大肠杆菌E.coli JM109与BL21(DE3)各有什么特点？在分子生物学里面的主要用途是什么？

E.coli（大肠杆菌）是一种常见的细菌，属于革兰氏阴性菌。它存在于人和动物的肠道中，有些菌株对人体有益，但也有一些具有致病性。E.coli在环境中易于生存和繁殖，可以通过污染的食物或水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道感染。尽管大多数E.coli菌株对人体无害，但某些菌株产生肠毒素，可引发严重的健康问题，如腹泻、腹痛和发热等。因此，正确处理食品、保持卫生和良好的个人卫生习惯对预防E.coli感染至关重要。

【答案】：当葡萄糖和乳糖同时存在时，乳糖操纵子以低水平进行转录。因为阻遏物与别乳糖(乳糖的一个异构体)形成复合物，别乳糖-阻遏物复合物不能与乳糖操纵子的启动子区城结合，从而使该阻遏物不能阻止转录起始。$缺少乳糖的条件下，将不会有别乳糖生成，乳糖阻遏物与乳糖操纵子启动子区结合，阻止转录。$当乳糖作为唯一的碳源时，该乳糖操纵子以最大的速率转录，在别乳糖存在的条件下，转录也是可能发生的，因为乳糖阻遏物不能结合乳糖操纵子的启动子区城。同样在缺少葡萄糖的条件下，转录速率也增加，因为cAMP产物增加，有更多的CAP-cAMP结合乳糖操纵子的启动子区城，促进转录，使细胞在乳糖作为可利用的唯一碳源时合成大量的酶来维持生长。

由于尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E. coli) OP50是尿嘧啶缺陷性，只能从，涂布于NGM（Nematode Growth Media）中获取尿嘧啶，无法自身合成。所以生长速度会比普通的大肠杆菌慢很多，这样既可以提供线虫食物，又不会过度生长。线虫一般从卵到成虫需要3天时间，而且湿度，氧气，以及各种环境因素会制约线虫的生长。所以需要营养合成缺陷型菌种为其食物

简单的说，就是通过RNA的二级结构对翻译进行调控： 该操纵子位于MRNA的前导序列内，前导序列有4个位点1、2、3、4，他们1和2，2和3，3和4之间都能形成剪辑互补配对的2级结构。而基因的核糖体结合位点位于区域4。（1234按照5`到3` 一次编号）。前导序列1能编码一段前导肽，该位点内有连续的2个色氨酸密码子。 当高浓度色氨酸存在时，色氨酸-TRNA是负载的，可以为该位点提供充足的翻译原料。这时，核糖体可以顺利通过区域1，停留在区域2上，此结构导致区域1和2不能互补配对，而3和4配对，导致4区域的核糖体结合位点被屏蔽，以至于无法翻译基因信息。 而当细胞内色氨酸缺乏时，就没有足够的色氨酸-TRNA渗透进正在1位点翻译的核糖体内，核糖体停留在1位点，暴露2位点，这样2和3就互补配对形成2级结构，从而导致4位点暴露，从而开启核糖体结合位点，使基因得以表达。 嗯，大概就是这样子。。。不妨用纸笔画画图，就明白了。上个图给你看

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端 而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端

必须是mRNA反转录的DNA或类似的DNA基因，必须与大肠杆菌启动子、RBS序列、SD序列、起始密码子正确拼接、应该还有大肠杆菌终止子。最后还要转入大肠杆菌中才可能正确表达。

筛选工业高产菌株一般从以下几个方面入手：1.筛选营养缺陷型菌株原理是解除了代谢途径中的协同反馈，这里选择酪氨酸营养缺陷型菌株，使得代谢支路受到阻遏，只要在培养基中加入少量酪氨酸，苯丙氨酸就可大量合成。2.筛选抗结构类似物突变株原理是解除阻遏或抗反馈抑制，对氟苯丙氨酸是苯丙氨酸的结构类似物,因此,对氟苯丙氨酸抗性菌株所产生的苯丙氨酸也不能与阻遏蛋白或变构酶结合,这样必然会在有苯丙氨酸存在的情况下,细胞仍然不断的合成苯丙氨酸,使其得到过量积累,这就是抗阻遏或抗反馈突变株。3.筛选温度敏感型突变株比如e.coli最适温度是37,突变后由于某酶结构改变，使得在37度下失活，等同于37度下的营养缺陷型，原理同第一条。

可以。大肠杆菌也是从一个复制起点开始双向复制，形成θ形

【答案】：尽管两个基因组都由独特序列的DNA组成，E.coli的基因组约大25倍，因而每条变性的E.coliDNA链复性得花费更长的时间来寻找其正确的互补链。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

如图.

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

可能是E.coli C600比较容易筛选吧，含有Rifampicin抗性。。。

大肠杆菌的的色氨酸合成系统操纵子，其从启动基因开始至转录衰减区附近所转录的信使RNA（mRNA），在细胞内色氨酸浓度高过一定程度时，则在该位置终止，但在色氨酸浓度低时，则通过该点进行mRNA的合成。在此操纵子中，最初的结构基因是从mRNA5′末端数第163个碱基开始的，而转录衰减区存在于稍前方，即约在第130个碱基附近。在此区域的前面，有产生由14个氨基酸所成的小肽的信息，其中有2个为色氨酸的遗传信号。所以当色氨酸缺乏时，此肽的合成在该位置迟滞以至完全停止，而妨碍参与肽合成核糖体向衰减区接近。反之当色氨酸浓度高时，则核糖体接近该区域，随之在mRNA上的衰减区（有回文结构）形成与转录终止相适应的二级结构，转录停止。在其它操纵子上也有同样的小肽的信息，例如组氨酸操纵子在16个氨基酸中有7个为组氨酸的遗传信号，而苯丙氨酸操纵子在15个中有7个为苯丙氨酸的遗传信号。这样氨基酸合成系统的操纵子，利用翻译机制来监测其操纵子所合成的氨基酸的浓度，即具有根据这浓度而确定mRNA是否继续合成的机制。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

?这两个一培养不就看出来了么，菌落不一样。革兰氏染色，大肠杆菌红色，金黄葡萄球菌紫色看看形态也不一样的，大肠杆菌，金黄葡萄球菌

培养什么菌的？ 一般比如大肠杆菌有M9培养基，酵母有合成培养基

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。

蛋白质的合成过程在蛋白质合成过程中，mRNA从5′→3′阅读，而肽链从N-端向C-端合成。（一）氨基酸的活化氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，活化成氨酰-tRNA(氨基酸以高能酯键与tRNA的3′-末端腺苷酸的2′或3′的羟基相连的)。AA + tRNA + ATP---AA～tRNA + AMP + PPi氨酰-tRNA合成酶有氨基酸和tRNA两种底物的专一性结合位点。每一种tRNA只专一携带一种氨基酸，而一种氨基酸可分别被几种tRNA专一携带(因为有密码子简并现象)。氨基酸一旦与tRNA结合成AA- tRNA，进一步的去向就由tRNA来决定。tRNA凭借自身的反密码子与mRNA上的密码子相识别，而把所携带的氨基酸定位在肽链的一定位置上。 各种氨酰-tRNA都具备后，就可以进行蛋白质的合成 （二）多肽链的起始合成参与起始的成分：IF1，IF2，IF3，核糖体的小、大亚基，mRNA，fMet-tRNAf，GTP。起始过程：1、IF1，IF3，30S小亚基，mRNA结合并定位；2、GTP，IF2，fMet-tRNAf加入，形成30S起始复合物；3、IF1，IF2，IF3，GDP，Pi释放，50S大亚基加入，形成70S起始复合物。 至此，起始过程完成，fMet-tRNA位于核糖体上的P位点（给位，即肽酰-tRNA结合位点），而A位点（受位，即氨酰-tRNA结合位点）空着，用于接受下一个AA-tRNA。（三）肽链的延伸此阶段包括氨酰tRNA进入核糖体A位点（进入）、肽键的形成（转肽）和核糖体在mRNA上移位（移位）三个步骤。这三步每重复一次，肽链上就增加一个氨基酸，直到mRNA上的终止密码出现在核糖体的A位时为止。1、进入开始延伸过程时，fMet-tRNAf位于核糖体上的P位点，而一个能与AUG后的密码子互补AA-tRNA进入A位点。具体过程：1、AA-tRNA与EF-Tu-GTP结合生成复合物Tu-GTP-AA-tRNA；2、复合物进入A位，GTP水解，EF-Tu-GDP从核糖体上释放， AA-tRNA留在A位；3、在EF-Ts帮助下，EF-Tu-GDP重新形成EF-Tu-GTP，以便于下一轮反应。2、转肽AA-tRNA的游离氨基与fMet的羧基形成肽键，此过程在肽酰转移酶催化下进行。反应后fMet转移到A位点，形成fMet-AA-tRNA，而P位点留下一空载的tRNAf3、移位在延伸因子EF-G（又称移位酶）帮助下，核糖体在mRNA上移动一个密码子的距离，结果使A位点的fMet-AA-tRNA移到P位，P位的tRNAf移出了核糖体，而A位点空出，以便于接受下一分子AA-tRNA。这样，一轮反应结束，肽链延长了一个氨基酸单位。紧接着进行下一轮延伸，直至肽链合成终止。（四）肽链合成的终止和释放肽链的合成过程同时也是核糖体沿mRNA 5′→3′方向移动，并翻译mRNA上密码子的过程。当核糖体移到终止密码子时，没有对应终止密码的氨酰-tRNA可以进入A位，终止因子进入A位，肽链合成停止。有三种终止因子(RF1、RF2、 RF3)参与终止步骤：RF1：识别终止密码UAA、UAG ；RF2：识别UAA、UGA；RF3：促进RF1、RF2的识别 。、RF2结合到核糖体后，使肽酰转移酶构象转变，表现出水解酶活力，催化肽酰基与tRNA的酯键水解，合成的肽链便从核糖体上释放下来。空载的tRNA接着从核糖体上脱落，核糖体便解离成50S和30S两个亚基离开mRNA，一条多肽链的合成便告结束。四、肽链合成后的加工肽链合成后多数还要经过加工处理，才能变为有生物活性的蛋白质分子，这个过程称为翻译后加工作用，内容包括：1、剪切由氨肽酶将N-端fMet（Met）以及多余氨基酸的切除。2、剪接将蛋白质分子内多余的片段切除3、氨基酸的修饰修饰方式多种多样，如：磷酸化、羟基化、糖基化、甲基化、乙酰化等等。4、二硫键的形成在专一性的氧化酶催化下，特定的Cys-SH之间连接形成二硫键。5、与辅基或辅酶结合对于结合蛋白质，与辅基或辅酶结合后才表现出活性。6、形成特定的构象，亚基间的聚合 我现在正在学生物化学，这个是生物化学上的蛋白质的合成步骤。比较专业化，希望能对你有所帮助。

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

大肠杆菌乳糖操作子。

肠杆菌科细菌

DNA解旋酶，DNA聚合酶

DNA连接酶的种类有很多，用的较多的是E·coliDNA连接酶和T4DNA 连接酶。从大肠杆菌中获得的DNA连接酶只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳，T4DNA连接酶具有较好的平末端双链连接的作用。 E·coliDNA连接酶所有从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶的称。酶的命名是有规律的。所以不能笼统的根据来源叫。

还有抗性筛选位点，比如氨苄Amp、卡那霉素Kana等等……

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Garen美服都是直接用名字的，像什么德玛西亚之力、德玛西亚之翼、诺克萨斯之手，都是只有国服才有技能的话由被动开始，依次到大招，都是英文和介绍Perseverance: (Innate): If Garen has not taken damage from any source except minions in the last 9 seconds, he will regenerate 0.5% of his maximum health per second.Decisive Strike (Active): Garen removes all slows affecting him and gains 35% bonus movement speed for a duration. In addition, his next melee attack within 4.5 seconds will deal physical damage, which can critically strike, and silence the target. ■No cost ■Cooldown: 8 secondsCourage (Passive): Garen"s armor and magic resistance are increased by 20% (Active): Garen places a defensive shield on himself, decreasing all damage taken and reducing crowd control by 30% for a duration. ■No cost Judgment (Active): Garen rapidly spins his sword around his body for 3 seconds, dealing physical damage to nearby enemies every half second. Minions and neutral monsters take 75% damage from this ability. Garen can deactivate Judgment early by activating the ability again after 0.5 seconds. Garen ignores unit collision, but his movement speed is slowed by 20% if spinning through minions. Judgment"s damage can critically strike, in which case, only the bonus damage will be multiplied. ■No cost ■Diameter of AoE: 330Demacian Justice (Active): Garen brings down Demacian Justice on his opponent, dealing magic damage, plus additional magic damage based on how much health his opponent is missing. ■No cost ■Range: 400

自由篮球g4礼包内容如下。1、JOYCITYWAVES球服。2、JOYCITYWAVES球裤。3、No.1项链兑换券。

non adopted不采纳双语例句1Non woven fabric was adopted as a new kind of suspended media. Adapting condition and operation parameters and biodegradation mechanism using non woven fabric media in wastewater treatment were studied. 采用无纺布作为一种新型悬浮填料，探索无纺布填料处理污水的适用条件、运行参数及降解机理。

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欢迎来到英雄联盟：Welcome to summoners" rift. Welcome to crystal scar.敌军还有三十秒到达战场，碾碎他们：Thirty seconds until minions spawn!全军出击： Minions have spawned！ps：四杀是quadra kill 不是quadro kill。 外国人的使用习惯，我们要尊重~~

为什么减速器开了朋友进不了也许是你哪个设置没有打开吧！

自由篮球什么职业好操作适合新手 自由篮球和街头篮球差不多，玩C需要反应还有能力拿板和盖帽，这个需要千锤百炼，G需要跑位助攻还有自己投篮，也需要一定时间掌握，相对而言F比较适合新手，因为就算你不会玩，但是只要会中投还有一定的真人篮球的知识是可以掌握的，建议玩前锋吧 自由篮球新手玩什么职业 新手最好是玩后卫，因为前锋不配合的话会被骂死的，而中锋更不用说了，没有篮板是很蛋疼的，所以新手最好是先玩后卫。 自由篮球这游戏玩什么职业好玩？ 我玩的是PG，还是相当不错的。不过下个星期就更新自由篮球2.0了，所以感觉还是到时候玩新的职业SW比较好，运球突破能力很强的啊！对于我这种技术流觉得玩起来一定非常赞！ 自由篮球新手玩什么职业 喜欢哪个位置就玩哪个，多练练就可以了自由篮球特殊角色哪个好 看你玩什么位置 老特殊角色多20点属性点 新角色多8点能力值 区别在于：能力值加满之后新角色直接再加能力值 老角色多出的20点属性点却只能加到别的属性上了。 所以说新角色是优于老角色的 最后建议： C建议小苍老师 大木 沙和尚 PF建议高妹刘雯雯 猪八戒 SF建议詹姆斯金 牛琪琪 PG建议娜娜 孙悟空 SG探头 牛琪琪 小生姜 自由篮球什么职业厉害 自由篮球里面PG（得分后卫）基本上在队伍里面属于核心的存在，一个称职的PG能让队友安心很多。 PG的作用大部分是在队友身上体现出来的，无球跑位，无球挡拆，空切等等这些都需要一个称职的PG才能体现出最大的威力。 大多数SF通常最喜欢和PG搭档原因也就是这个。 自由篮球哪个职业比较有前途 始终坚信一点：没有最强的职业，只有最强的玩家。任何职业当你掌握熟练都能变成大神。如果说非要选个有前途的，还得和版本来判断，目前来说，得分职业中，喜欢打中投和突破就玩SF，喜欢3分就SG。喜欢防守和扣篮就是PF，目前版本C移动比较慢，得分手段比较少，防守容易被牵制。当然，如果你是土豪也可以玩C。 自由篮球哪个职业厉害 控球后卫，又叫组织后卫，是篮球比赛阵容中的一个固定位置。控球后卫往往是全队进攻的组织者，并通过对球的控制来决定在恰当的时间传球给适合的球员。是球场上拿球机会最多的人。他要把球从后场安全地带到前场，再把球传给其他队友，这才有让其他人得分的机会。一个合格的控球后卫必须要能够在只有一个人防守他的情况下，毫无问题地将球带过半场。然后，他还要有很好的传球能力，能够在大多数的时间里，将球传到球应该要到的地方：有时候是一个可以投篮的空档，有时候是一个更好的导球位置。不可或缺。 自由篮球哪个职业好 看个人喜欢，在自由篮球中一共有5个职业可以选择，相对于街头来说选择面要宽了不少，我比较关注的是官方说每个角色都随身附送一整套酷炫时装，进入游戏后马上体验嘻哈高富帅的至尊享受。 自由篮球探头什么职业好 其实个人觉得这是想太多。萝莉和兔女都可以，个人不是很推荐牛琪琪，因为牛琪琪跑动不算高

in the endat the end of1、in the end意思“最后、终于”.它的意思相当于finally,at last.它往往表明事情的结局,在句子中一般单独使用.如:Xiao Ming passed the exam in the end.最后小明通过了那次考试.Ice become...

楼上回答很好，很不错，希望对你有帮助

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《自由篮球》回归福利大放送 代币商城开业领好礼不知如何解决，为此小编给大家收集整理《自由篮球》回归福利大放送 代币商城开业领好礼解决办法，感兴趣的快来看看吧。潮流竞技网游《自由篮球》回归专属福利大放送！球友们现在回归街头赛场，不仅可以体验全明星卡片、稀有服饰，更可以获得花式动作、庆祝动作等诸多好礼哦~参与阿斯特证券公司活动还有机会直接获得限定角色雅恩/安娜思角色兑换券！与此同时，游戏内的福利活动也在火热进行中！回归的球友们参与专属任务，即可获得700活动喷漆。在活动期间累计签到七天，更可获得回归专属礼包！开启礼包，还能获取更多活动喷漆、洗卡保护券等福利！此外，代币商城开业也有好礼相送！完成比赛即可兑换X-Machina装甲、潮人工作服等好礼，球友们不要错过哦！【回归福利免费放送 雅恩安娜思等你来拿】2月23日维护后3月23日9:00期间，回归体验活动正式开启！满足2023年2月23日维护之后，首次登录游戏或截止2023年2月23日维护前，累计30天以上未登录游戏的账号均可参加。球友只需完成在游戏内活动界面中完成指定任务，直接体验全明星卡片、稀有服饰等好礼！另外，参与与专属回归任务，还能获得海量活动喷漆、洗卡保护券等福利哦！同时，目前阿斯特证券公司活动也在火爆进行中！球友们可以通过抽奖在奖池中获取雅恩兑换券、安娜思角色兑换券等稀有奖励！值得一提的是，球友们在抽奖同时还将获得黑曜石。使用黑曜石，将可兑换阿斯特证券公司的全部角色！切勿错过哦~【代币商城开业 篮球大富翁火热进行】3月3日维护后-3月16日9:00期间，可兑换X-Machina装甲、潮人工作服等好礼的援助商城正式开业！除活动期间首次登录游戏，可获得1000援助代币外，球友们还可通过完成比赛获得更多代币，每日通过比赛可获得代币上限1000个！同时，截止3月9日 9:00前，篮球大富翁将持续开放！球友们每日登录和完成比赛都可获得一定数量的骰子，用来参与篮球大富翁活动！参与活动，不仅可以获得各式奖励和B，还有棋牌对应格子内的秘密金币奖励。累计获得的金币，更是用其兑换符文猫训练服、熊猫运动衫等各种潮流服饰哦~回归福利大放送！代币商城开业领好礼！篮球大富翁火热进行！快来《自由篮球》参与活动赢取奖励吧！

日文

没有最好的职业，这要看你喜欢进攻还是防守了。进攻就选后卫，防守就选大前锋或中锋，要是喜欢全能的那就选小前锋。

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Minions 《小黄人》围绕小黄人们的“前格鲁时代”展开叙述，并特别追溯了小黄人的起源。小黄人原本是一种单细胞体生物，之后逐渐进化为专为超级坏蛋提供服务的坏蛋助手。它们服务过的超级坏蛋包括：霸王龙、拿破仑、吸血鬼、北极熊。小黄人总是忠诚地为主人提供各种服务，兢兢业业，毫无怨言——直到它们失手“害死”每一任主人。在痛苦地失去一个又一个主人后，被困在冰洞之内小黄人们愈发焦躁不安，于是小黄人斯图尔特、凯文及鲍勃决定挺身而出，去到花花世界，再次寻找可以效劳的主人。 时值上世纪60年代，超级坏蛋也并不好找。不过总算皇天不负有心人，小黄人三人组无意间看到了“坏蛋大会”广告，该大会声称世界第一女坏蛋斯嘉丽·杀人狂（桑德拉·布洛克配音）会出席大会并发表演讲。为了尽快见到斯嘉丽，小黄人三人组甚至搭上了银行抢劫犯的顺风车。在经历了一系列可想而知的“灾难”之后，小黄人终于如愿以偿地成为斯嘉丽的助手。它们为斯嘉丽执行的第一个任务就是盗取英国伊丽莎白女王的皇冠，任务进展的十分顺利，顺利到呆萌的鲍勃竟然莫名其妙的成为新任国王。但是斯嘉丽对于他们的战果并不满意，她误以为小黄人三人组要自立门户，于是麻烦接踵而至。

《自由篮球》俱乐部改版积分补发和问题说明不知如何解决，为此小编给大家收集整理《自由篮球》俱乐部改版积分补发和问题说明解决办法，感兴趣的快来看看吧。亲爱的球友：自由篮球俱乐部系统已在3月23日进行了更新，针对球友们关心的俱乐部积分的问题，我们已根据改版前各俱乐部的等级和积分情况，发放了对应的全新俱乐部积分。还请球友们进入游戏后查看俱乐部积分情况。同时我们给所有俱乐部发放了可以兑换全能力+3（30天）所需的俱乐部积分，俱乐部会长在维护结束后，可直接在增益商店中进行兑换。另外针对改版前已经兑换的增益效果未使用完毕的情况，我们将会统计相关数据之后，对还有剩余增益时间的俱乐部按照相应比例补偿对应的俱乐部积分。（因数据量太大，我们将在后续陆续统计并发放，发放后会进行公告）关于球友们反馈的任务难度和积分获得量问题，我们已在关注。还请球友们多多体验俱乐部系统之后，随时把相关意见和反馈通过微博、微信、客服等渠道发送给我们。我们会参考球友们提出的意见，对俱乐部系统持续进行优化调整。还请各位多多提出意见和建议。《自由篮球》运营团队2023年3月23日

_根的词语解释是：块根kuàigēn。(1)呈块状的根。_根的词语解释是：块根kuàigēn。(1)呈块状的根。结构是：_(左右结构)根(左右结构)。拼音是：kuàigēn。_根的具体解释是什么呢，我们通过以下几个方面为您介绍：一、国语词典【点此查看计划详细内容】须根之中，有数个肥大而成块状者，如甘?等。词语翻译英语roottuber,tuberousroot法语tuberculessurlesracinesdesplantes二、网络解释块根块根是由营养繁殖的植株不定根或实生苗侧根膨大形成的，一株上可形成多个块根，它的组成不含下胚轴和茎的部分，完全由根构成，甘薯、何首乌的块根都属此类。甘薯块根外形较不规则，大约在栽插后20~30d,其中有些不定根开始膨大形成块根。何首乌的块根呈纺锤形，表面具4~6条纵棱。一般在块根直径约3cm时，内部结构基本分化完成。其副形成层由初生韧皮纤维束周围的薄壁细胞形成，中柱鞘也恢复分裂能力，向外产生一些薄壁细胞，使块根加粗。药用块根还有天门冬、百部等。关于_根的成语根连株逮错节盘根断根绝种根深柢固落地生根命根子_草除根关于_根的词语连根带梢达地知根落地生根翦草除根深根固柢剪草除根六根清净_草除根根深柢固断根绝种点此查看更多关于_根的详细信息

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