emsa中的poly dI-dC多少钱？可否用其他代替

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

EMSA全称是Electrophoretic Mobility Shift Assay，中文叫凝胶迁移实验或电泳迁移率实验，它是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术，可用于定性和定量分析。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。首先让蛋白质与末端标记的核酸探针结合，然后在跑PAGE胶，结合了蛋白质的复合物比未结合蛋白质的探针电泳的速度要慢，这样，从PAGE胶的电泳结果就可以判断，该蛋白是否和特定序列结合或者该序列是否和蛋白结合。

没做过

凝胶阻滞或电泳迁移率变动实验（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA） （来自《养鲤鱼》微信公众号） 1、为什么看不到迁移带？ 1）蛋白样本提取质量不高，蛋白降解或者提取量不足。 2）样本中没有可以与探针结合的蛋白。 3）探针与蛋白无特异性的相互作用。 4）转膜效率低，蛋白或者探针未转移到膜上。 5）曝光或者成像时间过短。 在Super-Shift EMSA测定中看不到Super-Shift DNA/蛋白复合物带还可能有以下原因： 6）抗体没有工作。不是所有的抗体都可以用于Super-Shift EMSA，只有对非变性蛋白的表面抗原决定簇起反应的抗体才能够用于Super-Shift EMSA。 7）测定的活化的DNA/蛋白复合物中没有希望检测的构成成分存在。此时既看不到Super-Shift的带，也看不到DNA/蛋白复合物的量的减少。 8）使用的抗体过度稀释。一般10-20ul的反应液需要使用0.5-1ul原倍的抗体。 9）多抗与DNA/蛋白复合物形成大的聚集物而不进胶。在这种情况下，虽然看不到Super-Shift的带，但应当可以看到DAN/蛋白复合物的电泳带明显减少。 2、为什么实验背景高？ 1）曝光或者成像时间过长。 2）封闭时间不足或者效率不高。 3）洗涤效果不佳 4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。 3、EMSA测定需要多少量的蛋白与标记的探针？ 对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化：一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白:DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍；用粗制核抽提液，需要2-10ug蛋白形成特异的复合物。 部分纯化蛋白与粗制核抽提液应保存在-80℃、探针应保存在-20℃以防止降解。 无论探针或是结合蛋白都应避免多次冻融。 4、Poly(dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA在EMSA测定中的作用？ Poly(dI:dC)由肌苷和胞嘧啶组成。在EMSA反应中加入poly(dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中转录调节因子与标记探针的非特异结合。结合溶液中的poly(dI:dC)的用量需在正式实验前进行优化，一般用量大约在0.05mg/ml左右。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)。 为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，特异竞争探针是非标记的DNA，其序列与标记探针相同，故能与标记探针竞争与结合蛋白的反应。非特异竞争探针的长度组成和DNA探针相同，但序列不同。如果结合蛋白与标记探针的结合被特异竞争探针抑制，而不受非特异探针的影响表明靶结合蛋白的存在。特异与非特异性竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是标记的探针用量的30-100倍（w/w）。 5、用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？ 将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%，在特定条件下可用高或低的浓度。也可将TGE缓冲液（12.5mM Tris，pH8.3，95mM 甘氨酸，0.5mM EDTA）用于不稳定的蛋白/DNA复合物。在4℃进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。 当带型不紧密出现拖尾时，表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合，以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量，或盐的浓度过量不适用于这一反应。在含抽提液的带中不含游离探针或复合物，但只含探针的带中有探针表明抽提物有核酸或磷酸酶污染，应在抽提液中和结合反应中加入相应的抑制剂。

转录因子和蛋白质结合的情况可以通过多种实验来验证。以下是常用的几种实验方法：1. Electrophoretic mobility shift assay (EMSA)：通过电泳迁移实验可以观察到转录因子与DNA结合后，复合物的迁移速度会变慢。而加入竞争性DNA片段或者抗体等会破坏该结合，从而使复合物不稳定，以致迁移速度回到原来的状态。2. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay：通过在细胞内部免疫沉淀转录因子及其结合到DNA上的小段染色质并清洗后，进一步检测其结合到靶基因上（序列分析）或者使用引物鉴定附着区域是否被转录因子组件包含。3. Yeast two-hybrid assay：此实验利用了酵母细胞中两个不同功能区蛋白（例如AD和BD）构建相互作用模型。将编码转录因子和其鉴定出的结合蛋白浸入到不同功能区的酵母中进行配对，如果有关联，则证明它们可以在活细胞中相互作用。这些实验都可以可靠地验证蛋白质与转录因子之间的结合关系。在实验室操作过程中，需要根据具体情况选择合适的实验方法，同时保证实验条件的严谨性和准确性。

在EMSA实验中，根据目的不同，所需使用的蛋白质量也会有所变化。通常情况下，蛋白的使用量为1-10微克之间。但是需要具体根据实验需要进行调整。EMSA凝胶迁移实验用于研究蛋白与核酸结合的实验技术。该实验以聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础，利用电泳的原理来检测蛋白与DNA或RNA分子的配对情况。emsa实验蛋白用量1、蛋白用量的确定EMSA实验中，蛋白的使用量应该通过实验计算、考虑样品量和标准曲线绘制等操作来确定2、样品准备首先从生物样品中提取目标蛋白，并用SDS-PAGE对蛋白进行定量和纯化。通常情况下，可以将纯化后的蛋白样品以50-100微克/微升的浓度储存，并适当稀释用于实验分析。3、滴定法测定蛋白浓度滴定法常用于测定蛋白质的浓度，在EMSA实验的蛋白用量计算中也有重要作用。首先，需要准备一定浓度的荧光素化合物（如BCA），然后将标准蛋白和待定蛋白分别用不同的浓度稀释，添加适量的荧光素试剂，并根据颜色变化来测定样品蛋白质的浓度。4、选择适当的蛋白量经过滴定法测定蛋白质浓度之后，可以选择适当的蛋白量进行实验。在实验中，蛋白质的使用量通常在1-10微克之间。如果使用的蛋白过多，可能会影响实验结果，使得最终的检测信号过强，掩盖低浓度样品的信号。而使用的蛋白过少，则很难观察到目标蛋白和DNA或RNA结合的迁移带。5、实验过程中的注意事项在EMSA实验过程中，还需要注意一些重要的步骤和原则，以确保实验结果的可靠性和准确性。如样品预处理、电泳缓冲液的选择和pH值的调节等。此外，为了避免扰动实验结果，还需要注意实验条件的控制，如温度、湿度、时间和光照等因素。EMSA凝胶迁移实验中，蛋白的使用量通常在1-10微克之间，但需要具体考虑实验需求、样品量等情况进行调整。在实验过程中，还需要注意一些重要的步骤和原则，以确保实验结果的可靠性和准确性。

EMSA实验实验背景高主要原因1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。使用UVA(365nm)、UVB(302 nm)、UVC(254 nm)三种波长四款紫外交联仪，主要包括VL-1000A系列紫外交联仪（365nm）、VL-1000B系列紫外交联仪（302nm）、VL-1000C系列紫外交联仪（254nm）、VL-3000系列紫外交联仪（三种波长）满足不同的科研需求。

EMSA 凝胶迁移实验检测的蛋白与其靶分子（通常是DNA或RNA）结合后形成的复合物在凝胶上出现了迁移减缓或者移动位置发生改变。一、蛋白在胶孔中滞留，可能是由于以下几个主要原因：1、胶溶液中存在高浓度的离子：高浓度的离子可以干扰蛋白与DNA或RNA的相互作用，从而影响迁移结果。2、蛋白与DNA或RNA的比例不恰当：如果加入的蛋白太多，会出现蛋白与DNA或RNA的比例失衡，导致蛋白在胶孔中滞留。3、组装复合物时间过长：如果组装复合物的时间过长，会导致复合物形成过程不完全或者不稳定，这也会导致蛋白在胶孔中滞留。4、蛋白稳定性不佳：如果蛋白质无法在凝胶电泳过程中保持稳定性，也会导致其在胶孔中滞留。蛋白质胶孔滞留问题的解决方法是：1、减少离子浓度2、调整蛋白与DNA或RNA的比例3、适当缩短组装复合物的时间，并检查蛋白的稳定性。4、在加载样品时，应尽量避免将蛋白团块直接加入凝胶孔中，而应该将其预先均匀混合。如果以上方法仍然不能解决问题，可能需要重新优化实验条件。

每个对照组的目的：1. 看光有探针，没有其他成分时，探针的位置，应该位于最下方。不然说明探针里面有杂质，影响电泳2. 这个是看蛋白和探针的结合，是实验目的3. 看探针结合的特异性。如果冷探针可以竞争结合，阻碍了标记的探针，说明2中的结合是特异的4. 目的和3相同。突变的冷探针应该对2的结果没有影响5. 也是判断特异性，这次是看蛋白的特异性，和抗体结合后，就会有super-shift。如果没有，说明是其他的蛋白结合。

1.EMSA中一般都是用P标记的探针，具有放射性，要是用生物素标记的话，放射性就小了，但是花的钱就多了。这个实验要是样本不多的话，大约花费4000左右吧，最重要的是放射性的问题，必须有磷屏，否则没法做。2.首先说应该用磷酸化的P65抗体，一般都用santa cruz公司的。并且有分装的，420块钱100μl，你要是做得少的话可以选择分装的抗体。3.还有就是免疫组化也是可以的。还有一种更好的方法就是promega的双荧光素酶报告系统，采用海肾和萤火虫两种荧光素酶，一种报告目的基因，一种报告内参，很好的方法，但是很贵。总体来说，做EMSA和双荧光素酶是最好的方法，算是定量，但是EMSA有放射性，双荧光素酶比较贵。western和免疫组化只能用来半定量，但是做的人比较多，也能发高水平的杂志，相对来说比较简单，也省钱。

生物标记emsa中可能出现探针生物素丢失　　EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合...　　BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。

EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等; 2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等; 3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失; -1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1 蛋白被降解; 6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v) 7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质; 8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间; 9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染组氨酸标签蛋白的纯化

那这几种技术要同时用吗？ChiP与EMSA的区别是什么呢？

多个核型多角体病毒 标记救援 反密码子摆动假说 棉铃虫核型多角体 代谢质粒 病毒附着蛋白 广泛宿主范围载体 实时PCR EMSA

不会是loading buffer 出问题沉淀堵孔了吧一般不会的哦。。。。我没有做过，，猜测猜测……

欧洲主流的保温壶都是用玻璃内胆的，玻璃内胆和市场中低端的玻璃内胆有以下区别 1、玻璃不能含重金属。 2、玻璃镀层须为纯银，加工不能使用石棉等危险物质。 3、 玻璃胆为人工制造，成本和耐用性大大提高。 4、人工制造的玻璃胆在内壁表层有许多不规则纹路和毛细微孔，饮品入内可以形成如紫砂壶相似原理的缓释氧化和保温的作用，因此人们喜欢直接用玻璃保温壶盛放咖啡和茶类饮品，而不是单纯的热水。 5、容量基本为1升至1.5升，设计原理是考虑到正常人3-5小时的饮料容量。避免‘老水"。 6、人工内胆对水中的重金属等杂质的吸附能力比不锈钢和机器玻璃胆有更好的表现，而且由于玻璃结晶自然形成，毛细孔弧度天然，更加容易清洗。 7、玻璃内胆无法和不锈钢内胆的强度相提并论，一般用于办公和居家使用。不锈钢内胆适合高强度和户外场合使用。 8、不锈钢内胆必须使用优质不锈钢，否则可能存在重金属或锈蚀的风险。

首先，你需要确定你的目的蛋白正确融合上了GST标签，建议先用anti-GST抗体对lysis上清做个western。当然如果你和你同学用的是同一个质粒的话，那么这一步就不必了。若标签没有问题，你在Flow Though里又可以在目标分子量大小处检到蛋白的话，那么出现这种情况只可能是glutathione、柱子以及buffer的问题。关注你所使用的GSH的保存条件、状态以确保没有被氧化；换一批Glutathione Sepharose 填料或用你同学用过的柱子试试；视情况对binding 的PH、盐浓度、DTT浓度做个优化 ，调整washing 及elution buffer glutathione 浓度。必要时甚至可以考虑更换缓冲体系。没有见到你的protocol所以不好更具体的说，但是需要强调的一点是，不要完全依赖protocol。不同的蛋白个性差异很大，同一个protocol做相同类型的不同的蛋白可能会得到完全不同的结果，因此很多时候对各个影响因素做若干水平的正交实验来确定一个符合实际需要的条件 是往往是必须的。

一.Enjoyhot&cold冷暖相宜容器产品特有技术：EMSA高规格的多层晶钻隔热瓶胆 2层优质耐热玻璃/EDS-layers技术,全人工内胆制造。内胆内壁充分的极微小气穴，形成犹如紫砂原理的缓释效果，完美保持饮品原味2层纯银镀层，产生有效的热反射，安全无污染风险1层高真空，高效隔热一体成型 二．Enjoymobilelife怡享旅程器皿系列特有技术:专利的u201ePowerLoc“-Closure:单手按压式杯盖全拆卸清洁设计100%防漏高真空保温高标准选材工艺，全面符合欧盟儿童食品接触标准三．Freshnessguaranteed&organized易鲜生活储藏收纳系列特有技术：1．欧盟婴童食品接触安全材料工艺通过欧盟DINEN14350-2EU的严格要求，成为市场目前唯一通过此要求的食品保鲜容器。2.无缝一体成型密封系统l优势1:高密封压力，真正实现100%防漏。n大多数食物保存时间更长*.nEMSA独有的一体成型密封圈比普通双孔硅胶圈密封压力更大n蓝色胶圈与透明盒盖一体成型，不会剥落。l优势2:无缝，无细菌滋生空间n密封圈与盒体一体成型n加宽的密封设计，安全，方便清洗 n无缝，无细菌滋生的死角,100%无异味渗出l优势3:实用的细节设计，通过专业餐饮行业使用HACCP认证四．‘Prepare&servefreshness"易鲜生活餐厨工具特有技术l‘Turbo"加速，转速提高40%以上l‘Spacesaving"设计，节省空间70%l优良的选材和加工工艺，全面符合欧盟儿童食品安全标准l‘Allin1"整合设计，提供全面的餐厨解决方案五．‘Plants/flowerspresented&cared"多彩四季园艺养护特有技术l‘AQUA-COMFORT"自动供水技术l‘360spray"超细喷雾工艺l完整的色系搭配设计六．Esteras爱斯特拉户外园艺特有技术l‘AQUA-COMFORT"自动供水技术l超轻光纤喷涂技术lFreecare便捷养护设计lUVfree10年抗紫外工艺

简单点说pkcs1中的填充就是【00 01+若干ff+00+明文数据】总长度为模长，例如rsa1024为128字节。还是实际搞个rsa1024例子吧 00 01 FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF FF 00 30 21 30 09 06 05 2B 0E 03 02 1A 05 00 04 14 EC A2 4D 06 CE 34 6A A8 4E E5 61 E2 D4 4A D9 9F A4 0A 47 34最后的为实际数据30 21 30 09 06 05 2B 0E 03 02 1A 05 00 04 14 EC A2 4D 06 CE 34 6A A8 4E E5 61 E2 D4 4A D9 9F A4 0A 47 34

一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。扩展资料由于很多研究的TF不具有结合的特异性，所以即使发现TF和被研究的寡核苷酸探针结合，也不表示在体内该TF不能和其它寡核苷酸结合，运用一些生物信息学 软件，可以模拟表示TF与基因启动子区寡核苷酸结合的具体情况，发现TF可以和启动子区PUTATIVE 结合。同时，由于EMSA在体外不能模 拟细胞内众多生物分子的相互作用，比如，某一TF在细胞内由于受到其它TF的协同或者修饰后才能与寡核苷酸结合的话，那么在体外是不能重现这一结果的。参考资料来源：百度百科-EMSA （凝胶迁移）

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。2)作这样的实验需要什么试剂？凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用g-32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe?/sup系统（a,b）（目录号P1420，P1430，P1440，P1450，P1460）可用于同位素标记的RNA的体外合成，DNA5`末端标记系统（目录号U2010）用于制备DNA探针，结合反应所需的组分有：含盐的溶液（氯化镁，氯化钠，或氯化钾）、缓冲体系（Tris-HCl或HEPES）、还原剂（DTT）、甘油、非特异的竞争DNA（poly(dI:dC)?dI:dC)，也可能含非离子去污剂。在结合蛋白和同位素标记的探针作用后，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物，随后将凝胶干燥并放射自显影，或用PhosphorImage?/sup分析。3)凝胶迁移实验系统提供了什么试剂？Promega公司提供一种凝胶迁移实验系统检测DNA结合蛋白，系统可作为这类实验的 一种正对照。系统包括目的寡核苷酸，对照DNA结合蛋白，结合缓冲液，用于寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统（目录号E3050）包括含重组AP2蛋白（AP2抽提液）的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是从表达AP2蛋白的大肠杆菌中提取的。另外，Core系统还含SP1同源寡核苷酸，凝胶迁移结合缓冲液（5′），和能作20次对照实验的HeLa核抽提液。Complete系统（目录号E3300）含另外5个双链寡核苷酸，分别是AP1、OCT1、CREB,、NF-kB、 TFIID结合位点的同源序列。这些寡核苷酸可以在末端标记后用作特异性探针，或在竞争实验中用作非特异性探针。参考凝胶迁移实验技术手册TB110获取更多的资料。4)成功进行凝胶迁移实验，需要优化哪些因素？凝胶迁移实验在理论上很简单也很快速，但要成功地进行凝胶迁移实验，需要优化一些参数，这主要受结合蛋白的来源和探针结合位点特点的影响。以下是需要优化的因素：抽提液的制备（核酸酶和磷酸酶污染会使探针降解），结合蛋白的浓度，探针的浓度，非特异性探针的浓度，缓冲液的配方和pH, 聚丙烯凝胶电泳的特点和电泳条件，保温时间和温度，载体蛋白，是否有辅助因子（比如锌，或镉等金属离子，或激素）。总之，反应总体积应最小（20ul）。为满足一般要求，结合缓冲液含4%甘油，1mMMgCl2, 0.5mMEDTA, 0.5mMDTT, 50mMNaCl, 10mMTris-HCl(pH7.5), 0.05mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC,或10mMHEPES(pH7.9), 50mMKCl, 1mMDTT, 1mMEDTA, 10%甘油，0.05mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC可作为优化实验的起始。参考凝胶迁移实验技术手册TB110获取更多的资料。5)提供了哪些同源的多核苷酸引物，这些引物的序列来源是什么？有各类dsDNA探针，它们含各种转录调控因子的同源结合位点。下表列出了所能提供的探针，和这些引物序列的出处。转录调控因子探针---------------------------------------探针名 目录号 序列（上链） 序列的出处Sp1 E3231,E3232 5`-ATT CGA TCG GGG CGG GGC GCG-3` SV40启动子（1）AP1 E3201 E3202 5`-CGC TTG ATG AGT CAG CCG GAA-3` 胶原酶基因TRE（2）AP2 E3211 E3212 5`-GAT CGA ACT GAC CGC CCG CGG CCC GT-3`人金属硫堇II a(3)基因NF-kB E3291, E3292, 5`-AGT TGA GGG GAC TTT CCC AGG C-3`鼠Igk轻链基因（4）Oct1 E3241 E3242 5`-TGT CGA ATG CAA ATC ACT AGA A-3` Ig重链基因（5）CREB E3281 E3282 5`-AGA GAT TGC CTG ACG TCA GAC AGC TAG-3`大鼠生长激素抑制基因（6）TFIID E3221 E3222 5`-GCA GAG CAT ATA AGG TGA GGT AGG A-3`belta-1球蛋白启动子只列出了上链的序列，探针是双链，下链序列和上链序列配对。黑体字表明序列来源于指定的基因序列，转录调控因子结合的序列用下线表明。一般而言，周围的核苷酸是任意。6)在DNA探针的选择上，要考虑哪些重要因素？目的DNA的长度应小于300bp，以有利于非结合探针和蛋白DNA复合物的电泳分离。双链的合成的寡核苷酸和限制性酶切片段可在凝胶迁移实验中用作探针。如目的蛋白已被鉴定，则应用短的寡核苷酸片段（约为25bp）,这样结合位点可和其他因子的结合位点区别开。长的限制性酶切片段可用于对推定的启动子/增强子区域内的蛋白结合位点定位。随后可用DNaseI 印迹对蛋白结合的特异区域在DNA序列水平上作出分析。7)用以下一些转录调节因子和HeLa细胞核抽提物可形成哪些复合物：AP1, AP2, CREB, NFkB, Oct1, Sp1, TFIID, TFIIB。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白的来源时，每1个转录调节因子和它相关的DNA同源序列结合形成特征型的结合形态。以下的文字描述了每一个单独的转录调节因子，包括识别的同源序列，因子的大小，特定的结合条件，以及和HeLa细胞核抽提物可形成的复合物的数目。1．AP1：AP1（激活蛋白1）是一个转录调节因子，它结合的同源序列为5`-TGAGTCA-3`。当基因的启动子区域存在AP1的结合位点时，这些基因可以被诱导，比如用佛波酯可诱导蛋白激酶C（2，7）。在细胞中，AP1形成c-Jun或Jun相关蛋白的同聚双体，或者形成c-Jun或Jun相关蛋白和c-Fos或Fos相关抗原（Fras）的异源双体。Fos蛋白自身不能形成同聚双体，并不能单独和AP1结合位点结合。c-Jun蛋白是一个40kDa的单体蛋白并通过亮氨酸拉链形成同聚双体。在HeLa细胞中，AP1的主要形式是c-Jun蛋白的同聚双体。在凝胶迁移实验中，形成一个特异的复合物。当作凝胶迁移实验测定AP1的活力时，除了基本的溶液组分外，应将0.01mg/ml poly(dI:dC)?dI:dC),100ug BSA, 5mMDTT加入到结合缓冲液中。如用纯化的蛋白，则用1-2ug的蛋白来检测迁移复合物。2．AP2：AP2是一个转录调节因子，可分别作为TPA-和cAMP诱导因子（10）。它是一个52 kDa的蛋白，识别的同源序列为5`-CCCCAGGC-3`或5`-GCCNNGGC-3`（3）。这个因子对视黄酸特别敏感，可能在形态发生中起着重要作用。HeLa细胞核抽提物和AP2同源DNA探针形成一个特定的复合物。用纯化的蛋白作凝胶迁移实验时，应用20-50ng的蛋白。3．CREB：CREB是一个37 kDa的转录调节因子，对cAMP应答，识别5`-T（G/T）ACGTCA-3`DNA同源序列（6，11）。它含亮氨酸拉链结构而形成同聚双体，相关的基本结构域和c-JunDNA结合结构域同源。当用HeLa细胞核抽提物时，能和CREB同源序列形成一个复合物。4．NF-kB：NF-kB最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现，形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49（也可称为p52），p75（c-Rel）,p68(RelB)。p65，p68，p75单体起反式激活作用。p50，p49（p52）单体具有DNA结合活力，但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体，类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。IkB和p65单体结合，阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。在体外高浓度的p65能形成同源双聚体，能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应（14）。p49和p50也能形成同源双聚体，但在细胞中的浓度很低。通常，在作NF-kB的凝胶迁移实验时，在20ul的反应体积中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸（pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。当用纯化的蛋白时，250-300ng足以形成凝胶迁移复合物，而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟，在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中，因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时，可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物，即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49，p50，p65的细胞中，可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物（p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65），如果存在高浓度的p65，可检测到微量的p65/p65。下列试剂可加强NF-kB在体外的结合：mM的GTP，ATP，精胺，亚精胺，钡或钙离子，ng的Co+3(NH3)6（12）。5．OCT1：OCT1是OCT转录调节因子家簇中的一员，显然在哺乳细胞中存在比较广泛（5）。POU结构域包括POU-box和Homeo结构域。当用HeLa细胞核抽提物时，可检测到一个与OCT1同源探针形成的序列同源凝胶迁移复合物。6．SP1：SP1是一个O-糖基化的转录调节因子，它识别10个核苷酸长度的同源序列5`-GGGGCGGGGC-3`（1）。核心识别序列是5`-GGGGCGGG-3`。同核心序列相似的序列常存在于启动子中。SV40的早期启动子就是一个例子，它是第一个可以结合SP1的启动子。根据糖基化的不同，它的分子量在95-105kDa，DNA结合结构域中的三个锌指纹决定了序列的特异性。HeLa细胞核抽提物与SP1同源探针形成特异的凝胶迁移复合物。7．TFIID/TFIIB：TFIID和TFIIB是基本的转录调节因子，参与RNA聚合酶II启动子的基本的转录（16）。TFIID与真核启动子的TATA区域形成特异的DNA结合。TFIID由几个蛋白组成，而其中的TATA区域结合蛋白（TBP），参与TATA序列的结合。TFIID的其他的蛋白组分被称为TBP-相关因子（TAFs）。用TFIID探针寡核苷酸和HeLa细胞核抽提物，可得到一个微弱的凝胶迁移带，但很难确定为是TFIID序列特异凝胶迁移复合物。纯化的重组的TBP很难作凝胶迁移实验，这部分是由于TBP存在很强的正电荷，导致TBP/DNA复合物很难进入凝胶。纯化的TBP形成二聚体后不能结合DNA（17）。因此形成的二聚体可参与DNA结合。TFIIB不单独与DNA结合，但与TFIID结合后增强它与DNA的结合。TFIIB与预启动复合物结合后，致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有重要作用。当用纯化的TFIID作凝胶迁移实验时，poly(dI-dC)不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油，20mMTris(pH8.0), 10mMMgCl2, 2mMDTT, 89mMKCl。对TFIID的凝胶结合实验中，可加入poly（dG:dC）?dG:dC。形成的复合物在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离，凝胶组分是：0.5′TBE, 6%聚丙烯酰胺凝胶(19:1丙烯酰胺:双叉),4mMMgCl2, 0.02%NP-40, 电泳缓冲液组分是：0.5′TBE，4mMMgCl2, 0.02%NP-40。当研究含TFIID和TFIIB的复合物时，应从结合缓冲液，凝胶，和电泳缓冲液中去除MgCl2。这些是一般的要求，用不同的细胞抽提物和TFIID、TFIIB形成复合物作凝胶迁移实验时，应对多种因素进行优化以达到理想的条件。8)在一次凝胶迁移实验中，用多少量的蛋白质或抽提物，和标记的DNA探针？对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化，一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白：DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍。用粗制核抽提液，需要1-20ug蛋白形成特异的复合物。所加入反应的探针的量是50，000-200，000cpm32P-标记的探针（高特异活性），反应体积为1-5ul。这相当于10-50fmoles的DNA探针。探针应保存在-20oC以防止降解，在合成或标记后1-2个星期内必需使用。无论探针或是结合蛋白应避免多次冻融。9)能用体外翻译法制备目的蛋白质吗？Promega没对所有的转录调节因子作这类测试。一般，用麦胚抽提物作哺乳细胞转录因子或DNA结合蛋白的体外翻译，兔网织红细胞溶裂解液可能含有内源哺乳细胞转录因子或DNA结合蛋白。但TNT？/sup>兔网织细胞溶解液系统（a,b,c,d）与TranscendTM 生物素标记的tRNA(目录号E3201)一同使用，翻译了转录调节因子AP1（c-Jun），它使AP1同源寡核苷酸（目录号E3201）产生的迁移效果和重组的AP1相同（18）。TNT？/sup>T7偶联的麦胚抽提物（b,c,d,e）在体外翻译了c-Rel。这一蛋白特异地使免疫球蛋白k轻链增强子探针产生迁移。在c-Rel结合反应中加入体外翻译的MAD-3（IkB家簇中一员）可干扰其相互作用。10)poly(dI:dC)?dI:dC)，非特异性竞争DNA，特异性竞争DNA的功能是什么？它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构，可抑制蛋白对标记探针的非特异结合，避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)?dI:dC)，可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合，比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时，不必一定加入poly(dI:dC)?dI:dC)，如加入，则普通反应中所用终浓度不超过50-100ng。对核抽提液，每2-3ug核抽提液用1 ug poly(dI:dC)?dI:dC)。为确定所形成的复合物的特异性，在含或不含增量的非放射性的特异竞争DNA或非特异的竞争DNA时，作结合反应的竞争实验。一般，非放射性的特异DNA是非标记的DNA探针，非特异的竞争DNA ，长度组成和DNA探针相同，序列不同。用非放射性的特异DNA能竞争掉，而用非特异的竞争DNA不能竞争掉的复合物，表明目的蛋白和同位素标记探针的特异结合。非特异结合能用特异DNA和非特异的竞争DNA竞争掉。结合溶液中的poly(dI:dC)?dI:dC)的量需作优化，但一般用0.05mg/ml。非放射性的（特异或非特异）的竞争DNA的用量也需优化或滴定，但竞争DNA通常是同位素标记的探针的10-1000倍（w/w）。其他类型的竞争DNA如小牛胸腺DNA不能用于凝胶迁移反应，它们会带有目的蛋白的结合位点。11)用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开？将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合，蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%（30：1丙烯酰胺：双叉），在特定条件下可用高或低的浓度。PH, 聚丙烯酰胺的浓度, 丙烯酰胺：双叉丙烯酰胺的比会影响复合物在凝胶中的迁移。大多数蛋白用10-15伏的电压，解离快的蛋白用短时间和高的电压（30-35伏的电压），电泳时所用的TBE和TAE必需是新配制的，无沉淀。低的离子强度和丙烯酰胺基质的`箱子效果`有助于复合物的稳定。也可将TGE缓冲液（12.5mMTris,pH8.3, 95mM甘氨酸，0.5mMEDTA）用于不稳定的蛋白/DNA复合物。可在4oC进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。加样样品液中的色素会导致不稳定复合物的解离，应用不含考马斯兰和二甲苯蓝的加样样品液。当带型不紧密出现拖尾时，表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合，以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量，或盐的浓度过量不适用于这一反应。在含抽提液的带中不含游离探针或复合物，但只含探针的带中有探针表明抽提物有核酸或磷酸酶污染，应在抽提液中和结合反应中加入相应的抑制剂。目前可用高强度琼脂糖凝胶分离蛋白/探针复合物（Metaphor?/sup/agarose）。12)如何在一个特定的复合物中确定一个蛋白质的存在？部分纯化的蛋白或粗制核抽提液和一个特定的探针可形成一个或几个特异的蛋白复合物。多个复合物的存在表明蛋白降解，应在制备抽提液的溶液中和结合反应中加入蛋白酶抑制剂。确定复合物中蛋白的特征可能会困难，但有一些方法作这方面的研究。如有目的蛋白的抗体，可进行超迁移实验，抗体和蛋白/探针复合物中的蛋白结合，使复合物的迁移延迟，形成超迁移。增量的抗体加入到结合反应中。抗体可加入到蛋白和探针反应后，也可将抽提物与抗体结合后，再加入探针。取决于抗体的特定的抗原决定簇，前者有利于超迁移复合物地形成，后者阻止复合物的形成导致原复合物的强度的减少。在大多数实验中，应对抗体作滴定，先使抗体：蛋白的摩尔比为1：1，然后应需要增加抗体的量。当有纯化的蛋白时，可用它们和实验的带型迁移复合物比较。除超迁移实验外，复合物中蛋白的特征也可用UV交联和标记转移来分析。在均质标记的探针和细胞核抽提物保温后，用UV照射使复合物交联，随后用DNA酶降解未保护的探针。需用均质标记的探针，因DNA酶会从末端标记的探针中除去标记。和保护的几个核苷酸交联的蛋白在变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离，干燥，放射自显影。结合蛋白的分子量可和标准分子参照物比较。也可用目的蛋白的抗体对复合物作Western印迹分析（20）。如一个蛋白和DNA探针的特定序列结合，可用含保守结合序列的竞争寡核苷酸，以及突变体来确定它的特征。也可用定点突变将保守序列结合位点改变来研究复合物的形成。参考资料1. Briggs M R et al 1986 Science 234, 472. Lee W et al 1986 Cell 49, 7413. Williams T et al 1989 Genes Dev 2, 15574. Sen R and Baltimore D 1986 Cell 46, 7055. Parlsow T G et al 1984 Proc Natl Acad Sci USA 81, 26506. Montminy M R et al 1986 Proc Natl Acad Sci USA 83, 66827. Angel P et al 1987 Cell 49, 7298. Chiu R et al 1988 Cell 54, 5419. Rauscher F J et al 1988 Cell 52,47110. Imagawa M et al 1987 Cell 51, 25111. Berkowitz L A and Gilman M Z 1990 Proc Natl Acad Sci USA 87, 525812. Baeuerle P A 1991 Biochim Biophys Acta 1071, 6313. Duckett C S et al 1993 Mol Cell Biol 13, 131514. Urban M B et al 1991 EMBO J 10(7), 181715. Dynan W S and Tjian R 1983 Cell 35, 7916. Peterson M G et al 1990 Science 248, 165217. Coleman R A et al 1995 J Biol Chem 270, 1384218. Beckler G and Hurst

单抗与多抗都可用于Super-Shift EMSA,但多抗可能与DNA/蛋白复合物形成大的聚集物而不进胶。在这种情况下,虽然看不到Super-Shift的带,但应当可以看到.

1. 避免缓冲液高浓度电供体基团比:NH4甘氨酸精氨酸Tris等等;2. 各种缓冲液能强螯合剂EDTAEGTA等等;3. 各种缓冲液能高浓度强原剂比DTT防止二价Ni原; 4. 能含离型垢剂比SDS防止Ni流失;-1mMPMSF防止目5. 破碎细胞候建议加入蛋白酶抑制剂比0.1蛋白降解;6. 缓冲液加入甘油防止蛋白间由于疏水相互作用发聚集沉淀甘油浓度高达50%(v/v)7. 应避免含碳酸氢钠柠檬酸等物质;8. 缓冲液NaCl浓度应300mM2M间;9. 加入变性剂促溶盐酸胍(高6M)尿素(高8M) 10.加入非离型垢剂TritonTweenNP40等高2%减少背景蛋白污染除核酸污染组氨酸标签蛋白纯化没有意义建议自己下去查查资料

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等;2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等;3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失;-1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1蛋白被降解;6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v)7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质;8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间;9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染组氨酸标签蛋白的纯化感觉这样的提问没有意义建议自己下去查查资料

想必也是想成为香橙或是维他命的人吧，其实这些基本的资料在百度里是可以找到的。不需要在这里问问题。我把网址给你吧！陈翔的：http://baike.baidu.com/view/288423.htm?fr=ala0_1李炜的：http://baike.baidu.com/view/217504.htm?fr=ala0_1还有任何问题都可以去百度贴吧里哦，我们会尽力帮你的！

如何判断一台风机是罗茨风机还是离心风机，主要从其工作原理上看。离心式鼓风机的工作原理：当电机转动带动风机叶轮旋转时，叶轮中叶片之间的气体也跟着旋转，并在离心力的作用下甩出这些气体，气体流速增大，使气体在流动中把动能转换为静压能，然后随着流体的增压，使静压能又转换为速度能，通过排气口排出气体，而在叶轮中间形成了一定的负压，由于入口呈负压，使外界气体在大气压的作用下立即补入，在叶轮连续旋转作用下不断排出和补入气体，从而达到连续鼓风的目的。同等功率下，风压和风量一般程反比。同等功率下，风压高，风量就会相对低，而风量大，风压就会低些，这样才能充分利用电机的功效率。罗茨风机、罗茨鼓风机的工作原理：罗茨风机为容积式风机，输送的风量与转数成比例，三叶型叶轮每转动一次由2个叶轮进行3次吸、排气，与二叶型相比，气体脉动变少，负荷变化小，机械强度高，噪声低，振动也小。在2根平相行的轴上设有2个三叶型叶轮，轮与椭圆形机箱内孔面及各叶轮三者之间始终保持微小的间隙，由于叶轮互为反方向匀速旋转，使箱体和叶轮所包围着的一定量的气体由吸入的一侧输送到排出的一侧。各支叶轮始终由同步齿轮保持正确的相位，不会出现互相碰触现象，因而可以高速化，不需要内部润滑，而且结构简单，运转平稳，性能稳定，适应多种用途，已运用于广泛的领域。简单的说就是：同等功率下，离心风机风量大、压力低，罗茨鼓风机压力高、风量小。这是我从E风机网上抄来的，希望能帮到你。那里还有好多这样的文章，你有空就去看看吧

【中文词】I"m gonna stay tonightIn the midnight midnight midnight你现在过得如何 有偶尔想起我吗在这漫长的夜 再次闭上双眼 想起了你 难以入睡有些格外漫长 没有你的夜晚也变的惆怅 送走你的那天会渐渐不再在意 会渐渐被遗忘吧总有一天 忘记你无法入眠的夜 so sad tonight 无法与你共处的这夜in the midnight, a a a midnight 想起你无法入眠的 midnight再次来到的夜 so sad tonight 再次面临没你的这夜in the midnight, a a a midnight 没有你无法入眠的 midnightI"m gonna stay tonightIn the midnight midnight midnight比眨眼的瞬间更迅速的来找我吧掉头离去的爱和你 you can"t do this to me够了已经够了 停止让我痛苦吧迷恋一词使我的夜晚没有尽头虽然不愿再提起过往之事 但看来我对你太过迷恋会越来越常想起 会越来越想念随著时间的流逝无法入眠的夜 so sad tonight 无法与你共处的这夜in the midnight, a a a midnight 想起你无法入眠的 midnight再次来到的夜 so sad tonight 再次面临没你的这夜in the midnight, a a a midnight 没有你无法入眠的 midnight在远方闪烁的 little star 来安慰我吧 在这无依无靠潦倒的夜在远方闪烁的 little star 来安慰我吧 在这无依无靠潦倒的数著星星的夜 因季节变化有些不同的这夜我仍然无法入睡的夜再次来到的夜 so sad tonight 再次面临没你的这夜in the midnight, a a a midnight 没有你无法入眠的 midnightI"m gonna stay tonightIn the midnight midnight midnight【罗马音】[DooJoon] Na, Na, Na, Na, Na, NaNa, Na, Na, Na, Na, NaI wanna sleep tonight In the Midnight, Midnight, Midnight[DongWoon] Geudaeneun eotteongayoGakkeumeun nareul saenggakhan jeok innayoI gin bame dasi nuneul gamgoGeudael saenggakhago jamdeulji motagoGeuraeyo[HyunSeung] Jogeum yunanhi gineyo geudae eomneun bamiAswiwojineyo geuttae bonaen geu nari deo~[DooJoon] Gyesok mudyeojigetjyo jeomjeom ichyeojigetjyo[DongWoon] Eonjenganeun geudaega[GiKwang] Jami oji annneun bamSo sad tonightGeudaewa hamkkehal su eomneun i bamIn the Midnight-igh-ight Midnight-ightNi saenggage jam mot deuneun Midnight[YoSeob] Dasi chajaon i bamSo sad tonightGeudaega eobsi dasi matneun i bamIn the Midnight-igh-ight Midnight-ightNiga eobsi jam mot deuneun Midnight[JunHyung] Nungamatda tteuneun saiboda deo ppareuge nal chajawatda tteonaga beorin sarang dangsinYou can‘"t do this to meChungbunhada chungbunhae geuman jom haera nal apeuge naege miryeoniran ireume bameun kkeutnaji anha[HyunSeung] Da jinan yaegi dasi hago sipjin anchimanNaega geudael manhi johahagin haenna bwayo~[DooJoon] Gyesok saenggangnagetjyo deo geuriwojigetjyo[DongWoon] Sigani jinalsurok[GiKwang] Jami oji annneun bamSo sad tonightGeudaewa hamkkehal su eomneun i bamIn the Midnight-igh-ight Midnight-ightNi saenggage jam mot deuneun Midnight[YoSeob] Dasi chajaon i bamSo sad tonightGeudaega eobsi dasi matneun i bamIn the Midnight-igh-ight Midnight-ightNiga eobsi jam mot deuneun Midnight[JunHyung] Jeogi banjjagineun Little starNal wirohaejuraGidael got hana eobsi sseureojineun oneul bam[DongWoon] Jeogi banjjagineun Little starNal wirohaejuraGidael got hana eobsi sseureojineun[DooJoon] Byeol heneun bamGyejeori jinaJogeumssik dallajyeoganeun i bamHajiman nanYeojeonhi nan jam mot irun bam[YoSeob] Dasi chajaon i bamSo sad tonightGeudaega eobsi dasi matneun i bamIn the Midnight-igh-ight Midnight-ightNiga eobsi jam mot deuneun Midnight[DooJoon] Na, Na, Na, Na, Na, NaNa, Na, Na, Na, Na, NaI wanna sleep tonight In the Midnight, Midnight, Midnight

McLaren

要选有创新的蠕动泵VRP蠕动泵不用换管子，解决了换管子这个麻烦事

at midnight在午夜（即00:00,指具体的某个时刻，用介词at; 又如：at7:00/at noon等）

大连IBM和埃森哲我应该选择哪个？ 确实是IBM更好。你需要问问IBM负责实习生的人员问问实习生是否会留用，留用几个，打听清楚再做决定 埃森哲仅仅是接到面试通知，你可以先请假去面试，是否会被录用还不一定呢 建议先做好打算，一定要确定被埃森哲录用为正式员工而IBM确实不留用实习生时再选择埃森哲（鉴于埃森哲并不是你的第一选择） 安永ITRA和埃森哲digital line，我应该去哪个 两家都干过 不太清楚AC(埃森哲)那个是什么条线 但ITRA主要是帮审计看系统合规性的 自己独立的项目少 走偏IT技术路线的话 品牌也是AC好 只要AC那个条线不是让你做外包开发什么的就去AC吧 请问什么是ITRA？再说变问一下你是大连的吗？大连的埃森哲和安永我都面试过，最后选了安永会计事务所，因为工资高 大连埃森哲 IBM 惠普 哪个比较好？ 如果你想做点开发的工作，还是到IBM吧，不过，开发的部门本科生比较难进。 大连IBM最近刚独立成为一个独立的子公司，前景还是不错的。 公司主要分为两部分，BPD（或者叫BPO）和AS。BPD是本科生甚至专科生都可能进来的，门槛比较低，不做技术，做业务流程外包。AS做开发，主要是大型机，数据库，SAP，软件开发与测试等。很少直接招本科应届生。 IBM的培训不用多说，大家都知道。 工资也是分部门的，BPD一般3000左右，一般到不了4000。AS一般4500起，这是2010年的数据。2011年应该比这个要多一点。 通过IBM的“蓝色之路”实习生计划进来是最简单的途径，或者内部推荐也可以。 这个月是我在大连IBM的第14个月，应该有一点发言权，仅供参考。 关于大连埃森哲 我不懂技术哈，如果埃森哲大连的话，保守估计应该6-7k没有问题。可以给我简历，我帮你投~ 我是你附近学校毕业的，财大的。 你去的部门是cdc，在数码广场绿色的楼 被录用后是否签订正式劳动合同? 或者让你和别的公司签? Offer怎样写的? 中智一般是做背景调查，看你的学历真假。 大连埃森哲待遇 补助500，不过需要同时过日语口语一级（公司组织考试）。涨幅程度看你的performance, 同一级别400-800，如果是升职的话1000+，产检待遇和国家的是一样的。剖腹产多15天，多生一个孩子多15天。产假付60%或80%，记不清了。 北京ntt与大连埃森哲哪个更好？？ aenture是世界500强 是世界咨询服务业NO.1 大连埃森哲和IBM的项目经理年薪多少 看项目大小吧 管十个人和200个人的项目 级别肯定不一样 我认识的埃森哲小项目经理 年薪也就7 8万 大连埃森哲信息技术在大连哪个区啊！ 属于沙河口区。 在软件园的铁路道口以南区域和以北的部分区域都是沙河口的行政区域。而埃森哲在铁路南侧。

机械设计制造及其自动化专业有车辆工程、机械电子工程、材料加工工程、机械制造及其自动化、机械设计及理论等考研方向。机械设计制造及其自动化专业有车辆工程、机械电子工程、材料加工工程、机械制造及其自动化、机械设计及理论等考研方向。机械设计制造及其自动化考研科目分为公共科目和专业科目，公共科目主要考《思想政治理论》、《数学》、《英语》、《数学》；专业科目主要考《微机原理》、《材料力学》等。机械机械设计制造及其自动化专业。机械机械设计制造及其自动化专业设计制造及其自动化专业旨在培养适应社会发展需要，具备较扎实的自然科学基础和宽厚的机械专业知识以及较强的实践能力。具有创新意识、国际视野、团队合作精神和良好的沟通能力；具有较好的人文社会科学素养、较强的社会责任感、良好的职业道德，能在机械工程领域从事机械产品研发、设计、制造、项目管理等工作的复合型工程技术人才。机械设计制造及其自动化专业核心知识领域包括：机械设计原理与方法、机械制造工程原理与技术、机械系统中的传动与控制、计算机应用技术等。机械设计制造及其自动化专业毕业生就业主要在机械、汽车、航空航天、能源、化工、电子、材料、冶金等行业领域，从事机械领域内的设计制造、科技开发、应用研究、运行管理和经营销售等方面的工作。

中文名：马尔科姆·麦克拉伦 外文名：Malcolm McLaren 出生地：英国伦敦 马尔科姆·麦克拉伦–英国“朋克之父” 　　马尔科姆·麦克拉伦在1946年生于英国伦敦，是一个著名的英国歌手。20世纪50年代末及60年代初他成为摇滚乐的狂热爱好者，便与音乐结下了不解之缘。从那时起，他对摇滚乐所具备的巨大潜能，尤其是作为一种摆脱普通社会规范束缚的手段方面，深信不疑。 　　当他在各种艺术学校时便有了明确的政治倾向：他是个行为主义者，即一种自由意志论的艺术运动者，意在让情境来暴露社会的各种压抑。与众不同的是他与伦敦西部的一个无 *** 团体“暴民主”有着密切的联系。该团体曾打扮成圣诞老人闯进伦敦一家很大的百货商店将各种货物免费送给顾客。这些历史使他以后作为一种宣传工具让“性手枪”获得了很高的知名度。 　　在1968年，马尔科姆·麦克拉伦试图前往巴黎，参加在那里的 *** 。后来，他通过先进的思想，统一并亲自参与到他的各种流行和摇滚音乐之中。在20世纪80年代，马尔科姆·麦克拉伦逐步向表演艺术家方向发展，同时他所制作的录音在大不列颠特别受欢迎。

三更半夜midnight现在叫国光帮帮忙。是在2005年台湾三立都会台所制播的综艺谈话性节目，制作人为汤宗霖，主持人为屈中恒、孙鹏与庹宗康三位台湾艺人。

看样子是好公司啊 NTTDATA是日本第一大运营商，类似中国移动

午夜

喷播机最适合难以用普通方法种植草坪的陡坡、铁路、公路两旁的护坡等。也适合于高尔夫球场、运动场以及城市大面积草坪的建植。喷播机除喷播种子以外也可以喷播匍匐茎。喷播机的牵引系统一般是汽车，汽车载着喷播机车，沿着公路和工作便道行进，行驶速度依喷播量的大小而定。根据种子的推力方式不同，草坪喷播机可分为气力喷播机和液力喷播机两大类。喷播机有不同的型号，主要性能参数包括容量、发动机功率、水泵压力、喷播效率、搅拌方式及搅拌驱动动力、喷射距离、机械质量以及外形尺寸等。容量是指装载箱的容积，水泵压力与喷射距离有关，一般为0.3～1.0MPa，喷射距离可达70m，喷播效率主要反映每分钟覆盖的面积。（1）气力式草坪喷播机的结构及工作原理气力喷播机又称风送式喷播机，主要用于喷撒草莲，或干纤维覆盖物于种植后的地被表面。气力喷播机主要由以下部分组成：①主风道系统。利用风机产生的高压气流将种子喷播出去。②排种输送系统。种子箱内的种子在排种器的作用下，进入输种管内，经过喉管进入喷筒。③喷筒摆动系统。喷播机作业时，喷筒作往复摆动，增加喷播面积，提高喷播效率。④传动系统。由拖拉机动力输出轴给喷播机提供动力，经过传动系统传递，分别提供给风机、喷筒和排种器。⑤三点悬挂机构。拖拉机通过三点悬挂机构牵引喷播机，进行作业。气力喷播机的工作原理如图3-24所示。喷播机工作时，种子箱内种子在外槽轮排种器的作用下，下落到输种管中，由风机在喉管内产生的高速气流带动，经过摆动的喷筒将种子喷播出去。图中箭头所指的方向表示种子的运动方向。图3-24 气力式草坪喷播机的工作原理（2）液力式草坪喷播机的结构及工作原理液力喷播机又名水力喷播机或液压喷播机，其功能是将催芽的种子混入装有一定比例的水、纤维覆盖物、黏合剂、肥料的容器里，把这种混合液通过软管输送喷播到待播的土壤上，形成均匀的覆盖层。从工作原理上可以把液力喷播种植机械分成射流搅拌喷播机、机械搅拌喷播机和压力助喷喷播机三类。射流搅拌喷播机与机械搅拌喷播机的输送方式相同，而混合方式不同，机械结构上有较大差异。机械搅拌喷播机与压力助喷喷播机混合方式基本相同，而输送方式不同，机械结构上有较大差异。射流搅拌喷播机一般采用油罐型混料罐，依靠上、下两根射流管喷射水流冲击罐内浆液形成两维循环流，实现固体物与水的混合。射流搅拌喷播机结构简单，搅拌力度较小，因此需要较长的混合搅拌时间，罐容量一般也只能在2000L以下。由于射流管结构的限制，射流搅拌喷播机一般只能输送7%～15%的固体含量的中等浓度混合浆液。这类喷播机通常适用于表层土熟化程度较高、以庭院花园为主的小规模绿化工程。机械搅拌喷播机一般采用槽箱型混料罐，依靠卧轴桨式搅拌器搅动罐内浆液形成维或三维循环流，实现固体物与水的混合。桨式搅拌器搅动力度大，可以保证固体含量30%～60%的高浓度浆液充分混合，并在喷播过程中始终保持悬浮状态。同时，机械搅拌喷播机配备的泵具有叶片少、流道宽、转速低的特点，保证了输送高浓度混合浆液不出现堵塞现象。搅拌机可以采用液压无级变速机械搅拌器，液压无级变速机械搅拌器调整范围大，可以根据浆液的浓度、罐容存量、混合程度随时调整搅拌的方向、速度和力度，能适应喷送各种纤维覆盖物施工需要，也能喷送草炭、泥炭或人工配制的生长基质，其性能是射流搅拌无法比拟的。当喷播施工作业面底层土质透水性较差时，需要喷送浓度超过50%的混合浆液。压力助喷喷播机是靠向混料罐内注入压缩空气帮助混合浆液外排，同时改用容积式蠕动泵抽送实现作业功能的。液力式草坪喷播机主要由混料罐、搅拌器、泵站、喷枪和机架5个部分组成。①混料罐。喷播机所需要的固液混合物在混料罐中相混合并达到均匀，它的形状和内部结构影响到物料混合的均匀性和混合均匀所需的时间，对喷播机的性能影响很大。②搅拌器。搅拌器对混合物的混合产生的影响最大，主要有射流搅拌器和机械搅拌器两种形式，也可以两种方式同时使用。射流搅拌器一般在油罐型的小型液力喷播机上使用，有循环射流和强制射流两种工作方式。稍大一些的喷播机或断面为椭圆形的混料罐往往采用上下各一支射流管的双管射流结构。机械搅拌采用0～100r/min无级变速搅拌器，可以正反转最好，必要时可以设置多层搅拌器。③泵站。泵站由高压浆泵和控制管路组成。一般采用泵与动力装置直接传动方式，控制管路一般由手动球阀或限压阀控制。泵站的主要功能为：对液、固相混合后的混合物提供动力使其具有足够高的压力，然后将混合物喷到施工表面。泵的选取要注意：要能够输送带有颗粒状的固体；出口具有足够高的压力，以便能够喷射到需要的距离。泵的压力和流量在一定范围内可以通过调整泵的转速来改变。④喷枪。喷枪一般有3～5种类型。常用的有远射程直流喷枪，适于线性作业；有中距离鸭嘴喷枪，适于开阔地带作业；适于近距离作业的扇形喷枪。此外还有消防喷枪和雾化喷枪，与喷播机配套使用，具有消防和打药的功能。喷枪是喷射物在喷出前所经过的最后一个环节，选择合适的喷口大小和喷射形状，可改善喷播的效率。⑤机架。机架是以上各部分的固定装置，作用是将喷播机的各个部分连接组合在一起。一般喷播机都采用固定机架，与拖拉机或其他动力车相连。液力喷播机的工作原理：喷播作业时，根据作业表面的种类、土壤条件、地域气候和工作面的坡度大小，按一定的程序，将水、草种、肥料、天然木纤维、保水剂、黏合剂、染色剂等有关材料定量地加入喷播机的混料罐中，待物料搅拌均匀后，通过喷射系统，将均质混合物用喷射泵通过管路和喷枪以高压力喷覆在作业的土壤表面上，形成松软而稳定的覆盖草种的覆盖层，在合适的条件下，草种即可很快萌芽和生长。（3）使用喷播机的注意事项要想获得良好的喷播效果，需要注意以下问题：①要对喷播的土壤进行分析，必要时进行土壤改良。②要对坪床进行必要的处理，包括整地、施肥，以便能满足喷播的要求。③选择适合的草坪种子或匍匐茎，并确定播种量。④选用的纤维覆盖物比例要适当，以确保种子发芽和生长。⑤选择合适的化肥和用量，使种子在苗期能快速茁壮生长。⑥必要时可使用土壤改良剂（如保水剂等）和稳定剂，以保证喷播效果。⑦根据气象条件拟定喷灌计划和灌水量，必要时采取适当的保湿措施。⑧对喷播区要及时进行管理养护。

“作为当今世界一线大团，Coldplay在《Ghost Stories》中展现了他们与时俱进的气度，电音及舞曲元素的加入，以及部分曲目中所呈现的冷色调，都未触及他们的筋骨：流畅而唯美的旋律；口白化却又含蓄隽永的歌词；以及精致与磅礴熔于一炉的整体氛围。他们是流行乐坛中鲜有能称作艺术家的那一群人。《Ghost Stories》是流行音乐里鲜有的能把艺术感和流行性结合得如此完美的专辑。甚至可以武断地认为，这是2014年中最好的流行唱片，至少于我个人，是足以循环播放一百次的唱片。”踌躇再三，我选择了这样一个开头。通常这样总结性的话语会放在文章(微博)的末尾。可我觉得，对于Coldplay来说，通常的所谓“乐评”对他们来说没有太大的意义，评论家自然也不必画地为牢，作茧自缚。在过去的一个月里，我每天上下班的通勤音乐都是《Ghost Stories》，最终结果便是，里头每首歌我都能倒背如流，包括其中所用到的合成器弦乐，每一段的吉他Riff，我都能准确无误地哼唱出来。其实，这便是Coldplay的魔力。早年，他们做着酷似Radiohead《The Bends》的英伦吉他流行曲，《Yellow》《In My Place》绝不亚于《High And Dry》；此后，他们曾用《Viva La Vida》致敬The Beatles，乐队成员不仅全副武装，打扮成嬉皮士与英国皇家近卫军的混合体，和《Sgt.Pepper"s Lonly Hearts Club Band》所做的那样，音乐上也不忘用上披头士迷幻时期的标配乐器西塔琴，《Life In Technicolor》满满是披头的影子，《Lost！》甚至像是保罗·麦卡特尼爵士的曲子；再到后来，他们朝着U2靠拢，在《Mylo Xyloto》里，《Charlie Brown》那些吉他连复段，Jon Buckland（Coldplay吉他手）的演奏听起来就像是U2的“刀刃”（Edge）的风格。但尽管如此，从来没有人说Coldplay有抄袭一事，反倒是陈绮贞《躺在你的衣柜》为代表的一大群华语乐坛小心翼翼地模仿《Yellow》，生产出来一大票衍生品。这便是Coldplay的才能，光阴似箭日月如梭，无论外头的世界怎样，他们自己的音乐进化成怎样，永远有着悦耳、连贯、迷人的旋律，且这强大的旋律性永远凌驾于风格之上。你不得不承认，除了Rolling Stones这样的老流氓，世间绝大多数伟大的乐队都是旋律大师：The Beatles——保罗·麦卡特尼甚至是整个流行音乐范畴里金曲之王；Nirvana——别等到人家不插电了才知道柯本的歌写得有多好；Radiohead——连“美拍”这样的无脑APP，在背景音乐里都有偷偷塞一首他们的《No Surprises》；Beyond——在这一碗心灵鸡汤里头，黄家驹下的是“神曲”的汤底。这使得他们在披着摇滚外衣的同时，与流行音乐中其他的天王天后相比，丝毫不落下风。而在《Ghost Stories》里，当我们在先行单曲中听到的那些一反乐队常态的东西，初始不适，紧接着就如同一直飞叶子的瘾君子忽然发现了世界上还有LSD这玩意一样。一个超越了风格的乐队是可怕的。这意味着就算他玩起了复古迪斯科，你也会像个脑残粉一样甘之如饴。恰好Bob Dylan就曾满怀嘲讽地说过：我其实是一个舞曲艺人。于是，当Coldplay在新专辑拿出《Magic》的时候，我的最初反应是：堂堂天团，为何要学起后辈The XX，用这样简约的电子节拍和暗流贝斯架构全曲？如果再往根源去说，U2在十年前便玩过这种东西了。可到了后来，木吉他扫弦引领着音墙席卷而上，主唱Chris Martin的招牌假音冲到浪尖口，我只能缴械投降。另一首先行单曲《Midnight》则更为离谱，万籁俱寂的午夜，电音氛围如衔枚疾走的时针分钟，乐队耐着性子，在歌曲整个上半段都没有加入任何打击乐器，仅仅是到了最后的一分半钟，让想象力小小地飞驰了一会，紧接着又恢复到无边的暗夜。如果不是亲耳所闻，我是绝不会相信英伦大团能够（或者说敢于）做这么一首高贵冷艳北欧电子乐的。至于大碟出来之前的最后一首单曲《A Sky Full Of Stars》，早已举白旗的我无所谓负隅顽抗了，跟着节拍跳舞吧！在《Mylo Xyloto》里没有尽兴的人们，在媚俗的琴键起落里，举起你们的双手吧！欢迎年度最佳舞曲乐队——Coldplay！Party的热潮冷却之后，舞客们横七竖八地倒在舞池里。所以说，如果仅仅是“好听”，那么《Ghost Stories》和Lady Gaga、Katy Perry的唱片没有太大区别，所谓的“艺术感”也无从说起。可他们是Coldplay。曾经，我以为《Viva La Vida》已是神作，当马汀以一身落魄的国王姿态出现，在轻快的弦乐组搭配下，高唱“听那耶路撒冷钟声传来，罗马骑兵歌声震彻山海；担当我的明镜，利剑和盾牌，我的传教士屹立边疆之外”，歌曲中波澜壮阔的史诗性，早已超越了对路易十六的影射，生命的容量被拓宽，这或许已经是一张流行唱片的上限了。可紧接下来，在《Paradise》里，他们不仅勾勒了憧憬世界的小女孩形象，更是引入“蝴蝶”这一重要的物象，使之贯穿整张专辑，“大象版”MV中那个从动物园逃离的大象，穿越整座城市，上演一出《马达加斯加》式胜利大逃亡，最后在草原上和乐队同伴们重聚，镜头忽然切至演唱会的现场，台上的Coldplay四子穿戴大象服装，台下万人朝拜。至此，天堂已不仅仅是美好想象之地了，即使如我这般没有任何宗教背景的听众，也忍不住为之飙泪。攀过了一座又一座的高峰，这一次，《Ghost Stories》里，Coldplay决心在整个唱片的企划案上做得更极致，更完美。如果你有留意此前他们为电影《饥饿游戏2：星火燎原》所创作的单曲《Atlas》，你会发现《Ghost Stories》的专辑概念早有预谋。作为希腊神话中的大力神，欧洲人总把Atlas塑造成一个身背地球的巨人，他甚至常会以托举着天球仪的姿态出现。包括大西洋之名也是由此而来，The Atlantic Ocean，其中Atlantic便是Atlas演化而来，意为“巨大的”。在Coldplay不仅在《Atlas》一曲中唱到弓箭、太阳、上帝，更是在MV中展现了如仙女座星云一般的星空图——这一切全都在《Ghost Stories》的封面中又再度出现了：一双天使的翅膀，里头有项链、迷宫、阶梯、情侣……背景是宝蓝色的海洋与天空，星星点缀其中。向来天文学与宗教不可分割，而海洋更是星辰的一部分，不仅有上述的大西洋为例，《Ghost Stories》中也有《Oceans》一曲，这才拼成一个完整的星夜。你或许会问，这满天的星斗，和“鬼故事”有什么样的关系呢？岂不知，整张专辑的内核，既不是星途大海，也不是鬼神之说，而是爱。今年三月，克里斯·马汀和他的奥斯卡影后太太“小辣椒”格温妮丝·帕特洛(微博)（Gwyneth Paltrow）宣布分手，结束两人11年的婚姻。这一娱乐圈的重磅消息，也成为了《Ghost Stories》在音乐之外的谈资。马汀这些年来没少为“小辣椒”写过歌，如治愈过无数伤心人儿的《Fix You》，他们的公开声明中也表示“虽然我们还爱着对方，但是我们还是选择分手”。月前，狗仔队更是曝出两人离婚后依然还住在一起，甚至还戴着婚戒，理由是格温妮丝认为“两人以孩子快乐为先”。两人到底会不会闪电复合？不如我们就从《Ghost Stories》寻找答案吧。“什么是魔法？什么是真实？和你一起，就是魔法。我浑身破裂，撕为两半。我称其为魔法，当我靠近你的时候。”（《Magic》）把爱情比作魔法，这本不是什么新鲜事。在爱情的暴风雨里，无论在这过程中受了多受罪，也依旧虔诚，人之常情。如副歌最后所唱：“如果你问我，在经历了这些之后，还相信魔法吗？嗯，是的，我相信。”最棒的是，《Magic》的MV请来了章子怡主演，她饰演马戏团老板的情人，备受凌辱；而Coldplay主唱马丁则出演一位学徒，一直对章子怡心生暗慕，一面苦练魔术，最后通过自己一双巧手，把马戏团领班给变没了——这么一个向意大利著名导演费德里科·费里尼“孤寂三部曲”《大路》致敬的MV，全程以黑白默片的方式呈现，伴随着Coldplay内敛而汹涌之情感，以及“国际章”的演出，几乎可以锁定年度最佳音乐录影带大奖。而《Magic》的单曲封面也匠心独运地采用了和MV专辑封面同样的浓厚中世纪拜占庭绘画风格，只不过主视觉从翅膀换作鸽子——这是魔术师最常用的道具，而鸽子的内部有扑克牌，舞台，以及魔术师、女助手，和歌曲内容以及MV紧密相连。在专辑里，我们还能听到描述刻骨铭心之爱的《Ink》，带着轻快的电子碎拍，如眨着眼睛的星星，马汀唱到：“在身上留下了共度一生的纹身字样，并有口袋小刀刻上你的名字……如星星般的你闪耀光芒，散发出爱的七彩光泽，是我一生渴求”；如赞美诗一般的《True Love》，是爱情不再后的自我麻醉，“真爱的火焰在你我的眼眸间闪烁，请你对我说爱我，若你不再欺骗我”，曲末的电吉他solo更是让人倍觉苍白无力；讲述爱人离去后形影相吊、茕茕孑立的《Another"s Arms》，你可以任由它在你的耳边不断循环，直到不自觉地跟唱，“世界于我一文不值，只要有你的怀抱”。这首歌让人想到经典影片《人鬼情未了》，爱人的影子也正正切合了“Ghost Stories”这一主题。至此，星空，爱，鬼灵，这一切的连接点都水落石出了。Coldplay想通过这张专辑告诉我们，每个人都是一颗星，而我们有幸在茫茫宇宙中相遇。虽然总有一天会离开，无论是因为生老病死或是感情破碎，但这些着着实实地发生在银河系里。就像我们现在抬头所见的星空，或许那些正在闪耀的星，在数百年前已经黯灭了，因为我们实在相隔太远而造成的错觉。专辑之所以叫做“鬼故事”，因为那些逝去的、不存在的爱，给我们的错觉也不过如此。也正如这张专辑真正意义上的主题曲《A Sky Full Of Stars》所唱的那样：“我不在乎，一点也不，即使我粉身碎骨。因为在这布满星辰的夜空，我恍如与你共度。”王安忆曾说，写爱情题材的作品往往是两类作家，一类是九流作家，一类是最好的作家。这句话放到流行音乐而言同样成立，我们所听到的大部分情歌都是九流作品，但Coldplay的《Ghost Stories》是无疑一流的。在那些九流情歌里，要么是为失恋者的提供劝慰，要么是提供你爱我我爱你的甜梦，可在一流情歌的世界里，如Coldplay，专辑里根本没有解决任何现实的问题，温情脉脉的面纱被掀开，旧有的生活格局被打破，该来的来，该去的去，一个崭新的世界呈现在我们面前，尽管谁也说不上它是好是坏。这才是真实的爱情，真实的生活。《Ghost Stories》最后一首歌叫做《0》。这样纯净的钢琴曲，或许还得追溯到多年前的那首小品《Postcards From Far Away》了。“一群鸟在天空盘旋，它们让你想起了爱情。我总是凝视着天空，在黎明前祈祷。它们在不经意间到来，又会在不经意间离开，远走高飞。”除了模拟一些鸟鸣，整首歌结束后，静止了约10秒种，又开始了乐队的涌动。这不仅是一个Outro，实际上也可以理解为Intro，它和专辑的开篇曲《Always In My Head》做到无缝连接，由此你可以明白为什么这首歌会叫做《0》。爱情就是这么一个循环的过程，如同斯蒂芬·金《黑暗塔》，小说的末尾枪侠罗兰(微博)终于攀上梦寐以求的高塔，但发现途中经历的一切不过是幻觉，且如埃舍尔非欧几何空间一样沉默如谜。你说，这到底是不是一件艺术品？

利用两个叶形转子在气缸内作相对运动来压缩和输送气体的回转压缩机。这种压缩机靠转子轴端的同步齿轮使两转子保持啮合。转子上每一凹入的曲面部分与气缸内壁组成工作容积，在转子回转过程中从吸气口带走气体，当移到排气口附近与排气口相连通的瞬时，因有较高压力的气体回流，这时工作容积中的压力突然升高，然后将气体输送到排气通道。两转子依次交替工作。两转子互不接触，它们之间靠严密控制的间隙实现密封，故排出的气体不受润滑油污染。这种鼓风机结构简单，制造方便，适用于低压力场合的气体输送和加压，也可用作真空泵。由于周期性的吸、排气和瞬时等容压缩造成气流速度和压力的脉动，因而会产生较大的气体动力噪声。此外，转子之间和转子与气缸之间的间隙会造成气体泄漏，从而使效率降低。罗茨鼓风机的排气量为0.15～150米(/分，转速为 150～3000转/分。单级压比通常小于1.7，最高可达2.1，可以多级串联使用。罗茨鼓风机操作规程一、使用要求输送介质的进气温度不得大于40℃。介质中微粒质含量不得超过100mgm3，微粒最大尺寸不得超过最小工作间隙的一半。运转中轴承温度不得高于95℃，润滑油度不高于65℃。使用压力不得高于铭牌上规定的升压范围或本说明书性能表中规定的升压范围。风机叶轮与机壳、叶轮与叶轮间隙出厂时已调好，重新装配时要保证该间隙。（间隙过大，影响性能价格比间隙过小，由于热膨胀会产生摩擦、碰撞现象。）鼓风机运行时，主油箱、副油箱油位必须在油位计两条经线之间。 二、性能范围罗茨风机性能中的吸入流量是指吸入压力为标准大气压，吸入温度为20℃，输送人质为清洁空气时的吸入状态流量。（鼓风机输送特殊气体时，吸入流量需根据输送介质的分子量、进口温度和进排气口压力进行换算。 三、运转方法运转准备彻底清除见机内外的灰尘和杂物，并避免混入油。检查进出口联接部位有无忘记坚固的地方，配管的支承件是否完备，需要冷却水的风机，冷却水管安装是否符合要求。如果在配管内有焊渣和铁屑等，应彻底清除。将润滑油回流到两条油位线的上线位置（鼓风机运转后，油位会稍有下降），注油过少，会导致齿轮和轴承烧伤；注油过多，往往会引起温升偏高，造成齿轮和其他部件损坏。润滑油一般采用L-AN68全损耗系统用油。风机运转过程中不应加油。在运转一周后应第一次更换新油墨一个月后第二次更换新油。以后，主、副油箱应按期更换润滑油。用手沿旋转方向盘动风机联轴器，检查有无异常现象。试运转打开进、排气侧阀门，在无负荷的状态下接通电源开头，核实旋向。需用冷却水的风机接通冷却水后，方可启动。启动后空载运转20-30分钟，检查有无异常振动及发热现象。如果出现异常现象，应立即停车，查明原因。异常现象大多由安装不良或联轴器对中不准引起，也有润滑油油位不适宜等其它情况。然后，在正常负载情况下运转2-3小时，同时观察每个部件的温度和振动。运转中须注意电流表的示值，如出现异常应立即停车检查，其原因大多是由叶轮摩擦引起的。运转中的注意事项运转过程中，须经常检查轴承、润滑油温度，电流表的示值。风机需用冷却水时应检查冷却水量是否达到规定的要求。风机为填料密封时，还应检查密封的泄漏情况，当泄漏严重时，应立即更换密封，以免危险气体泄漏引发安全事故，且腐蚀气体的泄漏也会损坏轴承。定期检查，作好记录。停车时，须先卸压减载，再停车。如操作不当，带负荷停车或因突断电停车时，风机出口侧系统内的高压气体会迅速流向低的风机进口侧（即通常讲的“打回流”），从而造成高压气体带动风机叶轮加速反射运转，风机叶轮转速越来越高，当叶轮速度达到其极限速度时，就会造成叶轮与机壳碰撞、打碎的恶性事故。特别是化肥厂等输送易燃易爆气体的用户更应严格操作，因为风机叶轮打坏的同时，往往会伴有爆炸起火等更危险事故的发生。

耐克倒钩的车子是迈凯伦。迈凯伦这个被广大车迷俗称“倒钩耐克”的超级跑车，车钥匙的造型当然也不能逊色。作为迈凯伦豪门的创始人。布鲁斯·迈凯伦对F1世界的巨大影响，远远超过了他作为车手取得的所有成绩的总和。50年代中期，迈凯伦在家乡开始了车手生涯。很快，他在1958年赢得了去欧洲参加F2比赛的奖金，迅速上升为单座车手。迈凯伦起源迈凯伦F1其实就是著名的迈凯伦F1跑车,而非一级方程式赛车。Mclaren F1能在3.2秒内从静止加速到100km/h，极速突破386km/h直到2005年。来自瑞典的Koenigsegg公司的CCR终止了Mclaren F1全球最快速度量产跑车的纪录。Mclaren F1曾经是世界上跑的最快的量产跑车，这个纪录从它1994年进入批量生产一直保持到2005年停产，这也使它创造了保持世界最速跑车纪录最久的纪录Mclaren F1由英国著名的赛车研发制造公司迈凯伦（Mclaren）公司打造。公司工程技术人员将大量的F1赛车技术应用到该跑车上，所以其F1的名字也由此而来，可以说它是一台地地道道的街道F1。虽说当今业界有不少车在极速上可以超越Mclaren F1，但是至今它仍然保持着全球最速自然吸气引擎跑车的名号。Mclaren F1搭载了一台6.1升60°夹角V12引擎，这具引擎由宝马公司提供，编号S70/2，这具引擎是当初宝马高端跑车8系所用的发动机衍生过来的。经过特殊的强化调校，专门提供给迈凯伦。据官方资料显示，Mclaren F1一共制造了107台，其中65台作为街道跑车出售，6台供LM型号，3台加长尾翼的GT街道跑车，5台街道原型车，28台GTR型号以及一台勒芒赛车原型车。

是午夜的意思。

刚刚大规模裁员，自己想吧

基本原理 原子吸收光谱法是依椐处于气态的被测元素基态原子对该元素的原子共振辐射有强烈的吸收作用而建立的。该法具有检出限低（火熖法可达ng?cm–3级）准确度高（火熖法相对误差小于1%），选择性好（即干扰少）分析速度快等优点。 在温度吸收光程，进样方式等实验条件固定时，样品产生的待测元素相基态原子对作为锐线光源的该元素的空心阴极灯所辐射的单色光产生吸收，其吸光度（A）与样品中该元素的浓度（C）成正比。即 A=KC 式中，K为常数。据此，通过测量标准溶液及未知溶液的吸光度，又巳知标准溶液浓度，可作标准曲线，求得未知液中待测元素浓度。 该法主要适用样品中微量及痕量组分分析

热水器使用过程中会出现的问题与解决办法:1.热水器加热过程中,安全阀小孔有水珠滴出。滴水原因：由于电热水器属于封闭型贮水式电热水器,在加热或保温过程中,热水器内胆的水压大于6Mpa,使单向安全阀溢压而滴出水.解决办法：关闭进水阀,将混水阀旋钮调到高温处即可避免单向安全阀的漏水现象,使水从花洒中滴出。如果未安装混水阀,可把出热水球阀打开一点,在此处泄压流水,也可避免单向安全阀的漏水现象.2.热水器中的热水使用时间短。原因分析：第一次使用热水器(或有段是境未使用而从新使用)由于热水器加热时间短,上下层水温不均匀,造成出热水量少。解决办法：连续使用热水器工作12小时以上,使热水器内的水温上下均匀。3.热水器使用过程中漏电。u2002原因分析：①风压开关调节不适当。②吸气嘴位置不恰当。③硅胶管脱落或龟裂导致漏气失压不能推动风膜。④风压开关失灵。⑤脉冲器故障。u2002解决办法：①调节风压开关至适当位置。②调节吸气嘴。③插上或更换硅胶管。④更换风压开关。⑤更换脉冲器。4.加热指示灯亮,但不能加热。原因分析：①发热管接插端接触不良或断线。②发热管烧坏。解决方法：①检查排除。②更换发热管。u20025.加热指示灯不亮且不能加热。原因分析：①温控器接插端接触不良或断线。②温控器烧断解决办法：①检查排除。②更换温控器。6.热水器指示灯一直不灭。原因分析：①温控器感温面与电热管法兰面接触点少。②温控器坏解决方法：①重新安装温控器,使感温平面接触。②更换温控器。7.在使用过程中漏电保护插头自行断电(有规律的自动跳闸),按下复位键,能复位恢复供电。u2002原因分析：1.通常是由于插座接触不良,异常温升过高所致。2.闪电、雷击或相邻电器对地漏电等等都会让接地线瞬间出现电流触发漏电保护插头动作。u2002解决方法：1.更换优质的插座(选插、拔力比较大,插头插进去后咬得比较紧的插座)。2.检查漏电保护插头的几只铜插脚,若已发黑,就用细砂纸把氧化层擦去,若插脚变形,应进行修正,三只铜脚应保持与底面垂直,不能弯曲。8.出水不热u2002原因分析：1.冷热水调节不当2.电源未接通;3.电加热器损坏;4.温控器损坏。u2002解决方法：1.适当调节冷热水混水阀的开度;2.调整电源插头或开关,使其接触良好;3.更换电加热器;4.修理或更换温控器。1.电热水器温控器与加热棒出现了故障可能是温控器坏,温控器坏了会使热水器持续加热,然后水温过高,从而很高温极限开关跳开,使热水器断电。你可以自己打开右侧,看是不是有个小红按扭,是否是它跳开了。加热棒坏。使用多年,如果从未清洗,热水器坏的机率很大的,就是不坏,上面也有很多水垢了,会很耗电的(有没发现加热时间比刚买时时间长了)。2.电热水器的本身功率太小（例如海尔）电热水器水不热,通常情况下有这些原因造成的,电热水器主要是靠电能发出的能量来加热水,如果出现电热水器不热的情况,大多情况下就是和电热水器的发热装置有关。如果电热水器,本身功率比较小,则等待热水的时间较长,所以会出现在短时间内没有热水的现象。9.出水温度太高u2002原因分析：1.冷热水调节不当;2.温控器旋钮调节不当或触点粘连。解决方法：1.适当调节冷热水混水阀的开度;2.先对温控器进行调整,然后修理触点,必要时更换温控器。u2002

http://baike.baidu.com/view/9413.htm 很详细，你慢慢看吧。

机械设计制造及其自动化专业有车辆工程、机械电子工程、材料加工工程、机械制造及其自动化、机械设计及理论等考研方向。机械设计制造及其自动化专业有车辆工程、机械电子工程、材料加工工程、机械制造及其自动化、机械设计及理论等考研方向。机械设计制造及其自动化考研科目分为公共科目和专业科目，公共科目主要考《思想政治理论》、《数学》、《英语》、《数学》；专业科目主要考《微机原理》、《材料力学》等。机械机械设计制造及其自动化专业。机械机械设计制造及其自动化专业设计制造及其自动化专业旨在培养适应社会发展需要，具备较扎实的自然科学基础和宽厚的机械专业知识以及较强的实践能力。具有创新意识、国际视野、团队合作精神和良好的沟通能力；具有较好的人文社会科学素养、较强的社会责任感、良好的职业道德，能在机械工程领域从事机械产品研发、设计、制造、项目管理等工作的复合型工程技术人才。机械设计制造及其自动化专业核心知识领域包括：机械设计原理与方法、机械制造工程原理与技术、机械系统中的传动与控制、计算机应用技术等。机械设计制造及其自动化专业毕业生就业主要在机械、汽车、航空航天、能源、化工、电子、材料、冶金等行业领域，从事机械领域内的设计制造、科技开发、应用研究、运行管理和经营销售等方面的工作。

有些人天生就会比较怕冷一点，出门的时候偶尔会因为天气比较冷而磨蹭很久，市面上也因此出现了很多种类的暖宝宝，典型的痛点需求就是发热时间比较久的会更受消费者的喜欢；也有里面灌水，通过充电发热的暖宝宝，这种使用性会比较持久，但是使用过程中问题也比较多，比如暖宝宝里面的液体少了怎么办？液体暖宝宝发热原理是什么呢？液体暖宝宝里头是注入了过饱和的溶液，内头还有一块移动的金属块，在通过充电发热以后，移动金属块会让饱和溶液里的溶剂结晶出来，也就是发热原理。 在多次使用以后如果发现暖宝宝中的液体少了之后，就要拉开外套口，露出注水口，注水口通常用塞子塞紧，取下的塞子要小心放好。然后用手捏住塞子周围的袋身，然后拿一个小型漏斗插入孔洞中，接着排尽袋子里面的空气，注入大概800ml左右的净水，在注入过程中尽量缓慢，不可使水触及电源插孔。在完成注入后塞紧塞子，注意不要将电暖宝中的液体倒出，袋内含有的都是导热剂液体，大量流失以后影响暖宝宝的发热情况。 在日常使用中要注意维护好液体暖宝宝，比如不要重摔或者是接触到一些尖锐物等等，而且充电的时间不宜过长，在指示灯变色后就可拔下充电线，发热时间过长容易影响下次加热时间。

本名：汪东成艺名：汪东城生曰：1981.8.24星座：处女座血型：O型身高：180cm鞋号：7.5号学历：复兴美工 - 广设科兴趣：运动、音乐专长：唱歌、画画口头禅：真的还假的最糗大的事：逛街时衣服穿反最难忘的事情：高中毕业典礼喜欢的颜色：天空色、大地色喜欢的艺人：HIDE喜欢听到的话：有气质喜欢吃的东西：只要能吃的都可以未来的目标：人见人爱的艺人人生以服务为目的，服务众人外表颇酷，但自认内心既狂野热情又搞笑喜欢的颜色：天空色、大地色喜欢的艺人：HIDE喜欢听到的话：有气质喜欢吃的东西：只要能吃的都可以目前为可米飞轮海(Fahrenheit)成员其他成员为辰亦儒、炎亚纶、吴尊.想寄东西、写信给大东，请寄至：110台北市信义区嘉兴街311号3楼可米制作 汪东城 收演出经历:☆☆ MTV☆☆MAKIYO"还给你"MTV张惠妹"记得"MTV (带头巾搬货的那个)梁静如"分手快乐"合唱版☆☆CF☆☆多喝水cf"躺在浴缸篇"有氏没氏非常茶饮料来一客泡面"甩尾篇"台新银行u be卡"曰本泡汤篇"MOTOROLA好礼大方送"taxi篇"立顿奶茶"破了比较好篇"新光人寿"美丽人生篇"爱之味鲜采蕃茄汁"保时捷篇"☆☆平面☆☆"木野直人&村明秀"服装代言人...已经当了三季喔!ps在很多百货公司都可以看得到,譬如:sogo,京华城,依蝶,西门诚品等...☆☆ 戏剧☆☆偶像剧"听笨金鱼唱歌"第八号当铺恶作剧之吻终极一班>>本名：辰亦儒>>小名:：陈奕儒>>英文名：Calvin (基本上朋友都这麼叫我)>>身高：184 cm>>体重：65 kg>>生曰：1980／11／10>>星座：天蝎座>>学历：建中 温哥华Simon Fraser University 大学 主修经济维多利亚 University>>of Victoria 硕士 主修经济>>血型： A型>>鞋号：US 10.5 号>>三围： 37, 31, 36>>家庭成员：爸爸 妈妈 一个姐姐>>喜欢的颜色：蓝色 白色>>兴趣：健身 网球 唱歌>>个性： 风趣幽默>>专长： 反应很快 嘿嘿>>歌声如何： 还不赖 自认中上 哈 眞的啦 录音师也这麼说^^>>近视：小时是电视儿童 所以 两眼都550 @@>>头发：微卷 以前超不爱 超限慕直发的人 但后来发现卷发其实好做造型 也不赖 哈>>口头禅：没啥特别的口头禅ㄟ>>英文能力：国外研究所的能力搂>>拍过的MV：拍摄当届创作歌曲选拔冠军"难以抗拒" 的音乐录影带>>拍过的广告：一堆加拿大温哥华阳光男孩公益活动的广告 大概有5支左右吧>>欣赏的女生类型：气质型>>家人对calvin进演艺圈的看法：书读了那麼多 给我跑去演艺圈 贞士气死人 哈 所以我需要你们的大力只持 交出好成绩给爸妈看 证明给他们看!!>>平常喜欢：跟好友聚在一起 做什麼都可以 因为我很重视友谊>>喜欢电影种类：好看的话 不管是动作 喜剧 文艺爱情 惊悚 我都爱>>最爱的电影：很多ㄟ 不过我很喜欢 妮可拉斯凯吉演的任何电影 他的演技真是没话说>>喜欢的歌手： 不如说是音乐种类吧 Hip Pop and R&B>>喜欢的女演员：>>喜欢的男演员：梁朝伟 吴镇宇>>喜欢的曰本艺人：木村 帅>>喜欢的漫画：男生爱看的 譬如 七龙珠 灌篮高手 神型太保>>喜欢看哪类型的小说：>>最想去的国家：加拿大 像是我第2个家 毕竟我呆了7年 我很想环游世界 喜欢不同的文化>>喜欢的音乐类型：Hip Pop and R&B>>喜欢什麼动物： 狗 超爱 之前加拿大养了两只比熊 不知道你们只不知道这个品种 有点像马尔季斯 但比马尔季斯大一点>>喜欢的食物：Japanese Food and Western food..Junk food..哈>>喜欢看书或上书店：以前在国外认为在书店喝咖啡看书是种享受 很爱忙里偷闲的感觉 嘿>>喜欢购物：超爱 基本上 我逛街可超像女生 哈 跟我逛街的男生都很受不了 觉得我超会逛>>害怕什麼事物： 害怕的事还好 但不喜欢伤心的事 譬如失恋 或跟朋友吵架这类的>>平常的穿衣style：两极化 有时很休闲 有时爱穿很正式耍帅 哈>>印象最深刻的事：7年前一个人独自上加拿大生活 一直一个人过了7年>>接过哪一件最辛苦的CAS：还好ㄟ 不过夏天拍戏 真是热热热>>希望能和所有的Fans共同做什麼事：多点见面会 多认识你们 我会好好努力记住你们的名字 你们只要见到我 我较不出你的名字 就再提醒我一次 直到我记住为止 哈 基本上我记性很好的喔>>当艺人前从事过什麼工作： 都在加拿大念书 念研究所当过学校大学助教>>喜欢哪一类的书：>>初恋和初吻几岁：16岁 高一>>谈过几次恋爱：好私人喔 不过不多啦 真的 5次以下 可以了吧 哈>>讨厌什麼样的人：就是两面人搂>>讨厌什麼昆虫或动物：>>最糗的事：>>最痛苦的事：>>梦想： 演艺圈闯出一番好成绩 这是我目前最大的愿望吧炎亚纶是台湾人是飞轮海组合里面的成员回答者：joyceline5231 - 魔法学徒 一级 3-8 08:21--------------------------------------------------------------------------------炎亚纶 基本档案本名：吴庚霖艺名：炎亚纶匿称：阿布生曰：1985/11/20星座：天蝎座血型：O身高：177体重：60学历:文化大学新闻系语言：国语、英语嗜好：篮球、跳舞、唱歌、交朋友、爱搞怪个性：多变 但大部分是话少却好相处三围：胸围忘ㄌ 28 36身体状况：轻微气喘专长：钢琴长笛 篮球最喜欢的团体：信乐团最喜欢的男演员：刘德华最喜欢的女演员：林依晨最喜欢的男歌手：哈林、林俊杰最喜欢的女歌手：林凡、梁静茹最想去的国家：都想去^^最喜欢的音乐类型：soul rock pop R&B hard rock jaz最喜欢什麼东西？有心意ㄉ东西最喜欢的颜色：绿色蓝色黄色黑色欣赏的女生类型：个性比较重要罗让你印象最难忘的事：初恋的心碎...最糗的事：ㄟ...怎麼会有糗事发生在我身上勒谈过几次恋爱？哈哈蛮多次ㄉ梦想：现在正在走ㄉ未来将达成ㄉ就是我ㄉ梦想想对家族成员说的话：你们每ㄍ人都很贴心也很可爱 我们要一起加油 考上大学...(不是啦) 你们每ㄍ人都要好好照顾身体 一定每天都要健健康康!! 真ㄉ!! 不管到哪里心都与你们相系寄东西给你要寄到哪？ 110 台北市信义区嘉兴街311号三楼 炎亚纶收§演艺经历:戏剧-2004 安室爱美惠2005 恶作剧之吻2005 终极一班团体-2005 飞轮海比赛-2004 新光三越第二届阳光男孩选拔台北区(初赛)姓名：吴尊，吴吉尊WU ZUN (GOH KIAT CHUN)昵称： 不知道甚麼意思。DON"T UNDERSTAND THE QUESTION!生曰： 10月10曰10-10血型 : O型星座： 天秤座LIBRA生肖： 不知道甚麼意思。DON"T UNDERSTAND THE QUESTION!身高： 182CM体重： 73KG个性：害羞,见忘，事业为重。SHY, FORGETFUL, CAREER MINDED嗜好： 打篮球，健身，看书，听音乐,看电影,吃,煮饭和旅行。PLAY BASKETBALL, FITNESS, READING BOOKS,LISTENING TO MUSIC,WATCHING MOVIE, EATING, COOKING andTRAVELLING专长：不知道甚麼意思。DON"T UNDERSTAND THE QUESTION!学校：RMIT大学，澳洲 (学士在工商管理过程中的生意，毕业生用)RMIT UNIVERSITY, AUSTRALIA (BACHELOR OFBUSINESS IN BUSINESS ADMINISTRATION, GRADUATE WITHDISTINCTION)喜欢的颜色：看情况…IT DEPENDS....喜欢的食物： 我很爱吃,除了油腻的食物我甚麼都吃。I LOVE EATING THEREFORE I EAT ANYTHINGEXCEPT OILY AND FATTY STUFF喜欢的饮料：无酒精的鸡尾酒饮料 MOCKTAIL喜欢的音乐： 看心情DEPENDS ON MY MOOD喜欢的地方： 纽约NEW YORK喜欢的电影： 英雄本色BRAVEHEART最喜欢的味道： 闻到美味的食物…哈哈哈!!SMELL OF DELICIOUS FOOD... HAHAHA!!!最想去的城市： 纽约NEW YORK最喜欢的季节： 秋SPRING喜欢的卡通人物： 超人SUPERMAN最喜欢的花/花语：百合LILIES爱情观： 不知道甚麼意思。DON"T UNDERSTAND THE QUESTION!几岁初恋：16岁喜欢异性类型： 对我而言，最重要的昰感觉。TO ME, MOST IMPORTANT IS THE FEELINGS最讨厌的事情：失去我身边最重要的人LOSING THE PERSON CLOSE TO ME最伟大的愿望： 在生命里做个好与事业有成的人BE A NICE AND SUCCESSFUL PERSON IN LIFE做过最难忘的事情： 在照顾去世前的妈妈TAKING CARE OF MY MUM BEFORE SHEPASSED AWAY做过最后悔的事情： 在妈妈去世前没花足够的时间在她的身边NOT SPENDING ENOUGH TIME WITH MYMUM BEFORE SHE PASSED AWAY做过最有勇气的事情： 在台湾继续追求我在演艺圈的事业