elisa

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

原理：利用抗原能吸附到固相载体表面的特性，使抗原抗体反应在固相载体表面进行的免疫酶技术，从而简化了抗原抗体结合物分离的手续。基本步骤：1包被：既是把抗原或抗体吸附到固相反应板上；2抗原抗体反应；3酶促反应。

ELISA双抗体夹心法 原理 ELISA双抗体夹心法(enzymelinkedimmunosorbentassay——sandwichtechnique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。生物帮有相关介绍。组织染料http://product.bio1000.com/100066/

原理是把抗原（或抗体）结合到固相载体上。Elisa是酶联免疫吸附测定的英文，能够通过抗原抗体相结合进行免疫反应测定的一种方法。检测hbcab和hbeab的方法原理是把抗原（或抗体）结合到固相载体上，并将抗原（或抗体）与某种酶连接成酶标记。

包被板上的成分有很强的阴离子吸附功能，包被液的PH为9.6，可以使被包被的蛋白质为碱性，因此可以牢固吸附在包被孔中

酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。1971年Engvall和Perlmann发表了该方法用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。间接法测抗体（indirect elisa）间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

液相阻断ELISA其实就是将抗体（兔抗血清）包被在ELISA板中,于此同时将待检血清做几个稀释度和已知抗原在反应板中反应；4°过夜,然后将ELISA板中包被的抗体弃掉,洗板；将反应板中一定量的反应液加入ELISA板中,37°1h；然后弃液,洗板,加入一定量的一抗（豚鼠抗血清）,与所剩抗原结合,37°1h；然后弃液,洗板,加入一定量的酶标二抗（兔抗豚鼠血清+酶标记物）,37°1h；然后弃液,洗板,加入配好的显色液,37°显色10-20分钟左右,加入终止液读数.

缺点：1只是诊断的辅助手段，特异性和灵敏性有待提高。 2操作过程有些繁琐，反应血药时间，不能一蹴而就。

(1)基本原理：把抗原在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品和酶标记物按一定程序反应形成复合物，并加入酶作用的底物;反应终止时，根据定性或定量分析有色产物的量来确定待检样品中的抗体的含量。(2)试验步骤：抗原包被→洗涤封闭→加待检血清（同时设立阴阳性对照）→反应一定时间→洗涤→加酶标二抗→反应一定时间→洗涤→加底物溶液→反应一定时间→终止反应→判定结果(3)结果判定：肉眼观察或仪器测定，可以阳性与阴性表示结果、以P/N比值表示结果、以终点滴度表示结果或以标准曲线进行定量测定。

enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文PolymeaseChainReaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方.聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，简称PCR)又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

将抗原包被于固相载体，加入待测血清后，如其中含有相应抗体，可与包被抗原结合。洗去不参与反应的无关蛋白成分后，再加入酶标记的第二抗体或酶标记抗原，使与待测抗体反应，在固相载体上形成抗原一待测抗体一酶标记抗抗体或抗原一待测抗体一酶标记抗原的复合物。待加入底物后，酶催化底物，产生呈色物质。根据着色深浅，可判定待测抗体的有无及含量。如检测IgM类抗体，可用抗u03bc链抗体包被固相载体，再依次加入待测血清、抗原、酶标记的针对抗原的特异抗体。如检测抗原，可采用抗原捕获(双抗体夹心)ELISA。除此之外，ELISA还有很多其他的演变方法，如竞争抑制法等。

竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原，其原理为：将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上，检测时加入待测样本，使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合。然后加入HRP酶标记的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体结合，由于酶标板上固著的抗体数量有限，因此当样本中抗原的量越多，则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少，两种抗原竞争结合包被抗体，所以称为竞争法。接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，当样本中抗原量越多，代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少，显色也就越浅。百特纯大分子Meretciel的测激素的ELISA试剂盒有些就是竞争法的。夹心法又叫双抗夹心法，用于检测较大分子的抗原或抗体，又分为：双抗体夹心法，用于检抗原；和双抗原夹心法用于检抗体。以双抗体夹心法为主，下面以双抗体夹心法为例讲解原理（双抗原夹心法类似）：首先将具有专一性之抗体包被（coating）于酶标板上，检测时加入待测样本，样本中若含有待测抗原，则会与酶标板上包被的抗体专一性结合，然后加入另一种针对待检抗原的抗体，通常称为检测抗体，包被抗体和检测抗体将抗原夹在中间所以叫双抗夹心。检测抗体通常带有HRP酶标记，接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，样本中抗原量越多则显色越深。现在很多ELISA试剂盒生产厂家比如：优尔生和百特纯大分子Meretciel将生物素-亲和素放大系统引入双抗夹心法，也就是在检测抗体上标记生物素，然后加入HRP酶标记的亲和素（或链亲和素），利用亲和素可以和生物素分子紧密结合的特性，将HRP酶连接到检抗上，接着加入底物显色。也有引入二抗的，如下图，检测抗体不标记，再加入HRP标记的二抗与检测抗体结合

我是从事食品安全检测elisa的工程师，这个问题是要打好多的字才能解释清楚，我尽力吧，希望能采纳：1.我们常用的食品安全检测elisa原理有直接法、间接法（一步法、二步法）。对于使用哪种方法，是经过多次研发调试得出的，要考虑线性、变异、检测限等等。2.根据你说的应该是间接二步法，实验过程是：加标准品/样本——加一抗——反应——甩出、洗板——加酶标二抗——反应——甩出、洗板——加显色液——反应——加终止液——检测。3.第一个问题：看的是液体的颜色，颜色深含量少，颜色浅含量高，一般是用酶标仪，双波长检测。4.第二个问题：实验用的抗体分为单抗和多抗，通常将待检测物认为是抗原，如果直接使用酶标抗体对抗原进行检测，难以保证实验的检测限及控制变异，并且实验的可重复性不好，当然随着研发的推进，将来可能会有更加便捷的检测方法。

免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。HBsAg试剂特点（检测模式：临床抗体夹心法）：包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性（99。98%）提高检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说（PEI）HBsAg标准品,对ad标准品的灵敏度为0。05ng/ml对ay标准品灵敏度为0。025ng/mlELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在长:450nm具体的你也可以咨询上海信帆生物处测量O.D。值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准,O.D。值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

基本原理是把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面，测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与固相载体上的抗原抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例，经洗涤去除反应中的其他物质，加入酶反应底物后，底物即被固相载体上的酶催化成为有色产物，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。

ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。

正相反。一般酶和抗体是化学键连接的。阳性对照中，抗体和抗原结合导致抗体的固定化（也就是说结合到板子上了），与抗体连接的酶就一并固定化了，所以再往酶标板中加入底物，酶就发挥作用显色了。阴性对照中，抗原没有，所以抗体不能固定化，随之没有酶的固定化，所以加入底物不显色。

看看百度文库里面这文章 ELISA的原理和类型，讲的很清楚了

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到?>聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。分类方法夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为：将具有专一性的抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结；洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结；洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。间接法间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为：将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原；加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结；洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结；洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结；加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来；洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。

Elisa法有间接ELISA和直接ELISA两种类型。其中，直接ELISA又分为竞争ELISA和非竞争ELISA两种。其原理均基于抗体与其对应的抗原之间的特异性结合，利用这一结合来检测样品中是否含有特定的抗原。以下是详细介绍：一、间接ELISA1.反应过程：先将被检测的抗原加到已涂有抗原的孔中，再加入未标记的特异性抗体与之结合，再加入与该次结合相应标记的二抗与上一步结合。2.原理：在检测过程中，第一次特异性抗体与抗原结合生成免疫复合物，随后加入待检测物质，其抗原结合剩余的空位，再加入第二抗体，二抗与第一次抗体产生的免疫复合物进行结合。二、非竞争ELISA1.反应过程：首先，在已经涂有抗原的孔板上加入待测的标本及一定量的酶标记抗体（例如辣根过氧化物酶标记抗体HRP），待测标本与孔中存在的抗原发生特异性反应形成抗原抗体复合物，此时酶标记抗体与复合物发生反应，余下的两种非结合状态被洗掉后再倒入颜色原液（如TMB）加速发色。2.原理：测定样品中特定分子含量的方法。标记的抗体对于待分析化合物极为特异，混合了待检测的样品后，抗体就会挑选出待测分子，从而获得分子的半定量信息。三、竞争ELISA1.反应过程：竞争ELISA先将受试物和固相相应抗体预先结合，再加入试样，与固相抗体竞争，并排开式吸附于固相抗体，结合非酶标抗体的辣根过氧化物酶HRP再次孵育，最后进行洗涤与溶胀反应。2.原理：根据待测物和内部参比物竞争抗体上的空间亲和力大小使得不同的化合物具有不同的结合力，利用这一特性来进行分析或检测的方法。被抗体固定在孔板中，样品中的待检测物在抗体的作用下结合到固相上。随后加入标记的待检测物和特异性未标记的二抗与前面的待检测物竞争结合。用酶标仪读出吸光度数据得到待检测物含量。

elisa实验原理是由于抗原、抗体的反应在一种固相载体—聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。elisa的实验步骤用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤，后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

enzyme linked immunosorbent assay，ELISA。指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

ElisaSchrey外文名：ElisaSchrey职业：演员代表作品：《塔楼》合作人物：NikiasChryssos

英文原文：queen elizabeth英式音标：[kwiu02d0n] [u026au02c8lu026azu0259bu0259θ] 美式音标：[kwin] [u026au02c8lu026azu0259bu0259θ]

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法，建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术，是一种用酶标记抗原或抗体的方法。由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来。 ELISA试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 ELISA基本原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 ELISA基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，基本原理有三条： （1） 抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； （2） 抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； （3） 酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。 在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感，且更为实用的免疫酶技术。　　免疫组织化学的全过程包括：1.抗原的提取与纯化；2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体；4.标本的制备；5.免疫细胞化学反应以及呈色反应；6.观察结果。免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescentantibodytechnique）。

歌曲名:Dancing歌手:Elisa专辑:Then Comes The SunDancingby ElisaleonwikiTime is gonna take my mindand carry it far away where I can flyThe depth of life will dim my temptation to live for youIf I were to be alone silence would rock my tears"cause it"s all about love and I know betterHow life is a waving featherSo I put my arms around you around youAnd I know that I"ll be living soonMy eyes are on you they"re on youAnd you see that I can"t stop shakingNo, I won"t step back but I"ll look down to hide from your eyes"cause what I feel is so sweet and I"m scared that even my own breathOh could burst it if it were a bubbleAnd I"d better dream if I have to struggleSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meI"m dancing in the room as if I was in the woods with youNo need for anything but musicMusic"s the reason why I know time still existsTime still existsTime still existsSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt mehttp://music.baidu.com/song/8297339

歌曲名:Dancing歌手:Elisa专辑:ElisaDancingby ElisaleonwikiTime is gonna take my mindand carry it far away where I can flyThe depth of life will dim my temptation to live for youIf I were to be alone silence would rock my tears"cause it"s all about love and I know betterHow life is a waving featherSo I put my arms around you around youAnd I know that I"ll be living soonMy eyes are on you they"re on youAnd you see that I can"t stop shakingNo, I won"t step back but I"ll look down to hide from your eyes"cause what I feel is so sweet and I"m scared that even my own breathOh could burst it if it were a bubbleAnd I"d better dream if I have to struggleSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meI"m dancing in the room as if I was in the woods with youNo need for anything but musicMusic"s the reason why I know time still existsTime still existsTime still existsSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt mehttp://music.baidu.com/song/53668746

歌曲名:Dancing歌手:Elisa专辑:Soundtrack "96-"06Dancingby ElisaleonwikiTime is gonna take my mindand carry it far away where I can flyThe depth of life will dim my temptation to live for youIf I were to be alone silence would rock my tears"cause it"s all about love and I know betterHow life is a waving featherSo I put my arms around you around youAnd I know that I"ll be living soonMy eyes are on you they"re on youAnd you see that I can"t stop shakingNo, I won"t step back but I"ll look down to hide from your eyes"cause what I feel is so sweet and I"m scared that even my own breathOh could burst it if it were a bubbleAnd I"d better dream if I have to struggleSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meI"m dancing in the room as if I was in the woods with youNo need for anything but musicMusic"s the reason why I know time still existsTime still existsTime still existsSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt mehttp://music.baidu.com/song/53652162

歌曲名:Dancing歌手:Elisa专辑:Caterpillar - Itunes VersionDancingby ElisaleonwikiTime is gonna take my mindand carry it far away where I can flyThe depth of life will dim my temptation to live for youIf I were to be alone silence would rock my tears"cause it"s all about love and I know betterHow life is a waving featherSo I put my arms around you around youAnd I know that I"ll be living soonMy eyes are on you they"re on youAnd you see that I can"t stop shakingNo, I won"t step back but I"ll look down to hide from your eyes"cause what I feel is so sweet and I"m scared that even my own breathOh could burst it if it were a bubbleAnd I"d better dream if I have to struggleSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meI"m dancing in the room as if I was in the woods with youNo need for anything but musicMusic"s the reason why I know time still existsTime still existsTime still existsSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt meSo I put my arms around you around youAnd I hope that I will do no wrongMy eyes are on you they"re on youAnd I hope that you won"t hurt mehttp://music.baidu.com/song/8272179

时间是在哪里把我的心并随身携带，远离那里，我可以飞深度的人生将暗淡的诱惑住你如果我真的被独自沉默就会动摇我的眼泪"事业，它的所有关于爱情，我更了解如何生活是一个挥舞着羽毛所以，我把我的武器在你身边我知道我将生活尽快我的目光都集中在你喜欢开玩笑，你你看，我不能停止摇头不，我不会退后一步，但是，我可以居高临下，以隐藏你的眼"原因是什么，我觉得是那么甜，我怕连我自己的呼吸哦，可能爆裂，它如果是一个泡沫我最好的梦想，如果我有挣扎所以，我把我的武器在你身边我也希望我会做的没有错我的目光都集中在你喜欢开玩笑，你我希望你们不要伤害我我的舞蹈在房间内，因为如果我是在树丛中，与你不需要什么，但音乐音乐的原因，我知道，时间依然存在时间依然存在时间依然存在所以，我把我的武器在你身边我也希望我会做的没有错我的目光都集中在你喜欢开玩笑，你我希望你们不要伤害我所以，我把我的武器在你身边我也希望我会做的没有错我的目光都集中在你喜欢开玩笑，你我希望你们不要伤害我

大量样本，同时检测某种蛋白（指标）的多少，意义，一组样品中 每个个体 指标多少？有什么变化趋势。一目了然。

elisa实验原理是在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。抗原和抗体跟酶交连以后仍然能够保持活性和酶的催化性。交连后的酶根底物可以进行反应，催化分解，使其产生有色物质。根据有色物质的多少和颜色深浅通过酶测曲线得出结论。elisa是用血清来检测的，由数值来判断是阴性还是阳性的结果。特点：一、高效、灵敏、特异的抗体；二、稳定的重复性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；五、节省实验经费。以上内容参考：百度百科--elisa试剂盒

ELISA的类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：2.2.1 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab"）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。2.2.2 双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。2.2.3 间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法（见图2-3）。操作步骤如下：1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。3）加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。4）加底物显色本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。2.2.4 竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。2.2.5 竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。2.2.6 捕获包被法测抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断(early diagnosis)中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断(early diagnosis)。甲型肝炎病毒（HAV）抗体的检测模式见图2-7。类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体，导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。2.2.7 ABS-ELISA法ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白，分子量60000，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物，分子量244。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物，标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性，其亲和力较抗原抗体反应大得多，两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个生物素分子结合，因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）。在LAB中，固相生物素先与不标记的亲和素反应，然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期，亲和素从蛋清中提取，这种卵亲和素为碱性糖蛋白，与聚苯乙烯载体的吸附性很强，用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点，在ELISA应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。

ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。加 样1.血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。1.标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2.加样后及时放入孵箱。 3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5.标本较多时，请分批操作。孵 育1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底； 2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。1.贴封片或加盖； 2.按说明步骤严格控制操作时间。洗 板1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。 3.反应板过多造成洗板等待时间长。1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2.合理安排，或多用几台洗板机。显 色1. 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2. 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。1. 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2. 加样时保持显色剂不外流； 3.A、B液应避免接触金属器械。终 止加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。加终止液时应避免产生气泡。读 板读板时板底不清洁。应保证酶标板清洁。全过程1.整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 2.实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

ELISA的全称enzyme-linked immuno sorbent assay，即酶联免疫吸附试验，是用来检测抗原或抗体的，因为原理是抗原抗体特异性结合，所以敏感性非常高，可以检测极微量的待测物，在医学上的应用很多，只要是蛋白质基本都可以检测（只要能合成对应的抗体就行了），而且是半定量的，可以显示滴度，比如检测血清里的HIV抗体、破伤风抗毒素、流感病毒的抗原等等，不限于病种

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1.储存.收到试剂盒后应尽快放入冷藏室内保存,保存温度为4℃-8℃.2.回温.试剂盒在使用前应于室温（22-27℃）下充分回温,回温时间为40-60分钟.回温过程中勿将酶标板的包装袋开封,回温结束后再将其从包装袋中取出使用.3.样品稀释.样品稀释应严格按照说明书要求的稀释倍数进行稀释.如稀释倍数过大,可采用多步法进行样品稀释.例如：试剂盒要求样品需进行500倍稀释,可吸取5μl样品加入245μl样品稀释液中,充分混匀后,再吸取10μl混合液加入90μl样品稀释液中即可.4.加样.稀释好的样品在加入酶标板进行孵育的过程中,尽可能缩短第一次加样和最后一次加样的时间间隔,样品加好后马上开始计时.5.洗板.样品孵育时间结束后,马上甩去孔内液体.如多块酶标板需同时洗涤,可先将板内液体甩去,倒扣于吸水纸上,再依次进行洗涤.使用洗板机洗涤时,建议洗涤次数增加一次.未用完的洗涤液可在4℃-8℃下密封保存1月.6.显色.底物药片可在显色前3-5分钟加入底物缓冲液中,混合直到完全溶解.本试剂最好是现用现配,未用完的底物溶液可在4℃-8℃下避光保存1周.7.终止及读数.提前打开酶标仪,加入终止液后立即读数.8.同批号试剂盒中的试剂,除酶标二抗及阳性对照外,其余均可通用.9.移液器的正确使用、保存、清洁、校对.10.实验室管理桌面保持整洁,插枪头戴手套等.

1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。ELISA已成为分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。

一、做ELISA试剂盒标准曲线样品检测时有几个问题需要注意1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，ELISA试剂盒这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.二、选择什么方程去拟合在S曲线的低浓度部门可以用乘幂方程很好的拟合，中低浓度部门可以用直线方程，中间部门可用对数方程，而中后段可用四参数。免疫检测时尺度点（可以是倍比稀释的，也可以不是）浓度假如和相应的吸光度（OD）值假如能够呈现直线关系当然是最理想的了，这时可以通过EXELL等利便的获得拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。 关于尺度曲线的拟合方式，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合，但都只合用于曲线的一部门，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中间一段，而Logistic曲线则对曲线的全部都有较好的合用性。在一个长的区间内，Logistic应该都能拟合得较为理想。假如用来定量，S形曲线的中间段（较陡处）是比较好的，而两真个平坦部门计算误差会大，有时甚至会很大。用于免疫检测的所谓“尺度曲线"实在称为拟合曲线比较合适。目前国际上最流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合"，用这种拟合方式往往能够比较精确的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较准确的获得样品中待测物质的浓度值。但我们做免疫检测很少有时候能够有这么理想的情况，标品浓度和相应OD值往往是"S"型的曲线关系，这时就不能用直线拟合的方式了，而对拟合方法进行选择就是必要的了。枢纽在于你的尺度曲线做到了S形的哪一部门，你想检测的样品浓度在曲线的哪一部门。当然，假如用于定量，仍是在中间一段较好。但建模型是一回事，ELISA试剂盒而用它来定量是另一回事。这些方法固然没有一种方法可以通用，但也都可以用。但并不是说它就是万能的。事实上不仅是ELISA，其它良多生物学反应都是S形曲线，也都可以用Logistic曲线拟合。

夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果间接法间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结。洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

EILSA主要是基于抗原或抗体能吸附至固相载体的表面并保持其免疫活性，抗原或抗体与酶形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

酶联免疫反应吸附试验：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。方法1三明治法（sandwich）方法2间接法（indirect）方法3竞争法（Competitive）

两者其实就是叫法不同而已。酶联免疫法(eia) 的翻译结果:enzyme linked immunosorbent assay (eia)缩写的另一种形式就是ELISA了

　ELISA的原理　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。　　2.　ELISA的类型　　ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：①双抗体夹心法②双抗原夹心法③间接法

会使检测的特异性降低，即信噪比降低。

在ELISA实验结束后，我们得到的是经酶标仪得出的标准品以及样本的OD值。其中，标准品的浓度已知，我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度，以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做一条标准曲线，并用公式表示出来。这样，我们把样本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即样本浓度。 下面我们就一步步来实现这个目标： 1、首先，将数据整理好输入Excel，分别为经酶标仪读出标准品的OD值及其对应的浓度值。 2、拖动鼠标选取完成的数据区，并点击图表向导，在图表类型中选“XY散点图”，并选择子图表类型的“散点图”（第一个没有连线的） 3、点击“下一步”，出现如下图界面。如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。 在做ELISA标准曲线，并通过此曲线求样本浓度时，因样本OD值是已知的，因此我们需要将OD值设为X。根据上图我们可以看到，横坐标X值为OD值，纵坐标Y为标准品浓度，这正是我们想要的。 有时需要我们手动选择X值，这时可以点击“系列”来更改 如果要对横坐标和纵坐标进行调换，我们可以就点击X值和Y值文本框右边的小图标 拖动鼠标选取正确的数据区域以调整X或Y。 5、调好之后，然后点击“下一步”出现图标选项界面， 6、点击“下一步”，在弹出的窗口再点击“完成”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。 7、到了这一步，散点图便完成了。我们可能会问，曲线在哪里啊？其实很简单，先点击图上的标准值点（记住一定要点选上），然后单击右键，点击“添加趋势线”。弹出趋势线类型选择对话框，有线性，对数，多项等选项 8、在选择之前，我们先对上图做一下肉眼观察，如果那些点能连成一条直线，或接近直线，我们就选择“线性”，意思就是出来的趋势线是一条直线，相应的该直线的方程就是y=ax+b的形式。不过一般的ELISA都不会是所有的标准点呈完全的线性关系的，也就是说不是一条完全的直线，这时我们可以选择“多项式”，多项式后面还有“阶数”的选择，也就是说求出来的方程是几次方，我们一般选“2阶”，即出来的方程为y=ax2+bx+c. 选择完毕后，弹出以下窗口。 9、趋势线也就是标准曲线在此便显示出来了。接下来我们需要将公式显示出来，以根据样本的OD值计算其浓度值。在鼠标点选该线（一定要选中，选中后出现下图的样子即线由很多店标识出来），单击鼠标右键，选择趋势线格式。我们在弹出的窗口中选择“选项”选项卡，出现下图，我们选择显示公式，显示R方，即相关系数，这时公式与R方值便都显示出来了。 我们将样本的OD值作为X代入上述方程，求出来的便为浓度值了。 一般ELISA的标准曲线的相关系数要达到0.99以上，本例中为0.9999，非常不错的曲线，这样就保证了由该曲线及其方程求出的样本浓度具有很强的可信性。

　ELISA的原理　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。　　2.　ELISA的类型　　ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型：①双抗体夹心法②双抗原夹心法③间接法

ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体.在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物.根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法.用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型： 1.双抗体夹心法测抗原　　双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下： 1） 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质. 2） 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质. 3） 加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关. 4） 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测. 在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应（hook effect）,因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时,应注意可测范围的最高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应. 假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题. 双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰.RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应.采用F（ab"）或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标. 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心. 2.双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似.用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体.与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法. 3.间接法测抗体　　间接法是检测抗体常用的方法.其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法.操作步骤如下： 1）将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原.洗涤除去未结合的抗原及杂质. 2）加稀释的受检血清,保温反应.血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物.经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去. 3）加酶标抗抗体.可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体.固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合,从而间接地标记上酶.洗涤后,固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关. 4）加底物显色本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断.间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法. 间接法成功的关键在于抗原的纯度.虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果,但应尽可能予以纯化,以提高试验的特异性.特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质,例如以E.Coli为工程酶的重组抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应.抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质,例如来自人血浆或人体组织的抗原,如不将其中的Ig去除,试验中也发生假阳性反应.另外如抗原中含有无关蛋白,也会因竟争吸附而影响包被效果. 间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性.病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分.IgG的吸附性很强,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面.因此在间接法中,抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次,以封闭（blocking）固相上的空余间隙.另外,在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200）,以避免过高的阴性本底影响结果的判断. 4.竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合.标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应.如抗原为高纯度的,可直接包被固相.如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原.洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应.竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc 　　ELISA一般采用此法.另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应.抗HBe的检测一般采用此法. 5.竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式.其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合.标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅.小分子激素、药物等ELISA测定多用此法. 6.捕获包被法测抗体 IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中.间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体.如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体,因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上.因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰.在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法.先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）.然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合.继而加酶标记针对抗原的特异性抗体.再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关.此法常用于病毒性感染的早期诊断.甲型肝炎病毒（HAV）抗体的检测模式. 类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应.因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功. 7.ABS-ELISA法 ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语.亲和素是一种糖蛋白,分子量60000,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成.生物素为小分子化合物,分子量244.用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物,标记方法颇为简便.生物素与亲和素的结合具有很强的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定.由于一个亲和素可与4个生物素分子结合,因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲和素-生物素（ABC）法两种类型.两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系统中的酶标抗体（抗原）.在LAB中,固相生物素先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度.在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA中可使本底增高.从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点,在ELISA应用中有替代前者的趋势.由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多.

ELISA 英[u026au02c8lau026azu0259, -su0259] 美[u026au02c8lau026azu0259, -su0259] http://fanyi.baidu.com/?aldtype=85#en/zh/ELISA 楼主自己听听看

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

法还是双抗原夹

酶链免疫吸附化验是平板化验法用于探测和确定某些物质的数量，比如肽，蛋白质，抗体，和荷尔蒙。另有名称，比如 酶免疫化验（EIA）指的是同一种试验。 扩展资料 　　酶联免疫检测法（PSTVd除外）全过程包括病毒抗原的分离与纯化、病毒抗血清的制备和抗血清反应3个环节。抗血清反应实验步骤包括：抗原吸附在固相载体上，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成抗原一待测抗体一酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。待测抗体的"量与有色产物成正比。同理也可包被抗体，测定抗原含量。ELISA常用的有直接法测定抗原、竞争法测定抗原、双抗体夹心法测定抗原等方法。 　　双抗体夹心酶联免疫检测方法是将抗体吸附于固相表面，加抗原，形成抗原一抗体复合物，再加酶标抗体，最后加底物，根据底物的降解量确定抗原有无及数量。

请参考以下链接：http://baike.baidu.com/view/3626382.htm

检测原理: 本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上，操作步骤: 1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。【二抗的种属来源】一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里， 如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。 艾美捷有相应的驴来源的二抗，非常适合做类似双标的免疫实验。【二抗的耦联标记】一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用Biotin/Avidin检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记的二抗。【是否经过血清吸附过的二抗】为减少二抗与样本的非特异性结合，艾美捷还能为您提供不同血清吸附的原装进口二抗。如您的检测样本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗就需要选择抗小鼠源的二抗，如果您对实验的特异性要求很高，那我们向您推荐经过人血清吸附过的抗小鼠源的二抗，这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织（如IgG等）可能发生非特异性反应的IgG，因此将非特异性结合降低到最低。【Anti-IgG还是Anti-IgG, F（ab"）2 fragment】在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内，通常含有较多的Fc受体，这时候选择二抗时最好选择Anti-IgG, F（ab"）2 fragment这样的特异性二抗，这样就消除了由于Fc部分与IgG的非特异性结合。常规的Anti-IgG （H+L）二抗与IgG的重链和轻链都有结合反应，即与IgG的Fc的F（ab"）2片段都能结合；由于IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此Anti-IgG （H+L）与它们都有交叉反应。而Anti-IgG, F（ab"）2 fragment经过了IgG Fc片段的吸附，因此只与IgG的F（ab"）2片段结合，然而IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此与它们也有交叉反应。【Anti-IgG（H+L）、Anti-IgG （gamma）、Anti-IgM （mu）、Anti-IgA （alpha）】在一些特殊的实验里，只需要检测样本里的IgG或者IgM，常规的Anti-IgG （H+L）由于与IgG的重链和轻链都有结合反应，而IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此不能特异性的检测某种类型的IgG或者IgM。这时候就需要针对特殊类型Ig分子的二抗。艾美捷备有全面的二抗现货产品并能提供最完整的二抗产品线。

WB-Re是Western Blot (Recombinant protein)WB-Ce是Western Blot (Cell lysate)IHC是Immunohistochemistry

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。elisa的临床意义，要根据具体的检测对象来看，主要是检测样本的含量以及定性，仅供参考

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

直接竞争ELISA和间接竞争ELISA区别　　1、直接竞争，标记抗原，与检测样品中的抗原竞争抗体。　　2、间接竞争，标记抗体，固相抗原与液相抗原（样品）竞争标记抗体。　　3、定义　　间接竞争法的模型：包被抗原，用HRP-抗体与样本一起加入。样本中的Ag与Solid-Ag竞争HRP-Ab，固相吸附的HRP-Ab与样本中的Ag浓度成反比。　　直接竞争法的模型：包被抗体，用HRP-抗原与样本一起加入。样本中的Ag与HRP-Ag竞争Solid-Ab，固相吸附的HRP-Ag与样本中的Ag浓度成反比。　　4、竞争法的理论基础：是限量抗体。只有在限量抗体基础上，两种抗原才会形成竞争关系。　　5、、间接竞争法具备较高灵敏度原因。　　直接竞争法里，标记抗原与待测抗原均是液相，与抗体的结合机会是一样的，例如有1份标记抗原与1份待测抗原竞争1份抗体，那么有50%的标记抗原能与抗体结合，所以标记抗原的相对结合率为50%。间接法里，固相抗原与抗体的接触面积较小，固相抗原与待测抗原的结合抗体机会是不平等的，接近顺序饱和法，即只有与待测抗原结合剩余的抗体才会与固相抗原结合，同样有1份固相抗原与1份待测抗原竞争1份抗体时，基本上抗体会被待测抗原中和掉，与固相抗原结合的抗体非常少。固相抗原的相对结合率为0%。因此，间接法的抑制曲线斜率会大于竞争法。　　因为抑制率越大则斜率越大，从而灵敏度越大。（假设零管变异5%，以两倍SD为灵敏度限，则为90%相对结合率，则间接法可以在较低的待测抗原浓度达到这一相对结合率，因此灵敏度要高。）　　在进行系统放大时，间接法一般可以使用酶标二抗。因为二抗可以针对抗体的多个部位，所以存在放大效应，从而能提高间接法的灵敏度。直接法一般难以进行放大，常用的有生物 素化抗原与酶标亲和素，但模式上似乎不存在放大效应。　　6、间接法的高灵敏度难以实现的原因：　　双抗体 夹心的免放（IRMA）模式刚出现时，也被模型证明灵敏度优于竞争法的放免（RIA），原因也是较大的斜率，但是IRMA的高灵敏度一直到单抗发展后才得以实现。

　　在国内生物研究蓬勃发展的现在，假冒无视科学研究的严谨性和严肃性，让广大的科研工作者被动造假，严重破坏了科研氛围，扰乱了市场秩序，联科生物整理了一些鉴别这些假冒伪劣ELISA试剂盒的方法，供广大的科研工作者和用户参考，让希望对广大科研工作者有所帮助。　　购买前　　【方法一】向厂家索要或从其网站下载说明书，查找ELISA的性能指标：准确度(加标回收率、稀释线性)、精密度(板内差、板间差)、灵敏度、样本值、特异性、校准。一般来说，除了校准不一定每份说明书都有外，其余的指标一般都需要罗列(部分样本需要高倍稀释的，可能没有准确度这个指标)。如果无法提供这些性能指标，则说明该试剂盒可能是假货，或者试剂盒开发过程不够科学严谨，有可能无法检测出真实的样本值。　　【方法二】对于夸大ELISA涵盖的指标的范围，尤其是不常见的种属，可先去国际知名ELISA试剂盒供应商(如eBioscience、R&D)网站上搜索，如果搜索不到该种属的ELISA试剂盒，则有可能是假货，需要小心谨慎。　　【方法三】将“厂家名”、“ELISA”和“假货”等关键词在网上搜索，有的网站或论坛如丁香园等会有打假曝光台。　　购买后　　【方法一】检查说明书、包装盒的质量，通常假冒伪劣产品为了降低成本，印刷的质量会比较差。其次仔细阅读说明书，如上所示查找ELISA的性能指标。　　【方法二】　　Ⅰ.利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原，方法如下：　　(1)将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody:antigen=1:2的混合孵育液　　(2)37℃孵育15分钟后，代替原试剂盒中的检测抗体　　(3)后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物　　(4)实验完毕后，检测其标准曲线，如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配，试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原，该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。　　(5)如果标准曲线无线性，则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰，影响了其实际试剂盒抗体的检测作用，则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。　　Ⅱ.如果购买了两盒同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验即可鉴别ELISA试剂盒是否造假，方法如下：　　(1)取出购买的试剂盒A的包被板两条。　　(2)一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。　　(3)另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。　　(4)后续操作按照试剂盒说明书进行，加检测抗体、酶复合物和底物。　　(5)实验完毕后，检测两条标准曲线，如果两条标准曲线一致则说明两个ELISA试剂盒检测的同一个指标而非A和B，即该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。　　(6)如果两条标准曲线不一致则说明两个ELISA试剂盒检测的不同指标，试剂盒A只能检测A，不能检测B，即该试剂盒为正常的ELISA试剂盒。

　　ELISA实验通用规则　　1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%.可用水和电子天平进行确定.但最好有专业人员进行矫正.　　2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支.吸取不同的液体后,要更换枪头.即使是吸取标准品时.　　3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定.　　4、实验时,要使底物避光保存.　　5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确.　　6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差.　　7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去.　　8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体.也可以用酶标仪的晃动功能.　　9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发.　　10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加彻底.没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干.　　11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液.加入1/1000的叠氮钠后可长期保存.　　12、底物是光敏感的,要在临用前现配.　　13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上.　　14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触.　　15、待检样品要澄清,否则会影响结果.　　16、温浴时间应遵守试剂盒规定.　　17、应尽量做双孔实验,这样才能保证数据的准确性.　　18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证.　　二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法　　1.加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低.　　a.原因：未加入酶标记物.　　解决办法：请按照操作步骤进行.　　b.原因：试剂盒内容物未能充分回.　　解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作.　　c.原因：室温太低.　　解决办法：若室温太低(25℃).　　解决办法：若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间.　　b.原因：底物溶液受到污染.　　解决办法：若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用.　　c.原因：反应时间超过太久.　　解决办法：请控制反应时间.　　d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂.　　解决办法：使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净.(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)　　4.阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值.　　a.原因：微孔中的试剂未能充分混合.　　解决办法：试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀.　　b.原因：洗板过程发生问题(同2-f.).　　解决办法：请参考2-f.　　c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致.　　解决办法：请参考2-d.

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文（2.2）已述，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物。　　完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定　　　中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

ELISA的基本原理是：1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开。最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关。故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。扩展资料：ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值。以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。参考资料来源：百度百科—ELISA

楼主你好！ELISA法指的是酶联免疫吸附实验 ，即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术，可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，它的基本原理主要是： 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）； ②酶标记的抗原或抗体（标记物）；③酶作用的底物（显色剂）。 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 希望可以对你有所帮助!

ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗体（capture Ab）固定在固相载体上，再加入一级检测抗体（primarydetection Ab），形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶（enzyme）标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质（substrate），作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。1.直接法（direct ELISA）将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。缺点：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。2.间接法（indirect ELISA）此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。缺点：交互反应发生的机率较高。3.双抗体夹心法（sandwich ELISA）被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。4.竞争法（competitive ELISA）样本里的抗原（自由抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。缺点：整体的敏感性和专一性都较差。5.最新ELISA技术：基于细胞法（cell-based ELISA）：是一种新的定性蛋白检测技术，将细胞直接在微孔板里培养，待检测时，不需抽提蛋白和裂解细胞，便可直接测量微孔板里蛋白经刺激或抑制作用后的变化。优势：无需裂解细胞，所以目标蛋白损失最少，可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。缺点：不能测定抗原量。

elisa 英[u026a"lau026azu0259] 美[u026a"lau026azu0259] abbr.enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附测定法 [例句]Rapid tests are the speedy alternative to the eia and elisa tests - and they "re just as accurate. 快速检测快速检测是一种相对于eia检测和elisa检测来说更快捷的检测方式,它们准确

EILSA主要是基于抗原或抗体能吸附至固相载体的表面并保持其免疫活性，抗原或抗体与酶形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验步骤及注意事项:1、固相载体选择聚苯乙烯：具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。聚氯乙烯：聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。2、包被①板孔的选择：ELISA级别的微孔板。②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度。③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h。⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。3、封闭①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性抗体）。②选择效果较好的封闭剂（细胞培养级BSA、Tween等）。4、加样及孵育①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件，建议加样孵育时使用shaker震荡仪，推荐轨道直径3mm，转速在500±50rpm。③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。④洗板对于ELISA来说，是极其关键的一步，保证ELISA的特异性。⑤封板膜一定要一次一换，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。5、显色和终止①使用前需检查，底物在加入96孔板之前应为无色透明。②显色底物需现配现用，避免污染。③孵育时间，说明书上为参考范围，具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度最大孔的颜色，变为蓝色较明显时即可。

　　1、ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。 　　2、原理如下： 　　（1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 　　（2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法；酶联免疫吸附测定（ELISA）为免疫学中的经典实验。基本原理为：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。扩展资料结果判断——1、定性测定：定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。2、定量测定：ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。参考资料来源：百度百科-ELISA

人名 译文：艾丽斯

抗原和抗体的结合

1.　ELISA的原理 　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性.在测定时,受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开.再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析.由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度. 操作步骤: 1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条,未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条,密封口袋,放回4℃. 2．空白孔加标准品和标本稀释液,其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔),用封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱孵育90分钟. 3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液. 4．洗板5次. 5．空白孔加生物素化抗体稀释液,其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔).用新封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱孵育60分钟. 6．提前20分钟准备酶结合物工作液.避光室温(22-25 ) ℃ 放置. 7．洗板5次. 8．空白孔加酶结合物稀释液,其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔).用新封板胶纸封住反应孔,36℃孵箱,避光孵育30分钟. 9．打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序. 10．洗板5次. 11．加入显色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分钟. 12．加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测量OD450值(3分钟内).在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果. 13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束. 建议保存酶标板框,以备下次或者今后试验使用.,10,检测原理: 本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上，操作步骤: 1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和,1,1.　ELISA的原理 　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此...,1,

elisa实验原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特点。ELISA可用于测定抗原，也可以测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法。检测方法一、双抗体夹心法该方法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。二、竞争法该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质，当然，这种方法也可以用来检测大分子抗原物质甚至是抗体。检测大分子抗原物质时，由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有双抗体夹心法检测大分子抗原物质灵敏度高。三、间接法测抗体本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。主要用于对病原体的检测而进行传染病的诊断。四、双抗原夹心法测抗体双抗原夹心法与间接法都可以对抗体进行检测。五、捕获法测抗体将抗IgM抗体包被于固相微孔板，用无关蛋白载体对未结合位点进行封闭后，加入待测样本，接着加入抗原物质，然后加入针对该抗原的经生物素标记的特异性抗体和HRP标记的链霉亲和素，经TMB底物显色和终止反应后即可计算浓度。

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ELISA，即酶联免疫吸附实验，其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA可用于测定抗原，也可以测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：1、固相的抗原或抗体；2、酶标记的抗原或抗体；3、酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法。分类：一、双抗体夹心法双抗体夹心法，其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入含有抗原之待测样品，通过加入酶标记特异性抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。该方法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。二、竞争法竞争法一般分为直接竞争法和间接竞争法，这里我们以直接竞争法为例进行原理讲解。直接竞争法，其基本原理是：将合适浓度的包被抗体包被于微孔板中，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，加入标准品（样本）和生物素标记的抗原物质进行竞争结合，经合适的温度和一定时间的孵育，洗涤后，加入HRP标记的链霉亲和素进行反应，TMB显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈负相关。该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质，当然，这种方法也可以用来检测大分子抗原物质甚至是抗体。检测大分子抗原物质时，由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有双抗体夹心法检测大分子抗原物质灵敏度高。三、间接法测抗体间接法一般用来检测抗体。其基本原理是：将一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板，加入无关蛋白载体封闭未结合位点后，加入待测样本，然后加入酶标二抗，经孵育和洗涤后，加底物显色。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。主要用于对病原体的检测而进行传染病的诊断。注意事项1、操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18 C～25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，是否符合要求。2、正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。3、手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孔内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孔间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。4、要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。5、显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。6、试剂的影响因数：应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。过期的试剂不宜再用，若别无选择，应做好双份质控品的监测，确保结果的可靠性。

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。ELISA实验基本方法：将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。