文库大多无法直接用于双杂交系统的筛选。而文库的质量对于转化和筛选又非常关键。因此，大量构建适用于酵母双杂交的文库非常必要。现已出现一种采用体内重组技术来达到这个目的的方法〔5〕。

酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。发现新的蛋白质和蛋白质的新功能酵母双杂交技术已经成为发现新基因的主要途径。当我们将已知基因作为诱饵，在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白，从筛选到的阳性酵母菌株中可以分离得到AD-LIBRARY载体，并从载体中进一步克隆得到随机插入的cDNA片段，并对该片段的编码序列在GENBANK中进行比较，研究与已知基因在生物学功能上的联系。另外，也可作为研究已知基因的新功能或多个筛选到的已知基因之间功能相关的主要方法。例如：Engelender等人以神经末端蛋白alpha-synuclein 蛋白为诱饵蛋白，利用酵母双杂交CLONTECH MATCHMARKER SYSTEM 3为操作平台，从成人脑cDNA文库中发现了与alpha-synuclein相互作用的新蛋白Synphilin-1，并证明了Synphilin-1与alpha-synuclein 之间的相互作用与帕金森病的发病有密切相关。为了研究两个蛋白之间的相互作用的结合位点，找到影响或抑制两个蛋白相互作用的因素，Michael等人又利用酵母双杂交技术和基因修饰证明了alpha-synuclein的1-65个氨基酸残基和Synphilin-1的349-555个氨基酸残基之间是相互作用的位点。研究它们之间的相互作用位点有利于基因治疗药物的开发。在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用利用酶联免疫（ELISA）、免疫共沉淀（CO-IP）技术都是利用抗原和抗体间的免疫反应，可以研究抗原和抗体之间的相互作用，但是，它们都是基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用。而在细胞体内的抗原和抗体的聚积反应则可以通过酵母双杂交进行检测。例如：来源于矮牵牛的黄烷酮醇还原酶DFR与其抗体scFv的反应中，抗体的单链的三个可变区A4、G4、H3与抗原之间作用有强弱的差异。Geert等利用酵母双杂交技术，将DFR作为诱饵蛋白，编码抗体的三个可变区的基因分别被克隆在AD-LIBRARY载体上，将BD-BAIT载体和每种AD-LIBRARY载体分别转化改造后的酵母菌株中，并检测报告基因在克隆的菌落中的表达活性，从而在活细胞的水平上检测抗原和抗体的免疫反应。筛选药物作用位点及药物对蛋白相互作用影响酵母双杂交的报告基因能否表达在于诱饵蛋白与靶蛋白之间的相互作用。对于能够引发疾病反应的蛋白互作可以采取药物干扰的方法，阻止它们的相互作用以达到治疗疾病的目的。例如：Dengue病毒能引起黄热病、肝炎等疾病，研究发现它的病毒RNA复制与依赖于RNA的RNA聚合酶（NS5）与拓扑异构酶NS3，以及细胞核转运受体BETA-importin的相互作用有关。研究人员通过酵母双杂交技术找到了这些蛋白之间相互作用的氨基酸序列。如果能找到相应的基因药物阻断这些蛋白之间的相互作用，就可以阻止RNA病毒的复制，从而达到治疗这种疾病的目的。建立基因组蛋白连锁图众多的蛋白质之间在许多重要的生命活动中都是彼此协调和控制的。基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。通过基因组的测序和序列分析发现了很多新的基因和EST序列，HUA等人利用酵母双杂交技术，将所有已知基因和EST序列为诱饵，在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白，从而找到基因之间的联系，建立基因组蛋白连锁图。对于认识一些重要的生命活动：如信号传导、代谢途径等有重要意义。

白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来，算是实验技巧分类目录的首篇。一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中，人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能，丰富了酵母双杂交系统的功能。此外，酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。二、噬茵体展示技术在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单克隆抗体的DNA序列，当噬菌体生长时，表面就表达出相应的单抗，再将噬菌体过柱，柱上若含目的蛋白，就会与相应抗体特异性结合，这被称为噬菌体展示技术。此技术也主要用于研究蛋白质之间的相互作用，不仅有高通量及简便的特点，还具有直接得到基因、高选择性的筛选复杂混合物、在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性等优点。目前，用优化的噬菌体展示技术，已经展示了人和鼠的两种特殊细胞系的cDNA文库，并分离出了人上皮生长因子信号传导途径中的信号分子。三、等离子共振技术表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance，SPR)已成为蛋白质相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一种纳米级的薄膜吸附上“诱饵蛋白”，当待测蛋白与诱饵蛋白结合后，薄膜的共振性质会发生改变，通过检测便可知这两种蛋白的结合情况。SPR技术的优点是不需标记物或染料，反应过程可实时监控。测定快速且安全，还可用于检测蛋白一核酸及其它生物大分子之间的相互作用。四、荧光能量转移技术荧光共振能量转移（FRET ）广泛用于研究分子间的距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合，可定量获取有关生物活体内蛋白质、脂类、DNA 和RNA 的时空信息。随着绿色荧光蛋白（GFP）的发展，FRET 荧光显微镜有可能实时测量活体细胞内分子的动态性质。提出了一种定量测量FRET效率以及供体与受体间距离的简单方法，仅需使用一组滤光片和测量一个比值，利用供体和受体的发射谱消除光谱间的串扰。该方法简单快速，可实时定量测量FRET 的效率和供体与受体间的距离，尤其适用于基于GFP 的供体受体对。五、抗体与蛋白质阵列技术蛋白芯片技术的出现给蛋白质组学研究带来新的思路。蛋白质组学研究中一个主要的内容就是研究在不同生理状态下蛋白水平的量变，微型化，集成化，高通量化的抗体芯片就是一个非常好的研究工具，他也是芯片中发展最快的芯片，而且在技术上已经日益成熟。这些抗体芯片有的已经在向临床应用上发展，比如肿瘤标志物抗体芯片等，还有很多已经应用再眼就的各个领域里。六、免疫共沉淀技术 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用[/url]的一种技术，其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)，若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|Pansobin”，因为SPA|Pansobin比较大，这样复合物在离心时就被分离出来。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物四组分又被分开。然后经Western blotting法，用抗体检测目的蛋白是什么，是否为预测蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的，符合体内实际情况，得到的蛋白可信度高。但这种方法有两个缺陷：一是两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；二是必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。七、pull-down技术蛋白质相互作用的类型有牢固型相互作用和暂时型相互作用两种。牢固型相互作用以多亚基蛋白复合体常见，最好通过免疫共沉淀（Co-IP） 、Pull-down技术或Far-western法研究。Pull-down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白（生物素-、PolyHis-或GST-），从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系，从体外传路或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。

1．DNA是遗传物质的两个重要试验的主要步骤？答：（1）Griffith及Avery细菌发生遗传转化试验证明了DNA是病毒的遗传物质，其具体步骤为：首先用活S型肺炎链球菌感染小鼠，小鼠死亡，而活R型感染，小鼠不死接着用灭活的S型和R型感染小鼠，结果都不致死；但是用灭活的S型和活R型混合感染小鼠，小鼠死亡，解剖小鼠发现有活的S型致病菌，分离死S型细菌各组分与活R型混合感染小鼠，发现只有S型DNA能使R型细菌发生转化，获得致病力，此实验证明DNA就是遗传物质。（2）Hershey用噬菌体感染细菌的试验证明DNA是细菌的遗传物质。其具体步骤为：在含有放射性标记的35S和32P的氨基酸或核苷酸培养液中培养噬菌体，获得含放射性标记的噬菌体，用这些放射性噬菌体感染无放射性大肠杆菌，经过1-2次传代后，子代噬菌体中几乎不含带35S标记的蛋白质，但还有30%的32P标记说明在传代过程中发挥作用的是DNA而不是蛋白质。2、简述中心法则的主要内容？(1) DNA序列是遗传信息的贮存者，通过自主复制得到永存；(2) DNA通过转录生成RNA;(3) 含遗传信息的mRNA通过翻译生成蛋白质来控制生命现象；(4) 同时某些RNA可以通过逆转录将遗传信息传到DNA；(5) 某些RNA自身还可进行复制使其遗传信息得以永存。1、 原核和真核生物在基因组DNA结构上有哪些差异？原核：（1）基因组较小，环状双螺旋DNA与DNA结合蛋白结合成带有单拷贝基因的单染色体（2结构简练几乎全部由功能基因和调控序列组成，几乎每个基因序列都与其所编码的蛋白质呈4）有些原核生物基因组内存在基因重叠现象，但编码序列一般不重叠。（5）基因是连续的，没有内含子。真核：（1）线性DNA与组蛋白结合形成染色体形式一般有多条。（2） 数量庞大含有大量重复序列（3）基因组中多数为非编码序列 （4含有割裂基因 （5具有多态性（6转录产物为单顺反子 （5）具有端粒结构2、作为遗传物质应该具备哪些特性？为什么说DNA适合作为遗传物质？遗传物质特性：贮存并表达遗传信息，能把信息传递给子代，物理和化学性质稳定，具有遗传变化的能力DNA特性：各异的碱基序列储存大量的遗传信息，DNA的复制是其表达和传递遗传信息的基础，通过磷酸二酯键相连，形成双螺旋结构，生理状态下物理、化学性质稳定，有突变和修复能力，可稳定遗传是生物进化的基础。3、简述DNA双螺旋结构的主要特点双链反向平行，具有5‘-3"极性，围绕中轴，螺旋盘旋，磷酸，脱氧核糖为骨架，以磷酸酯键相连，位于外侧，碱基互补配对，以氢键相连，位于内侧，大沟，小沟交替出现。4、简述真核染色体的组装过程DNA链盘绕由H2A,H2B，H3,H4组成的组蛋白八聚体核心形成念珠状结构的核小体，两端由H1封阻。核小体之间以DNA链连接，形成10nm纤丝状结构，螺旋后形成30nm螺纹管结构，折叠盘绕形成染色体。5、影响DNA稳定性的因素有哪些氢键，磷酸酯键，0.2 M Na+ 生理盐条件，碱基堆积力 (范德华力) ，疏水作用力6、请问哪些条件可促使DNA复性(退火) 降低温度、pH值和增加盐浓度可以促进DNA复性(退火) 7、影响Tm的因素有哪些（1）在 A, T, C, G 随机分布的情况下 ，决定于GC含量，GC含量越高，Tm越大（2）GC%含量相同的情况下， AT形成变性核心，变性加快，Tm 值小（3）对于大片段长短对Tm值的影响较小, 与组成和排列相关（4）对于小片段，片段愈短， 变性愈快，Tm值愈小（5）变性液中含有尿素，甲酰胺等可降低Tm（6）盐浓度和PH值也会影响Tm1、简述原核和真核DNA复制的特点？（1）原核为单复制起点，真核为多复制起点（2）原核复制子大而少，真核复制子小而多（3）真核复制起始受许可因子的控制 （4）真核复制叉移动的速度快，原核速度慢（5）真核冈崎片段小，原核大（6）真核复制存在端粒和端粒酶（7）真核原核DNA聚合酶种类，结构，作用上有差异（8）真核生物DNA复制的起始需要起始原点识别复合物（ORC）参与2、线性DNA如何解决末端复制的问题？（1）通过将线性复制子转变为环状或多聚分子。（2）某种蛋白质可能会介入，在真正的末端上启动。（3）DNA可形成特殊的结构，如在末端形成发夹。使分子没有游离末端。（4）末端是可变的，而不是精确确定的。3、列举参与DNA复制过程中的主要酶及其功能解旋酶：解开双螺旋，推动复制叉向前延伸SSB：使DNA单链保持一种伸展 构象，作为模板；使解开的单链不形成发卡结构；保护DNA单链不受Dnase水解螺旋酶：消除正超堆积，减少能量需求，有利于DNA解链引物酶：合成的引物，减少致死突变。 DNA连接酶：催化双链DNA上的单链断点的5"-与3"-生成磷酸二酯键，封闭DNA双链断点DNA聚合酶：聚合作用 ，3"→5"外切酶活性（校对作用），5"→3"外切酶活性（切除修复作用） 4、请以原核生物为例，说明DNA复制的过程起始蛋白复合体与DNA链复制起始点结合，在解旋酶和单链结合蛋白作用下解旋，启动复制起始起始形成的复制引发体在后随链上合成多个RNA引物，DNA聚合酶以核苷酸为底物延伸前导链和后随链。后随链合成的不连续冈崎片段用DNA连接酶连接复制到达复制终止序列，在终止蛋白作用下终止复制。5、DNA复制过程中如何保证其遗传信息传递的忠实性？（1）碱基配对原则（2）DNApol的3"?5"外切酶活性（校正） （3）DNApol只能从引物的3" 端延伸DNA（切除），需要RNA引物，而RNA引物最终被降解而避免错误（4）半不连续机制，有利于错配碱基的校正（5）修复系统有多种机制和酶6、DNA连接酶对于DNA的复制是很重要的，但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因在DNA复制时，连接酶对于后随链的合成是重要的，因为它能将冈崎片段的5"端与它前面的另一条链的3"端连接起来。RNA的合成既能以DNA为模板(RNA聚 合酶活性)，又能以RNA为模板(RNA复制酶活性)；相应的，先导链的合成沿着5"→3"方向进行，不需要连接酶。7、解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的因为DNA聚合酶只能朝着5"→3"的方向合成DNA，后随链不能象前导链那样总是朝着同一方向合成，滞后链是以大量独立片段的形式(冈崎片段)合成的，每个片段都是以5"→3"方向合成，这些片段最后连在一起形成一连续的多核苷酸链。每个片段都独立地被引发，聚合和连接1、列出真核生物mRNA与原核生物mRNA的区别：原核生物mRNA的半衰期短，多以多顺反子形式存在，5′端无帽子结构，3′端没有或有较短的polyA尾巴。单在原核生物起始密码上游具有能与核糖体16SrRNA3′端反向互补的序列，称SD序列。原核生物mRNA的起始密码子有AUG、GUG和UUG三种。转录和翻译在同一区域进行真核生物mRNA半衰期相对较长，多以单顺反子形式存在，5′端有GTP倒扣形成的帽子结构，3′端有较长的polyA尾巴。只有AUG一种起始密码子。转录在核内而翻译在核外进行。 2、概括说明σ因子对启动子调节的辅助功能。σ因子是RNA聚合酶的别构效应物，能增加聚合酶对启动子的亲和力，同时降低聚合酶对非启动子区的亲和力。由于同一个聚合酶可以和几种不同σ因子结合，故可利用选择不同的σ因子起始不同的基因转录。 3、列举原核生物同真核生物转录的差异？（1） 原核生物转录只有一种RNA聚合酶，真核生物转录根据转录产物不同而由多种RNA聚合酶。（2） 原核生物的启动子具有极高的同源性，而真核生物的启动子差异较大 （3）原核生物的转录产物是多顺反子mRNA，而真核生物的转录产物是核不均一RNA，需转录后修饰加工。4、概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列？启动子是RNA聚合酶结合和转录起始的特殊序列。典型的原核生物启动子大约40个核苷酸，并由两个重要的序列： －10区，pribnow box，TATA，和－35区TTGACA，是RNA聚合酶的结合位点。保守序列指所有启动子的该部位都有这一序列或十分相似的结构。5、真核生物启动子的基本结构包括哪些部分？分别有何功能？真核生物启动子包含核心启动子元件和上游启动子元件两部分。核心启动子元件即TATA box，其功能是使转录精确的起始。上游启动子元件包括CAAT box 和GC box，其功能是控制转录起始的频率。6、增强子是如何增强转录的？通过影响染色质DNA－蛋白质结构或改变超螺旋密度而改变模板的整体结构，从而使得RNA聚合酶更容易与模板DAN结合，起始基因转录。7、添加PolyA尾巴的信号序列是什么？简述尾巴结构的生理意义基因3′末端转录终止位点上游15～30bp处的保守序列AATAAA生理意义：保持mRNA的稳定性，防止被降解；与翻译起始有关8、简述转录的常规特点（1）在依赖DNA的RNA聚合酶作用下进行转录（2） A＝U、C≡G 合成RNA分子（3） 转录合成RNA链的方向为5"→3"，模板单链DNA的极性（4）方向为3"→5"， 而非模板单链的极性方向与RNA链相同，均为5"→3"。书写） （5）基因转录方式为不对称转录(一条单链DNA 为模板,RNA聚合酶的结合)9、RNA酶促合成的基本特征(1) 双链DNA分子以单链为模板；(2) 不需引物；(3) 底物是5`-核苷三磷酸（NTP）；(4) 前一个碱基的 3`-OH和后一个碱基的 5`-P反应，形成磷酸二酯键，RNA链延伸；(5) RNA碱基顺序由模板DNA顺序决定； (6) RNA合成方向是从5`→3`，新生RNA与模板DNA链呈反向平行；9、简述ρ因子依赖性终止子的作用机理ρ因子结合：最初结合到RNA终止子上游一个伸展的（约70个核苷酸）单链区。ρ因子移动：结合到RNA上后，发挥ATP酶活性以提供在RNA上滑动的能量，直到它到达RNA-DNA杂合链区域(可能ρ因子沿RNA移动比聚合酶沿DNA移动的速度快)，终止：ρ因子发挥解旋酶活性，使双链体结构10、比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么不同细菌中，DNA指导的RNA聚合酶核心酶由四个亚基组成(两个α亚基，一个β亚基，一个β"亚基)，核心酶与σ亚基结合产生全酶。核心酶可以催化NTP的聚合，但只有全酶能够引发转录的开始。主要的步骤是：具有特异识别能力的。亚基识别转录起，始点、上游的启动子特异同源序列，这样可以使全酶与启动子序列结合力增加，形成封闭的二元复合物。关键的作用是RNA聚合酶与DNA的相互作用。真核生物中，当含TBP的转录因子与DNA相互作用时，其他因子也结合上来，形成起始复合体，这一复合体再与RNA聚合酶结合，因此主要是RNA聚合酶与蛋白质之间的作用。 11、 转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链DNA是怎样被保护的转录过程中控板与编码链分离时，聚合酶覆盖了整个转录泡——从解旋位点到螺旋重新形成位点，因此单链的DNA被保护起来。与复制不同，转录不需要单链结合蛋白的参与。 12、 概括说明σ因子对启动子调节的辅助功能σ因子(除了RpoN)有识别启动子序列的结构域。作为游离的蛋白质；σ因子并不具备与DNA结合的构象。当σ因子与核心酶结合后构象发生改变，其N末端游离出与DNA结合的结构域。σ因子的这一调节方式是为了防止游离的σ因子与启动子区结合，而阻碍了依赖于全酶的转录启动。另外，这样也可防止形成全酶的σ因子的浓度被稀释，因为每一个细胞中，大约每三个核心酶对应于一个σ因子。 13、为什么只有DNA双螺旋中的一条链能被正常的转录? 如果两条链都被转录，每个基因就能编码两个不同的多肽14、原核生物的核糖体RNA和DNA相对较稳定并且半衰期而mRNA却不稳定很快被降解请解释这种稳定性的差异 如果转录物的寿命很长，就不可能通过控制mRNA的合成速率来调节基因的活性。另一方面，如果tRNA和rRNA的寿命长的话，就更合算。 15、启动子有何作用特点（1）一个基因可同时拥有一个及以上启动子 （2）启动子位置不定，一般在转录起始点上游。 （3）可与增强子共同控制转录起始和强度。 （4）发挥功能时除需RNA聚合酶外，还需转录调控因子与启动子区各种调控元件相互作用16、增强子有何作用特点① 可增强效应十分显著； ② 增强效应与其位置和取向无关； ③ 大多为重复序列；④ 一般具有组织或细胞特异性； ⑤ 无基因专一性； ⑥ 许多增强子还受外部信号的调控17、如何通过实验确定启动子与增强子边界及关键序列元件边界序列确定:从一段特定的含有启动子的DNA片段入手，从DNA的两侧不断缩短长度直至短到停止产生活性的某一位置。保守序列确定：A: 对已知启动子序列，可通过缺失或突变确定哪些碱基为必需； B: 还可通过比较不同的启动子间的同源性，确定哪些序列为保守序列。18、回答大肠杆菌RNA聚合酶各亚基生物学功能β和β"共同组成了酶的催化中心。它们的序列与真核生物RNA聚合酶的最大亚基相关。β亚基可能是酶和核苷酸底物结合的部位。β"亚基是酶与DNA模板结合的主要成分。α亚基的功能可能是识别其相应的启动子。原核生物σ因子的功能：帮助核心酶辨认启动子；解开DNA的双螺旋 I型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着I型内含子的催化中心有什么特点？ 可以。这些活性包括：RNA聚合酶、内切核酸酶、磷酸酶、连接酶的活性将I 型内含子转变成这些酶的能力表明它能结合于RNA的糖—磷酸骨架并能催化在它前后的几个不同反应。例如，连接是剪切的相反反应 1、列举核糖体上主要的活性位点，并解释起功能(1)mRNA结合位点—30S头部：防止mRNA链内碱基结合，促进mRNA与小亚基结合(2)肽酰－tRNA位点—P位点：结合起始rRNA，增强A位活性(3)氨酰基 tRNA 位点—A位点：结合特定氨酰tRNA(4)脱酰基tRNA和多肽的逐出位点—E位点：E1为脱酰基tRNA 离开核糖体提供出口；E2对蛋白质合成的准确性起重要作用；E3为多肽离开核糖体提供出口其他位点：结合起始，延伸等因子(5)5s rRNA位点（与tRNA进入有关）;(6)EF—Tu（延伸因子）位点 ：位于大亚基内，与氨酰基 tRNA的结合有关;(7) EF—G :转位因子结合位点,位于大亚基靠近小亚基的界面处 2、简述蛋白质生物合成的基本过程1）起始：核糖体小亚基识别起始位点，在起始因子作用下，与大亚基，氨酰tRNA结合，形成起始复合物 2）延伸：核糖体在mRNA移动，在延伸因子作用下，通过转移肽酰tRNA到氨酰tRNA，即经过进位，肽键形成和转移，脱落，移位的循环至终止密码子完成肽链延伸3）终止：在释放因子作用下，识别终止密码子，肽链从tRNA上释放，核糖体离开mRNA3、什么是摇摆假说?在蛋白质生物合成中转移核糖核酸反密码子的5′位碱基不严格的特异性的假说。允许反密码子的5′位(第一位)碱基与信使核糖核酸的密码子3′位(第三位)碱基通过改变了的氢键配对(如非G-C、A-U 配对)，从而识别一种以上的密码子 4、指出E.coli和真核生物翻译起始的不同[1]翻译的起始识别原核的起始tRNA是fMet-tRNA，存在SD序列和核糖体结合序列作为翻译起始位点，真核生物利用eIF4不同结合位点结合帽子和尾巴结构，识别起点。 [2]翻译起始：原核生物30s小亚基首先与mRNA模板相结合，再与fMet-tRNA结合，最后与50s大亚基结合。真核中起始tRNA是 Met-tRNA，40s小亚基首先与Met-tRNA(Met上角标）相结合，再与模板mRNA结合，最后与60s大亚基结合生成起始复合物，且真核生物的起始因子较多。 5、 N-甲酰甲硫氨酸-tRNA的功能是什么? 作为起始氨酰tRNA，能够识别AUG和GUG作为起始密码子，与IF-2结合成复合体进入小亚基的P位点6、解释核糖体肽基转移反应 肽基转移酶的活性区位于大亚基，临近肽酰tRNA的氨基酸茎，核糖体P位点和A位点。50S上肽酰转移酶催化P位的肽（氨）酰-tRNA把肽（或氨酰基）转给A位的AA-tRNA，并以肽键相连的过程 7、简述真核细胞中翻译终止的过程 由于氨酰tRNA上没有反密码子能够与三个终止密码子互补配对，因此翻译终止。终止需要tRNA的协助，此时没有氨基酸能够连接到位于P位点的肽酰tRNA上，释放因子有助于终止的发生，能使tRNA上的氨基酸C端不需要转肽基和脱酰基而发生转位。新生肽直接从P位点离开核糖体。8、真核与原核核糖体的主要区别是什么? 真核细胞80S核糖体中核糖体蛋白和rRNA数量和体积比原核细胞70S核糖体的大，真核大小亚基（40S和60S）均比原核细胞的大（30S，50S）。原核细胞的RNA含量比真核高，原核细胞核糖体有E位点便于脱酰tRNA的离开。原核中多以多聚核糖体形式存在，真核大多与细胞骨架和内质网膜结合10、密码子具有哪些特性（1）连续性：肽链合成起始后，密码子按3个一框读下去不重叠也不跳格，直到终止(2)简并性：许多氨基酸对应的密码子不止一种(3)兼职性：AUG（Met)和GUG（Val)两个密码子除代表特定氨基酸外，还兼作起始密码子(4)普遍性：各物种体内体外都适用(5)密码子-反密码子识别的摇摆性：在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，而第三对碱基有一定的自由度，可以“摆动”。简述信号肽作用机制信号肽便被信号识别颗粒(SRP)识别，SRP与携带新生链的核糖体结合而停止翻译SRP再与内质网上的船坞蛋白(DP)结合翻译阻滞逆转，并使正在延伸的肽链转移到内质网腔内，信号肽被切除。 新生肽进入ER腔之后经折叠，修饰（糖基化和羟基化等）后运送到其它的部位。1、酵母双杂交系统原理不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能 ，酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白-蛋白的相互作用2、酵母单杂交原理将已知的顺式作用元件构建到最基本启动子(Pmin)上游，把报告基因连接到Pmin下游。将待测转录因子的cDNA与酵母转录激活结构域(AD)融合表达载体导入细胞，该基因产物如果能够与顺式作用元件结合，而激活Pmin启动子使报告基因表达。3、简述DNA重组的基本过程？（1）目的基因的提取：供体生物基因或称外源基因的提取（2）限制性酶切：目的基因切成不同大小片段（3）酶接：连接到另一DNA分子上-克隆载体（4）转化：重组DNA分子转入受体细胞（5）筛选和鉴定：对吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定（6）基因表达：进行培养，检测外源基因是否表达4、凝胶电泳的工作原理与应用原理：1）核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，呈负离子化状态；核酸分子在一定的电场强度的电场中，它们会向正电极方向迁移； 2）电泳中使用无反应活性的稳定的支持介质，电泳迁移率（或迁移速度）与分子大小、介质粘度等成反比； 因此，可在同一凝胶中、一定电肠强度下分离出不同分子量大小或相同分子量但构型有差异的核酸分子。应用：分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段，分子克隆技术核心技术5、分子杂交的试验流程以及分类样品及探针制备--样品电泳分离---转膜----预杂交-----杂交----洗膜----分析（压片、显色、荧光观察等）分类： Southern blot ， Northern blot，Western blot，ISH， FISH6、简述DNA足迹试验的原理与应用 DNA结合蛋白结合在DNA片段上，能保护结合部位不被DNase破坏，DNA分子经酶切作用后遗留下该片段(亦称“足迹”)，进而可以确定它的序列。在电泳凝胶的放射性自显影图片上，相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带 7、简述凝胶阻滞试验的原理 原理：蛋白质与DNA结合后分子质量将增加，在电泳中移动的速率减小，没有结合蛋白的DNA片段迁移速率大。利用这一原理可分离纯化细胞提取物中特定DNA结合蛋白 8、简述PCR的工作流程，原理与应用 原理：利用DNA复制的半保留复制和DNA变性与复性的特性，用特异性引物对模板DNA进行指数扩增。 流程：首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是这种循环的不断重复。使DNA扩增量呈指数上升。 应用：基因组中特异片段克隆，不对称PCR，反向PCR，基因的体外诱变，RT-PCR，免疫PCR，基因组的比较研究 9、基因克隆的主要载体有哪些？ 质粒载体，噬菌体载体， BAC，克隆载体，表达载体，YAC，粘粒等 10、作为表达载体应具备哪些特点？ （1）能自主复制；（2）具有一个以上的遗传标记，便于重组体的筛选和鉴定；（3）有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； （4）分子量小，以容纳较大的外源DNA。 11、作为DNA重组应用较多的限制性内切酶II，其有哪些特点？ （1）识别位点严格专一；（2）识别序列的碱基数一般为4，6，8个bp；（3）识别位点经常是一种回文序列的DNA；（4）仅需 Mg2+ 作催化反应辅助因子，能识别双链DNA特殊序列，并可特异切割DNA，产生特异片段；（5）种类繁多，应用广泛 12、简述基因组文库的构建方法 ①用适当的限制性内切酶消化基因组DNA，以得到约20kb的片段；②用限制性内切酶切割载体DNA，使其形成与外源DNA相匹配的粘性未端；③用适当的方法除去l噬菌体裂解生长非必需的内部片段；④l噬菌体载体臂与外源DNA片段连接；⑤利用体外包装系统进行噬菌体的组装；⑥重组噬菌体侵染E. coli，每一克隆中含有外源DNA的一种片段，全部克隆构成一个基因文库。 13、简述cDNA文库的构建方法 ①mRNA的提取和纯化。②合成cDNA第一链。③将mRNA-cDNA杂交分子转变为双链cDNA分子。④将双链cDNA重组到噬菌体载体或质粒载体上。⑤将重组子体外包装成具有感染力的噬菌体颗粒导入到大肠杆菌寄主细胞中增殖 14、怎样筛选目的基因？ （1）核酸杂交（2）PCR筛选（文库，菌落）（3）免疫筛选【解释】 15、基因组文库与cDNA文库有哪些差异？ （1）cDNA文库 包含着细胞全部mRNA信息，基因组文库 包含有生物全部的基因。 （2）cDNA文库具有组织细胞特异性，基因组文库无。 （3）cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。 （4）基因组文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA 1、乳糖操纵子阻遏蛋白的负性调控机制 没有乳糖时，1ac操纵子处于阻遏状态。I 基因在自身的启动子PI 控制下，产生阻遏蛋白R。R以四聚体形式与操纵子o结合，阻碍RNA聚合酶与启动子P的结合。 当有乳糖存在时，乳糖与R结合，使R四聚体解聚成单体，失去与o的亲和力，与o解离，基因转录开放。 2、乳糖操纵子CAP的正性调控机制 cAMP含量与葡萄糖的分解代谢有关，当细菌利用葡萄糖供给能量时，cAMP含量降低；无葡萄糖时，cAMP含量升高。 cAMP与CRP结合变为CAP，并以二聚体的方式与特定的DNA序列结合。 1ac操纵子的强诱导既需要有乳糖的存在，又需要没有葡萄糖可供利用，通过CAP的正调控作用，细菌才能充分利用乳糖。 3、乳糖操纵子结构特点 大肠杆菌乳糖操纵子包括：结构基因：Z、Y和A,调控元件：启动子(P)、操纵区(O)和cAMP-CRP结合位点;调节基因：lacI 4、解释细菌对葡萄糖和乳糖的利用机制 1）．当葡萄糖存在，乳糖存在时：尽管乳糖作为诱导剂和阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白与操纵序列O解离。但由于cAMP浓度较低，cAMP和CRP结合受阻，基因处于关闭状态。2）．当葡萄糖和乳糖都不存在时：CRP可以发挥正调控作用，但由于没有诱导剂，阻遏蛋白的负调控作用使基因仍处于关闭状态。3）．当葡萄糖存在，乳糖不存在时：此时无诱导剂存在，阻遏蛋白与DNA结合。而且由于葡萄糖的存在，CRP也不能发挥正调控作用，基因处于关闭状态。 4）．当葡萄糖不存在，乳糖存在时：此时CRP可以发挥正调控作用，阻遏蛋白由于诱导剂的存在而失去负调控作用，基因被打开，启动转录。 5、色氨酸操纵子的阻遏蛋白的负调节机制 细菌通常需要自己经过许多步骤合成色氨酸，但是一旦环境能够提供色氨酸时，细菌就会充分利用外界的色氨酸。合成色氨酸所需酶类的基因E、D、C、B、A，受其上游调控蛋白R基因的调控。R并没有与O结合的活性，只有当环境能提供足够浓度的色氨酸时，R与色氨酸结合后而活化，能够与O结合，阻遏结构基因的转录，使基因开 ---关。

发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的。这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进。其中一个重要改进是引入额外的报道基因，如广泛采用的HIS3基因。经过改造带有HIS3报道基因的酵母细胞，只有当HIS3被启动表达才能在缺乏组氨酸的选择性培养基上生长。HIS3报道基因的转录表达是由“诱饵”和“猎物”的相互作用所启动的。大多数双杂交系统往往同时使用两个甚至三个报道基因，其中之一是 LacZ。这些改造后的基因在启动子区有相同的转录激活因子结合位点，因此可以被相同的转录激活因子（如上述的Gal4蛋白）激活。通过这种双重或多重选择既提高了检测灵敏度又减少了假阳性现象。其他还有针对“诱饵”或“猎物”表达载体等所作的改进，这里不一一详述。在双杂交鉴定过程中要经过两次转化，这个工作量是相当大的，特别是寻找新的作用蛋白质的时候尤其如此。而且，酵母细胞的转化效率比细菌要低约4个数量级。因此转化步骤就成为双杂交技术的瓶颈。Bendixen等人通过酵母接合型的引用，避免了两次转化操作，同时又提高了双杂交的效率。在酵母的有性生殖过程中涉及到两种配合类型：a接合型和α接合型，这两种单倍体之间接合（mating）能形成二倍体，但a接合型细胞之间或α接合型细胞之间不能接合形成二倍体。根据酵母有性生殖的这一特点，他们将文库质粒转化α接合型酵母细胞，“诱饵”表达载体转化a接合型细胞。然后分别铺筛选平板使细胞长成菌苔（lawn），再将两种菌苔复印到同一个三重筛选平板上，原则上只有诱饵和靶蛋白发生了相互作用的二倍体细胞才能在此平板上生长。单倍体细胞或虽然是二倍体细胞但BD融合蛋白和AD融合蛋白不相互作用的都被淘汰。长出来的克隆进一步通过β-半乳糖苷酶活力进行鉴定。这项改进不仅简化了实验操作，而且也提高了双杂交的筛选效率。