怎样对野生型e.coli诱变，来筛选e.coli的苯丙氨酸高产菌株？并说明其中的遗传学和酶学原理。

E.coli（大肠杆菌）是一种常见的细菌，属于革兰氏阴性菌。它存在于人和动物的肠道中，有些菌株对人体有益，但也有一些具有致病性。E.coli在环境中易于生存和繁殖，可以通过污染的食物或水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道感染。尽管大多数E.coli菌株对人体无害，但某些菌株产生肠毒素，可引发严重的健康问题，如腹泻、腹痛和发热等。因此，正确处理食品、保持卫生和良好的个人卫生习惯对预防E.coli感染至关重要。

【答案】：当葡萄糖和乳糖同时存在时，乳糖操纵子以低水平进行转录。因为阻遏物与别乳糖(乳糖的一个异构体)形成复合物，别乳糖-阻遏物复合物不能与乳糖操纵子的启动子区城结合，从而使该阻遏物不能阻止转录起始。$缺少乳糖的条件下，将不会有别乳糖生成，乳糖阻遏物与乳糖操纵子启动子区结合，阻止转录。$当乳糖作为唯一的碳源时，该乳糖操纵子以最大的速率转录，在别乳糖存在的条件下，转录也是可能发生的，因为乳糖阻遏物不能结合乳糖操纵子的启动子区城。同样在缺少葡萄糖的条件下，转录速率也增加，因为cAMP产物增加，有更多的CAP-cAMP结合乳糖操纵子的启动子区城，促进转录，使细胞在乳糖作为可利用的唯一碳源时合成大量的酶来维持生长。

由于尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E. coli) OP50是尿嘧啶缺陷性，只能从，涂布于NGM（Nematode Growth Media）中获取尿嘧啶，无法自身合成。所以生长速度会比普通的大肠杆菌慢很多，这样既可以提供线虫食物，又不会过度生长。线虫一般从卵到成虫需要3天时间，而且湿度，氧气，以及各种环境因素会制约线虫的生长。所以需要营养合成缺陷型菌种为其食物

简单的说，就是通过RNA的二级结构对翻译进行调控： 该操纵子位于MRNA的前导序列内，前导序列有4个位点1、2、3、4，他们1和2，2和3，3和4之间都能形成剪辑互补配对的2级结构。而基因的核糖体结合位点位于区域4。（1234按照5`到3` 一次编号）。前导序列1能编码一段前导肽，该位点内有连续的2个色氨酸密码子。 当高浓度色氨酸存在时，色氨酸-TRNA是负载的，可以为该位点提供充足的翻译原料。这时，核糖体可以顺利通过区域1，停留在区域2上，此结构导致区域1和2不能互补配对，而3和4配对，导致4区域的核糖体结合位点被屏蔽，以至于无法翻译基因信息。 而当细胞内色氨酸缺乏时，就没有足够的色氨酸-TRNA渗透进正在1位点翻译的核糖体内，核糖体停留在1位点，暴露2位点，这样2和3就互补配对形成2级结构，从而导致4位点暴露，从而开启核糖体结合位点，使基因得以表达。 嗯，大概就是这样子。。。不妨用纸笔画画图，就明白了。上个图给你看

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端 而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端

必须是mRNA反转录的DNA或类似的DNA基因，必须与大肠杆菌启动子、RBS序列、SD序列、起始密码子正确拼接、应该还有大肠杆菌终止子。最后还要转入大肠杆菌中才可能正确表达。

可以。大肠杆菌也是从一个复制起点开始双向复制，形成θ形

【答案】：尽管两个基因组都由独特序列的DNA组成，E.coli的基因组约大25倍，因而每条变性的E.coliDNA链复性得花费更长的时间来寻找其正确的互补链。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

如图.

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

可能是E.coli C600比较容易筛选吧，含有Rifampicin抗性。。。

大肠杆菌的的色氨酸合成系统操纵子，其从启动基因开始至转录衰减区附近所转录的信使RNA（mRNA），在细胞内色氨酸浓度高过一定程度时，则在该位置终止，但在色氨酸浓度低时，则通过该点进行mRNA的合成。在此操纵子中，最初的结构基因是从mRNA5′末端数第163个碱基开始的，而转录衰减区存在于稍前方，即约在第130个碱基附近。在此区域的前面，有产生由14个氨基酸所成的小肽的信息，其中有2个为色氨酸的遗传信号。所以当色氨酸缺乏时，此肽的合成在该位置迟滞以至完全停止，而妨碍参与肽合成核糖体向衰减区接近。反之当色氨酸浓度高时，则核糖体接近该区域，随之在mRNA上的衰减区（有回文结构）形成与转录终止相适应的二级结构，转录停止。在其它操纵子上也有同样的小肽的信息，例如组氨酸操纵子在16个氨基酸中有7个为组氨酸的遗传信号，而苯丙氨酸操纵子在15个中有7个为苯丙氨酸的遗传信号。这样氨基酸合成系统的操纵子，利用翻译机制来监测其操纵子所合成的氨基酸的浓度，即具有根据这浓度而确定mRNA是否继续合成的机制。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

?这两个一培养不就看出来了么，菌落不一样。革兰氏染色，大肠杆菌红色，金黄葡萄球菌紫色看看形态也不一样的，大肠杆菌，金黄葡萄球菌

培养什么菌的？ 一般比如大肠杆菌有M9培养基，酵母有合成培养基

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。

蛋白质的合成过程在蛋白质合成过程中，mRNA从5′→3′阅读，而肽链从N-端向C-端合成。（一）氨基酸的活化氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，活化成氨酰-tRNA(氨基酸以高能酯键与tRNA的3′-末端腺苷酸的2′或3′的羟基相连的)。AA + tRNA + ATP---AA～tRNA + AMP + PPi氨酰-tRNA合成酶有氨基酸和tRNA两种底物的专一性结合位点。每一种tRNA只专一携带一种氨基酸，而一种氨基酸可分别被几种tRNA专一携带(因为有密码子简并现象)。氨基酸一旦与tRNA结合成AA- tRNA，进一步的去向就由tRNA来决定。tRNA凭借自身的反密码子与mRNA上的密码子相识别，而把所携带的氨基酸定位在肽链的一定位置上。 各种氨酰-tRNA都具备后，就可以进行蛋白质的合成 （二）多肽链的起始合成参与起始的成分：IF1，IF2，IF3，核糖体的小、大亚基，mRNA，fMet-tRNAf，GTP。起始过程：1、IF1，IF3，30S小亚基，mRNA结合并定位；2、GTP，IF2，fMet-tRNAf加入，形成30S起始复合物；3、IF1，IF2，IF3，GDP，Pi释放，50S大亚基加入，形成70S起始复合物。 至此，起始过程完成，fMet-tRNA位于核糖体上的P位点（给位，即肽酰-tRNA结合位点），而A位点（受位，即氨酰-tRNA结合位点）空着，用于接受下一个AA-tRNA。（三）肽链的延伸此阶段包括氨酰tRNA进入核糖体A位点（进入）、肽键的形成（转肽）和核糖体在mRNA上移位（移位）三个步骤。这三步每重复一次，肽链上就增加一个氨基酸，直到mRNA上的终止密码出现在核糖体的A位时为止。1、进入开始延伸过程时，fMet-tRNAf位于核糖体上的P位点，而一个能与AUG后的密码子互补AA-tRNA进入A位点。具体过程：1、AA-tRNA与EF-Tu-GTP结合生成复合物Tu-GTP-AA-tRNA；2、复合物进入A位，GTP水解，EF-Tu-GDP从核糖体上释放， AA-tRNA留在A位；3、在EF-Ts帮助下，EF-Tu-GDP重新形成EF-Tu-GTP，以便于下一轮反应。2、转肽AA-tRNA的游离氨基与fMet的羧基形成肽键，此过程在肽酰转移酶催化下进行。反应后fMet转移到A位点，形成fMet-AA-tRNA，而P位点留下一空载的tRNAf3、移位在延伸因子EF-G（又称移位酶）帮助下，核糖体在mRNA上移动一个密码子的距离，结果使A位点的fMet-AA-tRNA移到P位，P位的tRNAf移出了核糖体，而A位点空出，以便于接受下一分子AA-tRNA。这样，一轮反应结束，肽链延长了一个氨基酸单位。紧接着进行下一轮延伸，直至肽链合成终止。（四）肽链合成的终止和释放肽链的合成过程同时也是核糖体沿mRNA 5′→3′方向移动，并翻译mRNA上密码子的过程。当核糖体移到终止密码子时，没有对应终止密码的氨酰-tRNA可以进入A位，终止因子进入A位，肽链合成停止。有三种终止因子(RF1、RF2、 RF3)参与终止步骤：RF1：识别终止密码UAA、UAG ；RF2：识别UAA、UGA；RF3：促进RF1、RF2的识别 。、RF2结合到核糖体后，使肽酰转移酶构象转变，表现出水解酶活力，催化肽酰基与tRNA的酯键水解，合成的肽链便从核糖体上释放下来。空载的tRNA接着从核糖体上脱落，核糖体便解离成50S和30S两个亚基离开mRNA，一条多肽链的合成便告结束。四、肽链合成后的加工肽链合成后多数还要经过加工处理，才能变为有生物活性的蛋白质分子，这个过程称为翻译后加工作用，内容包括：1、剪切由氨肽酶将N-端fMet（Met）以及多余氨基酸的切除。2、剪接将蛋白质分子内多余的片段切除3、氨基酸的修饰修饰方式多种多样，如：磷酸化、羟基化、糖基化、甲基化、乙酰化等等。4、二硫键的形成在专一性的氧化酶催化下，特定的Cys-SH之间连接形成二硫键。5、与辅基或辅酶结合对于结合蛋白质，与辅基或辅酶结合后才表现出活性。6、形成特定的构象，亚基间的聚合 我现在正在学生物化学，这个是生物化学上的蛋白质的合成步骤。比较专业化，希望能对你有所帮助。

E.coli Electro-Cells E.coli Electro-Cell JM109 制品名 TaKaRa Code 包装量 价格(人民币元) E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300 ■ GenotypeE.coli JM109recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F"[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15]■ 细胞浓度1～2×1010 Bacteria/ml ■ 保存-80℃■制品说明用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。TaKaRa使用独自开发的菌体培养法，制作出了效果极佳的E.coli Electro-Cell JM109。 ■细胞种类α-互补性选择宿主E.coli JM109E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时, 由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109 F"编码的lacZΔM15的结合，显示β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)。利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F"质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，调制单链DNA。■质量标准 使用10 pg的质粒DNA进行转化时：50 μl E.coli JM109 Electro-Cell/10 pg pUC19 plasmid转化时产生的菌落数>1×109 transformants/1 μg pUC19 plasmid F"质粒的稳定性检测对E.coli JM109使用pUC19 DNA进行电穿孔法转化后，在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG, 40 μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。 50 μl的E.coli JM109 Electro-Cell在含有100 μg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产生菌落。 --------------------------------BL21（DE3）pLysS细菌菌株 BL21（DE3）pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。BL21（DE3）pLysS对λDE3（1）是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I，编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21（DE3）pLysS含有pLysS质粒，他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。包装： P9811 500μlhttp://www.promega.com/tbs/tb095/tb095.pdf

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

大肠杆菌乳糖操作子。

肠杆菌科细菌

DNA解旋酶，DNA聚合酶

DNA连接酶的种类有很多，用的较多的是E·coliDNA连接酶和T4DNA 连接酶。从大肠杆菌中获得的DNA连接酶只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳，T4DNA连接酶具有较好的平末端双链连接的作用。 E·coliDNA连接酶所有从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶的称。酶的命名是有规律的。所以不能笼统的根据来源叫。

还有抗性筛选位点，比如氨苄Amp、卡那霉素Kana等等……

缝编无纺布

AJ1LA配色为奢华黑金；AJ1黑金脚趾配色为黑白金；AJ1黑红脚趾配色为黑红白；AJ1小闪电配色为蓝白黑；、AJ1阴阳配色为红白黑；AJ1渣渣灰配色为灰黑；OFF-WHITExAirJordan1配色为纯白和北卡蓝；AJ1伦纳德配色为银白黑；AJ1麂皮黑脚趾配色为墨绿、深蓝、亮黄和淡红色加黑白；AJ1大巴黎联名配色为黑等。AJ1LA配色为奢华黑金;AJ1黑金脚趾配色为黑白金;AJ1黑红脚趾配色为黑红白;AJ1小闪电配色为蓝白黑;、AJ1阴阳配色为红白黑;AJ1渣渣灰配色为灰黑;OFF-WHITExAirJordan1配色为纯白和北卡蓝;AJ1伦纳德配色为银白黑;AJ1麂皮黑脚趾配色为墨绿、深蓝、亮黄和淡红色加黑白;AJ1大巴黎联名配色为黑等。aj1所有配色加名称1、AJ1LA在2018年率先迎来登场的是以NBA全明星赛为主题的AirJordan1“LA”，采用奢华黑金色调打造，经典的OG9孔鞋型是许多资深鞋头的最爱。在鞋垫处印有洛杉矶的地图，暗示2018年NBA全明星赛举办地洛杉矶，大面积荔枝皮材质也极具质感。2、AJ1黑金脚趾作为黑人月主题登场，简约但不简单的黑白金三色调相互搭，极具奢华。鞋面漆皮材质的注入大大提升了鞋款整体的豪华质感，鞋身内外两侧还以两种不同装扮的姿态呈现黑白视觉反差。3、AJ1黑红脚趾这款无需多言，发售之日将“黑红脚趾”和“AJ1”两个关键词直接推上了微博热搜。这款黑红脚趾AirJordan1“BredToe”的人气只涨不跌，发售即售罄，如今也是一鞋难求。4、AJ1小闪电2014年发布的闪电联名FragmentxAirJordan1一直以来都是许多资深鞋头心目中的神鞋。这款AirJordan1“GameRoyal”酷似闪电联名，被称为“小闪电”，也是非常热门的鞋款。5、AJ1阴阳这双采用阴阳设计的AirJordan1“HomageToHome”既有黑红的经典又有芝加哥公牛队的配色，对半拼接的鸳鸯设计带来独特的视觉体验。其中，限量2300双的编号版本更是凭借稀少的货量加入了“天价鞋款”行列，一样有许多鞋头趋之若鹜。6、AJ1渣渣灰一度破产的AirJordan1“Shadow”又因“渣渣灰”的爱称一夜回暖，使用有别于荔枝皮质感的柔软光滑皮革材质打造鞋身，百搭耐脏。这款中性沉稳的配色成为了很多女生的挚爱，许多女生都非常喜欢这款配色，非常的好搭配，适用于各种环境。7、OFF-WHITExAirJordan1AJ1许多配色本身价格就已经不菲，加上ow联名，每双都是天价鞋款，并且在潮流圈刮起了一阵解构风。OFF-WHITExAirJordan1鞋款在经典的芝加哥配色拿下年度最佳鞋款的荣誉之后，又接连迎来了纯白配色和北卡蓝两款配色。9、AJ1伦纳德马刺队经典主色的AirJordan1“PassTheTorch”致敬科怀-伦纳德在总决赛中的爆发并拿下总决赛MVP的表现。鞋身的细节设计也处处彰显着鞋款主题。鞋舌处点缀伦纳德标志性手掌logo，鞋垫TheFinal字样与鞋带扣上的2014数字让人梦回马刺勇夺总冠军之年!这款也是发售即起飞。10、AJ1麂皮黑脚趾JordanBrand便打造了包括4双AirJordan1鞋款在内的名为“BestHandintheGame”系列。四款麂皮加持的黑脚趾AirJordan1鞋款分别以墨绿、深蓝、亮黄和淡红色承载乔丹职业生涯中的诸多高光时刻及荣誉。其中深蓝配色的AirJordan1“All-StarAppearances”就是大家口中的“贪玩蓝月”了!11、AJ1大巴黎联名JordanBrand跨界合作法甲豪门巴黎圣日耳曼带来的AirJordan1“PSG”，算得上是AJ系列的一个意外。这款PSG联名规格不低，但应该是在重磅云集的鞋款中被淹没了，也是为数不多现在依然能以原价入手的正代AJ1。12、AJ1黑紫脚趾、黑绿脚趾黑脚趾作为AirJordan1代鞋型中的非常受欢迎的人气配色，又推出了黑紫脚趾AirJordan1“CourtPurple”和黑绿脚趾AirJordan1“PineGreen”。发售即起飞，上架即售罄，“全员恶人”的绰号也非常有话题性，现在想入手也得花一点功夫了。13、NigelSylvesterxAirJordan1做旧风系列的AJ代表，虽比不上其他联名款式起飞的那么高，但也是一款极具人气的配色。在运动中对AirJordan1的损耗作为灵感而采用了做旧处理，极具韵味和创意。14、AJ1最佳新秀以MichaelJordan在领取最佳新秀奖时所穿的棕色衬衫作为鞋款配色的灵感来源，以致敬在1985年获得最佳新秀奖的MichaelJordan。这款AJ1最佳新秀也是最近发售的重磅AJ1，相比较而言比较容易入手的一款重磅，货量比较大，小麦色麂皮材质也是非常适合秋冬季节。15、AJ1体坛画报同样以MichaelJordan的荣光时刻作为鞋款配色的灵感来源，新秀赛季便登上著名杂志《SportsIllustrated》(体育画报)的封面。这款AirJordan1“SportsIllustrated”相对而言人气并不高，配色不太讨国人喜欢。16、UnionxAJ1年度最重磅AJ1之一。纽约知名潮流店铺UnionLA联手JordanBrand打造两双堪称史诗级的联名。选取黑红、黑脚趾、风暴蓝以及灰白四款元年配色，通过将两双不同配色缝合后，诠释出旧鞋经由修补重生的概念，同时致敬四款元年配色。这款重磅球鞋以夸张的车线透露出复古的气息，如今也是起飞，一鞋难得。17、AJ1禁止转卖这款相比不用过多介绍，年度最重磅最具话题性AJ1，应该也没有之一了。鞋款上加入诸如于“WEAR”“ME”(请穿我)、“PLEASE”“CREASE”(请折这里)、“NO”“PHOTOS”(没有照片)、“NOTFORRESALE”(不是用来炒卖的)、“SORRY，THISPAIRISNOTNUMBERED(对不起，这双鞋不是编号版本)”和“GENERALRELEASE(常规发售)”等主题印花，但是小编丝毫有感受到禁止转卖的气息。转卖价格飞起，完全是鼓励转卖嘛，也被许多朋友调侃为“禁止低价转卖”。以上是关于aj1所有配色加名称的内容，消费者可以根据自己的审美风格和喜好，参考上述关于aj1所有配色加名称的内容，考虑是否选择并尝试aj1的鞋子。倘若不知道自己适不适合，可以前往实体店体验一番。

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love。Mi是我的意思，L简写了，是love的意思。lover，名词，意思是情人（不准备结婚但保持超越友谊关系的人）；情侣；亲爱的人（对情人的称呼）。（美俚）拉皮条的人，为妓女拉客的人；好者。love是它的动词，表示热爱；lovely是形容词，表示可爱的，迷人的。

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　　无纺布没有经纬线，剪裁和缝纫都非常方便，而且质轻容易定型。非织造布突破了传统的纺织原理，并具有工艺流程短、生产速率快，产量高、成本低、用途广、原料来源多等特点。

表示时间时，in表示在一段时间里，on则表示在具体的某一天或者某天的上下午表示地点时，in表示在某个范围内，on则表示在某个平面上或与某个平面相接触

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数据更新不及时。经查阅图书网，小红书ark的缺点是后台数据更新不及时。ARK是小红书后台的商家运营系统。ARK基本信息设置里面包括：店铺名，贸易模式等。

popular：英[u02c8pu0252pju0259lu0259(r)]美[u02c8pɑu02d0pju0259lu0259r]，形容词，作形容词时意为“流行的，通俗的；受欢迎的；大众的；普及的”。做名词，时常意为 大众音乐会 (＝popular concert)。-ly，一般地，普通地；通俗地；通过民众地。短语搭配：快货popular goods快货Popular element流行元素 ; 盛行元素 ; 风行元素popular literature大众文学 ; 通俗文学popular songs通俗歌曲 ; 流行歌曲 ; 流行曲 ; 唱片名双语例句：To this day it remains one of the most popular in use.直到今天它在使用中保持最受欢迎的之一。Maybe, they like to be with you because you are popular.If we can do all of the above, I"m sure that all of us can be popular.如果我们能做到所有上述情况，我真的相信，我们所有人都可以流行。

郭月，嘉莱国际的董事长

统称：Minions[2]眼睛：单只或双只 小黄人(11张)头发：刺头、塌塌的小中分、冲天一小撮、光头等身型：黄色胶囊状身高：94--120cm，105cm为标准型性格：吵闹、易满足、爱享受、听主人话、乐于助人属性：呆蠢、贱萌的技术宅喜欢：大笑、玩耍讨厌：被嘲笑语言：中文、法语、英语、日语、西班牙语和意大利语等混杂语喜爱食物：冰激凌、水果尤其热爱香蕉(因为他们就是香蕉做的)代表人物Dave 戴夫　　眼睛：双　　头发：塌塌的小中分　　身材：标准　　身高：105cm（标准）　　喜欢：火箭和导弹　　讨厌：等待 Dave戴夫Stuart 斯图尔特　　眼睛：单　　头发：塌塌的小中分　　身材：标准　　身高：94cm（最矮）　　喜欢：玩耍和大笑讨厌：被其他小黄人欺负Stuart斯图尔特Tim 蒂姆　　眼睛：双　　头发：冲天的一小撮　　身材：苗条　　身高：120cm（最高）　　喜欢：装老大　　讨厌：被嘲笑，输了Tim蒂姆Mark马克　　眼睛：双　　头发：塌塌的小中分　　身材：标准　　身高：105cm（标准）　　喜欢：唱歌　　注意：长得像Dave Mark马克Phil菲尔　　眼睛：单　　头发：塌塌的小中分　　身材：标准　　身高：95cm　　喜欢：被艾格尼丝亲亲　　注意：长得像Stuart Phil菲尔Jerry 杰瑞　　第一部　　眼睛：双　　头发：小刺头　　身材：标准　　身高：105cm（标准）　　喜欢：Stuart一起玩耍　　注意：区分第二部的Jerry　　第二部　　眼睛：双　　头发：直立向上　　身材：肥胖　　身高：96cm　　喜欢：和Kevin一起玩耍Jerry杰瑞Jorge乔治　　眼睛：双　　头发：直立向上　　身材：肥胖　　身高：96cm　　喜欢：冲印自己的屁屁照 笑 Jorge乔治Kevin凯文　　第一部　　眼睛：单　　头发：小刺头、塌塌的小中分　　身材：标准　　身高：105cm，6cm（被格鲁用缩小枪缩小过）　　喜欢：格鲁（第一位被格鲁叫名字的小黄人）　　注意：确实在开始的小刺头和缩小的中分头时都被称呼Kevin（形象前后发型有区别 可能是片子出现的bug）　　第二部　　眼睛：双　　头发：一小撮冲天毛发　　身材：苗条　　身高：120cm(最高小黄人) Kevin凯文Jon乔恩 & Bob鲍勃　　眼睛：单　　头发：Jon为中分；Bob刺头　　身材：标准 Jon乔恩 &ampCarl (神偷奶爸2）眼睛：单头发：小刺头身材：标准性格：调皮（在危急时刻拿喇叭大喊）喜欢：起哄服装：头上、左、右戴着红色消防灯，手里拿着喇叭

PajamasSoft公司出品的人气Galgame《PRISM ARK》所改编的同名TV动画于10月7日24时30分开始放送。因凭借游戏容量“大”，妹妹胸口“大”而获得2006年度的GALGAME大赏的《PRISM ARK》此番改编最让人在意的就是，片中面的LOLI们经由动画监督大张正己之手后胸部集体缩水，从原来的“大片”变为了贫乳后宫片。FRONTLINE动画公司担任了《PRISM ARK》的动画制作工作。故事的系列构成担当为ほそのゆうじ，登场人物设定由江端里沙负责，TVA的OP是由榊原ゆい演唱的《于是我……》（そして仆は...）；ED曲为momo-i演唱的《opera fantasia》（オペラファンタジア）。《PRISM ARK》讲述了被称为“苍月的惨剧”之后的故事。风之国的国王和王妃以及他们的刚出生的小王女一同前往盟国接受洗礼仪式。途中他们却遭到了敌国军队的袭击，从此行踪不明。为此，王国集结了十字军以圣战的名义征战帝国讨回公道。而帝国却唤醒了迷之生体兵器——天使。在强大的天使面前十字军气势全无节节败退，疆土损失近一半。此后十余年，王国人民的生活渐渐恢复至小康状态，同时对战争的危机意识和国仇家恨也渐渐淡忘。代替行踪不明的国王而代理国政的摄政王，亲自出资开始在各地设立骑士养成学校，培养能守卫国家的精锐部队。而故事就是从以成为骑士为目标的主角进入骑士学院开始……　镜头切到罗森博格骑士养成学校。女主角普莉希娅是个才色兼备、使剑所向无敌的超级天才美少女。某日，普莉希娅却败在了一位迷之天然系男生哈亚维的手上。接着“状况女”、“恋兄女”、“口癖女”、“国之巫女”三差生等各种各样的角色接连登场。罗森博格校园开始了前所未有的学园大骚动……

S表示spunbond，M表示Meltblown，SM中文翻译成熔喷无纺布。SM无纺布属于复合无纺布，是纺粘和熔喷的复合产品，具有强力高、过滤性能好、不含粘合剂、无毒等优点，主要用于医疗卫生劳动防护产品如手术服，手术帽，防护服，洗手衣，手袋等。（不知道对不对，做个参考）

应该是in house in house :自身的；（机构）内部的；家里 例句： I work in house. 我在公司里上班。 We live in the house just past the church. 我们就住在挨着教堂那边的房子里。 Mornings in our house always follow a set pattern. 在我们家，每天上午的生活总是遵循一种固定的模式。

叫ark反应堆,就是一个金属钯反应堆,是利用金属钯的内部晶格空间的大小来挤压两个氢原子聚合产生能量,(这个叫低温聚变)至于怎么产生电能~~有人说是温差发电。。。感觉有点不太可能。钯的特性是可以溶解很多的氢,氢是聚变反应的原料。

可能是因为浙政钉中的短信功能只能用于单位内部通讯，不能向其他单位发送短信。因此，如果想要向其他单位发送短信，可能需要使用其他通讯方式，比如短信、邮件、电话等。同时，可以考虑使用其他功能来进行跨单位的信息沟通和协作，比如会议、任务分配等功能。这些功能都可以在浙政钉上进行操作，方便单位之间的信息共享和协作。

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The dog is in the house. 或Is the dog in the house?

歌名：Universal Fanfare歌手：The Minions所属专辑：Minions (Original Motion Picture Soundtrack)乐曲内容及翻译：额那个啥....BaBaBaBaBaBaBaBaBa巴巴爸爸吧叭叭叭把把BaBa拔拔BaBaBaBaBaBaBaBaBa霸霸把把把八八爸爸BaBaBaBaBaBaBaBaBa罢罢罢罢罢粑粑爸爸BaBaBaBa么么哒哒Ba叭uh......（额那个啥...）(down)(喘不过来啦~~~)Eh.....呱嗒..扩展资料：《Universal Fanfare》是环球影业公司为《小黄人大眼萌》电影上映时特意制作的“小黄人版”制作公司片头的配乐，以大家熟知的“环球影业公司”序曲为基础，加上了小黄人的萌唱，让人听了忍俊不禁。2015年9月13日，《小黄人大眼萌》在中国大陆进行公映，尽管该片在中国内地的上映时间已经比北美晚了两个月（北美7月10日上映），但却在发行首周的第一天就取得1.23亿票房，成为中国影史上第一部首日票房过亿的动画电影。该片的全球票房超过10亿美元，是世界票房收益第二高的动画电影。《小黄人》围绕小黄人们的“前格鲁时代”展开叙述，并特别追溯了小黄人的起源。小黄人总是忠诚地为主人提供各种服务，兢兢业业，毫无怨言，直到它们失手“害死”每一任主人。在痛苦地失去一个又一个主人后，被困在冰洞之内小黄人们愈发焦躁不安，他们决定挺身而出，去到花花世界，再次寻找可以效劳的主人。时值上世纪60年代，小黄人三人组无意间看到了“坏蛋大会”广告，该大会声称世界第一女坏蛋斯嘉丽·杀人狂会出席大会并发表演讲。于是，三个小黄人搭上了银行抢劫犯的顺风车。在经历了一系列的坎坷之后，小黄人终于成为斯嘉丽的助手。它们为斯嘉丽执行的第一个任务就是盗取英国伊丽莎白女王的皇冠，任务进展的十分顺利，顺利到呆萌的鲍勃竟然莫名其妙的成为新任国王，于是一系列的麻烦接踵而至。

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