免疫组化染色

1 、载玻片的处理： 抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下： 1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES，置通风橱中晾干即可。用此载玻片捞片时应注意组织要一步到位，并尽量减少气泡的存在，以免影响染色结果。 1.2 HistogripTM：将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的Histogrip液中，停留1~2分钟，然后用双蒸水快速清洗三次，室温干燥或60oC烤箱烘烤一小时，装盒备用。 1.3 Poly-L-Lysine：将洗净、干燥的载玻片放入以1:10比例去离子水稀释的多聚赖氨酸溶液中，浸泡5分钟，60oC烤箱烘烤一小时或室温过夜干燥。装盒备用。试验中使用的器具均为非玻璃制品。 2 、常用酶消化： 2.1 胰蛋白酶：一般使用浓度为0.05%~0.1%，消化时间为37℃、10~40分钟，主要用于细胞内抗原的显示。 2.2 胃蛋白酶：一般使用浓度为0.4%，消化时间为37℃、30~180分钟，主要用于细胞间质抗原的显示，如：Laminin（层粘蛋白），Collagen IV（IV型胶原）等。 2.3 皂素（Saponin）：一般使用浓度为2~10g/ml的saponin溶液，消化时间为室温孵育30分钟。 3 、抗原热修复： 可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如TBS、PBS、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01M枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）效果最好。请选用我公司提供的ZLI-9064 枸橼酸盐缓冲液（粉剂）配制，取该粉剂一包溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，其pH值在6.0 ± 0.1，如因蒸馏水本身造成的pH值偏差，请自行调整。 ……………… 详细资料请参考：on http://www.bio1000.com/experiment/immunology/228697.html满意请采纳

【答案】：A固定可防止细胞脱落，但主要目的是保存组织细胞抗原特异性的稳定。

CKpen阳性，提示为上皮性肿瘤；ki67中等阳性，提示肿瘤细胞增殖较活跃，恶性程度较高，预后较差；

多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理，选用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗抗体，对试剂盒中的荧光染料进行活化，将信号共价结合到抗原上，我们用的是absin品牌有多色荧光免疫组化染色试剂盒

免疫组化结果不能脱离组织学切片单独判断，单独看免疫组化没有什么意义，从图片提供的信息来看，目前诊断结果考虑是成年型粒层细胞瘤（也有人叫成年性颗粒细胞瘤）。成年型粒层细胞瘤是一种低度恶性的性索-间质肿瘤（一般发生在卵巢），分为两种类型：成年型和幼年型。成年型粒层细胞瘤大约占所有卵巢肿瘤的1%。是最常见的性索间质肿瘤。免疫组织化学染色可以帮助诊断该肿瘤，一般该肿瘤FOXL2、α-inhibin和calretinin染色阳性，EMA阴性。其他常用阳性包括CD56、WT1、SF-1、SMA、S100和CD99（膜显色）。ER/PR通常阳性，PR染色比ER强，部分肿瘤也可呈ER/PR阴性。该报告中的诊断结果提示需要进一步明确，可以遵建议处理，肿瘤患者明确诊断很重要。

脱蜡和水化的目的和原理不一样，但都是利用酒精既溶于水又溶于有机溶剂的特性。组织脱水的目的是通过酒精的媒介让有机溶剂渗透入组织，再让石蜡置换有机溶剂，从而使组织包埋在石蜡中。而水化是组织切片经二甲苯脱蜡后，用酒精洗去二甲苯，所以必须从高浓度酒精开始，让后再利用酒精的媒介入水。不知说明白没？

KI-67/MIB-1是细胞增殖相关抗原，以上强阳性的情况，提示肿瘤细胞增殖活跃，恶性程度较高，预后较差。

免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化，在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果，又能看到细胞的形态，CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒，效果很好。 1）做免疫组化的片子最好不要同时做HE染色，因为那样会掩盖阳性着色的结果；而且用苏木素复染细胞核也是淡染，若要在免疫组化的片子上观察形态学的改变，除非有非常典型的表现，一般是有很大的难度的。 2）你是培养的细胞做免疫组化吗？如果是的话，那就每个样本只有一张片子吧？唯一的办法是进行免疫双染，同时做CD34和AFP（甲胎蛋白）。我觉得后者阳性便可以或多或少的获得向肝细胞分化的证据。 3）用HE染色来识别造血干细胞向肝细胞分化，也就是说要看到肝细胞的典型形态学改变后才可以下结论。问题是：早期的肝细胞仅凭形细胞态学观察并不能很容易的被识别。病理大夫看组织切片，重要的是看其组织学结构，对肝细胞也是这样。如果单拿出来一个细胞，还是培养的细胞，染色后真的不容易区分。所以我觉得你设计的用HE染色来确定早期细胞向哪个方向分化不是很有说服力。 4）如果是切片，也就是说每个样本可以有多张切片，那可以在连续切片上分别染CD34和AFP，拍照时选择相同视野，也有一定说服力。但是还是不如双染法更可靠。 5）用双染最大的问题在于：这两者都表达在胞浆中，染色容易相互覆盖。所以在双染的方法选择上你还要再考虑一下，可不可以用免疫荧光双染？这样也很有说服力的

cea+，腺癌。ck20-，鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。ck7+，卵巢、肺和乳腺上皮常阳性。p53+1%，阳性率越高，预后约差。ki-67+8%，阳性率越高，恶性程度越高。cdx-2+，胃肠道腺癌。ck19+，腺癌。应该是低度恶性的腺癌。来源于胃肠道。

免疫组化主要用于预后评估及药物治疗指导意义

正确答案:C解析：抗体的质量是免疫组织化学技术成功的关键，同时也是必备试剂。使用前应了解第一抗体和第二抗体的特异性和敏感性；通过预试验决定抗体的最佳稀释度；在已知阳性和阴性的标本上观察实验结果的符合情况。

这个得看病理诊断是什么？如果是B细胞淋巴瘤，值得关注。如果是炎细胞，这个增殖不值得忧虑。

HER2阴性这是一个啊免疫指标，这种指标如果强阳性的话可以应用一种靶向药物。可以提高化疗的有效率，对肿瘤治疗效果比较好，现在如果乳腺癌免疫组化三个加号。都是推荐应用该要的。也阴性的患者，不见因为。因为收益率非常低

可能引起免疫组化染色失败的原因是：（） A.抗体浓度过高或过低(正确答案) B.使用多克隆抗体 C.抗原没有暴露(正确答案) D.使用稀释后的浓缩抗体 E.洗涤不充分(正确答案)

可做NF、NSE、S－100、Syn。NF：神经细丝（neurofilaments, NF）分布于神经纤维

低度恶性 意思转移慢 容易治疗

20%。根据查询免疫染色通透液配方，500毫升免疫染色通透液含有曲拉通200毫升，为20%。曲拉通成分为聚氧乙烯-8-辛基苯基醚，又称为聚乙二醇对异辛基苯基醚。

CKpen阳性，提示为上皮性肿瘤；ki67中等阳性，提示肿瘤细胞增殖较活跃，恶性程度较高，预后较差；

免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化，在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果，又能看到细胞的形态，CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒，效果很好。 1）做免疫组化的片子最好不要同时做HE染色，因为那样会掩盖阳性着色的结果；而且用苏木素复染细胞核也是淡染，若要在免疫组化的片子上观察形态学的改变，除非有非常典型的表现，一般是有很大的难度的。 2）你是培养的细胞做免疫组化吗？如果是的话，那就每个样本只有一张片子吧？唯一的办法是进行免疫双染，同时做CD34和AFP（甲胎蛋白）。我觉得后者阳性便可以或多或少的获得向肝细胞分化的证据。 3）用HE染色来识别造血干细胞向肝细胞分化，也就是说要看到肝细胞的典型形态学改变后才可以下结论。问题是：早期的肝细胞仅凭形细胞态学观察并不能很容易的被识别。病理大夫看组织切片，重要的是看其组织学结构，对肝细胞也是这样。如果单拿出来一个细胞，还是培养的细胞，染色后真的不容易区分。所以我觉得你设计的用HE染色来确定早期细胞向哪个方向分化不是很有说服力。 4）如果是切片，也就是说每个样本可以有多张切片，那可以在连续切片上分别染CD34和AFP，拍照时选择相同视野，也有一定说服力。但是还是不如双染法更可靠。 5）用双染最大的问题在于：这两者都表达在胞浆中，染色容易相互覆盖。所以在双染的方法选择上你还要再考虑一下，可不可以用免疫荧光双染？这样也很有说服力的

MLH1(+)、MSH2(+)PMS2(+)、MSH6(+)，即微卫星稳定型大肠癌，提示适合于含氟尿嘧啶类药物的化疗方案，并且分化差是高危因素之一。这些检查结果为阳性，可以见于胃癌，结肠癌等疾病，具体需根据伴随症状分析，如果是有胃痛，胃胀，打嗝，反酸，可以见于胃癌，需做个胃镜检查，如果是左下腹部疼痛，腹胀，排便困难，可以见于结肠癌。需去医院就诊，来明确诊断，如果是有胃癌或结肠癌，需尽早使用手术切除治疗，然后使用些化疗药物，中医中药治疗。

I、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。在免疫组化最后结果的判断时，常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象，经多方研究认为，它是一种假性非特异性的染色。因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散，肿瘤细胞无限制的生长和生长过速，导致肿瘤中间部分组织血液供给困难，造成缺血坏死，坏死细胞中的抗原由于机体的作用，可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质，这是抗原发生弥散的一种方式。另一种抗原弥散的方式就是，由于组织没有及时的固定所引起的。离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散，这是一非常普通的常识，但要做好却是极不容易。标本从外科切除到浸入固定液需要经过一段时间，在这段时间里，有的抗原就可以发生扩散。虽然已浸入了固定液，但标本较大，固定液的量又不足，当然由于固定液的渗透需要时间，当渗入到组织之中时，中间的细胞已发生了变化，抗原也随着发生扩散，这种现象在产酶多的器官是比较明显的，如胃癌，当切除后标本较大，虽然在手术室期间已放入了固定液，但固定液要透过肌层达到胃粘膜面起码需要几个小时的时间，当固定液发挥作用时，组织已经发生变化。因此，这了达到免疫组织化学染色的要求，对于离体的组织尽量快的进行固定，有条件的应将其剖开，早取材，早固定。II、组织脱水必须彻底干净组织块取材不能太大过厚，才能较好地完成脱水的过程。如果取材太厚，在较短的时间内脱水不完全，将可引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。由于先天不足，导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败，或者由此反复操作，造成人力物力的浪费，造成病理报告的延期发出等。因此，对取材的要求是除了要求要有艺术性外，即平整、外观好看，还要求适中。III、切片必须完整、均匀、平展、无邹折、应用于免疫组织化学染色的切片，对切片的质量要求较高，切片必须完整，平展、无汽泡，无邹折，这样有利在染色时的冲洗，有利于切片的牢固附贴。如果切片不平展，免疫组化染色后，可出现染色不均匀的现象，颜色深浅不一，　不平。如果切片有汽泡切片在烘烤时，由于汽泡的破裂影响了汽泡周围的组织，在其周围可观察到深浅不一的染色。如果切片有邹折，免疫组化染色后，在邹折的地方有深浅不一的颜色，这是一种假阳性，容易引起混淆。IV、切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂。免疫组织化学染色前的前期准备工作，就是必须对新的载玻片进行处理，新的载玻片表面看起来很干净，有人认为不需要进行任何的处理，都能够适合使用，这是一种错误的想法。新出厂的载玻片，表面复盖着开一层油脂样的物质，如果不加以处理，对切片的附贴是极为不利的。我们的做法是：新的载玻片，放于玻璃清洗液中浸泡4小时甚至过夜，然后取出，经自来水彻底冲洗后，浸入酒精中达2小时以上，取出擦干备用或烘干也可。然后再将载玻片浸入了－氨基－三乙氧基－硅烷（3－Aminopropyl triethoxy-silane）的稀释液（1：50用丙酮或无水乙醇稀释都可以）中硅化10分钟，后经无水乙醇洗2次，烘干即可使用。V、切片必须烘烤附贴牢固，既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片，又不至于破坏抗原。应用于免疫组化染色的切片。由于整个过程需经几个阶段的处理，如抗原修复时抗原修复液的沸腾且需持续十几分钟，PBS的反复冲洗，有的甚至于4℃冰箱中孵育达十几小时。因此，对切片的质量要求很高，尤其是切片的附贴程度。以往有人主张切片在60℃以下烘烤30-60分钟即可按此进行结果是切片掉片严重，切片松动率占100%。切片究竟烘烤多长时间才合适，既不脱片和适合各项要求，又不至于破坏抗原。几组实验[]诊断P173认为，切片在60℃的恒温干燥箱中烘烤2-5小时最为合适。这是因为：抗原可耐受如此的温度，病理科一般使用的石蜡，其熔点在60℃左右，组织浸蜡时，浸蜡箱中的温度，一般都调在65℃左右，组织在这样温度中要浸泡2小时以上，才能达到彻底地浸蜡。组织中的抗原已经受了65℃的温度考验，保存下来的抗原，都已具有耐热性。另外，经上述时间烘烤出来的切片，附贴牢固，抗原保存好，染色成功率达100%，保证了病理诊断的及时性和准确性。特需要注意的是，不管是应用于诊断的切片还是研究用的切片，烘烤后应尽快进行染色。如果切片切完后，迟迟不进行染色，存放于室温中或工作冰箱中，切片中的抗原将会随着时间的延长而逐渐消失，甚至出现假阴性。原则上是新鲜切片，即行染色，染多少张切多少张，这样才能尽可能的保存表达更多的抗原。VI、切片脱蜡必须干净，否则将会影响免疫组化染色的最后结果。蜡不溶于水，不与其它的临床使用的抗体相融合。它只能靠特用的试剂，处理足够的时间，才能将其除去。如果脱蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起许多弊病，如染色不均匀，阳性物时隐时现，真假难辨，背景染色增加等。为了解决上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡，目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，因它脱蜡力强，脱蜡时间较短。较受使用者的青睐。脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜程度采用不同脱蜡时间。如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长。总之，操作时应根据不同的季节，不同的室温，不同的试剂来决定脱蜡的时间，原则上是要彻底，干净，完全地脱去切片上的蜡。为了做到这一步，切片在脱蜡前的加温将有助于完成上述的要求。比如：当天切的切片，烧烤2小时后进行染色，切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程，如果预先切好烤好的切片，在染色前，还必须对切片进行加温10-20分钟，然后再行脱蜡，这样脱蜡速度加快，效果也会更好。VII、必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性，才能降低背景的染色。在各种组织中都含有很多的内源性过氧化物酶，尤其在红细胞，中性粒细胞，单核细胞嗜酸性细胞，出血的组织坏死的组织等等。含有这种酶的各细胞和组织如果在染色前不对其进行处理和抑制，它们将会在DAB底物的显色时，与HRP一样催化底样，使之显色，使之生成与阳性物一样的黄棕色，造成混乱。为止，在免疫组化染色前，都必须对内源性过氧化物酶进行抑制。当然，对它们进行彻底的消除是不行的，因为抑制太厉害，对抗原也会有相同的抑制作用。氢在抑制内源性过氧化物酶时，也要注意对抗原的保护，抑制也只能针对它们中的大部分，在DAB显色后，显示出淡黄色，这就足以与真正阳性物区别。抑制剂常用的是0.3%的H2O2，也可将其称为1%H2O2，因为市售的H2O2的浓度为30%，按其净含量则为0.3%，如果按其溶液的用量则为1%。关于H2O2的使用，有的使用是单纯的H2O2稀释溶，有的使用是H2O2甲醇混合物。根据实验，认为H2O2甲醇较适合于大多数的情况，因为除了H2O2外，甲醇对各种酶，都有钝化的作用，因此H2O2甲醇的双重作用效果较好。陈尚平等认为在多数情况中，用甲醇H2O2已经获得令人满意的结果。VIII、须适当合理地使用封闭试剂为了减少背景产生的非特异性染色，在免疫组化染色的过程中，在加入一抗孵育前，常常加入非免疫动物血清，以减少背景的染色，陈尚季等认为：抗体是高度的电荷分子，可能与带有相应电荷的组织成分无特异性地结合（如胶原）。由于这种非特异性结合，将导致标记的部分局部化（轭合物）和胶原的假阳性染色。要用一种不相干的抗体居先处理，可能减少和标记的抗体无特异性结合。以往，血清的使用有很多，如：小牛血清，马血清，山羊血清，绵羊血清，兔血清，浓度也有很多种，如：1%.2%.或1：5、1：10、和1:20.必须选择合适的抗体以及对作适当的保存和配制。VVI、选择合适的抗体至今为止，应用于临床的常用抗体有几十种，在这当中又可分为两种类型。

主要用于病理诊断，协助判断疾病类型和严重程度。H.E的话主要观察大体病变，一般的组织学病变，而免疫组化可以检测某一种因子或者抗原抗体的表达，进行定位定量

在确诊乳腺癌的检查中，对穿刺活检和手术活检取得的组织，都要做常规病理检查。免疫组化是对取下的人体组织做进一步的处理，进行特殊的染色，这对于明确是不是癌症、是什么类型的乳腺癌有很大的帮助。如果常规病理尚不能确定肿块的性质，则需要进行免疫组化染色，以进一步明确疾病的性质。

免疫组化是利用抗原抗体结合的原理的一种检测方法，常用于病理检查，帮助明确肿瘤的来源，鉴别肿瘤的类型等。

Ki67>20%是什么

希望你的问题更加详细；因为和不同类型的肿瘤细胞也有很大的关系。总体来说：Ki-67(+,<5%) ，表示肿瘤细胞的增生程度不是非常高；Syn(-)，提示不是神经内分泌或者神经元来源的成分；其它的，就要看是什么类型的组织细胞了希望对你有用

免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化，在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果，又能看到细胞的形态，CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒，效果很好。 1）做免疫组化的片子最好不要同时做HE染色，因为那样会掩盖阳性着色的结果；而且用苏木素复染细胞核也是淡染，若要在免疫组化的片子上观察形态学的改变，除非有非常典型的表现，一般是有很大的难度的。 2）你是培养的细胞做免疫组化吗？如果是的话，那就每个样本只有一张片子吧？唯一的办法是进行免疫双染，同时做CD34和AFP（甲胎蛋白）。我觉得后者阳性便可以或多或少的获得向肝细胞分化的证据。 3）用HE染色来识别造血干细胞向肝细胞分化，也就是说要看到肝细胞的典型形态学改变后才可以下结论。问题是：早期的肝细胞仅凭形细胞态学观察并不能很容易的被识别。病理大夫看组织切片，重要的是看其组织学结构，对肝细胞也是这样。如果单拿出来一个细胞，还是培养的细胞，染色后真的不容易区分。所以我觉得你设计的用HE染色来确定早期细胞向哪个方向分化不是很有说服力。 4）如果是切片，也就是说每个样本可以有多张切片，那可以在连续切片上分别染CD34和AFP，拍照时选择相同视野，也有一定说服力。但是还是不如双染法更可靠。 5）用双染最大的问题在于：这两者都表达在胞浆中，染色容易相互覆盖。所以在双染的方法选择上你还要再考虑一下，可不可以用免疫荧光双染？这样也很有说服力的

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和"杂音"染色片（有阳性信号）。 　　一、 无色片 　　染色结束后，切片中见不到任何阳性信号。这是常规工作中比较常见的现象，出现这种现象，有两种可能：1、真阴性结果：整个染色过程没有出现问题，组织或细胞确实不表达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映。假阴性结果又可分为两种情况：（1）、切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。出现这种情况，要麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了，要麽是技术员选错了蜡块。获得正确的切片进行染色是获得正确结果的前提。由此表明：制作出合格的免疫组化切片不仅仅是技术员的事，病理医生也起着不可缺少的作用。（2）、染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如，组织未进行抗原修复，有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达；或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体；或一抗失效，虽然抗体失效在理论上是一个逐渐的过程，但偶尔也遇到突然失效的情况，抗体长期不用和/或已超过有效期是主要的原因。也可见于染色过程中漏掉了某一环节，如忘记加二抗或三抗，或用了两次二抗而缺少了三抗，或配制DAB时少了过氧化氢。为了避免这种简单的错误，有一种简单的方法：在三抗孵育结束时，将切片上的三抗甩在一张白纸上，在将配制好的DAB滴一滴在白纸的三抗上，观察是否出现棕色。如果出现了，证明三抗和DAB的配制过程没有错误。如果这种DAB再滴到切片上没有出现任何阳性信号，问题一定是出在三抗以前。如果纸上不出现棕色反应，问题肯定在三抗DAB或DAB的配制过程。这种简单方法能迅速的帮助我们查找出现问题可能的原因。 　　解决阴性染色的问题非常简单，就是设立"阳性对照".如果阳性对照有了表达，说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。如果此时测试片仍为阴性，便是真实的阴性，说明组织或细胞没有相应的抗原表达。反之，如果阳性对照没有着色，表明染色过程中某个或某些步骤出了问题或试剂出了问题。应一一寻找原因。阳性对照包括两种，一种称为"自身对照"或"内部对照"，这是指在测试的切片中本身就存在已知的抗原，如正常淋巴结中存在T和B细胞抗原，CD20或CD3都应该有表达。自身对照是一种比较理想的对照，对照和测试组织或细胞都在同一张切片中，都处于相同的试验条件下，结果更可靠也更具有可比性。在选择自身对照片时选择既有病变组织同时又有正常组织的部分，这样有利于对比。另一种称为"外部对照"，有时在测试的切片中不存在已知的抗原，如在胃的标本中怀疑是恶性黑色素瘤，需要用HMB45或Mart-1来检测，在正常的胃组织中本身不存在相关的抗原，如果病变出现阳性反应结果，尚能提示是恶黑，但是如果出现阴性结果，就无法确定是本身组织中不含黑色素瘤抗原，还是技术问题。因此，应另外设立一个已知的阳性对照。这种在测试组织之外的阳性对照称为"外部对照".在实际工作中需要设立外部对照的情况很多，如果每一种抗体都要选不同的阳性对照，工作量会很大。为了解决这个问题，目前国内外有单位将多种不同组织集成在一起，制成多组织切片、"腊肠""春卷"切片、组织芯片等，其连续切片储备待用，需要时取出一张便可作为阳性对照。另外，比较简单的方法，是采用阑尾作为阳性对照，因为与人体其它组织器官比较阑尾包含的组织种类较多，如有上皮、淋巴组织、平滑肌、间质、神经、血管、间皮等。一张阑尾切片可以检测大多数常用的抗体。 　　设立阳性对照是病理医生的任务或责任，而不是技术员的责任。病理医生观察了HE切片，了解切片中是否有自身对照，如果没有，就应告诉技术员采用阳性对照。因此，病理医生在免疫组化中的作用是不可忽视的。 　　抗体未覆盖上测试组织：当多块散开的小组织染色时，可能漏掉某块组织染色。 　　二、“杂音”染色片 　　免疫组化除正常的真实的阳性信号外常常会遇到不正常的背景着色，这些非正常的着色称为"杂音"染色。"杂音"染色种类繁多，产生的原因也多种多样，为了便于说明，笔者将其归纳为下面几种。 　　1、 全片着色 　　全片着色是指整个切片全都染上了颜色，着色的强度可深可浅，总之，分不清那些组织是阳性那些组织是阴性。出现这种现象的原因有： 　　（1）、抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。 　　（2）、抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。 　　（3）、DAB变质和显色时间太长：DAB现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。 　　（4）、组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。 　　（5）、切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于24小时）：原因上不清楚，但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在4？C冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。（6）、一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买的抗体时设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

石蜡切片HE染色和免疫组化染色的区别不需要再做HE染色免疫组化就能显示不同颜色的区域石蜡切片保存方法最好是贴到载玻片上37度烘干后放到切片盒里保存

cD3部分(十)：T细胞淋巴瘤阳性。Ki67阳性细胞数10%：数值越高表示肿瘤增殖越快，恶性程度越高。TdT(一)：前B淋巴母细胞淋巴瘤阳性。Mp0(十)：T细胞淋巴瘤阳性。cD30(一)：内细胞皮肿瘤阳性。ALK(一)间变性大细胞淋巴瘤阳性。提示：T细胞淋巴瘤。

cD3部分(十)：T细胞淋巴瘤阳性。Ki67阳性细胞数10%：数值越高表示肿瘤增殖越快，恶性程度越高。TdT(一)：前B淋巴母细胞淋巴瘤阳性。Mp0(十)：T细胞淋巴瘤阳性。cD30(一)：内细胞皮肿瘤阳性。ALK(一)间变性大细胞淋巴瘤阳性。提示：T细胞淋巴瘤。