生化与分子生物学的研究生一定会做动物实验吗?经常做吗?

包含了生物大分子制备和分析常用技术、蛋白质与核酸的提取与分离、PCR技术、分子杂交与印迹技术、分子克隆技术、外源基因转移技术、蛋白质表达技术、分子标记技术、分子改造技术、测序及人工合成技术、基因组学技术、蛋白质组学技术、生物芯片技术、生物信息学技术、RNA研究技术等.

PCR，即链式酶聚合反应，反应管中各组分如下：扩增缓冲液：缓冲液有助于酶的稳定，是给聚合酶提供一个最适合酶催化反应条件；4种dNTP混合物：四种脱氧核苷酸，是DNA的原料；引物：DNA合成不能从零开始，必须要有引物，从引物末端开始延伸，合成整条链；模板：DNA合成需要模板链；TaqDNA聚合酶：催化PCR反应，该酶是从Thermusaquaticus细菌中提取的特殊的耐热DNA聚合酶，可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本；Mg2+：Mg与dNTP以及DNA模板结合形成复合体，只有这种复合体才能被DNA聚合酶识别；加双或三蒸水：调节反应体系的浓度用；

请教高人：一个最小最小的、只作DNA提取和扩增的分子生物学实验室需要什么仪器？？？请列明仪器名称、推荐型号和大概价格。 如果量很小的话，可以这样PCR仪一台 用作扩增高速离心机一台（可达12000rpm即可）电泳仪一台可以跑PAGE和琼脂糖的槽紫外观测仪器 看胶超净工作台，接菌用大摇床 培养菌用脱色摇床 如果需要染胶的话用细菌培养箱 细菌生长需要恒温水浴锅或电热板 很有用，呵呵然后就是移液器一套3-4支，枪头1000ul、200ul、20ul若干最好还有灭菌锅，枪头需要灭菌使用才准确。还有可以-20度的冰箱，保存DNA，一般菌种保存也差不多，有条件可以上-70度冰箱。 电子精密天平 称药品，配培养基等微波炉 用来制胶很方便的。凝胶成像系统 扫胶用，可以将胶图保存为图像文件存档。暂时就想这么多，我们实验室大致就这样。价钱不清楚，可以找生物公司去要他们的单子，多要几家的，选择对比下再买。祝你成功

分子生物学实验室（LMB）是一个设于英国剑桥的研究机构，参与了20世纪50年代到60年代发生的分子生物学革命，从那时起，它仍然是一个重要的医学研究实验室，但具有了更广泛的关注。于原址附近修建的新研究大楼于2013年5月投入使用。分子生物学实验室由英国政府医学研究委员会于1947年设立。迄今已产生了不少诺贝尔奖获得者，如詹姆斯·沃森、弗朗西斯·克里克、弗雷德里克·桑格、悉尼·布伦纳等。

分子生物学实验有什么特点目前，分子生物学飞速发展，分子生物学相关的理论和技术已深入到生命科学的各个领域，一些常用的技术，如基因组DNA的分离纯化，质粒DNA的抽提及纯化，RNA的提取，PCR扩增，Southern blot等成为分子生物学研究的强有力工具，为分子生物学的发展起了巨大的推动作用，然后，这些实验操作技术都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物质，对环境和人身安全也造成巨大的威胁。因此，弄清这些有害有毒物质的作用，加强实验室安全管理，建立良好的制度和处理，保证分子生物学实验室成为真正的科研阵地。放射性物质的处理：放射性同位素技术具有灵敏、简便和廉价等优点，在分子生物学实验室应用普遍，但由于放射性同位素的辐射会给人体造成损伤，如果使用不当或操作不规范，会造成环境污染，甚至损伤人员。在进行同位素操作时一定要注意个人防护，包括使用隔离、专用衣帽手套及防护背心、挡板等。对放射性同位素的污染进行安全性教育，实行责任到人的做法，对放射性物质统一保管、集中存放、集中处理的做法。在定购同位素时，根据需要量进行订购。α-31p半衰期为14.5天，在southern blotting应用较广，是危害较大的放射性物质。DNA杂交时，在探针标记、洗膜等几个阶段都涉及同位素。对含α-31p固体废物，放入铁皮箱10个半衰期(约半年)后埋到指定的地点：对于含α-31p浓度较高的液体废物(如首次洗膜液)，在厚实的朔料桶放置8个半衰期后倒入专用的下水道；含α-31p浓度较低的液体废物(如二、三次洗膜液)，则直接倒入专用的下水道。

第3章 分子生物学实验基本操作技术这里的实验基本操作技术是指在分子生物学实验中使用范围最广、使用频率最高、几乎所有实验都要应用的技术。器皿的清洗，试管、量筒（杯）、容量瓶、吸管及移液器、电子天平等量具的正确操作和使用、试剂配制等技术，应当都是基本操作技术，但这些内容已在分析化学、生物化学的实验课程中作了详细介绍。本章主要介绍与分子生物学实验有关的除（灭）菌技术、无菌操作技术和微量操作技术。3.1 除(灭)菌技术在进行分子生物学实验过程中，需要一个清洁的实验环境，所使用的器皿及溶液均需要进行除（灭）菌处理，一方面避免环境中微生物的污染，另一方面还可消除蛋白酶和核酸酶对实验的干扰和影响。在进行微生物及细胞的纯培养时要求更高，不能有任何外来杂菌。因此，对所有器材、培养基要进行严格灭菌，对工作场所进行消毒，保证工作顺利进行。实验室常用的除灭菌方法主要有物理方法及化学方法两种。物理方法包括用湿热（高压蒸汽）、干热、紫外线、过滤、离心沉淀等方法除去微生物；化学方法是使用化学消毒剂、抗菌素等杀死或抑制微生物。根据被灭菌物品的材料性质和实验要求，可采取不同的消毒灭菌方法。3.1.1 物理灭菌法（1）干热灭菌：干热灭菌包括火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。火焰灼烧适用于金属用具，如接种环、接种针和手术器械等，玻璃器皿的口颈，如试管口和瓶口，玻璃棒等的灭菌处理。这种方法灭菌迅速彻底。热空气灭菌一般在烤箱中进行，利用高温干燥空气（160℃uf07e170℃）加热灭菌1uf07e2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。干热消毒后的器皿干燥，易于保存。缺点是干热传导慢，可能有冷空气存留于烤箱内，因此要求较高的温度和较长的时间才能达到消毒的目的。应当注意，干烤灭菌完毕后不得马上将烤箱门打开，须等温度降至70℃以下时再开箱门，以免冷空气突然进入，影响消毒效果和损坏玻璃器皿或发生意外事故。在灭菌时，物品不能放的太挤。灭菌的玻璃器皿中不可有水，有水的玻璃器皿在干热灭菌时容易炸裂。培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此方法消毒。（2）湿热灭菌：在相同温度下，湿热的灭菌效力比干热灭菌好。原因是：（1）热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性。加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。蛋白质含水量与其凝固温度成反比；（2）热蒸汽比热空气穿透力强，能更有效地杀灭微生物；（3）蒸汽存在潜能，当气体转变成液体时可放出大量热能，故可更迅速提高灭菌物体的温度。湿热灭菌常用的方法有高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌和煮沸灭菌。其中高压蒸汽灭菌法最为常用，效果最好。常压蒸汽灭菌法不能在短时间内杀死细菌芽孢，必须采取间歇灭菌或持续灭菌的方法，才能达到完全灭菌。而煮沸灭菌仅用于注射器及某些用具的灭菌，被灭菌物品的湿度太大。所以，这两种方法较少使用。高压蒸气灭菌是在密闭的高压蒸汽锅中进行的。其原理是：将待灭菌的物体放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，将锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱尽后将锅密闭，再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上升，从而使温度也随之上升到100℃以上。灭菌时，根据不同的物品选择不同压力和时间，一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是0.15MPa下15min，培养液和橡胶制品为0.1MPa下10min。灭菌前在锅内加适量的水，加水过少，易将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物品浸水。物品不能装得过满，以免影响消毒器内气体流通。导气管要伸至罐底并防止堵塞。在加热升压之前，先要打开排气阀门排放消毒器内的冷空气，冷空气排出后，关闭排气阀门，同时检验安全阀活动自如，开始升压，当达到所需压力时，开始计时，并控制压力恒定。灭菌过程中，操作者不能离开工作岗位，要定时检查压力及安全，防止意外事件发生。灭菌完毕后一定要先打开阀门放气，当灭菌锅内压力下降到“0”时，再打开灭菌锅的盖。也可在灭菌完毕后，关闭电源总阀，让灭菌物品自然冷却，待灭菌锅压力表降至“0”时，再取出灭菌物品。蒸汽压力与温度的关系蒸汽压力（表压） 蒸汽温度Kg/cm2 MPa ℃ ℉0.00 0.00 100 2120.25 0.025 107.0 2240.50 0.050 112.0 2340.75 0.075 115.5 2401.00 0.100 121.0 2501.50 0.150 128.0 2622.00 0.200 134.5 274（3）紫外线杀菌： 紫外线的波长范围是200uf07e300nm，杀菌范围为240uf07e280nm，其中波长在260nm左右的紫外线杀菌作用最强。紫外灯是人工制造的低压水银灯，能辐射出257.3nm的紫外线，杀菌能力强且较稳定。紫外线杀菌作用是因为它可以被蛋白质（波长为280nm）和核酸（波长为260nm）吸收，造成这些分子的变性失活。紫外线穿透能力很差，不能穿透玻璃、衣物、纸张和大多数其他物体，但能穿透空气，主要用于实验室空气、操作台表面和不能使用其它方法进行灭菌的物品。紫外线直接照射方便、效果好，经一定的时间照射后，可以消灭空气中大部分细菌。培养室紫外线灯应距地面不超过2.5米，且消毒物品不宜相互遮挡，照射不到的地方起不到消毒作用。紫外线照射可产生臭氧，污染空气，对试剂及培养液都有不良影响，对人皮肤也有伤害。（4）过滤除菌：很多液体不能采用高压灭菌的方法进行灭菌处理，如血清、合成培养液、酶及含有生物活性蛋白的液体等，可采用过滤的方法除去细菌等微生物。滤器有抽吸（抽滤）式及加压式两种类型；滤板（或滤膜）结构可分为石棉板、玻璃或微孔膜。常用的滤器有Zeiss滤器（蔡氏滤器）、玻璃滤器和微孔滤膜滤器，其中微孔滤膜滤器最为常用。微孔滤膜滤器多为塑料结构，分为上下两部分，中间可放置纤维素滤膜。将待过滤液体吸入注射器内，慢慢注入滤器上部的孔中，通过中间的滤膜即可。可用于包括血清在内的各种培养液的过滤除菌，速度快，效果好。滤膜为一次性的特制混合纤维素滤膜，其孔径有0.6μm、0.45μm、0.22μm三种，用于过滤除菌时，最好选用0.22μm的滤膜（可以除去细菌和霉菌）。安装滤膜时要注意：先将滤膜在蒸馏水中浸湿再安装；滤膜薄且光滑，容易移动，千万不能装偏而使过滤失败；同时要注意滤膜的正反面，正面（光面）应朝上。由于滤膜薄，承受压力有限，压力不能过大、过猛，以免造成滤膜破裂。每次过滤后应打开滤器，核实滤膜是否移动和破裂，以保证有效过滤除菌。微孔滤膜滤器的清洗、消毒方法很简单，用完后去掉滤膜，用去离子水冲洗干净，再将新的滤膜正确放入其中，包裹后可高压灭菌处理，也可直接煮沸灭菌处理。现在也有一次性小滤器。3.1.2 化学灭菌法应用化学制剂破坏细菌代谢机能。常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、福尔马林、高锰酸钾、新洁尔灭等。最常见的是75%酒精及1‰的新洁尔灭，前者主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理。后者则主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒。化学灭菌法操作简单、方便有效。将高锰酸钾粉末与适量体积的福尔马林混合，会产生大量的甲醛气体，常用于无菌室的熏蒸消毒。3.1.3抗生素灭菌法主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。要注意不能完全依赖抗生素来达到消毒灭菌的目的，还应严格无菌操作。常用的抗生素是青霉素和链霉素。3.2无菌操作技术无菌技术是指实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法，是实验过程中预防和控制交叉污染的一项重要基本操作。在生化实验中经常涉及到无菌操作技术，尤其是微生物的纯培养、细胞及胚胎的培养，更需要严格的无菌操作技术。在无菌操作过程中，任何一个环节都不得违反操作原则，否则就可能造成实验失败。因此，必须加强无菌观念，准确熟练地掌握无菌技术，严格遵守无菌操作规程。无菌技术包括四部分内容：实验所用的玻璃、塑料制品及金属器械的处理；实验操作对象及试剂的无菌处理；工作环境及表面的处理；实验者的操作技术。前两部分已在前面介绍过，这里主要介绍后两部分内容。1. 周密计划 在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。2．仔细准备 根据实验要求，准备各种所需的器材和物品，并选择适宜的方法进行包装和除（灭）菌处理，清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净工作台)内。这样可以避免开始实验后因物品不全往返拿取而增加污染机会。3．严格操作 实验进行前，无菌室及超净工作台以紫外灯照射30uf07e60min灭菌，以70%酒精擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风机运转10min后，再开始实验操作。实验操作应在超净工作台的中央无菌区域，不要在边缘的非无菌区域操作。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精擦手或用消毒液洗手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入细胞培养室需彻底洗手，戴口罩、着消毒衣帽及鞋等。在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作，如安装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意：金属器械不能在火焰中烧的时间过长，以防退火，烧过的金属镊要待冷却后才能夹取组织，以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞或微生物的培养瓶时，火焰灭菌时间要短，防止因温度过高烧死细胞或微生物。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞。进行无菌操作时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备用品更换。工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养用液及其他溶液在未用前，不要过早开瓶；打开瓶盖进行操作时，瓶口朝上与台面呈45度角，减少落菌机会；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口。吸取营养液、PBS缓冲液、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防影响试剂的效果、扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作台讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖部碰到瓶口，则应更换干净吸管。对于微生物或细胞而言，每次操作只处理一种微生物或一个细胞株，即使培养基相同也不要共享培养基，以免微生物或细胞间污染。4．善始善终 实验完毕后，应及时将实验物品及废液带出工作台，关闭风机，以70%酒精擦拭无菌操作台面，关闭超净工作台的风机和照明灯，实验结束。尽管每次实验前都会进行工作台面的消毒处理，但建议实验结束后立即打开紫外灯进行消毒，特别是在夏季，以防细菌或霉菌孳生。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完即取出，以利于空气流通。3.3微量操作技术在过去的实验中，大家使用的重量和体积计量单位主要是克（g）和毫升（ml）及其以上者，而小于g和ml的单位如毫克（mg）、微克（uf06dg）及微升（uf06dl）等极少用到。从进入分子生物学实验开始，这些很小的计量单位都将经常使用，甚至更小者如纳克（ng）、皮克（pg）及纳升（nl）等也将用到。由相对宏观的操作突然转为微量操作，对初学者来讲需要有一个熟悉并熟练的过程，关键应当注意以下几个方面的问题。1. 熟悉并掌握微量称量器具的正确使用方法。微量电子天平（最小感量10-4g）和微量移液器（最大2uf06dl）是两种最常使用的器具，它们的使用方法请参考第2章有关内容。准确量取是微量操作的第一步，也是最重要的一步。2. 添加。将一种或几种液体物质分别准确量取后添加到同一个Eppendorf管中，必须保证看到每一种液体都加入其中，而且在取出移液器时，Tip头的尖部不得带出任何可见的液珠。3. 混匀并集中。全部液体加完后，总体积只有10到几十微升，难以用常规混匀的方法将各种成分彻底混匀。微量混匀的方法有：旋涡震荡混匀和弹匀。将盛有液体的Eppendorf管盖紧，握紧并将其底部与旋涡震荡器接触，液体会在管内高速旋转而混匀；也可手持盖好的Eppendorf管上端（口部），另一只手反复弹动其底部，将其中的液体混匀。最后，用高速台式离心机将全部液体甩到Eppendorf管的底部。4. 有时将极微量的物质如DNA片段或质粒DNA溶解在几微升液体中，尽管看不见待溶解物质，但将液体加入后，用上述同样的方法进行操作，也可很好将其溶解并混匀。5. 由于微量操作，实验结果很难用肉眼直接观察到。为了保证实验的顺利进行，在分子生物学实验过程中，每一步实验的结果都必须利用相关的检测、鉴定方法显示出来，判定正确后再进行下一步反应。这是所有科学实验的共同要求，但在分子生物学实验中更应当强调和加以注意。有其他需要留个EMAIL

怎么说呢....注意防护就可以了。。。除了提RNA要玩DEPC，其他的还好，都是试剂盒，生科的实验要比化院要好多了。。。这就是我的建议

实验1 质粒DNA的提取、酶切与电泳鉴定实验2 重组DNA分子的构建、筛选与鉴定实验3 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA分子导入原核细胞实验4 聚合酶链式反应扩增DNA片段实验5 DNA序列测定实验6 从哺乳动物细胞中提取核DNA 实验7 植物总RNA的提取及其电泳鉴定实验8 DNA的分子杂交实验9 RNA的分子杂交实验10 蛋白质的分子杂交 …… 附录1 分子生物学常用软件及数据库介绍附录2 常用试剂、溶液及缓冲液的配制附录3 常用培养基和抗生素的配制附录4 生物样品的贮存、邮送与实验室安全附录5 常用生物学数据

分子生物学实验常用试剂配置100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）

第1章 分子生物学实验室规范及注意事项1.1 分子生物学实验室常用仪器设备1.2 分子生物学实验室操作规范1.3 分子生物学实验注意事项第2章 常用的检测分析方法2.1 分光光度法2.2 电泳实验1 DNA浓度与纯度的紫外分光光度法分析实验2 DNA的琼脂糖凝胶电泳实验3 DNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳第3章 植物基因组DNA的提取及鉴定3.1 植物基因组DNA3.2 植物基因组DNA的提取技术实验4 改进SDS法提取植物基因组DNA实验5 CTAB法提取植物基因组DNA第4章 动物基因组DNA的提取及鉴定4.1 动物基因组DNA4.2 动物基因组DNA、的提取技术实验6 动物组织基因组DNA的提取实验7 血液基因组DNA的提取第5章 微生物基因组DNA的提取及鉴定5.1 微生物基因组DNA5.2 微生物基因组DNA的提取技术实验8 大肠杆菌基因组DNA的提取实验9 酵母基因组DNA的提取实验10 环境微生物基因组DNA的提取第6章 质粒DNA的提取及鉴定6.1 质粒6.2 大肠杆菌质粒DNA的提取技术实验11 碱裂解法小量制备质粒DNA实验12 试剂盒抽提大肠杆菌质粒实验13 质粒DNA的大量制备第7章 哺乳动物组织总RNA的提取及鉴定7.1 哺乳动物组织总RNA7.2 哺乳动物组织总RNA的提取技术7.3 总RNA提取中的关键问题实验14 哺乳动物组织总RNA的提取第8章 PCR基因扩增及检测8.1 PCR技术的原理8.2 PCR技术的发展历程8.3 PCR技术的种类实验15 绿色荧光蛋白基因的PCR扩增实验16 乳铁蛋白基因的PCR扩增实验17 查尔酮合成酶基因的PCR扩增实验18 逆转录PCR扩增第9章 分子杂交9.1 分子杂交的原理9.2 分子杂交的发展历程9.3 分子杂交的种类实验19 Southern杂交实验20 Northern杂交实验21 Western杂交第10章 限制性内切酶消化10.1 限制性内切酶的发现10.2 限制性内切酶的命名及种类10.3 限制性内切酶的反应体系10.4 限制性内切酶酶切图谱实验22 质粒的限制性内切酶消化实验23 λDNA的限制性内切酶消化第11章 目的基因的分离纯化实验24 乙醇沉淀法纯化PCR扩增产物实验25 硅胶膜吸附法纯化PCR扩增产物实验26 外源DNA的琼脂糖凝胶电泳回收第12章 DNA的体外重组12.1 常用的载体12.2 外源DNA与载体的连接方法实验27 PCR产物直接克隆实验28 黏性末端的连接第13章 感受态细胞的制备及转化13.1 转化13.2 感受态细胞的制备方法实验29 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验30 重组DNA的蓝白斑筛选第14章 外源基因的诱导表达14.1 表达系统14.2 表达载体14.3 外源基因诱导表达的优化实验31 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达实验32 蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第15章 基因文库的构建15.1 基因文库的构建方法15.2 基因文库的应用实验33 植物cDNA文库的构建附录 常用试剂母液配制表

分子生物学操作中会涉及一系列仪器，使用不当导致实验失败、减少仪器使用寿命或损坏仪器。因此在进行操作前细致地了解各种仪器的使用方法及注意事项，是使后继实验事半功倍的一个必要准备。 冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中，都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必需的重要工具。 使用方法: 1.离心机应放置在水平坚固的地板或平台上，并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。 2.打开电源开关，按要求装上所需的转头，将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与样品同时平衡)，关闭机盖。 3.按功能选择键，设置各项要求:温度、速度、时间、加速度及减速度，带电脑控制的机器还需按储存键，以便记忆输入的各项信息。 4.按启动键，离心机将执行上述参数进行运作，到预定时间自动关机。 5.待离心机完全停止转动后打开机盖，取出离心样品，用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。 注意事项: 1.机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线。 2.开机前应检查转头安装是否牢固，机腔有无异物掉入。 3.样品应预先平衡，使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。 4.挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏，以免腐蚀机腔或造成事故。 5.擦拭离心机腔时动作要轻，以免损坏机腔内温度感应器。 6.每次操作完毕应作好使用情况记录，并定期对机器各项性能进行检修。 7.离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。 附:相对离心力与每分钟转速的换算 离心机的转速，在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示。由于离心力不仅为转速函数，亦为离心半径的函数，即转速相同时，离心半径越长，产生的离心力越大。因此仅以转速表达离心力是不够科学的，近年来主张用相对离心力(RCF)来表示比较合理。现在国际资料中，已改用相对离心力来表示。 两者的互换公式如下: PCR扩增仪: 目前各公司提供的PCR仪操作方法各有不同，按其操作说明进行操作。 值得提出的是，在使用一定时期后，样品孔的实际温度与仪器显示温度有时会有较大差异，应当请厂商的技术支持人员校对仪器的各项性能。 数字式酸度计: 一、 准备工作 1.仪器应平放在符合使用环境的工作台上，依视觉角度支起支架。 3.pH值的定位测量法: (一)二点定位法(高精度测量方法) (1) 连接好电极线路，将参比电极及活化满24h以上清洁的PH电极移入第一标准缓冲液pH1中(例pH1=4.00)，待仪器响应稳定后，调节定位旋钮至仪器显示为“0.00”; (2) 将电级系统从第1种标准液中取出，用去离子水冲洗干净后以滤纸吸干电级表面水份，移入第2种标准液(例pH2=9.18)中，仪器响应稳定后，调节斜率旋钮，使仪器显示为(△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18)此后斜率旋钮不可再动，除非更换电极系统; (3) 斜率调节完成后，重新调节定位旋钮，使仪器显示第2种标准液的实际pH值(9.18)，至此2点定位结束; (4) 将电极从第2种标准液中取出冲洗、吸干后移入待测溶液中，仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。 (二)一点定位法(粗略测量法) (1) 将温度补偿旋钮调至溶液温度值; (2) 向左将斜率补偿旋钮旋转至头; (3) 将电级系统移入标准液中(一点法仅用一种标准液，如pH=4.00时)，调节定位旋钮使仪器显示“4.00”; (4) 取出电级冲洗吸干水分后移至待测溶液中，仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。 三、温度的测量 1.将功能选择拨至温度档。 2.将温度探头插入插孔，并将温度探头置于环境条件或溶液中，仪器响应稳定后仪器显示值即为环境条件或溶液温度值。 四、注意事项 1.认真做好仪器使用前准备工作。 2.仪器通电后或测量过程中出现显示不稳或乱跳现象，应切断电源进行检查，如电压、预热时间及电极系统等是否正常。 3.使用不同电极应注意排除离子的干扰，选择好盐桥，必要时应使用离子强度固定剂。 4.电极系统从第1种溶液取出移入第2种溶液之前，须用去离子水或双蒸水清洗干净，再用滤纸吸干表面水分，以免影响测定结果的准确性。 5. 仪器应存放于干燥、清洁无腐蚀的场所，每次测量结束后应关闭电源，退出电极及温度探头妥善保存。玻璃电极清洗后可浸于去离子水待用(注意水面不得低于玻璃球泡)，甘汞电极清洁后套上橡皮帽置于配套盒中保存，当甘汞电极内充液泄漏或不饱和及盐桥中断时，应及时补充饱和内充液。

《分子生物学实验指导》是一本简明实用且与目前高等学校分子生物学实验教学相适应的实验指导用书，作者魏群，由高等教育出版社出版。本书可作为高等院校生物类及农林、医药类开设分子生物学实验的各专业教学用书，也可供有关研究人员、技术人员和中学生物教师参考。

喜格实验室设计建设提供如下，希望可帮到你。溴化乙锭EB溴化乙锭(EB)是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302 nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光。溴化乙锭具有一定的毒性，皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内小心操作。二甲基亚砜DMSO二甲基亚砜(DMSO)，是一种渗透性保护剂，用途广泛,能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。研究表明，DMSO存在严重的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。(1) 吸入：高挥发浓度可能导致头痛，晕眩和镇静。(2) 皮肤：能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感，如同所见的皮疹及水泡一样。若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。(3) 吸收：吸收危险性很低。用的时候要避免其挥发，要准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤。丙烯酰胺聚丙烯酰胺是SDS-PAGE凝胶中的主要成分。未聚合的丙烯酰胺是一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收。丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性，同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化，试验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物，职业接触人群的流行病学观察表明，长期低剂量接触丙烯酰胺会出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状，伴随末梢神经病如手套样感觉、出汗和肌肉无力。具有累积毒性，不容易排毒。因此在称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时，戴好手套和面罩，在化学通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的，但是使用时也应小心，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。二硫苏糖醇（DTT）二硫苏糖醇（DTT），同巯基乙醇一样是很强的还原剂，散发难闻的气味。可用作蛋白质的保护剂，用于防止蛋白质内的半胱氨酸被氧化。也可用于SDS-PAGE电泳时样品的添加剂，用于彻底打破蛋白质中的二硫键。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。苯甲基磺酰氟（PMSF）苯甲基磺酰氟（PMSF），常用于蛋白质的提取过程中，是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的抑制剂，可抑制丝氨酸蛋白酶例如胰蛋白酶(trypsin)和胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)，也可抑制半胱氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶，是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤，已污染的工作服丢弃掉。二乙基焦碳酸酯DEPCDEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylpr℃arbonate)，可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩。不小心沾到手上注意立即冲洗，RNaseAwayTM试剂可以替代DEPC，操作简单，价格低，且无毒性。只需将RNaseAwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面，浸泡后用水冲洗去除，即可以快速去除器皿表面的RNase，并且不会残留而干扰后续实验。紫外光紫外光是实验室中常见的光源。能够用在无菌室进行灭菌，也会用来观察凝胶中的DNA。紫外光可损伤眼视网膜。切勿用裸眼和没有防护装置的紫外光源。在实验室里常用的紫外光源包括手提式紫外灯和紫外透射仪。只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。紫外线也是诱变剂和致癌的。为使暴露减少到最低限度，确保紫外光源要采用适当防护装置。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手套。甲醇甲醇常常用于分析试剂或者清除去油剂，有很大的毒性并易挥发。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大，它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸气能损害人的呼吸道粘膜和视力。急性中毒症状有：头疼、恶心、胃痛、疲倦、视力模糊以至失明，继而呼吸困难，最终导致呼吸中枢麻痹而死亡。慢性中毒反应为：眩晕、昏睡、头痛、耳鸣、视力减退、消化障碍。使用时要避免吸入其挥发的汽雾。要戴合适的手套和安全眼镜。

植物学的就不用，当然要想搞研究建议分子生物学方面 比较有发展 也不用动物实验

1.卡那霉素（Kanamycin Sulfate） 0.5g卡那粉末+10mL无菌水→ 0.22μm滤膜过滤，分装至1.5mL离心管中，保存于-20℃ 母液浓度：50mg/mL 工作浓度：50μg/mL 100mL LB培养基+100μl Kana 硫酸卡那霉素（Kanamycin sulfate）是一种氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌及支原体都有抑制作用。作用机制在于靶向结合细菌70S核糖体亚基，从而抑制核糖体易位和引起错误编码进一步干扰蛋白质合成。

请教高人：一个最小最小的、只作DNA提取和扩增的分子生物学实验室需要什么仪器？？？请列明仪器名称、推荐型号和大概价格。 如果量很小的话，可以这样PCR仪一台 用作扩增高速离心机一台（可达12000rpm即可）电泳仪一台可以跑PAGE和琼脂糖的槽紫外观测仪器 看胶超净工作台，接菌用大摇床 培养菌用脱色摇床 如果需要染胶的话用细菌培养箱 细菌生长需要恒温水浴锅或电热板 很有用，呵呵然后就是移液器一套3-4支，枪头1000ul、200ul、20ul若干最好还有灭菌锅，枪头需要灭菌使用才准确。还有可以-20度的冰箱，保存DNA，一般菌种保存也差不多，有条件可以上-70度冰箱。 电子精密天平 称药品，配培养基等微波炉 用来制胶很方便的。凝胶成像系统 扫胶用，可以将胶图保存为图像文件存档。暂时就想这么多，我们实验室大致就这样。价钱不清楚，可以找生物公司去要他们的单子，多要几家的，选择对比下再买。祝你成功

主要联系是由植物，动物，微生物基因组DNA的提取与鉴定，哺乳动物组织总RNA的提取与鉴定，质粒DNA的提取与鉴定，PCR扩增，分子杂交技术，限制性内切酶消化，分子克隆全过程和基因文库的构建等实验项目的原理及步骤。

超净台是必需的

mRNA是负责转录，也就是在基因层面的表达量，检测这个，可以知道这个基因的表达是上调还是下调了。

感觉和吃肯德基差不多。

如何做好研究生细胞分子生物学实验准备工作　　一般考研要考四科：英语、政治、专业课一、专业课二。 对于英语与政治，全国各个科目是一样的。 专业课一与专业课一，根据你所报的学校与专业是不同的，这主要由你所报考的学校所决定。比如说，如果你报考的是细胞生物学，那么还要考细胞生物学与生物化学，但有的学校是考细胞生物学与分子生物学，或者是细胞生物学与普通生物学。如果你报考的是动物学，那么要考动物学与生物化学，或者是动物学与普通生物学。一般而言，现在各个学校的生物系考研都是要生物化学的。而别外一门根据，你所报考的专业而定。 生物系考研的专业一般为：细胞生物学、生物化学与分子生物学、微生物学、动物学、植物学、发育生物学、遗传学、生态学、水生生物学等等。 热门专业为：细胞生物学、生物化学与分子生物学、微生物学。　　1.生物考研考政治和英语基础课，数学不考的，不要准备。　　英语需要积累，慢慢学，慢慢长进　　政治现在不用管，到了大四报个考研辅导班即可，太早了反而没有用的，政策在变。　　2.这几门课需要学好,考研的专业课：　　生物化学 一定要学好，多数生物类专业都考这科，推荐高等教育出版社《生物化学》（三版）王镜岩 朱圣庾，这本书是国内较为权威的一本生化教材　　分子生物学 也是基础，推荐高等教育出版社《现代分子生物学》朱玉贤　　细胞生物学 高等教育出版社，《细胞生物学》翟中和 ，《遗传学》　　3.同时平时多进实验室，积累操作经验和动手能力，到复试的时候导师很看重你的动手能力和实验室经历

DNA变性是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，双链变成单链，从而使核酸的天然构象和性质发生改变。变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。凡能破坏双螺旋稳定性的因素，如加热、极端的pH、有机试

需要，你做感受态啊，涂板啊什么都需要无菌啊

孵育就是几种化合物或有机大分子混在一起在特定条件下放置一段时间。

1.无需 灭菌，常温放置。2.没灭过，不知道。

兄弟难道还想混装？

包含了生物大分子制备和分析常用技术、蛋白质与核酸的提取与分离、PCR技术、分子杂交与印迹技术、分子克隆技术、外源基因转移技术、蛋白质表达技术、分子标记技术、分子改造技术、测序及人工合成技术、基因组学技术、蛋白质组学技术、生物芯片技术、生物信息学技术、RNA研究技术等.

类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

目前，分子生物学飞速发展，分子生物学相关的理论和技术已深入到生命科学的各个领域，一些常用的技术，如基因组DNA的分离纯化，质粒DNA的抽提及纯化，RNA的提取，PCR扩增，Southern blot等成为分子生物学研究的强有力工具，为分子生物学的发展起了巨大的推动作用，然后，这些实验操作技术都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物质，对环境和人身安全也造成巨大的威胁。因此，弄清这些有害有毒物质的作用，加强实验室安全管理，建立良好的制度和处理，保证分子生物学实验室成为真正的科研阵地。放射性物质的处理：放射性同位素技术具有灵敏、简便和廉价等优点，在分子生物学实验室应用普遍，但由于放射性同位素的辐射会给人体造成损伤，如果使用不当或操作不规范，会造成环境污染，甚至损伤人员。在进行同位素操作时一定要注意个人防护，包括使用隔离、专用衣帽手套及防护背心、挡板等。对放射性同位素的污染进行安全性教育，实行责任到人的做法，对放射性物质统一保管、集中存放、集中处理的做法。在定购同位素时，根据需要量进行订购。α-31p半衰期为14.5天，在southern blotting应用较广，是危害较大的放射性物质。DNA杂交时，在探针标记、洗膜等几个阶段都涉及同位素。对含α-31p固体废物，放入铁皮箱10个半衰期(约半年)后埋到指定的地点：对于含α-31p浓度较高的液体废物(如首次洗膜液)，在厚实的朔料桶放置8个半衰期后倒入专用的下水道；含α-31p浓度较低的液体废物(如二、三次洗膜液)，则直接倒入专用的下水道。 4.3常见的有毒物质的处理：溴化乙锭、Trizol、丙烯酰氨、DEPC、甲酰氨等毒性高、环境危害大的物质，分类收集后统一处理。 4.3.1 EB(Ethidiunl bromide，溴化乙锭)：EB是一种强烈诱变剂并有中度毒性，应戴手套操作，对于含有EB的溶液也不应直接倒下水道，用后妥善净化处理：EB含量大干0.5μg/ml溶液先用水将EB浓度稀释至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳。不时轻轻摇荡混匀，室温放置1小时，滤纸过滤将活性碳与滤纸密封在塑料袋中作为有害废物丢弃。或用专用一次性染料清除袋(Gene有限公司)吸附过夜，再焚烧袋子即可。EB接触物，如抹布、枪头等埋入地下。 4.3.2 Trizol：提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。 4.3.3 DEPC(Diethylprocarbonate，二乙基焦碳酸酯)：RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩。在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。 4.3.4 CHCl3(ChIoroform，氯仿)：常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。 4.3.5 Acrylamide(丙烯酰胺)：DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道。

目前，分子生物学飞速发展，分子生物学相关的理论和技术已深入到生命科学的各个领域，一些常用的技术，如基因组DNA的分离纯化，质粒DNA的抽提及纯化，RNA的提取，PCR扩增，Southern blot等成为分子生物学研究的强有力工具，为分子生物学的发展起了巨大的推动作用，然后，这些实验操作技术都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物质，对环境和人身安全也造成巨大的威胁。因此，弄清这些有害有毒物质的作用，加强实验室安全管理，建立良好的制度和处理，保证分子生物学实验室成为真正的科研阵地。放射性物质的处理：放射性同位素技术具有灵敏、简便和廉价等优点，在分子生物学实验室应用普遍，但由于放射性同位素的辐射会给人体造成损伤，如果使用不当或操作不规范，会造成环境污染，甚至损伤人员。在进行同位素操作时一定要注意个人防护，包括使用隔离、专用衣帽手套及防护背心、挡板等。对放射性同位素的污染进行安全性教育，实行责任到人的做法，对放射性物质统一保管、集中存放、集中处理的做法。在定购同位素时，根据需要量进行订购。α-31p半衰期为14.5天，在southern blotting应用较广，是危害较大的放射性物质。DNA杂交时，在探针标记、洗膜等几个阶段都涉及同位素。对含α-31p固体废物，放入铁皮箱10个半衰期(约半年)后埋到指定的地点：对于含α-31p浓度较高的液体废物(如首次洗膜液)，在厚实的朔料桶放置8个半衰期后倒入专用的下水道；含α-31p浓度较低的液体废物(如二、三次洗膜液)，则直接倒入专用的下水道。 4.3常见的有毒物质的处理：溴化乙锭、Trizol、丙烯酰氨、DEPC、甲酰氨等毒性高、环境危害大的物质，分类收集后统一处理。 4.3.1 EB(Ethidiunl bromide，溴化乙锭)：EB是一种强烈诱变剂并有中度毒性，应戴手套操作，对于含有EB的溶液也不应直接倒下水道，用后妥善净化处理：EB含量大干0.5μg/ml溶液先用水将EB浓度稀释至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳。不时轻轻摇荡混匀，室温放置1小时，滤纸过滤将活性碳与滤纸密封在塑料袋中作为有害废物丢弃。或用专用一次性染料清除袋(Gene有限公司)吸附过夜，再焚烧袋子即可。EB接触物，如抹布、枪头等埋入地下。 4.3.2 Trizol：提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。 4.3.3 DEPC(Diethylprocarbonate，二乙基焦碳酸酯)：RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩。在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。 4.3.4 CHCl3(ChIoroform，氯仿)：常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。 4.3.5 Acrylamide(丙烯酰胺)：DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道。

第一篇 常用分子生物学实验技术及原理第一章 载体第二章 分子生物学中常用的工具酶第三章 电泳第四章 真核生物基因组文库的构建第五章 eDNA文库的构建第六章　DNA序列测定第七章　PCR基因扩增第八章　基因表达第九章 印迹法及分子检测第十章 克隆化DNA的定点突变第十一章 mRNA差异显示技术第二篇　学生实验实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化实验二 质粒DNA的提取及其定性定、量分析实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验四　PCR基因扩增及扩增产物的回收实验五　DNA重组实验六 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测实验七 蛋白质印迹实验八 哺乳动物基因组DNA的分离和分析实验九 植物基因组DNA的提取实验十 大肠杆菌基因组DNA的提取实验十一 植物总RNA的提取实验十二 RT—PCR（反转录一聚合酶链反应）实验十三　PCR法差异显示mRNA实验十四 利用聚合酶链反应（PCR）定点突变实验十五 寡核苷酸介导的定点突变实验十六 Southern杂交实验十七 双脱氧链终止法测定DNA序列实验十八　DNA核苷酸序列分析——银染色法附录一、常用核酸、蛋白质换算数据二、氨基酸符号及相应密码子三、常见市售酸碱的浓度四、离心机转速与相对离心力的换算五、常用电泳缓冲液及凝胶加样缓冲液六、常用限制酶酶切位点及缓冲液七、分子生物学常用试剂和缓冲液的配制八、常用细菌培养基和抗生素溶液九、x光底片的冲洗方法十、溴化乙锭溶液的净化处理

分子生物学操作中会涉及一系列仪器，使用不当导致实验失败、减少仪器使用寿命或损坏仪器。因此在进行操作前细致地了解各种仪器的使用方法及注意事项，是使后继实验事半功倍的一个必要准备。 冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中，都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必需的重要工具。 使用方法： 1.离心机应放置在水平坚固的地板或平台上，并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。 2.打开电源开关，按要求装上所需的转头，将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上（离心筒须与样品同时平衡），关闭机盖。 3.按功能选择键，设置各项要求：温度、速度、时间、加速度及减速度，带电脑控制的机器还需按储存键，以便记忆输入的各项信息。 4.按启动键，离心机将执行上述参数进行运作，到预定时间自动关机。 5.待离心机完全停止转动后打开机盖，取出离心样品，用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。 注意事项： 1.机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线。 2.开机前应检查转头安装是否牢固，机腔有无异物掉入。 3.样品应预先平衡，使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。 4.挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏，以免腐蚀机腔或造成事故。 5.擦拭离心机腔时动作要轻，以免损坏机腔内温度感应器。 6.每次操作完毕应作好使用情况记录，并定期对机器各项性能进行检修。 7.离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。 附：相对离心力与每分钟转速的换算 离心机的转速，在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示。由于离心力不仅为转速函数，亦为离心半径的函数，即转速相同时，离心半径越长，产生的离心力越大。因此仅以转速表达离心力是不够科学的，近年来主张用相对离心力（RCF）来表示比较合理。现在国际资料中，已改用相对离心力来表示。 两者的互换公式如下： PCR扩增仪: 目前各公司提供的PCR仪操作方法各有不同，按其操作说明进行操作。 值得提出的是，在使用一定时期后，样品孔的实际温度与仪器显示温度有时会有较大差异，应当请厂商的技术支持人员校对仪器的各项性能。 数字式酸度计： 一、 准备工作 1.仪器应平放在符合使用环境的工作台上，依视觉角度支起支架。 3.pH值的定位测量法： （一）二点定位法（高精度测量方法） (1) 连接好电极线路，将参比电极及活化满24h以上清洁的PH电极移入第一标准缓冲液pH1中（例pH1=4.00），待仪器响应稳定后，调节定位旋钮至仪器显示为“0.00”； (2) 将电级系统从第1种标准液中取出，用去离子水冲洗干净后以滤纸吸干电级表面水份，移入第2种标准液（例pH2=9.18）中，仪器响应稳定后，调节斜率旋钮，使仪器显示为（△pH=pH1-pH2=9.18-4.00=5.18）此后斜率旋钮不可再动，除非更换电极系统； (3) 斜率调节完成后，重新调节定位旋钮，使仪器显示第2种标准液的实际pH值（9.18），至此2点定位结束； (4) 将电极从第2种标准液中取出冲洗、吸干后移入待测溶液中，仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。 （二）一点定位法（粗略测量法） (1) 将温度补偿旋钮调至溶液温度值； (2) 向左将斜率补偿旋钮旋转至头； (3) 将电级系统移入标准液中（一点法仅用一种标准液，如pH=4.00时），调节定位旋钮使仪器显示“4.00”； (4) 取出电级冲洗吸干水分后移至待测溶液中，仪器响应稳定后显示的数值即为待测溶液的pH值。 三、温度的测量 1.将功能选择拨至温度档。 2.将温度探头插入插孔，并将温度探头置于环境条件或溶液中，仪器响应稳定后仪器显示值即为环境条件或溶液温度值。 四、注意事项 1.认真做好仪器使用前准备工作。 2.仪器通电后或测量过程中出现显示不稳或乱跳现象，应切断电源进行检查，如电压、预热时间及电极系统等是否正常。 3.使用不同电极应注意排除离子的干扰，选择好盐桥，必要时应使用离子强度固定剂。 4.电极系统从第1种溶液取出移入第2种溶液之前，须用

按要求应该灭菌。不过我有时灭，有时不灭，没发现有什么问题。

最好不要做。。。怀孕期间就不应该进实验室。。。分子实验相对于化学和材料毒性是小很多 但是依旧会接触到有毒物质。。。其实应该在准备怀孕的时候就不要进实验室才对。。。

由于它具有带强负电荷的理化特性，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。

你可以到百度百科里面查找，会有详细的介绍的

分子这边主要有DNA，RNA提取，单克隆构建，PCR扩增，文库构建，应该每个公司具体的都不太一样，我们公司是周末经常加班，而且是义务加班，希望能够帮到你 来自职Q用户：向女士看你做那个领域的了，现在都是一代二代测序，提取之类的，做多了就觉得烦，看你应聘的公司是什么样的，我现在在一家小公司，天天加班还没有加班费 来自职Q用户：李女士

指细胞离体培养

It should not be a problem, as long as you do not work on isotopes. Also, wear gloves to handle toxic chemicals.

1）完成氨酰-tRNA合成酶的结构，许多合成酶都是在此第一次克隆的。蛋白质-RNA的系统研究已扩展到哺乳动物的信号识别粒子和许多与mRNA相互作用的蛋白质。（2）病毒的RNA，如流感和狂犬病，目的是了解它们是如何复制和组合的。（3）真核细胞转录因子蛋白-DNA复合物晶体。最近，把重心放在T蛋白/DNA复合体和第一个Stat/DNA复合体的结构确定。EMBL格勒诺布尔分站参加欧洲结构蛋白质组项目，并积极与其他机构结成联合体：法国格勒诺布尔的结构生物学联合体PSB（Partnership for Structural Biology）和病毒寄主细胞相互作用研究单位UVHCI（Unit of Virus Host Interactions）。UVHCI创建于2007年1月，它的两个合作伙伴是：法国国家科学研究中心CNRS（French National Center for Scientific Research）和约瑟夫·傅立叶大学（格勒诺布尔一大）UJF（University Joseph Fourier）。在PSB框架下，EMBL格勒诺布尔分站不仅建设了专门用于解析海量蛋白质结构、功能和结晶的基础设施和设备，还与ILL合作，成立了生物分子氘化实验室D-Lab。中子光源在生物学研究方面的巨大优势是可“目击”氢原子，而同步辐射的X射线很难检测。大分子结构与功能之间的关系错综复杂，从作为单一原子存在时的生物功能，到作为一个组装体，或与其他分子结合的复合体时的生物功能不尽相同。氢原子的“目击”观察可为各层次氢原子的组织结构提供独一无二的信息资料。在生物大分子中，几近一半是由氢原子组成的。因此氢原子对构成生物大分子有着举足轻重的作用。氢原子参与酶的催化反应是生命存在的基础。氘，即重氢（质量约为氢的2倍），氘化是指对氢原子进行同位素分离，以替代氢原子。选择性地氘化氢原子并替代它，可对分子内部结构进行更细致入微的分析。氘化生物大分子是极其困难的，但这正是D-Lab所做的工作。它充分利用中子光源的优势，成为全球独一无二的中子源在生物领域的应用基地。

分子生物学实验主要包括植物、动物、微生物基因组、DNA的提取与鉴定，哺乳动物组织总RNA的提取与鉴定，质粒DNA的提取与鉴定，PCR扩增，分子杂交技术，限制性内切酶消化，分子克隆全过程和基因文库的构建等实验项目的原理及步骤。　　但其中最终重要的部分——　　第一，PCR实验原理。实验的反应分为哪三步？第一变性，第二退火，第三延伸，这三个阶段的细节都很重要，尤其是延伸。　　第二，大肠杆菌感受态的制备（CaCl2法），这个也是实验原理比较重要。另外这个实验需要注意的部分【①感受态细胞长时间处在常温状态，会严重影响到其转化率，因此应尽量减少常温操作，动作要迅速。②为减少对细胞的机械损伤，操作时动作不能剧烈。③尽量在无菌状态下操作，减少污染的可能。】　　第三，CTAB法提取植物基因组DNA实验原理！　　第四，根据基因序列完成基因的克隆，七个步骤全部要熟悉。　　难点即重点，各个实验的原理、步骤，还有一些注意事项，都是比较复杂的。　　对于分子生物学我个人觉得还是理论课比较重要的，而且我们老师之前就说过，在实验中，如果你的理论知识不够强大的话，因为分子生物都是肉眼不能看见的变化过程，一般结果都是只有最后才能知道，也就是说，你耗时很久很久做完实验发现之前不知道哪一步做错了，最后功亏一篑，这时候如果你还不知道理论方面的知识，那么基本上连哪一步做错都不知道，无法分析的话，实验还是很难继续做下去的。　　我个人觉得，对于分子生物学实验来说，PCR技术无疑是最重要的，我的专业不是纯粹的生物学，但是分子生物学是基础学科，而对于这门课来说，我们做的最重要，老师讲解的最细致的一个实验就是PCR了。　　大概来讲解一下这个实验吧，对于我这种专业，我做的是大肠杆菌的PCR，学生物的都知道PCR是什么，我就不多说了，现在实验室的主要仪器就是PCR仪，但是之前的提取过程也是很重要的，我之前做实验有一次的一个样品就是没提取好，最后什么都没有，同时试样过程中的各种试剂、各种用量都非常精细，很多试剂都是无色透明的，一定要细致，把各种试剂的使用量、添加顺序都按实验指导做好，中间的最核心的部分一本都是PCR仪做的，所以还好，一般也不会出什么错，之后还要跑个电泳，跑电泳还是比较简单啦，现在也有各种各样的不同的技术。

实验室重视与国内外同行的交流。聘请国内外著名学者作为顾问参与指导实验室的研究方向。多年来，出访来访的学术活动每年约有100多人次。与国外有密切学术联系合作研究的科研院校十多个，它们主要分布在欧美发达国家。近些年实验室举办过多次国际学术讲习班，主讲者来自世界著名科研单位，学员也有相当一部分来自世界各地。通过上述一系列的交流活动，不仅促进了实验室的科研工作，也扩大了实验室在国际同行中的影响。紧密结合“人口与健康”这一国家重大需求，为防治人类重要疾病、培养生物新品种提供理论依据，建成一个在分子生物学领域从事基础研究的实验室，跻身国际前列，并为我国国民经济建设作出贡献历来是实验室的总体发展目标。国家组织专家对实验室进行的四次评估所给予的鼓励激励着全室成员更加努力地投身于科学创新，同时在酝酿联合兄弟实验室在适当的时候争取成为国家实验室，以便在更高层次上为国家做出更大的贡献。

信号假说提出后得到许多实验的支持，其中最有力的一项实验结果是杂合蛋白研究的结果。黑猩猩的α-球蛋白是一种在游离核糖体上合成并存在于胞质溶胶中的可溶性蛋白，科学家在编码该蛋白的基因上接上一段编码E.coli分泌蛋白β-半乳糖透性酶（β-lactamase）的信号序列DNA， 然后将该基因加入到无细胞的转录和翻译体系中，并加入从狗组织中分离的ER膜，研究结果发现，杂合蛋白出现在ER腔中，而且信号序列被切除了。这一研究结果不仅证实了信号假说的正确性，也揭示了信号序列的一个重要特性：信号序列没有特异性，并且原核生物的信号序列在真核生物中也是有效的。

分子生物学它不象人体解剖学那样直观，不象生理学那样有条理化，更不象内外科那样有吸引力.很多医学大学生三羧酸循环学得很好，甚至很精，但对于后面的分子生物学，即基因信息传递一章却感到非常头痛，很多大五学生在考研时考虑到分值较小而干脆放弃对这一章的复习.其实大家只要强制自己静下心来花点时间先认真看好书本上分子生物学的第一章，即DNA的生物合成，当你对这一章看进去了，并且基本上看出了头绪，我相信你一定有信心有兴趣继续看下去，并且最好是连贯性地系统性地看后面的，争取一次性地看完分子生物学这一篇，用通俗的话说就是花大力气啃掉这块硬骨头.如果中途有特殊情况，那么间隔时间最好不要超过两天，否则你前面辛辛苦苦培养出来的兴趣将会消失的一干二净，你又将回到从前讨厌分子生物学的状态.分子生物学理论学习只有通过自己看书理解才能掌握。　　除了学习分子生物学理论外，分子生物学实验也很重要，只有通过分子生物学实验才能学到书上学不到的东西。因此，最好在大学阶段进入老师实验室，跟老师研究生学习分子生物学技术，那样才能更好地学好分子生物学理论。现在分子生物学实验发展非常快，如果只是看书根本掌握不到多少东西，如DNA、DNA提取、PCR、文库构建、测序等，在书上看着很复杂，而且印象还不深刻，如果进入实验室多做几次，其实这些实验是最基础的实验，而且不用看书都能自己做，原理非常复杂或高深难懂，但实际做起来也不是很难。

有毒。分子生物学实验室常见毒物：溴化乙锭EtBr，二甲基亚砜DMSO，丙烯酰胺Acrylamide，丙烯酰胺Acrylamide，苯甲基磺酰氟PMSF，二乙基焦碳酸酯DEPC。分子生物学实验室中研究对象主要是细胞，DNA，RNA和蛋白质。实验过程中我们常常要对这些实验对象进行观察，提取，裂解等操作。然而，要知道我们人体本身就是由细胞组成的，细胞内包括DNA，RNA，蛋白质。所以对这些实验对象进行操作时，使用的很多试剂也会对我们身体产生危害。

其曝光的时间因实验的具体方法和实验目的而异。在常规的PCR实验中，曝光时间通常是几秒钟到几分钟不等。在PCR实验中，DNA片段被扩增后，需要将PCR产物置于琼脂糖凝胶中进行电泳，以便观察扩增产物的大小和数量。在电泳过程中，使用紫外线照射琼脂糖凝胶，以激发DNA中的荧光素。荧光素在紫外线照射下会发出明亮的荧光，这样就可以看到琼脂糖凝胶上的DNA条带。在其他类型的分子生物学实验中，如Western blot和南方杂交等实验中，曝光时间也会有所不同。在Western blot实验中，曝光时间通常在几秒钟到几分钟之间，以便观察蛋白质的表达和定量。在南方杂交实验中，曝光时间通常需要数小时到数天，以便观察DNA探针与靶DNA的结合情况。

科学领域中任何一门学科的形成和发展，一般很难准确地说明它是何时、何人创始的。分子生物学的产生和发展，同其它学科一样，经历了漫长而艰辛的过程，逐步走向成熟而迅速发展的道路。 1871年，Lankester就提出，生物不同种属间的化学和分子差异的发现和分析，对确定系统发生的关系，要比总体形态学的比较研究更为重要。后来，随着德国、美国生理化学实验室的建立和生物化学杂志的创办，促进了生物化学的发展。当生物化学深入到研究生物大分子时， 1938年Weaver在写给洛克菲勒基金会的报告中，首次使用了分子生物学(molecular biology)一词。他写道：“在基金会给予支持的研究中，有一系列属于比较新的领域，可称之为分子生物学……”。一年以后，研究蛋白质结构的Astbury使用了这个名词，以后它变得越来越普遍。特别是在1953年，Watson和Crick发表了著名论文“脱氧核糖核酸的结构”以后，DNA双螺旋结构的发现，促进了遗传学、生物化学和生物物理学的结合，推动了分子生物学的形成和迅速发展，使生命科学全面地进入分子水平研究的时代，这是生物科学发展史上的重大里程碑。1956年剑桥医学研究委员会率先建立了分子生物学实验室，1959年创刊了《分子生物学》杂志，1963年成立了欧洲分子生物学国际组织，分子生物学从而成为崭新的独立学科，带动着生命科学迅猛发展，成为现代自然科学研究中的重要领域。 在分子生物学的形成和发展过程中，有许多重大的发现和事件，具体情况如下： 1864年：Hoope-Seyler结晶并命名了血红蛋白。 1869年：Mieseher第一次分离了DNA。 1871年：Lankester首先提出生物不同种属间的化学和分子差异的发现与分析，对确定系统发生的关系，要比总体形态学的比较研究更为重要。 1926年：Sumaer从刀豆的提取物中得到脲酶结晶，并证明此蛋白质结晶有催化活性。同年，Svedberg创建了第一台分析用超高速离心机，并用其测定了血红蛋白的相对分子质量约为6.8X104。 1931年：Pauling发表了他的第一篇关于“化学键特性”的论文，详细说明了共价键联结的规律。后来，又建立了处理生物分子的量子力学理论。 1934年：Bernal和Crowfoot发表了第一张胃蛋白酶晶体的详尽的X-射线衍射图谱。 1941年：Astbury获得了第一张DNA的X-射线衍射图谱。 1944年：Avery提供了在细菌的转化中，携带遗传信息的是DNA，而不是蛋白质的证据。实验证明，使无毒的R型肺炎双球菌转变成致病的S型，DNA是转化的基本要素。8年后，1952年，Hershey和Chase又用同位素示踪技术证明T2噬菌体感染大肠杆菌，主要是核酸进入细菌内，而病毒外壳蛋白留在细胞外。烟草花叶病毒的重建实验证明，病毒蛋白质的特性由RNA决定，即遗传物质是核酸而不是蛋白质。至此，DNA作为遗传物质才被普遍地接受。 1950年：Chargaff以不同来源DNA碱基组成的精确数据推翻了四核苷酸论，提出了Chargaff规则，即DNA的碱基组成有一个共同的规律，胸腺嘧啶的摩尔含量总是等于腺嘌呤的摩尔含量，胞嘧啶的摩尔含量总是等于鸟嘌呤的摩尔含量，即[A]＝[T]和[G]＝[C]。 1951年：Pauling和Corey应用X-射线衍射晶体学理论研究了氨基酸和多肽的精细空间结构，提出了两种有周期规律性的多肽结构学说，即alpha螺旋和B-折叠理论。 1953年：这是开创生命科学新时代的第一年，具有里程碑意义的是Watson和Crick发表了“脱氧核糖核酸的结构”的著名论文，他们在Franklin和Wilkins X-射线衍射研究结果的基础上，推导出DNA双螺旋结构模式，开创了生物科学的新纪元。同年，Sanger历经8年的研究，完成了第一个蛋白质一胰岛素的氨基酸全序列分析。 随后，1954年Gamnow从理论上研究了遗传密码的编码规律；1956年Volkin和Astrachan发现了mRNA(当时尚未用此名)；1958年，Hoagland等发现了tRNA在蛋白质合成中的作用；Meselson和Stahl应用同位素和超离心法证明DNA的半保留复制；Crick提出遗传信息传递的中心法则。 1960年：Marmur和Dory发现了DNA的复性作用，确定了核酸杂交反应的专一性和可靠性；Rich证明DNA-RNA杂交分子与核酸间的信息传递有关，开创了核酸实际应用的先河。与此同时，在蛋白质结构研究方面，Kendrew等得到了肌红蛋白0.2nm分辨率的结构，Perutz等得到了血红蛋白0.55nm分辨率的结构。 1961年：这是分子生物学发展不平凡的一年。Jacob和Monod提出操纵子学说，发表了蛋白质合成中遗传调节机理的论文，此论文被誉为是分子生物学中文笔优美的经典论文之一。同年，Brenner等获得mRNA的证据；Hall和Spiegelman证明T2 DNA和T2专一性RNA的序列互补；Crick等证明了遗传密码的通用性。 1962年：Arber提出第一个证据，证明限制性核酸内切酶的存在，导致以后对该类酶的纯化，并由Nathans和Smith应用于DNA图谱和序列分析。 1965年：Holley等采用重叠法首先测定了酵母丙氨酰-tRNA的一级结构，为广泛、深入地研究tRNA的高级结构奠定了基础。 1967年：Gellert发现了DNA连接酶，该酶将具有相同粘末端或者平末端的DNA片段连接在一起。同年，Philips及其同事确定了溶菌酶0.2nm分辨率的三维结构。 1970年：Temin和Baltimore几乎同时发现了反转录酶，证实了Temin 1964年提出的“前病毒假说”。在劳氏肉瘤病毒(RSV)感染以后，首先产生的是含有RNA病毒基因组全部遗传信息的DNA前病毒，子代病毒的RNA是以前病毒的DNA为模板进行合成的。反转录酶已成为目前分子生物学研究中的一个重要工具。 1972年～1973年：重组DNA时代到来。Berg、Boyer和Cohen等创建了DNA克隆化技术，在体外构建成具有生物学功能的细菌质粒，开创了基因工程新纪元。与此同时，Singer和Nicolson提出生物膜结构的液态镶嵌模型。 1975年：Southern发明了凝胶电泳分离DNA片段的印迹法；Gruustein和Hogness建立了克隆特定基因的新方法；O"Farrell发明了双向电泳分析蛋白质的方法，为分子生物学的深入发展创造了重要的技术条件；Blobel等报导了信号肽。 1976年：Bishop和Varmus发现动物肿瘤病毒的癌基因来源于细胞基因(即原癌基因)。 1977年：Berget等发现了“断裂”基因；Sanger、Maxam和Gilbert创立了“酶法”“化学法”测定DNA序列的方法，标志着分子生物学研究新时代的到来。 1979年：Solomon和Bodmer最先提出至少200个限制性片段长度多态性(RFLP)可作为连接人整个基因组图谱之基础。 1980年：Wigler等通过与某个选择性标志物共感染，从而把非选择性基因导入哺乳动物细胞；Cohen和Boyer获得一项克隆技术的美国专利。 1981年：Cech等发现四膜虫26S rRNA前体的自我剪接作用，随后又证明前体中的居间序列(intervening sequence，IVS)有五种酶的活力。几乎在同时，Altman从纯化的RNase P中，证明催化tRNA前体成熟的催化剂是RNase P中的RNA。具有催化作用RNA(ribozyme)的发现，促进了RNA研究的飞速发展。 1982年：Prusiner等在感染搔痒病的仓鼠脑中发现了朊病毒(prion)。 1983年：Herrera-Estrella等用Ti质粒作为转基因载体转化植物细胞获得成功。 1984年：McGinnis等发现果蝇、非洲爪蟾等同源异形基因中的同源异形盒(homeobox)的核苷酸序列；Schwartz和Cantor发明了脉冲梯度凝胶电泳法；Simons和Kleckner等发现了反义RNA。 1985年：Saiki等发明了聚合酶链式反应(PCR)；Sinsheimer首先提出人类基因组图谱制作计划的设想；Smith等报导了DNA测序中应用荧光标记取代同位素标记的方法；Miller等发现DNA结合蛋白的锌指结构。 1986年：Dryja等发现成视网膜细胞瘤(Rb)基因是一种抑癌基因；Robin等采用X-光晶相学，证实了DNA结合蛋白的螺旋-转角-螺旋结构。 1987年：Mirkin等在酸性溶液的质粒中发现三链DNA；Burke等用酵母人工染色体(YAC)作载体克隆了大片段DNA；Hoffman等确定了Dnchenne肌肉萎缩病灶的蛋白产物是萎缩素(dystrophin)；Hooper等和Kuehn等分别用胚基细胞进行哺乳动物胚的转基因操作，取得重大进展。 1988年：Landsehalz等在对CyC3(细胞色素C基因调节蛋白)、癌基因产物(MyC、V-jun、V-fos)和CBP(CCAAT盒结合蛋白)的研究过程中，发现了结合区亮氨酸序列的周期性，提出DNA结合蛋白的亮氨酸拉链结构模型；同年，Whyfe等证明癌的发生是癌基因的激活和抑癌基因失活的结果。 1989年：Greider等首先在纤毛原生动物中发现了端粒酶(telomerase)是以内源性RNA为模板的反转录酶；Hiatt等首次报导了在植物中亦可产生单克隆抗体。 1990年：人类基因组计划(HGP)全面正式启动；Simpson等发现了对mRNA前体编辑起指导作用的小分子RNA(guide RNA)；Sinclair等在人类Y染色体上发现了新的性别决定基因-SRY基因。 1991年：由欧洲共同体(EC)组织17个国家35个实验室的147位科学家，以手工测序为主要手段，首先完成了第一条完整染色体(酵母3号染色体)的315kb的测序工作；Hake等首次报导在植物中发现含有同源异形盒基因；Blackburn等提出调节聚合序列[通式为(T/A)mGn，m＝124，n＝1~8]的单链DNA可形成分子内或分子间的四螺旋结构，起着稳定染色体的作用。 1993年：Jurnak等在研究果胶酸裂解酶时，发现一种新的蛋白质结构-平行B螺旋(parallel B helix)；Yuan等在哺乳类细胞内发现一种参与调节细胞凋亡并具有剪切作用的蛋白质-IL-1B转换酶(interlukin-1B-convertingenzyme，ICE)。 1994年：日本科学家在((Nature Genetics》上发表了水稻基因组遗传图；Wilson等用3年时间完成了线虫(Celegans)3号染色体连续的2.2Mb的测定，预示着百万碱基规模的DNA序列测定时代的到来。 1995年：Cuenoud等发现了具有酶活性的DNA；Tu等在E.coli中发现了具有转运与信使双功能的RNA-10 Sa RNA。 1996年：Lee等首次报导了酵母转录因子GCN4中的氨基酸片段能自动催化合成自我复制的肽；洪国藩等采用“指纹-锚标”战略构建了高分辨率的水稻基因组物理图谱，DNA片段的长度为120kb；Goffeau等完成了酵母基因组DNA全序列(1.25X10 7bp)的测定。 1997年：Wilmut等首次不经过受精，用成年母羊体细胞的遗传物质，成功地获得克隆羊-多莉(Dolly)；Willard等首次构建了人染色体(HACs)；Salishury等发现DNA一种新的结构形式-四显性组合，这可能是基因交换期间DNA联结的一种方式。 1998年：Renard等用体细胞操作获得克隆牛-Marguerife，再次证明从体细胞可克隆出遗传上完全相同的哺乳动物；GeneBank公布了最新人的“基因图谱98""，代表了30181条基因定位的信息；Venter对人类基因组计划提出新的战略-全基因组随机测序，毛细管电泳测序仪启动。 从以上所述分子生物学的发展中，可以看出20世纪是以核酸的研究为核心，带动着分子生物学向纵深发展。50年代的双螺旋结构，60年代的操纵子学说，70年代的DNA重组，80年代的PCR技术，90年代的DNA测序都具有里程碑的意义，将生命科学带向一个由宏观到微观再到宏观，由分析到综合的时代。

你？？！！

主要职责是确保学校的防疫要求，师生的身体健康。在采样过程中严格按照标准规程操作并做好个人防护；负责样品的入库、存放和出库；对提取后的核酸进行实时荧光定量聚合酶链式反应检测；使用高通量测序仪对核酸文库进行碱基序列的测定；分析高通量测序仪得出的数据并出具报告；配置、存放和管理核酸提取试剂、建库试剂和测序试剂。核酸检测组的招聘要求是：1、分子生物学、生物化学相关专业

甲醇常常用于分析试剂或者清除去油剂，有很大的毒性并易挥发。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大，它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸气能损害人的呼吸道粘膜和视力。急性中毒症状有：头疼、恶心、胃痛、疲倦、视力模糊以至失明，继而呼吸困难，最终导致呼吸中枢麻痹而死亡。慢性中毒反应为：眩晕、昏睡、头痛、耳鸣、视力减退、消化障碍。使用时要避免吸入其挥发的汽雾。要戴合适的手套和安全眼镜。而且一些有毒有害的物质千万不要随意丢弃，不要让收拾垃圾的阿姨大叔们遭受这种伤害，一定要有专门的处理方法。