如何降低ELISA的背景

elisa实验原理是：通过特定抗原与抗体的相互作用来检测和定量分析目标物质。下面将详细介绍ELISA实验的原理：1.ELISA的基本原理实验基于抗原与抗体的高度特异性结合，利用酶标记技术和吸附作用进行检测和定量分析。基本步骤包括：涂覆固相载体、非特异性结合位点的阻断、特异性抗原与抗体的结合、酶标记二抗的结合、底物添加和反应终止。通过测量底物的酶催化生成物的颜色或荧光强度，可以间接反映出目标物质的存在量。2.直接ELISA的原理直接ELISA中，目标抗原直接与被酶标记的抗体结合。具体步骤包括：将抗原溶液加到固相载体上，使其吸附；添加被酶标记的特异性抗体，形成抗原-抗体复合物；洗涤去除未结合的物质；加入底物，被酶催化生成可测量的产物。产生的信号强度与目标抗原的浓度成正比。3.间接ELISA的原理间接ELISA中，目标抗原首先与非酶标记的特异性抗体结合，然后再与被酶标记的二抗结合。具体步骤包括：将抗原溶液加到固相载体上，使其吸附；添加非酶标记的抗体，形成抗原-抗体复合物。洗涤去除未结合的物质；加入被酶标记的二抗，与抗原-抗体复合物结合；再次洗涤去除未结合的物质；加入底物，被酶催化生成可测量的产物。产生的信号强度与目标抗原的浓度成正比。4.间接竞争ELISA的原理间接竞争ELISA在间接ELISA的基础上进行了一些修改，用于检测样品中特定抗原的存在量。具体步骤包括：将抗原溶液加到固相载体上，使其吸附。加入被酶标记的特异性抗体和待测样品；洗涤去除未结合的物质；加入底物，被酶催化生成可测量的产物。产生的信号强度与待测样品中特定抗原的浓度成反比。ELISA实验的原理基于抗原与抗体的特异性结合、酶标记技术和底物反应等步骤，通过测量产生的信号强度来定量分析和检测目标物质的存在量。不同类型的ELISA实验可以根据实验设计和样品特点选择合适的方法，以满足不同的研究需求。

elasa实验原理如下：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。双抗夹心法适用于大分子物质的检测。将已知的可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体表面，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法，具有快速、灵敏、简便等优点。竞争法适用于较少表位的小分子物质。将抗体包被于微孔板中，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，加入标准品和生物素标记的抗原物质进行竞争结合。做实验的注意事项：1、实验前的准备工作很重要，试验前要准备充分，拿到任务应当进行简单的思考，将试验需要的各种试剂、试液、仪器以及试验的流程、注意事项、以前试验当中遇到的问题等想清楚，准备好，免得到时少东少西，自乱阵脚。第一次新实验的话最好请教一下做过类似实验的人，对于不常做的实验最好做一份详尽的试验流程图做时贴在试验台前，需要特别加以注意的地方要特别标注，可以随时参照。2、保持实验室整洁。做完实验做到药品归位，用过的仪器等恢复原样，不能做到哪里摊到哪里，永远把你的实验台面保持干净，不但是为了让你得到很好的结果，更是为了你自己的心情做实验不能做到整洁。实验时养成隋手清理的习惯。3、消煮后的原液做完后不要急着倒掉，最好等数据算出再倒掉，这样遇异常数据或超标数据，不用重复消煮就可以复检。

ELISA是免疫学的经典实验，酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA），指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

是用空气结合的

　　两者都是基于抗原与抗体之间能发生特异性结合这一基本原理。　　免疫组化是对组织标本或细胞标本中的抗原类物质如细胞中的病原体、蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、酶、激素、核酸等进行定位或定量检测，检测材料是石蜡切片或细胞涂片，检测时用到的抗体可以用酶标记，也可以用荧光素标记。 酶联免疫吸附试验既可以检测抗原也可以检测抗体，若检测抗体，则酶标板需要用抗原包被；若检测抗原，则酶标板需要用抗体包被。

实验大鼠可以取胆汁酸，先包被大鼠的总胆汁酸捕获抗体的包被微孔中，然后依次加入标本、标准品、HRP标记的监测抗体，经过温育并洗涤

1、Cell-BasedELISA的优点：Cell-BasedELISA（基于细胞的ELISA）是一种全新的ELISA技术，有两个最突出的优点：1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了实际情况。同时不用包被微孔板，简化了实验流程，有助于提高效率。科研人员在一个96酶联板上，便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样本的损失也能降到最低，比起其他普通的ELISA测定方法，这项全新的ELISA技术能更快速、更方便地一次检测大量的细胞内蛋白。1.2可同时检测两种不同蛋白：封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗，然后再加入不同的二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，可以减少工作量，此外还可以满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。2、Cell-BasedELISA的两种技术：某些公司发展了双通道Cell-BasedELISA技术；双通道与单通道Cell-basedELISA比较：双通道cell-basedELISA，顾名思义，即一次可以同时检测两种目的蛋白，R&DSystems提供的Cell-basedELISA就是双通道cell-basedELISA，原理略：（需要荧光检测方式和相应仪器）；单通道cell-basedELISA，即一次只能检测一种目的蛋白，他和普通ELISA的主要区别在于样品处理过3、cell-basedELISA的应用：该产品，最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量；4、有cell-basedELISA产品的公司：目前，多家elisa产品提供提供cellbasedelisa试剂盒，如Rndsystems，raybiotech，ebioscience，millipore等公司；5、如何自己进行cellbasedelisa实验？事实上，根据单通道的cellbasedelisa原理，可以自己建立cellbasedelisa实验系统；细胞加入培养板中；加入刺激物或者抑制剂进行培养；对细胞进行固定或者封闭；加入第一抗体；加入HRP结合的二抗（二抗的选择，同westernblot）；加入底物进行显色；

神经保护剂对小白鼠实验原理，巴比妥类，抑制中枢神经系统，随着剂量的由小到大，中枢抑制作用的程度，由浅入深，当剂量大于催眠剂量时有抗惊厥作用，

双抗体夹心法实验原理： 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色.TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的C3呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度.

一、实验目的1.深入了解ELISA 法测定抗体效价的原理。2.掌握ELISA 法测定单克隆抗体效价的方法。二、实验原理ELISA 是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色，根据颜色的有无和深浅，定位或定量抗原/抗体。ELISA 法是免疫酶技术的一种，其特点是利用聚苯乙烯微量反应板(或球)吸附抗原/抗体，使之固相化，免疫反应和酶促反应都在其中进行。在每次反应后都要反复洗涤，这既保证了反应的定量关系，也避免了末反应的游离抗体/抗原的分离步骤。在ELISA 法中.酶促反应只进行一次，而抗原、抗体的免疫反应可进行一次或数次，即可用二抗(抗抗体)、三抗再次进行免疫反应。目前常用的几种ELISA 方法有：测定抗体的间接法，测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为：首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内，加待测抗体，保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质，加酶标抗抗体，保温后洗涤，加底物保温30分钟后，加酸或碱终止酶促反应，用目测或光电比色测定抗体含量。……详细资料请参考：on http://www.bio1000.com/experiment/immunology/229066.html

不准确

自从Engvall和Perlman(1971）首次报道建立酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。尽管早期的ELISA由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。如今ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。 过氧化物酶（HRP）广泛分布于植物中，辣根中含量最高，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%），分子量约40 000，约由300个氨基酸组成，等电点为pH 3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的最大吸收光谱分别为275nm和403nm。酶的纯度以RZ表示：RZ=OD403/OD275纯酶的RZ多在3.0以上，最高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶，非酶蛋白约占 75%，不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢，催化反应时的供氢体有几种：⑴邻苯二胺（OPD），产物为橙色，可溶性，敏感性高，最大吸收值在490nm，可用肉眼观察判别，容易被浓硫酸终止反应，颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA中最常用的一种；⑵联大茴香胺（OD），产物为橘黄色，最大吸收值在400nm，颜色较稳定；⑶5－氨基水杨酸(5－AS）：产物为深棕色，最大吸收值在449nm，部分溶解，敏感性较差；⑷邻联甲苯胺（OT）产物为蓝色，最大吸收值在630nm，部分溶解，不稳定，不耐酸，但反应快，颜色明显。 良好的酶结合物取决于两个条件：即高效价的抗体和高活性的酶。抗体的活性和纯度对制备标记抗体至关重要，因为特异性免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。在酶标记过程中，抗体的活性有所降低，故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白，最好使用亲和层析提纯的抗体，可提高敏感性，而且可稀释使用，减少非特异性吸附。酶与抗体交联，常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为：将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中，加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠（NaIO4）水溶液0.5ml，混匀置4℃冰箱30分钟 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室温放置30分钟后加入含5g纯化抗体的水溶液1ml，混匀并装透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时（或过夜）使之结合，然后吸出，加硼氢化钠（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小时，将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液，置4℃冰箱30分钟后离心，将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中，并对之透析过夜（4℃），次日离心除去不溶物，即得到酶标抗体，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。 测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。⑴ 酶与抗体的活性　常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以ELISA方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。⑵ 结合物的定量测定　一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：酶量（mg/ml）=OD403×0.42IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62已知酶量和IgG量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×100%用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果最好。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时最好。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时最好。ELISA方法的基本类型、用途及操作程序根据ELISA所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。 本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。⑶ 结果判定　已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。 本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。 此法与双抗体夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。 此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。 本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。 本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性，该方法的主要程序为：① 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。 与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被　取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜彻底干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭　将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检血清　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。⑸显色　加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定　以阳性、阴险血清作为对照，膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应，否则为阴性反应。 （C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais,B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面积，提高反应的敏感性，且容易洗涤，不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似，只是载体不同。以对布氏杆菌抗原的检测为例，C－ELISA的主要程序为：⑴ 首先把抗布氏杆菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭；⑵ 加被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次；⑶ 加酶标记的抗布氏杆菌抗体，于室温下感作30分钟，然后洗涤5次；⑷ 加入底物液显色；⑸ 测定OD值。

做好对照正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。实验条件的选择在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。进口分装：检测范围和灵敏度不同，用量少时，可使用分装，前期是它的长久性不是很好。试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。试剂盒重复性好，板内、板间变异系数均<9 %。试剂的组份都多给20%的富余量，确保完成48/96孔的检测，避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作，保证实验结果的重复性。白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6, 骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血清和细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94的 700 pg/mL 预期用途

elisa试剂盒实验中的封闭液小知识 ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理： 1、ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用; 2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。 3、加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保护剂”的作用。 4、蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。封闭剂还可用5%的脱脂乳(市售即可)，0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。封闭剂的原理就是与酶联板上未结合抗原或抗体的微孔中用封闭剂封闭上，结合抗体或抗原的时候就不会产生非特异结合了，不会影响实验的准确度。tween的作用：虽然不能单独封闭，但和BSA在封闭时会起到清洗非特异性结合或结合不牢固的蛋白的作用，假如抗体包被在板上会出现YY-附件：ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置?最近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下：(1)　ELISA实验包被缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(3)　ELISA实验稀释液;(4)ELISA实验终止液(5)ELISA底物缓冲液(6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液(7)　ELISA实验ABTS使用液(8)ELISC。试剂(1)　ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):NaHCO3 1.59克NaHCO3　 2.93克加蒸馏水至1000ml(2)　ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15MKH2PO4 　　　　 　0.2克Na2HPO4·12H2O　　2.9克NaCl　　　　　 　　8.0克KCl　　　　　　　 　0.2克Tween-20　0.05%　 0.5ml加蒸馏水至1000ml(3)　ELISA实验稀释液：牛血清白蛋白(BSA) 0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。(4)　ELISA实验终止液(2M　H2SO4)：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。(5)　ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml0.1M 柠檬酸(19.2克/L)　　　　　 24.3ml加蒸馏水50ml。(6)　ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5)　　　 10ml0.75%H2O2 32μl(7)　ELISA实验ABTS使用液:ABTS　　　　　　　　0.5mg底物缓冲液(PH5.5)　 1ml3%H2O2 2μl(8)ELISA实验封闭液：牛血清白蛋白(BSA) 5克加洗涤缓冲液至100ml。值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉，不适合长期保存。生物帮推荐ELISA相关产品，详情见：封闭试剂、终止溶液、封闭肽、ELISA稀释液、ELISA试剂盒、ELISA缓冲液、ELISA洗脱缓冲液为了保证ELISA实验的准确性，实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要精确，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。 ELISA试剂盒http://www.hybiosh.com/Products/T53531.html 源自先进的酶联免疫技术上海恒远物科技有限公司，涵盖国内外专家的经验与智慧。采用先进的技术和设备，确保品质的同时，降低成本，为更多有需要的研究人员，节省实验经费，保证实验质量，为国家的科技发展多做贡献。多家生物科研基地合作伙伴，实力团队倾力打造专注于elisa试剂盒的生产，研发，助力您的科研试验!

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质.2) 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质.3) 加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关.4) 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测.在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题.双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应.采用F(ab")或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标(参见6.2).双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心.2.2 双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似.用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体.与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法. 竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合.标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应.如抗原为高纯度的,可直接包被固相.如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原.洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应.竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc ELISA一般采用此法.另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应.抗HBe的检测一般采用此法.2.5 竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式.其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合.标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅.小分子激素,药物等ELISA测定多用此法.

除脂 ： 在操作含有脂肪的样本的前处理过程中， 都会接触到除脂这个过程， 一般的除脂过 程都是通过液液分配萃取过程进行实现的， 脂肪属于非极性化合物， 而一般说来药物大 多属于极性化合物， 根据有机化学中相似相溶的原理可知， 在进行除脂过程一般选用非 极性试剂进行除脂，比如正已烷、四氯甲烷、正庚烷、环已烷或其他饱和烷烃等，而在 实验操作过程中，一般说来，还需要考虑到试剂的毒性以及其他危害性，所以正常的实 验过程中，最好选用对人体伤害较少且不容易挥发的试剂进行实验操作，比如正已烷、 正庚烷等，这样既可以达到除脂的效果，也可以保证该方法的回收率。 如果实验室并无以上所列的这几种试剂，也可利用其他非极性有机化合物进行代 替，但不宜选用分子量相对过大的试剂。 在除脂过程中，一般说来操作后脂肪会带有一定的颜色，可能为浅黄色，而无机相 则为透明无色液体， 以此也可以清楚的知道目标相处于上层还是下层， 避免造成实验误 差。 。

免疫印迹实验和酶联免疫的区别如下：免疫印记一般是要把检测的样品转到膜上,再用抗体检测酶联免疫一般是把抗体固定在支持物上,再与要检测的样品反应,目标物就会与抗体结合而留在支持物上。WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。WB只能用抗体去检测你的蛋白样品。ELISA可以固定抗原也可以固定抗体。WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；免疫印迹实验：免疫印迹法 (Western blotting) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。 免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法 Southern blot 相类似，亦被称为Western-blot.原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。酶联免疫实验：1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。原理：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

小鼠ELISA试剂盒用于测定小鼠体内特定蛋白质的含量的检测方法，检测范围指的是该试剂盒可以检测的目标蛋白质的浓度范围。不同品牌和型号的小鼠ELISA试剂盒的检测范围可能会有所不同，小鼠ELISA试剂盒的检测范围通常在pg/mL到ng/mL之间。对于ELISA试剂盒，其基本原理是将样本中的目标蛋白质与特异性抗体结合，然后通过荧光、颜色等方式进行检测。ELISA试剂盒检测范围的确定与所使用的抗体、检测物以及检测反应的灵敏度密切相关。检测范围应该根据需要进行选择，以确保其可以准确地检测到实验样本中的目标蛋白质，同时避免样本中浓度过高或过低而导致的检测结果失真。小鼠elisa试剂盒当实验需要检测的目标蛋白质浓度特别高或特别低时，可能需要选择不同品牌和型号的小鼠ELISA试剂盒来满足实验需求。在选择适当的ELISA试剂盒时，需要考虑以下因素：1、抗体特异性：选择具有高特异性的抗体，以确保可以准确地检测目标蛋白质。2、基质干扰：样本中可能存在不同程度的基质干扰。为了避免基质干扰影响检测结果，应选择适当的样本预处理方法。3、灵敏度：对于浓度较低的目标蛋白质，需使用灵敏度较高的ELISA试剂盒。4、动态范围：动态范围内可以实现线性检测，结果与目标蛋白质浓度成正比。因此，应根据预期的目标蛋白质浓度选择适当的ELISA试剂盒。Elisa检测在进行小鼠ELISA实验时，还需要注意以下几点：1、样本获取：样本的采集和保存条件应符合标准要求，以避免样本中的蛋白质失活或降解。2、样本稀释：通常情况下，样本需要进行恰当的稀释处理，以确保检测结果在试剂盒的检测范围内。3、交叉反应：不同抗体之间或与其他组分之间可能存在交叉反应，因此需要进行适当的交叉反应实验。4、实验重复：为了确保结果的准确性和可靠性，建议进行多次实验，以获得重复性较好的数据。小鼠ELISA试剂盒的检测范围通常在pg/mL到ng/mL之间，但在选择试剂盒时需要考虑多方面因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。

强酸都可以.我们这用的是硫酸

就是空腹抽血化验

酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）是在免疫酶技术。ELISA的基本原理有三条：1抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；2抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

1、Cell-Based ELISA 的优点：Cell-Based ELISA（基于细胞的ELISA）是一种全新的ELISA技术，有两个最突出的优点：1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了实际情况。同时不用包被微孔板，简化了实验流程，有助于提高效率。科研人员在一个96 孔酶联板上，便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样本的损失也能降到最低，比起其他普通的ELISA 测定方法，这项全新的ELISA 技术能更快速、更方便地一次检测大量的细胞内蛋白。1.2 可同时检测两种不同蛋白：封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗，然后再加入不同的二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，可以减少工作量，此外还可以满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。2、Cell-Based ELISA 的两种技术：某些公司发展了双通道Cell-Based ELISA技术；双通道与单通道Cell-based ELISA比较：双通道cell-based ELISA，顾名思义，即一次可以同时检测两种目的蛋白，R&D Systems提供的Cell-based ELISA就是双通道cell-based ELISA，原理略：（需要荧光检测方式和相应仪器）；单通道cell-based ELISA，即一次只能检测一种目的蛋白，他和普通ELISA的主要区别在于样品处理过程3、cell-based ELISA 的应用：该产品，最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量；4、有cell-based ELISA产品的公司：目前，多家elisa产品提供商均提供cell based elisa 试剂盒，如Rnd systems， raybiotech， ebioscience，millipore 等公司；5、如何自己进行cell based elisa实验？事实上，根据单通道的cell based elisa原理，可以自己建立cell based elisa实验系统；细胞加入培养板中；加入刺激物或者抑制剂进行培养；对细胞进行固定或者封闭；加入第一抗体；加入HRP 结合的二抗（二抗的选择，同western blot）；加入底物进行显色；

做好对照正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。实验条件的选择在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。（2） 包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。（4）　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。进口分装：检测范围和灵敏度不同，用量少时，可使用分装，前期是它的长久性不是很好。试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下。试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。试剂盒重复性好，板内、板间变异系数均<9 %。试剂的组份都多给20%的富余量，确保完成48/96孔的检测，避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作，保证实验结果的重复性。白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6, 骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血清和细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94的 700 pg/mL 预期用途

酶联免疫吸附试验就是ELISA检测主要原理是利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以三明治法、间接法、以及竞争法三种为主

ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，ELISA试剂盒这在很大程度上取决于结果的信噪比。ELISA试剂盒背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。洗涤很重要洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料（如非特异结合的抗体或检测试剂）残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。封闭更关键封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、ELISA试剂盒吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。ELISA实验最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，ELISA试剂盒因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度（正常浓度为0.01-0.1%），它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同，是永久的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白（BSA）、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。抗体浓度须优化ELISA实验我们通常会follow师兄师姐留下来的操作步骤，ELISA试剂盒但是如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。记住，非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。检测试剂要适量另一点也很显而易见：切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。

单克隆抗体是利用单一的B细胞，克隆出具有高度的均一性，仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体的原理，目前在临床上的应用主要是应用在检验诊断方面和治疗方面。检验诊断方面主要可以用来检测某些病原微生物的抗原抗体，肿瘤抗原的检测，免疫细胞以及亚群的检测，还有激素的测定，或者细胞因子的测定。治疗上主要是用于肿瘤的靶向药物治疗中。例如利妥昔单抗、曲妥珠单抗，都属于单克隆抗体的抗肿瘤药物。另外，在肿瘤的放射免疫显像技术上，也可以应用到单克隆抗体的原理。

还是没有活的希望

工作原理：吸尘器的风机叶轮在电动机高速驱动下，将叶轮中的空气高速排出风机，同时使吸尘部分内空气不断地补充进风机。这样不妨与外界形成较高的压差。吸嘴的尘埃、脏物随空气被吸入吸尘部分，并经过漏器过漏，将尘埃、脏物收集与尘筒内。结构：1、电机：有铜线电机和铝线电机之分。铜线电机有耐高温、寿命长、单次操作时间长等优点，但价格较铝线比较高；铝线电机有着价格低廉的特点，但是耐温性较差、熔点低、寿命不及铜线长。2、过滤系统：尘袋、前过滤片、后过滤片。按过滤材料不同又分：纸质、布质、SMS、海帕（HEPA高效过滤材料）。3、喉管：所有吸力式的吸尘器都会装备硬喉管，用来连接清洁用的软喉管及附件。4、电动刷：内式吸尘器的清洁头，是混合式吸尘器特别有的配件。5、圆刷头：也较小吸嘴，可做360*回转，方便清洁家具、精细网织物等。6、扁吸嘴：又称缝隙吸嘴，是一支细长、扁平的硬吸嘴。特别适用于清洁墙边、辐射式暖片、角落及浅窄地方。7、扫尘刷：用长而软的鬃毛制成，适用于清洁窗帘、墙壁等。8、吸尘器的原件：绝大部分吸尘器都配有一个组装刷头，供清理地板及地毯使用。吸力式吸尘器还会配备一系列的清洁刷及吸嘴，以便清扫角落、窗帘、沙发和缝隙用。扩展资料：吸尘器的使用维护和保养1、长期使用吸尘器时，会因过滤网网眼的堵塞而致使吸力下降。为了防止吸力降，应定期用水清洗过滤网以及布袋，洗后在阴凉处晾干再使用，即可恢复吸力。2、防止机头进尘、进水、受潮。3、若主机发热，发出焦味，或有异常振动和响声，应及时送修，不要勉强使用。4、软管不要频繁地折来折去，不要过度拉伸和弯曲。5、吸尘器的放置位置，尽量不要把吸尘器放在潮湿或有腐蚀性气体的场所，选择通风干燥的地方，以免引起机体的损坏。　参考资料来源：百度百科-吸尘器

责任编辑： 刘琼为何会发生地震？如何提高地震预测和风险防范能力？地震发生后又怎样将损失降到最低？针对这些长期困扰地震学界的难题，不久前，我国启动了地震科技创新工程，拟通过“透明地壳”“解剖地震”“韧性城乡”和“智慧服务”4个计划的实施，未来10年，我国的地震科学研究水平以及防震减灾能力将大幅度提升，达到国际先进水平。开展对地下结构的探察，让地壳逐渐变透明，寻找地震规律地表发生的一切地学现象几乎都能在地球深部找到答案。以地震为例，地震是地球内部应力作用的结果，了解地壳结构和地下应力变化，有助于我们探究地震孕育发生的规律。“我们现在可以上天下海，但对脚下大地的认知还不够。人类对地壳结构了解不够，进而难以深入研究地震孕育发生规律，突破地震预测的科学难题，”中国地震局地震预测研究所副所长张晓东说。张晓东介绍，“透明地壳”就是要开展对地下结构的探察，特别是主要地震带的深浅结构和断层活动习性，把地下搞清楚。“这就好比给地球深部‘做CT"，让看不见的地壳逐渐变透明，进而从中寻找地震孕育发生的规律。”“CT”如何做，原理如何？中国地震局地球物理研究所研究员吴建平介绍，地震被认为是瞬间照亮地球内部的明灯。由于地球内部物质的物理性质不同，其密度、磁性、电阻率以及地震波穿过时的传播速度和衰减特性存在差异。地震波在地下介质中传播时会发生反射、折射和透射，仪器接收到这些带有地球内部信息的信号，经过复杂的科学处理以后，就会得到地下结构，包括地下三维介质的物性、电性、磁性等图像，科学家在此基础上就能开展深入的地震科学研究工作。“通过观测不同传播路径的地震波速变化，获得地球内部结构图像，其原理与医学中的CT成像类似。”我国在内陆采用气枪震源在水中激发地震波的方法获取地球内部结构信息和连续、高精度介质变化图像。目前，地震科研人员已经在全国建立了4个人工气枪震源实验基地，未来还要建设6个人工气枪震源实验基地。实施“透明地壳”计划后，我国将建立中国大陆壳幔三维精细结构模型，获得地壳介质物性随时间变化图像，查明约200条活动断层空间展布和活动性参数，获得综合地球物理场及时间变化图像。张晓东说，想了解清楚地下变化情况，仅有静态的“透明地壳”还不够，需要有高密度的综合地球物理场动态观测结果。我国还将利用GPS、水准、重力、地磁观测网络，监测获取中国大陆三维地壳运动图像和地表重力场、岩石圈磁场变化图像，为强震中长期危险地点预测提供依据。详细解剖已发生地震，提升对强震孕育发生机理的科学认识“透明地壳”是“解剖地震”的基础，前者提供大的地壳构造和结构背景，后者主要研究地震孕育发生机理，探索地震预测方法。“你去医院看病，有了检查的‘片子"，医生才能据此分析病情。”张晓东说。吴建平介绍，“解剖地震”计划最终目标是对已发生的地震进行详细解剖，对典型强震进行全面深入的综合研究，建立典型强震的科学样本。“世界上大多数的大地震属于板缘地震，而我国很多是大陆内部地震，其强震孕震机制和前兆机理存在差异。‘解剖地震"能够发展和提出适用于中国大陆强震发生的机制和模型，其相关研究成果，还能为中亚等大陆内部地震多发国家提供借鉴。”张晓东说。国际上主要国家都开展了构建区域动力学模型和地震综合预测研究方面的工作。比如，美国通过25年的持续研究，建立了加州地区强震孕育发生的概率预测和动力学模型。我国地震预测研究始于1966年，经过多年探索，我国发展了中国大陆地震的活动地块理论，并在川滇地震多发区建设了地震监测预报实验场。“解剖地震”计划完成后，我国将完成对海城、唐山、汶川和玉树等地震的深入研究，并构建相关地震孕育发生模型，提升对强震孕育发生机理的科学认识。我国对地球物理、大地测量、地球化学和地质学等海量观测资料，开展数据同化处理工作，结合以往研究成果和大震案例，提取相关参数，构建基于大数据的地震孕育发生的物理过程，研发基于超算技术的相关计算方法和软件库，开展地震数值模拟实验与检验，同时也探索人工智能等地震预测新方法。张晓东说，实施“透明地壳”“解剖地震”还存在一些技术难题。比如，地球结构的探测精度与观测站的密度密切相关，一般来说对探测目标的高精度精细探测需要更高的观测密度。目前，我国地震台阵探测布设的站间距在35公里左右。要开展密集观测，获得更高分辨率的地壳结构，台站观测密度还要加大。此外，大地震样本少，时间久远的震例观测资料的分辨率、精度、完备性、连续性等都难以满足研究的需求。建设国家地震科学大数据中心，显著提高城乡抗震能力地震是地球演化过程中发生的自然现象，即使将来科技发展到能够准确预报地震的程度，人类也无法阻止大地震的发生。保障人们生命财产安全，就要做好地震信息服务和提升地面建筑的抗震能力。“以前，我们只能在地震发生后提供发震时间、地点和震级信息，俗称地震三要素。现在我们还要提供其它地震学参数，例如震源机制、地震矩、应力降、震源破裂过程等信息，为政府和公众提供参考。”张晓东说。地震科技创新工程的“智慧服务”计划，旨在提升我国的地震信息服务水平。据介绍，我国将建设地震科学大数据中心，构建防震减灾信息从云到端的智慧服务体系，重构业务信息化流程，包括地震预警和速报、灾情评估和速报、地震区划精细服务、建筑物抗震能力、地震科学知识普及、抗震救灾等信息，产出相关服务产品，提高地震数据和产品在线存储、计算和服务能力，实现信息资源的集约化。“国家地震科学大数据中心将汇集涵盖地球物理、地球化学、大地测量和地质学等学科领域的观测数据，形成全国统一、分布管理、合作共享的地震数据资源体系，服务国防、核电、水利建设，服务城市重大基础设施、高速铁路安全。”张晓东说。地震损失降至最低，要做到地震发生时免遭破坏，或者即使造成一定程度灾害也具备高效可恢复性。这就需要了解地面建筑结构特点，加强抗震能力设计。“韧性城乡”计划就是以“地上结实”为主要目标，确保重要建筑和生命线工程在强震袭击后可以在短期内恢复功能，显著提高城乡抗震能力。据介绍，我国将率先建成10个示范韧性城镇。将科学评估全国的地震灾害风险，采用并创新世界上最先进的抗震技术提高城乡的可恢复能力。同时，开展隔震与减震技术、摇摆结构体系、自复位结构体系、可更换构件结构体系研究，为韧性城镇建设提供技术支持。（喻思娈 杨桐彤）文章转载于新华网

感染你,一种无形的感知.

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没有这个字，只有woodpecker这个字，意思是啄木鸟。啄木鸟科（学名：Picidae）：是鸟纲鴷形目的1科，约有221种。体长 90～560毫米。该科鸟类头亦大，但颈较长，嘴强硬而直，呈凿形，舌长而能伸缩，先端列生短钩；脚稍短，具3或4趾；尾呈平尾或楔状，羽干坚硬富有弹性，在啄木时支撑身体。共有约34属221种。除大洋洲和南极洲外，均可见到。啄木鸟可以在树上凿孔钩虫，它的嘴巴又长又尖又硬，能一直插进坚硬的木质部，舌头又长又细，长了许多倒刺，表面布满一层粘液，可以准确无误地把害虫钩出来。主要吃隐藏在树干内部蛀食的天牛、透翅蛾、吉丁虫等害虫。被称为“森林医生”。该科鸟类头亦大，但颈较长，嘴强硬而直，呈凿形，鼻孔裸露；角舌骨延成环带状，两侧自咽喉绕过枕部至上嘴基。舌长而能伸缩，先端列生短钩；脚稍短，具3或4趾；初级飞羽9片。头骨为蜥腭型，锄骨被一些成对的骨片所代替，颌腭骨细小远离两侧，胸骨后端每侧有2切刻，胸骨柄分叉。腿肌肉缺栖肌和副股尾肌；尾呈平尾或楔状，尾羽大都12枚，羽干坚硬富有弹性，在啄木时支撑身体。 啄木鸟最为常见的是绿啄木鸟和斑啄木鸟。绿啄木鸟体羽主要是绿色，下体污灰色带有绿色沾染。雄鸟的头顶为红色，非常鲜艳。斑啄木鸟的体形略小，上体羽色是黑底有白斑，以翅膀上居多，下体棕白色，尾下部是红色，雄鸟的头的后部也是红色。还有一种体形更小的啄木鸟叫蚁鴷，也较为常见，它的羽色比较特别，上体是淡银灰色的底色，密布着暗褐色的斑纹，好像蛇皮的花纹，下体近白色。它不会攀登树木，也不啄木捕虫，却在地上觅食蚂蚁，所以也叫地啄木鸟。啄木鸟有极为高超的捕虫本领，它的嘴强直而尖，不仅能啄开树皮，而且也能啄开坚硬的木质部分，很像木工用的凿子，它的舌细长而柔软，能长长地伸出嘴的外面，还有一对很长的舌角骨，围在头骨的外面，起到特殊的弹簧作用，舌骨角的曲张，可以使舌头伸缩自如，舌尖角质化，有成排的倒须钩和粘液，非常适合钩取树干上的昆虫及幼虫。它们用嘴敲击树干，在寂静的林中发出“笃，笃……”的声音，如果发现树干的某处有虫，就紧紧地攀在树上，头和嘴与树干几乎垂直，先将树皮啄破，将害虫用舌头一一钩出来吃掉，将虫卵也用粘液粘出。当遇到虫子躲藏在树干深部的通道中时，它还会巧施“击鼓驱虫”的妙计，用嘴在通道处敲击，发出特异的、使害虫产生恐惧的击鼓声，使害虫在声波的刺激下，昏头转向，四处窜动，往往企图逃出洞口，而恰好被等在这里的啄木鸟擒而食之。它们一般要把整株树的小囊虫彻底消灭才转移到另一棵树上，碰到虫害严重的树，就会在这棵树上连续工作上几天，直到全部清除害虫为止。啄木鸟啄食的害虫包括森林中鞘翅目的象甲、伪步行甲、天牛幼虫、金龟甲，鳞翅目的逼债蛾、螟蛾，以及花蝽象、臭蝽象、蝗虫、蚂蚁、蛴螬、小囊虫、天牛幼虫、蛴螬、白蚁等。啄木鸟每天敲击树木约为500—600次，啄木的速度极快，几乎是音速的两倍，这样它的头部则不可避免地要受到非常剧烈的震动，但它既不会得脑震荡，也不会头痛。原来在啄木鸟的头上至少有三层防震装置，它的头骨结构疏松而充满空气，头骨的内部还有一层坚韧的外脑膜，在外脑膜和脑髓之间有一条狭窄的空隙，里面含有液体，减低了震波的流体传动，起到了消震的作用。由于突然旋转的运动比直线的水平运动更容易造成脑损伤，所以在它头的两侧都生有发达而强有力的肌肉，可以起到防震、消震的作用。这种精妙的防震设置原理，给防震工程学提供了安全运动防护帽和防震盔的正确设计方案，现代的防护帽都具有一个坚硬的外壳，里面为一个松软的套具，它们之间留有一定的空隙，帽中再加上一个防护领圈，以防止在突然碰撞时造成旋转运动。由于啄木鸟为保护树木所作出的巨大贡献，人们称它们为“森林卫士”或“树木医生”。在k国的一些古书里，很早就有关于啄木鸟啄木食虫的记载，例如《禽经》中有“ 志在木”，《异物志》中有“穿木食蠹”的记载，明朝李时珍的《本草纲目》则指出：“此鸟斫裂树木取蠹食故名”，还指出：“（啄木鸟）刚爪利嘴，嘴如锥，长数寸，舌长于嘴，其端有针刺，啄得蠹，以舌钩出”。此外还有“南山有鸟，其名啄木。饥则啄树，暮则巢宿。无干于人，惟志所欲，性清者荣，性浊者辱。”，以及“丁丁向晚急还稀，啄遍庭槐未肯归。终日为君除蠹害，莫嫌无事不频飞。”等歌咏啄木鸟的诗作，可见啄木鸟自古就受到人们的喜爱和赞美。元音字母组合oo在单字里发短元音/u028a/的音，发音时，舌后部抬高，舌位中高，牙床半合，双唇呈圆形，小而突出，这个音大多出现在字中，也常出现在非重读的字末，但很少出现在字首,如：book 书wood 木头cookie 甜饼干，曲奇wool 羊毛foot 脚，英尺（英制长度单位）cook 烹调hook 钩住look 看希望我能帮助你解疑释惑。

你可以去百渡里的"MP3"里下载啊

数控缓蚀剂

三维皮肤CT成像检测系统的出现是目前诊断顽固性白癜风疾病最可靠的依据， 对久治不愈的各种类型的癜风患者采用三维皮肤CT能直接扫描出白斑皮下黑色素细胞的数量，为治疗白癜风提供了可靠依据！皮肤影像学对于皮肤科来说是一种创新的技术，皮肤CT作为集检测和治疗双重功效的全新技术，是皮肤影像学运用于皮肤病检测和治疗的代表，其在国外临床运用上的时间为10多年，广泛运用开来则才有5年左右的时间，但是却取得了突破性的成效，无论在皮肤病检测和治疗上都是一项不可替代的创新技术和高端技术，接受过皮肤CT治疗的患者都会为其精确的检测和高质量的疗效而欣喜不已，目前这一技术正在全世界范围内被广泛的普及开来。

电视机壳体用塑料经历了从 ABS 到 HIPS 和改性 PP 的发展过程，目前大型电视机壳体采用 ABS，小型电视机壳体采用改性 PP，中型电视机壳体则改性 PP、HIPS、ABS 三种材料都选用。电冰箱用塑料件有内胆、门内衬、门框格、顶框、密封条、把手和隔热条等，用量已占电冰箱重量的 40-45%，涉及的主要塑料品种有 ABS、HIPS、PP、PE、PVC 和 PU 等。洗衣机用塑料件有内筒、喷淋管、内盖板、底座、排水管、齿轮、叶轮等，涉及的主要塑料品种有 PP、改性 PP、ABS、LDPE、POM 和 GFPA。空调器中除了动力部件、室外机壳和固定板外，几乎都用塑料制成，塑料的使用量占 20-30%，涉及的主要品种有 PS、PP、AS、ABS。收音机中的壳体和按纽用 ABS 或 HIPS，滑轮用 POM，磁带用 PET，耳机用 PA。音响用塑料件有机箱、罩壳、绝缘材料、装饰件和插头等，涉及的主要品种有 PS、PP、HIPS、ABS、AS、PMMA 等。电风扇用塑料件有风扇叶、风扇壳体、按纽和旋纽，涉及的主要品种有 ABS、HIPS、改性 PP 等。电脑：家庭常用的电脑以及它的配件用足了塑料，它的键盘常用的塑料有 ABS、HIPS、PBT；连接线和接插件用 PVC 作为绝缘材料；显示器用 ABS、HIPS、改性 PP、PVC/ABS 合金；手提电脑的壳体则是用 PC/ABS 合金。其他饮水机中的壳体用 ABS、HIPS、改性 PP，水桶用 PC。热水器中的旋纽用 ABS，排烟管用 PVC 波纹管。吸尘器中的壳体用 ABS、HIPS、改性 PP，把手和软管用软质 PVC。电熨斗中的把手和按键用 ABS、HIPS，其它部件用的塑料有 PC、PA、PBT、PPO、改性 PP 等。微波炉、电磁灶、洗碗机、抽油烟机、电饭煲用的主要塑料有 ABS、HIPS、改性 PP 等。其他资料没有了，希望对你有帮助。

按Esc，在选项里有插件设置，你没设置，肯定出不来东西，好久没玩wow了，现在还有人玩这个游戏啊

吸尘器哪个牌子好？吸尘器十大品牌口碑比较好的吸尘器有：冰尊吸尘器、飞利浦吸尘器、戴森吸尘器、三星吸尘器、松下吸尘器、伊莱克斯吸尘器、美的吸尘器、360吸尘器、华为吸尘器。1、冰尊吸尘器。冰尊吸尘器被业内外人士尊称为“欧洲室内清洁领域领导品牌”,多年发展为其奠定了一定实力。冰尊(BENSHION)家用吸尘器是一款外形颜值高、内部动力强,老少皆可使用的清洁工具。轻量化设计,满足多场合清洁需求,使用者久握也不费力。大动力装置,无刷电机和动力锂电池足以保证22000pa吸力稳定输出,2000MA持久续航。冰尊(BENSHION)家用吸尘器在细节上精益求精,尘气分离装置设计、一键拆装设计,直击当下清洁产品设计盲点。综合考虑下来,冰尊(BENSHION)是家用无线吸尘器的不二之选。2、飞利浦吸尘器飞利浦家用吸尘器性能一点也不差。内搭power blade高速马达后成功保住了它大吸力的优势点,无论是螨虫还是灰尘,一台动力型飞利浦无线吸尘器都能完美解决。3、戴森吸尘器戴森家用吸尘器产品外形设计上和上述两款无太大差别,重点说一下内机双层放射式气旋,该气旋可以快速分离灰尘和空气。如果家中有经常过敏的人,选择该机能快速帮你捕捉到空气中过敏源,是个不错的品牌。4、三星吸尘器三星家用吸尘器外机主色调为轻奢灰,多功能样式下手持2合一,轻松扫吸灰尘和杂质。三星智能吸尘器释放出的20W大吸力使得清扫更有效,碎片、灰尘和毛发不再话下。特殊集尘桶装置,需要用户轻轻拉动控制杆来完成快速清尘工作。5、松下吸尘器松下家用吸尘器外吸直径大,吸尘面积大,外加特制的微尘感知系统,无论是大颗粒物还是小浮尘都能快速清除干净。

应该是sitting down here吧，坐在这里

在潘特拉斯水域中间。从上往下的第二个湖心岛周围水中的小怪，具体位置在一个大恐龙阵营战那块。《异度之刃3》击杀海母甲兽会有几率掉落耐酸甲壳。《异度神剑3》使用了类似《异度神剑X》的人设风格，角色设定相比《异度神剑2》更加成熟，根据任天堂的高桥伸也透露，《异度神剑3》的故事讲述的是《异度神剑》以及《异度神剑2》世界未来的故事。特色系统：可参与到各种试炼中去，打试炼增加个人角色的五维属性；接触不同的人或者事件可以获得不同奖励。《异度神剑》（日文：ゼノブレイド；英文：XenobladeChronicles；又译为异度之刃）是由MonolithSoft制作，任天堂游戏公司出版发行的角色扮演游戏，于2010年6月10日发行，登陆任天堂旗下的Wii平台，2015年4月2日移植至3DS平台，2020年5月29日登陆Switch平台。《异度神剑》由指导过《异度装甲》与《异度传说》系列作品开发的高桥哲哉领衔制作。该作品独立于《异度装甲》世界观，以远古残存的巨神与机神遗骸为舞台，叙述人与机械纷争下所展开的奇幻冒险。

意思：你是不是对女生很有兴趣啊亲爱的？那个“darl”可以看做是darling的缩写，darling是昵称意思是心肝，但用的时候不一定在那么密切的场合用。

http://lib.verycd.com/2005/02/02/0000037617.html中文名称：全金属外壳英文名称：Full Metal Jacket资源类型：MP3!版本：192K发行时间：1988年专辑歌手：电影原声地区：美国语言：英语专辑名称：Full Metal Jacket演唱歌手：Various Artists发行年份：1988年地区：美国语言：英语专辑曲目：01 Full Metal Jacket02 Hello Vietnam03 Chapel of Love04 Wooly Bully05 I Like It Like That06 These Boots Are Made for Walking07 Surfin" Bird08 The Marines" Hymn09 Transition10 Parris Island11 Ruins12 Leonard13 Attack14 Time Suspended15 Sniper用电驴跑一趟。

CT二次过电压保护器的基本元件是特种Zn0压敏电阻，它并联于CT二次被保护绕组两端，正常运行时压敏电阻两端的电压小于20V。此时压敏电阻处于近似断路的高阻状态，通过它的电流称为泄漏电流，小于1mA，对该回路保护动作值和表计准确度的影响可以忽略不计。 当二次回路开路或一次绕组出现异常过流时，在二次绕组中产生的电压远远高于正常运行电压（数值取决于CT本身参数和运行情况），此时并接的压敏电阻瞬间进入导通状态。由于Zn0压敏电阻的固有特性，过电压被有效地限制在选定值以下，进入稳定的短路状态，从而彻底避免了过电压危害。保护器能在过压产生的20ms内可靠地将二次绕组短接并发光显示，能提供开路（或过压）信号与闭锁差动保护的接点。故障排除后，将其复位即可再次使用，动作寿命可达上万次之多，运行稳定可靠。

我觉得第1个呢，是正常的一个新陈代谢，第2个呢则是因为因为疾病导致的这个细胞死亡。

歌曲名:Kind Of A Girl歌手:Tinted Windows专辑:Promo Only Mainstream Radio MayTinted Windows - Kind Of A GirlShe"s the kind of a girl you can"t get enough ofShe"s the kind of girl you need to feel the touch ofShe"s the kind of a girl that can really shake up your whole worldThe kind of a girl you kinda never wanna let goI had some time to kill, I had a lot to learn yeahShe said I heard you got a little money to burn yeahShe said she knew some things to do, some places we could goThe way she looked I guess I kinda couldn"t say noAnd she took me by the handAnd she said she had some plansAnd I tried so hard but I didn"t quite understandBut she knows just what to sayAnd she always gets her wayAnd before too long it was clear as dayThis girl was hear to stayShe"s the kind of a girl you can"t take too much ofShe"s the kind of a girl you kinda had enough ofShe"s the kind of a girl that can really take up your whole worldThe kind of a girl you kinda wish you didn"t knowhttp://music.baidu.com/song/20353914

工业X射线CT扫描（X-CT）设备主要由放射源和探测器两部分组成。仪器基本工作原理是：利用射线穿透物体，收集由于物体的吸收而衰减了的射线强度。CT扫描的穿透数据是由多个不同角度的测量数据汇总而得来的，各角度的数据是通过计算机采用图像重建的方法收集而来。图像重建功能根据所收集的数据建立物体的CT横断面扫描图像。X-CT对岩心分析的基本原理是：透过物体后的X射线的强度与该物体的密度有关，当光子量为I0的X射线光通过任何一个具有线性衰减系数μ的体积元时光子量变为I，这个过程遵循Beer定率：煤储层精细定量表征与综合评价模型公式（5.1）中，I0为原始X射线强度，I为透过物体的X射线强度，μ为X射线的衰竭系数（特定的物质的衰竭系数是一定的），h是物体厚度。通过一系列的X射线检测器就可以检测来自物体周围不同角度的X射线强度，然后再对这一系列的X射线资料进行处理即可得到由不同像素组成的CT图像。图像质量取决于图像的制式。为了便于CT图像间直接进行比较，定义CT值（H）为物体相对于水的衰减系数μ：煤储层精细定量表征与综合评价模型式中：CT是以HU单位表示的CT数；μT和μ水分别为目标物体和水的衰减系数。当μT＝μ水，水的CT值为0HU；当μT＝μ空气＝0（μ空气为空气的衰减系数）时，空气的CT值为-1000HU。水和空气的CT值不受射线能量的影响，因此它们为CT标尺上的固定点。一般CT值的范围是在-1024HU至＋3071HU之间，可获得4096（212）个不同的CT值，即每个像素由12位数据表示。通过对扫描图像的像素数或CT数进行分析，即可获得岩石中各种物质组成和孔裂隙的基本信息，用于对目标进行深入的精细描述和定量研究。

都不属于

歌曲名:Some Kinda Wonderful歌手:The Inmates专辑:Dirty Water: The Very Best Of The InmatesTitle: Some Kinda WonderfulArtist: SkyI came upon my crossroads yesterday,I met her on a ship just west of eyeball bay,We ate fish and we listened to some old time rock n Roll,She said "you can call me baby if you"ll let me hold your soul,But it"s because she"s wonderful the guys they look her way,She"s some kinda big shot..ChorusShe"s some kinda wonderful,She makes a mean steak and she"s an eyeful,My baby she"s some kinda wonderful to me,She"s some kinda wonderful to me,She"s some kinda wonderful,Forget it snowflake, she"s mine,So just say she"s wonderful and then be on your way,She"s some kinda wonderful you see,We bought a little house on highball way,Great kids, nice home, and a brand new chevrolet,All my neighbors and friends say the wife is a little strange,I know, the eyes are freaky and the horns are there to stay,But it"s because she"s wonderful the guys they look her way,She"s some kinda big shot,ChorusShe"s some kinda wonderful,She makes a mean steak and she"s an eyeful,My baby she"s some kinda wonderful to me,She"s some kinda wonderful to me,She"s some kinda wonderful,Forget it snowflake, she"s mine,So just say she"s wonderful and then be on your way,She"s some kinda wonderful you see,ChorusShe"s some kinda wonderful,She makes a mean steak and she"s an eyeful,My baby she"s some kinda wonderful to me,She"s some kinda wonderful to me,She"s some kinda wonderful,Forget it snowflake, she"s mine,So just say she"s wonderful and then be on your way,She"s some kinda wonderful you seehttp://music.baidu.com/song/8409325

原理是radon变换，具体可以看一下http://baike.baidu.com/link?url=_sWGs_vNn0XaBSTW_m1E1ddDQrrj6NjQqln4LsHLxgIVeHKFgxP8z5UHi4nEW69C8bSj8GeosDW-iU5VkDvjtq

Necrovirus group濮祖芹原名烟草坏死病毒组（Tobacco necrosis virus group）。属单链核糖核酸、无胞膜、球形、单体基因组病毒，芸薹油壶菌（Opidium brassica）的游动孢子传播，引起寄主植物系统或局部坏死。1987年得到国际病毒分类委员会（ICTV）的承认。组名源于希腊文nekros（坏死体）。典型成员是烟草坏死病毒（Tobacco necrosis virus，TNV），其他成员有：从河水中分离得到的藜坏死病毒（Chenopodium necrosis virus）、石竹黄条病毒（Carnation yellow stripe virus）和Lisianthus necrosis virus。过去隶属本组的有由瓜类油壶菌（O.radicale）传播的黄瓜坏死病毒（Cucumber necrosis virus，CNV），由于其核酸和蛋白外壳结构与本组成员有明显差异，也无血清学相关性而从本组删除。坏死病毒组编码程式是R/1∶1.5/19∶S/S∶S/Ve/Fu。病毒性质病毒粒子球形，无包膜。粒子直径大小因制样方法不同而异，包埋在组织切片中的粒子直径较小，用金属投影或负染法测定的直径较大。文献中常用的数据为后者，约为28纳米。粒子的分子量为6.3～7.6×106，沉降系数为118～133S，在氯化铯中的密度为1.399克/立方厘米，扩散系数为1.2×10－7，等电点为pH值3.9～4.5，吸收光谱260纳米/280纳米比值为1.7。外壳蛋白由一种多肽构成，分子量为30000～33000。每个粒子上有180个亚基，以T＝3的20面体网络排列。核酸基因组为ssRNA，正功能，分子量为1.3～1.6×106，单分子。RNA的5"端的序列为ppApGpUp……。TNV—RNA在大肠杆菌及麦胚无细胞体系中可作为mRNA，转译6种蛋白质，其中以分子量30000～33000的外壳蛋白质为转译的主要产物。烟草坏死病毒的免疫原性较强，在凝胶双扩散中有良好的沉淀反应，在不同的分离物中至少存在7个血清型。分布和为害烟草坏死病毒是史密斯（Smith，K.M.，1935）从温室生长的无症状的烟草根部分离得到并鉴定的。分布极广，从生长在未消毒土壤中的寄主植物根部都可以分离得到。寄主范围广，在试验条件下可侵染10科以上的植物。在适合生长的条件下，接种24小时后即可出现病斑，但多为局部侵染，系统侵染的寄主有郁金香、菜豆、大豆、黄瓜、桑、半夏等，引起组织或器官坏死。在木本植物上多为系统性潜隐侵染，寄主地上部分都含有病毒。由烟草坏死病毒所致的病害大多数没有严重的经济损失。活体外的稳定性烟草坏死病毒在活体外性质比较稳定，钝化温度85～95℃，体外存活7～28天，稀释限点10－6。但是在一些分离物中也存在不稳定的变异体，在组织榨取液中对RNA酶极为敏感，变异体中约有一半是以核酸的形式存在。传播途径烟草坏死病毒组成员极易通过机械传毒。在自然条件下由芸薹油壶菌的游动孢子传播。芸薹油壶菌的不同生物型与烟草坏死病毒之间有高度的特异性。一般认为，当芸薹游壶菌的游动孢子在土壤中活动时，病毒粒子吸附在游动孢子的鞭毛和质膜（Plasmalemma）上；当游动孢子接触到根的表皮时，鞭毛收缩，形成外囊壁，病毒粒子被带到游动孢子体内；当游动孢子产生侵染管时，病毒粒子随细胞质一同注入根细胞内而完成侵染。烟草坏死病毒的卫星病毒在一些分离物中，伴有直径为17纳米的小球形的卫星病毒（Satellite of tobacco necrosis virus，STVV或SV）。卫星病毒的外壳蛋白由一种多肽构成，分子量为21000，与烟草坏死病毒无血清学相关性。核酸分子杂交证明两者之间的碱基序列只有2%～10%的同源性，因此确定它们是不同的病毒。卫星病毒依赖烟草坏死病毒而活化和复制核酸，其核酸的分子量为0.28～0.4×106，由1239个核苷酸组成，它的5"端没有m7G5p的帽子结构，携带一个外壳蛋白基因，因此卫星病毒的RNA包被在自身转译的蛋白外壳之中。卫星病毒对烟草坏死病毒的依赖关系具有高度的专化性。环线虫ring nematodes廖金铃，冯志新体环很粗、无角质膜鞘的一类植物根部外寄生线虫。属垫刃目、环科。环线虫体形大多较为粗短，体环很粗，33—200环。食道前部与后部融合，且后部很大成高度发达的肌质。雌虫口针粗大，雄虫口针退化或缺。阴门靠近虫体后端，卵巢单个，前伸。根据英国西迪克（M.R.Siddiqi）1986的分类系统，属于环线虫的类群包括大阴茎亚科的大阴茎线虫属、轮线虫属、小环线虫属、唇盘小环线虫属、不正轮线虫属、环亚科的环线虫属、培克线虫属和Crossonema属。其中尤以大阴茎线虫属、环属和轮属较为常见和重要。大阴茎线虫属Macroposthonia雌虫中等大小，长300～780微米。体环数40～150。粗，后缘圆，平滑、呈圆锯齿状。唇区具2～3个环纹，常不缢缩，假唇极退化，侧唇几乎缺，具亚中唇瓣，突出而彼此分开，第一唇环常退化成唇盘。阴唇开张，向外直伸，前唇裂片状或棘状，尾圆或尖。雄虫侧区4条侧线（奥斯坦布林克大阴茎线虫具2条）。幼虫环纹平滑、圆锯齿状或具纹饰，但缺鳞片、棘或其它附属物，四龄雄虫无口针。此属约有90个有效种，其中的弯曲大阴茎线虫可寄生并侵害桃、水稻、小麦、菜豆、三叶草、康乃馨、光滑冬青等多种植物，引起根部皮层组织坏死。还可与其它微生物形成复合侵染。中国还发现寄生花生并引起花生黄矮与减产。此外，异扁大阴茎线虫、球头大阴茎线虫、俄尼大阴茎线虫等为害桃、水稻等作物。轮线虫属Criconemoides雌虫体长300～1000微米。体环48～153，圆锯齿状，粗糙或平滑，具圆形外轮廓。唇区具2个环纹，比体环细，但形态与体环并无显著不同。亚中假唇裂片状，在侧面相融合（背和腹假唇裂片部分融合）。侧假唇退化。口针坚硬或部分可弯曲。阴门唇关闭，圆锥形（前唇无饰物、不外伸）。阴道直。尾端圆锥形、凸圆锥形或半球形。雄虫唇区圆，侧线4条。交合伞明显，位于近尾末端。幼虫体环圆锯齿状，有时平滑，但不具鳞片或棘。四龄雄虫缺口针。此属线虫在病害中重要性不大。但日本今村（Imamura）1931年发现柯马巴轮线虫为害日本的水稻，造成稻根肿大。中国广东、辽宁、江西、福建等省的一些作物根周围也发现轮线虫的寄生。环线虫属Criconema雌虫体长200～760微米。体表环纹数37～134，圆或向后翻，具平滑或锯齿状缘。唇区具两个环纹，唇区高，具6个假唇。亚中唇不发达或通常缺。口针长45～132微米。阴门关闭，从阴门至尾端体环数3～21个。VL/Vb0.5～3。尾圆锥形，尖或圆。雄虫侧区具3～4条侧线。具交合伞但低平或缺。四龄幼虫具8～18排鳞片，每一鳞片顶端有一尖棘。环线虫属常见于一些树木的根部或根围。