EMSA实验蛋白为什么进不到PAGE胶内

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

EMSA全称是Electrophoretic Mobility Shift Assay，中文叫凝胶迁移实验或电泳迁移率实验，它是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术，可用于定性和定量分析。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。首先让蛋白质与末端标记的核酸探针结合，然后在跑PAGE胶，结合了蛋白质的复合物比未结合蛋白质的探针电泳的速度要慢，这样，从PAGE胶的电泳结果就可以判断，该蛋白是否和特定序列结合或者该序列是否和蛋白结合。

没做过

凝胶阻滞或电泳迁移率变动实验（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA） （来自《养鲤鱼》微信公众号） 1、为什么看不到迁移带？ 1）蛋白样本提取质量不高，蛋白降解或者提取量不足。 2）样本中没有可以与探针结合的蛋白。 3）探针与蛋白无特异性的相互作用。 4）转膜效率低，蛋白或者探针未转移到膜上。 5）曝光或者成像时间过短。 在Super-Shift EMSA测定中看不到Super-Shift DNA/蛋白复合物带还可能有以下原因： 6）抗体没有工作。不是所有的抗体都可以用于Super-Shift EMSA，只有对非变性蛋白的表面抗原决定簇起反应的抗体才能够用于Super-Shift EMSA。 7）测定的活化的DNA/蛋白复合物中没有希望检测的构成成分存在。此时既看不到Super-Shift的带，也看不到DNA/蛋白复合物的量的减少。 8）使用的抗体过度稀释。一般10-20ul的反应液需要使用0.5-1ul原倍的抗体。 9）多抗与DNA/蛋白复合物形成大的聚集物而不进胶。在这种情况下，虽然看不到Super-Shift的带，但应当可以看到DAN/蛋白复合物的电泳带明显减少。 2、为什么实验背景高？ 1）曝光或者成像时间过长。 2）封闭时间不足或者效率不高。 3）洗涤效果不佳 4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。 3、EMSA测定需要多少量的蛋白与标记的探针？ 对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化：一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白:DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍；用粗制核抽提液，需要2-10ug蛋白形成特异的复合物。 部分纯化蛋白与粗制核抽提液应保存在-80℃、探针应保存在-20℃以防止降解。 无论探针或是结合蛋白都应避免多次冻融。 4、Poly(dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA在EMSA测定中的作用？ Poly(dI:dC)由肌苷和胞嘧啶组成。在EMSA反应中加入poly(dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中转录调节因子与标记探针的非特异结合。结合溶液中的poly(dI:dC)的用量需在正式实验前进行优化，一般用量大约在0.05mg/ml左右。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)。 为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，特异竞争探针是非标记的DNA，其序列与标记探针相同，故能与标记探针竞争与结合蛋白的反应。非特异竞争探针的长度组成和DNA探针相同，但序列不同。如果结合蛋白与标记探针的结合被特异竞争探针抑制，而不受非特异探针的影响表明靶结合蛋白的存在。特异与非特异性竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是标记的探针用量的30-100倍（w/w）。 5、用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？ 将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%，在特定条件下可用高或低的浓度。也可将TGE缓冲液（12.5mM Tris，pH8.3，95mM 甘氨酸，0.5mM EDTA）用于不稳定的蛋白/DNA复合物。在4℃进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。 当带型不紧密出现拖尾时，表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合，以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量，或盐的浓度过量不适用于这一反应。在含抽提液的带中不含游离探针或复合物，但只含探针的带中有探针表明抽提物有核酸或磷酸酶污染，应在抽提液中和结合反应中加入相应的抑制剂。

转录因子和蛋白质结合的情况可以通过多种实验来验证。以下是常用的几种实验方法：1. Electrophoretic mobility shift assay (EMSA)：通过电泳迁移实验可以观察到转录因子与DNA结合后，复合物的迁移速度会变慢。而加入竞争性DNA片段或者抗体等会破坏该结合，从而使复合物不稳定，以致迁移速度回到原来的状态。2. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay：通过在细胞内部免疫沉淀转录因子及其结合到DNA上的小段染色质并清洗后，进一步检测其结合到靶基因上（序列分析）或者使用引物鉴定附着区域是否被转录因子组件包含。3. Yeast two-hybrid assay：此实验利用了酵母细胞中两个不同功能区蛋白（例如AD和BD）构建相互作用模型。将编码转录因子和其鉴定出的结合蛋白浸入到不同功能区的酵母中进行配对，如果有关联，则证明它们可以在活细胞中相互作用。这些实验都可以可靠地验证蛋白质与转录因子之间的结合关系。在实验室操作过程中，需要根据具体情况选择合适的实验方法，同时保证实验条件的严谨性和准确性。

在EMSA实验中，根据目的不同，所需使用的蛋白质量也会有所变化。通常情况下，蛋白的使用量为1-10微克之间。但是需要具体根据实验需要进行调整。EMSA凝胶迁移实验用于研究蛋白与核酸结合的实验技术。该实验以聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础，利用电泳的原理来检测蛋白与DNA或RNA分子的配对情况。emsa实验蛋白用量1、蛋白用量的确定EMSA实验中，蛋白的使用量应该通过实验计算、考虑样品量和标准曲线绘制等操作来确定2、样品准备首先从生物样品中提取目标蛋白，并用SDS-PAGE对蛋白进行定量和纯化。通常情况下，可以将纯化后的蛋白样品以50-100微克/微升的浓度储存，并适当稀释用于实验分析。3、滴定法测定蛋白浓度滴定法常用于测定蛋白质的浓度，在EMSA实验的蛋白用量计算中也有重要作用。首先，需要准备一定浓度的荧光素化合物（如BCA），然后将标准蛋白和待定蛋白分别用不同的浓度稀释，添加适量的荧光素试剂，并根据颜色变化来测定样品蛋白质的浓度。4、选择适当的蛋白量经过滴定法测定蛋白质浓度之后，可以选择适当的蛋白量进行实验。在实验中，蛋白质的使用量通常在1-10微克之间。如果使用的蛋白过多，可能会影响实验结果，使得最终的检测信号过强，掩盖低浓度样品的信号。而使用的蛋白过少，则很难观察到目标蛋白和DNA或RNA结合的迁移带。5、实验过程中的注意事项在EMSA实验过程中，还需要注意一些重要的步骤和原则，以确保实验结果的可靠性和准确性。如样品预处理、电泳缓冲液的选择和pH值的调节等。此外，为了避免扰动实验结果，还需要注意实验条件的控制，如温度、湿度、时间和光照等因素。EMSA凝胶迁移实验中，蛋白的使用量通常在1-10微克之间，但需要具体考虑实验需求、样品量等情况进行调整。在实验过程中，还需要注意一些重要的步骤和原则，以确保实验结果的可靠性和准确性。

EMSA实验实验背景高主要原因1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。使用UVA(365nm)、UVB(302 nm)、UVC(254 nm)三种波长四款紫外交联仪，主要包括VL-1000A系列紫外交联仪（365nm）、VL-1000B系列紫外交联仪（302nm）、VL-1000C系列紫外交联仪（254nm）、VL-3000系列紫外交联仪（三种波长）满足不同的科研需求。

EMSA 凝胶迁移实验检测的蛋白与其靶分子（通常是DNA或RNA）结合后形成的复合物在凝胶上出现了迁移减缓或者移动位置发生改变。一、蛋白在胶孔中滞留，可能是由于以下几个主要原因：1、胶溶液中存在高浓度的离子：高浓度的离子可以干扰蛋白与DNA或RNA的相互作用，从而影响迁移结果。2、蛋白与DNA或RNA的比例不恰当：如果加入的蛋白太多，会出现蛋白与DNA或RNA的比例失衡，导致蛋白在胶孔中滞留。3、组装复合物时间过长：如果组装复合物的时间过长，会导致复合物形成过程不完全或者不稳定，这也会导致蛋白在胶孔中滞留。4、蛋白稳定性不佳：如果蛋白质无法在凝胶电泳过程中保持稳定性，也会导致其在胶孔中滞留。蛋白质胶孔滞留问题的解决方法是：1、减少离子浓度2、调整蛋白与DNA或RNA的比例3、适当缩短组装复合物的时间，并检查蛋白的稳定性。4、在加载样品时，应尽量避免将蛋白团块直接加入凝胶孔中，而应该将其预先均匀混合。如果以上方法仍然不能解决问题，可能需要重新优化实验条件。

每个对照组的目的：1. 看光有探针，没有其他成分时，探针的位置，应该位于最下方。不然说明探针里面有杂质，影响电泳2. 这个是看蛋白和探针的结合，是实验目的3. 看探针结合的特异性。如果冷探针可以竞争结合，阻碍了标记的探针，说明2中的结合是特异的4. 目的和3相同。突变的冷探针应该对2的结果没有影响5. 也是判断特异性，这次是看蛋白的特异性，和抗体结合后，就会有super-shift。如果没有，说明是其他的蛋白结合。

1.EMSA中一般都是用P标记的探针，具有放射性，要是用生物素标记的话，放射性就小了，但是花的钱就多了。这个实验要是样本不多的话，大约花费4000左右吧，最重要的是放射性的问题，必须有磷屏，否则没法做。2.首先说应该用磷酸化的P65抗体，一般都用santa cruz公司的。并且有分装的，420块钱100μl，你要是做得少的话可以选择分装的抗体。3.还有就是免疫组化也是可以的。还有一种更好的方法就是promega的双荧光素酶报告系统，采用海肾和萤火虫两种荧光素酶，一种报告目的基因，一种报告内参，很好的方法，但是很贵。总体来说，做EMSA和双荧光素酶是最好的方法，算是定量，但是EMSA有放射性，双荧光素酶比较贵。western和免疫组化只能用来半定量，但是做的人比较多，也能发高水平的杂志，相对来说比较简单，也省钱。

生物标记emsa中可能出现探针生物素丢失　　EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合...　　BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。

EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等; 2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等; 3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失; -1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1 蛋白被降解; 6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v) 7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质; 8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间; 9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染组氨酸标签蛋白的纯化

那这几种技术要同时用吗？ChiP与EMSA的区别是什么呢？

多个核型多角体病毒 标记救援 反密码子摆动假说 棉铃虫核型多角体 代谢质粒 病毒附着蛋白 广泛宿主范围载体 实时PCR EMSA

不会是loading buffer 出问题沉淀堵孔了吧一般不会的哦。。。。我没有做过，，猜测猜测……

欧洲主流的保温壶都是用玻璃内胆的，玻璃内胆和市场中低端的玻璃内胆有以下区别 1、玻璃不能含重金属。 2、玻璃镀层须为纯银，加工不能使用石棉等危险物质。 3、 玻璃胆为人工制造，成本和耐用性大大提高。 4、人工制造的玻璃胆在内壁表层有许多不规则纹路和毛细微孔，饮品入内可以形成如紫砂壶相似原理的缓释氧化和保温的作用，因此人们喜欢直接用玻璃保温壶盛放咖啡和茶类饮品，而不是单纯的热水。 5、容量基本为1升至1.5升，设计原理是考虑到正常人3-5小时的饮料容量。避免‘老水"。 6、人工内胆对水中的重金属等杂质的吸附能力比不锈钢和机器玻璃胆有更好的表现，而且由于玻璃结晶自然形成，毛细孔弧度天然，更加容易清洗。 7、玻璃内胆无法和不锈钢内胆的强度相提并论，一般用于办公和居家使用。不锈钢内胆适合高强度和户外场合使用。 8、不锈钢内胆必须使用优质不锈钢，否则可能存在重金属或锈蚀的风险。

首先，你需要确定你的目的蛋白正确融合上了GST标签，建议先用anti-GST抗体对lysis上清做个western。当然如果你和你同学用的是同一个质粒的话，那么这一步就不必了。若标签没有问题，你在Flow Though里又可以在目标分子量大小处检到蛋白的话，那么出现这种情况只可能是glutathione、柱子以及buffer的问题。关注你所使用的GSH的保存条件、状态以确保没有被氧化；换一批Glutathione Sepharose 填料或用你同学用过的柱子试试；视情况对binding 的PH、盐浓度、DTT浓度做个优化 ，调整washing 及elution buffer glutathione 浓度。必要时甚至可以考虑更换缓冲体系。没有见到你的protocol所以不好更具体的说，但是需要强调的一点是，不要完全依赖protocol。不同的蛋白个性差异很大，同一个protocol做相同类型的不同的蛋白可能会得到完全不同的结果，因此很多时候对各个影响因素做若干水平的正交实验来确定一个符合实际需要的条件 是往往是必须的。

poly(dI:dC)（dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？ 它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)（dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)（dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)（dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)（dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用...poly(dI:dC)（dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？ 它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)（dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)（dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)（dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)（dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用于凝胶迁移反应，它们会带有目的蛋白的结合位点。

一.Enjoyhot&cold冷暖相宜容器产品特有技术：EMSA高规格的多层晶钻隔热瓶胆 2层优质耐热玻璃/EDS-layers技术,全人工内胆制造。内胆内壁充分的极微小气穴，形成犹如紫砂原理的缓释效果，完美保持饮品原味2层纯银镀层，产生有效的热反射，安全无污染风险1层高真空，高效隔热一体成型 二．Enjoymobilelife怡享旅程器皿系列特有技术:专利的u201ePowerLoc“-Closure:单手按压式杯盖全拆卸清洁设计100%防漏高真空保温高标准选材工艺，全面符合欧盟儿童食品接触标准三．Freshnessguaranteed&organized易鲜生活储藏收纳系列特有技术：1．欧盟婴童食品接触安全材料工艺通过欧盟DINEN14350-2EU的严格要求，成为市场目前唯一通过此要求的食品保鲜容器。2.无缝一体成型密封系统l优势1:高密封压力，真正实现100%防漏。n大多数食物保存时间更长*.nEMSA独有的一体成型密封圈比普通双孔硅胶圈密封压力更大n蓝色胶圈与透明盒盖一体成型，不会剥落。l优势2:无缝，无细菌滋生空间n密封圈与盒体一体成型n加宽的密封设计，安全，方便清洗 n无缝，无细菌滋生的死角,100%无异味渗出l优势3:实用的细节设计，通过专业餐饮行业使用HACCP认证四．‘Prepare&servefreshness"易鲜生活餐厨工具特有技术l‘Turbo"加速，转速提高40%以上l‘Spacesaving"设计，节省空间70%l优良的选材和加工工艺，全面符合欧盟儿童食品安全标准l‘Allin1"整合设计，提供全面的餐厨解决方案五．‘Plants/flowerspresented&cared"多彩四季园艺养护特有技术l‘AQUA-COMFORT"自动供水技术l‘360spray"超细喷雾工艺l完整的色系搭配设计六．Esteras爱斯特拉户外园艺特有技术l‘AQUA-COMFORT"自动供水技术l超轻光纤喷涂技术lFreecare便捷养护设计lUVfree10年抗紫外工艺

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一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。扩展资料由于很多研究的TF不具有结合的特异性，所以即使发现TF和被研究的寡核苷酸探针结合，也不表示在体内该TF不能和其它寡核苷酸结合，运用一些生物信息学 软件，可以模拟表示TF与基因启动子区寡核苷酸结合的具体情况，发现TF可以和启动子区PUTATIVE 结合。同时，由于EMSA在体外不能模 拟细胞内众多生物分子的相互作用，比如，某一TF在细胞内由于受到其它TF的协同或者修饰后才能与寡核苷酸结合的话，那么在体外是不能重现这一结果的。参考资料来源：百度百科-EMSA （凝胶迁移）

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。2)作这样的实验需要什么试剂？凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用g-32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe?/sup系统（a,b）（目录号P1420，P1430，P1440，P1450，P1460）可用于同位素标记的RNA的体外合成，DNA5`末端标记系统（目录号U2010）用于制备DNA探针，结合反应所需的组分有：含盐的溶液（氯化镁，氯化钠，或氯化钾）、缓冲体系（Tris-HCl或HEPES）、还原剂（DTT）、甘油、非特异的竞争DNA（poly(dI:dC)?dI:dC)，也可能含非离子去污剂。在结合蛋白和同位素标记的探针作用后，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物，随后将凝胶干燥并放射自显影，或用PhosphorImage?/sup分析。3)凝胶迁移实验系统提供了什么试剂？Promega公司提供一种凝胶迁移实验系统检测DNA结合蛋白，系统可作为这类实验的 一种正对照。系统包括目的寡核苷酸，对照DNA结合蛋白，结合缓冲液，用于寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统（目录号E3050）包括含重组AP2蛋白（AP2抽提液）的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是从表达AP2蛋白的大肠杆菌中提取的。另外，Core系统还含SP1同源寡核苷酸，凝胶迁移结合缓冲液（5′），和能作20次对照实验的HeLa核抽提液。Complete系统（目录号E3300）含另外5个双链寡核苷酸，分别是AP1、OCT1、CREB,、NF-kB、 TFIID结合位点的同源序列。这些寡核苷酸可以在末端标记后用作特异性探针，或在竞争实验中用作非特异性探针。参考凝胶迁移实验技术手册TB110获取更多的资料。4)成功进行凝胶迁移实验，需要优化哪些因素？凝胶迁移实验在理论上很简单也很快速，但要成功地进行凝胶迁移实验，需要优化一些参数，这主要受结合蛋白的来源和探针结合位点特点的影响。以下是需要优化的因素：抽提液的制备（核酸酶和磷酸酶污染会使探针降解），结合蛋白的浓度，探针的浓度，非特异性探针的浓度，缓冲液的配方和pH, 聚丙烯凝胶电泳的特点和电泳条件，保温时间和温度，载体蛋白，是否有辅助因子（比如锌，或镉等金属离子，或激素）。总之，反应总体积应最小（20ul）。为满足一般要求，结合缓冲液含4%甘油，1mMMgCl2, 0.5mMEDTA, 0.5mMDTT, 50mMNaCl, 10mMTris-HCl(pH7.5), 0.05mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC,或10mMHEPES(pH7.9), 50mMKCl, 1mMDTT, 1mMEDTA, 10%甘油，0.05mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC可作为优化实验的起始。参考凝胶迁移实验技术手册TB110获取更多的资料。5)提供了哪些同源的多核苷酸引物，这些引物的序列来源是什么？有各类dsDNA探针，它们含各种转录调控因子的同源结合位点。下表列出了所能提供的探针，和这些引物序列的出处。转录调控因子探针---------------------------------------探针名 目录号 序列（上链） 序列的出处Sp1 E3231,E3232 5`-ATT CGA TCG GGG CGG GGC GCG-3` SV40启动子（1）AP1 E3201 E3202 5`-CGC TTG ATG AGT CAG CCG GAA-3` 胶原酶基因TRE（2）AP2 E3211 E3212 5`-GAT CGA ACT GAC CGC CCG CGG CCC GT-3`人金属硫堇II a(3)基因NF-kB E3291, E3292, 5`-AGT TGA GGG GAC TTT CCC AGG C-3`鼠Igk轻链基因（4）Oct1 E3241 E3242 5`-TGT CGA ATG CAA ATC ACT AGA A-3` Ig重链基因（5）CREB E3281 E3282 5`-AGA GAT TGC CTG ACG TCA GAC AGC TAG-3`大鼠生长激素抑制基因（6）TFIID E3221 E3222 5`-GCA GAG CAT ATA AGG TGA GGT AGG A-3`belta-1球蛋白启动子只列出了上链的序列，探针是双链，下链序列和上链序列配对。黑体字表明序列来源于指定的基因序列，转录调控因子结合的序列用下线表明。一般而言，周围的核苷酸是任意。6)在DNA探针的选择上，要考虑哪些重要因素？目的DNA的长度应小于300bp，以有利于非结合探针和蛋白DNA复合物的电泳分离。双链的合成的寡核苷酸和限制性酶切片段可在凝胶迁移实验中用作探针。如目的蛋白已被鉴定，则应用短的寡核苷酸片段（约为25bp）,这样结合位点可和其他因子的结合位点区别开。长的限制性酶切片段可用于对推定的启动子/增强子区域内的蛋白结合位点定位。随后可用DNaseI 印迹对蛋白结合的特异区域在DNA序列水平上作出分析。7)用以下一些转录调节因子和HeLa细胞核抽提物可形成哪些复合物：AP1, AP2, CREB, NFkB, Oct1, Sp1, TFIID, TFIIB。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白的来源时，每1个转录调节因子和它相关的DNA同源序列结合形成特征型的结合形态。以下的文字描述了每一个单独的转录调节因子，包括识别的同源序列，因子的大小，特定的结合条件，以及和HeLa细胞核抽提物可形成的复合物的数目。1．AP1：AP1（激活蛋白1）是一个转录调节因子，它结合的同源序列为5`-TGAGTCA-3`。当基因的启动子区域存在AP1的结合位点时，这些基因可以被诱导，比如用佛波酯可诱导蛋白激酶C（2，7）。在细胞中，AP1形成c-Jun或Jun相关蛋白的同聚双体，或者形成c-Jun或Jun相关蛋白和c-Fos或Fos相关抗原（Fras）的异源双体。Fos蛋白自身不能形成同聚双体，并不能单独和AP1结合位点结合。c-Jun蛋白是一个40kDa的单体蛋白并通过亮氨酸拉链形成同聚双体。在HeLa细胞中，AP1的主要形式是c-Jun蛋白的同聚双体。在凝胶迁移实验中，形成一个特异的复合物。当作凝胶迁移实验测定AP1的活力时，除了基本的溶液组分外，应将0.01mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC),100ug BSA, 5mMDTT加入到结合缓冲液中。如用纯化的蛋白，则用1-2ug的蛋白来检测迁移复合物。2．AP2：AP2是一个转录调节因子，可分别作为TPA-和cAMP诱导因子（10）。它是一个52 kDa的蛋白，识别的同源序列为5`-CCCCAGGC-3`或5`-GCCNNGGC-3`（3）。这个因子对视黄酸特别敏感，可能在形态发生中起着重要作用。HeLa细胞核抽提物和AP2同源DNA探针形成一个特定的复合物。用纯化的蛋白作凝胶迁移实验时，应用20-50ng的蛋白。3．CREB：CREB是一个37 kDa的转录调节因子，对cAMP应答，识别5`-T（G/T）ACGTCA-3`DNA同源序列（6，11）。它含亮氨酸拉链结构而形成同聚双体，相关的基本结构域和c-JunDNA结合结构域同源。当用HeLa细胞核抽提物时，能和CREB同源序列形成一个复合物。4．NF-kB：NF-kB最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现，形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49（也可称为p52），p75（c-Rel）,p68(RelB)。p65，p68，p75单体起反式激活作用。p50，p49（p52）单体具有DNA结合活力，但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体，类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。IkB和p65单体结合，阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。在体外高浓度的p65能形成同源双聚体，能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应（14）。p49和p50也能形成同源双聚体，但在细胞中的浓度很低。通常，在作NF-kB的凝胶迁移实验时，在20ul的反应体积中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸（pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。当用纯化的蛋白时，250-300ng足以形成凝胶迁移复合物，而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟，在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中，因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时，可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物，即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49，p50，p65的细胞中，可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物（p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65），如果存在高浓度的p65，可检测到微量的p65/p65。下列试剂可加强NF-kB在体外的结合：mM的GTP，ATP，精胺，亚精胺，钡或钙离子，ng的Co+3(NH3)6（12）。5．OCT1：OCT1是OCT转录调节因子家簇中的一员，显然在哺乳细胞中存在比较广泛（5）。POU结构域包括POU-box和Homeo结构域。当用HeLa细胞核抽提物时，可检测到一个与OCT1同源探针形成的序列同源凝胶迁移复合物。6．SP1：SP1是一个O-糖基化的转录调节因子，它识别10个核苷酸长度的同源序列5`-GGGGCGGGGC-3`（1）。核心识别序列是5`-GGGGCGGG-3`。同核心序列相似的序列常存在于启动子中。SV40的早期启动子就是一个例子，它是第一个可以结合SP1的启动子。根据糖基化的不同，它的分子量在95-105kDa，DNA结合结构域中的三个锌指纹决定了序列的特异性。HeLa细胞核抽提物与SP1同源探针形成特异的凝胶迁移复合物。7．TFIID/TFIIB：TFIID和TFIIB是基本的转录调节因子，参与RNA聚合酶II启动子的基本的转录（16）。TFIID与真核启动子的TATA区域形成特异的DNA结合。TFIID由几个蛋白组成，而其中的TATA区域结合蛋白（TBP），参与TATA序列的结合。TFIID的其他的蛋白组分被称为TBP-相关因子（TAFs）。用TFIID探针寡核苷酸和HeLa细胞核抽提物，可得到一个微弱的凝胶迁移带，但很难确定为是TFIID序列特异凝胶迁移复合物。纯化的重组的TBP很难作凝胶迁移实验，这部分是由于TBP存在很强的正电荷，导致TBP/DNA复合物很难进入凝胶。纯化的TBP形成二聚体后不能结合DNA（17）。因此形成的二聚体可参与DNA结合。TFIIB不单独与DNA结合，但与TFIID结合后增强它与DNA的结合。TFIIB与预启动复合物结合后，致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有重要作用。当用纯化的TFIID作凝胶迁移实验时，poly(dI-dC)不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油，20mMTris(pH8.0), 10mMMgCl2, 2mMDTT, 89mMKCl。对TFIID的凝胶结合实验中，可加入poly（dG:dC）?dG:dC。形成的复合物在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离，凝胶组分是：0.5′TBE, 6%聚丙烯酰胺凝胶(19:1丙烯酰胺:双叉),4mMMgCl2, 0.02%NP-40, 电泳缓冲液组分是：0.5′TBE，4mMMgCl2, 0.02%NP-40。当研究含TFIID和TFIIB的复合物时，应从结合缓冲液，凝胶，和电泳缓冲液中去除MgCl2。这些是一般的要求，用不同的细胞抽提物和TFIID、TFIIB形成复合物作凝胶迁移实验时，应对多种因素进行优化以达到理想的条件。8)在一次凝胶迁移实验中，用多少量的蛋白质或抽提物，和标记的DNA探针？对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化，一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白：DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍。用粗制核抽提液，需要1-20ug蛋白形成特异的复合物。所加入反应的探针的量是50，000-200，000cpm32P-标记的探针（高特异活性），反应体积为1-5ul。这相当于10-50fmoles的DNA探针。探针应保存在-20oC以防止降解，在合成或标记后1-2个星期内必需使用。无论探针或是结合蛋白应避免多次冻融。9)能用体外翻译法制备目的蛋白质吗？Promega没对所有的转录调节因子作这类测试。一般，用麦胚抽提物作哺乳细胞转录因子或DNA结合蛋白的体外翻译，兔网织红细胞溶裂解液可能含有内源哺乳细胞转录因子或DNA结合蛋白。但TNT？/sup>兔网织细胞溶解液系统（a,b,c,d）与TranscendTM 生物素标记的tRNA(目录号E3201)一同使用，翻译了转录调节因子AP1（c-Jun），它使AP1同源寡核苷酸（目录号E3201）产生的迁移效果和重组的AP1相同（18）。TNT？/sup>T7偶联的麦胚抽提物（b,c,d,e）在体外翻译了c-Rel。这一蛋白特异地使免疫球蛋白k轻链增强子探针产生迁移。在c-Rel结合反应中加入体外翻译的MAD-3（IkB家簇中一员）可干扰其相互作用。10)poly(dI:dC)?dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)?dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)?dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)?dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)?dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用于凝胶迁移反应，它们会带有目的蛋白的结合位点。11)用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%（30：1丙烯酰胺：双叉），在特定条件下可用高或低的浓度。PH, 聚丙烯酰胺的浓度, 丙烯酰胺：双叉丙烯酰胺的比会影响复合物在凝胶中的迁移。大多数蛋白用10-15伏的电压，解离快的蛋白用短时间和高的电压（30-35伏的电压），电泳时所用的TBE和TAE必需是新配制的，无沉淀。低的离子强度和丙烯酰胺基质的`箱子效果`有助于复合物的稳定。也可将TGE缓冲液（12.5mMTris,pH8.3, 95mM甘氨酸，0.5mMEDTA）用于不稳定的蛋白/DNA复合物。可在4oC进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。加样样品液中的色素会导致不稳定复合物的解离，应用不含考马斯兰和二甲苯蓝的加样样品液。当带型不紧密出现拖尾时，表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合，以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量，或盐的浓度过量不适用于这一反应。在含抽提液的带中不含游离探针或复合物，但只含探针的带中有探针表明抽提物有核酸或磷酸酶污染，应在抽提液中和结合反应中加入相应的抑制剂。目前可用高强度琼脂糖凝胶分离蛋白/探针复合物（Metaphor?/sup/agarose）。12)如何在一个特定的复合物中确定一个蛋白质的存在？部分纯化的蛋白或粗制核抽提液和一个特定的探针可形成一个或几个特异的蛋白复合物。多个复合物的存在表明蛋白降解，应在制备抽提液的溶液中和结合反应中加入蛋白酶抑制剂。确定复合物中蛋白的特征可能会困难，但有一些方法作这方面的研究。如有目的蛋白的抗体，可进行超迁移实验，抗体和蛋白/探针复合物中的蛋白结合，使复合物的迁移延迟，形成超迁移。增量的抗体加入到结合反应中。抗体可加入到蛋白和探针反应后，也可将抽提物与抗体结合后，再加入探针。取决于抗体的特定的抗原决定簇，前者有利于超迁移复合物地形成，后者阻止复合物的形成导致原复合物的强度的减少。在大多数实验中，应对抗体作滴定，先使抗体：蛋白的摩尔比为1：1，然后应需要增加抗体的量。当有纯化的蛋白时，可用它们和实验的带型迁移复合物比较。除超迁移实验外，复合物中蛋白的特征也可用UV交联和标记转移来分析。在均质标记的探针和细胞核抽提物保温后，用UV照射使复合物交联，随后用DNA酶降解未保护的探针。需用均质标记的探针，因DNA酶会从末端标记的探针中除去标记。和保护的几个核苷酸交联的蛋白在变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离，干燥，放射自显影。结合蛋白的分子量可和标准分子参照物比较。也可用目的蛋白的抗体对复合物作Western印迹分析（20）。如一个蛋白和DNA探针的特定序列结合，可用含保守结合序列的竞争寡核苷酸，以及突变体来确定它的特征。也可用定点突变将保守序列结合位点改变来研究复合物的形成。参考资料1. Briggs M R et al 1986 Science 234, 472. Lee W et al 1986 Cell 49, 7413. Williams T et al 1989 Genes Dev 2, 15574. Sen R and Baltimore D 1986 Cell 46, 7055. Parlsow T G et al 1984 Proc Natl Acad Sci USA 81, 26506. Montminy M R et al 1986 Proc Natl Acad Sci USA 83, 66827. Angel P et al 1987 Cell 49, 7298. Chiu R et al 1988 Cell 54, 5419. Rauscher F J et al 1988 Cell 52,47110. Imagawa M et al 1987 Cell 51, 25111. Berkowitz L A and Gilman M Z 1990 Proc Natl Acad Sci USA 87, 525812. Baeuerle P A 1991 Biochim Biophys Acta 1071, 6313. Duckett C S et al 1993 Mol Cell Biol 13, 131514. Urban M B et al 1991 EMBO J 10(7), 181715. Dynan W S and Tjian R 1983 Cell 35, 7916. Peterson M G et al 1990 Science 248, 165217. Coleman R A et al 1995 J Biol Chem 270, 1384218. Beckler G and Hurst

1. 避免缓冲液高浓度电供体基团比:NH4甘氨酸精氨酸Tris等等;2. 各种缓冲液能强螯合剂EDTAEGTA等等;3. 各种缓冲液能高浓度强原剂比DTT防止二价Ni原; 4. 能含离型垢剂比SDS防止Ni流失;-1mMPMSF防止目5. 破碎细胞候建议加入蛋白酶抑制剂比0.1蛋白降解;6. 缓冲液加入甘油防止蛋白间由于疏水相互作用发聚集沉淀甘油浓度高达50%(v/v)7. 应避免含碳酸氢钠柠檬酸等物质;8. 缓冲液NaCl浓度应300mM2M间;9. 加入变性剂促溶盐酸胍(高6M)尿素(高8M) 10.加入非离型垢剂TritonTweenNP40等高2%减少背景蛋白污染除核酸污染组氨酸标签蛋白纯化没有意义建议自己下去查查资料

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等;2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等;3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失;-1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1蛋白被降解;6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v)7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质;8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间;9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染组氨酸标签蛋白的纯化感觉这样的提问没有意义建议自己下去查查资料

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[编辑本段]基本信息 总 部： 英国沃金(Woking) 首次参赛： 1966年05月22日 (摩纳哥GP) 参赛次数： 649 车队冠军： 8 (1974, 1984, 1985, 1988, 1989, 1990, 1991, 1998) 车手冠军： 12 (1974, 1976, 1984, 1985, 1986, 1988, 1989, 1990, 1991, 1998, 1999, 2008) 分站冠军： 162 胜率：24.96% 杆位次数： 141 单圈最快： 137 车队总分： 3517.5 领奖台： 431 单赛季最多获胜：15 现役车手：刘易斯-汉密尔顿 （Lewis Hamilton） 和 海基-科瓦莱宁 （Heikki Kovalainen） 试车手： 德拉-罗萨 和 帕菲特 官方网站： http://www.mclaren.com 现役车手： -------------------------------------------------------------------------------- 全 名：刘易斯-汉密尔顿 （Lewis Hamilton） 生 日：1985年1月7日 出生地：英国 国 籍：英国 身 高：1.75 体 重：66KG 车 号：1 常驻地：瑞士 处子秀：2007.3.18澳大利亚GP 婚 姻：未婚 网 站：http://www.lewishamilton.com/ -------------------------------------------------------------------------------- 全 名： 海基-科瓦莱宁 （Heikki Kovalainen） 生 日： 1981年10月19日 出生地： 芬兰 国 籍： 芬兰 身 高： 1.72 体 重： 66KG 车 号： 2 常驻地： 芬兰 处子秀： 2007.3.18澳大利亚GP 婚 姻： 未婚 网 站： http://www.heikkikovalainen.net/[编辑本段]迈凯轮MP4-23技术参数 车型代号 迈凯轮MP4-23 引擎代号 梅赛德斯-奔驰FO108V 底盘 迈凯轮碳/铝蜂窝状复合材料模具一体成型(配备前后防冲击机构/安全油箱) 引擎排量 2.4升 前后悬挂 碳纤维双叉臂推杆结构 气缸形式 90度V8 悬挂减震器 Koni 引擎最高转速 19000转/分(FIA自2007年限定) 变速箱 7挡半自动变速箱＋1倒挡 活塞直径 98毫米(FIA限定) 离合器控制方式 手动 气缸间距 1 06.5毫米 轮胎型号 普利司通Potenza 气阀数量 32气阀 电池品牌 GS-Yuasa-Corporation 燃油 美孚1号无铅汽油(5.75%生物燃油) 方向盘 迈凯轮助力转向 润滑油 美孚1号 电子系统 迈凯轮 引擎质量 95公斤(FIA限定最低质量) 轮毂品牌 Enkei 无线电 Kenwood[编辑本段]车队管理层人物传记 罗恩.丹尼斯（Ron Dennis)-----迈凯轮F1车队总管 迈凯轮集团主席兼CEO 罗恩.丹尼斯，生于1947年6月1日，在1966年在Cooper赛车公司开始他在赛车运动中的事业。他后来转入布拉布汉姆(Brabham)车队，并在1968年指派为Jack Brabham爵士的首席机械工。3年后，罗恩.丹尼斯成立了自己的公司Rondel Racing，在70年代期间，他连续经营了非常成功的车队，集中精力于F2 和Procar冠军杯赛事上。1980年，罗恩.丹尼斯的公司Project Four和迈凯伦有限公司合并，成为迈凯伦赛事公司。这是迈凯伦时至如今享有成功与多样化的催化剂。 自从1980年以来，迈凯伦已赢得7项世界车队锦标赛冠军，并9次获得世界车手锦标赛冠军。1989年，罗恩.丹尼斯参与筹资建立了迈凯伦汽车公司，设计生产革新的F1赛车。 迈凯伦公司在罗恩.丹尼斯率领下，一举称霸20世纪80年代。于是，罗恩.丹尼斯从此开始了将F1顶尖技术转化到民用车上的计划。就这样，堪称陆地之王的迈凯伦F1公路跑车诞生了！ 迈凯伦F1公路超跑性能指数 （这是一组至今都让自以为是的跑车之王法拉利ENZO汗颜的数据） 0-100kph用时：3.2s 0-160kph用时：6.1s 0-242kph用时：12.7s 0-320kph用时：23.4s 极速（公证记录）：386kph 极速（最好成绩）：391kph 理论极速：400kph 最大功率：627BHP 由于迈凯伦F1跑车项目成本太高，同时恰逢欧美市场经济衰退期，迈凯伦于1998年正式停产F1超跑。 之后，迈凯伦公司于1999年为德国戴姆勒-奔驰集团公司(Daimler-BENZ AG)设计、开发与研制一体的 Vision SLR跑车项目。Vision SLR超跑在2003年正式量产，并同时将Vision SLR更名为SLR McLAREN（Mercedes-Benz SLR McLaren)。之后于2006年推出SLR 722，2007年年初推出SLR Roadster和年末推出的SLR 722 GT(赛车）。 迈凯轮集团持续增长和多样化发展，目前旗下拥有迈凯轮汽车有限公司、迈凯轮电子系统公司、迈凯轮市场营销公司、迈凯轮应用技术公司、绝对美味(Absolute Taste)公司和Lydden赛场公司，它们皆为迈凯轮赛事公司的迈凯轮F1车队这支旗舰添砖加瓦。 丹尼斯和妻子及三个孩子居住在Surrey。他在2000年，因对汽车运动的贡献而被授予女王荣誉勋章(CBE)。2001年，丹尼斯因对汽车运动的贡献而被颁发BRDC金牌。在1996年，朗恩还从De Montford大学获得Hon Dtech技术博士学位，1997年在伦敦城市大学获Hon DSc科学博士学位，在2000年获Surrey大学的荣誉博士学位。 马丁.惠特马什(Martin Whitmarsh)-----迈凯轮F1车队一级方程式首席执行官 马丁.惠特马什，生于1958年4月，1980年以机械工程学学位毕业，在英国航空和宇航局(现BAE SYSTEMS)开始他的事业，当时工作是有限元件分析。马丁在组织内部发展很快，在1988年提升为生产主管。 1989年末，马丁离开了BAE SYSTEMS，加入现称作迈凯轮赛车公司的迈凯轮国际公司，成为运作主任，该专设的职位运用他的管理专长，协助此公司的成长和多样化发展。除了负责此公司的工程和制造职能外，马丁最初还负责比赛队及测试队。 在迈凯轮国际公司待了两年后，马丁的职位升为运作主管。1997年，作为国际化母公司，迈凯轮集团持续发展，马丁被提拔为总裁，一个如今管理车队员工和协调F1运作及与公司技术伙伴关系的职务。除了保证集团主要业务F1继续成功高效地运作这个主要任务以外，马丁也参与了迈凯轮集团的长期发展策略工作。马丁在任期间，迈凯轮车队问鼎了3项世界车队锦标赛桂冠和4项世界车手锦标赛桂冠。在2004年4月，马丁被任命为迈凯轮F1车队一级方程式首席执行官，负责一级方程式引擎和底盘计划。 罗伯特.豪格(Norbert Haug)-----梅赛德斯·奔驰汽车运动公司副董事长 生于1952年，罗伯特.豪格一生都与车打交道，特别是赛车。起初他是他家乡Pforzheim日报社的一名实习记者，他对一切有车轮和引擎的东西的热爱使他在1975年到斯图加特出版社的Motor-Presse-Verlag 。他一开始是《汽车运动》专刊编辑部的成员，1976年他为出版社的旗舰刊物《汽车和运动》杂志负责运动部门。1985年，罗伯特成为《汽车运动》的主编，后来在1988年以副主编身份重新回到《汽车和运动》。 两年后，已婚并有一个女儿的罗伯特更换了角色 - 梅赛德斯·奔驰AG管理董事会任命这位知识深厚的赛车记者成为他们新的汽车运动主任。自1990年10月1日开始，他已完全负责所有梅赛德斯·奔驰公司汽车运动活动。在罗伯特的领导下，梅赛德斯·奔驰 达到了国际汽车运动的颠峰。作为引擎供应商，该"带星的品牌"在1994年庆祝它重返F1赛事，而且和Penske合伙赢得印第安纳波利斯(Indianapolis) 500。一年后，同迈凯轮车队的合伙关系达成， 带来了1998年世界F1车手和车队冠军的双重胜利，并再次于1999年让哈基宁荣获世界车手桂冠。2000，2001和2003年，车队在车手排行榜上取得亚军，另外在2000和2001年车队排名中居二。在整个90年代，梅塞德斯-奔驰还在其它重要的汽车运动赛事中收获了冠军美誉：1992，1994和1995年德国拉力车赛(DTM)冠军；1995年国际拉力车赛(ITC)冠军；1997年，梅赛德斯·奔驰在美国卡丁车锦标赛上居制造商排名之首；1997和1998年，AMG梅塞德斯在国际汽联GT锦标赛上赢得车手和车队双料桂冠。2000，2001和2003年，梅赛德斯·奔驰和Bernd Schneider 在新的德国拉力车赛上赢得三次殊荣。具体的在这里http://baike.baidu.com/view/410468.htm

在高中文化知识的基础上，掌握本专业所必需的基础知识、基本原理和较熟练的专业实践技能，学生毕业时要求掌握的知识和具有的能力为： （1） 从事机械设计与制造加工工艺规程的编制与实施工作； （2） 从事机械、电气、液压、气压等控制设备的维护维修工作； （3） 从事工艺工装的设计、制造工作； （4） 从事数控机床、加工中心等高智能设备的编程及操作工作； （5） 从事机械CAD/CAM技术的应用工作； （6） 从事机械设计与制造的现场技术管理工作； （7） 从事机电产品的销售和服务工作。 （8） 钳工、车工或电工的初级技能； （9） 编制、实施机械设计与制造工艺规程的基本能力； （10） 使用、保养、维修、管理机电设备的基本能力； （11） 选用、设计制造、调试工艺工装的基本能力； （12） 操作数控机床、加工中心等高智能设备的基本能力； （13） 行机械设计与制造生产现场技术管理的初步能力； （14） 应用机械CAD/CAM的基本能力； （15）应用计算机处理文字、图表、数据和信息，设计机械和电气图样，编制数控加工程序的能力。 （一）基础课 1.两课（132学时） 本课程包括马克思主义哲学、毛泽东思想概论、邓小平理论和三个代表重要思想、法律基础知识、思想品德修养。本课程是高等职业技术学院学生必修的一门德育课，主要讲授马克思主义哲学基础；充分认识毛泽东思想是中国共产党人在长期奋斗中坚持马克思主义基本原理同中国具体实际相结合的第一个理论成果；深刻领会邓小平理论和三个代表重要思想的意义，掌握邓小平理论和三个代表重要思想的理论论述；使学生了解宪法、行政法、民法、经济法、刑法、诉讼法中与学生关系密切的有关法律基本知识；对学生进行普遍关心的形势、政策、人生、理想、道德、民主、纪律等方面的教育。初步树立正确的世界观、人生观和价值观；做到知法、懂法，增强法律意识，树立法制观念，提高辨别是非的能力；培养学生优良的思想品质、理想和人生观，为将来从事社会实践，做一个合格的高职生打下基础。 2.体育与健康（108学时） 本课程通过体育基础理论和基本技能的传授和有效的体育实践，全面增强学生体质，促进学生身心的健康发展。使学生喜爱体育，掌握锻炼身体的基本方法，养成体育锻炼的习惯；培养学生勇敢顽强的精神，公平竞争的态度，以及乐观、自信、进取的心理品质。 3.大学语文（60学时） 本课程主要讲授两部分，一部分以阅读为主，精选古今中外公认的文学名篇，另一部分以 写作为主，系统介绍写作知识。使学生学会欣赏文学名篇和掌握阅读方法与技巧，并 提高学生的读写能力。 4.高等数学（128学时） 本课程主要讲授极限与连续、一元函数微分学、积分学，向量代数与空间解析几何，多元函数微分学，二重积分，无穷级数，常微分方程等。通过教学，进一步提高学生的数学素养，培养学生的高等数学运算、空间想象、数形结合、思维和实际应用能力，为学习专业课打下基础。 5.大学英语（128学时） 本课程是一门基础课。以培养学生外语应用能力为教学重点，同时传授必要的语言知识。通过教学，对学生进行听、说、读写的语言训练；培养学生较强的阅读与本专业有关的外语技术资料的能力，听说能力和基本的书写外语信函等应用文的能力，为学生进一步提高外语使用能力打好基础。 6.计算机应用基础（60学时） 主要讲授计算机的基础知识、常用操作系统的使用、文字处理软件的使用、计算机网络的基本操作和使用，掌握计算机操作的基本技能、具有文字处理能力，数据处理能力，信息获取、整理、加工能力，网上交互能力，为以后学习和工作打下基础。 （二）专业课 7.机械制图与CAD(194学时，机械测绘1周，CAD实训1周) 本课程是一门技术基础课。主要讲授投影作图和机械制图等内容，使学生掌握正确正投影法的基本原理和基本方法，熟悉机械制图国家标准。培养学生具有一定的图示能力，读图能力，空间形体的想象能力，要求学生能较熟练地绘制一定复杂程度机械零件工作图和部件装配图，并能按给定的要求正确标注尺寸、公差配合及表面粗糙度等。熟练运用计算机绘图，掌握一种计算机辅助绘图软件的应用。 8.工程力学（90学时） 主要讲授静力学、运动学、动力学和材料力学。静力学和运动学部分，使学生认识物体机械运动的基本规律，学会运用这些规律和方法分析、解决工程实际中的力学问题；材料力学部分，使学生掌握杆件强度、刚度和稳定性等方面的知识，能熟练地对构件进行强度和刚度计算，并具有较强的实践能力。 9.机械设计基础（66学时，课程设计3周） 主要讲授常用机构的运动与动力分析、常用机械零件的设计等内容。本课程使学生掌握常用机构，具有分析机械运动和动力性能的能力；掌握通用机械零件的知识，具有分析、选用和设计机械零部件及机械传动装置的能力和查阅、运用有关资料的能力。 10.金属工艺学（66学时，金工实习5周） 本课程主要讲授金属材料来源，力学性能，晶体结构钢的热处理，常用工程材料、铸造、锻压和焊接等内容。使学生了解机械零件毛坯各种成形方法特点和应用；掌握常用工程材料的性能及金属热处理方法；具有选用材料、毛坯及分析毛坯结构工艺性的能力。 11.电工学与工业电子学（90学时，电工实训2周） 电工学部分主要讲授直、交流电路及常用电机、电器设备的应用知识。使学生了解常用电机、电器的工作原理，能看懂电器、接触器控制线路原理图。学会使用万用表示波器等常用仪表和选用常规电器元件，并能装调一般的控制电路。工业电子学部分主要讲授交、直流放大电路、振荡电路、脉冲与数字电路的工作原理及其应用。使学生掌握电子电路的 分析方法，能阅读电子线路图，学会使用常用的电子仪器。 12.公差配合与测量技术（44学时，大作业1周） 本课程公差部分主要讲授光滑圆柱公差配合、形位公差，表面粗糙度和圆锥度结合，螺纹结合，键联接，圆柱齿轮等公差及直线尺寸链等内容。通过大型作业综合训练，使学 生掌握公差配合的概念；了解有关公差标准的规定；对图样上常见的公差标准能正确地解释和标注；能按公差选用原则，用类比法选择确定合理的公差配合。 测量技术部分主要讲授测量技术知识，光滑工件检测及光滑量规设计，螺纹、键、圆柱齿轮的测量等内容。使学生了解常用测量仪器的种类，应用范围和检测方法，能设计极限量规和位置量规。并通过实验教学，使学生具有正确选用和使用现场常用测量仪器，对机械零件进行综合检测的能力。 13.液压与气压技术（44学时） 本课程主要讲授液压传动的相关知识，液压元件、液压基本回路及典型液压系统等内容，使学生熟悉常用液压元件的工作原理及选用方法；能参照说明书阅读设备的液传动系统图；通过综合实验，掌握常见故障的分析和排除方法，并具有调试和设计一定设备液压系统的能力。 14.电气控制技术（44学时） 本课程主要讲授常用低压电器，常用金属切削机床继电器故障的排除方法；可编程控制器的工作原理及用可编程控制器组成控制线路的方法。使学生能熟练地阅读常用机床可编程控制线路的原理图。对其常见的故障有一定的分析能力，并能用可编程控制器组成较复杂的控制线路 15.金属切削原理与刀具（66学时，设计与综合实训1周） 本课程金属切削原理部分主要讲授刀具的几何角度与切削要素、刀具材料、切削变形、切削力、切削热及温度，刀具磨损与耐用度、刀具几何参数的合理选择等内容使学生具有根据工艺要求合理选择各类刀具、确定刀具几何要素、选择切削用量和设计标准刀具能力。 16.机械加工设备（44学时，拆装1周，课程设计1周） 本课程主要讲授机床结构性能、传动、使用和机床设计基本知识等内容，使学生掌握机床的基本知识。培养学生能正确选用，合理使用，维护、保养、安装、调试以及检查验收常用机床，并具有改装机床部件和设计专用机床的初步能力。 17.机械制造工艺学（66学时，课程设计1周） 本课程主要讲授工艺规程设计、典型零件加工工艺和质量，生产率，经济性综合分析等内容。使学生掌握机械加工工艺的理论知识，了解典型零件加工的常规工艺和适用的先进工艺技术，具有编制、贯彻工艺规程和分析解决工艺技术问题的能力。 18.机床夹具设计（44学时，课程设计1周） 本课程主要讲授工件的定位机构、夹紧机构和专用夹具设计等内容。使学生掌握工件的定位夹紧原理和误差分析方法，熟悉典型机床夹具的结构特点，具有设计一般复杂程度机床夹具的能力。 19.单片机原理及应用（44学时，课程设计1周） 本课程是一门专门化课程。主要讲授单片机的基本组成、原理、指令系统、存储器、接口技术与接口芯片等内容。使学生了解微处理器、存储器和接口电路的结构及其工作原理：掌握硬件连接的一般方法。较熟练掌握一种典型单片机的指令系统。掌握用汇编语言进行程序设计的方法及常用接口电路的使用。初步掌握一种单片计算机的软硬件应用(如进行简单工业控制)设计。 20.数控机床操作入门（66学时） 本课程是一门专门化课程。主要讲授数控机床的工作原理、主要技术参数、结构与编程、使用及日常保养等方面知识，也兼顾介绍与典型普通机床使用与保养有关的知识。培养学生正确操作典型数控机床、编制较复杂零件的加工程序的能力，具有合理选用数控机床和普通机床的类型、规格的基本知识和基本能力；具备分析、解决生产中与现代机床相关的实际技术问题的初步知识，具有日常保养维护、管理和改造机床的基本知识。 21.CAXA制造工程师（66学时） 本课程主要讲授CAXA制造工程师的基本概念和基本操作、线架造型、曲面造型、特征实体造型、数控铣加工的基本知识、数控铣加工刀具轨迹生成与编辑、轨迹生成方法分析等，使学生不仅能够掌握较强的三维造型能力和数控自动编程技巧，而且能达到计算机辅助制造的目的。 （三）选修课 22.现代礼仪 本课程主要讲授礼仪的概念、仪容礼仪、仪表礼仪、仪态礼仪、言谈礼仪、接待礼仪、现代交际礼仪等内容，使学生充分认识学习礼仪的重要意义，为提高个人竞争能力、自身修养、塑造良好个人形象、促进社会文明打下基础。 23.机械专业英语 本课程主要讲授金属力学性能、金属材料及热处理、铸造、锻压、焊接、机械零件、公差与测量、电工学、液压传动、机床、机械制造工艺与夹具、金属特种加工、刀具以及工业企业管理等机械制造专业的主要专业课和专业基础课方面的内容，使学生较全面地掌握机械制造专业方面的专业英语水平。 24.口才、应用文写作与实训 本课程主要讲授口才能力培养、口才应用和写作知识及应用文三部分。使学生具有较好的口才表达能力和应用文写作能力。 25.数控加工工艺 本课程主要讲授数控加工的工艺基础，工件在数控机床上的装夹，数控加工系统的工艺装备，数控车削加工工艺，数控铣削加工工艺，加工中心加工工艺等内容，使学生正确、合理、全面地掌握数控加工工艺，学到必要的机械加工工艺知识和数控加工工艺。 26.数控机床及其程序编制 本课程主要讲授数控机床概述，数控机床机械结构，计算机数控系统，数控机床编程基础，数控镗铣加工及手工编程，数控车削加工及手工编程等内容，使学生掌握机床、计算机、数控技术及手工编程等专业技术知识。 27.钳工工艺与技能训练 本课程主要讲授钳工工艺：划线、錾削、锯削、孔加工、螺纹加工、刮削、研磨、矫正和弯曲、铆接、装配知识、钻床夹具等。通过实际操作，使学生掌握钳工工艺的实际操作技术。 28.加工中心操作 本课程分为三部分，一是基础知识部分，主要讲授数学知识，公差、制图、材料、数控技术、切削刀具及切削知识、机械加工工艺规程基础知识；二是专业知识部分，主要讲授加工中心、常用刀具及辅具、机床夹具、常用测量器具、加工工艺、程序编制；三是加工中心操作及实例。使学生在就业前复习在校期间所学课程内容，为顺利就业打下基础。 （一）制图测绘及CAD实训（60学时） 通过测绘装配体，使学生了解装配体的工作原理、熟悉拆装顺序。具有手工和利用计 算机绘制装配图和零件图的能力。 （二）金工实习（150学时） 金工实习使学生获得机械制造的基础知识，完成本专业必须的基本操作训练。通过机加工工种的轮换实习，使学生具有1～2种主要机械设备的初步操作技能，为后面的专业课学习打下基础。金工实习包括钳工、车工、铣工和磨工。 钳工实习要训练学生了解钳工的工艺范围、应用及安全技术，能够正确使用钳工的常 用工具、量具，掌握金属凿削、锉削、锯割和划线等操作方法，能够按图样独立加工形状简单的零件或成品。 车工实习要指导学生熟悉车床的组成，各部分名称、作用和操作方法，车床的使用维护。掌握车外圆与端面、切槽与切断、孔加工、车圆锥面、车成型面与滚花、车螺纹等操作方法。能够按图样技术要求，独立地加工轴、套、螺纹类零件。简单车刀的刃磨。 铣、磨工实习要指导学生熟悉铣床的组成，各部分名称、作用和操作方法，铣床的使用维护。掌握铣平面、铣槽与切断、铣等分工件等操作方法。指导学生熟悉磨床的组成、各部分的名称、作用和操作方法，能进行磨削外圆与平面等的操作。 （三）电工实习（60学时） 指导学生熟悉电工常用工具、仪表及其正确使用方法；掌握室内照明线路、简单动力线路安装、维修的基本方法；熟悉常见导线和绝缘体材料、灯具、开关及熔断器等的类型与选用。了解安全用电知识和电工安全操作规程。 （四）公差配合与技术测量大作业（1周） 本环节是《公差配合与技术测量》课程的配套实训。通过对动手操作与示范相结合的方法，使学生熟练地掌握常用测量器具的使用方法，掌握尺寸测量、角度和锥度测量、表面粗糙度的测量、形状和位置误差的测量、普通螺纹联接及齿轮的测量等方法。初步认识气动、电动量仪测量，三坐标测量机测量等方法。 （五）机械零件课程设计（90学时） 目的在于进一步巩固本课程及先修课程的知识，使学生系统地综合运用学过的知识，获得独立设计完整的简单机械或部件的能力，使学生初步掌握正确的设计方法，树立正确的设计思路和严谨的工作作风。 （六）电气控制线路安装调试（30学时） 该环节与电气技术课程配套。学生独立完成控制系统的安装、调试与故障排除。 （七）机械制造工艺课程设计（30学时） 要求运用所学的机械制造工艺知识，进行机械零件制造工艺的制定，训练学生根据实际加工条件，正确编制机械零件加工工艺的能力。 （八）机床夹具设计（30学时） 本课程设计的目的是培养学生应用工艺、工装基本理论和实际知识，独立设计一般复杂程度夹具的基本能力，并进一步提高学生计算、制图及使用各种资料的能力。 （九）机床拆、装、调(30学时) 指导学生了解机床装配与拆卸的工艺过程和方法，动手拆卸和装配机床部件，掌握常用拆装工具的使用，保证装配质量的技术措施。 （十）数控机床实习（30学时） 指导学生熟悉数控车床、数控铣床和加工中心的组成，各部分的名称、作用、编程功能指令和操作方法，使学生初步掌握数控机床加工程序编制、操作和调整机床的方法。 （十一）单片机原理课程设计(30学时) 选择具有检测或控制的应用课题，指导学生独立完成总体设计和部分硬件、软件模块 的设计，并进行模拟调试，培养学生初步掌握单片机原理与接口技术的应用能力。课程设计单独考核，考核成绩列入成绩册。 （十二）岗前培训（510学时） 为取得两种等级证书打好基础，进行为期3周的岗前培训，以期缩短上岗适应期。 （十三）公益劳动与机动（150学时） 为培养学生的劳动观念和劳动技能，每学期安排一周的公益劳动。 （十四）第二课堂 为培养和发展学生个性特长和创新能力，鼓励学生积极参加第二课堂和假期社会实践活动、课外活动、兴趣小组、专题竞赛、社会调查、社区服务、技术服务等活动。学生在三年教育时间内，应利用假期进行为期40天的社会实践；积极参加数控课程、机械制造等兴趣小组活动；根据其他有关部门的安排，参加专题竞赛、社会调查、社区服务、技术服务等活动。 课程设置与教学进程见附表3 七、教学组织 组织教学要以应职岗位的人才规格为目标，突出能力培养，全面提高学生综合素质。要依据各门课程的知识、技能要求，采用先进的教学方法，如模块式、CBE等，大量利用直观演示、双边教学、快速联想、小组讨论、作业练习、启发式等手段开展教学活动；教学内容应突出必需、适用、实用的原则，强调理论教学与实践训练并重，要以“应用”为主旨特征，各课程、单元之间不强求学科的系统性，要关注学生职业能力的培养，课堂教学和实验实训应以学生为中心，并注意对学生学习态度、兴趣、习惯、品质、意志等方面的培养，使其职业技能达到从事相应职业岗位（岗位群）工作所需的要求和标准。 （一）基础课 从应职岗位需求出发，充分考虑学生的文化基础，选择灵活多样的教学方法和适宜的教学内容。教学重点应是教法改革和内容选择，并注意培养学生自主学习和再学习的能力。根据教学内容，教师恰当地分配每一次课的时间，确定自学讨论、讲授、实验与练习所占的时间比例。同时使学生在学习态度、学习方法上为续课程打下基础。 利用第二课堂活动。以形势报告、文艺汇演、音乐、美术欣赏及心理健康咨询等提高学生素养；结合“两操一课”与体育竞赛增强学生体质；开展英语知识竞赛、演出与口才训练、书法、绘画、微机强化等培训班培养学生的特长，提高学生推销自己的能力，增加就业机会。 （二）专业课 1.课堂教学：以适用、实用为原则，优化知识技能结构，形成与应职岗位相一致的教学内容。从应职岗位需要出发，将各课程的知识与技能有机地结合起来，选用恰当的教学方法，精讲多练，突出能力教育。各课程要根据本专业在社会生产中的发展规律和生产实际情况，对教学内容作好时续上的必要调整。要积极探索以学生为主体的各种灵活多样的教学形式和影视、电脑课件等现代教学手段，并注重教学信息资料单、作业单、技能单、图表图像等教学资料的建设，提高教学效果。要引导学生选择好规定学分的选修课，并精心组织教学，以扩大学生的知识面。 2.教学实训：根据教学进程，安排在恰当时间。具体安排时间或全部集中或以周为单位分散。要充分认识教学实训对学生专业能力培养的重要性，认真准备好实训大纲，精心组织。充分利用实验室和校内外实训基地，按照应职岗位需要进行专项技能培训。让学生在实践中多做、反复做，使其把主干课程的知识与专业技能联系起来，进一步强化综合技能，教学实训重点是学生实际工作能力的培养和训练，所以，还要重视学生爱岗敬业、吃苦耐劳精神的教育和培养。 3.岗前实训：最后一学期，以顶岗形式安排就业前综合实训。模拟顶岗，强化训练，使学生稳定的掌握所学的各项知识和技能，并将各专项技能联贯起来形成职业岗位能力， 以缩短进入实际工作岗位的适应期，增强就业能力。 （三）供职技能教育 包括口才与演讲、书法与写作、公共关系学、人际关系学、人才市场消息、就业与创业指导、职业道德等多方面的内容。主要通过选修课和晚自习、第二课堂活动培养，达到增强供职技能的目的。 八、成绩考核 （一）本计划设置的所有必修课和学生选定的选修课及岗前实训等均在教学过程中或完成教学目标时进行知识和技能考核，合格者取得该课程学分。 （二）理论知识成绩采用百分制，技能成绩按优秀、良好、及格、不及格评定。专业课理论知识和技能两项考核中有一项不合格者，定为该门课程不合格，不能取得相应学分。 技能考核应根据应职岗位技能要求，确定其相应的主要技能考核项目，由专业课教师组织考核。 （三）教学实训、岗前实训由指导教师和实训基地共同组成考核小组考核，内容包括综合技能和工作态度。成绩按优秀、良好、及格、不及格评定。及格者取得相应学分。 （四）计算机应用能力达到国家二级标准并获取等级证书。 岗前实训结束后，按照《职业技能鉴定规范》要求，学生参加职业技能鉴定，获得教育部的计算机二级考试、劳动部高级数控工艺员和劳动部高级车工（或钳工、铣工、焊工等）职业资格证书。 （五）英语水平达到国家四级标准并获得等级证书 （六）学生学习质量评定采用学期成绩分。 学期成绩分=∑（换算前课程成绩×所得课程学分）+奖励成绩分 课程成绩=（理论成绩+技能成绩）÷2 技能成绩按“优90分，良75分，及格60分”折算。 （七） 考试方法：采用笔试、口试；闭卷、开卷；抽查、实际操作等方法。 九、学分计算 （一）一门课程按每16个学时1学分计算。 （二）教学实训、岗前实训、公益劳动按1 周1 个学分计算。 （三） 算机应用和职业资格证书每个计2学分。 ```不同的学校具体情况也不同，应该算是比较好找工作的

申请机械工程专业要有很好的工程背景，即非常优秀的数学和物理学的成绩。机械工程设计的研究方向还是比较多的，根据不同侧重点，机械工程专业可以细分为材料、能量、制造、控制四大类，而这四大类下面又分为几个研究方向，具体如下（一下机械工程简写为ME）：　　(1)材料大类：主要涉及机械领域内的纳米微米材料，聚合工程，生物机械。　　◆纳米微米机械材料的主要研究方向：　　纳米技术的不断发展给机械领域提供了一种全新的材料选择的可能。目前和机械交叉的研究领域主要集中在：高级材料学，材料及固体力学，材料及机械系统，材料加工，材料机械特性，材料力学，材料力学及制造。　　申请所需相关背景：需要有很强的材料学背景，同时要求有固体力学，材料力学，工程力学背景。　　申请难度：由于很多学材料的学生会转向这些和他们非常相关的学科进行申请，所有单纯具有机械背景的申请者能成功地机会非常小。而且纳米作为新兴的技术，受到各国重视，美国本土学生也会大量申请。所以此专业的申请难度非常大，没有很牛的背景请不要轻易尝试。　　◆生物机械的主要研究方向：　　生物机械，生物力学，生物机械工程，生物材料与设备，材料力学，生物传感器，纳米技术，活细胞封装，工程生物力学，生物医学机械工程，神经工程学，整形外科工程，感觉及神经系统研究，运动生物力学，人造心脏。　　申请所需相关背景：这是典型的新兴学科同传统基础学科结合的表现。总体来说，此方向需要生物学，机械工程和医学知识三个领域的知识背景。单纯的生物或医学背景是很难适应此学科的要求的，需要在具备机械背景的同时拥有生物，或者医学知识，尤其是生物学知识。这里所说的机械背景主要指机械中基本的制造，力学，材料背景。但要求不会像前面几个学科中对纯力学或材料背景那么高的要求。另外对于神经工程学，感觉及神经系统研究，人造心脏这些方向，处了需要医学、生物学、工程学知识外，还要有很好的EE背景(信号模拟，信号传输等)。　　申请难度：此学科属于新兴学科，所有美国学生申请的比较多，而且由于是交叉学科，三个领域的研究者只要在相关的另外两个领域有一定背景，就能够申请，因此申请的竞争非常激烈。对于国内纯机械工程学院毕业的学生来说最好不要尝试这个方向，成功机会渺茫。　　◆聚合工程的主要研究方向：　　主要通过分子聚合技术为机械领域提供新型材料　　申请所需相关背景：需要有很好的高分子材料相关背景，同时对材料力学的要求也比较高。　　申请难度：一般来说，高分子的学生多还是会选择化学系下进行研究。转向ME学院的毕竟还是少数，所有说如果你有很好的高分子背景，再有一定的机械基础则成功地机率会非常大。总体来说这个方向只要背景不错还是很好申请的。　　(2)能量大类，主要涉及的学科有：能量、摩擦、燃烧、流体这几大类。　　◆能量的主要研究方向：　　能量及流体，主要包括风能、水能的能量转换，能量转换系统及其设备的设计制造，能量系统及热力学，能量应用(加热/通风/空调及制冷用能)，能量及环境，环境能量技术评估，热物理学，太阳能，清洁能源，清洁能源技术。　　申请所需相关背景：申请此方向需要有很强的物理学基础;当偏流体学相关时，那么申请者相应的流体力学、空气动力学，热力学等相关背景;如果有能量系统整 体研究则要有很好的数学建模能力;在能量转换系统设备制造这一领域，则要有很好Design and Manufacturing相关背景。　　申请难度：由于目前来说，能源问题很受各国的重视，能量的主要研究集中在新能源的开发，各种能量转换设备的设计和制造上。资金主要来自于联邦政府的拨款，由于此领域的战略意义和研究的难度，有研究实力的都是综合排名比较靠前的学校，所以申请难度比较大，但是一旦通过录取，获得offer的机会是非常大的。　　◆摩擦的主要研究方向：　　摩擦时能量的转换，同热物理学结合非常紧密，并同新型材料的研究开发结合，对某些材料的相关摩擦性能进行研究。　　申请所需相关背景：物理学的研究内容之一，所以申请此专业一定要有好的物理背景。除此之外根据不同的方向应有热力学或材料学相关背景。　　申请难度：总体来说，申请此方向的多为物理理论研究者，申请竞争人群的数量不大，所以在ME专业中属于较好申请的一类。　　◆流体的主要研究方向：　　主要针对两大主要方向：航空航天领域和能量领域。前者有空气动力学，推进，空间探索系统，后者有水电、风电为主的流体能量转换。另外还有环境及生物流体力学，流体动力学，流体物理学，热力学，物质专业。　　申请所需相关背景：如果从事理论研究，则对物理、数学建模和流体力学要求非常高，如果是偏相关设备的研究则要很好的机械背景。　　申请难度：美国AME非常需要这方面的理论研究人才，所有多是原来从事物理、流体力学的研究者向此方向申请，一般纯机械的申请者在这几个领域申请是没有优势的。总体来说如果具有理论基础则在申请中有很强的竞争力。　　建议具有物理、流体力学、热力学、空气动力学等理论研究背景的申请者选择以上几个方向。　　◆燃烧的主要研究方向：　　燃烧，燃烧及推进，燃烧及能量，能量转换，燃烧及热传递，电气推进，涡轮及推进，汽车工程中内燃机的燃烧研究等。　　申请所需相关背景：通摩擦一样，物理背景必不可少，热力学非常重要。当然如果是偏向设备的话，那么就需要机械的设计制造与控制背景了。　　申请难度：燃烧同能量的结合极为紧密，但与实际工程的运用结合得更紧，所以申请者更多些，竞争要比能量和摩擦的激烈。　　(3)制造，主要包括设计和制造两大方向　　◆设计的主要研究方向：　　机械设计，产品设计，设计方法学，计算机辅助设计，工程设计　　申请所需相关背景：设计在国内主要以工业设计学院的形式设置。ME中的Design，适合的申请者一般具有机械理论基础(分具体机构和整体制造流程理论两大方面)，同时又有设计基础——包括一定的艺术功底(素描)，电脑绘图软件(Photoshop，ProE等)的运用。　　申请难度：对于国内的ME的学生来说如果单独申请设计，主要缺陷在于设计理念、理论的落后，对整体工艺的把握上同工业发达国家的申请者相比差距比较大。而工设的学生在机械理论基础知识上有比较匮乏，所以能够成功申请的应届毕业生不多。获得录取的多为有一定工作经验的申请者，所以参与竞争的人群数量较小，如果有相关背景申请比较容易。　　◆制造的主要研究方向：　　计算机辅助制造，产品实现，高级制造，制造科学，制造系统，纳米制造。　　申请所需相关背景：国内ME学生的主要申请方向集中于此，而且多集中于机械制造和计算机辅助制造。对于此专业的学生，申请首先需要基本的机械工程学背景，包括：机械原理，机械制造和固体力学背景。另外，对于产品实现，高级制造和计算机辅助制造，一定要有很强的计算机背景，包括计算机语言编程，设计软件的使用;纳米制造则首先要有很好的纳米技术应用背景，然后具备一定的工程学知识。　　申请难度：国内的ME学生大多数都比较适合此方向，所以申请的人数非常多，竞争比较激烈。不过美国大学单独把Manufacturing拿出来做主要学科设置的非常少，基本都是以Design & Manufacturing存在，国内学生在纯制造领域的竞争非常激烈。如果能够有足够的计算机设计背景那么成功获得录取的机会将会非常大。　　(4)控制类，包括计算机辅助工程，系统与自动控制，微电子系统　　◆计算机辅助工程的主要研究方向：　　计算流体力学，计算工程及信息技术，计算力学，计算科学及工程，计算机辅助工程，计算机辅助设计，力学建模，数学计算建模，数字推进，数字方法，数字模拟，虚拟现实应用。　　申请所需相关背景：极强的数学背景——应用数学，数学建模，计算工程，同时还需要计算机语言能力和计算机软件运用能力。如果能在具有这些能力的同时还能有相应的其他背景(如申计算流体力学有流体力学背景，申计算机辅助设计有设计经历，计算工程及信息技术有EE背景)那么会使自己在申请中得到很大程度上的加分。　　申请难度：由于偏向CS和EE，美国申请者，国际学生都很喜欢这个专业，所以申请的难度大大增加。虽然不如EE和CS，但是由于众多EE和CS的申请者为了躲避本专业的高难度申请，纷纷转向同本专业结合非常紧密而且有不错就业前景的这个方向，造成了此方向的同前面三个方向相比难度大了非常多。　　◆系统与自动控制的主要研究方向：　　系统控制，控制/设计/制造，控制及 动力学，控制/机器人/仪表，动力学系统及控制，动力学系统/控制及机械人，旋转机械动力学，动力学/振动/声学，系统动力学及控制，系统识别及控制，系统/测量/控制，智能机械系统，智能交通系统，机械系统，非线性动力学及适应控制，非线性飞行控制，机械人学，机械人及控制，机械人及动力学，机械人及自主系统，机械人及人机交互，转动体动力学，自动化，自动推进系统，自动巡航系统。　　申请所需相关背景：需要数学、计算机语言编程、基本的EE相关背景(电子电路知识)、控制的鲁棒与最优控制、鲁棒多变量控制系统、大规模动态系统、多变量系统的标识、最小最大控制与动态游戏、用于控制与信号处理的自适应系统、随机系统、线性与非线性评估的设计、随机与自适应控制等等，同时根据不同侧重点，应有相应的设计制造、动力学、仪表等相关背景。　　申请难度：同计算机辅助系统相比，此方向的研究内容更加靠近EE这个理工科中最难申请的专业。而且国内的ME和EE专业无一不会设置自动控制上的课程，所以说这个方向是ME的中国学生也是美国和国际学生 申请方向最集中的专业方向，加上EE和CS的申请人群的转移，所以这是ME专业中最难申请的方向。　　◆微电子系统的主要研究方向：　　MEMS，纳米制造，微机械与纳机械装置，超声微喷流(Microjet)和微米尺度电机，纳米尺度热量流动，微流体，微重力，微尺度热传递，微米/纳米系统，纳米摩擦学，纳米力学。　　申请所需相关背景：MEMS是一个极端多学科交叉的领域，最基础的方面是微制备技术的加工知识，制造微小结构的方法，同纳米技术结合紧密，所以很强的纳米技术必不可少。同时根据不同侧重点还需要有基本的机械理论知识，流体，力学相关知识。　　申请难度：这也是一个新兴的交叉学科，对美国学生有很大吸引力，另外由于EE学科中也有这个方向的设置，所以申请难度仅次于系统与自动控制。有强纳米材料背景的申请者会在申请中占有优势。　　(5)声学、光学，主要包括：激光技术、光电测量，声音动力学、公路噪音控制、震动　　◆声学的主要研究方向：声音动力学、公路噪音控制、震动　　申请所需相关背景：物理背景，声音动力学，声学传感器应用背景　　申请难度：申请者多为纯物理研究者，所以申请人群非常少，申请竞争不激烈，容易录取。　　◆光学的主要研究方向：　　激光技术，光电子学装置，超快电子学，非线性光学，微光子学，三维视觉，光通讯，软X光与远紫外线光学，光印刷学，光数据处理，光通讯，光计算，光数据存储，光系统设计与全息摄影，体全息摄影研究，复合光数字 数据处理，图象处理与材料光学特性研究。　　申请所需相关背景：强光学背景，测量技术，图像技术　　申请难度：虽然在美国光学和光电学结合非常紧密，但是国内这两个学科的结合紧密程度远不如美国。国内申请此方向的多是物理学基础研究者，而国内EE此专业的设置并不重，因此此方向国内的申请者很少。竞争不激烈，较容易申请。　　总体来说，ME专业中申请难度如下：　　最难申请的：系统与自动控制，MEMS，计算机辅助工程。　　其次：制造，设计。　　较易申请的：纳米材料，生物机械，聚合工程。　　最易申请的：声学，光学，摩擦，燃烧，能量，流体

是McLaren

at midnight / in the midnight

冷水进入热水器，流经水气联动阀体在流动水的一定压力差值作用下，推动水气联动阀门，并推动微动开关将电源接通并启动脉冲控制器，打开燃气通气电磁阀门，将燃气热水器燃烧器点燃，燃烧器点燃后，火焰检测元件通过检测火焰给出火焰信号予脉冲控制器，通过维持电流将电磁阀打开，维持燃烧器的正常燃烧，如果当点火失败，脉冲点火器因无检测到火焰的维持电流信号，无法维持电磁阀的正常开启，关闭电磁阀，切断燃气的供应。燃气热水器也会费一些电，但是很少很少，燃气热水器的电是用于主机板控制，比如LCD、LED显示、按键输入、燃气点火控制、温度控制等这些都是小电或说微功耗部分，不过这些基本是24小时工作，大部分时间处于低功耗状态，操作时处于工作状态，所耗电量都微不足道，排风扇、热水循环同样需要用到电。

主要是振动清洗除垢

一个偏机械，一个偏电路控制，就业简单来说就是机械工程师和电气工程师的区别，如果两种都懂，那就是机电工程师。

at midnight

迈凯伦除了质量差，毛病多，做工糙，剩下的都是优点

您好这些是航司的起飞、安全检查、餐前广播...中英文广播词希望可以帮助到你！1.安全检查广播女士们、先生们:飞机 ( 已经推出 准备滑行/已经开始滑行)，请您系好安全带，收超小桌板，调直椅背，打开遮光板，关闭电子设备的电源，包括带有飞行模式功能的手机。本次航班是禁烟航班。谢谢您的合作！Ladies and Gentlemen:We are ready for departure. Please fasten your seat belt, open the window shade, put the tray table in place，bring your seat back upright and switch off all the electronic devices, including the mobile phone in flight mode. Please do not smoke during the entire flight.Thank you!2.起飞前再次确认安全带女士们、先生们：飞机即将起飞，请再次确认安全带已经系好，所有电子设备已关闭。谢谢！Ladies and Gentlemen:We are ready for take-off，please double-check your seat belt is securely fastened and all electronic devices are switched off. Thank you.3.餐前广播女士们、先生们：我们将为您提供餐食及各种饮料，希望您能喜欢。在用餐期间，请您调直座椅靠背，以方便后排的旅客。如需要帮助，我们很乐意随时为您服务。谢谢！Ladies and Gentlemen:We are pleased to begin our meal services. Flight attendants will be moving through the cabin serving meals and beverages soon.For the convenience of the passenger siting behind you, please adjust your seat back to its upright and locked position during the meal service。If you need any assistance, please contact any flight attendant。　　4.起飞前广播、安全检查女士们，先生们：我们的飞机很快就要起飞了，请您配合客舱乘务员的安全检查，系好安全带，收起小桌板，调直座椅靠背，靠窗边的旅客请您协助将遮光板拉开。同时，我们将调暗客舱灯光，如果您需要阅读，请打开阅读灯。谢谢您的合作！祝您旅途愉快！Ladies andGentlemen:We will take off soon. Please be seated,fasten your seat belt and make sure that your tray table is closed, your seatback to the upright position. If you are sitting in a window seat, please help usby opening the shading plate.We will be dimming the cabin lights. If you wantto read, please turn on your reading light.Thank you!

变频器工作原理:主电路是给异步电动机提供调压调频电源的电力变换部分，变频器的主电路大体上可分为两类:电压型是将电压源的直流变换为交流的变频器，直流回路的滤波是电容。电流型是将电流源的直流变换为交流的变频器，其直流回路滤波是电感。 它由三部分构成，将工频电源变换为直流功率的“整流器”，吸收在变流器和逆变器产生的电压脉动的“平波回路”，以及将直流功率变换为交流功率的“逆变器”。整流器:　　最近大量使用的是二极管的变流器，它把工频电源变换为直流电源。也可用两组晶体管变流器构成可逆变流器，由于其功率方向可逆，可以进行再生运转。平波回路:　　在整流器整流后的直流电压中，含有电源6倍频率的脉动电压，此外逆变器产生的脉动电流也使直流电压变动。为了抑制电压波动，采用电感和电容吸收脉动电压（电流）。装置容量小时，如果电源和主电路构成器件有余量，可以省去电感采用简单的平波回路。逆变器:　　同整流器相反，逆变器是将直流功率变换为所要求频率的交流功率，以所确定的时间使6个开关器件导通、关断就可以得到3相交流输出。以电压型pwm逆变器为例示出开关时间和电压波形。 　　控制电路是给异步电动机供电（电压、频率可调）的主电路提供控制信号的回路，它有频率、电压的“运算电路”，主电路的“电压、电流检测电路”，电动机的“速度检测电路”，将运算电路的控制信号进行放大的“驱动电路”，以及逆变器和电动机的“保护电路”组成。 　　1）运算电路：将外部的速度、转矩等指令同检测电路的电流、电压信号进行比较运算，决定逆变器的输出电压、频率。 　　（2）电压、电流检测电路：与主回路电位隔离检测电压、电流等。 　　（3）驱动电路：驱动主电路器件的电路。它与控制电路隔离使主电路器件导通、关断。 　　（4）速度检测电路:以装在异步电动机轴机上的速度检测器(tg、plg等)的信号为速度信号，送入运算回路，根据指令和运算可使电动机按指令速度运转。 　　（5）保护电路:检测主电路的电压、电流等，当发生过载或过电压等异常时，为了防止逆变器和异步电动机损坏，使逆变器停止工作或抑制电压、电流值。数控机床上的变频器的作用:用于主轴的无极调速. 有CNC给出模拟电压(0----+10V),控制变频器的输出频率.从而改变主轴电机的转速,通过传动机构(皮带或齿轮)传到主轴,而改变主轴的速度(转速)

罗茨风机与离心风机的区别1、工作原理不同，离心风机用的是曲线风叶，靠离心力将气体甩到机壳处，而罗茨风机用的是两个8字形的风叶，它们间的间隙很小，靠两个叶片的挤压，将气体挤至出气口。2、由于工作原理不同，一般它们的工作压力不同，罗茨风机的出气压力比较高，而离心风机比较小。3、风量不同，一般罗茨风机用在风量要求不大但压力要求较高的地方，而离心风机用在压力要求低，风量要求大的地方。4、制造精度不一样，罗茨风机要求的精度很高，对装配要求也很严，而离心风机比较松。当然还有一些小区别就不说了。5、如果负载需要的是恒流量效果的情况时就用罗茨鼓风机。因为罗茨鼓风机属于恒流量风机，工作的主参数是风量，输出的压力随管道和负载的变化而变化，风量变化很小。罗茨风机是一种高压风机，罗茨鼓风机为容积式风机，输送的风量与转数成比例，把气体由吸入的一侧输送到排出的一侧。如果负载需要的是恒压效果的情况时就用离心风机。因为离心风机属于恒压风机，工作的主参数是风压，输出的风量随管道和负载的变化而变化，风压变化不大。6、离心式风机，风压力不大。空气的压缩过程通常是经过几个工作叶轮(或称几级)在离心力的作用下进行的。离心风机属于平方转矩特性，而罗茨风机基本属于恒转矩特性。

院校专业：基本学制：四年 | 招生对象： | 学历：中专 | 专业代码：080202培养目标培养目标 培养目标：本专业培养具备机械设计制造基础知识及应用能力，能在机械制造领域从事设计 制造、科技开发、应用研究、运行管理等方面工作复合型高级工程技术人才。培养要求：本专业学生主要学习机械设计、机械制造、机械电子及自动化等方面的基础理论 和基本知识，接受现代机械工程师的基本训练，具有机械产品设计、制造、设备控制及生产组织管 理等方面的基本能力。毕业生应获得以下几方面的知识和能力：1．具有数学及其他相关的自然科学知识，具有机械工程科学的知识和应用能力；2．具有制订实验方案，进行实验、处理和分析数据的能力；3．具有设计机械系统、部件和工艺的能力；4．具有对于机械工程问题进行系统表达、建立模型、分析求解和论证的初步能力；5．初步掌握机械工程实践中的各种技术和技能，具有使用现代化工程工具的能力；6．具有社会责任感和良好的职业道德；7．具有团队合作精神和较强的交流沟通能力；8．具有国际视野、终身教育的意识和继续学习的能力。主干学科：力学、机械工程。核心知识领域：机械设计原理与方法（含形体设计原理与方法、机构运动与动力设计原理、 结构与强度设计原理与方法、精度设计原理与方法、现代设计理论与方法）、机械制造工程原理 与技术（含材料科学基础、机械制造技术、现代制造技术）、机械系统中的传动与控制（含机械电 子学、控制理论、传动与控制技术）、计算机应用技术（含计算机技术基础、计算机辅助技术）、热 流体（含热力学、流体力学、传热学）。核心课程示例：1．示例一：工程制图（40+32学时）、材料力学（56学时）、理论力学（60学时）、机械原理(56 学时)、机械设计（56学时）、电路理论（40学时）、模拟电子技术（40学时）、数字电路（32学时）、 微机原理（40学时）、机电传动控制（64学时）、工程材料学（32学时）、机械制造技术基础（40学 时）。2．示例二：理论力学（64学时）、材料力学（64学时）、机械工程制图（48 +64学时）、机械原 理（64学时）、机械设计（64学时）、电工技术基础(64学时)、电子技术基础（64学时）、工程材料 （32学时）、热工基础（48学时）、机械制造技术基础（64学时）、控制工程基础（48学时）。3．示例三(1)工程机械方向：机械制图（32+48学时）、机械原理（48学时）、机械设计（48学时）、发动 机构造与原理（32学时）、液压与液力机械传动（48学时）、工程机械底盘（40学时）、现代工程机 械（48学时）、工程机械设计（32学时）、工程机械运用技术（32学时）。(2)机电一体化方向：机械制图（32+48学时）、机械原理（48学时）、机械设计（48学时）、控 制工程基础（40学时）、机械电子学（48学时）、机制工艺学（48学时）、机电传动控制（40学时）、 液压传动（40学时）、CAD/CAM（40学时）。主要实践性教学环节：金工实习、电工（电子）实习、认识实习、生产实习、课程设计、科技创 新与社会实践、毕业设计（论文）。主要专业实验：工程力学实验、机械设计基础实验、互换性测量技术基础实验、工程测控实 验、电工与电子技术实验、机械制造基础实验、机电传动与控制实验。修业年限：四年。授予学位：工学学士。 职业能力要求职业能力要求 专业教学主要内容专业教学主要内容《C/C++程序设计》、《机械CAD/CAM》、《AUTO CAD 二维绘图与三维造型》、《电路与模拟电子技术》、《数控技术及应用》、《机械精度设计》、《机械拆装与测绘》、《自动化制造系统》、《机械精度设计基础》、《自动化机械系统设计》 部分高校按以下专业方向培养：车辆、机辆工程、汽车运用、数控技术、机电一体化、机械新技术、机械设计制造、精密制造技术、机电传动与控制、制造自动化与测控技术。专业（技能）方向专业（技能）方向机械、技术类企业：机械设计、机械制造、控制设备的维护维修、数控机床的编程及操作、工艺工装的设计制造、机械CAD/CAM技术、现场技术管理。职业资格证书举例职业资格证书举例 继续学习专业举例 就业方向就业方向 发展前景：（1） 从事机械设计与制造加工工艺规程的编制与实施工作；（2） 从事机械、电气、液压、气压等控制设备的维护维修工作；（3） 从事工艺工装的设计、制造工作；（4） 从事数控机床、加工中心等高智能设备的编程及操作工作；（5） 从事机械CAD/CAM技术的应用工作等； 对应职业（岗位）对应职业（岗位） 其他信息：说起机械设计制造及其自动化，其实我是非常熟悉这个专业的，因为我大一的专业就是机械类，包括了机械设计制造还有一些自动化内容，目前就读的是机械工程专业。首先我想说的是，机械是国民制造的基础，机械也是衡量一个国家发展水平的高低，所以如果你选择了这个专业，那么就说明你没有选错。我目前就读的大学是 东北大学 ，它里面的机械这个专业我觉得真的是不容小觑，因为不管是从设备上来说，还是老师的专业水平，都能达到国家双一流的指标，最重要的是有达到国家级别的实验室，真的是让我们在学校的学生有着非常好的体验，玩转各种实验仪器！其中也看到了一些机械类学长的就业情况和薪资高低，我觉得都要比其他学校强很多，很多优秀的机械设计制造师以及自动化的人才都是来自于东北大学，学长们已经把我们学校的名号打出去，为我们以后做出了好的铺垫。另外要说的就是在东大这里你可以有类似于实习的机会，在这里我们称它为金工实习，能够全方面的锻炼你动手的的能力，方便你能够很快的适应社会上的一些工作和岗位，不会发生一些像其他学校那样只教授理论知识，而缺乏了实践动手能力的教育。从多方面来看我觉得还是东北大学这个机械设计制造及其自动化是最好的，当然了，学校也是有一些高低之分的，看大家自己怎么认为啦！我是一个女生，划重点——女生！学的也是机械设计制造及其自动化，看到这个问题，我想说一下我所了解的机械。机械是一个很普遍的专业，基本上每一个理工科学校都会有机械，毕竟现在关于制造业的哪个行业基本上都需要机械。但是讲真的，作为一个女生的亲身感受，我觉得机械真的不适合女生！！！清华，作为在中国数一数二的学校，机械特别强，但是毕竟对于大多数人来说，清华北大基本上就是一个实现不了的梦想，所以，我作为一所也是211学校的学生，本着实际一点的态度，跟大家说一下哪个学校的机械比较强。首先要说的是上海交通大学，但看在机械方面的话，个人感觉上海交通大学的机械完全比得上清华的机械，甚至感觉更强一点，但是上海交通大学的录取分数线肯定是比清华低的，所以要是学习很好的学霸想学机械完全可以考上海交通大学。我在北京上学，现在大四了，我们专业的好多人也保研了，在北京的话保研一般都是首选北京航空航天大学，然后北京理工大学，然后北京科技大学，然后是保本校。清华因为确实是太难了，北航的机械也比较好，其实北航和北理差不多，但可能是北航的宣传比较多把，所以给人的感觉就是北航更强一些。北京之外的话，我知道的黑龙江的哈尔滨工业大学、陕西的西安交通大学、湖北的华中科技大学，这些学校都比较厉害。像中国农业大学这种学校，就是一看就有一个主要的强势的王牌专业，那学校里的机械肯定是往那方面发展的，方向性比较强。我是在中国地质大学学机械，我们学校最主要的是地质学，机械就作为一个辅助性学科了，我们学校的机械主要研究的就是钻探机一类的了，给大家看一下我们学的机械，冰山一角哈，这是我们大三的时候的一次实习的计算的第一天我拍的照片~~~这大概就是我所知道的，希望对大家有所帮助吧，总之，机械还是一门挺适合男生的学科，要是喜欢机械就根据自己的分数段找一个合适的学校，专业性强一些的。好专业比好学校重要。大二机械在读，两年的学习也算对机械专业有了一个初步认识。机械专业属于传统制造业，行业相对成熟，注重积累，涉及面广，机械设计制造及其自动化专业恐怕是工科中最具有代表性的专业，大部分高校都有开设，但水平也是参差不齐。如果要问那所大学的机械专业最好，最权威？那毋庸置疑一定是清华大学，清华大学最早设置的院系之一，学科积累深厚，以“造就各项机械工程专门人才，适应国内社会需要”为宗旨，培养了大批的机械类优秀工程师。但是还是想说一说家乡的大学哈尔滨工业大学。作为黑龙江最好的大学，从小就如雷贯耳，地处东北传统工业基地，机械专业那自不用说。机械设计制造及其自动化是哈工大的传统优势学科之一，发展历史悠久。1998 年得到教育部、国防科工委和世界银行贷款资助，建立了国家工科机械基础课程教学实验基地，对于我们机械的未来的学习发展是至关重要的。 由于东北近年来的经济的下滑，哈尔滨工业大学的分数线相对于其他机械强校来说都是稍低的，性价比还是很高的。并且学校里的学术氛围浓厚，适合本科生大学期间沉下心来学习。还有很多的大学的机械还是不错的，最强的可能就是机械五虎，清华大学、上海交通大学、华中科技大学、西安交通大学、哈尔滨工业大学。稍弱一点机械四小龙，吉林工业大学（现并入吉林大学）、湖南大学、燕山大学、合肥工业大学都是老牌机械强校。第四轮机械工程学科评估希望能对你有帮助！南航机械工程本科在读来答。机械专业的第一梯队的高校的话就是上海交通大学、清华大学和华中科技大学。我们学校机械专业最好的同学读研去向最多也是上海交通大学，其次是清华。因为南京念本科的同学大多还是打算在长三角发展的吧。当然，两所学校都是中国顶尖高校了，专业领域也是数一数二，所以选择的话就主要看个人喜好和未来规划吧。想去北京或者对清华有情怀的就去清华，想去长三角就选择上交。华中科技大学的话，相比前面二者可能平台稍低，也没有那么大的地域优势，当然专业方面还是很强很强，收分也会稍低一些。教育部 2012年学科评定第二梯队是一些老牌工科强校，诸如西安交通大学、哈尔滨工业大学，都是“九校联盟”，也是工信部直属高校，机械专业都有很强的底子。奈何这两所学校地理位置都不是太好，许多人都不大愿意选择，因而生源可能有一点吃亏。不过我认为，只要能学到真本事在哪里都是可以的。毕竟地域问题的话，工作或者再进修也不是不能再做选择。机械专业是一个基础学科，所以很多学校都开设，强校也很多。第三梯队理工科院校有北京航空航天大学、北京理工大学、西南交通大学等。综合性大学有吉林大学、浙江大学、中南大学、湖南大学、重庆大学。另外还有一个“双非”院校——燕山大学的机械工程也很强（因为燕山大学直接是原来哈工大机械系分出来的）。上面提到的所有学校的机械专业都是国家一级重点学科。另外还有一些学校的机械相关专业是国家二级重点学科（一级学科和二级学科是大门类和细分专业的区别，并无高下之分），比如南京航空航天大学和大连理工大学的机械制造及其自动化，西北工业大学的机械电子工程，同济大学和 东北大学 的机械设计及理论等等。希望我的回答对你有帮助，也祝你考入自己心仪的学校~作为一只学机械的中国地质大学的大四狗，在一211学校读，不得不说，我们学校的机械是作为我们学校重点学科的一个辅助学科，感觉类似石油、海洋、地质、矿大和农大等这样的大学都是把机械作为自己的主要学科的辅助。但是欢迎你报考中国地质大学~如果你想在机械工程等这样的传统机械方面得到提升，中国最最最厉害的学校就是上海交大，里面的人基本上都是大牛，基本上就是你刚会算自由度，人家就已经可以自己设计变速箱了（举的例子有点简单，勿喷）；而且，重点来了，它的分比清华低！！！敲黑板！！清华，去年还是前年，貌似成了机械世界第一？？我不太记得了，但是，我的学校离清华还算挺近，而且硕导和博导们经常有清华联培的项目，不过就我个人而言，我听到最多的是这么说的，清华精密机械世界第一，没人比得上。所以说机械设计制造及其自动化这门课各个都有各个学校的优势吧，拿北京的各个高校来说：如果你对精密仪器感兴趣，本科就去清华，对航空航天感兴趣就去北航，对车辆感兴趣就去北理，如果你非要问哪个好，恕我直言，考得好的话上清华，考的不好的就上交。就我在机械摸爬滚打四年来，给你排一个我心里想去的学校的名称：清华、上交、浙大、哈工大、北航、北理、华科、北科~不过去年的排行貌似变了哈工大排在了第一，好吧，我还是想去清华。还有，兄弟我劝你一句，要想多挣钱还是别学机械了，哈哈哈哈，虽然我不想转专业~

si ti dan

McLaren Mecederz

A、水路系统：进水接头、进水阀（水阀体/水流量传感器）、热交换器、出水阀、安全阀、稳流组件；B、气路系统：进气接头、气控系统（调节阀/比例阀）、分段阀（手动/自动）、电磁阀等；C、燃烧系统：燃烧器、燃烧室等；D、排烟系统：强排风机、集烟罩、排烟管等；E、电控系统：主控板、显示板、线路、变压器等；F、点火系统：脉冲点火器、点火针、反馈针等；G、安全系统：安全阀、过热温控器、防熄火保护装置、防干烧装置、防倒风装置、风压开关，万和最多可达52项安全保护装置；H、壳体：底壳、面壳。

变频器是利用电力半导体器件的通断作用把电压、频率固定不变的交流电变成电压、频率都可调的交流电源。现在使用的变频器主要采用交—直—交方式（VVVF变频或矢量控制变频），先把工频交流电源通过整流器转换成直流电源，然后再把直流电源转换成频率、电压均可控制的交流电源以供给电动机。变频器主要由整流（交流变直流）、滤波、再次整流（直流变交流）、制动单元、驱动单元、检测单元微处理单元等组成的。

slr迈凯轮奔驰slr迈凯轮离地间隙有25cm左右。这个高度非常合适，因此设计很巧妙。Mercedes-BenzSLRMcLaren，中文名通常为“奔驰SLR迈凯轮”。单镜头反光相机，也被简称为“单反”或“单反相机”。海洋学中SLR是SeaLevelRise的首字母缩写。PCB制造中SLR是SignalLayerRepair的首字母缩写·测绘工程中SLR：SatelliteLaserRanging;卫星激光测距中文名奔驰SLR迈凯轮外文名Mercedes-BenzSLRMcLaren建造公司奔驰公司简称slr梅赛德斯“单反相机”缩写学术词汇TA说梅赛德斯Mercedes-BenzSLRMcLaren，中文名通常为“SLR迈凯轮”。详见百科词条：奔驰SLR迈凯轮“单反相机”缩写单镜头反光相机，也被简称为“单反”或“单反相机”。详见百科词条：单镜头反光相机SLR，即卫星激光测距，利用安置在地面上的卫星激光测距系统发射的激光脉冲，跟踪装有激光反射棱镜的人造地球卫星，以测定站星距离的技术和方法。编译技术里面的一种语法分析技术SLR又一个意思是编译技术里面的一种语法分析技术，又叫简单的LR分析技术，而LR分析技术是一种高效的、自下而上的分析一大类上下文无关文法的分析技术。L是指从左向右扫描，R是指构造最右推导的逆。奔驰迈凯伦图片及价格迈凯伦750s这款车的价格在300多万左右一辆：1、外观方面个人感觉，迈凯伦的车型设计要秒杀保时捷911，一直都觉得保时捷和法拉利的外形设计是偏向传统缺乏设计感的；2、但是迈凯伦的设计就十分具备科技感和设计感，整体外形没有任何一辆超跑的外形特点，独成一脉，造型非常帅气；3、内饰方面，全车都是使用的碳纤维，非常有逼格，座椅方面非常舒适，用料考究，并且全安自操作，让你在一个中控台上就可以操控全车。迈凯伦奔驰slr722迈凯轮公司和梅赛德斯公司一起研发的这辆奔驰SLR722所以车上既有奔驰的标志又有迈凯轮的标志。具体原因如下：1.迈凯伦为传奇跑车:因为那个是迈凯轮与梅赛德斯奔驰两家最有经验的跑车豪车制造商合作制造是绝对的超级跑车这种传奇跑车很受欢迎。2.采用迈凯伦的发动机：高性能跑车梅赛德斯-奔驰SLR迈凯轮轮采用5.5升V8增压发动机其功率为460千瓦u002F626马力最大转矩为780牛顿米在3250-5000转u002F分的范围内都能够保持最大转矩。SLR八缸发动机的性能达到公路用跑车发动机的最高水平。

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据说在1854年美国人罗特兄弟在设计水轮车的过程中发明了这种风机，在当时的影响非常大，这也为风机时代开辟了新路，后来世人将这种风机以他们的名字命名，就叫罗茨鼓风机，这也是目前风机历史上唯一一个保留人名称呼的机器。那么罗茨鼓风机是什么工作原理呢？与其他风机又有什么不同呢？三叶罗茨风机工作原理示意图罗茨风机是一种容积式鼓风机，通过一对转子的"啮合"（转子之间有间隙，又不相互接触）使进气口隔开，转子由一对同步齿轮传动，做反方向运动，将吸入的气体无内压缩的从吸气口推至排气口。气体到达排气口的瞬间，因排气侧高压气体的回流而被加压，从而完成气体输送。罗茨风机工作原理示意图

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看样子是好公司啊 NTTDATA是日本第一大运营商，类似中国移动