一个可以在E.coli DH-5中表达蛋白质的载体应该包括哪些必需部分？

E.coli（大肠杆菌）是一种常见的细菌，属于革兰氏阴性菌。它存在于人和动物的肠道中，有些菌株对人体有益，但也有一些具有致病性。E.coli在环境中易于生存和繁殖，可以通过污染的食物或水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道感染。尽管大多数E.coli菌株对人体无害，但某些菌株产生肠毒素，可引发严重的健康问题，如腹泻、腹痛和发热等。因此，正确处理食品、保持卫生和良好的个人卫生习惯对预防E.coli感染至关重要。

【答案】：当葡萄糖和乳糖同时存在时，乳糖操纵子以低水平进行转录。因为阻遏物与别乳糖(乳糖的一个异构体)形成复合物，别乳糖-阻遏物复合物不能与乳糖操纵子的启动子区城结合，从而使该阻遏物不能阻止转录起始。$缺少乳糖的条件下，将不会有别乳糖生成，乳糖阻遏物与乳糖操纵子启动子区结合，阻止转录。$当乳糖作为唯一的碳源时，该乳糖操纵子以最大的速率转录，在别乳糖存在的条件下，转录也是可能发生的，因为乳糖阻遏物不能结合乳糖操纵子的启动子区城。同样在缺少葡萄糖的条件下，转录速率也增加，因为cAMP产物增加，有更多的CAP-cAMP结合乳糖操纵子的启动子区城，促进转录，使细胞在乳糖作为可利用的唯一碳源时合成大量的酶来维持生长。

由于尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(E. coli) OP50是尿嘧啶缺陷性，只能从，涂布于NGM（Nematode Growth Media）中获取尿嘧啶，无法自身合成。所以生长速度会比普通的大肠杆菌慢很多，这样既可以提供线虫食物，又不会过度生长。线虫一般从卵到成虫需要3天时间，而且湿度，氧气，以及各种环境因素会制约线虫的生长。所以需要营养合成缺陷型菌种为其食物

简单的说，就是通过RNA的二级结构对翻译进行调控： 该操纵子位于MRNA的前导序列内，前导序列有4个位点1、2、3、4，他们1和2，2和3，3和4之间都能形成剪辑互补配对的2级结构。而基因的核糖体结合位点位于区域4。（1234按照5`到3` 一次编号）。前导序列1能编码一段前导肽，该位点内有连续的2个色氨酸密码子。 当高浓度色氨酸存在时，色氨酸-TRNA是负载的，可以为该位点提供充足的翻译原料。这时，核糖体可以顺利通过区域1，停留在区域2上，此结构导致区域1和2不能互补配对，而3和4配对，导致4区域的核糖体结合位点被屏蔽，以至于无法翻译基因信息。 而当细胞内色氨酸缺乏时，就没有足够的色氨酸-TRNA渗透进正在1位点翻译的核糖体内，核糖体停留在1位点，暴露2位点，这样2和3就互补配对形成2级结构，从而导致4位点暴露，从而开启核糖体结合位点，使基因得以表达。 嗯，大概就是这样子。。。不妨用纸笔画画图，就明白了。上个图给你看

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

E·coliDNA连接酶是从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶 只能连接粘性末端 而平末端则要交给T4DNA连接酶了 它可以连接粘性末端也可以连接平末端

必须是mRNA反转录的DNA或类似的DNA基因，必须与大肠杆菌启动子、RBS序列、SD序列、起始密码子正确拼接、应该还有大肠杆菌终止子。最后还要转入大肠杆菌中才可能正确表达。

筛选工业高产菌株一般从以下几个方面入手：1.筛选营养缺陷型菌株原理是解除了代谢途径中的协同反馈，这里选择酪氨酸营养缺陷型菌株，使得代谢支路受到阻遏，只要在培养基中加入少量酪氨酸，苯丙氨酸就可大量合成。2.筛选抗结构类似物突变株原理是解除阻遏或抗反馈抑制，对氟苯丙氨酸是苯丙氨酸的结构类似物,因此,对氟苯丙氨酸抗性菌株所产生的苯丙氨酸也不能与阻遏蛋白或变构酶结合,这样必然会在有苯丙氨酸存在的情况下,细胞仍然不断的合成苯丙氨酸,使其得到过量积累,这就是抗阻遏或抗反馈突变株。3.筛选温度敏感型突变株比如e.coli最适温度是37,突变后由于某酶结构改变，使得在37度下失活，等同于37度下的营养缺陷型，原理同第一条。

可以。大肠杆菌也是从一个复制起点开始双向复制，形成θ形

【答案】：尽管两个基因组都由独特序列的DNA组成，E.coli的基因组约大25倍，因而每条变性的E.coliDNA链复性得花费更长的时间来寻找其正确的互补链。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

如图.

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

1、作用不同E.coliDNA 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在DNA 的复制和修复过程中起着重要的作用。T4-DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5"-P末端和3"-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。2、连接条件不同用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段；用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来；先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头，使之形成粘性末端之后，再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异，但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。扩展资料：粘性末端DNA片段的连接DNA连接酶最突出的特点是，它能够催化外源DNA和载体分子之间发生连接作用，形成重组的DNA分子。平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸（通过脱氧核苷三磷酸前体）加到DNA分子单链延伸末端的3′-OH基团上。由核酸外切酶处理过的DNA，以及dATP和末端脱氧核苷酸转移酶组成的反应混合物中，DNA分子的3′-OH末端将会出现单纯由腺嘌呤核苷酸组成的DNA单链延伸。这样的延伸片段，称之为poly（dA）尾巴。反过来，如果在反应混合物中加入的是dTTP，那么DNA分子的3′-OH末端将会形成poly（dT）尾巴。因此任何两条DNA分子，只要分别获得poly（dA）和poly（dT）尾巴，就会彼此连接起来。这种连接DNA分子的方法叫做同聚物尾巴连接法（homopolymertail-joining），简称同聚物加尾法。衔接物连接法所谓衔接物（linker），是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成、具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。衔接物的5′-末端和待克隆的DNA片段的5′-末端，用多核苷酸激酶处理使之磷酸化，然后再通过T4DNA连接酶的作用使两者连接起来。接着用适当的限制酶消化具衔接物的DNA分子和克隆载体分子，这样的结果使二者都产生出了彼此互补的粘性末端。于是我们便可以按照常规的粘性末端连接法，将待克隆的DNA片段同载体分子连接起来。DNA接头连接法DNA接头，是一类人工合成的一头具某种限制酶粘性末端另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸短片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具粘性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。实际使用时对DNA接头末端的化学结构进行必要的修饰与改造，可避免处在同一反应体系中的各个DNA接头分子的粘性末端之间发生彼此间的配对连接。参考资料来源：百度百科-DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-T4-DNA连接酶

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

可能是E.coli C600比较容易筛选吧，含有Rifampicin抗性。。。

大肠杆菌的的色氨酸合成系统操纵子，其从启动基因开始至转录衰减区附近所转录的信使RNA（mRNA），在细胞内色氨酸浓度高过一定程度时，则在该位置终止，但在色氨酸浓度低时，则通过该点进行mRNA的合成。在此操纵子中，最初的结构基因是从mRNA5′末端数第163个碱基开始的，而转录衰减区存在于稍前方，即约在第130个碱基附近。在此区域的前面，有产生由14个氨基酸所成的小肽的信息，其中有2个为色氨酸的遗传信号。所以当色氨酸缺乏时，此肽的合成在该位置迟滞以至完全停止，而妨碍参与肽合成核糖体向衰减区接近。反之当色氨酸浓度高时，则核糖体接近该区域，随之在mRNA上的衰减区（有回文结构）形成与转录终止相适应的二级结构，转录停止。在其它操纵子上也有同样的小肽的信息，例如组氨酸操纵子在16个氨基酸中有7个为组氨酸的遗传信号，而苯丙氨酸操纵子在15个中有7个为苯丙氨酸的遗传信号。这样氨基酸合成系统的操纵子，利用翻译机制来监测其操纵子所合成的氨基酸的浓度，即具有根据这浓度而确定mRNA是否继续合成的机制。

一、指代不同1、E.coliDNA连接酶：从大肠杆菌中获得的DNA连接酶。2、T4连接酶：一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。二、原理不同1、E.coliDNA连接酶：一条分子量为75KD的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物，但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。2、T4连接酶：T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。三、特点不同1、E.coliDNA连接酶：只连接具有相同黏性末端的DNA分子的基本骨架，即磷酸二酯键。只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳。2、T4连接酶：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。参考资料来源：百度百科-T4DNA连接酶参考资料来源：百度百科-DNA连接酶

?这两个一培养不就看出来了么，菌落不一样。革兰氏染色，大肠杆菌红色，金黄葡萄球菌紫色看看形态也不一样的，大肠杆菌，金黄葡萄球菌

培养什么菌的？ 一般比如大肠杆菌有M9培养基，酵母有合成培养基

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。

蛋白质的合成过程在蛋白质合成过程中，mRNA从5′→3′阅读，而肽链从N-端向C-端合成。（一）氨基酸的活化氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，活化成氨酰-tRNA(氨基酸以高能酯键与tRNA的3′-末端腺苷酸的2′或3′的羟基相连的)。AA + tRNA + ATP---AA～tRNA + AMP + PPi氨酰-tRNA合成酶有氨基酸和tRNA两种底物的专一性结合位点。每一种tRNA只专一携带一种氨基酸，而一种氨基酸可分别被几种tRNA专一携带(因为有密码子简并现象)。氨基酸一旦与tRNA结合成AA- tRNA，进一步的去向就由tRNA来决定。tRNA凭借自身的反密码子与mRNA上的密码子相识别，而把所携带的氨基酸定位在肽链的一定位置上。 各种氨酰-tRNA都具备后，就可以进行蛋白质的合成 （二）多肽链的起始合成参与起始的成分：IF1，IF2，IF3，核糖体的小、大亚基，mRNA，fMet-tRNAf，GTP。起始过程：1、IF1，IF3，30S小亚基，mRNA结合并定位；2、GTP，IF2，fMet-tRNAf加入，形成30S起始复合物；3、IF1，IF2，IF3，GDP，Pi释放，50S大亚基加入，形成70S起始复合物。 至此，起始过程完成，fMet-tRNA位于核糖体上的P位点（给位，即肽酰-tRNA结合位点），而A位点（受位，即氨酰-tRNA结合位点）空着，用于接受下一个AA-tRNA。（三）肽链的延伸此阶段包括氨酰tRNA进入核糖体A位点（进入）、肽键的形成（转肽）和核糖体在mRNA上移位（移位）三个步骤。这三步每重复一次，肽链上就增加一个氨基酸，直到mRNA上的终止密码出现在核糖体的A位时为止。1、进入开始延伸过程时，fMet-tRNAf位于核糖体上的P位点，而一个能与AUG后的密码子互补AA-tRNA进入A位点。具体过程：1、AA-tRNA与EF-Tu-GTP结合生成复合物Tu-GTP-AA-tRNA；2、复合物进入A位，GTP水解，EF-Tu-GDP从核糖体上释放， AA-tRNA留在A位；3、在EF-Ts帮助下，EF-Tu-GDP重新形成EF-Tu-GTP，以便于下一轮反应。2、转肽AA-tRNA的游离氨基与fMet的羧基形成肽键，此过程在肽酰转移酶催化下进行。反应后fMet转移到A位点，形成fMet-AA-tRNA，而P位点留下一空载的tRNAf3、移位在延伸因子EF-G（又称移位酶）帮助下，核糖体在mRNA上移动一个密码子的距离，结果使A位点的fMet-AA-tRNA移到P位，P位的tRNAf移出了核糖体，而A位点空出，以便于接受下一分子AA-tRNA。这样，一轮反应结束，肽链延长了一个氨基酸单位。紧接着进行下一轮延伸，直至肽链合成终止。（四）肽链合成的终止和释放肽链的合成过程同时也是核糖体沿mRNA 5′→3′方向移动，并翻译mRNA上密码子的过程。当核糖体移到终止密码子时，没有对应终止密码的氨酰-tRNA可以进入A位，终止因子进入A位，肽链合成停止。有三种终止因子(RF1、RF2、 RF3)参与终止步骤：RF1：识别终止密码UAA、UAG ；RF2：识别UAA、UGA；RF3：促进RF1、RF2的识别 。、RF2结合到核糖体后，使肽酰转移酶构象转变，表现出水解酶活力，催化肽酰基与tRNA的酯键水解，合成的肽链便从核糖体上释放下来。空载的tRNA接着从核糖体上脱落，核糖体便解离成50S和30S两个亚基离开mRNA，一条多肽链的合成便告结束。四、肽链合成后的加工肽链合成后多数还要经过加工处理，才能变为有生物活性的蛋白质分子，这个过程称为翻译后加工作用，内容包括：1、剪切由氨肽酶将N-端fMet（Met）以及多余氨基酸的切除。2、剪接将蛋白质分子内多余的片段切除3、氨基酸的修饰修饰方式多种多样，如：磷酸化、羟基化、糖基化、甲基化、乙酰化等等。4、二硫键的形成在专一性的氧化酶催化下，特定的Cys-SH之间连接形成二硫键。5、与辅基或辅酶结合对于结合蛋白质，与辅基或辅酶结合后才表现出活性。6、形成特定的构象，亚基间的聚合 我现在正在学生物化学，这个是生物化学上的蛋白质的合成步骤。比较专业化，希望能对你有所帮助。

E.coli Electro-Cells E.coli Electro-Cell JM109 制品名 TaKaRa Code 包装量 价格(人民币元) E.coli Electro-Cell JM109 D9022 1 Set (50 μl×10支) 300 ■ GenotypeE.coli JM109recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F"[traD36, proAB+, lac Iq, lacZ ΔM15]■ 细胞浓度1～2×1010 Bacteria/ml ■ 保存-80℃■制品说明用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌，从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一，比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高，在转化少量DNA时，特别能发挥其特有的威力。TaKaRa使用独自开发的菌体培养法，制作出了效果极佳的E.coli Electro-Cell JM109。 ■细胞种类α-互补性选择宿主E.coli JM109E.coli JM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时, 由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109 F"编码的lacZΔM15的结合，显示β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)。利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。因为具有F"质粒，除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外，也可作为M13载体DNA的宿主，调制单链DNA。■质量标准 使用10 pg的质粒DNA进行转化时：50 μl E.coli JM109 Electro-Cell/10 pg pUC19 plasmid转化时产生的菌落数>1×109 transformants/1 μg pUC19 plasmid F"质粒的稳定性检测对E.coli JM109使用pUC19 DNA进行电穿孔法转化后，在含有100 μg/ml的Ampicillin、0.2 mM的IPTG, 40 μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生的白色菌落在1%以下。 50 μl的E.coli JM109 Electro-Cell在含有100 μg/ml的Ampicillin L-琼脂平板培养基上不产生菌落。 --------------------------------BL21（DE3）pLysS细菌菌株 BL21（DE3）pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。BL21（DE3）pLysS对λDE3（1）是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I，编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21（DE3）pLysS含有pLysS质粒，他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下，T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。包装： P9811 500μlhttp://www.promega.com/tbs/tb095/tb095.pdf

（1）操纵子基因突变 死亡。不能与RNA聚合酶结合，关闭转录，不能运用乳糖，所以将死亡。 （2）结构基因突变 大量增殖。O不能与阻遏因子结合，将持续表达，因此大量增殖。 （3）CAP位点基因突变 存活，增殖减弱。不能形成cAMP-CAP复合物，不能促进转录，但正常转录不受影响。

大肠杆菌乳糖操作子。

肠杆菌科细菌

DNA解旋酶，DNA聚合酶

DNA连接酶的种类有很多，用的较多的是E·coliDNA连接酶和T4DNA 连接酶。从大肠杆菌中获得的DNA连接酶只能连接具有互补配对粘性末端的双链，对平末端效果不佳，T4DNA连接酶具有较好的平末端双链连接的作用。 E·coliDNA连接酶所有从大肠杆菌中获得的DNA 连接酶的称。酶的命名是有规律的。所以不能笼统的根据来源叫。

1. 描写小黄人样子的作文 有一天，妈妈带我去逛街，在路上我看到了一个小摊，上面放着一堆小黄人。 忽然，我的目光转移到了一个小黄人身上：它只有一只眼睛，而别的小黄人都有两只眼睛。它有两只耳朵，别的小黄人没耳朵。 它的身体里有铃铛，而别的小黄人没有。我便问：“老板这个小黄人叫什么？”老板说：“叫“孤铛”。” “为什么？”“因为它只有一只眼睛，还有只有它有铃铛。”“那我就要它了！”买到了“孤铛后我觉得这个名字不吉利，又看到它长得像花生，就给它取名许花生（因为我姓许）小名小花生！从那天起，我和小生就成了好朋友，每天它陪我吃饭，睡觉，写作业，上学……而且我还把它放在床头呢，有一次，我把它带到学校，可是硬是被我们班最顽固的陈昊看见了，他跟我抢着小生，可是抢不过我，他一转身把老师给叫来了，老师要我马上交出小生，我一听灵机一转说：“老师，这是我姐姐送给我的她要去云南上大学了，所以送了我一个小黄人，我一看到这个小黄人就想起我姐姐，所以请您不要没收好吗？”老师一听，心软了。 便说：“好吧，看在是你在远方的姐姐送给你的。”我听了连忙说：“谢谢老师！”等老师走远了，我心里暗暗高兴：总算是逃过一劫。 2. 关于小黄人300字的作文 看完3d电影《卑鄙的我2》（神偷奶爸）后，我就想要一个可爱的小黄人了，不过，我的愿望马上实现了，因为正月初八是我的生日，当妈妈说我要什么的时候，我不假思索的回答：“小黄人。” 小黄人长着一个扁圆形的身体，身体和头是连在一起的，它全身是黄颜色的，穿着蓝色加黑色的连衣裤，它有着灯泡似的眼睛，和比眼睛还大的镜框，它有着雪白的牙齿，一副嬉皮笑脸的样子，可爱极了！ 小黄人是格鲁用变种dna、脂肪酸和香蕉泥组成的胶囊状生物，穿着蓝色背带装。语言为个种语言的各种混杂······ 怎么样，我的小黄人可爱吧。 3. 关于小黄人300字的作文 看完3d电影《卑鄙的我2》（神偷奶爸）后，我就想要一个可爱的小黄人了，不过，我的愿望马上实现了，因为正月初八是我的生日，当妈妈说我要什么的时候，我不假思索的回答：“小黄人。” 小黄人长着一个扁圆形的身体，身体和头是连在一起的，它全身是黄颜色的，穿着蓝色加黑色的连衣裤，它有着灯泡似的眼睛，和比眼睛还大的镜框，它有着雪白的牙齿，一副嬉皮笑脸的样子，可爱极了！小黄人是格鲁用变种dna、脂肪酸和香蕉泥组成的胶囊状生物，穿着蓝色背带装。语言为个种语言的各种混杂······怎么样，我的小黄人可爱吧。 4. 描写小黄人漫画的作文 Minions is a 2015 American 3D puter-animated family edy film, serving as a spin-off/prequel to the Despicable Me franchise. Produced by Illumination Entertainment for Universal Pictures, it was directed by Pierre Coffin and Kyle Balda, written by Brian Lynch, and produced by Chris Meledandri and Ja Healy. The film stars Coffin (as the Minions), Sandra Bullock,Jon Hamm, Michael Keaton, Allison Janney, and Steve Coogan, and is narrated by Geoffrey Rush. It was first foreshadowed in the end credits of Despicable Me 2, where Kevin, Stuart, and Bob, three of the Minions, are seen auditioning for the film.Minions had its premiere on June 11, 2015, in Leicester Square, London, and went into general release in the United States on July 10, 2015. Critical response was mixed: some critics praised the edic aspects of the film and the performances of Bullock and Hamm, while others felt that the titular characters were not able to carry the film on their own, and that the villains were flatly characterized. The film has grossed over $1.1 billion worldwide (outgrossing both Despicable Me films), making it the 10th highest-grossing film of all time, the 2nd highest-grossing animated film, and the highest-grossing non-Disney animated film.Minions are *** all, yellow creatures who have existed since the beginning of time, evolving from single-celled ani *** s into beings who exist only to serve history"s most villainous masters. They speak their own language, Minionese, a conlang consisting of funny sounding words from Italian, Korean, and other languages. They find great masters—including a T-Rex, acaveman, an Egyptian pharaoh, Dracula,and Napoleon，—but after accidentally killing nearly all of them with their inpetence, they decide to isolate themselves from the world and start a new life in Antarctica.By 1968, the lack of a master to serve drives them into depression, so Kevin, one fearless Minion, plans to find a new one for them by going back out into the world. Stuart—a bored, teenaged minion who is obsessed with guitars—joins him reluctantly, as does an over-enthusiastic Bob, whom Kevin only chooses because of no one else willing to volunteer.After a long journey, the Minions arrive in New York, where they soon learn about Villain-Con, a convention to be held in Orlando where supervillains gather from around the world. Theyhitchhike to Orlando, where they successfully bee the henchmen for Scarlet Overkill, the world"s first female supervillain. As Scarlet takes the Minions to her home to London, Kevin immediately notifies the other Minions back home. In Antarctica, the other Minions begin working for a Yeti, but once again accidentally kill their leader. Fleeing from the Yeti"s angry friends, they travel around the world to find Kevin, who had already told them to meet the trio in England.Scarlet and the Minions arrive at her home, where she orders them to steal St. Edward"s Crown from Queen Elizabeth II of England and later shows through a bedtime story that she"ll kill them if they fail. With gadgets from Herb, Scarlet"s hu *** and, the Minions successfully break into the Tower of London. However, the crown is being delivered to the Queen, so they steal it from her while she"s in her carriage, with the police in pursuit. Bob crashes onto the mythical Sword in the Stone and pulls the sword, Excalibur, out to defend himself. After he has pulled out the legendary sword, Elizabeth II is immediately removed from the throne and Bob is crowned as the new King of England.Convinced they are traitors for stealing her dream, Scarlet confronts the Minions and threatens to execute them for good. King Bob abdicates in Scarlet"s favor, but she still doesn"t five the Minions, locking them in the palace dungeon to be tortured by Herb. The Minions" unusual physiology prevent them from being affected by the torture and Herb eventually leaves to attend his wife"s coronation. The Minions then escape the dungeon through a sewer, intending to apologize to Scarlet.At Westminster Abbey, the Minions accidentally interrupt Scarlet"s coronation by unscrewing a chandelier, which falls and crushes Scarlet before she can be crowned. Scarlet survives and orders those attending the coronation—including some super-villains—to get the Minions. Stuart and Bob are captured while Kevin hides in a bar where he finds Elizabeth. Kevin learns that Stuart and Bob are to be executed and breaks into Herb"s laboratory, with villains chasing him. He accidentally triggers an experimental machine that enlarges him, destroying the Overkill residence in the process, which scares the villains away。 5. 请同学看电影小黄人大眼萌作文800 许多年前，我和爸爸一起去民光影院看电影，那时候我还很小的，是第一次出去看电影。 在门口买票时，我看见影院的招牌很大，我想里面一定像大型饭厅一样灯火辉煌，漂亮无比的。我随着爸爸走进影院，向指定影房走去。在走廊上我发现的确和我想象的一样，富丽堂皇。我更加高兴了，连蹦带跳地跑进了影房，里面一片黑暗，影片刚刚开始放了。黑暗把我刚才走廊上的想法全都冲散了。不过只有二点让我猜了个正着，一是影院很大，大得不得了，比我们学校的礼堂还要大好几倍呢！二是座位特别多，一个影房里屏幕和其他东西总共才占三分之一，座位却占了三分之二。我只好随爸爸在前排座位上找了两个空位，坐下来看电影，电影的题目叫《小黄人大眼萌》，有时，一些惨不忍睹的画面把我吓哭了，爸爸拿着上好佳不停地哄我，渐渐地我止住了哭声。过了好一会儿，我觉得很无聊，拿着电筒，向座位的最后一排去冒险，后排的座位却是一些两人坐椅，长短正好，不高也不低，我赶紧把爸爸拉过来，对他说：“爸爸，我们两个人一人两个位子看电影好吗？”爸爸点点头。影片放的内容有些地方我好像在哪儿看过，啊，对了是《大眼萌》。影片在进入尾声时，我发现了一个特大号问题，寻就是：影房上有许多灯，不但不开，还把窗户用窗帘遮了个严严实实。后来在三年级时，我才明白：“因为屏幕上的画面是用一束光传递到屏幕上的。如果有其它光束进来，画面就看不清楚了。 第一次看电影前对电影知道不了多少，现在我想起来还觉得很有趣。对自己的无知感到不好意见。 6. 小黄人公仔毛绒玩具作文400字 网友采纳热心网友嗨，我是一只玩具小熊，一年前，我被别人当作生日礼物送给了我的小主人。 我是用棉花和布做成的，头戴一个美丽的帽子，身穿一件花纹的衣服。 刚来到这里的时候，小主人对我非常好，每当我的身上弄上一个小脏点，小主人就会细心的给我洗掉。 可是没有几天，小主人对我没有以前好了。一次他没有好好写作业，被老师批评了。 小主人回到家时，气还没有消，于是就拿我出气，对我一阵乱打乱踢，然后把我扔到一边，不闻不问。可是小主人高兴的时候，也会亲吻我，但他发脾气时让我很难忍受啊。 一个晚上，我躲在墙角，伤心的哭了，一边哭，一边自言自语述说着自己的不幸遭遇。我的话被小主人听到了。 小主人觉得自己做错了，就向我说：“对不起，以后我会好好对待你的玩具小熊 嗨，我是一只玩具小熊，一年前，我被别人当作生日礼物送给了我的小主人。 我是用棉花和布做成的，头戴一个美丽的帽子，身穿一件花纹的衣服。 刚来到这里的时候，小主人对我非常好，每当我的身上弄上一个小脏点，小主人就会细心的给我洗掉。 可是没有几天，小主人对我没有以前好了。 一次他没有好好写作业，被老师批评了。小主人回到家时，气还没有消，于是就拿我出气，对我一阵乱打乱踢，然后把我扔到一边，不闻不问。 可是小主人高兴的时候，也会亲吻我，但他发脾气时让我很难忍受啊。 一个晚上，我躲在墙角，伤心的哭了，一边哭，一边自言自语述说着自己的不幸遭遇。 我的话被小主人听到了。小主人觉得自己做错了，就向我说：“对不起，以后我会好好对待你的。” 我原谅了小主人。 从此以后，小主人对我非常好。 我有许多玩具，有力大无比的变形金刚，有战无不胜的孙悟空，还有得意洋洋的大公鸡，但那辆威风凌凌的坦克车，却让我百看不厌，是我生日那天我朋友送给我的，也送给了我几颗子弹。 我的坦克车是深绿色的，坦克车上还有一些奇形异状的花纹，令它更像一辆真正的坦克了，它顶上还有一根像长长的缸豆似的炮筒更是栩栩如生，有着一圈一圈的花纹，坦克车的下面有圆形的轮胎，带着一条乌黑的履带。 想玩得时候，只要往炮筒上装上6颗子弹，再按一下按钮，6颗子弹就“波”“波”“波”地发射出来，令人防不胜防，所以打算明天准备带它去“打猎”。 到了明天，我和哥哥拿着这辆坦克车，去外面“打猎”。 我们走在半路上，忽然发现半空中有一只苍蝇，我和哥哥准备“抓捕”它，哥哥把炮筒移向苍蝇的翅膀上，瞄准它，然后如同一个指挥官一样命令我，打那只苍蝇，我按一下按钮，只听“波”“波”的两声，两颗子弹从炮筒里飞了出来，直冲苍蝇的翅膀，但是，苍蝇左躲右闪，灵敏地躲开了子弹的攻击，又嗡嗡地叫了几声，好像在说：“哈哈哈！ 你们敢欺负我，等100年吧！”我看着哥哥，哥哥咬牙切齿地说：“跑的了和尚，跑不了庙，算你走运，准备连续开炮。”话音刚落，就听见了“波”“波”“波”“波”“波”的声音，五颗子弹如同流星般从炮筒一一飞了出来，射向苍蝇，苍蝇顿时乱了手脚，不慎被一颗子弹击中，掉了下来，命在旦夕，频临死亡，但还在那里做垂死挣扎，最后，苍蝇以身殉职，我和哥哥哈哈大笑地走了回家。 我喜欢这个独特的玩具。我有一只可爱的小狗玩具，那是爸爸给我买的生日礼物，我可喜欢它了。 这只小狗全身有黄白相间的毛，摸起来毛茸茸的，它那水汪汪的大眼睛几乎快要被那长长的毛盖住了，那黑黑的小鼻子鼓鼓的，好像被马蜂蜇了似的，可漂亮了。你们知道吗？我们之间还有一个小故事呢！爸爸本来是在云蒙山上班的，因为照顾我转到了林业局。 那一年十月一日，因为原来的单位人手不够，所以让爸爸回到那儿帮忙。到那儿之后，爸爸把我安排好，就去忙了。 他忙完后就告诉我这有只小狗，很好玩。第二天早晨，我忙跑去看，是一只可爱的小黄狗，我给它起名叫“黄黄”。 短短7天的时间，我们之间就变的特别亲密，我都有些离不开它了。开学后的一天，和我爸一起工作的一位大爷，请我们吃饭，告诉我一个小女孩把黄黄领养了，我伤心极了。 吃完饭，回家，晚上我就梦见了黄黄的样子，慢慢消失在我面前，我哭醒了。星期六，我生日的时候，爸爸为了安慰我，就给我买了这只小狗玩具，我把它当成黄黄，让它永远陪伴着我。 每天晚上，我都要把它放在床头，让它和我一起进入甜蜜的梦乡。它已经成了我形影不离的好伙伴。 7. 一篇600字的作文,题目是：玩 中国有句古话：“玩物丧志。”意思是说，只顾玩赏所喜好的东西，因而消磨掉志气。我的老师，我的父母也经常告戒我：别玩，要认真读书。“玩”，绝对是一无是处，绝对是彻头彻尾的不求上进的代名词。 然而，我不敢苟同，我要为“玩”正名。 一天，我的表哥送给我两块铁，他说叫磁铁，两块磁铁的两端各标有“N”与“S”的英文字母。我摆弄着这两块磁铁。一不小心，其中一块掉在了文具盒上，我去捡文具盒上的磁铁，可是连文具盒也跟上来了。我感到很惊讶！ 我想：“磁铁会不会吸其他东西呢？”为此，我又搬来我的塑料文具盒，用磁铁去吸它，竟然吸不起来。这磁铁只能吸铁！我越来越觉得惊讶！ 然而最令我惊讶的还不是这些。我听人说磁铁也是铁，我便拿这块磁铁去吸那块磁铁。 我先让这块磁铁的“N”端去吸那块磁铁的“N”端，但两者就是不肯靠拢，我费了九牛二虎之力硬把它俩靠拢在一起，可一松手，又马上分开了，像冤家似的。我又试着让这块磁铁的“S”端去吸那块磁铁的“S”端，同样不肯靠拢，任凭我使出吃奶的劲，还是不能把它俩完全靠拢，一放手，又马上弹开，使了魔法似的。 我想：“S”端和“N”端会相吸吗？我拿这块磁铁的“S”端，去吸那块磁铁的“N”端。令人称奇的是，两者一见钟情，“叮”地一声粘在了一起，想分也分不开，如同一对情侣。 我想知道其中的原因，便去翻阅家中的书籍。《十万个为什么》告诉我，每一块磁铁都有两个磁极：“N”极和“S”极；两块磁铁相同的磁极相互排斥，而不同的磁极相互吸引。真可谓：同性相斥，异性相吸！ 原来如此！ 我恍然大悟：科学世界真是奥秘无穷啊！同时，我更进一步感悟到，其实“玩”并不像老师、父母讲的那么可怕，那么一无是处。不是吗？今天的“玩”磁铁引我走向了浩瀚无比的科学大海的海滩，引我不住地往科学的大海探望！ 8. 学守规 知规范 争做最美小黄人作文 下面我演讲的题目是《学守则，守规范，争做优秀小学生》。 《小学生守则》、《小学生日常行为规范》是我们的行为准则 它不仅仅是纸上条文，我们不但要记住它，更重要的是要体现在 我们的行动上。现在，我已把《规范》熟记在心，时刻用它们来对 照我的行为，使我不断地改正缺点，完善自我。 在学校，我爱护校园里的花草树木和一切公共设施，不乱扔果 皮纸屑。见到老师我能够主动向老师问好。服从老师的管理，接受 同学们的监督。 在与同学们的交往中，能做到团结同学 相互尊重，相互信任。妈妈常说“你希望别人怎样对待你， 你就应当怎样对待别人”。是啊，你对别人有礼貌，别人也同样会 尊重你。向别人问一声“你好”会给人带去一天的好心情，说一句 “谢谢”拉近了人与人之间的距离，道一声“对不起”、“没关系 ”能化解同学之间不必要的矛盾。 在家里，我尊敬长辈，孝敬父母。面对家长的批评，我能认真 听取，不顶嘴。家里来了客人，我热情、有礼貌的招待，为客人端 茶倒水。

无纺布（英文名：Non Woven Fabric 或者 Nonwoven cloth）又称不织布，是由定向的或随机的纤维而构成。因具有布的外观和某些性能而称其为布。无纺布具有防潮、透气、柔韧、质轻、不助燃、容易分解、无毒无刺激性、色彩丰富、价格低廉、可循环再用等特点。如多采用聚丙烯（pp材质）粒料为原料，经高温熔融、喷丝、铺纲、热压卷取连续一步法生产而成。

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猫爪论坛金加隆得方式1、积分签到可以获得金加隆一个2、在猫爪论坛上发主题贴得一个金加隆3、回复主题贴得0.5个金加隆4、在任务中做相对应的任务也是可以获得，每天任务不一样。

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大家学习法语前是不是都很认真的取个法语名字呢那你的名字是什么含义呢一起来看下吧1.EmmaIlyapleindebonnesraisonsdenepasappelersonenfantEmmamaisvasavoirpourquoi,ceprénomestdanslespremiersduclassementdepuisplusdedixans.Alorsbiens_r,c"estclassiqueetjolimaisc"esttoutdemêmeleprénomdeMadameBovaryetons"esttousbienfaitchierenlisantcebouquin.Emma这个名字是Emmanuelle的爱称。在希伯来语里面,immanuel是“上帝与我们同在”的意思。在日耳曼语中，Emma则意味着“家”的意思。这个名字已经超过十年名列姓名排行榜首啦！MadameBovary的名字也是它哦，一个classiqueetjoli的名字，你应该不想错过吧~2.GabrielEnplusd"êtreleprénomdegar_onlepluspopulairecesdernièresannées,c"estégalementleprénomleplusdonnéàParis.IlyaaussibeaucoupdeMarceauetdeLéonmaisexclusivementchezlesbobosdu11ème.Gabriel是希伯莱语gabar和el的派生词，这两个词分别表示“是强大的”和“上帝”的意思。它不仅是近年来最受欢迎的名字，还是巴黎最受欢迎的男孩名字3.JadeJade.C"estvraimentpasoufcommeprénomJade,jenecomprendspasl"engouementgénéral.D"accord,c"estleprénomdelafilledeJohnnyetilnousmanquebeaucoupmais_anejustifiepasd"appelersongaminparunnomdecaillasse.这个名字来源于西班牙语的Ijada，有“精美的绿色玉石”的意思，这种玉石在在东方很常见。大家还记得致命女人里面的Jade吗，刚出场的时候就觉得她美呆了！4.Gasparine:Selonlelexiquelatin,leprénomGasparineprovientde_gaspardus_,motlui-mêmedérivédusanskrit_gathaspa_quisignifie_cellequivientvoir_.Sesracineshébra_ques_ghaz_et_bar_luidonnentlesensde_lagardiennedutrésor_oude_cellequigèreunegrandesommed"argent_.根据拉丁语词典，Gasparine来自gaspardus，这个词本身源自梵语gathaspa，意思是“见到的人”。希伯来语根源：ghaz和bar赋予“宝藏的守护者”或“管理大笔资金的人”Dérivés:Gasparini,Gaspar,Gaspare,JasperetKasper.5.LouiseEncoreunefois,onapleinderaisonsdenepasappelersonenfantLouise.Déjà,touteslesLouisesontsuperchiantes.Enplus,_arimeavecmouise:superdépartdanslavie.Réfléchissez-y.和男版Louis一样这个名字来自日耳曼语的hlod和wig，分别代表“荣耀”和“战斗”，是胜利者的完美代名词比如：LouisXIV：大名鼎鼎的“太阳王”，也是在位时间最长的君主之一LouisVuitton：奢侈品牌LV创始人，是时尚界最杰出的设计大师之一6.Rapha_lLepeintre,letennismanoulatortueNinja,lesRapha_lpeuventfacilements"identifieràdespersonnalitésconnues.Enfin,sic"estpournepasêtreconnusoi-même,jenevoispastropl"intérêt.Rapha_l这个词由希伯来语rapha和el组成，rapha是“治愈”的意思，el是“上帝”的意思，合在一起就是“上帝治愈”的意思。7.LéoMoiquipensaisquelaedesLéos"étaitéteinteen2008aprèslavaguedesEnzo,Timéo,Mathéoetcetc,ilfautcroirequej"avaistort.HeureusementquelesLéoontDiCapriopourpouvoirs"identifieràunpersonnagestyléparcequetroislettres,c"estunpeujuste.在拉丁语里，Leo是“狮子”的意思，是力量和勇气的象征。在写Léo时，在E上面可加闭音符，也去掉闭音符8.PhilibertPhilibertestcomposédesracinesgermaniquesfilietberht,setraduisantrespectivementpar_beaucoup_et_brillant_.Philibert由日耳曼语的fili和berht组成，可以理解为为“很多”和“辉煌”Dérivés：Filibert，Philbert，Philiberte9.CovidBryantUnprénomtrèsambitieuxpuisqu"ilpermetdeseremémorerdeuxévénementstragiquesdel"année2020maissurtoutderendrehommageàunelégende.SurTwitter,ceprénomavraimentétémentionnémaisiletdifficiledesavoirs"ils"agitd"uneblagueoupas.在Twitter上确实提到了这个名字，但是很难说这是否是个玩笑10.FauveDulatinfalvus,commedesonascendancegermaniquefalwa,ceprénomsignifie_d"unjaunetirantsurleroux_.源自拉丁语系，如其日耳曼祖先falwaDérivés:Fauvette,Fauna,Fozia,Fausta,Faustin,Faustine,Faustina,Fustyne,FortunaetFaudel.11.CylianeCylianeestundérivédeCillian,lui-mêmetirédumotcelteceallachrenvoyantausensde_lutte_.Cyliane取自凯尔特语ceallach，意为“斗争”Dérivés:Kiliane,Kyliana,Killiana,Kylliana,Kiliana,KillianeetKylianne.12.Nathana_lDel"hébreunathaetel,ilsignifieeffectivementdieudonne.在希伯来语nathaetel中，它实际上是指“dieudonne”Dérivés:Nathan,Natana_l,Nathanel,Nathanial,Nathanie,Nathaniel,Nathean,Nathel,NattanetNaty.还记得基法一中的Lavande和Dragon吗？大家选名字的时候可以问下外教或者去查下资料，毕竟选一个好听有寓意的名字还是很重要哒！！！

球友们每日完成一场比赛，即可获得一个“开工红包”。球友们在“开工红包”中可获得随机数量的活动喷漆，最高可获得“888活动强化喷漆”的。《自由篮球》即《Freestyle2》，是韩国JOYCITY公司所研发、世纪天成代理国服运营的篮球竞技网络游戏。

苹果手机浙政钉第二次下载：浏览器搜索“浙政钉”点击下载即可。1、打开苹果自带的浏览器。2、搜索“浙政钉”，点击“前往”。3、点击图中第一个搜索结果。4、点击“下载iPhone版”。5、输入信息验证身份后，即可下载。浙政钉浙政钉2.0苹果版是一款专门为广大浙江地区政府公务员打造的内部办公软件。平台覆盖省内所有政府单位，拥有极其全面的即时通讯、协作办公、资料查询等功能，创新、开放且安全。支持pc、手机端同步操作，让广大地区公务员办公效率得到质的提升。按单位、职级、业务条线、人员类型，可快速搭建专属通讯录，提供按政务用户习惯直接搜索单位和用户信息，实现高效找人、快速建群。建设“浙政钉”开放平台，统筹通讯录、安全服务、标准规范，整合手写签批、电子签章、天地图、视联网等平台能力，谋划建设场景化的多业务协同应用。建设客户端安全、接入安全、链路安全、应用及数据安全等全链路的安全防护能力和全链路安全能力架构，对密码体系、工作文档和工作信息的转发、下载等泄密行为进行动态监测管理。

秘令昂死，喝腐，死普让的。Minions have spawned：奴才已经孵化出来了。~~^_^~~

1.in the end意思“最后、终于”。它的意思相当于finally, at last。它往往表明事情的结局,在句子中一般单独使用。如:Xiao Ming passed the exam in the end. 最后小明通过了那次考试。Ice becomes smaller and smaller until in the end it disappears completely. 冰变得越来越小,直到最后完全消失。 2.by the end of +表示时间的名词,意为“到……末为止,到……最后”,注意:如果of后面接表示过去时间的名词,那么本句的谓语必须用过去完成时态。如:How many English words had you learned by the end of last term?到上学期末为止,你学会了多少个英语单词？I had been to the Summer Palace three times by the end of last year.到去年年末我去过颐和园三次了。

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找Jacques prevert的诗歌去比如paris at night、pour toi mon amour用词简单但是很深情顺便赞一下LS推的Le Dormeur Du Val，除了Jacques Prevert的诗以外这首是我最喜欢的

1，打开手机上的wps应在浙政钉内发送文档和表格，即可多人同时编辑，或者在浙政钉群文件里创建文档，邀请同事好友一同查阅、编辑。它还会自动记录文档历史版本，联网自动同步。2，打开的浙政钉页面中找到需要发送电脑文件的联系人。3，然后点击“文件夹”图标，选择“发送本地文件”。4，在打开的对话框中选择需要发送的文件，点击打开，即可将电脑中的文件发到浙政钉了。同时在手机及电脑上打开浙政钉软件（也可以登录钉钉网页版），使用电脑端（或网页版）的“文件小助手”，选择上传WPS附件，即可在手机端的“文件小助手”里查看到您上传的文件!也可以传给浙政钉上的任何好友。

at the end1. 在(…的)结尾，到(…的)尽头；达(…的)限度，到(…的)极限2. 在终点，在一端3. 最终，终了时例句：At the end the road divaricated.在终点那条道路分叉了。《21世纪大英汉词典》Pass the message down to the people at the end of the table.把这份电报往下传给坐在桌子末端的人们。《21世纪大英汉词典》At the end of the game the audience rose to their exciting exhibition.比赛结束时观众对他们的精彩表演热烈地欢呼鼓掌。in the end最后，最终，终于，到末了；到底；结果例句：He calmed down in the end.他的情绪终于平定下来。《新英汉大辞典》I had to ask him several times for my money, and he paid up in the end.我不得不向他讨了几回账，他最后终于还清债了。《21世纪大英汉词典》His research in cancer that spanned 15 years has made considerable headway in the end.他对癌症持续15年的研究终于取得了极大的进展。所以 at the end 一般要和 of 连用，表示在。。。。尽头、末尾，而 in the end 可以单独使用，可做副词，表示最终、末了。具体可参见上面的例句。望采纳。

7月3日凌晨，《方舟：生存进化手游》对于2.0版本中的地牢模式又有了一次内容方面的更新，增加了一个新的地图——沼泽圣器。在这张新地图里面，玩家将会面对非常强大的全新BOSS巨蛙，击败BOSS之后将能获得全新的泰克科技之一——泰克发电机。接下来我就来给大家详细的介绍一些新BOSS巨蛙，以及新科技泰克发电机的具体功能。先来说说巨蛙，从字面意思上来看，它就只是一只被放大了的青蛙而已。可真的到你在《方舟：生存进化手游》的沼泽圣器对上它的时候就会发现，这个BOSS除了和青蛙一样恶心以外，其他方面的都比青蛙要强。除去两万多的血量不说，巨蛙还有一个特殊的技能，能将玩家击晕以及拉到身旁，这个特殊技能算得上是恶心了。正是因为这种特殊的技能，让巨蛙分为两个版本，在低难度下的《方舟：生存进化手游》沼泽圣器中，玩家能不费吹灰之力虐杀它，因为巨蛙的眩晕频率和眩晕值都不算是很高，虽然血量多，可玩家只要多花一点时间就能将它击杀。而在高难度下，无论是眩晕次数还是眩晕时间都已经让它接近到无解的程度了，因此高难度的巨蛙算得上《方舟：生存进化手游》地牢中最强的BOSS之一。至于击败巨蛙以后获得的奖励泰克发电器，它的作用和《方舟：生存进化手游》中普通的发电器差不多，能给各类电器发电。但是它有一个非常BUG的作用，那就是能在水下使用。这也就意味着你能在《方舟：生存进化手游》水下建造出一些高科技的机械产品，例如在自己的水上基地周围布置防御工事。

都不多！ 街球是太老了 自由是没宣传 他们都是有挂的 走了很多 他们都是坑钱的 走了很多他们都是体育类游戏 很多人不喜欢玩

popular的用法：基本意思是流行的、大众喜爱的,指受到大部分人所欢迎和喜爱的,作此解时,可用作定语,也可用作表语,常与介词in, among,连用。 意思是什么 流行的，大众化的； 民众的，大众的，公众的； 通俗的，普通的，平易的； 〈美俚〉自以为了不得的，骄傲的 popular的用法 1、popular的基本意思是“流行的”“大众喜爱的”,指受到大部分人所欢迎和喜爱的,作此解时,可用作定语,也可用作表语,常与介词in, among, with, for连用。 2、popular引申可作“通俗的”“大众(化)的”解,指适合一般人的爱好,需要或在一般人能理解的范围内,多含有贬义。作此解时,只用作定语。 3、popular还可作“普通的”“一般的”“广泛的”解。有时popular也可作“公众的”解,只用作定语,且没有比较等级。

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自由篮球里的每个位置都各有特色，看个人喜好来选择位置。选pg可以掌控整个比赛的节奏，也是因为后卫的移动速度非常快。