急，麻烦翻译并且名词解释

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

EMSA全称是Electrophoretic Mobility Shift Assay，中文叫凝胶迁移实验或电泳迁移率实验，它是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术，可用于定性和定量分析。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。首先让蛋白质与末端标记的核酸探针结合，然后在跑PAGE胶，结合了蛋白质的复合物比未结合蛋白质的探针电泳的速度要慢，这样，从PAGE胶的电泳结果就可以判断，该蛋白是否和特定序列结合或者该序列是否和蛋白结合。

没做过

凝胶阻滞或电泳迁移率变动实验（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA） （来自《养鲤鱼》微信公众号） 1、为什么看不到迁移带？ 1）蛋白样本提取质量不高，蛋白降解或者提取量不足。 2）样本中没有可以与探针结合的蛋白。 3）探针与蛋白无特异性的相互作用。 4）转膜效率低，蛋白或者探针未转移到膜上。 5）曝光或者成像时间过短。 在Super-Shift EMSA测定中看不到Super-Shift DNA/蛋白复合物带还可能有以下原因： 6）抗体没有工作。不是所有的抗体都可以用于Super-Shift EMSA，只有对非变性蛋白的表面抗原决定簇起反应的抗体才能够用于Super-Shift EMSA。 7）测定的活化的DNA/蛋白复合物中没有希望检测的构成成分存在。此时既看不到Super-Shift的带，也看不到DNA/蛋白复合物的量的减少。 8）使用的抗体过度稀释。一般10-20ul的反应液需要使用0.5-1ul原倍的抗体。 9）多抗与DNA/蛋白复合物形成大的聚集物而不进胶。在这种情况下，虽然看不到Super-Shift的带，但应当可以看到DAN/蛋白复合物的电泳带明显减少。 2、为什么实验背景高？ 1）曝光或者成像时间过长。 2）封闭时间不足或者效率不高。 3）洗涤效果不佳 4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。 3、EMSA测定需要多少量的蛋白与标记的探针？ 对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化：一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白:DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍；用粗制核抽提液，需要2-10ug蛋白形成特异的复合物。 部分纯化蛋白与粗制核抽提液应保存在-80℃、探针应保存在-20℃以防止降解。 无论探针或是结合蛋白都应避免多次冻融。 4、Poly(dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA在EMSA测定中的作用？ Poly(dI:dC)由肌苷和胞嘧啶组成。在EMSA反应中加入poly(dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中转录调节因子与标记探针的非特异结合。结合溶液中的poly(dI:dC)的用量需在正式实验前进行优化，一般用量大约在0.05mg/ml左右。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)。 为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，特异竞争探针是非标记的DNA，其序列与标记探针相同，故能与标记探针竞争与结合蛋白的反应。非特异竞争探针的长度组成和DNA探针相同，但序列不同。如果结合蛋白与标记探针的结合被特异竞争探针抑制，而不受非特异探针的影响表明靶结合蛋白的存在。特异与非特异性竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是标记的探针用量的30-100倍（w/w）。 5、用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？ 将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%，在特定条件下可用高或低的浓度。也可将TGE缓冲液（12.5mM Tris，pH8.3，95mM 甘氨酸，0.5mM EDTA）用于不稳定的蛋白/DNA复合物。在4℃进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。 当带型不紧密出现拖尾时，表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合，以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量，或盐的浓度过量不适用于这一反应。在含抽提液的带中不含游离探针或复合物，但只含探针的带中有探针表明抽提物有核酸或磷酸酶污染，应在抽提液中和结合反应中加入相应的抑制剂。

转录因子和蛋白质结合的情况可以通过多种实验来验证。以下是常用的几种实验方法：1. Electrophoretic mobility shift assay (EMSA)：通过电泳迁移实验可以观察到转录因子与DNA结合后，复合物的迁移速度会变慢。而加入竞争性DNA片段或者抗体等会破坏该结合，从而使复合物不稳定，以致迁移速度回到原来的状态。2. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay：通过在细胞内部免疫沉淀转录因子及其结合到DNA上的小段染色质并清洗后，进一步检测其结合到靶基因上（序列分析）或者使用引物鉴定附着区域是否被转录因子组件包含。3. Yeast two-hybrid assay：此实验利用了酵母细胞中两个不同功能区蛋白（例如AD和BD）构建相互作用模型。将编码转录因子和其鉴定出的结合蛋白浸入到不同功能区的酵母中进行配对，如果有关联，则证明它们可以在活细胞中相互作用。这些实验都可以可靠地验证蛋白质与转录因子之间的结合关系。在实验室操作过程中，需要根据具体情况选择合适的实验方法，同时保证实验条件的严谨性和准确性。

在EMSA实验中，根据目的不同，所需使用的蛋白质量也会有所变化。通常情况下，蛋白的使用量为1-10微克之间。但是需要具体根据实验需要进行调整。EMSA凝胶迁移实验用于研究蛋白与核酸结合的实验技术。该实验以聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础，利用电泳的原理来检测蛋白与DNA或RNA分子的配对情况。emsa实验蛋白用量1、蛋白用量的确定EMSA实验中，蛋白的使用量应该通过实验计算、考虑样品量和标准曲线绘制等操作来确定2、样品准备首先从生物样品中提取目标蛋白，并用SDS-PAGE对蛋白进行定量和纯化。通常情况下，可以将纯化后的蛋白样品以50-100微克/微升的浓度储存，并适当稀释用于实验分析。3、滴定法测定蛋白浓度滴定法常用于测定蛋白质的浓度，在EMSA实验的蛋白用量计算中也有重要作用。首先，需要准备一定浓度的荧光素化合物（如BCA），然后将标准蛋白和待定蛋白分别用不同的浓度稀释，添加适量的荧光素试剂，并根据颜色变化来测定样品蛋白质的浓度。4、选择适当的蛋白量经过滴定法测定蛋白质浓度之后，可以选择适当的蛋白量进行实验。在实验中，蛋白质的使用量通常在1-10微克之间。如果使用的蛋白过多，可能会影响实验结果，使得最终的检测信号过强，掩盖低浓度样品的信号。而使用的蛋白过少，则很难观察到目标蛋白和DNA或RNA结合的迁移带。5、实验过程中的注意事项在EMSA实验过程中，还需要注意一些重要的步骤和原则，以确保实验结果的可靠性和准确性。如样品预处理、电泳缓冲液的选择和pH值的调节等。此外，为了避免扰动实验结果，还需要注意实验条件的控制，如温度、湿度、时间和光照等因素。EMSA凝胶迁移实验中，蛋白的使用量通常在1-10微克之间，但需要具体考虑实验需求、样品量等情况进行调整。在实验过程中，还需要注意一些重要的步骤和原则，以确保实验结果的可靠性和准确性。

EMSA实验实验背景高主要原因1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。使用UVA(365nm)、UVB(302 nm)、UVC(254 nm)三种波长四款紫外交联仪，主要包括VL-1000A系列紫外交联仪（365nm）、VL-1000B系列紫外交联仪（302nm）、VL-1000C系列紫外交联仪（254nm）、VL-3000系列紫外交联仪（三种波长）满足不同的科研需求。

EMSA 凝胶迁移实验检测的蛋白与其靶分子（通常是DNA或RNA）结合后形成的复合物在凝胶上出现了迁移减缓或者移动位置发生改变。一、蛋白在胶孔中滞留，可能是由于以下几个主要原因：1、胶溶液中存在高浓度的离子：高浓度的离子可以干扰蛋白与DNA或RNA的相互作用，从而影响迁移结果。2、蛋白与DNA或RNA的比例不恰当：如果加入的蛋白太多，会出现蛋白与DNA或RNA的比例失衡，导致蛋白在胶孔中滞留。3、组装复合物时间过长：如果组装复合物的时间过长，会导致复合物形成过程不完全或者不稳定，这也会导致蛋白在胶孔中滞留。4、蛋白稳定性不佳：如果蛋白质无法在凝胶电泳过程中保持稳定性，也会导致其在胶孔中滞留。蛋白质胶孔滞留问题的解决方法是：1、减少离子浓度2、调整蛋白与DNA或RNA的比例3、适当缩短组装复合物的时间，并检查蛋白的稳定性。4、在加载样品时，应尽量避免将蛋白团块直接加入凝胶孔中，而应该将其预先均匀混合。如果以上方法仍然不能解决问题，可能需要重新优化实验条件。

每个对照组的目的：1. 看光有探针，没有其他成分时，探针的位置，应该位于最下方。不然说明探针里面有杂质，影响电泳2. 这个是看蛋白和探针的结合，是实验目的3. 看探针结合的特异性。如果冷探针可以竞争结合，阻碍了标记的探针，说明2中的结合是特异的4. 目的和3相同。突变的冷探针应该对2的结果没有影响5. 也是判断特异性，这次是看蛋白的特异性，和抗体结合后，就会有super-shift。如果没有，说明是其他的蛋白结合。

1.EMSA中一般都是用P标记的探针，具有放射性，要是用生物素标记的话，放射性就小了，但是花的钱就多了。这个实验要是样本不多的话，大约花费4000左右吧，最重要的是放射性的问题，必须有磷屏，否则没法做。2.首先说应该用磷酸化的P65抗体，一般都用santa cruz公司的。并且有分装的，420块钱100μl，你要是做得少的话可以选择分装的抗体。3.还有就是免疫组化也是可以的。还有一种更好的方法就是promega的双荧光素酶报告系统，采用海肾和萤火虫两种荧光素酶，一种报告目的基因，一种报告内参，很好的方法，但是很贵。总体来说，做EMSA和双荧光素酶是最好的方法，算是定量，但是EMSA有放射性，双荧光素酶比较贵。western和免疫组化只能用来半定量，但是做的人比较多，也能发高水平的杂志，相对来说比较简单，也省钱。

生物标记emsa中可能出现探针生物素丢失　　EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合...　　BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。

EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等; 2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等; 3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失; -1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1 蛋白被降解; 6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v) 7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质; 8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间; 9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染组氨酸标签蛋白的纯化

那这几种技术要同时用吗？ChiP与EMSA的区别是什么呢？

不会是loading buffer 出问题沉淀堵孔了吧一般不会的哦。。。。我没有做过，，猜测猜测……

欧洲主流的保温壶都是用玻璃内胆的，玻璃内胆和市场中低端的玻璃内胆有以下区别 1、玻璃不能含重金属。 2、玻璃镀层须为纯银，加工不能使用石棉等危险物质。 3、 玻璃胆为人工制造，成本和耐用性大大提高。 4、人工制造的玻璃胆在内壁表层有许多不规则纹路和毛细微孔，饮品入内可以形成如紫砂壶相似原理的缓释氧化和保温的作用，因此人们喜欢直接用玻璃保温壶盛放咖啡和茶类饮品，而不是单纯的热水。 5、容量基本为1升至1.5升，设计原理是考虑到正常人3-5小时的饮料容量。避免‘老水"。 6、人工内胆对水中的重金属等杂质的吸附能力比不锈钢和机器玻璃胆有更好的表现，而且由于玻璃结晶自然形成，毛细孔弧度天然，更加容易清洗。 7、玻璃内胆无法和不锈钢内胆的强度相提并论，一般用于办公和居家使用。不锈钢内胆适合高强度和户外场合使用。 8、不锈钢内胆必须使用优质不锈钢，否则可能存在重金属或锈蚀的风险。

首先，你需要确定你的目的蛋白正确融合上了GST标签，建议先用anti-GST抗体对lysis上清做个western。当然如果你和你同学用的是同一个质粒的话，那么这一步就不必了。若标签没有问题，你在Flow Though里又可以在目标分子量大小处检到蛋白的话，那么出现这种情况只可能是glutathione、柱子以及buffer的问题。关注你所使用的GSH的保存条件、状态以确保没有被氧化；换一批Glutathione Sepharose 填料或用你同学用过的柱子试试；视情况对binding 的PH、盐浓度、DTT浓度做个优化 ，调整washing 及elution buffer glutathione 浓度。必要时甚至可以考虑更换缓冲体系。没有见到你的protocol所以不好更具体的说，但是需要强调的一点是，不要完全依赖protocol。不同的蛋白个性差异很大，同一个protocol做相同类型的不同的蛋白可能会得到完全不同的结果，因此很多时候对各个影响因素做若干水平的正交实验来确定一个符合实际需要的条件 是往往是必须的。

poly(dI:dC)（dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？ 它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)（dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)（dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)（dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)（dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用...poly(dI:dC)（dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？ 它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)（dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)（dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)（dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)（dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用于凝胶迁移反应，它们会带有目的蛋白的结合位点。

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一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。扩展资料由于很多研究的TF不具有结合的特异性，所以即使发现TF和被研究的寡核苷酸探针结合，也不表示在体内该TF不能和其它寡核苷酸结合，运用一些生物信息学 软件，可以模拟表示TF与基因启动子区寡核苷酸结合的具体情况，发现TF可以和启动子区PUTATIVE 结合。同时，由于EMSA在体外不能模 拟细胞内众多生物分子的相互作用，比如，某一TF在细胞内由于受到其它TF的协同或者修饰后才能与寡核苷酸结合的话，那么在体外是不能重现这一结果的。参考资料来源：百度百科-EMSA （凝胶迁移）

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。2)作这样的实验需要什么试剂？凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用g-32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe?/sup系统（a,b）（目录号P1420，P1430，P1440，P1450，P1460）可用于同位素标记的RNA的体外合成，DNA5`末端标记系统（目录号U2010）用于制备DNA探针，结合反应所需的组分有：含盐的溶液（氯化镁，氯化钠，或氯化钾）、缓冲体系（Tris-HCl或HEPES）、还原剂（DTT）、甘油、非特异的竞争DNA（poly(dI:dC)?dI:dC)，也可能含非离子去污剂。在结合蛋白和同位素标记的探针作用后，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物，随后将凝胶干燥并放射自显影，或用PhosphorImage?/sup分析。3)凝胶迁移实验系统提供了什么试剂？Promega公司提供一种凝胶迁移实验系统检测DNA结合蛋白，系统可作为这类实验的 一种正对照。系统包括目的寡核苷酸，对照DNA结合蛋白，结合缓冲液，用于寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统（目录号E3050）包括含重组AP2蛋白（AP2抽提液）的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是从表达AP2蛋白的大肠杆菌中提取的。另外，Core系统还含SP1同源寡核苷酸，凝胶迁移结合缓冲液（5′），和能作20次对照实验的HeLa核抽提液。Complete系统（目录号E3300）含另外5个双链寡核苷酸，分别是AP1、OCT1、CREB,、NF-kB、 TFIID结合位点的同源序列。这些寡核苷酸可以在末端标记后用作特异性探针，或在竞争实验中用作非特异性探针。参考凝胶迁移实验技术手册TB110获取更多的资料。4)成功进行凝胶迁移实验，需要优化哪些因素？凝胶迁移实验在理论上很简单也很快速，但要成功地进行凝胶迁移实验，需要优化一些参数，这主要受结合蛋白的来源和探针结合位点特点的影响。以下是需要优化的因素：抽提液的制备（核酸酶和磷酸酶污染会使探针降解），结合蛋白的浓度，探针的浓度，非特异性探针的浓度，缓冲液的配方和pH, 聚丙烯凝胶电泳的特点和电泳条件，保温时间和温度，载体蛋白，是否有辅助因子（比如锌，或镉等金属离子，或激素）。总之，反应总体积应最小（20ul）。为满足一般要求，结合缓冲液含4%甘油，1mMMgCl2, 0.5mMEDTA, 0.5mMDTT, 50mMNaCl, 10mMTris-HCl(pH7.5), 0.05mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC,或10mMHEPES(pH7.9), 50mMKCl, 1mMDTT, 1mMEDTA, 10%甘油，0.05mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC可作为优化实验的起始。参考凝胶迁移实验技术手册TB110获取更多的资料。5)提供了哪些同源的多核苷酸引物，这些引物的序列来源是什么？有各类dsDNA探针，它们含各种转录调控因子的同源结合位点。下表列出了所能提供的探针，和这些引物序列的出处。转录调控因子探针---------------------------------------探针名 目录号 序列（上链） 序列的出处Sp1 E3231,E3232 5`-ATT CGA TCG GGG CGG GGC GCG-3` SV40启动子（1）AP1 E3201 E3202 5`-CGC TTG ATG AGT CAG CCG GAA-3` 胶原酶基因TRE（2）AP2 E3211 E3212 5`-GAT CGA ACT GAC CGC CCG CGG CCC GT-3`人金属硫堇II a(3)基因NF-kB E3291, E3292, 5`-AGT TGA GGG GAC TTT CCC AGG C-3`鼠Igk轻链基因（4）Oct1 E3241 E3242 5`-TGT CGA ATG CAA ATC ACT AGA A-3` Ig重链基因（5）CREB E3281 E3282 5`-AGA GAT TGC CTG ACG TCA GAC AGC TAG-3`大鼠生长激素抑制基因（6）TFIID E3221 E3222 5`-GCA GAG CAT ATA AGG TGA GGT AGG A-3`belta-1球蛋白启动子只列出了上链的序列，探针是双链，下链序列和上链序列配对。黑体字表明序列来源于指定的基因序列，转录调控因子结合的序列用下线表明。一般而言，周围的核苷酸是任意。6)在DNA探针的选择上，要考虑哪些重要因素？目的DNA的长度应小于300bp，以有利于非结合探针和蛋白DNA复合物的电泳分离。双链的合成的寡核苷酸和限制性酶切片段可在凝胶迁移实验中用作探针。如目的蛋白已被鉴定，则应用短的寡核苷酸片段（约为25bp）,这样结合位点可和其他因子的结合位点区别开。长的限制性酶切片段可用于对推定的启动子/增强子区域内的蛋白结合位点定位。随后可用DNaseI 印迹对蛋白结合的特异区域在DNA序列水平上作出分析。7)用以下一些转录调节因子和HeLa细胞核抽提物可形成哪些复合物：AP1, AP2, CREB, NFkB, Oct1, Sp1, TFIID, TFIIB。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白的来源时，每1个转录调节因子和它相关的DNA同源序列结合形成特征型的结合形态。以下的文字描述了每一个单独的转录调节因子，包括识别的同源序列，因子的大小，特定的结合条件，以及和HeLa细胞核抽提物可形成的复合物的数目。1．AP1：AP1（激活蛋白1）是一个转录调节因子，它结合的同源序列为5`-TGAGTCA-3`。当基因的启动子区域存在AP1的结合位点时，这些基因可以被诱导，比如用佛波酯可诱导蛋白激酶C（2，7）。在细胞中，AP1形成c-Jun或Jun相关蛋白的同聚双体，或者形成c-Jun或Jun相关蛋白和c-Fos或Fos相关抗原（Fras）的异源双体。Fos蛋白自身不能形成同聚双体，并不能单独和AP1结合位点结合。c-Jun蛋白是一个40kDa的单体蛋白并通过亮氨酸拉链形成同聚双体。在HeLa细胞中，AP1的主要形式是c-Jun蛋白的同聚双体。在凝胶迁移实验中，形成一个特异的复合物。当作凝胶迁移实验测定AP1的活力时，除了基本的溶液组分外，应将0.01mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC),100ug BSA, 5mMDTT加入到结合缓冲液中。如用纯化的蛋白，则用1-2ug的蛋白来检测迁移复合物。2．AP2：AP2是一个转录调节因子，可分别作为TPA-和cAMP诱导因子（10）。它是一个52 kDa的蛋白，识别的同源序列为5`-CCCCAGGC-3`或5`-GCCNNGGC-3`（3）。这个因子对视黄酸特别敏感，可能在形态发生中起着重要作用。HeLa细胞核抽提物和AP2同源DNA探针形成一个特定的复合物。用纯化的蛋白作凝胶迁移实验时，应用20-50ng的蛋白。3．CREB：CREB是一个37 kDa的转录调节因子，对cAMP应答，识别5`-T（G/T）ACGTCA-3`DNA同源序列（6，11）。它含亮氨酸拉链结构而形成同聚双体，相关的基本结构域和c-JunDNA结合结构域同源。当用HeLa细胞核抽提物时，能和CREB同源序列形成一个复合物。4．NF-kB：NF-kB最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现，形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49（也可称为p52），p75（c-Rel）,p68(RelB)。p65，p68，p75单体起反式激活作用。p50，p49（p52）单体具有DNA结合活力，但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体，类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。IkB和p65单体结合，阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。在体外高浓度的p65能形成同源双聚体，能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应（14）。p49和p50也能形成同源双聚体，但在细胞中的浓度很低。通常，在作NF-kB的凝胶迁移实验时，在20ul的反应体积中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸（pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。当用纯化的蛋白时，250-300ng足以形成凝胶迁移复合物，而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟，在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中，因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时，可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物，即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49，p50，p65的细胞中，可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物（p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65），如果存在高浓度的p65，可检测到微量的p65/p65。下列试剂可加强NF-kB在体外的结合：mM的GTP，ATP，精胺，亚精胺，钡或钙离子，ng的Co+3(NH3)6（12）。5．OCT1：OCT1是OCT转录调节因子家簇中的一员，显然在哺乳细胞中存在比较广泛（5）。POU结构域包括POU-box和Homeo结构域。当用HeLa细胞核抽提物时，可检测到一个与OCT1同源探针形成的序列同源凝胶迁移复合物。6．SP1：SP1是一个O-糖基化的转录调节因子，它识别10个核苷酸长度的同源序列5`-GGGGCGGGGC-3`（1）。核心识别序列是5`-GGGGCGGG-3`。同核心序列相似的序列常存在于启动子中。SV40的早期启动子就是一个例子，它是第一个可以结合SP1的启动子。根据糖基化的不同，它的分子量在95-105kDa，DNA结合结构域中的三个锌指纹决定了序列的特异性。HeLa细胞核抽提物与SP1同源探针形成特异的凝胶迁移复合物。7．TFIID/TFIIB：TFIID和TFIIB是基本的转录调节因子，参与RNA聚合酶II启动子的基本的转录（16）。TFIID与真核启动子的TATA区域形成特异的DNA结合。TFIID由几个蛋白组成，而其中的TATA区域结合蛋白（TBP），参与TATA序列的结合。TFIID的其他的蛋白组分被称为TBP-相关因子（TAFs）。用TFIID探针寡核苷酸和HeLa细胞核抽提物，可得到一个微弱的凝胶迁移带，但很难确定为是TFIID序列特异凝胶迁移复合物。纯化的重组的TBP很难作凝胶迁移实验，这部分是由于TBP存在很强的正电荷，导致TBP/DNA复合物很难进入凝胶。纯化的TBP形成二聚体后不能结合DNA（17）。因此形成的二聚体可参与DNA结合。TFIIB不单独与DNA结合，但与TFIID结合后增强它与DNA的结合。TFIIB与预启动复合物结合后，致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有重要作用。当用纯化的TFIID作凝胶迁移实验时，poly(dI-dC)不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油，20mMTris(pH8.0), 10mMMgCl2, 2mMDTT, 89mMKCl。对TFIID的凝胶结合实验中，可加入poly（dG:dC）?dG:dC。形成的复合物在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离，凝胶组分是：0.5′TBE, 6%聚丙烯酰胺凝胶(19:1丙烯酰胺:双叉),4mMMgCl2, 0.02%NP-40, 电泳缓冲液组分是：0.5′TBE，4mMMgCl2, 0.02%NP-40。当研究含TFIID和TFIIB的复合物时，应从结合缓冲液，凝胶，和电泳缓冲液中去除MgCl2。这些是一般的要求，用不同的细胞抽提物和TFIID、TFIIB形成复合物作凝胶迁移实验时，应对多种因素进行优化以达到理想的条件。8)在一次凝胶迁移实验中，用多少量的蛋白质或抽提物，和标记的DNA探针？对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化，一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白：DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍。用粗制核抽提液，需要1-20ug蛋白形成特异的复合物。所加入反应的探针的量是50，000-200，000cpm32P-标记的探针（高特异活性），反应体积为1-5ul。这相当于10-50fmoles的DNA探针。探针应保存在-20oC以防止降解，在合成或标记后1-2个星期内必需使用。无论探针或是结合蛋白应避免多次冻融。9)能用体外翻译法制备目的蛋白质吗？Promega没对所有的转录调节因子作这类测试。一般，用麦胚抽提物作哺乳细胞转录因子或DNA结合蛋白的体外翻译，兔网织红细胞溶裂解液可能含有内源哺乳细胞转录因子或DNA结合蛋白。但TNT？/sup>兔网织细胞溶解液系统（a,b,c,d）与TranscendTM 生物素标记的tRNA(目录号E3201)一同使用，翻译了转录调节因子AP1（c-Jun），它使AP1同源寡核苷酸（目录号E3201）产生的迁移效果和重组的AP1相同（18）。TNT？/sup>T7偶联的麦胚抽提物（b,c,d,e）在体外翻译了c-Rel。这一蛋白特异地使免疫球蛋白k轻链增强子探针产生迁移。在c-Rel结合反应中加入体外翻译的MAD-3（IkB家簇中一员）可干扰其相互作用。10)poly(dI:dC)?dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)?dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)?dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)?dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)?dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用于凝胶迁移反应，它们会带有目的蛋白的结合位点。11)用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%（30：1丙烯酰胺：双叉），在特定条件下可用高或低的浓度。PH, 聚丙烯酰胺的浓度, 丙烯酰胺：双叉丙烯酰胺的比会影响复合物在凝胶中的迁移。大多数蛋白用10-15伏的电压，解离快的蛋白用短时间和高的电压（30-35伏的电压），电泳时所用的TBE和TAE必需是新配制的，无沉淀。低的离子强度和丙烯酰胺基质的`箱子效果`有助于复合物的稳定。也可将TGE缓冲液（12.5mMTris,pH8.3, 95mM甘氨酸，0.5mMEDTA）用于不稳定的蛋白/DNA复合物。可在4oC进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。加样样品液中的色素会导致不稳定复合物的解离，应用不含考马斯兰和二甲苯蓝的加样样品液。当带型不紧密出现拖尾时，表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合，以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量，或盐的浓度过量不适用于这一反应。在含抽提液的带中不含游离探针或复合物，但只含探针的带中有探针表明抽提物有核酸或磷酸酶污染，应在抽提液中和结合反应中加入相应的抑制剂。目前可用高强度琼脂糖凝胶分离蛋白/探针复合物（Metaphor?/sup/agarose）。12)如何在一个特定的复合物中确定一个蛋白质的存在？部分纯化的蛋白或粗制核抽提液和一个特定的探针可形成一个或几个特异的蛋白复合物。多个复合物的存在表明蛋白降解，应在制备抽提液的溶液中和结合反应中加入蛋白酶抑制剂。确定复合物中蛋白的特征可能会困难，但有一些方法作这方面的研究。如有目的蛋白的抗体，可进行超迁移实验，抗体和蛋白/探针复合物中的蛋白结合，使复合物的迁移延迟，形成超迁移。增量的抗体加入到结合反应中。抗体可加入到蛋白和探针反应后，也可将抽提物与抗体结合后，再加入探针。取决于抗体的特定的抗原决定簇，前者有利于超迁移复合物地形成，后者阻止复合物的形成导致原复合物的强度的减少。在大多数实验中，应对抗体作滴定，先使抗体：蛋白的摩尔比为1：1，然后应需要增加抗体的量。当有纯化的蛋白时，可用它们和实验的带型迁移复合物比较。除超迁移实验外，复合物中蛋白的特征也可用UV交联和标记转移来分析。在均质标记的探针和细胞核抽提物保温后，用UV照射使复合物交联，随后用DNA酶降解未保护的探针。需用均质标记的探针，因DNA酶会从末端标记的探针中除去标记。和保护的几个核苷酸交联的蛋白在变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离，干燥，放射自显影。结合蛋白的分子量可和标准分子参照物比较。也可用目的蛋白的抗体对复合物作Western印迹分析（20）。如一个蛋白和DNA探针的特定序列结合，可用含保守结合序列的竞争寡核苷酸，以及突变体来确定它的特征。也可用定点突变将保守序列结合位点改变来研究复合物的形成。参考资料1. Briggs M R et al 1986 Science 234, 472. Lee W et al 1986 Cell 49, 7413. Williams T et al 1989 Genes Dev 2, 15574. Sen R and Baltimore D 1986 Cell 46, 7055. Parlsow T G et al 1984 Proc Natl Acad Sci USA 81, 26506. Montminy M R et al 1986 Proc Natl Acad Sci USA 83, 66827. Angel P et al 1987 Cell 49, 7298. Chiu R et al 1988 Cell 54, 5419. Rauscher F J et al 1988 Cell 52,47110. Imagawa M et al 1987 Cell 51, 25111. Berkowitz L A and Gilman M Z 1990 Proc Natl Acad Sci USA 87, 525812. Baeuerle P A 1991 Biochim Biophys Acta 1071, 6313. Duckett C S et al 1993 Mol Cell Biol 13, 131514. Urban M B et al 1991 EMBO J 10(7), 181715. Dynan W S and Tjian R 1983 Cell 35, 7916. Peterson M G et al 1990 Science 248, 165217. Coleman R A et al 1995 J Biol Chem 270, 1384218. Beckler G and Hurst

单抗与多抗都可用于Super-Shift EMSA,但多抗可能与DNA/蛋白复合物形成大的聚集物而不进胶。在这种情况下,虽然看不到Super-Shift的带,但应当可以看到.

1. 避免缓冲液高浓度电供体基团比:NH4甘氨酸精氨酸Tris等等;2. 各种缓冲液能强螯合剂EDTAEGTA等等;3. 各种缓冲液能高浓度强原剂比DTT防止二价Ni原; 4. 能含离型垢剂比SDS防止Ni流失;-1mMPMSF防止目5. 破碎细胞候建议加入蛋白酶抑制剂比0.1蛋白降解;6. 缓冲液加入甘油防止蛋白间由于疏水相互作用发聚集沉淀甘油浓度高达50%(v/v)7. 应避免含碳酸氢钠柠檬酸等物质;8. 缓冲液NaCl浓度应300mM2M间;9. 加入变性剂促溶盐酸胍(高6M)尿素(高8M) 10.加入非离型垢剂TritonTweenNP40等高2%减少背景蛋白污染除核酸污染组氨酸标签蛋白纯化没有意义建议自己下去查查资料

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等;2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等;3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失;-1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1蛋白被降解;6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v)7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质;8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间;9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染组氨酸标签蛋白的纯化感觉这样的提问没有意义建议自己下去查查资料

暖宝宝贴过安检不会响。暖宝宝又叫暖贴，是一种可供取暖的工具。反应原理为利用原电池加快氧化反应速度，将化学能转变为热能。为了使温度能够持续更长，使用了矿物材料蛭石来保温。因为在使用前不能发生反应所以袋子材质要很特别，由原料层，明胶层和无纺布袋组成。无纺布袋是采用微孔透气膜制作的，它还得有一个常规不透气的外袋。在使用时，去掉外袋，让内袋（无纺布袋）暴露在空气里，空气中的氧气通过透气膜进入里面。将暖贴的真空包装沿切入口打开，揭去后面的衬纸，贴于内衣的外侧，用手铺平即可。可贴于人体的肩部、腹部、背部、腰部、胃部及相关关节部位。注意不可将暖贴贴在容易撕扯坏的衣物上，比如毛衣。

不知道。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。？！！！！！

midnight:是指:午夜,子夜,半夜12点:12o"clockatnight.midnight还可作定语用:amidnightswim;amidnightvisit.午夜游泳；午夜的访问.caughtthemidnightshow.去看午夜演出midnight用什么介词？1.在午夜,用介词:atatmidnight.Wepulledinatmidnight.我们午夜抵达Thatshopclosedatmidnight.那家商店营业到午夜十二点。2.午夜前,用介词:beforebeforemidnight.3.午夜后,用介词:after,beyondaftermidnight.beyondmidnight.午夜之后4.一直到午夜,用介词:until(also:till)Theytalkonuntilmidnight.他们继续谈话直到半夜。

附庸高雅，很闲适、很小资、很儒雅，告别过去，重获新生。

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郑伊健完全档案 中文名：郑伊健 英文名：Cheng Yee-Kin, Ekin 出生日期：1967年10月4日 生肖：羊 星座：天秤座 出生地点：香港 籍贯：恩平 身高：179cm 体重：65kg 血型：B 学历：大同中学 家庭状况：父母 一兄一妹 能操语言：广东话 就职于：BMG唱片公司 婚姻：未婚，女朋友是梁咏琪 嗜好：打机 电脑 运动 口头禅：收工啦！ 收集物品：古董 玩具 电动玩具 睡前习惯：看书 生气方式：不会发脾气 但会当场说出来 满意身体部位：鼻子 初恋年纪：18岁（中学毕业） 初恋感觉：不记得啦，无味吧 喜爱异性：大而化之的男性化一点的女孩 欣赏异性：个性、内在 座右铭：人人为我 我为人人 特殊专长：直觉，算不算？ 不做艺人做什么：开一家温馨的小店 最喜爱公仔：大口仔（TABO） 最喜爱的国家：日本 最尴尬的事：裤子破掉（当场裂开） 最喜爱歌手：王 菲 张学友 Beatles 最喜爱演员：周润发 Mr.Bean Tom Hanks 最喜爱人物：DAD & MOM 最喜爱动物：狗 最喜爱食物：芒果 布丁 鳗鱼 最喜爱颜色：黑 白 蓝 最喜爱地方：家 里 最喜爱科目：美 术 最喜爱季节：秋 天 最喜爱衣服：休闲装 最喜爱漫画：《怪医秦博士》《海虎》 最喜爱GAME：《生化危机》《萨尔达传说》《炸弹人》 最满意作品：没有 因为开始满意自己，就是开始退步 最讨厌的事：被人骗 电视剧：01.镭射青春(1989) 02.闭门一家千(1990) 03.阿二一族 (1990) 04.男人勿近(1990) 05.命运快车(1990) 06.天若有情(1990) 07.蜀山奇侠(1991) 08.金蛇郎君(1991) 09.血玺金刀(1991) 10.月儿弯弯照九州(1991) 11.九反威龙(1992) 12.九二钟无艳(1992)13.王重阳传奇(1993)14.南帝北丐(1993)15.孤星剑(1993)16.笑看风云(1994)17.婚姻物语(1994) 18.杀手风云(1995) 19.双面伊人(1999)20.鹿鼎记(2000) 21.新楚留香（2000） 电影：01.现代应召女郎（1992）02.追男仔（1992） 03.超级学校霸王（1992） 04.风尘三女侠（1994）05.神龙赌圣之旗开得胜（1994）06.男儿当入樽（1994） 07.新英雄本色（1994） 08.人鱼传说（1994）09.庙街故事（1995） 10.不道德的礼物（1995） 11.古惑仔之人在江湖（1995）12.古惑仔之猛龙过江（1996）13.古惑仔之只手遮天（1996） 14.百分百感觉（1996） 15.百分百feel（1996） 16.97古惑仔之战无不胜 17.爱上百分百英雄（1997） 18.风云（1998） 19.98古惑仔之龙争虎斗（1998） 20.幻影特工（1998） 21.中华英雄(1999) 22.极速传说(1999) 23.东京攻略(1999) 24.决战紫禁之巅(1999) 25.蜀山之紫青二世(2000) 26.胜者为王(2000) 27.辣手回春(2000)28.暗战2(2001) 29.BadBoy特工(2001) 30.我老婆不够秤(2002)31.千机变(2003)32.恋之风景(2003) 33.双雄(2003)34.炮制女朋友(2003)35.安娜与武林(2004) 36.见习黑玫瑰(2004) 37.六壮士（2004） 38.阿孖有难（2004） 伊面金曲 2004年 外家……内伤 2000年 郑伊健卡拉OK精选 Ekin Magic 东京攻略特别版 珍重伊健十年精选 （首张国语精选辑） Beautifual Life 92年 不要哭了 （第一张个人粤语专辑） 93年 撒哈拉 94年 On Stage 姐妹情深电影原声大碟 郑伊健MTV个人专辑 The Best Show 新歌+精选 95年 earth 96 Life （伊健首张EP专辑） 96年 郑伊健 金碟精选 古惑仔之人在江湖 电影原声大碟 如果天空要下雨 爱发狂 伊健.十三 古惑仔II之猛龙过江电影原声达碟 古惑仔III只手遮天电影原声达碟 97年 古惑仔战无不胜电影原声大碟 偏爱你 Senses 身形别版CD 包括： 儿童乐园 友情岁月 热血燃烧 一个为你干去蹈火海的人 全世界的眼泪 直至消失天与地 如果天空要下雨 The Best Show 2 新歌+精选 98年 古惑仔龙争虎斗电影原声大碟 郑伊健 13+ 98 风云雄霸天下 电影原声大碟 99 年 中华英雄电影原声大碟 戏中戏精选 Ekin Magic + 极速传说电影原声大碟 双面人 星路历程 电影中的郑伊健，演古惑仔时有型有款，成熟稳重，做歌手唱歌时则情深款款，与现实中 的他判若两人。 舞台后的伊面，绝对是个童心未泯的大男孩，爱电脑，爱玩具，爱打游戏机，凡是能玩的 东西，他都乐此不疲。 伊面坦言：“孩童时代，真是贪玩，铁皮玩具呀，模型呀，玻璃棋 呀，反正什幺都觉得好玩。最喜欢去的地方就是公园，游乐场，足球场， 有时到了礼拜天，一玩就是一天，妈咪常常为找我和兄妹到处奔忙。 贪玩，是男孩子的天性。然而玩得过火，也常常伤筋动骨。伊面回忆起有一次玩秋千，正当玩得兴起，一不小心跌到地上，痛得直喊妈妈，吓得哥哥脸色发青，但为了不被家里人 发觉，仍然装做若无其事。伊面说起这件事，仍露出一脸痛苦的表情：“从秋千上跌下来 以后，每次看到秋千，都有一种惊骇的感觉。” 步入娱乐圈后，虽然工作千头万绪，唱歌，拍戏连轴转，但只要空闲，伊面仍忘不了忙里 偷闲，尽情的玩上一回。 他的观点是：“工作时认认真真，拼命地干，争取做得最好，闲时约上几个朋友，痛痛快快地玩，在玩耍中把不愉快的事情忘掉，如果一个人不懂得调节 自己的生活，在现代快节奏的生活中，是有可能垮掉的。”

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可以控制水量的多少，起到节流的作用，当然如果水量很少的时候水温也会稍稍变高一些

暖宝宝是很多女生冬季必备保暖神器，怕冷的女生在冬天可以使用暖宝宝经取暖，将暖宝宝贴在衣服上，能够起到强大的保暖效果，保暖时间也比较持久。也有很多女生在冬天不喜欢穿厚重的衣服，这个时候暖宝宝也就能够派上用场了。那么你对暖宝宝了解多少呢？暖宝宝的发热原理，暖宝宝不撕背胶会发热吗？暖宝宝的主要材料是活性炭，铁，蛭石，无机盐等。暖宝宝的发热原理是利用铁氧化反应进行发热放热，同时原材料活性炭也有强大的吸附性，可以吸附水蒸气，在化学作用下迅速发生反应放出热量。总而言之，暖宝宝主要采用化学反应原理进行发热放热，起到取暖保暖效果。 大家在使用暖宝宝的时候，如果不撕背胶会发出热量吗？暖宝宝的背胶不但能够起到粘附作用，同时也能够起到封闭作用，如果不撕背胶的话是不会发热的，因为不撕背胶暖宝宝接触不到空气就不会发生化学反应，就不会产生热量，所以大家在平时使用的时候要先将背胶撕掉。 最后还要提醒大家，在平时使用暖宝宝的时候，一定要隔着衣服去使用，因为暖宝宝最高温度可达到50~60度左右，如果直接接触皮肤有可能会被烫伤。在使用的时候要注意安全。

　　你怎样呢 有没有偶尔想起我　　漫漫长夜再次闭上眼　　想到你就无法入睡　　好像尤其漫长呢 没有你的晚上　　变得更加遗憾了 让你离开的那天　　会变得迟钝的吧 会渐渐淡忘的吧　　总有一天会忘掉你　　In the midnight a a a midnight　　无法入眠的晚上 so sad tonight　　无法和你一起的晚上　　In the midnight a a a midnight　　想着你无法入睡的晚上　　Midnight　　再次到来的晚上 So sad　　tonight　　没有你独自面对的晚上　　In the midnight a a a midnight a　　没有你无法入睡的晚上　　midnight　　眼一睁一闭 夜晚再次降临　　离去的爱情 我的你You can"t do this to me　　够了真的够了 停止吧　　别再让我难过　　以迷恋的名义 让夜晚无止境　　虽然不想再说已经过去的事　　但看来我曾真的很喜欢你　　会一直想起的吧 会越来越思念的吧　　时间越是流逝　　无法入眠的晚上 so sad tonight　　无法和你一起的晚上　　In the midnight a a a midnight　　想着你无法入睡的晚上 Midnight　　再次到来的晚上 So sad tonight　　没有你独自面对的晚上　　In the midnight a a a midnight a　　没有你无法入睡的晚上 midnight　　那闪闪发光的 Little star 请安慰我吧　　没有任何依靠 倒下的这个晚上　　那闪闪发光的Little star 请安慰我吧　　没有任何依靠 倒下的　　满是星星的晚上 随着季节变换　　慢慢变化的夜晚　　可是我 我仍然　　是无法入睡的晚上　　再次到来的晚上 So sad tonight　　没有你独自面对的晚上　　In the midnight a a a midnight a　　没有你无法入睡的晚上　　midnight

血红蛋白测量方法一般为比色法。比色法测量的原理是被测试溶液浓度的改变，改变了溶液颜色的深浅。溶液浓度越高，溶液的颜色就越深，反之如果溶液的浓度越低，颜色就越浅。颜色的深浅直接影响了溶液对光线的吸收程度。溶液颜色越深吸收的光线越多，透过的光线越少。反之，溶液颜色越浅吸收的光线越少，透过的光线越多。通过测量透过比色池光线的强弱，可以间接测量出溶液的浓度。它的测试依据应该遵循朗伯一比耳定律，这就是光电比色法测试的基本原理。根据测试原理和血红蛋白测试机构的组成，影响血红蛋白测试的主要因素有：1、测试机构的光路系统光路系统包括，光源灯供电电路，光源灯，透镜组，滤光片，比色池，光电转换器件(光电池，光电管)等。如果光源供电不稳，滤波不好，波纹过大，供电电压过低会影响光源灯的发光强度，和光源的稳定，影响测试的准确。此时按电路的维修程序，对电路进行调试修理，使之符合要求。光源灯暗、光源灯老化发光效率降低，影响测试值，会使测试值偏低。此时应该清洁灯泡，或更换新的光源灯。如果透镜组脏，影响透镜的透光程度，会影响测试值。此时要进行清洁透镜组。滤光片使用日久会受潮、老化、生霉或脏，而影响测试，此时应该认真清洗滤光片。如果滤光片老化变质，会影响滤光片的中心波长和滤光片的带宽。从而影响测试值，此时只能更换新的相同波长滤光片。比色池脏、漏气会影响测试值，因为脏不仅会影响透过比色池的光强度，如果比色池脏了并附着有气泡，会使通过比色池的光产生反射或散射，严重影响测试结果。这时要对比色池认真清洗必要时用蛋白溶剂浸泡、冲洗排除故障。光电器件表面有灰尘或脏物会影响光的接收和光电信号的转换。此时要认真清洗，如果光电器件老化，只能进行更换。2、液路系统液路系统包括进液管、输液管、泵管、电磁泵(或蠕动泵)及供电电路等部件。进液管脏、堵、裂隙会影响进液量，或吸入气泡，严重影响测量。这时要清洁冲洗，除去堵塞，有裂隙漏气要更换进液管。输液管、泵管，主要是脏和堵或老化。脏堵要认真冲洗。对泵管，因为挤压和摩擦容易发生粘连，或老化，严重的甚至磨破而漏气，所以对泵管要及时检查。损坏要及时更换。电磁泵(或蠕动泵)的故障主要是转动不灵活，卡死不转动，或供电电路故障。转动不灵活或者卡死不转动往往由于落入灰尘，与油形成油污所至。只要认真清洗可以排除故障。如供电电路问题按电路程序修理，泵本身损坏只能更换。综上述血红蛋白测量出现故障，往往出在光路和液路。因为现代电路比较成熟，使用的器件一般经过筛选故障率较低。所以血红蛋白测量系统出现故障，一般对光路和液路进行检查大多数故障可以排除。

我最喜欢的动物狗(100字左右)语文 我喜欢的小动物是一只小狗，它全身长满白色的毛，像一团棉花糖；眼睛是圆溜溜的，像两颗宝石；耳朵是半圆形，鼻子是黑色，尾巴短短的，很可爱。 我给它爱吃的骨头，它会一块一块，一小段一小段地啃。它啃完骨头后，就会汪汪地叫几声，好像在说：“小主人，谢谢你。” 希望初中英语作文我最喜欢的动物狗，100字左右，急用！ my favorite dog dog is my favorite animal among all the animals.As we all know,dog is a lovely animal.i love it not only because of its cute shape,but also because of its loyalty.it will never betray its master.another reason why i love dog is that dog can make me happy.when i am sad,it will do everything he can to cheer me up and fet the unhappy things.so i will love dog for ever and ever. 谁有 我最喜欢的动物 英语作文 熊猫 50字左右 Panda is favored by people from all around the world and it is unique in China. These lovely animals are famous for the round shape and black eyes, who live in the southwest part of China. As its peculiarity, it has long been treated as national treasure. The government often sends pandas to other countries as the gift to show friendliness. Panda has been the important ambassador in dealing with the foreign affairs. Panda is very lazy. They sleep for a very long time and they barely move. People love them and they play the joke that you have the panda eyes, which means you don"t get enough sleep. A lot of people e to the tourist sites to witness this national treasure. There are special nurses trained to look after pandas. They like the families as they get along with each other for a long time. 熊猫受到来自世界各地人们的喜爱，它在中国也是独一无二的。这些可爱的动物因为圆圆的体型和黑黑的眼睛而出名，它们住在中国的西南部。由于它的特质，所以长期以来被视为国宝。 *** 经常把熊猫作为示好的礼物赠送给其他国家。熊猫已经成为重要的外交大使。熊猫很懒惰，他们经常在睡觉，几乎不怎么活动。人们喜欢它们，有时候他们会用熊猫眼来形容一个人没有得到充足的睡眠。很多人跑去旅游景点去看国宝。大熊猫有专业的人训练、照顾，他们就像是一家人，因为他们彼此相处了很长一段时间。 题目：我最喜欢的动物30字左右帮帮忙！ 【我最喜欢的动物】 我最喜欢的动物是小兔子！它叫“珂珂”它全身的毛都是雪白的，长着一双又长又薄的耳朵，连血丝都看得一清二楚；两只红色的眼睛，像两颗红珍珠；嘴巴向上翘，十分可爱。我也有一对像珂珂那样的大白牙，呵呵，很可爱的！ 急 我最喜欢的动物200和300字左右就行了 我家养了一只可爱的狮子狗，它的名字叫丁丁。 丁丁的脸和别的狗的不一样，它的脸短短的，头上的毛很长，只露出一双大大的眼睛。它的腿很短，跑起来就像一个大毛球在地上滚。平时睡觉或休息的时候，总喜欢爬着。 丁丁饿了的时候，就“汪汪”地大声叫，只要你给它食物吃，它立刻不叫了。中午的时候，我就带它去草地里玩耍，它就象一只出笼的小鸟，到处跑，那高兴劲就甭提了。你一见准会喜欢上它的。 丁丁不但样子逗人爱，还帮过我一个大忙呢！ 有一次，我带丁丁去公园玩。一路上，它都是东张西望，像在找什么东西似的，还翘起一条后腿到处撒尿。到了公园门口，我买了一个鸡腿，三下两下就把肉吃完，就把骨头给了丁丁。丁丁把骨头吃完了以后，“汪汪”叫了两声，好像在说：“谢谢。”走了一截路，我突然感到内急，就躲进一个树丛中，了了一桩“大事”。我想：一会儿玩什么好呢？想着想着，就到了一个玩赛车的游乐场，我一看价钱，不贵，才2.50元一圈，我坐二圈吧。我正掏钱的时候，发现钱包不在了，忽然我想起刚才在树丛中的事。我便径直跑回刚才的树丛，到处找，可就是找不到，我急得脚不停地跺，丁丁也在树丛中东闻西闻。突然，丁丁叫了几下，我以为丁丁又找到骨头了，我走过去一看，原来是我的钱包，我高兴极了，抱起丁丁说：“真乖。” 我们玩了很久才回家。出公园门时，我又买了一个鸡腿，这次，骨头和肉都是奖励丁丁的。 唉！你看，我家的丁丁多可爱。 我最喜欢的运动 英文 最好100字左右 My Favorite Sports Fishing is my favorite sports. I often fishing with some of my friends on the Sand River near the city during weekends in spring,summer and autumn. This makes me happy,satify and healthy actually. In spare time, fishing under the blue sky and white clouds is really a good thing to pass the time. Through fishing, we can get a lot of benefits. Firstly, I can do more exercises outside and breathe fresh air in the suburb, and what"s more,I can enjoy the beautiful scenery of nature. So it always made me a pleased mood and kept me fit. Secondly, I could catch wild pure fish without any pollution and do not pay any money. I could be excited when fish s caught by myself,because the happiest thing in life is free. Finally, I can consider something during waiting for someone fish to eat the biat which may be useful for work and life in future. Sum up in a word, fishing is my favorite, I like it very much. It will be very helpful and very useful to my daily life. It could make me mental and physical health.Material and mental lives both are good condition is the true happy life. 《我最喜欢的动物》作文100字怎么写 我最喜欢的动物小兔子，它不仅天真烂漫和纯洁，有时也非常讨人喜欢。 以前，我外婆有一只小兔子，似乎离娘不久，虽然有些调皮，也看的出它们得天真来。 它有一对小小的通红的长耳朵；小小的鼻子；一双圆溜溜的红眼睛，想两颗红色玻璃珠一样；有一个短尾巴；它的毛像冬天的雪一样洁白；形成一只可爱又机灵，非常讨人喜欢的小白兔。 小白兔喜欢吃胡萝卜和青菜，怎么吃都吃不厌。 小白兔就像我的好朋友一样，整天几乎对我寸步不离似的。吃饭的时候，他那狼吞虎咽的样子真令人发笑。反正，我能看见它就是了，玩的时候，我们一起玩，它在我左右伴随我，不过总有一天我们会分开的。 因为我得去上学了，差不多每到寒假或暑假，我才能去外婆家，再次见到可爱的小白兔了。 不仅是这一点，小白兔还有很多特点呢，而且我非常喜欢它那满身洁白的羽毛，像天上的白云一样洁白，你喜欢它哪个地方呢？请你尽快告诉我。不仅小白兔很可爱，每一个人，每一只动物都有他的可爱之处，都有天真和冷漠的一面，你说是不是呢？ 我最喜欢的一句论语(300字左右) 【子曰：“温故而知新,可以为师矣.”《为政》】出自《论语。为政》。 温故而知新”有两解.一为“温故才知新”：温习已闻之事,并且由其中获得新的领悟；二为“温故及知新”：一方面要温习典章故事,另一方面又努力撷取新的知识.合并这两种解法,也许更为完整：在能力范围以内,尽量广泛阅览典籍,反复思考其中的涵义,对已经听闻的知识,也要定期复习,期能有心得、有领悟；并且也要尽力吸收新知；如此则进可以开拓人类知识的领域,退也可以为先贤的智能赋予时代的意义.像这样融会新旧、贯通古今方可称是“温故而知新”. 对于学过的旧知识，你要常去温习它，你将会有新的体会，新的发现。你收获的就会更多，你比别人懂得的就会更多，这样在某方面就能成为别人的老师了。 生活中，每一件事，每一句话都有它的多方面。不同的人，有不同的理解。也许你一时只能理解其中的一点，当但你经历多了，见识丰富了，你再去看时，也许你会有不一样的理解和体会。生活就是这样多方面性的，当你对一句话不理解时，你是选择遗弃它，还是深入的去思考？当你多次的去深究它的时候，你将会有不一样的体会。 当我们忙完了一个阶段的事情后，利用暂时的忙里偷闲，回顾曾经的点点滴滴时，才发现我们不能变成工作的奴隶，我们要学会思考和总结，要让我们的工作充满坚持和成长才行。 英语作文 我最喜欢的动物（兔子或狗） my favorite animal dog is my favorite animal among all the animals. As we all know, dog is a lovely animal. i love it not only because of its cute shape, but also because of its loyalty. it will never betray its master. another reason why i love dog is that dog can make me happy. when i am sad, it will do everything he can to cheer me up and fet the unhappy things. so i will love dog for ever and ever. 我最喜欢的XXX （人，动物） 要求：记叙文，原创，600字左右 小狗笨笨 我住的小区里有一个老奶奶，她养了一只小狗叫笨笨。它全身雪白雪白的，毛绒绒的，像个小雪球。它的耳朵小小的、软软的，白里透红。它还有一双炯炯有神地大眼睛，而且眼睛周围还恰到好处地长了个黑眼圈，非常漂亮。它的小腿矮矮的，尾巴细细的，还调皮的向上翘着，非常可爱。 它的性格很古怪，它喜欢追逐活动的东西。比如篮球、足球、纸飞机。特别是红色的东西。有一次，我和小伙伴正在玩“红色回旋镖”，只见笨笨飞快地跑过去，翘着前腿，不停地向上跳跃，就像蹦床运动员似的，一点儿也不怕累。我想：它也许把回旋镖当成红烧肉了吧。回旋镖落地后，笨笨一口咬住它，嘴腿并用，竟把它折为三段，我欲哭无泪，却又没办法。这么可爱的小精灵，我怎么忍心责备它呢？我赶紧说：“好笨笨别吃了，这不是红烧肉，你去吃葡萄吧，可甜了！”它眨眨大眼睛，摇摇小尾巴，仿佛听懂了我的话，不再啃飞镖了，直奔葡萄架去了。 过了好一会儿，笨笨还没回来，我赶紧到葡萄架找它。只见它正在葡萄架上悠然自得地荡秋千呢。我很奇怪：为什么它没吃葡萄呢？我摘一颗一尝，妈呀！差点把我的牙倒下来，那葡萄——太~酸~了~，我想：这家伙太聪明了，叫笨笨太亏了。 那天，我放学回家时，看见笨笨无精打采地趴在地上，没有平时看到我就欢呼雀跃的样子。我想：它病了还是饿了？我急忙回家，拿了馒头和火腿肠。它一见我拿的食物，马上抓着我的裤腿向上爬，一会又围着我转，一个劲的讨好我，好像在说：“奶奶不在家，我饿了，给我点吃的吧。”我看它可怜巴巴的眼神，好像还含着泪花呢！我赶紧把馒头和火腿肠给它，它也没有了往日的风度，狼吞虎咽地吃起来。等它填饱肚子后，满足地舔了舔嘴唇，“汪汪”地叫了两声，好像在说：“谢谢你，小主人，你真是我的好伙伴。” 笨笨睡觉的时候更可爱，它会找一个非常光滑和干净的地方，生怕把它一身雪白的绒装弄脏，你看它微闭着双眼，鼻子一耸一耸地，小嘴巴还不住地一张一合，看它那甜蜜而又享受的样子，是不是做梦都在吃美味大餐呢！ 尽管有时笨笨很淘气，但是我非常喜欢它，我爱笨笨!

保时捷、法拉利、兰博基尼、布加迪这些可能无人不知，但迈凯伦是什么档次的车可能就有很多人不知道了，其实迈凯伦（Mclaren）也是世界顶级超跑品牌之一，看到这里可能就有人想知道迈凯伦多少钱一辆了，迈凯伦540C是迈凯伦售价最低的一款车，参考价220万元起。

罗茨风机的工作原理： 罗茨风机为容积式风机，输送的风量与转数成比例，叶轮端面和风机前后端盖之间及风机叶轮之间者始终保持微小的间隙，在同步齿轮的带动下风从风机进风口沿壳体内壁输送到排出的一侧。风机内腔不需要润滑油，结构简单，运转平稳，性能稳定，适应多种用途，已运用于广泛的领域。遍布污水处理、烟尘脱硫、物料输送、瓦斯及易燃易爆气体输送、重油喷燃、高炉冶炼、水产养殖、农药化工、甲醛合成等领域。

主要分两种：蠕动泵、注射泵。各有利弊，蠕动修理方便，价格相对便宜，较为常用。注射进样的“进样量”准确，价格相对贵一些，先出的存在问题，还不好修（AFS-930），那家的好一些（AFS-9700）好在阀上，不容易坏，软件一体的，实用。

　　现在生理期成为了困扰女性的一个大难题，女性本来比较容易手脚冰冷，尤其在来月经时会更加痛苦一些，痛经有些人甚至会痛到晕过去，会选择痛经贴和暖宝宝，因为大部分人认为只要腹部感觉温暖，应该会缓解疼痛，那一起贴，在女性痛经的时候有用吗?这个原理是什么呢?女生痛经贴暖宝宝原理?下面和我一起来了解一下吧! 女生痛经贴暖宝宝原理 　　在来大姨妈的时候有些女生会使用暖水袋敷在小腹部位，通过其散发的热量可以使小腹周围的血液循环加快，身体的新陈代谢加速，从而起到缓解疼痛的效果。其实暖宝宝贴也是一样的作用原理，只不过它更轻便，使用也更简单。 　　暖宝宝里的成分大多是一些用于加热的细小的金属粉末，然后用特殊的材质包装好，做成贴纸形状，然后密封起来防止与外界空气接触氧化失效。等到要用的时候再将片式的暖宝宝贴包装撕开，暖宝宝贴就慢慢开始发热，温度的持续时间较长，这确实对痛经的情况有缓解，还可以帮助呵护卵巢，在例假期是可以使用的，只要注意不要被暖宝宝的温度烫伤就行，隔着衣物贴于小腹部位使用即可。痛经分为原发性痛经和继发性痛经，继发性痛经通常是由疾病引起的，只有病好了，痛经症状才会消失。原发性痛经则要找准痛经的原因，如果是气滞血瘀引起的，贴暖宝宝确实能够缓解痛经症状。 　　暖宝宝的作用就相当于一个热水袋，其发热原理能够促进血液循环，对于缓解痛经有一定的效果，但是很多女性却不知道暖宝宝的正确使用方法。通常来说，暖宝宝贴于肚脐下方3寸的关元穴较好，关元穴对于保暖、活血化瘀都有较好的作用。但是，并非所有女性都适合使用暖宝宝，比如糖尿病患者、血液循环障碍者、对热敏感以及年老体弱者，这些患者的神经末梢感觉迟钝，容易被烫伤。 痛经贴暖宝宝宝的使用注意事项 　　暖宝宝不要连续使用超过2小时，尤其是不要在昏睡、服用镇静剂后使用，也要尽量避免长期压迫贴暖宝宝的位置，即使以上几点你都做到了，也需要随时观察局部皮肤的状况，一旦发现异常状况就该及时取下暖宝宝。家里有小朋友的女性一定要注意了，暖宝宝一定要放在孩子接触不到的地方，避免撕坏暖宝宝的袋子使内容物洒出造成不必要的伤害。温馨提醒：女性痛经还可辅助使用痛经灸，使用痛经灸的禁忌内容或注意事项详见说明书。 　　小心烫伤，虽然暖宝宝热贴看起来小小的，但是它的发热温度却可以超过人体所能承受范围，因此暖宝宝热贴并不是它的发热温度越高就越好。人体中的蛋白质所能够承受的最高温度也就68℃，所以一旦超过就会造成烫伤。因此在使用暖宝宝热贴时，一定不要直接将其贴在皮肤上，可以隔一层衣服使用。

你开心就好，没问题，只管换吧。（只要空间够、2.5平方及以上的线就够了）

机械设计制造及其自动化专业有车辆工程、机械电子工程、材料加工工程、机械制造及其自动化、机械设计及理论等考研方向。机械设计制造及其自动化专业有车辆工程、机械电子工程、材料加工工程、机械制造及其自动化、机械设计及理论等考研方向。机械设计制造及其自动化考研科目分为公共科目和专业科目，公共科目主要考《思想政治理论》、《数学》、《英语》、《数学》；专业科目主要考《微机原理》、《材料力学》等。机械机械设计制造及其自动化专业。机械机械设计制造及其自动化专业设计制造及其自动化专业旨在培养适应社会发展需要，具备较扎实的自然科学基础和宽厚的机械专业知识以及较强的实践能力。具有创新意识、国际视野、团队合作精神和良好的沟通能力；具有较好的人文社会科学素养、较强的社会责任感、良好的职业道德，能在机械工程领域从事机械产品研发、设计、制造、项目管理等工作的复合型工程技术人才。机械设计制造及其自动化专业核心知识领域包括：机械设计原理与方法、机械制造工程原理与技术、机械系统中的传动与控制、计算机应用技术等。机械设计制造及其自动化专业毕业生就业主要在机械、汽车、航空航天、能源、化工、电子、材料、冶金等行业领域，从事机械领域内的设计制造、科技开发、应用研究、运行管理和经营销售等方面的工作。

爱一个人就是你幸福我就幸福，我快乐你就快乐吗? 恋爱刚开始是这样的，后面一起要贯穿到现实的生活，彼此对对方要求也会越来越多，爱情就开始慢慢变质，不再是你幸福我就幸福，你快乐我就快乐。。话说真爱是这样，但又多少的真爱可以完美毫无要求的继续下去呢 你幸福我快乐600字 晨曦中露珠晶莹闪亮，湛蓝的天空印染著粉红的霞光，夏天的早晨真是美好。我身穿雪白的连衣裙，头扎淡蓝色的蝴蝶结，胸前飘拂著鲜艳的红领巾，早早地来到学校。 一进校门，嗬！好几辆大客车已经停在了校园，好多同学和老师早已来到了学校。他们有的在那里说笑，有的围成一团听着老师说著什么，个个脸上乐开了花。是啊，今天怎么不高兴呢？因为，自从昨天老师说今天要带我们去游合肥科技馆后，我几乎兴奋了一夜，我想像著那神秘的自然现象，那深邃的宇宙太空，那神奇的海洋世界……我感到无比快乐。 今天在老师的带领下我们看到了有趣的光影成像，模仿自然界的雷电风暴，滑稽可笑的海豚顶球，还有用高科技手段制作的许多奇妙的玩法等等，不仅学到了许多科学知识，大开了眼界，而且还使我获得了很多乐趣，增添了对科学的热爱。 傍晚回来，我虽然有些疲劳，但心里一直美滋滋的。我开启日记本在记下这愉快的一天的同时也想了很多。我今年已经十一岁了，多年来，有爸爸妈妈的精心呵护，是他们用勤劳的双手为我建造居住舒服的楼房，为我营造了幸福生活的家园，使我健康地生活；有学校老师的精心培育，他们用温暖的爱心教给我们知识，教育我们做人，带给我们欢乐，使我快乐地成长。 夜晚，我做了个梦：梦见月牙向我微笑，星星和我嬉戏，萤火虫驮着我在花丛中穿梭，我高兴地喊著、叫着，“咯咯咯”地笑！…… 你幸福我快乐 歌词 你幸福我快乐 词曲：陈玉建 演唱：陈玉建 只要你幸福 我就会快乐 这一辈子都会疼着你 在我的嘴里没有华丽言语 把你放在我心里 只要你幸福 我就会快乐 哪怕再大的风和雨 在我的心里你是我的唯一 我会永远爱着你 抱着你 自从那天遇见了你 我就深深爱上了你 轻轻的说声 我爱你 我要和你在一起 你的爱意在我心里 一生陪你我也愿意 轻轻的拉起 你的手 从此我们相偎相依 只要你幸福 我就会快乐 这一辈子都会疼着你 在我的嘴里没有华丽言语 把你放在我心里 只要你幸福 我就会快乐 哪怕再大的风和雨 在我的心里你是我的唯一 我会永远爱着你 抱着你 你的爱意在我心里 一生陪你我也愿意 轻轻的拉起 你的手 从此我们相偎相依 只要你幸福 我就会快乐 这一辈子都会疼着你 在我的嘴里没有华丽言语 把你放在我心里 只要你幸福 我就会快乐 哪怕再大的风和雨 在我的心里你是我的唯一 我会永远爱着你 抱着你 只要你幸福 我就会快乐 这一辈子都会疼着你 在我的嘴里没有华丽言语 把你放在我心里 只要你幸福 我就会快乐 哪怕再大的风和雨 在我的心里你是我的唯一 我会永远爱着你 抱着你 :music.baidu./song/5960228 爱一个人、真的是她幸福我就快乐吗？不在一起也行！ 时间是最好的良药，随着时间的推移，一切都不再如最初那么刻骨铭心，调整好心态，生命短暂，青春有限，你不会有太多的时间去等待去追忆去痛苦，平常心面对一切，你将会有更多的精力面对未来！忘记是更为深刻的记忆。所以，不要刻意的去忘记，每个人都有自己的路程，路程中会出现各种各样的过客，每段感情每段经历每个人都是生命留下的印记，不论回忆是美好的还是痛苦的，都是已经发生的，学会感谢生命中每个曾经相遇或离别的人。 学会遗忘，并不是很轻松就做到的，因为许多忘不掉的悲哀、耻辱是刻骨铭心的。那么，就需要我们用一颗平常心去对待问题。既然发生了，就注定无法挽回。当你在为错过太阳而流泪时，你也将错过群星。 当你失落、悲伤的时候，最好学会遗忘。不要在乎脚下的路，前面的风光更迷人。过去的就过去了,但是留下的是最美好的回忆,为什么要刻意去忘记呢.虽然不能和他在一起但是,你们有着美好的回忆,我相信他也会把你们美好的回忆永远留在心中的,爱一个人就是要他幸福,要他开心,但是他幸福的前提是你幸福吗,你开心吗,做自己想做的事情,幸福与不幸福都在自己的心里,等到时间慢慢的过去了,你找到了你的另一半的时候,你就会把你们的回忆放在心底,把你的祝福也同样用回忆带给他,过去的就让他过去,短暂的心痛是难免的,但是不要让自己刻意的忘记什么,那样会更痛苦,只要自己认为自己是幸福的那自己永远都是幸福的. 求采纳 你幸福就是我快乐，我幸福你也要快乐 英文怎么说 Your happiness is my happy. I am happy then you are happy,too. 你幸福我快乐演员表 祝士彬 饰 唐祥元 马书良 饰 姚建文 梁丹妮 饰 秀丽 侯天来 饰 姚建武 李勤勤 饰 黄新玲 曹力 饰 姚建斌 史可 饰 程似锦 李梦男 饰 姚建国 管乐 饰 唐小芹 爱一个人 她幸福 你快乐吗？ 不快乐，因为她现在的幸福，不是我给的... 幸福我快乐你演讲稿 怎样写好演讲稿 一、了解物件，有的放矢 演讲稿是讲给人听的，因此，写演讲稿首先要了解听众物件：了解他们的思想状况、文 化程度、职业状况如何;了解他们所关心和迫切需要解决的问题是什么，等等。否则，不看 物件，演讲稿写得再花功夫，说得再天花乱坠，听众也会感到索然无味，无动于衷，也就达 不到宣传、鼓动、教育和欣赏的目的。 二、观点鲜明，感情真挚 演讲稿观点鲜明，显示著演讲者对一种理性认识的肯定，显示著演讲者对客观事物见解 的透辟程度，能给人以可信性和可*感。演讲稿观点不鲜明，就缺乏说服力，就失去了演讲 的作用。 演讲稿还要有真挚的感情，才能打动人、感染人，有鼓动性。因此，它要求在表达上注 意感 *** 彩，把说理和抒情结合起来。既有冷静的分析，又有热情的鼓动;既有所怒，又有 所喜;既有所憎，又有所爱。当然这种深厚动人的感情不应是“挤”出来的，而要发自肺腑， 就像泉水喷涌而出。 三、行文变化，富有波澜 构成演讲稿波澜的要素很多，有内容，有安排，也有听众的心理特征和认识事物的规律。 如果能掌握听众的心理特征和认识事物的规律，恰当地选择材料，安排材料，也能使演讲在 听众心里激起波澜。换句话说，演讲稿要写得有波澜，主要不是*声调的高低，而是内容的有起有伏，有张有弛，有强调，有反复，有比较，有照应。 四、语言流畅，深刻风趣 要把演讲者在头脑里构思的一切都写出来或说出来，让人们看得见，听得到，就必须借 助语言这个交流思想的工具。因此，语言运用得好还是差，对写作演讲稿影响极大。要提高 演讲稿的质量，不能不在语言的运用上下一番功夫。 写作演讲稿在语言运用上应注意以下五个问题： (一)要口语化。“上口”、“入耳”这是对演讲语言的基本要求，也就是说演讲的语言 要口语化。 演讲，说出来的是一连串声音，听众听到的也是一连串声音。听众能否听懂，要看演讲 者能否说得好，更要看演讲稿是否写得好。如果演讲稿不“上口”，那么演讲的内容再好， 也不能使听众“入耳”，完全听懂。如在一次公安部门的演讲会上，一个公安战士讲到他在 执行公务中被歹徒打瞎了一只眼睛，歹徒弹冠相庆说这下子他成了“独眼龙”，可是这位战 士伤愈之后又重返第一线工作了。讲到这里，他拍了一下讲台，大声说：“我‘独眼龙"又 回来了!”会场里的听众立即报以热烈的掌声。 演讲稿的“口语”，不是日常的口头语言的复制，而是经过加工提炼的口头语言，要逻 辑严密，语句通顺。由于演讲稿的语言是作者写出来的，受书面语言的束缚较大，因此，就 要冲破这种束缚，使演讲稿的语言口语化。为了做到这一点，写作演讲稿时，应把长句改成 短句，把倒装句必成正装句，把单音词换成双音词，把听不明白的文言词语、成语改换或删 去。演讲稿写完后，要念一念，听一听，看看是不是“上口”、“入耳”，如果不那么“上口”、 “入耳”，就需要进一步修改。 (二)要通俗易懂。演讲要让听众听懂。如果使用的语言讲出来谁也听不懂，那么这篇 演讲稿就失去了听众，因而也就失去了演讲的作用、意义和价值。为此，演讲稿的语言要力 求做到通俗易懂。列宁说过：“应当善于用简单明了、群众易懂的语言讲话，应当坚决抛弃 晦涩难懂的术语和外来的字眼，抛弃记得烂熟的、现成的但是群众还不懂的、还不熟悉的口 号、决定和结论”。 (三)要生动感人。好的演讲稿，语言一定要生动。如果只是思想内容好，而语言干巴 巴，那就算不上是一篇好的演讲稿。写好演讲稿，只有语言的明白、通俗还不够，还要力求语言生动感人。 (四)要准确朴素。准确，是指演讲稿使用的语言能够确切地表现讲述的物件——事物 和道理，揭示它们的本质及其相互关系。作者要做到这一点，首先，要对表达的物件熟悉了 解，认识必须对头;其次，要做到概念明确，判断恰当，用词贴切，句子组织结构合理。朴 素，是指用普普通通的语言，明晰、通畅地表达演讲的思想内容，而不刻意在形式上追求词 藻的华丽。如果过分地追求文辞的华美，就会弄巧成拙，失去朴素美的感染力。 (五)要控制篇幅。演讲稿不宜过长，要适当控制时间。 你幸福我快乐读后感 幸福是什么？幸福，是能做自己喜欢做的事情。 幸福是什么？幸福，是成为一名品德兼优的好学生。 幸福是什么？幸福，是同学、朋友、老师、亲人的陪伴。 今天下午，来到充满书香的教室，坐在座位上静静地看着萧红的《呼兰河传》。 忽然，教室的窗帘、后门和灯都关了起来，这是要干什么呢？——没错，一般这种情况不是上课就是看电影，问了身边的同学这是究竟怎么回事。同桌笑了笑，道：“刚刚你还没来时，广播说要看一部电影，好像是心理素质教育片呢！”一听要看电影，我有些兴奋，然后又坐在座位上等待着老师的到来。 过了一会儿，英语老师来了，开启电脑平台，把电影开启，同学们静静地坐在座位上看着。教室里黑黑的，倒真有几分看电影的感觉。突然，我脑瓜蹦出一个想法：如果再来一桶爆米花和一杯可乐那就更好了！哈！哈哈！哈哈哈！ 不到一会，电影就开播了，影名是《你幸福我快乐》，接着，全班都专心致志地看了起来。 一分钟……十分钟……四十分钟…… 不知不觉，电影结束了。我抬起头，活动了一下筋骨，发现讲台上的英语老师换成了语文老师。啊！原来已经过了两节课啊！ 令我感触最深的是，一个来自富裕家庭的同学，也就是焉祤嘉。虽然他的家庭非常的富裕，但是缺少关爱。因为他的妈妈在加拿大工作，每天只可以用视讯通话来和焉祤嘉保持联络，要很久很久才可以真正见上一面。他的爸爸，虽然和焉祤嘉在一个城市生活中，但是也是忙里偷闲来陪伴焉祤嘉。在焉祤嘉的生日派对中，焉祤嘉的爸爸妈妈都说来陪伴焉祤嘉，但是都还是因工作来不了焉祤嘉的生日派对。但焉祤嘉还有一群和他一起玩的小伙伴，所以还是请了整个班的小伙伴来一起度过著欢乐的时光。当小伙伴们都走了的时候，焉祤嘉又开始了他的孤独生活。当天晚上，他的爸爸终于回来了，看到焉祤嘉在鱼缸旁自言自语地说：“就‘他们"最幸福，一家人每天都可以在一起，吃喝拉撒睡都是在一起。” 主人公陈怡霏，她因为要完成妈妈临终的心愿，来到深圳学习，但因为无法学校的环境，感到非常的自卑和不快乐，但是她没有就此放弃，她还是坚持了下来，慢慢适应。最终，她不再孤独，而是快乐的一个小女孩！ 《你幸福我快乐》用歌舞形式讲述了家庭背景不同的两个孩子及一群五年级的孩子，在日常生活学习中遇到种种困难，并以积极向上的心态去面对。 幸福是什么？幸福，就是家人、朋友、同学的陪伴与鼓励！ 幸福是什么？幸福，就是在学习过程中不断提升学习兴趣、自信成长！ 幸福是什么？幸福，就是 “笑对一切”的人生态度！

公交线路：118路，全程约17.2公里1、从无锡站步行约80米,到达火车站2、乘坐118路,经过27站, 到达东南大学站（也可乘坐760）3、步行约130米,到达无锡NTT数据有限公司

英格兰的，前英格兰国家队主帅，08年在欧锦赛预选赛主场负于克罗地亚的比赛后下课。也是前米德尔斯堡主帅。带领米德尔斯堡获得了联盟杯亚军。

是：atmidnight释义：在午夜， 在半夜，午夜，午夜时短语：AtOneMidnight 一天夜里AtAboutMidnight 中约在半夜atthemidnight 在午夜例句：She stole out ofthe house at midnight. 她在半夜悄悄离开了家。《21世纪大英汉词典》They startedofftoNormandie at midnight. 他们在午夜踏上了开赴诺曼底的征程。www.yinghanhuyi.comThey arrivedin Beijing at midnight and checked into Beijing Hotel. 他们于午夜抵达北京并登记住进北京饭店。

化学反应 铁粉遇到空气