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流式和elisa测细胞因子的区别

2023-08-23 20:34:43
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max笔记

ELISA只能检测溶液中的细胞因子浓度。

而流式检测细胞因子有两种机理:

  1. 固定细胞后,使用荧光抗体检测。检测到的是每个细胞内的细胞因子的量

  2. 使用表面粘附抗体的微珠,基本原理和ELISA相似。但是可以同时检测数十种细胞因子在溶液中的浓度。

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流式细胞术原理

流式细胞术是利用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒同时进行多参数、快速定量分析和分选的高新技术。其特点是:第一,只要样本制备成单个细胞或生物颗粒悬液均可以分析。第二,测量速度快,每秒中可以测量数千个乃至数万个细胞。第三,同时测量每个细胞的多参数特征。第四,在进行细胞特征分析的同时可以把指定特征的细胞分离出来,以便对特定细胞做进一步培养、克隆化、观察或进行某些实验,这就是分选技术。
2023-08-16 18:39:281

流式细胞分析术的工作原理

流式细胞计是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。国外又把流式细胞计称作荧光激活细胞分选器(Flu-orescence Activated CellSorter,FACS)。美国Becton—Dickinson 公司生产的流式细胞计系列均冠以FACS字头。目前中国国内使用的仪器多为美国、西欧及日本等国的产品,国内有些单位也已研制成功,但尚无定型产品面市。流式细胞计的基本结构流式细胞计组成它们是:流动室和液流系统;激光源和光学系统;光电管和检测系统;计算机和分析系统。⑴流动室和液流系统:流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成,常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细,是液流系统的心脏。样品管贮放样品,单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出;鞘液由鞘液管从四周流向喷孔,包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液,一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用,被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体,受到振荡信号可发生振动。⑵激光源和光学系统:经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光;激光器又以氩离子激光器为普遍,也有配和氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。汞灯是最常用的弧光灯,其发射光谱大部分集中于300~400nm,很适合需要用紫外光激发的场合。氩离子激光器的发射光谱中,绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强,约占总光强的80%;氪离子激光器光谱多集中在可见光部分,以647nm较强。免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上,可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份,可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine 6G水溶液的染料激光器,则可得到550~650nm连续可调的激光,尤在590nm处转换效率最高,约可占到一半。为使细胞得到均匀照射,并提高分辨率,照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经透镜会聚。光斑直径d可由下式确定:d=4λf/πD。λ为激光波长;f为透镜焦距;D为激光束直径。色散棱镜用来选择激光的波长,调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ。为了进一步使检测的发射荧光更强,并提高荧光讯号的信噪比,在光路中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的光线滤除或通过。例如使用525nm带通滤片只允许FITC(Fluoresceinisothiocyanate,异硫氰荧光素)发射的525nm绿光通过。长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上的光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的荧光信号,就采用二向色性反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开。⑶光电管和检测系统:经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。光电倍增管(PMT)最为常用。PMT的响应时间短,仅为ns数量级;光谱响应特性好,在200~900nm的光谱区,光量子产额都比较高。光电倍增管的增益从10到10可连续调节 ,因此对弱光测量十分有利。光电管运行时特别要注意稳定性问题,工作电压要十分稳定,工作电流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;最大阳极电流在几个毫安。此外要注意对光电管进行暗适应处理,并注意良好的磁屏蔽。在使用中还要注意安装位置不同的PMT,因为光谱响应特性不同,不宜互换。也有用硅光电二极管的,它在强光下稳定性比PMT好。从PMT输出的电信号仍然较弱,需要经过放大后才能输入分析仪器。流式细胞计中一般备有两类放大器。一类是输出信号辐度与输入信号成线性关系,称为线性放大器。线性放大器适用于在较小范围内变化的信号以及代表生物学线性过程的信号,例DNA测量等。另一类是对数放大器,输出信号和输入信号之间成常用对数关系。在免疫学测量中常使用对数放大器。因为在免疫分析时常要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群,它们的荧光强度相差1~2个数量级;而且在多色免疫荧光测量中,用对数放大器采集数据易于解释。此外还有调节 便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。⑷计算机和分析系统:经放大后的电信号被送往计算机分析器。多道的道数是和电信号的脉冲高度相对应的,也是和光信号的强弱相关的。对应道数年纵坐标通常代表发出该信号的细胞相对数目。多道分析器出来的信号再经模-数转换器输往微机处理器编成数据文件,或存贮于计算机的硬盘和软盘上,或存于仪器内以备调用。计算机的存贮容量较大,可存贮同一细胞的6~8个参数。存贮于计算机内的数据可以在实测后脱机重现,进行数据处理和分析,最后给出结果。除上述四个主要部分外,还备有电源及压缩气体等附加装置。参数测量、样品分选及数据处理⑴参数测量原理:流式细胞计可同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的,所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时,受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线,散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关,因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射,因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变,其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关,还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。在流式细胞术测量中,常用的是两种散射方向的散射光测量:①前向角(即0角)散射(FSC);②侧向散射(SSC),又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来,前向角散射光的强度与细胞的大小有关,对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大;对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系;对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大,尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关,但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感,也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。在实际使用中,仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时,可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的荧光染料;②选用适宜的激光和滤片光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。⑵样品分选原理:流式细胞计的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的过程是:由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴,根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中;其它液体被当作废液抽吸掉,某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。稳定的小液滴是由流动室上的压电晶体在几十KHz的电信号作用下发生振动而迫使液流均匀断裂而形成的。一般液滴间距约距约数百μm。实验经验公式f=v/4.5d给出形成稳定水滴的振荡信号频率。其中v是液流速度,d为喷孔直径。由此可知使用不同孔径的喷孔及改变液流速度,可能会改变分选效果。使分选的含细胞液滴在静电场中的偏转是由充电电路和偏转板共同完成的。充电电压一般选+150V,或-150V;偏转板间的电位差为数千伏。充电电路中的充电脉冲发生器是由逻辑电路控制的,因此从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间,一般为数十ms。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键,仪器多采用移位寄存器数字电路来产生延迟。可根据具体要求予以适当调整。(50)数据处理原理:FCM的数据处理主要包括数据的显示和分析,至于对仪器给出的结果如何解释则随所要解决的具体问题而定。①数据显示:FCM的数据显示方式包括单参数直方图(histogram)、二维点图(dot plot)、二维等高图(contour )、假三维图(pseudo 3D)和列表模式(list mode)等。直方图是一维数据用昨最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析,形同一般X—Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同,横坐标可以是线性标度或对数标度,用“道数”(Channel No .)来表示,实质上是所测的荧光或散射光的强度。纵坐标一般表示的是细胞的相对数。图10-2给出的是直方图形式。只能显示一个参数与细胞之间的关系是它的局限性。二维点图能够显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系。横坐标和纵坐标分别为与细胞有关的两个独立参数,平面上每一个点表示同时具有相应坐标植的细胞存在(图10-3)。可以由二维点图得到两个一维直方图,但是由于兼并现象存在,二维点图的信息量要大于二个一维直方图的信息量。所谓兼并就是说多个细胞具有相同的二维坐标在图上只表现为一个点,这样对细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。二维等高图类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数,即“等高”。曲线层次越高所代表的细胞数愈多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的,因此等高线越密集则表示变化率越大,等高线越疏则表示变化平衡。图10-4给出了二维等高图的样式。假三维图是利用计算机技术对二维等高图的一种视觉直观的表现方法。它把原二维图中的隐坐标—细胞数同时显现,但参数维图可以通过旋转、倾斜等操作,以便多方位的观察“山峰”和“谷地”的结构和细节 ,这无疑是有助于对数据进行分析的。图10-5为假三维图的示意图。列表模式其实只是多参数数据文件的一种计算机存贮方式,三个以上的参数数据显示是用多个直方图、二维图和假三维图来完成的。可用List Mode中的特殊技术,开窗或用游标调出相关部分再改变维数进行显示。例如,“一调二”就是在一维图上调出二维图来;“二调一”就是从二维图中调出一维图来。图10-6给出了从二维图等高图中调出相应窗口的直方图的示意图。上面简要地介绍了几种数据显示形式,在实际应用中,可根据需要选择匹配,以便了解和获得尽可能多的有用信息。②数据分析:数据分析的方法总的可分为参数方法和非参数方法两大类。当被检测的生物学系统能够用某种数学模型技术时则多使用参数方法。数学模型可以是一个方程或方程组,方程的参数产生所需要的信息来自所测的数据。例如在测定老鼠精子的DNA含量时,可以获取细胞频数的尖锐波形分布。如果采用正态分布函数来描述这些数据,则参数即为面积、平均值和标准偏差。方程的数据拟合则通常使用最小二乘法。而非参数分析法对测量得到的分布形状不需要做任何假设,即采用无设定参数分析法。分析程序可以很简单,只需要直观观测频数分布;也可能很复杂,要对两个或多个直方图逐道地进行比较。逐点描图(或用手工,或用描图仪、计算机系统)是大家常用的数据分析的重要手段。我们常可以用来了解数据的特性、寻找那些不曾预料的特异征兆、选择统计分析的模型、显示最终结果等。事实上,不经过先对数据进行直观观察分析就决不应该对这批数据进行数值分析。从这一点来看,非参数分析是参数分析的基础。逐道比较工作量较大,但用直观法很容易发现明显的差异,特别是对照组和测试组。考虑到FCM的可靠性,要注意到对每组测量,都要有对照组,对照组可以是空白对照组、阴性对照组、或零时刻对照组等,具体设置应根据整体实验要求而定。对照组和测试组的逐道比较往往可以减少许多不必要的误差和错误解释。顺便指出,进行比较时对曲线的总细胞数进行归一化处理,甚至对两条曲线逐道相减而得到“差结果曲线”往往是适宜的。因为数据分析往往和结果解释关系十分密切,也就是说和生物学背景相关,因此具体的分析法和原理将在后面结合实例再介绍。流式细胞计的技术参数 为了表征仪器性能往往根据使用目的和要求而提出几个技术参数或指标来定量说明。对于流式细胞计常用的技术指标有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度、可分析测量参数等。⑴荧光分辨率:强度一定的荧光在测量时是在一定道址上的一个正态分布的峰,荧光分辨率是指两相邻的峰可分辨的最小间隔。通常用变异系数(C.V值)来表示。C.V的定义式为:C.V=σ/μ式中,σ为标准偏差,μ是平均值。在实际应用中,我们使用挖关系式σ=0.423FWHM;其中FWHM为峰在峰高一半处的峰宽值。目前仪器的荧光分辨率均优于2.0%。⑵荧光灵敏度:反映仪器所能探测的最小荧光光强的大小。一般用荧光微球上所标可测出的FITC(fluorescein isothiocyanate 异硫氰基荧光素)的最少分子数来表示。目前仪器均可达到1000左右。⑶分析速度/分选速度:仪器每秒种可分析/分选的数目。一般分析速度为5000~10000;分选速度掌握在1000以下。⑷样品浓度:主要给出仪器工作时样品浓度的适用范围。一般在1010细胞/ml的数量级。其它技术参数尚多,不再一一介绍。流式细胞计的调试和使用古语说:“工欲善其事,必先利其器”。要想很好地应用流式细胞分析和分选技术,必需先对仪器进行调试,使其处于良好的工作状态,并能正确使用仪器。下面简要介绍细胞计的调试项目及要点、使用的程序等等。⑴调试和校准:流式细胞计在使用前,甚至在使用过程中都要精心进行调试,以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。激光强度:除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外,还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。液流速度:可通过操作台数字显示监督,调节 气体压力大小以获得稳定的液流速度。测量区光路调节 :这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交,而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。流式细胞术中所测得的量是相对值,因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定,这样才能通过相对测量获得绝对的意义。因而FCM中的校准具有双重功能:仪器的准直调整和定量标度。标准样品应该稳定,有形成份形状应是大小比较一致球形,样品分散性能良好,且经济、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品,鸡血红细胞做为生物学标准样品。微球用树脂材料制作,或标有荧光素,或不标记荧光素。Flow Cytometry Stands公司可提供荧光强度药盒,在免疫实验中可用来作为定量荧光标准来测定每个细胞所标记的抗原位点数目。所用的鸡血红细胞标准样品制作过程昭下:取3.8%枸橼酸或肝素抗凝的鸡血(抗凝剂:鸡血=1:4),经PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛与清洗后的鸡红细胞混合,室温下振荡醛化24h,最后经PBS再清洗,贮4℃冰箱中备用。需要指出的是因为未经荧光染色,所测光信号为鸡血红蛋白的自发荧光。⑵仪器的操作和使用:①打开电源,对系统进行预热;②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;⑧将所需结果打印出来。在操作和使用中一定要注意如下事项:1)光电倍增管要求稳定的工作条件,暴露的较强的光线下以后,需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作;另外还要注意磁屏蔽;2)光源不得在短时间内(一般要1h左右)关上又打开;使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常;3)液流系统必需随时保持液流畅通,避免气泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒;4)注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等;5)特别强度每次测量都需要对照组。
2023-08-16 18:40:061

流式细胞术原理

FSC通道 FSC,即前向角散射,它的值代表细胞的 大小 。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的大小,利用FSC值对细胞进行分群和分类。 SSC通道 SSC,即侧向角散射,它的值代表 细胞的颗粒度 (granularity)。细胞越不规则,细胞表面的突起越多,细胞内能够引起激光散射的细胞器或者颗粒性物质越多,其SSC值就越大。所以可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度,利用SSC值对细胞进行分群和分类。 检测样品中是否含有细胞表达某一CD分子——标记荧光素偶联的该CD分子的抗体——表达有该CD分子的细胞就会结合荧光素偶联抗的该CD分子的抗体——荧光素被相应的激光激发后产生荧光——荧光通道值反映接收到的荧光信号的强弱,——反映细胞上结合的荧光素的量,反映细胞上表达该CD分子的量——间接反映细胞表达某CD分子这一化学特征 不同细胞群的FSC值和SSC值最多相差几倍,而荧光信号强弱之间一般相差很大,阴性细胞与阳性细胞之间、强阳性与弱阳性之间有时可以相差几十倍、几百倍,甚至几千倍,呈指数关系。 流式图数轴上FSC值和SsC值以“一般数序形式”表示,而荧光通道值常以“对数形式”(logarithmic scale)表示 流式直方图的x轴表示一个通道的值,y轴表示细胞数量。 流式直方图只能表示一个通道的信息,而流式散点图能够同时表示两个通道的信息,可以非常直观地发现细胞群体中这两个通道值的相互高低关系,从而更易于细胞分群、分类,以及确定比例关系等。 流式散点图也是采取坐标轴的方式,x轴表示一个通道的值,y轴表示另一个通道的值,图中每一点代表一个细胞,该点所对应的横坐标值就是该点所代表细胞的x轴通道的值,所对应的纵坐标值就是该点所代表细胞的y轴通道的值。 环线聚集越多的地方表示此区域细胞密度变化越快,细胞最稀疏的地方还是用散点表示,环线的中央区域代表细胞聚集的中心 流式等高线图比流式散点图更能直观地体现细胞的分群。
2023-08-16 18:40:221

试述流式细胞术加光学检测的原理及其优点。

原理:利用流式细胞术使单个细胞随着流体动力聚集的鞘流液在通过激光照射的检测区时,使光束发生折射、衍射和散射,散射光由光检测器接受后产生脉冲,脉冲大小与被照细胞的大小成正比,脉冲的数量代表了被照细胞的数量。优点:①细胞是一个一个地通过激光检测区;避免了细胞重叠的可能性;②利用高、低角等前向散射光还可获得这个细胞的各种相关数据,经综合分析可进一步提高对细胞的鉴别功能。
2023-08-16 18:40:291

细胞试验中流式细胞术是用来干什么的,怎么用? PBS溶液怎么配,请给出具体成分及用量。 谢谢大家!!

流式细胞术可以用来测细胞周期,测凋亡率和抗原情况。细胞经胰酶消化后用冰乙醇固定过夜,第二天用PI染料反应30分钟后就可以上机检测了。PBS(ph=7.4)配方:Nacl 8g + Kcl 0.2g + Na2HPO4 1.44g + KH2PO4 0.24g
2023-08-16 18:40:412

流式细胞术的实验原理是什么?主要有哪些应用

简单的给你概况一下:细胞或者大小接近的颗粒物质都可以检测。样本通过鞘液的输送,成单个队列依次通过激光束。样本事先可以根据检测需要被荧光标记,通过激光束的时候就会得到荧光信号,被记录下来。可以同时标记不同的荧光标记做不同的检查。优点就是可以在短时间内检测大量的样本(每秒几千个到几万个细胞)。主要应用于各种生物医学研究和临床诊断。国际上通用的白细胞和淋巴瘤的诊断标准就是靠流式细胞仪的分型来确定的。
2023-08-16 18:41:041

流式细胞术:原理、操作及应用的介绍

《流式细胞术:原理、操作及应用》主要介绍流式细胞术的原理、操作及应用,分为概述、流式细胞仪的原理、流式图、流式细胞术的基本操作与技巧、流式分析术的应用和流式分选术的应用6个部分。
2023-08-16 18:41:121

流式细胞术基本原理与实用技术的内容简介

《流式细胞术基本原理与实用技术》按照细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、细胞遗传学、生物化学等学科的应用领域进行归类,全面而详尽地介绍流式细胞术的应用范围,涉及细胞表面分子、细胞内或细胞核内抗原、细胞凋亡、DNA含量与细胞周期、细胞增殖、细胞毒作用、可溶性蛋白质分子、报告基因等的检测和分析,并介绍了流式细胞术的其他用途。
2023-08-16 18:41:261

流式细胞术的图书

丛书名: 药学实验室技术系列作 者: 贾永蕊 编出版时间: 2009-3-1版 次: 1页 数: 183开 本: 16开包 装: 平装所属分类: 图书 >> 医学 >> 药学 >> 药学理论 本书分为三篇,原理篇主要介绍了流式细胞术的原理和质量控制方法;操作篇详细地介绍了流式细胞术细胞悬液的制备,以及在具体的各项应用中流式细胞术的操作方法与技巧:常见问题解答篇采用一问一答的方式,根据编写人员的实践经验,对流式细胞术中常见的问题进行详细解答。内容涉及,应用流式细胞术进行:细胞周期禾口DNA倍体分析DNA双参数分析凋亡检测肿瘤细胞多药耐药检测细胞免疫表型分析细胞因子的测定与同类书相比,本书更加以实际经验为基础,突出实际操作技巧,采取Step-by-Step方式进行说明,使方法与技巧更易于掌握。本书适用干医药、生命科学相关实验室的技术人员及相关研究生。
2023-08-16 18:41:531

尿液干化学分析仪的检测原理

【答案】:A尿液干化学分析仪的检测原理:尿液中的化学成分与多联试带上的相应模块发生颜色变化,颜色深浅与尿中相应物质的浓度成正比,仪器将接收到的不同强度的光信号转化为相应的电信号。而镜检影像分析原理及流式细胞术和电阻抗检测原理是尿沉渣分析仪的检测原理。
2023-08-16 18:42:231

流式细胞术散点图参数中FSC-A与FSC-H是什么意思

前向角散射,即FSC与细胞直径平分正相关(大小),所以我们平时上机的时候,有时用FSC做阈值,排除碎片及其它颗粒,避免干扰。侧向角散射,即SSC是指与激光束正交90度方向的散射信号,它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感,可以提供细胞内结构及颗粒性质的信息FL2-A ,FL2-W 中A和W的含义FL2-H1024,FL2-H256 中H的含义,1024和256又代表什么呢。名词“道数”是怎么定义的?w好像代表脉冲宽度,但是脉冲宽度反映的是细胞什么特性呢?H-脉冲高度反映细胞什么特性呢?好像你做的是细胞周期分析,如果是,FL2-A代表的是荧光峰面积,反映了细胞DNA含量(前提是用Rnase处理去掉了RNA);FL2-W代表的是荧光峰宽度,这个值可以区分单个细胞和双联体细胞;下面的1024和256是定义数据文件大小的(记得培训时工程师这么说的)-H好像没有什么特殊含义 ,就是指这个通道了,一般检测那个通道的荧光就是选择哪个-H,比如FSC-H,SSC-H,FL1-H等等流式涉及的调节参数太多了,主要的有:1.电压2.阈值3.荧光补偿4.通道选择:需要哪些通道、选择面积/高度/宽度、线性/Log5.停止条件选择太多太多了FL2-A代表FL2 AREA,FL2-H即FL2 HEIGHT,通过这两个参数,可以将粘连体排除出去,因为粘连体跟多倍体有相同的FL2-A,但是FL2-H远远大于正常细胞。正确的设置是将FL2-A设置在200附近。当然,不设在200也可以,但是那样会对日后的分析造成困难。200道是对周期分析最佳的参数。FSC是前向角散射,一般代表细胞的体积,值越大代表细胞越大。SSC是侧向角散射,一般代表细胞的颗粒度,值越大代表细胞的颗粒度越大,颗粒度指细胞表面的皱折度,细胞内亚细胞器、颗粒的数目等。
2023-08-16 18:42:333

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流式检测细胞周期百分比各相之和为什么不是100,流式细胞术(FCM)可用于测定细胞周期各时期细胞的百分比。其主要原理是应用能与DNA结合的荧光探针。
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dapi染色能否区分活死细胞

因为dapi可以透过完整的细胞膜,dapi能快速进入活细胞中与dna结合,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。dapi染色原理:dapi为一种荧光染料,可以穿透细胞膜与细胞核中的双链dna结合而发挥标记的作用,可以产生比dapi自身强20多倍的荧光,和eb相比,对双链dna的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100%)。dapi染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。dapi也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链dna染色。细胞经热激处理后用dapi染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。a、正常的烟草细胞核:核形完整,染色质均匀。b、染色质固缩,向外周聚集,形成周边化。c、染色质进一步固缩,形成很多颗粒物质。d、细胞核破裂形成碎片,核解体。
2023-08-16 18:43:173

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2023-08-16 18:43:263

网织红细胞英文

网织红细胞英文:reticulocyte。网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞,在周围血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能,因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。网织红细胞(Reticulocyte,Ret)是红细胞的未成熟阶段,是反映骨髓红系造血功能以及判断贫血和相关疾病疗效的重要指标。骨髓中红细胞系统的增生发育过程是:多能干细胞→单能干细胞→原始红细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞。从原始红细胞增殖到晚幼红细胞阶段共分裂3-4次,约需72小时,红细胞数由一个变为8一16个,细胞核由大变小而浓缩,胞浆中含血红蛋白逐渐增多。网织红细胞计数一、原理 网织红细胞是晚幼红细胞脱核后但尚未完全成熟的红细胞,胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存,经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后,胞质中可见蓝或蓝绿色枝点状甚至网织状结构。二、方法活体染色法.近年来还可通过某些血液自动分析仪及流式细胞术检测法进行网织红细胞计数。三、参考值(活体染色法)成人和儿童0.005-0.015,新生儿,0.02-0.06,网织红细胞绝对值(24-84)×10^9/L。
2023-08-16 18:43:521

什么是奈米?奈米的用途

什么是奈米?奈米的用途 奈米技术是一门高新技术,它对21世纪材料科学和微行器件技术的发展具有重要影响。为了解奈米技术的发展状况,记者走访了英国牛津大学材料系奈米材料专家保尔·华伦博士。 华伦说,奈米技术是当前全球都在谈论的热门话题。所谓奈米技术,是指用数千个分子或原子制造新型材料或微型器件的科学技术。奈米技术涉及的范围很广,奈米材料只是其中的一部分,但它却是奈米技术发展的基础。牛津大学材料系目前研究的奈米技术专案有40多个,其中主要的有超细薄膜、碳奈米管、奈米陶瓷、金属奈米晶体和量子点线等。 超细薄膜的厚度通常只有1奈米-5奈米,甚至会做成1个分子或1个原子的厚度。超细薄膜可以是有机物也可以是无机物,具有广泛的用途。如沉淀在半导体上的奈米单层,可用来制造太阳能电池,对开发新型清洁能源有重要意义;将几层薄膜沉淀在不同材料上,可形成具有特殊磁特性的多层薄膜,是制造高密度磁碟的基本材料。碳奈米管是由碳60分子经加工形成的一种直径只有几奈米的微型管,是奈米材料研究的重点之一。与其它材料相比,碳奈米管具有特殊的机械、电子和化学效能,可制成具有导体、半导体或绝缘体特性的高强度纤维,在感测器、锂离子电池、场发射显示、增强复合材料等领域有广泛应用前景,因而受到工业界的普遍重视。目前,碳奈米管虽仍处于研究阶段,但许多研究成果已显示出良好的应用前景。陶瓷材料在通常情况下具有坚硬、易碎的特点,但由奈米超微颗粒压制成的奈米陶瓷材料却具有良好的韧性,有的可大幅度弯曲而不断裂,表现出金属般的柔韧性和可加工性。 奈米技术在现代科技和工业领域有着广泛的应用前景。比如,在资讯科技领域,据估计,再有10年左右的时间,现在普遍使用的资料处理和储存技术将达到最终极限。为获得更强大的资讯处理能力,人们正在开发DNA计算机和量子计算机,而制造这两种计算机都需要有控制单个分子和原子的技术能力。 感测器是奈米技术应用的一个重要领域。随着奈米技术的进步,造价更低、功能更强的微型感测器将广泛应用在社会生活的各个方面。比如,将微型感测器装在包装箱内,可通过全球定位系统,可对贵重物品的运输过程实施跟踪监督;将微型感测器装在汽车轮胎中,可制造出智慧轮胎,这种轮胎会告诉司机轮胎何时需要更换或充气;还有些可承受恶劣环境的微型感测器可放在发动机汽缸内,对发动机的工作效能进行监视。在食品工业领域,这种微型感测器可用来监测食物是否变质,比如把它安装在酒瓶盖上就可判断酒的状况等。 在医药技术领域,奈米技术也有着广泛的应用前景。如用奈米技术制造的微型机器人,可让它安全地进入人体内对健康状况进行检测,必要时还可用它直接进行治疗;用奈米技术制造的"晶片实验室"可对血液和病毒进行检测,几分钟即可获得检测结果;科学家还可以用奈米材料开发出一种新型药物输送系统,这种输送系统是由一种内含药物的奈米球组成的,这种奈米球外面有一种保护性涂层,可在血液中回圈而不会受到人体免疫系统的攻击,如果使其具备识别癌细胞的能力,它就可直接将药物送到癌变部位,而不会对健康组织造成损害。 除此之外,奈米技术在工业制造、国防建设、环境监测、光学器件和平面显示系统等领域也有广泛的用途,对21世纪的科技发展具有重要作用。 为了对奈米技术有一个较全面的印象,华伦博士带记者参观了纳米材料实验室。由于奈米材料的结构很小,在自然光下肉眼无法看到,所以需要借助显微镜来观察和操作。走进实验室,首先看到的是一台被称作"奈米刀"的仪器。参观时,研究人员正在用它在一个电子器件材料表面上切削亚微米方型小孔,以便对该器件的材料构成进行分析。在另一个室验室摆放著多台透射电子显微镜,一位研究人员正在用它研究磁性薄膜的内部结构。接下来参观的是一台原子探针场离子显微镜,利用这台仪器,可通过移动一个个原子并形成三维影象,对材料结构进行分析。在另一个实验室,研究人员正在用一台扫描探针显微镜在一个平面上观察和操作单个原子,并直接测量原子间的作用力。特别值得一提的是,牛津大学不仅科研基础雄厚,在仪器制造上也有很强的实力。这里的许多仪器,都是他们自己研制的,有些处于世界领先水平。 近年来,为实现奈米技术的产业化,牛津大学在加强基础研究的同时,还十分重视科研成果的转化工作。今年6月,他们新建了一个以材料科学为主的科学园。在科学园内,科研人员与企业界密切合作,一方面对大学的科研成果进行开发,另一方面根据企业和市场需要研发新的专案。目前,这里的研究涉及生物医学、包装、电信、发电、航空航天、汽车、计算机等许多领域,其中有些专案很有发展潜力。如材料系成立的一家公司,现在正从事纳粒子发光剂的商品化研究,这种纳粒子发光剂主要用于平面显示系统,他比传统发光剂效能先进,有很好的应用前景。 据研究到2010年,奈米技术将成为仅次于晶片制造的世界第二大产业,拥有数百亿英镑的市场份额。为此,今年7月,英国贸工部在新发表的科技与创新白皮书中,已将奈米技术列为21世纪科技发展的重点,加速该领域的发展。正如科学家预测:奈米技术这一新兴的高科技领域,将成为21世纪一颗新的科技明星. 奈米铝粉的用途有哪些 奈米铝粉是一种非常精细的特种精细化学品,主要会用在航天、微电子等行业,具体情况呢你最好还是找一个做铝粉的厂家问一下,像比较知名的,河南远洋,山东银箭等 奈米金在生活中的用途 应用于均相溶胶颗粒免疫测定技术 均相溶胶颗粒免疫测定法(sol particle immunoassay, SPIA)是利用免疫学反应时金颗粒凝聚导致颜色减退的原理,将奈米金与抗体结合,建立微量凝集试验检测相应的抗原,如间接血凝一样,用肉眼可直接观察到凝集颗粒。已成功地应用于PCG的检测,直接应用分光光度计进行定量分析。 l.3 应用于流式细胞仪 应用荧光素标记的抗体,通过流式细胞仪(Flow CytoMeter,FCM)计数分析细胞表面抗原,是免疫学研究中的重要技术之一。但由于不同荧光素的光谱相互重叠,区分不同的标记很困难。Boehmer等研究发现,奈米金可以明显改变红色镭射的散射角,利用奈米金标记的羊抗鼠Ig抗体应用于流式细胞术,分析不同型别细胞的表面抗原,结果奈米金标记的细胞在波长632nm时,90度散射角可放大10倍以上,同时不影响细胞活性。而且与荧光素共同标记,彼此互不干扰。因此,奈米金可作为多引数细胞分析和分选的有效标记物,分析各类细胞表面标志和细胞内含物。 1.4 应用于斑点免疫金银染色技术 斑点免疫金银染色法(Dot-IGS,IGSS)是将斑点ELISA与免疫奈米金结合起来的一种方法。将蛋白质抗原直接点样在硝酸纤维膜上,与特异性抗体反应后,再滴迦纳米金标记的第二抗体,结果在抗原抗体反应处发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的红色斑点,此称为斑点免疫金染色法(Dot-IGS)。此反应可通过银显影液增强,即斑点金银染色法(Dot-IGS/IGSS)。 1.5 应用于免疫印迹技术 免疫印迹技术(immunoblotting,IBT)也称为免疫转印技术,其原理是根据各种抗原分子量大小不同,在电泳中行走的速度不同,因而在硝酸纤维素膜上占据的位置也不同;把含有特异性抗体的血清和这一薄膜反应,那么特异性的抗原抗体反应就显色。而奈米金免疫印迹技术相比酶标记免疫印迹技术具有简单、快速、具有相当高的灵敏度。而且应用奈米金将硝酸纤维素膜上未反应抗体进行染色,评估转膜效率,校正抗原一抗体反应的光密度曲线,即可进行定量免疫印迹测定。 1.6 应用于斑点金免疫渗滤测定技术 斑点金免疫渗滤测定法(dot immuno-gold filtration assay,DIGFA)是斑点免疫测定法(dot immunoboding assay,DIBA)中的一种,是1982年由Hawkes等人在免疫印迹技术基础上改良发展起来的一项免疫学新技术。其原理完全同斑点免疫金染色法,只是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料,即为渗滤装置。在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。与斑点免疫渗滤测定法(d o t immunotietration assay,DIFA)相比,所不同的是免加底物液,直接由红色胶体金探针显色,结果鲜艳,背景更清楚,可以在室温下储存。该方法已成功地应用于人的免疫缺陷病病毒(HI)的检查和人血清中甲胎蛋白的检测。目前使用的有HCG试剂盒,AFP试剂盒,消化道肿瘤筛检试剂盒。 1.7 应用于免疫层析技术 免疫层析法(gold immunochromatography assay, GICA)是将各种反应试剂以条带状固定在同一试纸条上,待检标本加在试纸条的一端,将一种试剂溶解后,通过毛细作用在层析条上渗滤、移行并与膜上另一种试剂接触,样品中的待测物同层析材料上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生特异性免疫反应。层析过程中免疫复合物被截留、聚集在层析材料的一定区域(检测带),通过可目测的奈米金标记物得到直观的显色结果。而游离标记物则越过检测带,达到与结合标记物自动分离之目的。GICA特点是单一试剂,一步操作,全部试剂可在室温长期储存。这种新的方法将奈米金免疫检测试验推进到~个崭新的阶段。 都是在网上搜的,这是别人的答案 奈米微孔隔热毡的用途及使用? 奈米隔热毡一般用在需要一定弯曲的装置和管道保温用,如钢包隔热、管道保温,反应器保温等,固特节能奈米微孔隔热毡是最好的高温隔热材料,有板状的和异型的,该产品应用比较广泛,有加热炉、试验炉、黑匣子、电梯防火门、电陶炉发热盘、船舶、机械、铸造、冶金等热工装置,还能应用在制冷装置里。保冷效果相当明显。 有超塑延展性的奈米铜的用途是 金属材料生产出来以后,如果要应用到实际生产当中,就需要加工成各种需要的形状,通常的加工方法无非是车铣刨磨钳和锻铸焊,但是有些特殊的形状十分的难以加工,用通常的办法几乎没有办法加工,或者就是成本高的接受不了,超塑技术可以在一定程度上解决这个问题,有些特殊形状的金属制品可以用超塑的办法生产出来,但是也不是说所有的结构,形状都可以用超塑材料来加工,这个要具体情况,具体分析 超塑延展性的奈米铜也是如此,可以做的东西很多,但是具体情况具体分析。通常就是用来做一些形状复杂,一般方法加工不出来的东西 奈米隔热板的用途有哪些? 固特节能奈米隔热板用途比较广泛,有加热炉、试验炉、黑匣子、电梯防火门、电陶炉发热盘、船舶、机械、铸造、冶金等热工装置,还能应用在制冷装置里。保冷效果相当明显。 BTU奈米隔热板的用途有哪些? 固特节能BTU奈米隔热板应用比较广泛,有加热炉、试验炉、黑匣子、电梯防火门、电陶炉发热盘、船舶、机械、铸造、冶金等热工装置,还能应用在制冷装置里。保冷效果相当明显。 奈米材料在各行业中的用途 奈米材料的用途很广,主要用途有: 医药 使用奈米技术能使药品生产过程越来越精细,并在奈米材料的尺度上直接利用原子、分子的排布制造具有特定功能的药品。奈米材料粒子将使药物在人体内的传输更为方便,用数层奈米粒子包裹的智慧药物进入人体后可主动搜寻并攻击癌细胞或修补损伤组织。使用奈米技术的新型诊断仪器只需检测少量血液,就能通过其中的蛋白质和DNA诊断出各种疾病。 家电 用奈米材料制成的奈米材料多功能塑料,具有抗菌、除味、防腐、抗老化、抗紫外线等作用,可用处作电冰霜、空调外壳里的抗菌除味塑料。 电子计算机和电子工业 可以从阅读硬碟上读卡机以及储存容量为目前晶片上千倍的奈米材料级储存器晶片都已投入生产。计算机在普遍采用奈米材料后,可以缩小成为“掌上电脑”。 环境保护 环境科学领域将出现功能独特的奈米膜。这种膜能够探测到由化学和生物制剂造成的污染,并能够对这些制剂进行过滤,从而消除污染。 纺织工业 在合成纤维树脂中新增奈米SiO2、奈米ZnO、奈米SiO2复配粉体材料,经抽丝、织布,可制成杀菌、防霉、除臭和抗紫外线辐射的内衣和服装,可用于制造抗菌内衣、用品,可制得满足国防工业要求的抗紫外线辐射的功能纤维。 机械工业 采用奈米材料技术对机械关键零部件进行金属表面奈米粉涂层处理,可以提高机械装置的耐磨性、硬度和使用寿命。 为推进我国功能奈米材料的产业化程序,中国商品交易中心和中国科学院化学研究所共同组建了北京中商世纪奈米技术有限公司,该公司将以中国科学院化学研究所功能奈米介面材料研究组为技术依托,致力于功能奈米介面材料技术与开发与推广。 奈米微孔隔热毡的用途有哪些? 固特节能奈米微孔隔热材料是最好的高温隔热材料,有板状的和异型的,该产品应用比较广泛,有加热炉、试验炉、黑匣子、电梯防火门、电陶炉发热盘、船舶、机械、铸造、冶金等热工装置,还能应用在制冷装置里。保冷效果相当明显。 奈米的用处是什么? 什么是奈米? 奈米是尺寸或大小的度量单位,是一米的十亿分之一(千米→米→厘米→毫米→微米→奈米), 4倍原子大小,万分之一头发粗细。
2023-08-16 18:44:181

阿尔比恩绿球是啥

阿尔比恩绿球是一种稀有的绿色宝石,常用于珠宝和装饰品制作。它得名于发现它的地点,位于巴西东北部的阿尔比恩地区。阿尔比恩绿球的颜色独特,深浅不一,因其珍贵稀有而备受珠宝商和收藏家的青睐。它的硬度和透明度也让它成为一种适用于多种场合的宝石,如婚戒、项链、耳环等。此外,阿尔比恩绿球也被认为具有神秘的精神和治疗特性,常被用于灵性和疗愈领域。纯手打,望采纳!
2023-08-16 18:44:2715

流式细胞术的用途是什么

细胞或者其他颗粒状的物体可以被荧光标记的抗体或者替他荧光染料染色。当这些被标记的物体通过流式细胞仪的时候,激光照射,得到不同的激发光。用途:1.临床诊断:比如白血病,淋巴瘤的分型,可以指导治疗。检测干细胞的百分率,可以判断干细胞治疗的效果等等2.实验研究。根据前面所说的原理。只要可以被染色的,都可以用流式来分析。可以检查各种抗原的含量。代谢状态等等。3.细胞的分选。最后,根据染色的状态,可以把不同的细胞筛选出来,进行下一步的研究。
2023-08-16 18:44:521

求方法:怎么用流式细胞术检测血清中IL

目前最常用的方法就是使用微球阵的multiplex。早以商品化了。以BD出品的为例,你可以购买现成的或者可以根据你要检测的不同细胞因子和厂家定制bead array。基本原理就是试剂盒含有多种微球,每一种都是两种不同荧光强度组合,所以在流式检测的时候会形成一个矩阵。每种微球上附着有可以识别一种细胞因子的抗体。和样本孵育后,再加入荧光标记的抗不同细胞因子的抗体(同样颜色)。这样,只要微球上结合有细胞因子,这个微球就会有三种荧光了。前两种荧光来判断是哪种微球(哪种细胞因子),第三种荧光是识别抗体上的,来定量。试剂盒还会提供标准品,用来做标准曲线。
2023-08-16 18:45:031

将细胞分离的原理有哪些?各有什么特点

将细胞分离的原理有机械法、化学法、酶消化法、酶消化法、流式细胞术。各有优点和缺点。1、机械法:利用物理外力,如切、割、压、挤、拉、撕、旋等方法,将细胞分离开。优点:操作简单,不使用有毒和致癌物质。缺点:对于细胞脆弱的情况,会造成细胞损伤。2、化学法:利用化学试剂溶解细胞间粘连物和细胞本身的粘附物,让细胞分离开。优点:分离效果好,易于扩大规模。缺点:化学试剂对细胞产生毒性和副作用。3、酶消化法:用特定酶对细胞的胞膜和基质进行消化,使细胞释放出来。优点:可以选择特定的酶,在具有选择性的条件下将目标细胞分离出来。缺点:目标细胞因受到消化酶的损伤而死亡。4、酶消化法:利用离心机对不同密度的细胞进行分离。优点:分离效果好,速度快。缺点:离心需要繁琐的操作,不能完全分离所需的细胞类型。5、流式细胞术:利用流式细胞仪对细胞进行单个分选。优点:技术先进,可快速、准确的分离出目标细胞。缺点:设备价格昂贵,需要专业操作人员。
2023-08-16 18:45:111

微生物群落测定方法及其原理

微生物群落测定方法及其原理如下:1、培养基法培养基法是最常用的微生物群落测定方法之一。其原理是将样本接种到含有特定营养成分的培养基上,然后放置在适宜的环境条件下(如温度、pH等)促使微生物生长繁殖。数天后,可以观察到培养皿上出现的菌落,然后再进行菌落计数和种类鉴定。2、电子显微镜法电子显微镜法是一种高分辨率的显微镜技术,可用于直接观察微生物的形态和数量。该方法需要先将样品进行处理(如固定、染色等)然后用电子显微镜观察样品中的微生物。由于电子显微镜的分辨率非常高,因此可以观察到微生物的形态、大小、结构和数量等细节。3、PCR法PCR法是一种基于DNA扩增的技术,可用于测定微生物群落中不同种类的微生物数量。该方法需要先设计一组引物,使其能够特异性地扩增出目标微生物的DNA片段,然后用PCR反应进行扩增。扩增后的DNA片段可以通过凝胶电泳等方法进行定量和鉴定。4、流式细胞术流式细胞术是一种可用于快速测定微生物数量和种类的技术。该方法通过将样品中的微生物单个分离,然后在流式细胞术仪中进行检测。在检测过程中,微生物会通过激光束被逐个扫描,然后通过荧光染色等方式进行定量和鉴定。
2023-08-16 18:45:201

血细胞的分类测定

血细胞五分类技术及其应用进展。血细胞分析仪是医院临床检验应用非常广泛的仪器之一,是指对一定体积内血细胞数量及异质性进行分析的仪器。20世纪90年代以来,随着电子技术、流式细胞技术、激光技术、电子计算机技术和新荧光化学物质等各种高新技术在血细胞分析仪中的应用.使血细胞分析仪的检测原理不断完善、测量参数不断增加、检测水平不断提高.尤其在白细胞五分类技术方面,已发展到利用多项技术(如射频、细胞化学染色、流式细胞术和荧光染色技术等)联合同时检测一个白细胞.再用先进的计算机技术区分、辨别经上述方法处理后的各自细胞间的细胞差别.综合分析实验数据,得出较为准确的白细胞分类结果。为临床疾病的诊断、治疗提供了重要的实验室依据。近年来。可以对白细胞进行五分类计数的血细胞分析仪已经普遍使用。本文就目前血细胞五分类测定中常用技术及其最新应用进展作一综述。1 血细胞五分类技术的原理1.1 流式细胞术流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术,使被测溶液流经测量区域,并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性,从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。首先,待测细胞经处理或染色后被压人流动室,与此同时,不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出,鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度,这样鞘液就能被包绕着样品高速流动,组成一个圆形的流束,待测细胞在包绕下单行排列,依次通过检测区域.在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两个光源信号分别反映了细胞体积的大小和内部的信息.经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过模,数转换器.将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号,经计算机处理,可将分析结果显示在屏幕上。为了保证细胞单个排列地逐一通过检测区域,鞘流技术在流式细胞术中被广泛应用。根据层流理论,由于两种液体的流速和压力不同。在一定条件下样品溶液与包裹它的鞘液在流动中可以保持相互分离并且同轴。同时鞘液流可以加速样品溶液中颗粒的流动并迫使他们的流动轨迹保持在液流的中轴线上,使细胞单排列地逐一通过检测区域,这便是所谓的液流聚焦原理1_2 阻抗法根据库尔特原理,将不良导体血液按一定比例稀释于等渗的电解液中,在小孔电极的两侧加一恒流源.在负压作用下,使稀释的血细胞通过小孔。当细胞通过截面时会由于电阻增大产生相应的脉冲,其脉冲的幅度与细胞的体积成正比,脉冲的频度与细胞的数量成正比。这便是著名的库尔特原理或称变阻脉冲原理。利用库尔特原理可以有效地区分淋巴及单核细胞。1.3 激光散射法/多角度偏振光散射技术根据光散射理论,当激光照射到流动室内流过的每一个细胞时,由于细胞的物理特性,部分光线从细胞上经不同的角度散射。其中,前向小角度散射光的光强可以反应细胞体积;大角度散射光的光强可以反应细胞核,浆复杂度和细胞颗粒的信息;而侧向散射光的光强可以反应细胞膜、核膜、细胞质的变化。因此,可以依据细胞表明光散射的特点对细胞进行分类。用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区,在不同角度(10度~70度)对每个细胞进行扫描分析,测定其散射光强度,从而提供细胞结构、形态的光散射信息。由于粗颗粒细胞的散射强度比细颗粒细胞更强,故光散射对细胞颗粒的构型和颗粒质量具有很好的区别能力。
2023-08-16 18:45:491

流式细胞术的用途是什么

流式细胞术能在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点。流式细胞分析仪临床用于细胞治疗中心在FACSVantage革命化的细胞分选功能基础上推出的分选增强(Sort Enhanced edition,SE),BD FACSVantage SE,其新功能和新配置通过与标准多激光多荧光系统以及数据处理系统的整合。扩展资料:流式细胞仪的构成1、液流系统,包括流动室和液流驱动系统。2、光学系统,包括激发光源和光束收集系统。3、电子系统,包括光电转换器和数据处理系统。流式细胞仪的工作原理是使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池,同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号,经计算机处理形成相应的点图,直方图和加三维结构图像进行分析。参考资料来源:百度百科——流式细胞技术
2023-08-16 18:46:191

流式细胞分析术的发展历史

概要说来,流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术,以及数据的采集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。1934年,Moldavan1首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置计测的设想,在此之前,人们还习惯于测量静止的细胞,因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成较大的细胞和细胞团块的淤阻。1953年Crosland –Taylor根据雷诺对牛顿流体在圆形管中流动规律的研究认识到:管中轴线流过的鞘液流速越快,载物通过的能力越强,并具有较强的流体动力聚集作用。于是设计了一个流动室,使待分析的细胞悬浮液都集聚在圆管轴线附近流过,外层包围着鞘液;细胞悬浮液和鞘液都在作层液。这就奠定了现代流式细胞术中的液流技术基础。1956年,Coulter在多年研究的基础上利用Coulter效应生产了Coulter 计数器。其基本原理是:使细胞通过一个小孔,只在细胞与悬浮的介质之间存在着导电性上的差异,便会影响小孔道的电阻特性,从而形成电脉冲信号,测量电脉冲的强度和个数则可获得有关细胞大小和数目方面的信息。1967年Holm等设计了通过汞弧光灯激发荧光染色的细胞,再由光电检测设备计数的装置。1973年Steinkamp设计了一种利用激光激发双色荧光色素标记的细胞,既能分析计数,又能进行细胞分选的装置。这样就基本完成了现代FCM计数技术的主要历程。现代的FCM数据采集和分析技术是从组织化学发源的,其开拓者是Kamentsky。1965年,Kamentsky在组织化学的基础上提出了两个新设想:⑴细胞的组分是可以用光光度学来定量测定的,即分光光度术可以定量地获得有关细胞组织化学的重要信息。⑵细胞的不同组分可以同时进行多参数测量,从而可以对细胞进行分类。换句话说,对同一细胞可以同时获得有关不同组分的多方面信息,用作鉴别细胞的依据。Kamentsky不仅思路敏捷,而且能身体力行。他是第一个把计算机接口接到仪器上并记录分析了多参数数据的人,也是第一个采用了二维直方图来显示和分析多参数的人。流式细胞术在细胞化学中的应用的先驱者是Van Dilla和美国的Los Alamos小组。他们在1967年研制出流液束、照明光轴、检测系统光轴三者相互正交的流式细胞计的基础上,首次用荧光Feulgen反应对DNA染色显示出DNA的活性与荧光之间存在着线性关系,并在DNA的直方图上清楚地显示出细胞周期的各个时相。Gohde 和Dittrich接着把这项技术推向实用,他们用流式细胞术测定细胞周期借以研究细胞药代动力学问题。FCM用于免疫组织化学中的关键是对细胞进行免疫荧光染色,其它和在细胞化学的应用并没有多大差异。近20年来,国内外在FCM上都做了不少的研究和应用工作,也取得了不少成果。特别是随着仪器和方法和日臻完善,人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作以扩大FCM的应用领域和使用效果。FCM在免疫组织化学中的应用也大致差不多,并注重了在临床应用的推广。
2023-08-16 18:46:341

流式细胞术2/p1/p2是什么意思

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。
2023-08-16 18:46:511

尿液干化学分析仪的检测原理

正确答案:A解析:尿液干化学分析仪的检测原理:尿液中的化学成分与多联试带上的相应模块发生颜色变化,颜色深浅与尿中相应物质的浓度成正比,仪器将接收到的不同强度的光信号转化为相应的电信号。而镜检影像分析原理及流式细胞术和电阻抗检测原理是尿沉渣分析仪的检测原理。
2023-08-16 18:47:011

流式细胞术散点图参数中FSC-A与FSC-H是什么意思

fsc代表的是forward scatter,这个参数和细胞的大小成正比,A是area的缩写,H是height的缩写。这是机器在记录信号时所采用的参数(不显示在用户界面,在调试机器的时候可以显示)每个细胞通过激光的时候,机器都会记录一个波状信号(一个拱形的信号),H就是这个拱的高度(代表的是信号的强度),A就是这个拱的曲线下面积,代表信号强度和细胞大小的关系。其实还应该有一个参数W,是width的缩写,是这个拱的宽度,代表细胞通过激光束所花的时间。不光是FSC,其他每一个通道都有这三个参数可以记录。可以用其中的任何一个,根据实验要求来作图。机器就会根据设置显示出最终的图形了。扩展资料:注意事项:1、有时候,可以染一种在感兴趣的细胞与其他细胞都有表达的标志物(例如在所有白细胞上都表达的 CD45)。虽然这个步骤不是必须的,但对于分析一些稀少细胞类型时有帮助。2、染细胞时,建议将细胞分在两个试管中,在其中一个试管中,用荧光标记的抗体染感兴趣的细胞,而另一个试管应用荧光同型抗体做为相应的阴性对照,这样有助于在分析中更精确地区分阳性信号和阴性的荧光背景。3、在必要时,需要通过设置和调节 FSC 阈值,将大部分的细胞碎片、气泡和激光噪声的干扰(全都属于 FSC-low 的区域)排除在分析区域之外。参考资料来源:百度百科-流式细胞术:原理、操作及应用
2023-08-16 18:47:091

dapi染色能否区分活死细胞

DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合,因此DAPI对生物体而言,也被视为一种毒性物质与致癌物。CM-Dil是标记细胞膜的,而DAPI是标记细胞核的可以是活细胞,一人做兔子的膀胱肿瘤,他说在14天的时候很强,21天的时候比较弱,再长的时间就没有检测过。文献上说50天以后还可以看到DAPI的标记
2023-08-16 18:47:403

什么是细胞剥离,细胞剥离是什么?

从科学的角度上讲是 生物细胞分离是在高渗透液中细胞壁和细胞膜发生分离。原理是细胞膜的流动性和透过性。细胞分离技术包括离心技术、流式细胞术和细胞电泳。离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体,以及各种大分子基本手段。流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。细胞电泳是指在一定PH 值下细胞表面带有净的正或负电荷,能在外加电场的作用下发生泳动。水剥离美容技术也是利用这一特性即是剥离细胞,形成美白去皱纹的效果。
2023-08-16 18:48:006

细胞剥离安全吗?

细胞剥离是网上流行的细胞剥离美容术。基本原理:利用水动力软性剥离细胞 达到抗衰去皱纹的效果,从原理上看安全问题不大,生理盐水作为剥离的介质。
2023-08-16 18:48:233

制作土豆发电的道理

技术原理:土豆电池的工作原理主要是需要两块金属,一块作为阳极,是电势低的电极,如锌;另一块作为阴极,是带正电荷的电极,如金属铜。土豆内部的酸性物质会与锌和铜发生化学反应,当电子从一端流向另一端时,电能就释放。金属锌的化学性质比铜活泼,当这两种金属同时处在酸液中时,锌就会失去电子,这些失去的电子沿着导线传到铜片上,形成电流。结构组成:土豆发电的组成,这种绿色高效能的电池由锌、铜电极和煮熟的土豆片制成的。土豆提供反应所需要的酸, 这使得电子从铜到锌的运动能够进行,作为电池两极的铜和锌分别来自铜钉和镀锌钉。每个土豆能产生大约0.5伏特的电压,电流0.2毫安左右。马铃薯在煮熟后会在表面产生一个涂层,这个涂层是土豆电池的关键,因为希伯来大学的研究人员发现,提高土豆块涂层就增强了盐桥能力,因此有马铃薯涂层的电池产生的电能是无马铃薯涂层电池的十倍。也就是说,土豆煮熟后发电能力比煮熟前提高10倍左右,从而延长供电时间至数日甚至数周。希望能够帮到您,望采纳,谢谢!
2023-08-16 18:43:081

中秋节英文是什么?

中秋节英文介绍:"Zhong Qiu Jie", which is also known as the Mid-Autumn Festival, is celebrated on the 15th day of the 8th month of the lunar calendar. It is a time for family members and loved ones to congregate and enjoy the full moon - an auspicious symbol of abundance, harmony and luck. Adults will usually indulge in fragrant mooncakes of many varieties with a good cup of piping hot Chinese tea, while the little ones run around with their brightly-lit lanterns.农历八月十五日是中国的传统节日——中秋节。在这天,每个家庭都团聚在一起,一家人共同观赏象征丰裕、和谐和幸运的圆月。此时,大人们吃着美味的月饼,品着热腾腾的香茗,而孩子们则在一旁拉着兔子灯尽情玩耍。"Zhong Qiu Jie" probably began as a harvest festival. The festival was later given a mythological flavour with legends of Chang-E, the beautiful lady in the moon.中秋节最早可能是一个庆祝丰收的节日。后来,月宫里美丽的仙女嫦娥的神话故事赋予了它神话色彩。 According to Chinese mythology, the earth once had 10 suns circling over it. One day, all 10 suns appeared together, scorching the earth with their heat. The earth was saved when a strong archer, Hou Yi, succeeded in shooting down 9 of the suns. Yi stole the elixir of life to save the people from his tyrannical rule, but his wife, Chang-E drank it. Thus started the legend of the lady in the moon to whom young Chinese girls would pray at the Mid-Autumn Festival.传说古时候,天空曾有10个太阳。一天,这10个太阳同时出现,酷热难挡。弓箭手后翌射下了其中9个太阳,拯救了地球上的生灵。他偷了长生不死药,却被妻子嫦娥偷偷喝下。此后,每年中秋月圆之时,少女们都要向月宫仙女嫦娥祈福的传说便流传开来。In the 14th century, the eating of mooncakes at "Zhong Qiu Jie" was given a new significance. The story goes that when Zhu Yuan Zhang was plotting to overthrow the Yuan Dynasty started by the Mongolians, the rebels hid their messages in the Mid-Autumn mooncakes. Zhong Qiu Jie is hence also a commemoration of the overthrow of the Mongolians by the Han people.在14世纪,中秋节吃月饼又被赋予了一层特殊的含义。传说在朱元璋带兵起义推翻元朝时,将士们曾把联络信藏在月饼里。因此,中秋节后来也成为汉人推翻蒙古人统治的纪念日。 During the Yuan Dynasty (A.D.1206-1368) China was ruled by the Mongolian people. Leaders from the preceding Sung Dynasty (A.D.960-1279) were unhappy at submitting to foreign rule, and set how to coordinate the rebellion without it being discovered. The leaders of the rebellion, knowing that the Moon Festival was drawing near, ordered the making of special cakes. Packed into each mooncake was a message with the outline of the attack. On the night of the Moon Festival, the rebels successfully attacked and overthrew the government. What followed was the establishment of the Ming Dynasty (A.D. 1368-1644). Today, moon cakes are eaten to commemorate this event.在元朝,蒙古人统治中国。前朝统治者们不甘心政权落入外族之手,于是密谋策划联合起义。正值中秋将近,起义首领就命令部下制作一种特别的月饼,把起义计划藏在每个月饼里。到中秋那天,起义军获取胜利,推翻了元朝,建立明朝。今天,人们吃月饼纪念此事。
2023-08-16 18:43:081

NSF-CAREER-Award是什么意思

NSF-CAREER-Award美国国家科学基金会奖
2023-08-16 18:43:132

SELECT TOP 100 PERCENT 这是什么意思

SELECT TOP 100 PERCENT选择前百分之100SELECT TOP 100 PERCENT选择前百分之100
2023-08-16 18:43:151

土豆发电的原理是什么,应该怎么制作?

这个我也想
2023-08-16 18:43:183

商界评论top100权威吗?

权威。根据查询《商界评论》官网信息得知,《商界评论》Top100权威。《商界评论》杂志是商界传媒有限公司旗下的一本高端的商业管理类杂志。是国内第一本最彻底深入研究微观中国经济,研究微观中国企业问题的泛MBA读本。
2023-08-16 18:43:221

notes的nsf文件怎么打开

只要安装有notes客户端,双击就可以打开了
2023-08-16 18:43:232

常见的电路保护

常见的电路保护有,电门箱里不能放物品;电门箱前不能堆挂杂物;不能在电线上搭挂物品;不得私自乱拉电线等。
2023-08-16 18:43:273

铃儿响叮当英文单词怎么读?

The bell sings
2023-08-16 18:43:312

如何查看亚马逊类目top 100?

1、登入亚马逊美国官网,选择感兴趣的任意一个产品,点击该商品,进入产品页面。2、下拉找到该产品Product Details页面:可以看到Amazon Best Sellers Rank这一栏,这一栏就表示该卖家在在整个类目的销售排行榜。首先说明亚马逊的商品种类非常丰富, 是作为新手海淘的第一站。 在亚马逊上的商品, 有些是亚马逊自营的, 由亚马逊质检和配送, 有的是第三方商家销售的。 在我们海淘的时候,很明显首选亚马逊自营的商品,这样质量和售后最是有保障,尤其是在海淘的时候,自营商品是首选查看排行榜直接打开官方然后进入分类搜索你需要的按照价格或销量评分筛选就可以了
2023-08-16 18:43:323

除垢剂安全吗,饮用水专用的除垢剂是西利弗斯牌吗?

绝对安全不可能,毕竟是化学酸物质。只要我们最后冲洗干净就成啦!
2023-08-16 18:43:053

土豆为什么能发电,是什么原理

楼主理解错了,并不是土豆能发电,而是土豆是原电池。首先,把铜电极和锌电极插在切开的土豆里,联接上微安电流计就会看到有很微弱的直流电流通过,同时可看到插铜电极的一端会变绿,这是正极,不变色的锌电极则是负极。这是因为土豆是高淀粉植物,其内部含大量的蛋白酶,类似于果酸,土豆内部的含水量也很高,对插进去的活泼性且有差异的金属具有电解化学反应,在这个反应中会产生电流,这就是原电池反应现象。此时的土豆是充当了电解媒介,不但是土豆,很多水果和高含酸、含酶的植物都有此作用,楼主可以拿个柠檬去试试,效果更明显的
2023-08-16 18:43:001

热过载继电器接线图及介绍

向左转|向右转向左转|向右转首先要了解控制原理1、接触器线圈要接上对应的电压,如220V接触器应该选用一零一火。380V接触器应该选两根火线作为控制电压。(一定要注意线圈额定电压。)2、控制回路零线(对于220v接触器而言,380V接触器此处接一根火线)接到A1。控制回路火线(380V接触器需与A1的火线不同)经过停止按钮常闭点(NC)开始,串联启动按钮的常开点(NO),串联经过热过载继电器的常闭点进入接触器线圈A2.(线圈的另一端),此时如果上电,按下启动按钮线圈通电,接触器吸合。松开启动按钮接触器就会断开。这样处于点动运行状态。显然这样还不行。3、观察接触器上找到NO触点,分别引出两根线。来并联到启动按钮两端。这样相当于接触器吸合,接触器上常开点(NO)点接通了按钮常开点(NO)两端,这样可以松手啦。这就是书上所说的自锁。
2023-08-16 18:42:582

nsf认证净水器包括42、53、55分别指什么

特百惠获得的两项NSF国际认证分别是42号和53号认证。42号认证是指感官上看无毒、无味,清澈透明;53号认证是指关于过滤的细菌、病毒、重金属的程度的认证
2023-08-16 18:42:561

土豆发电原理是什么?

土豆是高淀粉植物,其内部含大量的蛋白酶!类似于果酸!土豆内部的含水量也很高!对插进去的活泼性有差异的金属具有电解化学反应!在这个反应中会产生电流!这就是原电池反应现象!x0dx0a此时的土豆是充当了电解媒介罢了!不但是土豆!很多水果和高含酸,含酶,的植物都有此作用!x0dx0a土豆电池的工作原理主要是需要两块金属,一块作为阳极,是电势低的电极,如锌;另一块作为阴极,是带正电荷的电极,如金属铜。土豆内部的酸性物质会与锌和铜发生化学反应,当电子从一端流向另一端时,电能就释放。金属锌的化学性质比铜活泼,当这两种金属同时处在酸液中时,锌就会失去电子,这些失去的电子沿着导线传到铜片上,形成电流。x0dx0a离子方程式:x0dx0aZn失去电子变成Zn2+,故在锌片上发生的反应为:x0dx0aZn - 2e- — Zn2+(氧化反应)x0dx0a溶液中的H+在铜片上得到电子变成 H2,故在铜片上发生的反应为:x0dx0a2H+ + 2e- — H2(还原反应)
2023-08-16 18:42:491

中秋节的英文怎么说?

the Mid-autumn Festival 中秋节中秋节介绍:"Zhong Qiu Jie", which is also known as the Mid-Autumn Festival, is celebrated on the 15th day of the 8th month of the lunar calendar. It is a time for family members and loved ones to congregate and enjoy the full moon -an auspicious symbol of abundance, harmony and luck. Adults will usually indulge in fragrant mooncakes of many varieties with a good cup of piping hot Chinese tea, while the little ones run around with their brightly-lit lanterns.农历八月十五日是中国的传统节日——中秋节。在这天,每个家庭都团聚在一起,一家人共同观赏象征丰裕、和谐和幸运的圆月。此时,大人们吃着美味的月饼,品着热腾腾的香茗,而孩子们则在一旁拉着兔子灯尽情玩耍。
2023-08-16 18:42:431

制作土豆发电的道理

技术原理:土豆电池的工作原理主要是需要两块金属,一块作为阳极,是电势低的电极,如锌;另一块作为阴极,是带正电荷的电极,如金属铜。土豆内部的酸性物质会与锌和铜发生化学反应,当电子从一端流向另一端时,电能就释放。金属锌的化学性质比铜活泼,当这两种金属同时处在酸液中时,锌就会失去电子,这些失去的电子沿着导线传到铜片上,形成电流。结构组成:土豆发电的组成,这种绿色高效能的电池由锌、铜电极和煮熟的土豆片制成的。土豆提供反应所需要的酸,这使得电子从铜到锌的运动能够进行,作为电池两极的铜和锌分别来自铜钉和镀锌钉。每个土豆能产生大约0.5伏特的电压,电流0.2毫安左右。马铃薯在煮熟后会在表面产生一个涂层,这个涂层是土豆电池的关键,因为希伯来大学的研究人员发现,提高土豆块涂层就增强了盐桥能力,因此有马铃薯涂层的电池产生的电能是无马铃薯涂层电池的十倍。也就是说,土豆煮熟后发电能力比煮熟前提高10倍左右,从而延长供电时间至数日甚至数周。希望能够帮到您,望采纳,谢谢!
2023-08-16 18:42:391

超时空救兵里面的土豆发电是不是真的?

是真的
2023-08-16 18:42:203

中秋节英文怎么拼

mid-autumn festival the Mid-autumn Festival
2023-08-16 18:42:193

SGSGMPNSF各指什么

SGS 是 Societe Generale de Surveillance S.A. 的简称,译为“通用公证行”。 GMP”是英文Good Manufacturing Practice 的缩写,中文的意思是「良好作业规范」,或是「优良制造标准」,是一种特别注重制造过程中产品质量与卫生安全的自主性管理制度。它是一套适用于制药、食品等行业的强制性标准,要求企业从原料、人员、设施设备、生产过程、包装运输、质量控制等方面按国家有关法规达到卫生质量要求,形成一套可操作的作业规范帮助企业改善企业卫生环境,及时发现生产过程中存在的问题,加以改善。 NSF是美国国家卫生基金会的英语缩写
2023-08-16 18:42:131