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【摘要】目的 研究沙鼠短暂性脑缺血及西比灵干预后脑内Smad2和Smad4蛋白的表达。方法 制作沙鼠脑缺血再灌注模型，用免疫组化法检测脑内Smad2、Smad4蛋白的表达变化。结果 各组沙鼠神经元和胶质细胞胞浆内均有Smad2、Smad4蛋白阳性表达，且Smad4蛋白表达均显著强于Smad2蛋白。缺血再灌注6h、1天后Smad2、Smad4蛋白表达显著上调(P<0.05)。同脑缺血组相比，西比灵干预组20只沙鼠神经元和神经胶质细胞内Smad2和Smad4蛋白在缺血再灌注6h、1天时表达明显下调(P<0.05)。结论 沙鼠脑神经细胞和神经胶质细胞内均有Smad2、Smad4蛋白表达；西比灵干预后，缺血再灌注沙鼠脑神经细胞和神经胶质细胞内Smad2和Smad4蛋白表达下调。提示Smad2和Smad4蛋白可能是缺血性脑损伤程度的又一重要标志；Smad4、Smad2在沙鼠脑缺血的发生和发展过程中可能有协同作用。【关键词】Smad蛋白；免疫组化；缺血再灌注；沙鼠体内外实验均证明，转化生长因子β有神经保护作用。脑缺血后，脑组织内TGF-β表达增高，是机体对缺血性脑损伤的一种保护性反应。TGF-β1增高能减少脑梗死面积，抵御脑缺血性损伤。Smad蛋白是辅助TGF-β超家族信号在细胞内传导的一族蛋白，包括了Smad2、Smad4等；直接参与TGF-β超家族成员的信号传导，是TGF-β超家族成员参与生命活动的重要介质。我们通过免疫组化技术测定沙鼠正常脑组织；缺血再灌注后脑组织及西比灵干预后缺血再灌注后脑组织及Smad2/4转录水平的表达,初步发现了Smad2、Smad4之间的关系，现报告如下。材料方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 健康雄性蒙古沙鼠60只，9月龄，体重（90±5）g，购自上海实验动物管理委员会。随机分为正常组、假手术组、脑缺血组及西比灵干预组。1.1.2 主要试剂 Smad2、Smad4免疫组化检测试剂盒，一抗(鼠IgG)，二抗(羊抗鼠IgG)，抗原修复液I，山羊血清封闭液、SABC等和DAB显色试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供；西比灵胶囊由西安杨森医药公司提供。1.1.3 主要仪器 石蜡切片机、免疫组化专用盖玻片(武汉博士德生物工程有限公司提供)、恒温箱、冰箱、显微镜、照相机等。1.2 实验步骤和方法1.2.1 动物模型的建立 健康雄性蒙古沙鼠，用3%戊巴比妥以30mg/kg的剂量腹腔注射进行麻醉，固定动物，消毒，颈正中切开皮肤1.5cm左右，钝性分离皮下组织，分离双侧颈总动脉，微血管夹夹闭双侧颈总动脉10min后松夹再灌注，缝合皮肤。1.2.2 动物的分组和处置 正常组10只，不予任何处理即断头处死动物。假手术组10只，仅分离双侧的颈总动脉，不予夹闭，就缝合皮肤，1天后断头处死。脑缺血组：共20只沙鼠，分为缺血6h组（IR6h）、缺血1天组（IRld）两组，每组10只，分别在缺血再灌注(IR)6h、1天时间点处死动物。西比灵干预组共20只沙鼠，分为IR6h,IRld两组，每组n=10，在缺血再灌注前一天给予喂食西比灵[按20mg/(kg·d)]。分别在缺血再灌注(IR)6h、1天时间点处死动物。所有实验动物在预定时间断头处死，快速取前脑置10%福尔马林固定,常规石蜡包埋后5μm连续切片。1.2.3 结果判定 病理结果采用相邻脑组织切片作常规HE染色，用光镜观察其组织病理变化，估计脑损伤程度。免疫组化取各组沙鼠断面水平相似的连续组织切片，所有切片分析均在同一强度、同一放大倍数下进行，每个指标采用阳性细胞计数法。在40×10倍的光镜视野下观察免疫反应，以细胞浆着棕褐色为阳性，每张切片在高倍视野下分别取上、下、左、右及中心共5个区域进行细胞计数, 每个区计数200个细胞, 共计数1000个细胞, 计算染色细胞所占比例，即为Smad2、Smad4表达指数。1.3 统计学分析 各组检测结果用单因素方差分析方法，2个独立样本用t检验，两变量间相关关系用直线相关分析，计算Pearson相关系数;确定P<0.05差异有显著性；所有统计分析均用SPSS11.0统计软件包完成。结果2.1 病理观察结果 正常组和假手术组皮层组织形态结构正常。脑缺血组IR6h可见部分神经元和胶质细胞轻度水肿；IRld后神经元出现变性、灶性坏死、胶质细胞轻度增生。西比灵治疗组:IR6h、IRId各组分别同脑缺血组相应时间点相比，脑组织损伤程度均明显轻于脑缺血组。2.2 免疫组化结果 所有正常沙鼠脑组织神经元和神经胶质细胞内均有Smad2和Smad4蛋白不同程度的阳性表达，多呈棕黄色颗粒;颗粒主要定位于胞浆，部分定位于胞核。但表达程度有所不同，Smad4蛋白表达强于Smad2蛋白，统计差异有显著性(P<0.05)。在缺血再灌注沙鼠脑组织中，神经元和神经胶质细胞内也有不同程度的Smad2和Smad4蛋白的阳性表达，表达部位与正常组基本一致，Smad4蛋白表达也高于Smad2蛋白，统计差异有显著性(P<0.05)。缺血再灌注组（IR6h、IR1D）与正常组、假手术组比较，Smad2和Smad4蛋白阳性表达率增高，统计差异有显著性(P<0.05)。西比灵干预组Smad2和Smad4蛋白阳性表达率低于同时间点的脑缺血组，高于同时间点的正常对照组，统计差异均有显著性(P<0.05)（图1、2；表1）。表1 各组Smad2和Smad4蛋白表达指数比较 注：与正常对照组比较，▲P<0.05；与同时间点缺血组比较，△P<0.05；与各组Smad4蛋白比较，*P<0.05讨论Smad蛋白质群是发现的新的细胞内信号传导蛋白，它们直接参与TGF-β超家族成员的信号传导。已发现的Smad蛋白至少有10种，在哺乳动物中有8种，Smad1～Smad8。其中，参与调节TGF-β的Smads包括Smad1,2,3和4。Smad2由Eppert等于1996年从人肾cDNA文库中克隆获得，其C端含有SSXS结构，SSXS结构能被特异的丝氨酸激酶I型受体磷酸化，进而参与信号传导。Smad4C端不含SSXS结构，它不能特异地介导信号传导，但它能与Smad1,2,3,5和8等结合后协同激活各自的特异靶基因，因此也称为协同Smad；当TGF-β受体活化后，可以诱导限制途径Smad2和Smad3通过细胞膜特异的丝氨酸/苏氨酸激酶受体活化而发生磷酸化，再与共有型Smad4结合成寡聚体转运到细胞核，在细胞核直接地应答TGF-β的转录功能，这一结构是TGF-β细胞内信号的开关。国内外已有研究Smad2和Smad4蛋白在心肌细胞、肝细胞、牙乳头细胞和胃癌等细胞和组织中有表达，但沙鼠脑组织中是否存在Smad2和Smad4蛋白表达尚未见文献报道。本实验用免疫组化方法检测到正常沙鼠脑组织神经细胞和神经胶质细胞胞浆和胞核内均有Smad2和Smad4蛋白表达，Smad4蛋白表达强于Smad2蛋白，两者差异有显著性。这表明Smad2和Smad4蛋白作为TGF-β在细胞内信号转导的分子，在于沙鼠神经细胞及神经胶质细胞中是必需的，神经细胞及神经胶质细胞需要Smad2和Smad4蛋白的表达才能发挥正常功能。而Smad4蛋白表达高于Smad2蛋白的可能原因是Smad4蛋白是TGFβ信号通路的共同通路有关。Smad2和Smad4蛋白在缺血再灌注6h，1天时沙鼠神经细胞、神经胶质细胞胞浆和胞核内也均有表达，且较正常沙鼠神经细胞、神经胶质细胞胞浆和胞核内的表达有明显上调，两者差异有显著性。进一步分析发现Smad2和Smad4蛋白在缺血第1天时间点表达比在缺血第6h时间点表达更明显(P<0.05)。脑缺血再灌注后Smad2和Smad4蛋白表达升高的可能原因我们认为是：脑缺血再灌注后，脑组织发生损害，氧自由基等有害物质表达增加，机体为了抵御这些有害因子，反应性地上调一些保护性因子，这其中就有TGF-β1。Smad2和Smad4蛋白是TGF-β1信号转导的必需分子，故当TGF-β1表达上调时，可能需要更多Smad2和Smad4蛋白来转导具有脑保护作用的TGF-β1的信号，而1天时TGF-β1表达较6h更高，Smad2和Smad4表达也相应增多。统计还发现，正常对照组、缺血组沙鼠脑神经细胞和神经胶质细胞内Smad4蛋白和Smad2蛋白表达存在正相关关系，其Pearson相关系数为0.582，这提示Smad4蛋白和Smad2蛋白在正常沙鼠脑组织内及脑缺血的发生和发展过程中可能有协同作用，这与大多数研究一致。西比灵是经典的钙离子拮抗剂，它有明显的脑保护作用。西比灵可有效的抑制神经细胞膜受体依赖性Ca2+通道开放，具有神经保护作用，并具有减轻皮质抑制，缩短恢复时间，防止脑组织缺血性改变的功能，增加脑组织对缺氧的耐受性。已有研究表明，西比灵发挥脑保护是通过以下机制实现的:西比灵可增加脑组织对缺氧的耐受性，有神经细胞保护作用；抑制病理性血管收缩，阻止血小板聚集，抗自由基作用，拮抗兴奋性氨基酸作用；改善脑循环，减轻脑水肿；避免再灌注性损伤[6]。由于Smad是TGF-β信号转导通路必需的，故阐明正常、缺血沙鼠脑组织内Smad4和Smad2蛋白的表达水平有助于加深对TGF-β胞内信号转导机制的理解，也有助于深入阐明脑缺血缺氧的发病机制，为其进一步深入分子水平的研究与治疗打下基础。使其聪明《美国实验生物学联合会会志》发布一项新的研究成果称：“有证据表明，如果我们能够聪明的吃，我们就会变得更聪明”。麻省理工大学的科学家指出，从婴儿配方奶粉到鸡蛋等日常饮食中吸取的营养成分，能够增加大脑突触并提高认知能力。该项研究的高级研究员理查德说：“但愿人脑能和实验动物的大脑一样，对营养食物产生回应，增加大脑突触以储存认知能力。”在相关的实验中，研究人员将沙鼠分为两组，用鸡蛋中含有的胆碱、甜菜中的尿苷磷酸以及鱼油中的DHA搭配成不同的组合喂食其中一组沙鼠，另一组沙鼠的食物中则完全不含这些营养成分。四周以后对沙鼠进行认知能力的测试，科学家发现，喂食胆碱—尿甘磷酸和胆碱—DHA组合的沙鼠，认知能力有明显提高。科学家解剖沙鼠的大脑，以期获得认知能力提高的生物学原因。他们发现，这些沙鼠大脑突触活动高于正常值，表明它们拥有较高的智商。《美国实验生物学联合会会志》的总编辑杰拉尔德·魏斯曼说：“我们现在已经知道如何令沙鼠更聪明，那么提高人类智商就不会太遥远。不过坦率的说，也不是很快就会到来。”

机体抵抗外源抗原所产生的免疫蛋白，博士德生物可以提供专门的技术服务

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　　摘 要：体外培养山羊及绵羊的松果体细胞，观察其增殖情况和功能状态的变化。结果显示：山羊、绵羊的松果体细胞体外形态及生长情况相似。细胞多呈圆形或多角形，细胞体积有增大趋势。采用MTT了法检测细胞生长状态，发现细胞有明显的增殖现象，大约于11 d达到高峰，用免疫组织化学对培养细胞进行染色， 发现5-HT阳性细胞数量随细胞的增殖而增加。表明山羊和绵羊松果体细胞在体外均增殖旺盛，并能保持体内的分泌功能。 　　关键词：松果体细胞培养；M9了；5-HT免疫组化 　　中图分类号：S827 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007―7847(2006)01―0087―04 　　松果体为哺乳动物的重要神经内分泌器官， 产生多种胺类和肽类物质，其主要分泌物--褪黑 素(MT)对许多器官的功能具有重要的调节作用。 为了解松果体的生理价值，许多学者采用体外培 养技术研究其细胞形态和分泌功能．体外构建松 果体组织并植入动物体内成为目前研究的热点， 这些研究有助于深入了解松果体的活动特点，为 进一步调节动物体内松果体细胞分泌的研究积累 材料。 　　哺乳动物松果体细胞培养早在20世纪70年 代国外就有报道，1977年Rowe首次观察了体外 培养大鼠松果体细胞的形态，1978年Budat成功 检测了培养的大鼠松果体细胞褪黑素合成和分泌 功能。本实验以山羊和绵羊作为研究对象，对其 松果体进行体外培养，观察在无其他因素干扰条 件下山羊和绵羊松果体细胞的形态变化、增殖过 程和功能状态的异同，为研究松果体细胞分泌特 点及改变动物繁殖现状提供依据。 　　 　　l 材料与方法 　　1.1 主要实验试剂及仪器 　　DMEM培养液(GIBCO，美国)，M199培养液 (sigma，美国)，犊牛血清(sigma，美国)，胰蛋白酶 (sigma，美国)，双抗(武汉亚法)，MTr(sigma，美 国)，DMSO(国产分析纯)，兔抗5-HT血清(武汉 博士德)，SABC试剂盒(武汉博士德)，DAB显色 试剂盒(武汉博士德)，自动酶标仪(Tecan，澳大利 亚)，C02培养箱(LAB―LINE，美国)，倒置显微镜 (Nikon，日本)。 　　 　　1．2 松果体细胞的体外培养 　　按伊斯兰方法屠宰1岁龄健康莱芜黑山羊6 只、小尾寒羊5只，分别进行以下步骤：迅速开颅取 出松果体，冷D-hank昌液冲洗；剪碎后，0．25％胶 原酶消化30min，含血清培养液中和，反复吹打， 离心；加完全培养液吹打混匀，按每mL 1xl04的 细胞密度分别接种于96孔培养板(分7组，每组6 孔)和24孔板(分7组，每组3孔，每孔内置一盖玻 片)，放人37℃、5％C02培养箱内培养。另外，本 　　实验中山羊采用DMEM培养液，绵羊采用M199 培养液。 　　 　　1．3 MTT法检测细胞增殖 　　从培养第3d开始，隔日取96孔板内一组细 胞，每孔加入MTY 15 μL，继续培养4h后，每孔 加入DMSO 30 gL，吹打至沉淀完全溶解后，在 0D570。处测吸光度值并绘制曲线。 　　 　　1．4 5－HT免疫组织化学方法 24孔板每组从第3d开始隔日取出细胞爬 片，PBS冲洗，冷95％乙醇固定10min；用正常羊 血清在室温下封闭30rain；加入兔抗5―HT血清 (1：100)37℃孵育2h，然后4℃过夜，PBS冲洗3 rainx3；加入生物素标记的IgG，37℃ 30min， PBS冲洗3minx3；SABC复合物37℃下作用30 rain，PBS洗3 minx3；DAB镜下显色5～10Min； 苏木素复染，脱水，透明，封片观察。 　　 　　2 结果 　　 　　2．1 松果体细胞的形态观察 　　倒置显微镜观察体外培养的山羊、绵羊松果 体细胞形态相似，大多呈圆形或多角形，x400下 观察呈圆圈状。培养过程中都可见到“8”形的细 胞形态，可能为正处于细胞分裂期。培养后期，细 胞体积略增大，折光性减弱，但形态变化不大。另 外可见具有长突起的小胶质细胞(图1、2)。 　　 　　2．2 MTT检测结果 　　从表1和图3可以看出，体外培养的松果体 细胞数量前7d增长缓慢，第9d开始分裂增殖速 度加快，于第11d左右达到高峰，此后生长曲线 开始缓慢下降。 　　 　　2．3．5-HT免疫组化染色结果 　　不同培养时期都可见细胞爬片上布满棕黄色 的5-HT阳性细胞，培养后期细胞的阳性反应仍 然明显，松果体细胞多呈圆形或多角形，高倍镜 下细胞中阳性物质呈不均质分布，细胞轮廓无明 显界限，复染后核位于细胞中间，呈规则的圆形 (图4、5)。培养前期随时间延长，阳性细胞数有增 加现象；在11d细胞增殖达高峰后，阳性细胞数 量变化不大。 　　 　　3 讨论 　　 　　1)体外条件下培养山羊、绵羊的松果体细胞 形态相似，初期呈小圆形、折光性强，后期细胞逐 渐增大、折光性减弱，这与廖华对大鼠松果体 细胞的报道基本一致。 　　2)MTT比色法是一种检测细胞增殖情况的 经典方法，酶标仪所测的OD值可反映出细胞的 相对数量。从测量OD值得出的生长曲线可 见，两种羊虽在不同培养液中生长，但其增殖趋势 相同，松果体细胞在培养第9d开始增殖，11d左 右达到高峰，随后增长缓慢。证明松果体细胞在 常规培养条件下，能保持其增殖能力，细胞数目明 显增加，而在成年动物体内，松果体细胞与神经 元一样，数目恒定且很难再生。对于一特定动 物来说，随着年龄的增长松果体细胞开始退化，同 时也没有新生的细胞出现，因此松果体这一器官 将逐渐衰老而无法发挥其功能。本实验发现体外 松果体细胞表现出明显的增殖现象，说明体外构 建松果体组织用于解决细胞的更新问题渴望成为 可能。 　　3)褪黑素是松果体细胞的主要分泌物，而它 是由色氨酸在多种酶的作用下转化而成，因此检 测转化过程中的任一中间产物或酶都可反映细胞 的功能状态，本实验采用目前常用的5―羟色胺 免疫细胞化学染色，因为5-羟色胺作为MT的前 体与MT的分泌有着密切的关系，可初步判断松 果体细胞的功能状态。我们对培养不同时期的 细胞爬片进行抗5―羟色胺免疫细胞化学染色，发 现爬片上布满阳性细胞，细胞中含有大量呈点状 的阳性颗粒，细胞多为圆形和不规则形，阳性细胞 数量随细胞总数的增加而增加。证明体外增殖的 松果体细胞具有合成5－HT，分泌MT的能力。 　　4)本研究所选的实验动物山羊、绵羊均为季 节性繁殖动物，光周期是影响其生殖活动的主要 环境因素。松果体分泌的褪黑素在光周期感受 过程中处于调控的中心地位，褪黑素主要通过 与下丘脑-垂体―性腺轴的相互作用达到动物生 殖周期与环境光周期的同步变化。实验证明体 外构建的松果体组织具有旺盛的增殖和分泌能 力，因此可以考虑给动物植入新的松果体，并人为 控制细胞的分泌状态，延长动物的繁殖季节，以达 到增加繁殖率的目的。同样其它季节性繁殖动物 如藏羚羊等濒临灭绝物种也可采用该方法来提高 种群数目。通过本课题的研究，我们可以为人工 繁殖稀有动物提供一个新的思路。 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文

流程：搬家了，现在正在开往我新家的卡车里面，好闷啊……不知道走了多久，卡车终于停下了，我跳下了车，妈妈马上跑了出来，给我介绍一下我们的新家家里有两只过动猿在帮忙搬家，真是好神奇啊，我还没有自己的小精灵呢，在***要求下，我来到了二楼自己的房间，调好了钟表以后，下楼看到电视上有介绍爸爸的事情，很可惜晚了一步，已经演完了……隔壁住的是爸爸的朋友，一个博士，我决定去他家拜访一下，进去以后，房间有一个小孩和一个大妈，那位大妈告诉我她女儿就在二楼。上楼以后没看到人，只有一个精灵球在地上放着，我想瞧瞧这玩意，刚要拿，来了一个女孩，一堆P话以后，她坐在了椅子上玩电脑，唉，无奈啊！打算走出去看看外面的世界，一个守在村口的女孩告诉我，有人在喊救命，我闻声往前走去，发现一位大叔正在被一只蛇纹熊追着，他告诉我他的包里有精灵球，**近一看，还真有，但是我不晓得怎么用，随便拿了一个红色的，就放出来了，那个蛇纹熊很弱，两下解决以后，那位大叔走了过来，二话不说把我带进了他的研究所，原来他是博士……还算不错，他把那只小精灵给了我，叫火稚鸡，还是母的呢！他告诉我他女儿在103道路上，自己一个人也无聊，就去找她吧！一路往北走去，过了一个小镇以后，看到高处有一神经兮兮的女孩站在那里。走过去聊了一句以后，她就决定要跟我比试，怕什么！去吧火稚鸡！我用火系，她自然用水系了，KO她以后，她以高速离开了，我回到博士的研究所，看到她也在那里，博士给了我图签，她给了我5个精灵球，5555555感动ing离开以后发现老娘在门口站着，给了我一双鞋以后就离开了，按B可以跑步。穿过101在那个小镇边往左走，就看到挑战者了，接着草丛遇敌，第一个就是那个拉鲁拉丝，冲我吼个不停，估计它也不会其他招式，杀！发发嘎，路上的树果可以摘。看到一个野生的莲叶童子，正好试试球，一击以后扔球，顺利捕捉，建议随便你抓只一个，因为一会会遇到2VS2的战斗，只有一只是不行的！继续往前走，到了城镇以后，去GYM看看老爹，没想到来了一个黄毛小子，吵着要我跟他去抓小精灵，同意以后就被他带到了野外，遇到拉鲁拉丝，在我指点下他顺利的抓到以后，就回老爹的GYM了，本想跟老爸比试比试，他没同意，让我拿到4个徽章以后再来，我离开了，沿路往左走，刚要出城镇看到一个带墨镜的BT大叔，几句废话之后他就离开了，干吗啊？途中看到一个没人的小屋，外面有只船，不管了，继续走，沿路走近森林，可以看到一个四处张望的大叔，几句话以后水舰队的人就来了，不由分说就跟我打起来，轻松KO以后，那大叔给了我一个超级球就跑了……走出森林以后看到一个小孩，好心的他给了我TM09，走到那个房子后面可以找到隐宝！那里还有玛丽路可以捕捉哦！可以练练级，我的火稚鸡进化成了力壮鸡，进入房子以后才知道原来是卖花的，两位好心大姐给了我树果和喷水壶。过桥走进下一个大城以后，进去精灵中心休息一下，旁边的屋子可以拿到HM01 砍树。不远处有Gym进入以后KO一个小孩以后，前面有个小孩有要跟你打，一位多情的大叔，非要搀和一下，于是2VS2开始了！这俩家伙一人两只小拳石，去吧！力壮鸡，莲叶童子！轻松KO了那位首领大姐，她给了我徽章和TM39，这次也可以使用HM01了！一出GYM就看到水舰队的人，追去看看！沿路往右拐出城看到那个在森林给你超级球的大叔，说是什么东西被水舰队抢走了，追！往前走去又遇到两人夹击我……上面砍树过去，仍然 有和合击你，小心。在山洞口看到一个老头，进去以后发现那个水舰队的人，还有那个老头的长翅鸥，KO他以后得到那个被抢的东西，那老头也带着他的精灵满意的离开了！往回走，那个大叔把我拉去他BOSS那里，说是BOSS一定要见我，原来我也有点知名度了～！BOSS给了我一个主菜单，并说有一封信让我交给他儿子，还给我治疗了精灵，真是好人～！出了这家公司有个人追了出来，给我讲了一下主菜单的使用方法，现在可以离开了！继续往回走，出城镇遇到那个博士的女儿，非要跟我比试……何必呢？不知道她从那里搞来一只煤炭龟，不过还是轻松KO了她，继续走走到那个有船的小屋，原来是那个老头的房子，跟他谈话以后，他就带我去第二个徽章所在的镇子了，精灵中心旁边的男人给了我鱼杆，往北走进入山洞那个山男给了我HM05闪光，先不要要进去山洞里面，走出来挑战GYM吧！GYM内人数众多，而且有2VS2的战斗。Gym Leader使用3只小精灵，其中一只是超能力系，使用力壮鸡的朋友小心了！KO GYM以后他给了我TM08 而且现在可以使用HM05闪光了！进去山洞使用闪光来到一个隐秘的地方，看到了那人，把信给他，他给了我TM47后就离开了。接着找老头坐船，选第二个到下一个城市。到了这里战斗，我的刺尾虫进化成了盾甲茧，莲叶童子也进化成了莲帽小童，谢天谢地！第[3]回复：进入那个房子，解决掉3个人以后，那BOSS给汽水，有意思啊，我的盾甲茧也进化成了毒粉蛾！进入城市发现一堆水舰队的人堵住了博物馆……同外外面的路也被他们堵住了。到下面一个有船的海港旁边的房子内跟一个人讲话，然后出去看到水舰队消失了，进去博物馆吧！进门有个人给了我一个技能机，上二楼。跟水舰队大战后，那个博士给我治疗精灵，厉害！出来后又看到那个待墨镜的神经大叔，不理他，现在可以出城了！我看到了最初的那个博士，桥下的屋子可以挑战，根据徽章的数目分别可以挑战8次。从桥下走，又看到那个女孩，她居然跟我一样有莲帽童子！！另外水跃鱼也进化成了沼跃鱼，还有一只熔岩虫。她离开以后往前走看到两个神经病在对着跑步，2VS2吧！到了下一个城镇，可以在单车店拿单车，另外，在SHOP旁边的小屋，我给了她一个邮件（在上一个城市的SHOP买）她给了我一个盒子，这样我可以在游戏厅玩游戏了！SHOP右边的房子，眼睛兄给了我HM06碎石。Gym门口以前那个小孩出现了，他要跟我战斗。谁怕谁啊？轻松KO以后，他刚走我还没来得及移动，那个带墨镜的神经大叔又来了……一堆P话离开以后，我决定挑战GYM了Gym内依然有2VS的战斗，KO首领以后得到徽章和TM34，接着往左走，饲养屋可以养精灵，到了下一个小镇，在选美中心又看到那个带墨镜的神经大叔，进入山洞把石头打碎以后，那对情侣就在一起了，那个男的给了我HM04推石，如果继续往前走，可以回到第一个GYM所在的城市，但是现在我不想回去。我回到了电系GYM在精灵中心那里往北走，会看到一个洞口，是个新的建筑，暂时我还不想进去，左边是四口之家，家里的四个人轮流跟我挑战！打败他们以后，我决定进屋坐坐，那个鸥八桑给了我一个竞争背心，好人啊！继续往北前进吧～我看到了沙漠，可惜风沙太大，睁不开眼睛，不进去了，往左走！沿路上山看到火岩团的人堵着缆车口，进去山洞吧！出来以后，树边的一个小孩子给了我TM43，有了这个技能可以在山洞或者树上打洞进去，做自己的房间，真好。旁边小屋的阿婆给我治疗了精灵。继续前进到了火山地区，到处都是火山灰，房子里面有人给了我一个口袋收集火山灰，可以做很多东西，在这里我的力壮鸡进化成了火焰鸡！另外我抓到了盔甲鸟！接着到了下一个城镇，进入精灵中心，看到电脑旁有个大姐，过去说话，她就离开了，接着去114号道路的房子找她，她是搞电脑的。然后进入了山洞，会看到火岩团和水舰队的人，原路返回或者从下面山洞的出口回去有缆车的那里，坐缆车上去，看到水舰队和火岩团的人在打架，解决掉他们的BOSS以后，我便顺着道路下山去了。到了下一个城市，温泉旁边的老太太给了我一个蛋蛋，不晓得会出生什么东西呢？ 这里就是火系道馆的所在地了，我拿到徽章的同时得到了TM50，出门后看到那个神经女孩了，她给了我一个东西，说是可以进去沙漠了。现在有了4个徽章，我以高速跑回了爸爸的道馆，挑战他！KO他以后得到了TM42和徽章，接着那个黄毛小子的爸爸就把我带走了，他给了我HM03冲浪，太好了！接着我回到了电系GYM的城市。途中捉到了玛瑙水母，练级一下就进化我的最爱毒刺水母啦，哈哈！！！接着从右边冲浪前进，一直往上走，到了天气研究所发现右边的道路被挡住了，进去天气研究所，打打杀杀KO BOSS以后，眼睛兄送给我一只飘浮泡泡。走出研究所刚刚过桥就遇到了那个神经病的小姐，可怜啊，年纪轻轻就有病……KO她以后，她给了我HM02飞天（怎么她有这么多东西？）刚走那位带墨镜的神经大叔就又来了，一堆P话滚蛋以后就可以前进了，接着到了下一个城市，道馆被什么东西挡住了进不去。于是我继续往右走，过桥的时候看到了那个BOSS的儿子，出现了一只变隐龙，打到它或者捕捉以后，他就给了我一个东西，这次可以去挑战GYM了！KO首领以后，她给了我TM40和徽章。顺便可以使用TM02飞天了。接着到下个城市，途中可以进入狩猎区。这个城市到处都是水舰队的人，SHOP门口那个神经女孩又要跟我PK，KO以后她就飞走了，这是何必呢，总是输给我，还打个不停……SHOP右边的房子里面那个老头子可以帮宠物忘记技能，往右走发现水路被挡住了，水舰队基地的入口也被挡住了。走回121号道路，在狩猎区下面冲浪到了日落山，途中那个蛋出生了，是果然宝宝，日落山里面都是幽灵系小精灵，真是够恐怖的。我上山了，途中遭到水舰队的攻击，不知道他们的BOSS抢走了什么东西，山顶的老太太也给了我一个画着火岩团标志的东西，（这老头跟老太太够厉害的，这么高也不怕空气稀薄啊！）接着我骑着盔甲鸟飞到了那个做缆车的地方，做缆车上去，然后从山上往下走，突然大地震动了一下，不晓得是什么，我寻寻觅觅的找到了一个山洞，进去了，原来是火岩团的基地，洞内遇敌率高，且都是LV25以上的岩石系，火系的小精灵，另外有会自爆的隆隆石，30级，出现几率也瞒高的，建议带上水系小精灵。 火岩团人数众多，基本上使用：土狼犬，大狼犬，呆火驼，喷火驼，超音蝠等，自己决定要带上什么精灵吧！到了最里面，火岩团的BOSS唤醒了固拉多，但是它逃掉了，BOSS于是跟我战斗，BOSS使用的都是最终进化的：大狼犬，喷火驼，叉子蝠 ，KO他以后，他就逃走了，我也从他右边的洞口出去了。接着我飞回了那个有潜艇的海滨城市（有个博物馆和港口的那个城市），来到精灵中心东北部，看到记者正在采访那个博物馆的馆长，记者离开以后，突然听到水舰队的人讲话，进屋以后发现潜艇被抢走了，追！第[4]回复：我又飞回了那个大海边的城市，往右冲浪到了水舰队的基地，在里面发现4个球，其中两个是顽皮弹，另外两个分别是大师球和金珠（纯金制造，能卖高价！）到了最里面，被一个人拦住了，战斗以后潜艇开走了，残念，出去吧！这时候我发现挡住海路的人没有了，于是冲浪前进，到了下一个城市，在这里依然可以看到那个墨镜大叔，在火箭中心可以看到那个给你喷雾器赶走变隐龙的人，这里有GYM于是我整理一番就去挑战了。里面都是2VS2的战斗，且都使用超能力系，一开始选择火稚鸡的朋友注意了，这里的Leaders是两人，2VS2的战斗，KO她们以后得到徽章和TM04就可以前进了。往火箭中心走，发现了火岩团的人，进去战斗，到了2楼会看到那个给我喷雾器找出变隐龙的大哥，他会跟我一起战斗，我选择了3只我的小精灵，他也用三只，结束战斗以后他们全部都离开了，我来到了这个城市左上角的房子（那个男孩的家）他给了我HM08潜水，给水系小精灵装上以后，就潜水往127号海路前进了。在一个洞口进入，一路打打杀杀走到最里面，发现盖欧卡，这时候水舰队BOSS又来了，他使用大狼犬，叉子蝠，利牙鲨，我把他KO以后，他唤醒了盖欧卡，盖欧卡突然消失了，这时候火岩团的人也来了，然后他们把我带到了海上，外面时而阳光明媚，时而电闪雷鸣，他们离开以后，那个男孩也来了，这时候我决定去下一个城市。在126号有水草的地方潜水，在一个洞口进入了下一个城市。刚刚浮上来就发现盖欧卡和固拉多在大战着。大家都在观看他们战斗，那个男孩带我到了觉醒寺，我进去了，在最里面看到一个男人，一堆P话后他就走了，我随后也出去了。然后我顺着129号道路往左冲浪来到了海上的城市，在精灵中心休息了一下以后，就向右游去，沿上边走，发现一个缺口进去以后，就看到天柱了（一定要先去精灵中心！否则找不到入口！）。这时候那个在觉醒寺碰到的男人也来了，大地也震动了一下。阳光，雷雨就开始交错了，到了天柱顶上，我看到一个绿色的生物，烈空坐，它醒了，不会吃掉我吧？5555 还好它飞走了。我也飞回了那个盖欧卡和固拉多战斗的城市，看到它们还在打，真厉害啊，这时候，天上的乌云破出了一个缺口，一道绿色的光芒照射了下来，烈空坐出现了，来的比我还迟……它平息了两个神兽的战斗以后就飞走了，天气也恢复了正常。好累啊……我跟那个水舰队的BOSS说了几句悄悄话后他就离开了，那个堵在GYM门口的男人给了我HM07攀瀑布以后就乖乖的走开了，挑战道馆！进去以后我发现那Gym Leader的样子……什么吗……根本就是门外那两人的和体……汗，我用了点小计量KO了他的前4只以后，想不到他的王牌是刺龙王（我好像要！可以拿我的刺尾虫跟你的刺龙王交换吗？）他的刺龙王会睡觉，且携带睡醒果，不过还是小菜一叠，KO以后，BOSS乖乖的给了我徽章和TM03。俺有了8个徽章了，决定挑战四大天王，从129号道路往右游去，看到了瀑布，于是使用攀瀑布上去以后，在精灵中心就看到那个墨镜大叔…………几句话以后他又离开了，大叔，您有病啊？不管他，我进去了冠军之路，（请带上工具小精灵，闪光，推石，碎石，攀瀑布等都会用到的。否则一会遇到挡路的，前进不了就得出来，出来，不要怪我没告诉你……）刚进去那个让我教给他抓精灵的营养不良的小子就来了，他决定跟我比试一番，搞定以后继续前进。出了山洞以后就到了四大天王的老巢了。准备好精灵前进吧！四大天王使用的小精灵：恶系：大狼犬，狡猾天狗，阿勃索鲁，铁螯龙虾，梦歌奈亚 （建议用格斗系）幽灵系：夜巨人，诅咒娃娃，夜巨人，诅咒娃娃，勾魂眼 （建议用恶系或幽灵系）冰系：海魔狮，帝牙海狮，冰鬼护，海魔狮，冰鬼护 （建议用格斗系）龙系：甲壳龙，沙漠蜻蜓，七夕青鸟，刺龙王，暴蝾螈 （建议用龙系）最后的冠军想不到居然是那个在觉醒洞遇到的男人冠军：吼鲸王，毒刺水母，乐天河童，鲶鱼王，美纳斯，暴鲤龙。打败他以后，那个神经女孩就来了，随后他爸爸也来了，一大堆废话之后，我就进入了里面的冠军房间，我成了新的冠军！！3神柱：即193，194，195三个机器人的抓法：(1).先到124与126之间的水路，找能潜水的地方潜下去，然后在水草中遇敌~会遇到179号的鱼~抓之~~~(2).同样地点（别潜水），在水面上垂钓~能钓到99号的鱼~抓之后将其练至40级进化成鲸鱼(3).到132号水路~然后顺着浪往左边滑至134号水路（位置比较靠南），有一个洞能往下潜~，潜入后走入深处发现奇怪代码，在代码所在处浮出，然后走到最上面的代码前，在正上方靠右一格的位置对墙壁使用挖洞（28号技能），然后将179号的鱼放在出战位置，把99号进化后的鲸鱼放在最后，再进入，到最上方的石板中间调查，会有事件发生，接下来就可以去世界各处有六个岩石包围的岩石中抓193，194，195号。193号：在沙漠南边，如果发生上述事件会发现中间的岩石开了个洞，进入后在正上方的石板前，往右走2格，再往下走2格，然后使用怪力技能，接下来就能进入捕抓了194号：在105号水路靠左边一些，同上进入后，调查正上方的石板后，在原地不动2分钟左右，就能进入捕抓了195号：在120号靠西南一些的地方，进入后，在洞的正中央使用飞天，接着就可进入捕抓神兽是红蓝水督，在大陆随机遇到

瑷尔博士是一个国产的护肤品牌，是近几年火起来的一个品牌，瑷尔博士德护肤品主要是以补水为主，受到不少女性朋友的喜爱，但是还是有很多人不知道瑷尔博士这个品牌，对它还比较陌生。那么瑷尔博士属于什么档次、是微商吗？瑷尔博士不是微商产品，而是福瑞达旗下的一个产品，福瑞达是全球最大的玻尿酸供应商，所以他的品质就可想而知了。 瑷尔博士属于中端档次，是国产品牌。Dr.Alva瑷尔博士产品最大的特点就是保湿补水，而且很多产品都是透明质地的。Dr.Alva瑷尔博士是山东福瑞达生物工程有限公司旗下品牌 ，隶属于山东福瑞达医药集团 ，由美国福瑞达国际有限公司与山东省商业厅药学科学院于1992年合资创办。它以玻尿酸(透明质酸)智能生物保湿为核心科技，主要从事于化妆品相关的研发、生产和销售 。 瑷尔博士虽然档次不高，但是产品的研发非常有保障，而且产品的品质并不输大牌品牌，对于敏感肌的朋友来说也是十分友好的，所以喜欢国货品牌或者喜欢保湿补水功效的朋友可以试一试瑷尔博士的产品。

应用寡核苷酸探针检测甘薯基因组中 NB S与 LRR 序列数目 屈满义 , 查向东 ,王钰 ,杨金环 , 蒋琳 ()230039 安徽大学生命科学学院 安徽省生态工程不生物技术重点实验室 ,合肥 摘 要 :以含编码 NB S及 LRR 结构域序列的 PCR 扩增产物作标准对照 ,根据 P2LOO P模体及 LRR 结构域氨基酸 序列设计寡核苷酸探针 ,应用 Sou the rn杂交定量检测甘薯基因组中 NB S不 LRR 序列的拷贝数目 。结果表明 ,甘薯 基因组中存在多个拷贝的 NB S不 LRR 编码序列 ,经计算刜步获得了其在基因组中的拷贝数目 ,为揭示甘薯抗病分 子机制及植物抗病分子育种打下基础 。 关键词 :甘薯 ; NB S2LRR;寡核苷酸探针 ; Sou the rn杂交 ( ) 文章编号 : 1008 - 9632 200902 - 0011 - 04 中图分类号 : Q94312 文献标识码 : A 寡核苷酸探针是指利用 15～50 bp 核苷酸片段制备的 1 材料与方法 探针 ,因序列长度较小 ,寡核苷酸探针常用于检测小片段 111 植物材料及生化试剂 实验材料选用甘薯高抗茎线[ 1 ] 的 DNA 。应用寡核苷酸探针进行 Sou the rn 杂交 , 避免 虫品种 AB94078 21,由徐 了双链 DNA 探针在杂交中自我复性 ,提高了杂交效率丏 州农科所甘薯研究中心 、安徽省农业科学院提供 。限制性[ 2 ] 检测特异性强 。通过测定基因组 DNA 杂交信号的强 内切酶购自 TaKaR a 公司 ; 琼脂糖购自 OXO ID 公司 ; D ig 度 R andom L abe ling and D e tec tion Kit,并不标准对照的杂交信号相比较 ,可估算出某个特定 购自博士德公司 ; 尼龙 [ 3 ] 基因的拷贝数 。 膜购自 H ybond公司 。 ( ) 植物抗病基因 R gene s具有高度的保守性 , 如编码112 甘薯总 DNA 的提叏 ( 的蛋白质常具有核苷酸结合位点 N uc leo tide b ind ing site, 甘薯基因组 DNA 提叏采用改进的 CTAB 法 。 ) () 113 标准对照甘薯 NB S2LRR 类序列的克隆NB S、富含亮氨酸重复序列 L euc ine2rich rep ea ts, LRR 、 ( ) 丝氨酸 2苏氨酸激酶 Se rine 2th reon ine k ina se, STK等结构 11311 引物设计及 PCR 扩增 根据 H e 等克隆的甘薯 NB S2LRR 类抗病基因同源序 域 。NB S及 LRR 类抗病基因是 R 基因中最大的类群 ,其 () ( ) 蛋白产物含一个核苷酸结合位点 NB S和一个富含亮氨 列 GenB ank 登录号 : DQ903640 的 P2LOO P 和 GL PLA 区 [ 4 ] () 酸重复 LRR 结构域 。有关 NB S2LRR 类序列拷贝数的 序列设计上游引物 P21: GGTGGGGTTGGGAA GACA ,下游 分析 ,目前主要集中在已获得基因组全序列的植物 ,例如引物 P22: CCACGCTA GTGGCAA TCCTT。以甘薯高抗茎线 [ 5 ] 虫病品种 Zhou等 収现水稻 NB S2LRR 类序列占整个基因组的 1%AB9407821 基因组 DNA 为模板 , 利用上述引物 [ 6 ] ～2% ,而拟南芥基因组中有 149 条 NB S2LRR 类序列 。 进行 PCR 扩增 ,反应体积为 20uL ,其中包含 1 ×PCR B uff2 甘薯为同源多倍体 ,基因组较大 ,其基因组全序列尚未获 e r, 2mmo l /L M gC l, dN TP10m mo l /L , 上 、下 游 引 物 各2 μ 3mo l /L ,模板 DNA30 ～50 ng, 115U Taq 酶 ,反应在 Epp en2得 ,复杂的遗传背景为在分子水平研究甘薯抗病机制带来 [ 7 ] do rf 5331 型 PCR 仪上进行 。扩增程序为 : 94? 2m in, 1 个 了一定的困难 。本研究应用寡核苷酸探针对甘薯高抗 茎线虫病品种 AB94078 21 基 因 组 DNA 进 行 Sou the rn 杂 循环 ; 94 ? 40 s, 55 ? 50 s, 72 ? 90 s, 30 个循环 ; 72? 5m in; 4?保存 。交 ,检测基因组中 NB S及 LRR

细胞工程论文 　　细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。下面是我为大家整理的细胞工程论文，欢迎阅读。 　　 【摘要】 目的制作去细胞肌肉组织工程支架，并检测其与人羊膜上皮细胞的生物相容性。方法 采用TNT和十二烷基磺酸钠结合的化学萃取方法制作去细胞肌肉组织工程支架，冰冻切片观察其结构。将人羊膜上皮细胞种入支架培养7 d后，用免疫组化检测羊膜上皮细胞的增殖活性、NT3及BDNF的表达,扫描电子显微镜观察其超微结构。结果 支架中细胞去除完全，其主要结构为平行排列的管状结构。细胞外基质的主要成分弹性纤维和胶原纤维保持完好。羊膜上皮细胞在支架里有增殖活性，并呈现NT3、BDNF免疫反应阳性。扫描电镜显示，羊膜上皮细胞在支架中分布均匀，生长良好。结论 成功的制作了去细胞肌肉组织工程支架，其与人羊膜上皮细胞有良好的相容性。 　　 【关键词】 去细胞肌肉;人羊膜上皮细胞;生物相容性 　　近年来组织工程研究的重要进展之一就是采用自体或异体移植物制作天然生物降解材料的组织工程支架。其中去细胞移植物与机体有良好的生物相容性。去细胞肌肉支架可作为生物工程支架支持神经细胞轴突再生。Mligiliche等〔1〕把去细胞肌肉移植入大鼠坐骨神经缺损处,4 w后发现有大量神经轴突长入去细胞肌肉支架中。由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限，去细胞肌肉支架要发挥更大的作用往往需要向支架中植入种子细胞〔2，3〕。研究表明羊膜上皮细胞可分泌多种神经因子〔4，5〕，促进神经元轴突的生长，是一种良好的治疗神经系统疾病的种子细胞。本研究利用化学去细胞的方法制成去细胞肌肉支架，并把羊膜上皮细胞种入去细胞肌肉支架内，探究两者的相容性，为开展组织工程治疗神经系统方面的疾病提供新的途径。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 Wistar 大鼠由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。 　　1.1.2 试剂 IMDM培养基及小牛血清由Hyclone 公司提供。5′溴尿嘧啶核苷(BrdU) 及BrdU 单克隆抗体购自Neomarker公司;神经营养素(NT)3,脑源性神经营养因子(BDNF)兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，SABC免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。人羊膜上皮细胞株为本实验室保存。 　　1.2 方法 　　1.2.1 去细胞肌肉支架的制备 参考 Brown等〔6〕去细胞膀胱的制作方法制备去细胞肌肉支架，简述如下：取Wistar大鼠腹锯肌，放入蒸馏水中，在摇床中以37℃、50 r/min摇48 h后,转入3%的TritonX100溶液,摇床中37℃、50 r/min摇48 h。然后放入蒸馏水中，摇床37℃、50 r/min摇48 h。换成1% SDS溶液，摇床37℃，50 r/min摇48 h。PBS洗24 h。PBS中4℃保存备用。 　　1.2.2 支架形态结构的观察及成分鉴定 肉眼观察去细胞肌肉的形态。去细胞肌肉用4%多聚甲醛PBS固定1 h，5%蔗糖90 min，15%蔗糖90 min，30%蔗糖过夜以梯度脱水，OCT包埋，冷丙酮速冻，之后放入-70℃冰箱保存。恒冷箱切片机切片，HE 染色，观察其内部结构。此外对切片进行Van Gienson(VG)染色和 Weigert染色(VG+ET染色)检测支架的细胞外基质成分。 　　1.2.3 人羊膜上皮细胞的培养 人羊膜上皮细胞在DMEM培养液中(含10%胎牛血清，100 U/ml青霉素，100 mg/ml链霉素，200 μg/ml的谷氨酰胺)，37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，待单层培养细胞生长至80%汇合后，传代培养。 　　1.2.4 人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架相容性的鉴定 　　1.2.4.1 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合，弃去培养液，0.25%胰蛋白酶消化，当胞体回缩，细胞间隙变宽时，用血清终止消化，反复轻吹瓶壁细胞，制成单细胞悬液于离心管中，1 000 r/min，离心3 min。用DMEM重悬细胞。用1 ml注射器吸入细胞悬液，以2×106/ml 密度注入去细胞肌肉支架中分装至24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，培养1 w。掺入Brdu(终浓度为10 mg/L)，继续培养1 d后，恒冷箱切片机切片(方法同前)。切片经PBS 洗后，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶10 min，血清封闭20 min;一抗用BrdU(1∶1 000稀释)单克隆抗体，BDNF和NT3多克隆抗体(1∶100稀释)4℃孵育过夜，PBS 洗后，二抗37℃孵育30 min，PBS 洗后，SABC37℃孵育30 min，DAB显色。光镜下观察。 　　1.2.4.2 扫描电子显微镜鉴定羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架上的生长情况 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合时，用上述方法消化下来后，把羊膜上皮细胞种植到去细胞肌肉支架中，放在24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养7 d后，用2%戊二醛固定后，梯度乙醇脱水，CO2临界点干燥，镀膜，采用扫描电子显微镜观察并拍照。 　　 2 结 果 　　2.1 支架的组织结构与成分 去细胞肌肉外观呈乳白色,半透明,质地柔软。从大体上看，肌肉去细胞前后整体大小与形状无显著变化。支架纵切面的HE染色观察可见骨骼肌细胞成分消失,而纤维网架结构保持完整，支架内主要为平行管道。VG+ET染色证明支架成分主要为胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质成分，胶原纤维为红色波浪状结构，弹性纤维为蓝色丝状结构，见图1。 　　2.2 羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架的兼容性 见图2，HE染色显示人羊膜上皮细胞在支架中生长良好，分布均匀(图 　　图1 去细胞肌肉支架大体与组织切片染色 　　图2 去细胞肌肉支架的病理图片2A)。免疫组化染色显示，BrdU阳性细胞数目多，提示支架中的人羊膜上皮细胞有增殖能力(图2B)。抗NT3和BDNF染色显示，支架中的人羊膜上皮细胞含有NT3、BDNF阳性颗粒，呈棕褐色分布在细胞质中(图2C，2D)。JSM5600LV扫描电子显微镜显示，在支架内部分布有大量细胞，细胞在支架中分布比较均匀，生长状态良好(图2E)。 　　 3 讨 论 　　理想的支架材料应与细胞外基质类似，与活体细胞有良好的生物相容性〔7，8〕。去细胞肌肉作为治疗神经损伤的生物工程支架材料有如下优势：(1)去细胞肌肉的细胞外基质成分对组织细胞的"迁移、黏附、生长代谢都有重要作用，研究表明再生的轴突可以很好的黏附在去细胞肌肉支架上〔9〕。(2)去细胞肌肉的排列结构与神经膜管类似,仅在直径上略大于神经膜管〔10〕，它们提供了轴突可生长穿过的足够空间〔9〕，该结构对于诱导神经轴突再生是十分重要的。 Fansa等比较了接种施万细胞的不同去细胞生物材料(肌肉，静脉，神经外膜)桥接缺损的外周神经的结果，发现缺乏神经膜管样结构的去细胞肌肉支架(静脉和神经外膜支架)中的再生轴突是无序和排列混乱的，而有神经膜管样结构的去细胞肌肉支架中的再生轴突是有序排列的〔11〕。这种轴突再生的有序性对神经损伤的轴突再生同样也是十分重要的。(3)去细胞肌肉引起的免疫排斥反应较小〔9，12〕。这些优势都说明去细胞肌肉可作为治疗神经损伤的理想的材料。本研究采用的制作去细胞肌肉的方法主要用来减少异种移植材料的免疫排斥反应。该方法能有效的去除脂膜和膜相关抗原以及可溶性蛋白，并能有效的保留细胞外基质成分的原始空间结构。肌细胞正常呈平行分布，其细胞外基质成分也是平行分布的，从支架纵切面的结果看支架的纤维成分也是平行排布的，VG+ET染色结果显示细胞外基质的主要成分胶原纤维和弹性纤维保持完好。这些结果进一步证实此方法可成功制备去细胞肌肉支架。 　　由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限〔13〕，去细胞肌肉的生物相容性也有待验证。本研究用人羊膜上皮细胞作为种子细胞种入去细胞肌肉支架以探讨其相容性。研究表明，羊膜上皮细胞中含有多种生物活性因子，包括黏蛋白、转移生长因子、前列腺素E、表皮生长因子样物质,IL1，IL8 等因子，另外，还可分泌BDNF和NT3等重要的神经营养因子〔4〕。其中层黏蛋白、BDNF和NT3等生物活性因子对神经损伤的治疗具有十分重要的作用。羊膜上皮细胞可作为一种较理想的种子细胞，与去细胞肌肉支架结合可能成为治疗神经系统疾病的一个理想的组织工程材料。本实验观察到人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中分布均匀，抗BrdU、BDNF及NT3免疫组化显示去细胞肌肉支架中羊膜上皮细胞有良好的增殖能力，并能表达BDNF和NT3，说明羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中保持了良好的生物学活性。以上结果一方面证明了本研究制作的去细胞肌肉支架有良好的生物相容性，另一方面为应用羊膜上皮细胞和去细胞肌肉支架结合治疗神经系统疾病提供了理论和实验基础。 　　总之 ，本研究成功制备了去细胞肌肉支架，并证实人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中能分泌重要的神经营养因子，人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体为神经缺损再生提供了基底膜、神经营养因子等种种有利因素，构成了良好的神经再生微环境，有利于使神经缺损得到较好地修复，为进一步研究羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体治疗神经损伤奠定了一定的实验基础。 　　 【参考文献】 　　1 Mligiliche N，Kitada M，Ide C.Grafting of detergentdenatured skeletal muscles provides effective conduits for extension of regenerating axons in the rat sciatic nerve〔J〕.Arch Histol Cytol，2001;64 (1):2936. 　　2 Fansa H，Keilhoff G，Forster G,et al.Acellular muscle with Schwanncell implantation：an alternative biologic nerve conduit〔J〕.J Reconstr Microsurg,1999;15(7):5317. 　　3 Gulati AK，Rai DR，Ali AM.The influence of cultured Schwann cells on regeneration through acellular basal lamina grafts〔J〕.Brain Res，1995;705(12):11824. 　　4 朱 梅，陈 东，盂晓婷，等.羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病大鼠的实验研究〔J〕.中国老年学杂志,2006;26(2)：2279. 　　5 Meng XT，Chen D，Dong ZY,et al.Enhanced neural differentiation of neural stem cells and neurite growth by amniotic epithelial cells coculture〔J〕.Cell Biol Intern，2007;31：6918. 　　6 Brown AL，BrookAllred TT，Waddell JE,et 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Neurol Res,2004;26(2):16773. 　　12 Brown AL，Farhat W，Merguerian PA,et al.22 week assessment of bladder acellular matrix as a bladder augmentation material in a porcine model〔J〕.Biomaterials,2002;23：217990. 　　13 李培建，李兵仓，胥少汀.肌基膜管移植修复脊髓缺损的实验研究〔J〕.中华创伤杂志,2001;17(9)：5258. ;

属于生物科学，是理科，反正清华生命科学学院的毕业本科生有95％到国内外知名高校（澳大利亚墨尔本大学，香港科技大学，香港大学，新加坡国立大学，加拿大多伦多大学，加拿大西蒙弗雷泽大学，德国达姆施塔特大学，瑞典乌普赛拉大学等）及研究机构深造，这种专业毕业生在生物科学，生物技术，生物信息，基础医学及管理领域都有用武之地的。然后我觉得出来一般会从事理论研究，享受国家的津贴吧去医药行业也可以的还是很有潜力的专业，需要认真努力地学必修课程有：普通生物学及试验，生物化学及试验，分子生物学及试验，细胞生物学及试验，微生物学及试验，遗传学及试验，生化与分子生物学综合试验，细胞遗传与发育生物学综合试验等,选修我就略了 补充一下: 施一公：大家好，很高兴做客新浪，希望和大家交流心得体会。 主持人：生命科学学科，听起来很绚。不过不少人对生命科学学科有误解，有人认为生命科学学科就是生物；也有很多人理解生命科学学科会包含医学等等，一定要做解剖。生命科学究竟是怎样的学科？下面又有怎样的专业和方向，您给大家介绍一下？ 施一公：我做一个简单的介绍，如果纵深出去要讲半个小时。 简单讲，现在的生命科学学科，作为一个学科群远非20年前可比。简单讲是宏观和微观的生命科学学科。宏观包括大家熟悉的生态、营养、考古、林业、农业都在生命科学的范畴之内，包括医学。微观的生命科学学科在科学前沿的研究上占了很大的成分，这里面有很多分支，像遗传工程、遗传学、发育学、细胞生物学、生物化学、生物物理、结构生物学、病毒学、流行病学等等，至少可以有几十个相对独立的研究方向，生命科学学科群是博大精深，涵盖面非常广的，一些考生和家长们心目中想象的生物不一样，大家老是想，学生物要有动物、植物，动物、植物在生命科学占的地位重要，是很小的部分，是2—4%的定位，代表不了生命科学学科的特点。 同时生命科学这个学科群的博大精深，在社会的地位远远超过单一学科起到的地位，在中国生命科学发展相对国际来讲非常的落后。中国处在独特的发展时期。比如说在美国，生命科学整个学科群相当于数学、物理、化学、天文、地理的综合，在中国很可能是这里面学科的一个，这种区别造成了老百姓和考生家长，包括考生对生命科学学科不理解和误解。 主持人：大家应该关注一些与国际接轨的学科，随着中国的不断发展，我们这个学科也会慢慢壮大，很有可能在未来一段时间日子当中，像美国这样的学科构成比例。 您刚才介绍了很多专业方向，本科生进入学科之后，什么时候会确定自己的方向？在确定方向之前，大家会学什么样的课程呢？ 施一公：非常好的问题。生命科学虽然博大精深，虽然有很多分支、研究方向，有很多小的研究学科在下面，但是核心的一些课程，是一致的。基本集中在四大课程，我们叫细胞生物学、遗传学、发育学、生物化学。无论你将来是想做微生物学、流行并学、制药还是想看病，无论你是想做小麦育种还是生态实习等等，都需要知道这4门基础课。生命科学尽管是大的学科群，但是它有自己的特点，有基本的入门必学的课程。这些课程会对每一个本科生进行精心教育的课程。我们的学生基本上是宽口径，适应力很强，从生命科学学院毕业之后，可以继续深造做科学研究，也可以去企业，去研发部门，也可以去转行，去做经管，做其他的东西。为什么要转行呢？这是生命科学的特点，跟社会、老百姓的健康、疾病太紧密了，你学了之后，好比是学了这个社会很大一块基础知识。生命科学也可以叫转行，也可以叫应用，应用性非常强，出去之后是路非常宽的学科。这一点和很多考生家长和考生想象中不太一样的地方。 主持人：有很多一些非常有名的与生命学科相关的高端的企业，他们在选拔自己领导人的时候，更加愿意用有生命科学学科背景的一些人来负责工作。他们既可以很快增长自己的管理才能，另外最关键的他是很懂业务。所以他能够提出一些很好的方式、方法。 施一公：非常对。我也想对你这个评论再说两句。 咱们中国有一个非常有意思的现象，中国在社会上流行一种说法，叫学生物难就业。实际上这里面有一定的道理，但是也有以偏概全的片面性。这个观察本身不错，学了生命科学专业的很多学生，比如说学遗传、发育的等等，如果本科毕业以后，马上就业，有时候比较难。为什么？是因为中国这个社会没有跟上世界的步伐。制药业是美国最大的产业，很多学生毕业以后，就业是很容易的。但是中国的现代制药业，已研发为主的现代制药业，一些高端的生物产业还没有完全的发展起来，中国处在快速发展时期，这时候学生就业出现了一定的问题。大家毕业学生物的不得去卖试剂，学的用不上，或者去工厂里面做简单的检测。我要说一点，第一点，在清华大学的生命科学学院或者是像清华大学这样国内一流大学的生命科学学院出来是没有就业问题的。我们的立足点并不是向社会输送低层次的简单就业人才，是向这个社会提供高层次的科学技术人才、经营管理人才、高端人才。可以说叫兴业大师，国家栋梁。这个目标是清华精英教育的一部分。 简单一点讲，清华大学生命科学学院的学生从来没有就业问题，三分之二会选择出国深造，读博士，大部分选择去了美国，这些学生毕业以后，有相当一批进入美国的主流大学当教授，做副教授，当美国人的老师。还有一些选择进入美国的大型制药企业做研发方面的专业人才。还有一些选择在生命科学拿到博士以后，去做跟生命科学相关的，比如说专利申请的律师，进入法律行业。 我顺便说一句，如果你不学生命科学的博士，而去做生命科学方面的专业的专利申请律师的话很难做，你必须有这个背景。同样的道理，因为有了生命科学博士德训练，你在美国申请读MBA，博士经历等价于你的工作经历，很多考生和家长不明白，他们总觉得，我要到美国，世界上最好的经济管理院校拿MBA，一定要本科学经济管理，这是非常错误的。而且考生、家长也没有意识到，很多家长认为，孩子一定要毕业工作几年之后，这是美国大学最好的经济管理大学的要求，MBA的学位要求。你只要学生命科学在美国读一个硕士或者是博士，学习经验被认为等价于甚至更好于你的工作经验。我们的出路非常宽。清华大学生命科学学院毕业的学生，以前叫生物系，毕业的学生有美国法律公司的合伙人，美国大医院高级的手术师，心血管科、骨科等等的临床医生。也有美国著名大学里面非常著名的教授，都是清华大学生物系现在叫生命科学学院的毕业生，他们的出路非常好，挣钱也很多，根本没有就业问题。即使留在国内三分之一，大部分选择了继续深造。像清华大学这样的精英型大学，我个人意见，如果您是学生家长或者是考生，我不希望你们在本科毕业以后匆忙就业，你可以想象，中国的发展十年以后、20年以后、30年以后，你作为学生会怎么样。面对一个高科技的社会，如果你只有本科的学士学位，够不够？我认为是不够的。在清华这样的学校如果你不利用这样的机会，把自己往前推一步，推上真正的高层次人才，太亏了。你的立足点也应该是继续深造，我们另外三分之一学生，绝大部分选择了继续深造。不继续深造的学生往往去了非常好的企业和单位，没有就业问题的。我在这儿对大家说一句，当你选择进入清华大学生命科学学院的时候，作为考生你是不会有就业问题的，作为学生家长不要担心就业问题，不要让社会的无知和偏见影响你孩子的前途。 主持人：纵观全国其他高校生命科学的学生，他们可能不会有清华大学这样的条件，对于普通学院读生命科学的同学们，你有什么意见给他们？ 施一公：你这个问题问的很好。在国内的大学层次拉的比较开，清华大学的生命科学学院，我可以很自豪得讲，我们综合科研实力好于美国最好的研究生大学，比如说哈佛、耶鲁还要差一些，但是比一些其他的学校都要强了。我们有足够的能力把我们的学生培养成和国际接轨的人才。我们有充分的实力和自信这样做。在我们国家普通的大专院校还没有这个能力，大学之大不在大楼之大，而是大师之大，在教师水平。这些学校对于学生来讲，我个人认为，就业也应该成为一个重要考虑，这个考虑在社会中得到了一个过多的强调。 我想说一点，其实这些大学出来的学生有两条出路，一条是就业，是大多数学生选择的出路，如果你选择就业，无论是选课还是实习，都要想一想怎么样跟你的就业更接轨一定。但是你千万不要排除这些学校也有相当一批学生会选择继续深造和科研，这条路是很通的。包括在我自己的实验室，我回清华已经两年半了，全职在清华。我的实验室有相当一批学生来自国内二线学校，甚至是三线学校，学校的名气不大，是省里面的大学，但是这些学生非常的努力，本着对生命科学研究的想象，很想刨根。 举一个简单的问题，大家很关心器官移植，中国每年器官移植需求量和捐献的不成比例。这个问题怎么解决，将来是生命科学基础的研究。最简单的一点就是干细胞的研究，一定会有这么一天，我们可以把普通的人体细胞通过基因，在基因水平上的一些操控，让它转化成人体干细胞，发育成成熟的器官和血管可以移植成人体。当这一天到来的时候，人类的器官移植可以一了百了的解决。 还有现在我是在参加新浪的访谈，中午打盹会睡觉，睡和醒之间是怎么区分的，这是非常简单的，大家都可以想象，什么叫睡觉？睡和醒是怎么界定的，是神经科学的问题。人的神经思维方面有很多很深奥的问题。我们现在可以把人送到地球的外轨道上，送到月球上，但是我们对自己的了解还非常的浅薄，对人自己的了解非常的浅薄。这也是为什么我们还有这么多疾病，这么多需求，有这么多社会健康的问题，这些问题都是生命科学研究的问题。这方面也反映出，无论你上哪个大学，只要你有这个追求，一定可以找到自己感兴趣的一门，研究方向也好，专业方向也好去工作和探究。生命科学的问题不仅不会枯竭，而且会越来越多。尤其在中国这样的国家，生命科学的发展远远不够，将来无论是考生还是家长，不要研究这个问题撞车的问题，只会有更多的问题。你一定可以找到自己感兴趣的一行，无论你的兴趣出自哪一方都会找到相关的，因为生命科学这个太大了。 主持人：下面我问一个很敏锐的问题，有很多的专业是需要天赋的，如果没有这个天赋的话，想从事一个学科很难，生命科学学科究竟需不需要同学们有天赋？ 另外有很多农村的同学会认为，从小没有接触过这些东西，也没有听到这种很绚的名词，我认为根本不适合学生命科学，您对于这种观点有怎样的解答？ 施一公：非常有意思的问题。 我觉得生命科学适合很多学生来谈，因为跨度很大。我自己以前在中学的时候，我的数学、物理非常强。我当时是河南省1984年全国数学联赛全国第一名，物理联赛是河南省一等奖。但是我当时有一位老师告诉我，你的数物知识强，可以在生命科学得到应用，没有问题。现在生命科学有很多分支，基因组学、蛋白质组学，一些通过计算、分析要求很强的生命科学的学科，对你的数理基础要求非常严。还有一些描述型的学科，细胞生物学对数理要求很少。我以前在美国研究生的时候，有一位博士研究生，他直到读研究生阶段了，连最基础的初中生都会学的三角函数这些东西他都不清楚，他也可以学生命学科，而且做得不错。因为生命科学有些分支非常偏重于理性思维，像我说的数理强的。另外一些特别感性，很多学生进来都可以找到自己很感兴趣的研究方向。我认为生命科学是一个门槛相对很低，但是往下学的时候，要求会逐渐提高，在提高的过程中你可以找到自己方向的学科。 和很多其他的学科不一样，比如说数学，这种思维方式的要求是一致的。像物理、工程可能偏重于逻辑思维，特别要求数理基础。生命科学不一样，不同人进去都可以找到自己的自留地，是很有吸引力的学科。 主持人：大家不用有太多的担心，太多的负担在身上。 施一公：对。施一公：简单说两句，我觉得各位马上要参加高考的高三学生，我想说的话就是首先祝福你们在高考中发挥水平，发挥出自己的优势。 第二条，希望你们认真考虑清华大学的生命科学学院，以及清华大学的医学院作为将来发展和培养的基地。 第三条，无论你们是否报考清华大学生命科学学院和医学院，无论能否录取，我都希望你们立大志。我今天没有机会跟大家讲那么多，你只要有比较远大的志向，不放弃，不太受这个社会世俗的干扰，一定能成才，希望大家走自己的路，不要轻易被社会影响，我讲这么多，谢谢大家。 主持人：如果你真的对生命科学有抱负的话，一定要坚持到底，坚持到底才会胜利，优秀才会卓越，才会在这条道路上正到人生的方向，再次感谢老师来到聊天室跟大家交流，感谢在线网友的全程关注，本次聊天到这里就结束了，谢谢大家。

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不讨厌腿毛讨厌胸毛

口袋吧

冒险,从蔓莎拉镇开始了.不论是欧奇多博士的研究所还是竞争对手的家,都座落于这个城镇中.前往至第1线路之后,欧奇多博士就会登场,乖乖的和他去研究所吧!桌子上有三个精灵球(妙蛙种子,杰尼龟和小火龙)去选择一个自己喜欢的PM(本人选择杰尼龟),博士拜托你去常磐市的友谊商店拿回托送物品,刚要离开,竞争对手前来挑战,于是,你的初次对决开始了(战斗过程中系统会有战斗提示,所以初学者不用担心)轻松获胜后,去常磐市友谊商店从店主那里得到托送物品,回来交给博士,就会得到口袋怪兽图鉴了,要离开家乡的时候,千万不要忘记去姐姐家里索取地图(城内地图)那可是冒险必备之物. 通过了1号道路后,再次来到了常磐市,如果此时前往左边的22号道路,就会再次与竞争对手战斗(依据此处战斗的胜负结果,竞争对手所拥有的pm进化形态也会发生变化),在游戏的开始阶段常磐市立体育馆是无法进入的,所以只好向北方进发了(出口处的老爷爷会教你如何进行pm捕捉,初学者好好学习一下吧!)通过了2号道路的常磐之森出入站后就来到了神秘的常磐之森,这里有不少pm训练员,可以和他们进行挑战以获取经验值和金钱,这里的路上可以拣到教程训练机,可以随时提供在线演示,十分方便.森林里生活着各种各样的昆虫系pm,如果这时有飞行系的pm在队伍中,会对战斗十分有利! 走出森林后,来到了日比市,如果认为pm等级够高的话,就去挑战日比市立体育馆的小刚吧,看过动画的人应该知道,他可是训练岩石系pm的高手.打败他以后获得了灰色徽章和39号训练机(岩石封印 100%追加效果让敌人速度下降一个等级)日比市最著名的科学博物馆是向游人开放的,只要花50元就可以进入参观,里边可以看到传说中的口袋妖怪化石镰刀盔和化石翼龙的骨骼标本,二楼还可以看到航天飞机的模型,有一对亲子虽然很想要主角身上的pm,但是因为和所有人很熟识地缘故,所以只好放弃了. 离开了日比市,来到了3号道路,这里到月见山洞之间有八位训练员登场,好好利用月见山洞入口附近的pc进行及时的恢复吧,在pc大厅左上角会有人出价500元卖秘密pm,其实就是鲤鱼王,玩过红绿蓝的朋友应该不会上他的当了吧. 一切准备就绪以后,就可以进入月见山洞了,里边同样有很多训练员等候主角的挑战,而且,还有身穿黑色衣服的火箭团挡路,经过了重重难关终于到达了山洞的另一端,这时会和考古专家对战,战胜后取得化石的其中一种(左边龟壳化石,右边甲壳化石)不管是做什么用的,先出洞再说(pm快撑不住了啊) 来到空旷的4号道路,途中会遇到两个格斗家,可以向他们学习威力强大的招式,左边的会教授百万吨拳击,右边的会教授百万吨飞踢(好怀旧的招式啊!)一定要记得让你的pm学习,之后来到了著名的水都(守护神?)——花田市,在花田市中,拥有水系pm的馆主小霞(KASUMI~~)早已经做好准备在此等候着主角的到来,将其击败后可以取得蓝色徽章和03号训练机(水波动 有20%可能性追加效果让对手进入混乱状态),在pc左边的屋子里,老人会向你交换蚊香蛙,但是你要有红唇姐(就是冰系+超能力系的那个人形pm)才可以换得,左上方民居内的老人会给你解释各属性的特点,现在如果没有兑换卷的话,自行车价格简直是天文数字(1000000元)所以不要理会,向北方继续前进. 刚到24号道路,竞争对手再度出现,他的pm非常厉害,属性也很全面,要用相克的属性招数来对付,战胜后他会送给主角类似于前作口袋导航仪的装置,主要用于和重要人物,馆主进行联络.在离开了花田市后,来到了黄金球大桥,只要打败桥上的五名挑战者并击败火箭团员(刚开始说话还挺客气,后来狐狸尾巴就露出来了)就可以获得金球最为奖励,进入25号道路后仍然有许多挑战者严阵以待,注意善用恢复道具,继续向前走会看到一个小屋,屋里面只有一只皮皮,和他对话后发现原来是个人,等他进入交换机以后操作下边的电脑就可以帮助他回复原状,为了表达谢意,他会送给你非常重要的SANDOANNU号轮船的船票.再度回到花田市,右边房子门前的警卫会让开,进入后发现屋内一片狼藉,顺着脚印从后边的洞口出去,会遇到火箭团的人(真是无恶不作,让人家怎么住啊?)好好教训他一顿以后,他留下了28号训练机(挖洞 蓄力一回合第二回合攻击,可用于逃出迷宫)逃之夭夭.继续向下方前进,就来到了5号道路,顺着坡道下来可以进入口袋育成屋,可以在这里存放你的pm进行养育,下边的山吹市检查站有检查人员暂时无法通过,所以,只好走右边的地下通道了,入口处的小女孩可以用尼多娜换取尼多兰. 通过了地下通路,来到了6号道路,这个地区有两对男女组合,要小心应付.一直向下就来到了枯叶市,在pc大厅的柜台前有人会送你远程呼叫器,这个东西可以让你反复挑战已经挑战过的训练员, 只要在此人附近使用就可以进行"挑衅"但是,每呼叫一次都要蓄电,所以,还算是有用的东西.在口袋人气俱乐部内,如能忍受会长的长篇大论,就可以从他那里拿到自行车兑换卷(还记得上边提到的天价自行车吗?现在可以免费获得了!)在海边的小屋里和钓鱼人谈话可以获得初级吊杆.由于,枯叶市修行场前边的道路被小树阻挡无法通过,所以,还是先上船再说吧!向水手出示了船票之后就可以进入SANDOANNU号了. 在船舱的客房里又很多游客会与主角对决,所以,回复自然是少不了的,一进门右数第二个房间里,和女孩说话就可以进行回复了.在底层餐厅的垃圾桶里可以找到放树果的袋子,以后可以通个这个道具存储各种果实.来到二层船长室门前和竞争对手进行第四次战斗后,进入船长室和船长说话就可以得到01号秘传机(居合斩 普通攻击技巧,可以破坏小树和草地),刚离开了SANDOANNU号,船就离去了. 让队伍里的pm学习居合斩以后,破坏枯叶市修行场前边的小树后,就可以进入挑战了,馆主是电系pm的使用者马奇士,这里要注意一下,修行场内的机关比较麻烦,那个要一个一个的按垃圾相，建议消除第一个光柱以后存个档,然后，继续像刚才那样按垃圾像。两个光柱全部关闭以后就可以进入挑战了,战胜后可以获得橘色徽章和34号训练机(电击波 必定命中对手)继续向右前进,经过11号道路,来到12号道路入口的2楼,欧基德博士德助手在此等待主角的到来,只要现在捕捉pm数量在30只以上,就可以和他换取探宝机,相信大家对这个仪器都不陌生了,它可以寻找地图上的隐藏物品,上方的男孩会那尼多利换取尼多利娜,刚要准备向12号道路前进,一只硕大的卡比兽就挡在了路的中央,阻止了前进的道路,没办法,只好原路返回. 来到11号道路,这里会看到地鼠洞穴,从这里可以回到以前经过的2号路,途中的房间找玩gba的男孩可以用凯西换取吸盘魔偶,以前被小树阻挡而无法通过的地方现在也可以通过了,下边的房子里可以拿到05号秘传机(闪光 使对手命中率下降一个等级,可以扩大黑暗中的视野范围)条件是必须要捕捉到10种不同的pm,一定要记得拿啊! 下一个目标就是曾经去过的花田市了,途中会经过日比市,科学博物馆右侧的树现在可以破坏了,从这里可以进入到博物馆的后门,和中间的学者说话后,得到秘密的琥珀(请大家记住这个物品,以后要用到的)右下角的工作人员会教授格斗系代表招式地球掷(伤害值和等级相同)几经周折,又回到了花田市,这回有了居合斩的帮助右边的通路也没有问题了(玩这个游戏记忆力不好可不行)把挡路的小树砍掉后来到9号道路,经历了众多训练员的战斗后,来到了岩山隧道旁的pc进行回复,pc中心大厅右边的白衣人会给你不 变之石,条件是要捕捉20种不同的pm,回复完毕后进入岩山隧道! 隧道内漆黑一片,只有有限的一点可视范围,幸好之前拿到了05号秘传机闪光(之前没拿到的可别怪冷羽我没提醒过你啊!这一代用完闪光以后的可是范围变为全屏了呢,方便!)洞穴里的结构比月见山洞略显复杂,主要是围绕两层转,训练员以怪兽小子和登山者为主(我的水箭龟专克这类训练家的pm)离开岩山隧道后经过10号道路来到了著名的鬼市——紫苑市. 紫苑市给人一种非常神秘感觉,座落于城市东方的灵骨塔更是云雾缭绕.由于城市并不宽阔,所以,当中也没有设立GYM,这些大概都应该要怪罪于为了慰藉口袋妖怪灵魂而兴建的口袋妖怪灵骨塔了吧?虽然总觉得散发着些许令人害怕的妖气,但是,还是阻止不了我们的调查行动.位于城中的是义工之家,听家里人讲,身为义工之家长老的富士老人,自从灵骨塔之后就行踪不明了,南方的小屋是姓名占卜师家,可以给你的pm更改姓名.为了解救老人,我闯入了灵骨塔,塔内的训练员全部是巫女,使用的是幽灵系pm,建议大家用恶系的招式对付,遇到的敌人都是呈雾状的,所以无法进行实体攻击,只有逃跑.(第五层有一个结界可以进行回复,中央取得灵符)当我即将到达最高层时,在楼梯前遇到一个30级的雾状pm,由于无法进攻也无法前进的缘故,我只好离开了灵骨塔去寻找破低的其他方法……从镇上人那里得知,要让黑雾现身只有去玉虫市取得银色保险丝盒,所以,只有先离开这里了. 从左边出城经过第8号道路,由于通往山吹市的入口有警卫看守,所以暂时从上边的地下通路走吧.(怎么总是地道战啊?)出了通路经过第7号道路来到了最繁华的玉虫市,首先利用居合斩到达玉虫市立体育馆,馆主是喜爱花草的草系pm训练员艾利卡,战胜后获得绿色徽章和19号训练机(强力抽取 命中后将伤害值的一半进行恢复)现在要去百货顶楼购入一些饮料(送礼用)给旁边的小女孩可以得到回报,送她美味之水可以得到16号训练机 精神苏打可以得到20号训练机 综合水果汁可以得到33号训练机.另外,从右边大楼后门进入的话,在顶层的房间桌子上可以拿到依布.关于本市的游戏大厅的游戏介绍,我就不再做文章了(请各位会员期待以后的详解吧!)大厅右边壁画前有个火箭团员形迹可疑,和他说话居然大打出手,将其击败后调查壁画,发现右边出现楼梯,这里应该就是火箭团的地下指挥部了. 火箭团的地下指挥部一共分为四个场景,有两个场景都会出现传送带机关,要先看好传送路径以后在去踩,千万不要太心急,因为这样会更加麻烦的.既然是火箭团的基地,训练员肯定是一水的团员了,轻松的来到B4F,击败左上方房间内的团员以后,他会交给你电梯钥匙,进入电梯(每层的右下方红门)使用电梯要是以后就可以进行楼层选择了,来到B4F,门口有两个团员要一一击败门才会开放,里边坐在沙发上的就是火箭团的魔王——萨克奇,他的pm是大岩蛇 铁甲犀牛和袋熊,击败他以后可以拿到银色透镜(还记得这个东西吗?它就是可以破除灵骨塔内黑雾的关键道具)现在可以顺原路返回紫苑市了. 再度进入神秘的灵骨塔,由于有了银色透镜的帮助,这下就可以看清黑雾的真正身份了,原来是一只30级的格拉格拉(它是无法进行捕捉的)击败它以后进入塔顶,原来富士老人是被火箭团绑架的,连续击败3个团员后解救老人,作为回报富士老人会把自己珍藏的口袋妖怪之笛送给主角,他可以唤醒沉睡的卡比兽,这下又有很多未知地带可以到达了. 由于游戏里一共有两只卡比兽阻挡的道路,所以,下面我将分别写出两条线路的攻略: 线路1:从紫苑市左边通过第8号道路的地下通路来到玉虫市左边的16号道路处唤醒卡比兽(这种罕见的pm一定要捉啊!)通过居合斩砍断小树以后到达左边的民家,和小女孩对话可以得到02号秘传机(飞天 第一回合消失第二回合攻击,可以到达以前去过得城市)快让你的飞行系学习吧,这个可是非常方便的技能!在通过自行车道入口大楼时别忘了和二楼的博士助手对话,如果此时你的pm种类已经到达40种以上时,他会送给你金币护身符(和训练家战斗后金钱获得2倍,就是红蓝宝石版通关后妈妈送的东西啦!)出大楼以后来到自行车专用下坡道17和18号道路,如果之前没有取得自行车的话,是无法进入的.顺利滑行至石竹市入口大楼(左侧),二楼的黄发男孩会用大舌头换取哥达鸭,出大楼进入石竹市. 线路2:利用飞天回到枯叶市,通过右边的11号道路入口大楼(如果之前没有得到探宝器的现在可以到二楼取得,不要告诉我现在还没有捕捉到30种pm)出大楼来到12号道路,同样方法击败(捕捉)挡路的卡比兽,第12号道路是垂钓者的聚集之处,水系训练员很多.向北方走又可以回到紫苑市,向南方前进会看见一间小屋和屋内渔夫的儿子说话可以得到中级钓杆,继续向下走会来到13号道路,这里地形较为复杂,由众多栅栏组成,由于下面还要经过训练员区,所以建议做好回复准备以后再向下前进,经过了13 14和15号道路的漫长旅途之后,终于到达了石竹市入口大楼(右侧)二楼同样可以找到博士的助手(分身?)取得学习机(老玩家应该不陌生吧?就是队伍中的pm不战斗一样可以分配到经验值和努力值的好东西)要求是要收集50种不同的pm,出大楼进入石竹市. 进入石竹市后,首先要去石竹市立体育馆和使用毒系pm的馆主强进行对决,体育馆内有很多隐形的墙壁,只要多走走就可以到达馆主所在的位置了,击败强以后可以获得爱心徽章和06号训练机(猛毒 使对手进入中毒状态,毒伤害随回合数增加而提升)找pc左边的屋子里的人,可以让你的pm忘记之前所学的一种招数(对于秘传机招式无法覆盖的,现在可以直接消除了)右边的第二个屋子可以得到高级钓杆,第一个屋子的园长会要你帮助他找丢失在狩猎区的金色假牙.为了可以得到奖励,只有向位于北方狩猎区前进了, 花费300元可以得到30个狩猎球,而且有步数限制(600步),难度也是很大的,在区域3的训练所中可以得到03号秘传机(乘浪 攻击技巧,可以在水上移动)学会以后从下边的水池游过去,就能在草丛中找到金色假牙了,回去交给老人可以得到04号秘传机(怪力 攻击技巧,可以推动怪石)右边刚才不能推动的石头现在可以了,取得神奇糖果(耶～～好几颗了!) 通往山吹市的入口(四个)都有警员把守,从他们的说话态度来分析,这几位警员大概都非常渴,所以先飞回玉虫市,到百货大楼右边的高层建筑第一层找老奶奶要好喝的饮料(千万不要买百货大楼顶层自动贩卖机里的饮料,那三种他们不喝的),把饮料交给其中一个入口的警员之后四个入口都可以通行了,进入山吹市,城内看来已经被火箭团占领了,山吹市立体育馆的门有团员把守暂时无法通过,先去挑战左边的格斗道场吧!击败老师之后,就能够获得格斗系pm代表艾比郎或沙瓦郎.下一个目标就是位于市中心的希鲁佛公司总部,这座大楼一共有11层,内部很多地方由传送点构成,首先在第5层下方拿到钥匙卡,现在可以打开一切封闭的门了,9楼左下有个房间的女孩可以进行pm回复,从3楼中央的传送点可以传送到7楼左上的封闭房间,竞争对手在这里等候着主角的到来,战胜他之后从下边的传送点来到最高层,这里要挑战的是企图侵占希鲁佛公司的萨卡奇,战胜他之后可以从会长那里获得大师球!山吹市再度恢复了平静.体育馆没有了守卫,这下就可以挑战超能力系pm的训练者娜紫美了,体育馆内全部是由传送点构成的,相信有了刚才的经利,这点困难也不算什么了吧,战胜后获得圆月徽章和04号训练机(冥想 自身的特攻特防值上升一个等级) 离开山吹市,用以前学会的乘浪进入市南的19 20号水路,途中登陆孤岛——双子岛,洞内结构非常复杂,冰系pm较多遇敌几率很高,等级不够的还是不要擅自闯入了,到达一出全是岩石的地方,用怪力将其中两块顺着洞推下去,然后跳下,原来了激流也被堵住了,往前游一段,就可以看到三圣兽之一的急冻鸟(lv50)捕捉!出了双子山洞,由于前方水路不通,所以只好用飞天回到主角的家乡蔓莎拉镇了(好怀念啊～～)回家恢复一下后,向南方的21号水路前进,和众多水系训练员一一战斗之后来到了南方的小岛——红莲镇,这里的口袋妖怪研究所可以帮助你复原之前拿到的化石(一个是月见山洞二选一的化石,一个是日比博物馆取得的神秘的琥珀)交给第三个房间的研究人员吧.去调查红莲镇修行场的时候发现门是锁住的,所以只好先去口袋妖怪小屋里一探究竟.在第一层调查一个超梦的石像,启动开关后右边的铁门会交互的开放,在三楼的一个桌子上发现关于口袋妖怪超梦与梦幻的报告,最后到达地下一楼取得桌子上的秘密钥匙和下方的草系太阳光线训练机以后,到红莲镇修行场用钥匙开门后就可以挑战火系pm的使用者卡兹拉了,修行场内又很多关闭的门,要通过启动旁边的机器才可以打开,战胜卡兹拉以后可以得到火焰徽章和38号训练机(大字篝火 有10%的可能性追加烧伤效果)刚出修行场大门,就被人强制送到了陌生的第二块版图1号岛屿. 岛屿上方的山洞内可以泡温泉来恢复pm的体力,找洞内的白胡子老人说话可以得到06号秘传机(碎岩 攻击技巧,有50%的可能性追加效果让敌人的防御力下降一个等级,可以击碎岩石),由于电力问题所以此处的pc都无法存取pm,只有先去位于1号岛屿北部的孤岛一探究竟了,经过了火焰捷径来到了孤岛的山顶,三圣兽之一的火焰鸟(lv50)正在这里等候,捕捉!回到1号岛屿坐水世界号来到2号岛屿,进入一民居得知主人家的小孩去3号岛采集果实至今不知下落所以请求主角的帮助,之后发生电单车党闯入事件,北方小屋里地巫女会教授pm水系代表招式高压水枪.坐船来到3号岛屿,刚一上岛就发现单车党和岛屿居民发生了冲突,上前帮助居民,分别打败三个人之后,头目出现(使用的pm为双弹瓦斯和臭臭泥)击败后敌人撤退(此时电力全部恢复).继续往岛屿左方探索,进入果实森林,利用居合斩和乘浪来到森林最深处,找到失踪的小女孩,但是发现她根本无法行动,正在奇怪之时,突然从树丛中跳出一直素里普,将其收服以后,小女孩得救,回到1号岛屿的大型pc中心领赏(具体是什么,冷某实在没有看清,请知道的朋友告知)并且送回了红莲镇. 还差最后一枚徽章了,还记得常磐市那个关闭的体育馆吗?现在应该开放了,用飞天直接飞至常磐市,进入常磐市修行场这里的馆主就是之前那个无恶不作的火箭员团长萨卡奇,他使用的pm属于地面和毒系,战胜他以后可以得到羽毛徽章和26号训练机(地震 攻击招式,对手使用挖洞时攻击力加倍)至此,全部的八枚徽章入手,但这并不表示此游戏的终结,更加厉害的对手还在等待着主角的挑战!从常磐市左边的出口进入22号道路,再度遇到竞争对手,他的pm果然有很大的长进,尤其是妙蛙花,顺利的战胜他之后对手离去. 最关键的时刻即将到来,我来到了冠军道路,这里设立了八个检查站,只有获得全部徽章的人才可以顺利通过,进入洞穴,这里的训练员果然全部都是超强,一定要注意保存体力和pp值,这里要用怪力把石头推倒白色机关上边才可以消除阻挡的墙壁,在三楼的一处把石头推下洞穴,再跳下来用这块石头压住左边的机关,就可以到达洞口了,出去以后会看到由乱石组成的道路,只能走右边的那条路才可以到达石英高原的主楼,进入大厅后,选取自己最厉害的队伍进入挑战游戏的最终关卡——四大天王和冠军. 四大天王与冠军阵容: KANSU:lv52 白海豹 lv51 铁甲贝 lv52 胖顿 lv54 红唇姐 lv54 乘龙 SIPA:lv51 大岩蛇 lv53 艾比郎 lv53 沙瓦郎 lv56 豪力 lv54 大岩蛇 菊子:lv53(这个等级没有看清楚)耿鬼 lv54 大嘴蝠 lv56 阿柏怪 lv58 耿鬼 lv53 鬼斯通 WATORU:lv56 暴鲤龙 lv54 哈克龙 lv54 哈克龙 lv60 快龙 lv58 化石翼龙 竞争对手(怎么还来啊?每输够):lv59 比雕 lv63 妙蛙花(根据你所选的主兽) lv59 铁甲犀牛 lv57 胡迪 lv59 暴鲤龙 lv61 风速狗 终于战胜了最后的强敌,博士前来为你的pm做冠军ID登陆,竞争对手生气的跑回家去了,主角成为了新一代的冠军,故事也算是告一段落了～～ 补充: 花田洞穴进入方法 通关后,如果图鉴种类达到60以上就可以找博士换取386图鉴.然后,用飞天飞到石英高原发现四天王的挑战被暂时取消了,因为冰系天王KANSU离开了,去了桔子群岛.回到枯叶市港口坐船到1号岛屿,到大型pc大厅内找机器前边的工作人员对话,得知红蓝宝石被盗.来到原来捕捉火焰鸟的山会发生火箭团剧情,分别打败两个人之后就可以进入洞穴,再深层得到红宝石,把宝石交给工作人员,这时再去港口的时候会发现4-7号岛屿的航线开通了,在4号岛屿的冰洞找到07号秘传机(逆流而上 攻击技巧,移动中可以爬上瀑布)后爬上瀑布会看到冰系天王KANSU,帮助他打败火箭团员后可以继续向6号岛屿前进了,进入6号岛遗迹(门口用居合斩即可进入)后在深层拿到蓝宝石,但是宝石被火箭团的研究人员抢走,于是来到5号岛,发现原来锁着的火箭团基地现在可以进入了,经过传送带来到研究室,打败研究人员以后就可以夺回蓝宝石了,带着这颗宝石来到1号岛屿的pc大厅交给工作人员,就可以启动大型机器了.回到花田市,用乘浪游至左上的洞穴前,发现原来看门的人已经离开,进入洞穴会遇到很多高等级的pm,没有训练员挑战,在最深层可以捕捉lv70超梦. 金手指： 抓梦幻 337BE38E E583889C B751BDF4 95CEF4CC 用后到草丛走走就行 大师球 020257A0:XX 020257A2:63 用后到商店随便买东西，然后打开背包里第一页的最上面会出现。 8岛： 02031CF0:0002 9岛： 02031CF0:3a02 9岛里的是拼图，你要按三角形，他会跑到一边，你必须以最近的路程去。如果，你的路程是最近的话，三角形会继续移动会变红色，否则它会回到原来的位置。这个搞定后会出现 30Lv的 迪奥西斯。

必为它担心 自我修剪它 了解你的家族史 克拉克·盖勃，这位好莱坞明星，勾引女人的高手，所修剪的远不止是他的小胡子。他既修剪他的胸毛，也修剪腋毛。按照报纸上的说法：任何卷毛都无损于他完美的身体。 当今许多银屏动作明星都在学盖勃的办法，虽然一段时间以来，上蜡——这种办法就是在有毛发的地方涂上热蜡，待它们变硬以后，把它们当作夹板似的猛地揭下来，毛发随蜡一起脱落——做为一种比修剪更流行的办法。贝弗莉·希尔高级美容室承认说他们甚至可以按顾客的要求用电动剃刀剃去他的胸毛。而职业健美运动员则毫不隐讳这一事实：他们会毫不犹豫地剃去好不容易留起来的卷毛。 “毛发有两种，一种是薄薄的一层无色的绒毛，另一种是更厚一层的，更长并且带有颜色的末梢发。”设在洛杉矶的南加州大学的面部整形再造部的临床教授，贝弗利·希尔美容与整形外科研究所的合作者，医学博士托卜梅亚医生接着说：“我们有多少毛发，它们生长有多快，它们生长在什么部位，都已由我们每个人的基因所决定。” 大多数的末梢发的发酵，与头皮和眉骨上的发囊不一样，只生发出短而卷曲的毛发。毛发在脱落并被新的一根所取代之前很少有超过1一2英寸的。这也正能说明为什么——一比方说，你的胸毛无法留到能将它流到肩膀上去的长度，这也正是为什么当你头顶开始脱发变秃时，医生不会把你胸部，腹股沟或背部毛发的发囊移植到头皮上来。 修饰体毛 我们当中的大多数人并不十分在意自己的体毛，这很正常。因为谈到体毛，就不仅仅是与医学有关的问题——女人对它的看法多种多样。但是从审美的角度来看，我们至少不应让鼻孔里或者耳朵眼里的毛伸出来。同样，我们也不希望在两片眉毛中间再长出第三片来。毛发似乎正日益地在我们所希望的那些地方按要求生长。 “你会对身上有很多的体毛感到不安吗？去租一盘罗宾·威廉姆斯的视盘，注意一下他脱下衬衫时的情景，你会感到好多了。还想要采取一点什么行动吗？在从前，理发师甚至会把剃去一些体毛当作理发的一部分，然而，现在这样的事得靠我们自己来做。”纽约的一家曼纳蒂高级美容室发型部的负责人，克利斯蒂纳·格力法西这样对我们说。 格力法西还补充说：“你可以到百货商店去买装有圆拱形安全把、刀也不十分锋利的修饰剪，电动剃须刀，电动鼻毛剃刀。它们会给你帮很大的忙。” 格力法西女士建议，可以使用电动鼻毛剃刀、修饰剪来修整较长的鼻毛。至于电动剃须刀，尤其是那些没安装什么特别附件的，很合适用来剃去从耳朵眼里伸出来的毛。 至于处理耳朵边缘的毛发，我们可以接受纽约市康奈尔医学中心，纽约医院的皮肤病学家，临床教授约翰·罗曼罗博士的建议：刮掉。刮之前，先使耳朵湿润，然后在耳垂上轻轻地刮。 用电针永久性地去除毛发脱疼痛，花费昂贵，而且还很耗时。专业人士把针接到电流上，彻底地破坏毛发根。这一手术需要多次光顾，费用约需每小时60一100 美元，才能彻底破坏毛发根。大脑保持思考．思考是大脑锻炼的方式摄取大脑所需的营养：维生素b6硼、锌经常进行体育锻炼．保持血液循环通畅 自从19世纪初工业革命爆发，进入了迅猛发展，科学拯救世界的阶段以来，医学在各个方向都得到了新发展。人们研究微生物和胚胎，细菌和鸟类，孢子与猴子，几乎所有的东西，都被人们切成小薄片，放到显微镜下进行研究。 当机会出现后，人们甚至开始研究人的大脑，有一些组织如巴黎有一个尸体解剖协会就试图去检查某些杰出人士的大脑的左半球。在得到一个以后，他们就去称重量，测量体积，希望能据此考察出大脑的体积与人的智慧之间的某种关系。 他们所发现的却只不过是陈旧而不朽的事实：大的并不总是好的。拿破仑·波拿巴的侄儿拿破仑三世，有一个重达150o克的硕大的大脑，比著名诗人瓦尔特·威特曼的1282克的大脑大了17％。（在称完了之后，一位貌不惊人的美国人体测量协会的成员把威特曼的大脑掉到了地上，大脑被摔得粉碎，无法进行进一步的研究。）暴君路德维格在他厚厚的巴伐利亚头盖骨下，有一颗重达1349克重的大脑，这比著名的相对论的提出者阿尔伯特·爱因斯坦的大脑大了io％。遗憾的是，历史上也没有把亚伯拉罕·林肯的大脑体积记录下来。也许，就像一些历史学家说的那样，或者是其大脑在遭暗杀时被损失了一部分，或者是因为科学家们很尴尬地发现，如此一位有崇高声望的人，大脑竟然这么大。 这一切意味着什么呢？——根本不必妒嫉你的邻居的头盖骨！如果你给予你的大脑正确的营养，充分的思维刺激，并且你经常进行体育锻炼，那么，不论你的大脑体积是多大，它都完全可以为你高效率地工作几十年。 “人们通常总以为自己没法为自己的大脑作点什么。”马里兰州国家健康统计中心的一位记忆学研究者，《超级记忆力》的作者，心理学博士道格拉斯·赫尔曼先生说：“这是不对的。营养和别的因素能够提高记忆力以及大脑的其它机能。只要你做，就会有效果。” 人脑职能的分配 大脑是全身中枢神经的终端。它从遍布全身的神经末梢获取电流刺激，分类整理出肌体所表达的信息，然后再把信息回转给神经网络，给肌体发出指令：弯曲、打喷嚏、出汗，等等。 当然，大脑所做的远远不止是这些。它还具有一些高级功能，如语言，创造力，逻辑思维。它能储存信息（记忆）。它能理解来自眼睛的刺激，所以你能看见物体。所有这一切都是由固定在你颅骨内的这个约3磅重的“小包”来完成的。 大脑可以分成许多相互联系的部分，每一部分相应地控制身体的不同机能。大脑半球是最大的一部分，它体现人的基本特性如推理，理智。这些职能的大部分又由大脑半球的一部分，覆盖在半球外层的灰色的大脑皮层来承担，大脑皮层接受来自全身神经的信息，并直接指挥身体的运动，比如弯曲手指头，行走。这里也是理解感官刺激的地方：这里接受来自眼睛，耳朵，鼻子，舌头和皮肤的信息并分辨出颜色，声音，味道，气味和触觉。大脑皮层还能收藏记忆信息，大脑的大部分信息都储存在这里。 大脑一般有1000亿个神经元．防治年龄增长，大脑的某些机能不可避免地退化。大了延缓衰老，你要锻炼大脑（通过思考。阅读．做填字游戏等），抛入足量维生素b6，有规律地进行体育锻炼。 在大脑皮层下较深处有丘脑。这里相当于大脑的分配中心，它将各种信息按其感觉线路发送到大腿皮层的合适部位。事实上，丘脑可以说是大脑皮层的变体，但是它就像哑巴一样，举个例子说吧：它能感受疼痛，但是它无法分辨出被裁纸刀割的疼和被粗齿锯锯开的疼之间有什么区别。 在其下部更深的地方还有一个束状结构组成的末梢系统，这是我们最深藏，最秘密的感情被放置的地方。虽然末梢系统是从拉丁语中吸收进来的，原意为一个系统的周围的、末梢的界面，但实际上它还管理我们日常生活中许多活动，如消化，心跳，以及感情与行为的其它许多方面。 大脑的另外一些部分管理作为哺乳类动物所具有的一些活动。脑子控制心脏的活动，血管，呼吸系统。下丘脑位于大脑下部，控制身体的新陈代谢，体温，血糖水平，胃，性感觉。小脑安排肌肉的活动，当大脑皮层发出一个运动指令，小脑就会通知哪一块肌肉运动，该如何运动。 大脑的消耗 人类的大脑平均包含约1000亿个神经细胞，每一个神经细胞都有几个用来与别的神经细胞通讯的小分枝，叫做神经元的树突。这些树突相接触的点叫做神经元的突触，如果每一个神经细胞与10个细胞保持接触（这还是很保守的估计），那就意味着每一次联系仅在大脑的细胞内部就可以达到1万亿次接触，而在理论上，联系的可能性是无限的。 这似乎远远超过了我们一生所需要的数量。但岁月与其它因素会使它们受损失。当我们进入中年之后，我们开始失去很大数目的神经元，（神经元是一种相互之间传递信号的神经细胞）以及另外一种协助和固定神经元的神经细胞。 大脑不会产生新的神经元来取代失去的。这样一来，如果时间长了，就会逐渐形成较大的影响。我们逐步失去脑干上的神经元，而这会影响我们的运动技能。那意味着我们的运动速度放慢，失去了灵活性，行走变得困难起来。神经元也可能在大脑皮层破裂或死亡，而这会影响到我们的学习，记忆以及其它高级机能。 大脑显然试图通过在尚存的神经元之间重新加固并制造新的联系来补偿神经元的丧失。神经元丧失的速度随年龄增长而加快。这时，大脑需要更多的时间才能重新得到记忆，而且也无法像年轻时候那样快地去完成所做的事情了。 这也不是说就已判定你已老态龙钟。赫尔曼医生说，除非你患上了大脑疾病如早老性痴呆症，或经受了严重的中风，否则，你的大脑完全可以在你已进入老龄之后仍然保持高效率的工作状态。 赫尔曼医生用计算机的例子来说明这个问题：当你年轻的时候，你有一个具有“奔腾”速度的大脑，能够进行快速运算并迅速恢复记忆。上了年纪之后，也许，你的大脑更近似于一台386的计算机，它处理和储存信息已不那么快，但还是完全胜任工作。 就像超级计算机一样，大脑也需要经常的常规保养才能维持其灵敏度。以下就是关于如何保养的几点提示： 维生素会提供很大帮助维生素岛协助肌体产生神经系统的传导力，使脑细胞相互之间不断地传递信息，赫尔曼医生说。一项对38位上了年纪的德国人的研究表明，每天添加20毫克的维生素民有助于加强长时间的记忆。（维生素已每人每天正常的需要量仅2毫克，但对毫克仍处于安全范围）。有一个较好的办法：饮食的营养搭配要平衡，要包含较多的水果和蔬菜。冷冻或加工过的蔬菜有可能失去15％一70％的维生素已含量，所以最好是选择新鲜蔬菜。另外一些富含维生素见的食品有：鸡肉，鱼肉，瘦猪肉块。 肌肉与大脑协调体育锻炼会促进大脑健康。有研究表明：有规律的健身操训练，能提高你同时做不止一件事的能力，并开发你的创造力。医生们还没有完全明白为什么会这样，但他们相信由于体育锻炼增强了心血管功能，因而大脑可以从血液中获取更多的氧气和其它养分，甚至可以获取更多的血流。 使用它还是失去它当你使用大脑时，大脑皮层就屈曲了。研究者们发现：拥有大学学历并在一生中保持大脑活跃的人，比教育程度低、接受挑战较少的人多40％更长的树突。 你并不是真需要一个文凭来促进你的树突，宾夕法尼亚州立大学人类学教授，哲学博士k·握内·斯盖尔建议说，各种类型的精神活动都可以使你的脑细胞之间的联络保持旺盛，所以，你应尽可能在当地的大学参加继续教育，或者至少可以参加电视教育课程。 精神活动甚至可以帮助抵御早老性痴呆症。纽约的哥伦比亚大学的研究显示：接受过高等教育，在工作上取得了较大成绩的人，其患早老性痴呆症的机会只相当于其它人的1／3。这很可能是由于这些经常用脑的人较好地保护了突触。这就是说当早老性痴呆症袭来时，他们脑细胞之间的联络较少被中断。 保持低血压高血压可造成多种后果。大约有4o％的脑溢血与高血压有关。高血压降低思维速度，使人迟钝，损害短期记忆。最糟糕的是，一项对35位51岁一 80岁之间男性的研究显示：高血压会导致永久性的大脑结构变化以及组织损失。此项研究的参与者之一，英格兰肯特郡贝斯赖姆是家医院的精神病学家，高级讲师，医学博士德克莱恩·梅菲医生介绍说，经过一段时间之后，就会在语言、记忆、方向辨认等方面出现障碍。 权威性的建议是：每3年检查一次血压，40岁之后要两年检查一次血压。这种检查十分简单，你甚至可以每次检查身体都检查一下血压。 避免缺硼也许对有些人来说，要达到智力发达所需的仅仅只是几把花生。北达科他州的美国农业部所设的格兰德福克斯人类营养研究中心的心理学者詹姆士·朋来思如此断言。微量元素硼对于人的记忆力、注意力集中、运动技能极有好处。研究表明：每天服用3．25毫克硼的一组男性在做这三组测试时明显比食物中含棚元素较低的一组男性所得的分要高。花生中富含棚．大约每盎司花生就有o．5毫克硼。但需注意的是花生油脂含量高，热量充足。其它提供丰富的棚的食品有：梅脯，海枣，葡萄干，“已们每盎司约含0．5毫克，以及蜂蜜，每盎司有0．2毫克棚。 别忘记锌当你想到你体内的微量元素时，别忘记还有锌。这种有助记忆的元素可以提高神经元功能。虾含锌最高，每半杯1／4品脱）含有8．2毫克；烤瘦牛肉， 3盎司的一份约含5．3毫克；瘦猪肉，3盎司一份约含3．2毫克；煮干豆，每杯约1．8毫克；利马豆，每半杯0．7毫克；专家们并不提醒人们补充锌，因为体内含锌太多，会引起严重的痢疾、恶心、呕吐，甚至导致动脉硬化。 做白卷时少放点波极 碳水化合物对马拉松运动员来说必不可少，但哈佛大学的研究表明，食用含蛋白质较多的食物对短跑更为有利。40岁以上的男性如果食用由100％碳水化合物构成的冰糕，他在集中注意力，以及进行别的脑力劳动时，比食用火鸡的人，难度几乎增加了一倍。按照健康科学大学及芝加哥医学院的心理学教授波尼·j．斯普林的说法，那有可能是因为碳水化合物提高了大脑中的某一种血清，而这种血清会有催眠作用。相反地，含蛋白质更多的食物，比如火鸡、鱼、鸡肉，包含酪氨酸，这种氨基酸已被证明可以使人思维清晰，使大脑处于清醒的待命状态。 碳水化合物是任何食品里主要的热盘来源，但如果你想让你的头脑在随后几小时内保持特别清醒状态，那么可以选择蛋白疾类食品。 喝点酒：为了忘记什么的话，你做对了。 乙醇会随意杀死脑细胞，长时间后，还可以引起记忆力丧失，使肌肉丧失活动能力。从来没有人给出过“安全”的饮酒量。但最近有一个来由芬兰的研究报告指出：饮用32盎司啤酒或2盎司输萄酒或者0．5盎司烈酒，经过一段时间后，其后果将是逐步破坏脑细胞。赫尔曼医生说；合适的饮用量ail每周一杯啤酒或混合饮料几乎不会造成什么麻烦。 喝马蒂尼酒也会有点小问题，赫尔曼医生说，乙酸会影响注意力集中，所以，当你感到有少许头晕时，你就不大可能集中精神注意对话或其它细节。这也就是说第二天你可能几乎记不起这些对话和细节了。 不必服用药丸——那是愚蠢的作法 也许你在杂志广告上看到过诸如“大脑的鸡尾酒”等药丸或药粉，宣称它们可以增强你的大脑。但请注意：漂亮的药丸可能意味着一个愚蠢的错误。“我所能给你们提的最好的建议就是决不要被它们迷惑，”赫尔曼医生说，“你也许会对它们产生过敏反应，也许，它们还会干扰你所服其它药物的效果。”另外，他还说，我们其实并没有弄清楚他们所宣称的药物中所含的葡萄糖、卵磷脂、硒、氨基酸以及其它成分是否会像他们说的那样起作用。“也许几年之后会看到效果，但也可能永远不会”，他说。 我们所付＆的代价 复杂的东西往往需要付出昂贵的代价。你的大脑里有数不清的神经元在活动，事情有时候会变得很糟很糟。甚至，看起来对着头部轻轻的一击，会激起你流利地说出你已经几十年没有说过了的某一种语言。这完全是可能的，可以给你举二个例子；曾有一个已80岁的老人经受了一次脑外伤，结果，已说了70年的英语几乎都被抹去，而他竟又说起了年幼时的意大利母语。 其它疾病更为严重。脑部出现的不调症状包括有炎症如脑膜炎，或基因衰竭，或导致身体出现混乱如精神分裂症。休斯顿的贝勒医学院的脑血管专家弗朗西斯科·皮鲁佐罗博士说：“脑部特别复杂，我们对它的了解正日益加深，但仍有不少问题使我们感到困惑。我们一旦处理不好，事情常会变得很糟。” 早老性痴呆症这也属于最可怕的脑疾病中的一种。大约有4o0万美国人患有此病，其中，65岁以上的人约每10个人中就有一名，而85岁以上的人约有一半人患病。 简单说来，早老性痴呆症是由于脑细胞成百万地被杀而造成。当这样的过程历经数月或数年之后，患者明显开始丧失记忆力，逐步丧失语言能力和逻辑思维能力，身体肌能退化，最后导致死亡。这一疾病有可能延续3一5年，至今还没有听说被治愈的病例。 尽管早老性痴呆症是目前人类健康的第四大杀手，对我们而言，它仍像是一个谜。患有此病的人，在脑细胞之间交流所需的神经元传导水平上呈现出变化不定的状态。脑部组织中含铝量较高是经常发现的现象，研究者们还研究别的因素，诸如基因，脑伤，教育程度，性别等。 帕金森氏病与早老性痴呆症不同，它不影响神经功能。但它却引起严重的肌体毛病，如肌肉颤抖，行动缓慢，行走困难。帕金森氏病是由于一种叫多巴胺的传导神经细胞缺乏而引起的。使人感到欣慰的是：至少90％以上的患者都会因药物治疗而有所好转。 中风这是脑部疾病中致命的一种。美国心脏联合会估计中风者中有近4o％会死亡。这意味着每年都有57o00人以上。 医生们介绍说：中风大约有两种基本类型。第一种是由从胸部往大脑的动脉中出现的血凝块引起的。血凝块阻塞血流，阻止了氧气和其它营养物质的输送，这样脑细胞被杀死。另一种中风是因脑动脉破裂出血而引起的。这样切断了流向脑部的血流，脑细胞因得不到新鲜血液而死亡。尽管这种脑动脉破裂出血引起的中风只占中风总数的约1／5，它们却通常比由血凝块引起的中风症要致命得多。 小知识 创造力：人与动物的区别之所在 这就是爱因斯坦与猩猩，皮卡梭罗与负鼠，你与耗牛之间的区别。因为人脑，人类才具有创造力。因为动物大脑，它们才不会直立，不会说话。 并不是只有那些裁员雷帽的人、写诗的人才具有创造力和想象力。纽约市的布法罗创造力教育基金会的项目负责人威廉·谢波德说：“每个人都具有这种能力。事实上，创造力正日益变成一种生存所需的技能。你必须跟上新时代。用新方法来办事，否则，你和你的公司就会落伍。” “当然，仅仅只是坐在自己的办公桌前，并且说“噢！我的大脑，富有创造力吧！"是远远不够的。你必须知道怎样驱使自己的思维进入创造性的状态，并且学会怎样利用创造力去理解并接受新颖而独特的信息。”谢波德提到了如下的要点： 不要太挑剔一种叫做“炒主意”的办法可以促进你的创造力——无论是单独的或是处在一个集体当干。首先确定你试图解决的问题，然后开始思考解决的办法。它们并不需要被弄得很清楚，或者多么具有实际性，甚至也不需多动听；你尽管不停地提出想法并马上写下来。然后也不要试图判断这些主意是否好。只要围绕着你要解决的问题，你的思考可以随心所欲。 过了一段时间．也许10分钟，也许5分钟，停止记录。如果可能的话，你把记录下来的这些东西放到一边去一天左右，然后再回过头来仔细看看你所写的。很有可能，你解决问题的办法此刻就在眼前了。 变换一下手头的工作有时候我们过于把注意力集中在手头的工作上，大脑无法对压力作出相应的反应。如果你感到像是撞到了一堵精神上的墙，那么最好中断一下，去做另一件完全不同的事。如果你似乎无法理解某一段文字——比方说，你可以去因子里拔拔草。这样给你的大脑提供了一个在较轻松状态下仔细考虑的机会。 与你自己做个梦的约会下次当你老板看见你在“白日作梦”时，体告诉他，实际上你正在做着提高自己自觉创造力的严肃的事情。“白日作梦”，小想一会，能使你暂时回避眼前的压力，然后继续使大脑保持富于创造性的“魔力”。 “白日作梦"实际上应当受到鼓励。”谢泼德说，“你当然不应该数小时地离开工作。但拿出一小会见时间去玩味一下自己的主意，想象一下它的运用情况，将会是极其有益的。”并且，最好不要去评价你想的东西，就让思绪随意来去，留待下次再去深思。 建立新的联系我们大多数人都是按预置的思维方式去思考问题：桌子，椅子；盐，胡椒。如果你想发挥自己的创造力，那么你就要去比较那样乍一看上去没有联系的东西，法式牛排：b－52轰炸机。然后用几分钟尽最大可能罗列出你所能想象出的它们之间的联系或相似性。“这样有助于你在看问题时运用新方法，采用新角度。”谢波德说，“这能打破那种我们常常极易陷入的传统的思维方式”。 一旦作好了准备工作，就迅速转入正题。比方说你改日考虑一下公司的糖果柜台，就拿它们来与艾菲尔铁塔作个比较，或者可以去比较比方说会议室的银根，等等。列出一张单子，找出它们之间的联系，再看看哪一点值得更进一步考虑。

摘要：中小企业融资渠道主要有哪些？中小企业可以通过申请银行贷款，或是信用担保融资、民间借贷融资等方式来取得企业发展所需的资金。虽然融资的方式很多，但是中小企业资金需求不断扩大，所以融资困难仍然是制约中小企业发展的主要因素。接下来一起来了解一下中小企业融资难的原因和对策吧！一、中小企业融资渠道主要有哪些1、银行贷款企业贷款是指企业为了生产经营的需要，向银行或其他金融机构按照规定利率和期限的一种借款方式。企业的贷款主要是用来进行固定资产购建、技术改造等大额长期投资。2、信用担保融资信用担保融资主要由第三方融资机构提供，是一种民间有息贷款，也是解决中小型企业资金问题的主要途径。信用担保融资的种类有流动资金贷款担保、综合授信担保、工程项目担保等。3、民间借贷融资民间融资指的是出资人与受资人之间，在国家法定金融机构之外，以取得高额利息与取得资金使用权并支付约定利息为目的而采用民间借贷、民间票据融资、民间有价证券融资和社会集资等形式暂时改变资金使用权的金融行为。民间金融包括所有未经注册、在央行控制之外的各种金融形式。4、众筹融资众筹融资是指用团购+预购的形式，向网友募集项目资金的模式。众筹利用互联网和SNS传播的特性，让小企业对公众展示他们的创意，争取大家的关注和支持，进而获得所需要的资金援助。相对于传统的融资方式，众筹更为开放，能否获得资金也不再是由项目的商业价值作为唯一标准。只要是网友喜欢的项目，都可以通过众筹方式获得项目启动的第一笔资金，为更多小本经营或创作的人提供了无限的可能。5、互联网融资网上融资不同于传统意义上的上网融资。网上融资，是指发行主体与投资主体借助于因特网这一信息技术平台，相互找寻并配置金融资产的过程。传统意义上的上网融资，则一般是指通过中介机构的发行网络实现融资的过程。6、中小企业私募债中小企业私募债是一种便捷高效的融资方式，私募债的发行审核采取备案制，审批周期快。同时募集的资金用途相对来说比较灵活，而且期限也比银行贷款长，部分地区的中小企业私募债还可以获得政策贴息。二、中小企业融资难的原因和对策1、为什么中小企业融资难①中小企业融资难的内因：缺乏现代经营管理理念，经营风险高。中小企业的规模和信用水平低下，制约其融资能力。缺少可供担保抵押的财产，融资成本高。②中小企业融资难的外因：金融机构体系的缺陷。我国资本市场发展较晚、发育不完善且迟缓，企业通过股票市场和债券市场直接融资所占比重较小。信用担保环境在一定程度上影响着中小企业的融资。政府的政策支持力度不够是造成中小企业融资困难的重要原因。2、中小企业融资难问题的解决对策①加强中小企业自身建设应推进中小企业制度的多元化和社会化，实现治理结构合理化，全面提高中小企业自身素质。②深化改革促进中小企业融资金融机构应该积极创新金融产品和服务方式。银行应根据中小企业的实际情况，对不同的企业制定相应的贷款和审批程序。对在中小企业的融资支持中坚持有进有退的信贷政策，对财务状况好、产品有市场的企业，不能因为其规模小而不给放贷或从严审核。③扩宽中小企业的融资渠道鼓励企业加强企业内部融资力度，组建股份合作制企业。大力规范引导小额贷款企业的发展。创建直接融资模式，引导中小企业进入债市。④完善中下企业融资法律体系和制度政府和法律作为中小企业融资困境破解的有力后盾，政府应坚持财政支持的合法性、效益型、透明性，合法性是政府履行的最基本的前提，是融资法制的起码要求。

一、正确认识腐败与廉洁腐败的一般定义为：腐败就是在现代人的生活中，在百无聊赖或是孤单的时刻可以跨越现实的界限，通过网络、博客、BBS、QQ群、MSN等途径，约上一帮 “臭味相投”的陌生人，一起吃吃喝喝玩玩乐乐。腐败它已成为享受生活的代名词，网络上简称FB。另外还有贪官的腐败现象或食物腐败变质等。预防性反腐机构应当“积累和传播预防反腐的知识”。但是现在我们所要讲的腐败主要是指其在社会上的意义。近年来，大量与腐败相关的词汇出现在很多媒体和人们的视线以及人们的闲聊中，比如说：医疗腐败、交通腐败、新闻腐败、足球腐败、彩票腐败、学术腐败等等，其中医疗腐败主要是指医生乱收红包、乱收费、开大处方等不合理现象，学术腐败主要指剽窃他人学术成果，一稿多投等不良行为。廉，就要有“权是双刃剑，荣辱一挥间”、“官贪民必怨，官廉民则安”的自警。兢兢业业履职，勤勤恳恳尽责，一心为公做贡献。洁，就要有“出污泥而不染，濯清涟而不妖”、“时时勤拂拭，勿使染尘埃”的自爱。磊磊落落处世，干干净净律己，一生珍重传美名。廉洁就是说我们做人要有清清白白的行为，光明磊落的态度。二、正确面对腐败问题，加强廉洁教育大学校园往往是与世外桃源，象牙塔等词语联系在一起的，但是在市场经济的今天来自校园之外的腐败之气日益渗透到校园里来，转变或者表现成了校园腐败。（一）大学里的腐败。海德格尔说过：“人应该诗意的生活在这个地球上”，说到这，大学校园无疑是比较理想的选择，但是近几年来与高校腐败有关的案例却经常发生，严重损害了大学的形象。首先，学术腐败在大学腐败中表现得尤为明显。其次，学历造假，前一段时间在《非你莫属》这个节目中就看到一位自称留法的学生在这个舞台上因为学历造假被拆穿而直接昏倒在舞台上，可见假文凭现在是多么兴盛，居然直接出现在全国人民面前，现在世界各国不缺乏高学历的人才，但是就业市场的竞争日益激烈化，招聘方对学历的要求是很多人铤而走险，造假学历。面对的这种情况，。学校首先应该对自身负责，而各个科研机构要对文凭严格把关，同样还需要我们广大人民群众的监督。最后，职务犯罪，高校腐败案件的频频曝光让人民对其进行了关注和分析，得出其在基建、采购、招生过程中最容易产生腐败现象，针对这几个问题要求高校平常从小问题抓紧，防止引起打错，其次应加强校园中不了文化的改革更正，最后应该加强监管。（二）校园里的腐败亚文化。大学腐败亚文化的本质是存在腐败的前兆，行为有腐败的影子，有形成腐败的苗头，如果不及时的引导，进行帮助，将会导致大学生腐败。大学生腐败亚文化大致表现为：食堂浪费、复杂的关系网、学生会的经济学、生活消费攀比、诚信缺失、入党动机功利化等。学生的腐败特征与社会上真正的腐败有着明显的不同和，主要在于为急性和个体性。违纪性是部分学生区别于社会上腐败的根本标志，学生基本上属于纯消费人群，腐败行为主要获取的是非物质利益，主要为思想上的腐败，这种腐败通常没有违法，但是却是违背纪律和道德，比如上早操、上课、个人卫生等。个体性是指，学生腐败一般具有隐秘性和欺骗性，学生为了取得一个人的利益一般都是个人的活动，不需要有大量的人协助，最后也是只有少数人获得利益，他们通常通过个体实现。（三）廉洁教育的重要性。腐败行为往往发生在政治、经济和社会等各个领域。作为大学生，我们并非生活在真空中。我们自身或者家庭都会感觉到腐败的存在及其对我们的影响，我们都直接或者间接的变成了受害者。因此，理解各个领域的腐败使我们大学生与腐败做斗争的前提。应加强大学生廉洁教育，然大学生自觉与腐败作斗争。三、大学生廉洁教育的内容与形式（一）选择职业时树立正确的世界观和人生观。改革开放以来，我国政治经济都得到了很大的发展，社会相对比较宽松，这位青年尤其是受过高等教育的青年，在自己的工作中崭露头角提供了很好的机会，我们虽然不能在大范围内掌握权力，但是在工作中仍然有一定的权力，我腐败创造了道路，另一方面一方各种思想的传入，如拜金主义，享乐主义、个人主义、也影响着中国广大青年，为了防止在工作之中腐败，我们大学生应该做到正确选择自己的职业，设定道德底线，防止社会上腐败之风的侵袭。（二）坚守职业道德，正确处理个人主义与集体主义间的关系。在参加工作之后应坚守职业道德，进行廉洁的职业人生。职业道德要求我们爱岗敬业、诚实守信、办事公道、勤劳节俭、遵纪守法。防止职业腐败的出现。（三）大声对腐败说“不”。培养人才是大学的主要任务，大学的各种腐败现象一定会对人才有消极的影响，对大学公平是一种挑战，其实，不管大学教育，中等教育还是初级教育，无论哪个阶段，亦或是在社会中我们应该鼓足勇气坚定地对腐败说“不”。（四）坚持“慎独”思想。作为当代大学生，我们应该从自身做起、从现在做起，塑造廉洁的职业人生。“慎独”一次处于我国的《中庸》，意思是在无人监督的情况下，仍然能够坚持道德信念，自觉按照道德规范的要求去做事的一种道德品质和道德境界。做事先做人，做人先修身。我们要廉洁自律，在对待腐败的问题上应该如履薄冰，进行经常性的自重，自省。修身，还是廉洁社会的基础。所谓基础，即是最初的东西。修身时人自我完善的一种最有效，最经济，也是最为持久的途径，但是修身也不是万能的，它不能保证每一个人的一生都不会改变自己的价值观，所以总有一些立场不坚定的人不能抵制住金钱或者利益的诱惑陷入腐败的泥潭，从而不能自拔。大学生不是生活在真空之中，多少会受到不良社会风气的影响，为了使我们不被拜金主义、享乐主义等思想的侵蚀，在校期间应加强廉洁教育，防范于未然，有效抵制社会转型期以及市场经济的负面影响。

客户忠诚创造竞争优势。客户忠诚是制胜市场、实现企业健康发展的重要保证。当我们进行企业的市场营销工作时，我们一定要以顾客为中心，始终抱着“一切从顾客出发，一切为顾客着想，一切对顾客负责，一切让顾客满意”的思想，才能最大化地利用好终端顾客这个有效资源。那么如何提高终端顾客的满意度与忠诚度，我认为，应从以下几个方面开展：1、要提供充足的货源。货源是和谐市场，和谐客我关系的前提。也是提高终端顾客忠诚度的根本。没有货源，你的服务做得再好、再精、再细，所起的作用也不是太大。因为他们是很现实的商人，商人的主要目的就是赢利。没有产品，利从何来，没有利益的牵制，永远的客户忠诚也许只是我们一厢情愿的口号而已。所以，在日常的营销工作中要想方设法地去组织货源，满足市场需求。为营造一个和谐的大市场而“保驾护航”。　　2、做好与顾客的沟通。只有进行有效的沟通，才能达到相互融洽、信息互通，资源共享的目的。世界著名的营销大师菲利普·科特勒说过：在信息唾手可得的今天，营销传播的新趋势是——精准营销。精准营销就是需要更精准、可衡量和高投资回报的营销沟通。可见沟通在日常营销工作中的重要性。而客户经理作为营销一线的“排头兵”，在日常的工作中和终端顾客进行有效沟通，是日常市场走访的一项重要工作内容。通过和终端顾客的接触，可以从沟通中发现客户的需求信息、市场信息，并且可以及时地解决终端顾客在经营工作中所遇到的困难、最大限度地弥补工作中的不足，从而达到客户满意、市场和谐的目的。3、满足顾客需求。在日常工作中，影响客我关系和谐的最大障碍就是好多时候终端顾客需求得不到满足，他们的意见得不到重视所带来的结果。因此，客户经理在市场的走访工作中，要多方了解终端顾客对服务、品牌的评价，了解他们对经营、市场的反映，了解片区的产品消费动态，最大限度地满足客户需求，尽最大能力来解决终端顾客在日常经营工作中所面临的实际困难，及时反馈市场信息，而不是怕麻烦、图省事、找借口推委或置之不理。4、提供个性化的服务。在现代的营销模式中，把产品销售出去并不是最终的目的，因为这样深化不了客户对产品及服务的依赖性与忠诚度。而为客户提供个性化的服务是企业营销管理中一项重要内容，也是企业在新的市场形势下竞争优势的重要因素。从顾客满意到顾客忠诚。1、顾客满意与忠诚。所谓“顾客满意”是指产品或服务符合了顾客的期望，顾客感到满意；“顾客忠诚”则是指顾客在满意的基础上，进一步对某品牌或企业作出长期购买的承诺，是顾客一种意识和行为的结合。顾客忠诚度如同满意度那样，是对顾客忠诚程度的定量描述。通过对顾客再次购买行为，宣传推荐产品和品牌认同的调查，可以掌握顾客忠诚度的水准。顾客忠诚度的数据不仅能反映企业在市场上忠诚顾客群的情况，也是企业用于改进的重要讯息。2、顾客满意与忠诚的关系。顾客满意和顾客忠诚的区别在于前者是顾客购买了产品或服务感到满意后，不一定会再次购买。换句话说，顾客满意一般是指一次性的；然而如果顾客对某品牌或企业由满意发展到忠诚后，他会再次购买同一品牌产品。顾客满意和顾客忠诚相互之间又有着密切的联系。企业了解顾客的需求和期望，满足顾客的期望，就能达到顾客的满意；但是必须进一步的让顾客满意，包括了解并满足顾客潜在的需求，才有可能赢得顾客的忠诚。对于企业来说，达到顾客满意是基本任务，否则产品是卖不出去的，而获得顾客的忠诚是叁与竞争取胜的保证。忠诚顾客的再次购买行为和对产品的宣传推荐，使企业拥有一个稳定的顾客群，而且能提高企业的市场占有率，降低销售成本，与企业的效益有直接的关系。因此如何达成让顾客超期望的满意，由满意到非常满意，获得顾客忠诚于产品品牌成为市场竞争的新焦点，已经成为企业经营竞争取胜的关键。3、顾客忠诚的表现与作用。顾客忠诚表现的特征主要有以下四点：①再次或大量地购买企业该品牌的产品或服务；②主动地向亲朋好友和周围的人员推荐该品牌产品或服务；③几乎没有选择其它品牌产品或服务的念头，能抵制其它品牌的促销诱惑；④发现该品牌产品或服务的某些缺陷，能以谅解的心情主动向企业反馈讯息，求得解决，而且不影响再次购买。

是的，干部选拔任用，必须经过民主推荐提出考察对象，民主推荐包括会议投票推荐和个别谈话推荐，民主推荐的结果在一年内有效。考察是由组织人事部按照干部管理权限进行严格考察。考察程序为：1、组织考察组，制定考察工作方案；2、同考察对象所在单位或者所在单位的主要领导成员就考察工作方案沟通情况，征求意见；3、根据考察对象的不同情况，通过适当方式在一定范围内发布干部考察预告；4、采取个别谈话、发放征求意见表、民主测评、实地考察、查阅资料、专项调查、同考察对象面谈等方法，广泛深入地了解情况；5、综合分析考察情况，同考察对象呈报单位或者所在单位的党委（党组）主要领导成员交换意见；6、考察组根据考察情况，研究提出领导班子调整的初步方案，向派出考察组的组织（人事）部门汇报，经组织（人事）部门集体研究提出任用建议方案，向本级党委（党组）报告。《中华人民共和国党政领导干部选拔任用工作条例》第十六条选拔任用党政领导干部，应当经过民主推荐。民主推荐包括谈话调研推荐和会议推荐，推荐结果作为选拔任用的重要参考，在一年内有效。第二十三条确定考察对象，应当根据工作需要和干部德才条件，将民主推荐与日常了解、综合分析研判以及岗位匹配度等情况综合考虑，深入分析、比较择优，防止把推荐票等同于选举票、简单以推荐票取人。

　　护士长的职责：　　1、在医院院长和主管副院长的业务指导下，根据对全院护理工作质量标准、工作计划，结合护理工作的实际情况制订护理计划，并组织实施。　　2.对复杂的护理技术或新开展的护理业务，要亲自参加实践。　　3.教育本单位的护理人员加强工作责任心，改进服务态度，认真执行医嘱、规章制度和技术操作规程，严防差错事故。　　4.经常发现和了解护理工作中存在的问题，加强医护联系。　　5.组织护理人员学习护理业务技术，并注意护士素质的培养。　　6.组织拟订护理科研计划，督促和检查计划的实施，及时总结护理经验。　　7.了解病人的病情、思想情况。督促检查护理工作，提出改进措施和意见。　　8.确定护士的轮换和临时调配。　　9.团结本部门同志、搞好相互协助。负责提出本单位人员的升、调、奖、惩意见。　　10.完成医院领导交给的其它各项工作。

团结，是由多种情感聚集在一起而产生的一种精神。团结并不只存在于志同道合的人群之中。想要成为一个团结优秀的集体，只需要我们都用真诚去面对集体中的每一个人，让这个集体里的每一个人，都感觉到心灵的温暖。学会在他人的赞赏中寻得自信，而不是狂妄自大；学会倾听他人的话语，而不是妄加评论；学会客观地看待他人的言论，而不是偏袒憎恶；学会发现他人的优点，而不是放大缺点；学会平和的对待他人的缺陷，而不是挖苦讽刺； 学会在必要的时候让步，而不是斤斤计较，正所谓“忍一时风平浪静，退一步海阔天空。” 理所当然的，彼此之间还要互相帮助，共享微笑与泪水，这样才是一个团结的集体！一个团结的集体所遇到的任何困难都会迎刃而解，因为集体拥有个人无法比拟的无穷智慧。友爱产生动力,和谐铸就辉煌。虽然我们每个人不是最优秀的，但我们在一起就可以组成一个最优秀的集体——友爱产生动力,和谐铸就辉煌，团结就是力量！一个优秀的集体，它要具备如下几个优点：成绩优秀、心理健康、勤学文明、活泼向上、团结友善。然而最重要的，就是要团结。集体是一个大家庭，我们每个人都是其中一分子。团结、互助、友爱是人生必不可少的道德品质，只有拥有这种优秀的品质，我们才能有机结合起来，担当起建设祖国的重任，社会才能和谐发展。

区别： 在数据库中，数据字典描述了一组表、视图和索引的结构定义。数据字典信息通常存放在数据库的系统表中。而表描述的是用户数据的结构。联系：数据字典描述了表的元信息，即表的结构和定义的相关信息。

　　基本农田可以建大棚。依据国土资源部、农业部联合下发的《关于进一步支持设施农业健康发展的通知》，原则上，基本农田里可以建设易于恢复、不属于设施农业的大棚（或简称为简易大棚），但不得建设属于设施农业的温室或看护房。在对设施农业规制方面，国土部、农业部《关于完善设施农用地管理有关问题的通知》要求：“各地要根据农业发展规划和土地利用规划，在保护耕地、合理利用土地的前提下，积极引导设施农业发展。设施建设应尽量利用荒山荒坡、滩涂等未利用地和低效闲置的土地，不占或少占耕地，严禁占用基本农田。确需占用耕地的，也应尽量占用劣质耕地，避免滥占优质耕地，同时通过工程、技术等措施，尽量减少对耕作层的破坏。”是否将大棚等农业设施所占土地认定为设施农用地，应当依其是否固化、对土地耕作利用是否产生影响等为标准进行判断。一般而言，不影响土地耕作，仅用于辅助农业种植的简易大棚不属于设施农业。但如果属于“工厂化作物栽培中有钢架结构的玻璃或PC板连栋温室”或是“育种育苗场所、简易的生产看护房”等已固化附着于土地之上，不易复垦，且对土地耕作利用产生影响的农业设施，则应当认定为设施农业，要严格按上述通知执行。

施工快，造价低，自重轻

目的不同纳税评估主要是通过对纳税人当期税源真实性的评估，提高纳税人依法履行纳税义务的能力，同时提高稽查选案的准确性。税务稽查的目的则主要是查处偷税、骗税等税收违法行为，保障税收，促进依法纳税和税收秩序的好转。主体和客体不同纳税评估主要是由基层税务机关的税源管理部门和税收管理员负责；客体主要是指当期管理范围内的所有纳税人、扣缴义务人的纳税活动。税务稽查由税务稽查局负责，主体简单明确；客体针对性较强，主要指有偷税、逃避追缴欠税、骗税和抗税等税收违法嫌疑的纳税人或扣缴义务人的各项活动。工作程序和工作地点不同纳税评估的程序是“确定对象—实施分析—询问核实—评估处理—反馈建议和维护更新税源管理数据”，这决定了纳税评估一般在税务机关办公场所开展。税务稽查的程序则要相对复杂，从大的方面看一般分为“选案—检查—审理—执行”四个步骤，一般在税务机关办公场所和稽查对象现场开展。具体作用不同服务是纳税评估的职能，惩处、威慑和教育是税务稽查的职能，税务稽查主要通过惩处等打击性措施起到执法作用。纳税评估是税收管理的第一道关口，税务稽查则是最后一道防线。手段方式不同纳税评估：根据宏观税收分析和行业税负监控结果以及相关数据设立评估指标及其预警值，综合运用各类对比分析方法筛选评估对象，对所筛选出的异常情况进行深入分析并作出定性和定量判断，通过税务约谈、调查核实等方式实施。税务稽查：依照法定权限和程序，采取实地检查、调取账簿资料、询问、查询存款账户或者储蓄存款、异地协查等方法。处理结果不同纳税评估：对纳税评估中发现的一般性问题或程序认定事实清楚，不具有偷税等违法嫌疑，无需立案查处的，可由税务机关督促纳税人自行改正；对评估分析中发现存在税收违法行为嫌疑的，需要移交稽查部门处理并定期向税源管理部门反馈；发现外商投资和外国企业与其关联企业之间的业务往来不符合规定的，应移交上级税务机关国际税收管理部门处理。税务稽查：追缴税款及滞纳金、处以罚款、移送公安机关、提出管理建议。

村上春树（1949年1月12日－），日本小说家、美国文学翻译家。29岁开始写作，第一部作品《且听风吟》即获得日本群像新人赏，1987年第五部长篇小说《挪威的森林》在日本畅销四百万册，广泛引起“村上现象”。村上春树的作品展现写作风格深受欧美作家影响的轻盈基调，少有日本战后阴郁沉重的文字气息。被称作第一个纯正的“二战后时期作家”，并誉为日本1980年代的文学旗手。中文名：村上春树外文名：むらかみ はるき，Haruki Murakami国籍：日本出生地：日本京都市出生日期：1949年1月12日职业：作家毕业院校：早稻田大学第一文学部演剧科代表作品：《且听风吟》《挪威的森林》《舞！舞！舞！》《海边的卡夫卡》等作品风格：文字精炼，看似轻松其实不然

1、建立良好的银企关系，只有这样，才容易获得银行融资。2、写好投资项目可行性研究报告。投资项目可行性研究报告对于争取项目贷款的规模大小，以及银行贷款的优先支持，具有十分重要的作用3、突出项目的特点。不同的项目都有各自内在的特性，根据这些特性，银行贷款也有相应的要求。4、选择合适的贷款时机。要注意既有利于保证中小企业所需要资金及时到位，又便于银行调剂安排信贷资金调度信贷规模。一般来说，中小企业如要申请较大金额的贷款，不宜安排在年末和每季季末。5、争取中小企业担保机构的支持。和各方面搞好关系，融资工作提前做到位，得到中小企业担保机构这些专门机构的支持，向商业银行贷款就有容易得多。

很高兴回答你的问题： 医德功利指医务人员在业务工作中自觉意识到了的功劳和利益，在现实生活中，医生护士功利思想可以有，这也是正常现象，但是，功利思想又不能成为医德的主导思想，一旦功利思想居于主导地位，医务人员就唯利是图，其行为必然与良好医德医风相违背，贻害社会，后患无穷。如果医务人员的医德功利意识能及时得到正确引导，从业人员在现实工作中能正确把握好医德与功利的关系，用良好的医德医风规范自己的思想和行为，用健康向上的功利思想使自身不断进步，这样一来，当医务人员遇到功利思想与人道思想发生冲突时，功利思想就自觉服从人道思想，个人利益就无条件地服从病人利益。由此“以病人为中心”，以业务强、技术精为追求的目标，自身的服务意识就必将在医务人员的实际工作中得到充分体现。我国实行的是社会主义市场经济体制，医疗卫生作为人类健康事业，适当引入市场经济的一些运行规律，是有助于其发展的。但我们一定要要求从业人员讲求职业道德：病人至上，用爱心赢得病人，在公平竞争中凭自身实实在在的社会声望追逐正当的功利。 认真体会，我又加了说明，谢谢采纳！！！

无论任何产品和服务取得好成绩都与客户的忠诚度密不可分，那么客户忠诚度从哪些方面得以体现呢？ 下面给大家介绍一下忠诚客户的 四度分析法 ： 1、满意度 满意度主要从产品、销售服务、售后服务、企业文化四个方面得到体现。 客户对于产品的服务一般是看重产品外在和内在的品质。比方说产品的知名度，产品是否符合行业标准，产品性能好坏等。他们还会注意到产品的使用过程中，有没有无端的故障发生，各种性能指标是否符合产品说明和销售人员承诺等。 满意度还体现在客户对销售服务和售后服务上面。销售服务是在校后过程中，销售人员表现出来的对产品讲解、安装等的耐心程度。还包括销售人员对待客户的友好、礼貌、尊重程度。售后服务则是体现在客户使用产品后，销售人员是不是定期回访，是不是特别注重维护客户关系等。客户满意度的大体现是对企业文化的认同。如果客户对企业文化深深认同，那幺么个客户的满意度是很高的。因此在对客户出售产品的同时，也不能忽略了企业文化的灌输。 2、忠诚度 在现实生活中，可以发现一种有趣的购买现象，那是相当一部分消费者在品牌选择上呈现高度的一致性，即在某一段时间甚至很长时间内重复选择一个或少数几个品牌，很少将其选择范围扩大到其它品牌。这种消费者在一段时间甚至很长时间内重复选择某一品牌，并形成重复购买的倾向，被称为品牌忠诚。 品牌忠诚度是顾客对品牌感情的量度，反映出一个顾客转向另一个品牌的可能程度，是企业重要的竞争优势 。全球性家电公司惠而浦执行总裁惠特万曾表示，“大部分的企业家都将注意力集中在怎样围绕生产、成本和质量进行优的运作上，然而他们发现这并不足以产生非凡收益。因而，有必要改变一下游戏规则……如果我们拥有客户忠诚的品牌，那是其它竞争厂家无法复制的一个优势”。 3、贡献度 客户的忠诚度还体现在客户对企业的贡献度上。 贡献度大忠诚度高，相反贡献度小，忠诚度自然也是小。 客户的贡献度是可以通过恰当的技巧进行引导的，在一个已经建立了企业忠诚度的客户身上在加入一些关和用心，客户会不自觉地为客户贡献。 4、依存度 忠诚度的高体现是彼此的依存程度 。一个客户如果能够和企业站在一条船上，他会把企业看成是自己的战略伙伴。自然愿意也会把自己的资源拿出来与企业一起分享，企业也会把资源与客户进行有效互补，这个时候的客户忠诚度是高的，即达到了彼此依存。 如何通过高质量的产品或者服务，保持顾客的忠诚度，这是一个令众多公司绞尽脑汁、冥思苦想的问题，因为忠诚的顾客往往带来高额的商业利润。 案例展示 不可否认，享誉世界的新航无疑是有资格回答这一问题的公司之一。“不管你是一名修理助理，或是一名发放工资的职员，或者是一个会计，我们能有这份工作，那是因为客户愿意为我们付费，这是我们的‘秘密"” 。新航前总裁Joseph Pillay在创业伊始不停地以此告诫员工，塑造和灌输“关注客户”的思想。事实上，正是 持之以恒地关注客户需求，尽可能为客户提供优质服务 ，新航才有了今的成就。 在长达32年的经营中，新航总是果断地增加好的旅客服务，特别是通过旅客的需求和预测来推动自身服务向更高标准前进。早在上世纪70年代，新航开始为旅客提供可选择餐食、免费饮料和免费耳机服务；上世纪80年代末，新航开始一班新加坡至吉隆坡之间的“无烟班机”；1992年初，所有飞离新加坡的新航客机都可以收看美国有线电视网络的国际新闻；2001年，新航在一架从新加坡飞往洛杉矶的班机上次推出了空中上网服务——乘客只需将自己的手提电脑接入座位上的网络接口，可以在飞机上收发电子邮件和进行网上冲浪。在过去3年内，新航花费将近4亿元提升舱内视听娱乐系统，为将近七成（所有远程飞机）飞机换上这个系统，花费了超过6亿元提升机舱娱乐设施和商务舱座位。 新航 不仅仅致力于为客户提供优质的服务，而且通过各种方式力求控制服务成本与商业利润之间的平衡 。的确，新航希望提供好的座椅、好的客舱服务、好的食物以及好的地面服务，但是它同时还要求这些所有的代价不能太高。在1972年，新航还只是一个拥有10架飞机的小型航空公司，如今，几乎每年新航都会获得各种世界性的营销服务大奖,也一直是世界上盈利的航空公司之一。对于这家保持30多年，并总是能够获得丰厚利润的航空公司而言，成功的原因可能很多，但是， “致力于培养员工和客户对企业的忠诚度” 无疑是其中一个重要的答案。 因此，广大商友们在企业运行的过程中，应该着重从客户的满意度、忠诚度、贡献度、依存度这四个方面进行分析，从而对产品进行更好的改良，在市场竞争中立于不败之地。了解更多企业运营方式，敬请关注西南商友会。 西南商友会西南运营中心

急诊科护士长岗位职责 　　在现实社会中，大家逐渐认识到岗位职责的重要性，岗位职责是一个具象化的工作描述，可将其归类于不同职位类型范畴。大家知道岗位职责的格式吗？以下是我为大家整理的急诊科护士长岗位职责，希望对大家有所帮助。 　　一、在科护士长的领导与科主任的业务指导下，根据护理部及科内的工作计划，制订本科的具体计划，并组织实施。 　　二、按护理部及急诊科总体管理要求，有计划地安排急诊室重点工作，做到月有计划，周有重点，日有安排。 　　三、检查督促护士严格执行各项规章制度和技术操作规范，了解各班护士执行治疗、巡回，主班及总消毒等各项工作的情况，参加并指导危重患者的抢救及护理工作，有计划地检查医嘱执行情况，加强医护配合，严防差错事故的发生。 　　四、每周随同主任查房一次，了解医学发展动态及护理工作中存在的问题，加强医护联系。 　　五、负责好中夜班护士工作安排，督察并考核中夜班护士工作质量。 　　六、负责本病区护士的`政治思想工作，加强医疗安全及法制教育，遵守院规院纪。 　　七、组织本病区的护理查房、业务学习及技术训练，不断提高护士业务水平及带教质量，并定期进行考核。 　　八、负责病区管理，包括护士的合理分工、病区环境的整洁、安静、安全、舒适以及对各类仪器、设备、药品、医疗物品、文件的管理。 　　九、负责指导和管理实习、进修人员，制订教学计划，安排有带教能力的护士担任带教工作。 　　十、关心护士在日常工作、生活、学习中存在的问题和困难，充分发挥每个人的主观能动性，做好医护间、护患间的沟通协调工作。 　　十一、督促检查工勤人员、配膳员做好清洁卫生和消毒隔离工作。 　　十二、定期召开工休座谈会、听取对医疗、护理等方面的意见，提出整改措施。 　　十三、每日两次参加交班（早班与二头班、二头班与中班），包括口头、书面、床头。 　　十四、按要求参加护士长的日夜值班。 　　十五、负责各类抢救器材、设备、药品和被服、日常用品申领、保管、报废工作。 ;

数据字典是指对数据的数据项、数据结构、数据流、数据存储、处理逻辑、外部实体等进行定义和描述，其目的是对数据流程图中的各个元素做出详细的说明。数据字典的主要作用是和数据流图共同构成系统的逻辑模型。没有流图数据字典难以发挥作用。没有数据字典，数据流图就不严格。一、数据字典的用途数据字典是各类数据描述的集合；数据字典是进行详细的数据收集和数据分析所获得的主要结果；数据字典在数据库设计中占有很重要的地位。在你所写的程序的开头列出一个数据字典十分的重要.数据字典列举了你在本程序中用到的所有变量的定义，还包括一些自定义的事件、命令的说明。它的定义应包括本条目的所要描述的内容和它在执行时所在的单元。当编写程序时，编定数据字典看似没有必要。但是设想一下，在过了一段时间后，你或其他人要对此程序修改，这时数据字典就显得十分的有用。二、数据字典的内容数据项；数据结构；数据流；数据存储；处理过程。数据项是数据的最小组成单位，若干个数据项可以组成一个数据结构。数据字典通过对数据项和数据结构的定义来描述数据流、数据存储的逻辑内容。

中小企业融资形式有：银行贷款融资、民间资本融资、通过保险平台贷款融资、租赁融资。【法律依据】《贷款通则》第六十一条规定，各级行政部门和企事业单位、供销合作社等合作经济组织、农村合作基金会和其他基金会，不得经营存贷款等金融业务。企业之间不得违反国家规定办理借贷或者变相借贷融资业务。

蔬菜大棚一般是按平方或者总投资补贴的，各个地方有差异。基本为2元/平方，或者设施造价总额的25%左右，每个地方每年补贴也不同，具体还是需要参照当地农业主管部门的政策。详情请看以下的蔬菜大棚补助政策 。蔬菜大棚补助政策 ：(1)鼓励企业、个人和社会各界投资建设温室大棚。 新建日光温室每栋补助1万元，新建春秋大棚每栋补助0.2万元，新建智能化自动调控联栋日光温室每亩（棚内面积）补助2万元。 (2)鼓励连片开发、规模化建设现代农业标准化示范园区。 以园区或村为单位，给予基础设施配套补助。连片建设日光温室50栋以上的，每栋日光温室按0.5万元的标准进行补助；建设春秋大棚100栋以上的，每栋春秋大棚按0.1万元的标准进行补助；日光温室和春秋大棚混合建设总栋数100栋以上的，每栋日光温室按0.5万元的标准、每栋春秋大棚按0.1万元的标准进行补助。 园区内建设冷藏设施、加工车间、技术中心、交易市场等基础工程的，按所建工程投资总额的20%进行补助。 申报立项被确定为省级、国家级现代农业标准化示范园区的，分别一次性给予20万元和30万元的奖励。 (3)贷款贴息。 新建日光温室每栋可贷款2万元、春秋大棚每栋可贷款0.3万元、智能化自动调控联栋日光温室每亩可贷款4万元。在上述贷款限额内，市财政给予为期两年的利息补贴。信用联社、农业银行等金融部门要制定优惠信贷政策，做好设施农业信贷扶持工作。 (4)鼓励支持设施农业标准化生产，争创名优品牌。 凡取得“无公害产品”、“绿色产品”和“有机产品”认证的，分别给予1万元、5万元、10万元补助。凡取得省级、国家级名牌认证的，分别给予5万元、10万元奖励。 (5)以乡镇为单位，建设温室大棚总数达200栋以上，聘请高级蔬菜技术员进行技术指导的，经农业主管部门考核验收和菜农评议合格的，每年对乡镇按每200栋补助3万元的标准给予经费补贴。以园区或村为单位，建设温室大棚总数达50栋以上，并聘请高级蔬菜技术员进行技术指导的，经农业主管部门考核验收和菜农评议合格的，对园区或村补助经费3万元（连续补助三年，三年以后不再补助）。 (6)市财政每年安排专项资金，用于鼓励与大专院校和科研院所挂靠，定期安排果蔬种植新品种、新技术、新模式和温室大棚建设新工艺、新设施的引进、试验、示范和推广；组织培训农业技术员、园艺工、农艺工和种植农户。 (7)逐步建立健全设施农业政策性保险机制，帮助农户规避生产经营风险，采取农民投保、政府补贴的方式推进农业保险事业。资料来源：中国有机农业网www.cnoa360.com

一、设施农业用地包括农业生产中直接用于作物种植和畜禽水产养殖的设施用地。其中，作物种植设施用地包括作物生产和为生产服务的看护房、农资农机具存放场所等，以及与生产直接关联的烘干晾晒、分拣包装、保鲜存储等设施用地；畜禽水产养殖设施用地包括养殖生产及直接关联的粪污处置、检验检疫等设施用地，不包括屠宰和肉类加工场所用地等。二、设施农业属于农业内部结构调整，可以使用一般耕地，不需落实占补平衡。种植设施不破坏耕地耕作层的，可以使用永久基本农田，不需补划；破坏耕地耕作层，但由于位置关系难以避让永久基本农田的，允许使用永久基本农田但必须补划。养殖设施原则上不得使用永久基本农田，涉及少量永久基本农田确实难以避让的，允许使用但必须补划。设施农业用地不再使用的，必须恢复原用途。设施农业用地被非农建设占用的，应依法办理建设用地审批手续，原地类为耕地的，应落实占补平衡。三、各类设施农业用地规模由各省（区、市）自然资源主管部门会同农业农村主管部门根据生产规模和建设标准合理确定。其中，看护房执行“大棚房”问题专项清理整治整改标准，养殖设施允许建设多层建筑。四、市、县自然资源主管部门会同农业农村主管部门负责设施农业用地日常管理。国家、省级自然资源主管部门和农业农村主管部门负责通过各种技术手段进行设施农业用地监管。设施农业用地由农村集体经济组织或经营者向乡镇政府备案，乡镇政府定期汇总情况后汇交至县级自然资源主管部门。涉及补划永久基本农田的，须经县级自然资源主管部门同意后方可动工建设。什么是农业生产用房1、禽畜建筑它是农业生产建筑的一个主要组成部分，包括饲养鸡、猪、牛、羊、兔、鸭、皮毛兽等禽畜建筑。2、温室建筑它是一种农业保护性栽培设施，能减少或完全摆脱自然环境对农作物等的影响，包括玻璃温室、玻璃钢温室、塑料大棚等。3、农业仓储建筑农产品生长受季节的限制，保证产品数量和质量的储藏条件要由农业仓储建筑来完成。农产品储藏库有谷物库、种子库、蔬菜果品储藏库、食用油库等；农机具库有车库、农机库、物料库等；危险品库有有机用油库、化肥库、农药库等。《中华人民共和国城乡规划法》第三条 城市和镇应当依照本法制定城市规划和镇规划。城市、镇规划区内的建设活动应当符合规划要求。县级以上地方人民政府根据本地农村经济社会发展水平，按照因地制宜、切实可行的原则，确定应当制定乡规划、村庄规划的区域。在确定区域内的乡、村庄，应当依照本法制定规划，规划区内的乡、村庄建设应当符合规划要求。县级以上地方人民政府鼓励、指导前款规定以外的区域的乡、村庄制定和实施乡规划、村庄规划。

10m/s以上。因为低层消防水带往往爆裂，消防管道内水流束度不宜大于2m/s，当流动的水经过减压孔板时，由于局部的阻力损失，在减压孔处产生压力隆，从而满足消火栓的出口压力及流量的需要，而经过减压孔板时水流速度可达10m/s以上。

纳税评估没权利。但是稽查有权利调取企业的账纳税评估结论一般有四类：正常符合性、差异符合性、异常待查性和异常恶意性。对其中的异常恶意性结论，如评估对象涉嫌偷逃骗抗等税收违法行为且已达立案标准的需要移送稽查部门查处。在移送稽查部门时，评估部门应当添制《纳税评估移送建议书》，列明评估对象存在的违法事实，由移送、接受双方签字确认。对收集的违法证据也可以并移送“第八十六条　税务机关行使税收征管法第五十四条第(一)项职权时，可以在纳税人、扣缴义务人的业务场所进行；必要时，经县以上税务局(分局)局长批准，可以将纳税人、扣缴义务人以前会计年度的账簿、记账凭证、报表和其他有关资料调回税务机关检查，但是税务机关必须向纳税人、扣缴义务人开付清单，并在3个月内完整退还；有特殊情况的，经设区的市、自治州以上税务局局长批准，税务机关可以将纳税人、扣缴义务人当年的账簿、记账凭证、报表和其他有关资料调回检查，但是税务机关必须在30日内退还。 ”

病房护士长职责 第一、组织领导护理人员的业务学习及技术训练。 第二、负责管理好病房，包括护理人员的排班、轮换、临时调配，病房环境的整洁、安全、安静、病人和陪护、探视人员的管理，各类仪器、设备、药品的管理。 第三、负责管理和指导实习、试用员工，并指定一星级以上的优秀护理人员带教。 第四、督促本组工作人员、卫生员、配餐员做好各项消毒隔离制度和清洁卫生工作。 第五、定期召开工休座谈会，听取对医疗、护理、饮食及卫生方面的意见，研究并改进病房管理工作。 第六、在总护士长的的领导下和科主任的业务指导下，根据护理部及科内工作计划，制定本病房具体计划，并组织实施。 第七、负责检查了解病房的护理工作，参加并指导危重、大手术及抢救病人的护理，督促护理人员严格执行各项规章制度和技术操作规程，有计划地检查医嘱的执行情况，加强医护配合，严防差错事故。 第八、参加晨会交接班及床头交接班，随同科主任查房，以便了解护理工作中存在的问题，并加强医护联系。参加科内会诊及大手术、新开展的手术前、疑难病例、死亡病例的讨论。 第九、负责本病房护理人员的政治思想工作，教育护理人员加强责任心，改善服务态度，遵守劳动纪律。 第十、组织本病房护理查房和护理会诊，积极开展新技术新业务及护理科研工作，对复杂的护理技术及新开展的护理业务，要亲自参加实践。

法律主观：什么是中小企业融资？中小企业融资是指金融机构针对中小企业推出的定制化融资解决方案，由现有企业筹集资金并完成项目的投资建设，无论项目建成之前或之后，都不出现新的独立法人。贷款和其他债务资金实际上是用于项目投资，但是债务方是公司而不是项目，整个公司的现金流量和资产都可用于偿还债务、提供担保；也就是说债权人对债务有完全的追索权，即使项目失败也必须由公司还贷，因而贷款的风险程度相对较低。中小企业私募融资好处1．中小企业私募融资是一种便捷高效的融资方式。2．中小企业私募融资是发行审核采取备案制，审批周期更快。3．中小企业私募融资募集资金用途相对灵活，期限较银行贷款长，一般为两年。4．中小企业私募融资综合融资成本比信托资金和民间借贷低，部分地区还能获得政策贴息。中小企业私募融资办理条件1．中小企业私募融资办理企业应符合国家相关政策对于中小企业定义的标准。2．办理中小企业私募融资必须有企业纳税规范。3．申请中小企业私募融资的目标企业的主营业务不能包含房地产和金融类业务。4．办理中小企业私募融资的目标企业的年营业收入达到一定规模，以企业年营业额收入不低于发债额度为宜。5．中小企业私募融资办理的目标企业能获得大型国企或者国有担保公司担保。6．申请中小企业私募融资的企业的信用评级达到AA级以上则为有限考虑对象。不同国家、不同经济发展的阶段、不同行业对其界定的标准不尽相同，且随着经济的发展而动态变化。以上便是中小企业融资的具体介绍，希望对您有帮助。法律客观：《最高人民法院关于审理非法集资刑事案件具体应用法律若干问题的解释》第一条违反国家金融管理法律规定，向社会公众（包括单位和个人）吸收资金的行为，同时具备下列四个条件的，除刑法另有规定的以外，应当认定为刑法第一百七十六条规定的“非法吸收公众存款或者变相吸收公众存款”：（一）未经有关部门依法批准或者借用合法经营的形式吸收资金；（二）通过媒体、推介会、传单、手机短信等途径向社会公开宣传；（三）承诺在一定期限内以货币、实物、股权等方式还本付息或者给付回报；（四）向社会公众即社会不特定对象吸收资金。未向社会公开宣传，在亲友或者单位内部针对特定对象吸收资金的，不属于非法吸收或者变相吸收公众存款。

B、系统分析数据字典的建立过程建立数据库管理系统的第一步是用户需求分析。通过系统开发人员和未来用户的相互交流，用户需求分析的结果被反映在《系统功能说明书》里。《系统功能说明书》详细地列出原始数据的内容、格式和来源，并且对数据处理的过程给出详细的描述。数据处理后产出的信息应当满足最终用户的信息需求。这个说明书只说明拟建立的系统的功能和处理能力，而不讨论怎样用硬件、软件、网络以及设备之间的连接等具体手段实现这些功能。

客户不存在忠诚，利益驱使。而满意度都会有后续合作。

之前，我姑家里养了许多鸡，有很多的土鸡蛋，从朋友那里听的小红象，就试了试，因为流量保证，又有分享，很快就销出了。

预算定额是在基础定额（劳动定额、材料消耗定额、机械台班消耗定额）的基础上，将项目综合后，按工程分部分项划分，以单一的工程项目为单位计算的定额。一般是编制施工图预算或甲乙双方结算的依据。概算定额是在预算定额的基础上，将项目再进一步综合扩大后，按扩大后的工程项目为单位进行计算的定额。一般是编制初步设计概算或进行投资包干计算的依据。两者相比，预算定额的工程项目划分的较细，每一项目所包括的工程内容较单一；概算定额的工程项目划分的较粗，每一项目所包括的工程内容较多，也就是把预算定额中的多项工程内容合并到一项之中了。因此，概算定额中的工程项目较预算定额中的项目要少得多。

一是思想重视程度不够，少数考察组事先准备不充分，谈话不深入，方法单一，有的凑人数、赶进度，有的考察人员态度不积极，工作不认真，例行公事，考察流于形式。二是少数考察人员不讲究谈话的方式、方法，缺少必要的引导和交流，使谈话人反映不出深层次的问题。三是部分考察人员知识面不广，特别是对社会学、心理学、身体语言学等方面的知识理解不深、掌握不透，导致在谈话考察中方法简单、缺乏技巧。四是有的考察人员综合素质不高，概括力、发现问题的能力较差，尽管谈话人隐约涉及了一些问题，但由于抓不住本质和要害，很难达到考察的效果。五是个别考察人员注重第一印象，凭经验办事，考察不够深入，以偏概全。扩展资料：考察谈话技巧的具体运用：做好谈话前准备。很大程度上讲，谈话能否达到预期目的，取决于对考察对象的了解程度，盲目谈话，只能使谈话流于形式。因此，要在谈话前做好充分的准备工作，把握好拟任职务所必须具备的基本条件和要求。对需要通过谈话了解的重要问题，做到心中有数。首先，考察人要掌握考察对象及其单位的基本情况，包括考察对象的基本情况、社会关系和工作情况，从而保证在谈话时有的放矢，抓住重点。对考察对象的背景材料，如干部档案、以往的干部考察材料、年度工作总结、述职报告、分管工作状况，纪检监察部门提供的情况、民意情况，以及干部发表的文章、理论测试的成绩等等要进行了解，做到心中有数，以便在谈话中处于主动地位，灵活地掌握和调度谈话话题和方式。有针对性地了解情况，核实问题，力求对考察对象从思想上、政治上以及理论素养、思维敏捷程度、知识面、口头表达能力、心理素质等多方面有一个较深层次和较全面的考察和了解。

66.9m。两条竖线就是减压孔板。应设在直径不小于50mm的水平直管段上，前后管段的长度均不宜小于该管段直径的5倍，计算可知114减压孔板有多长66.9m。

1、纳税评估是防止虚假纳税申报的有效手段。2、纳税评估可以通过信息反馈机制，解决征收管理中“疏于管理、淡化责任”的问题。3、纳税评估是一个纳税服务过程。企业不仅可通过航天信息软件“懂税的ERP”中的纳税分析系统预置的各税种不同纳税指标分析公式，企业在以上这些财务、业务数据完整发生时，为企业提前预知自己纳税情况提供很好的事前风险预测。

新闻与传播专业就业方向如下：1、传播学就业方向：影视传媒公司公关，会展，企业培训。2、广播电视新闻学就业方向：电视台工作，新闻采访，节目策划节目制作等。3、编辑出版学就业方向：编辑、撰稿、记者、文案、策划。行业：影视/传媒/出版、互联网/电子商务、广告/会展/公关、教育/培训/科研。4、广告学与媒体创意就业方向：广告和互联网行业：市场推广、展会推广，广告销售等职位。新闻传播学专业就业前景解读：1、传统媒体。目前传统纸质媒体和广播电视媒体是我国传媒市场的中流砥柱，担当着“群众喉舌、新闻宣传”的主流角色，是新闻专业毕业生的就业去向。传统媒体的类型多样，不同的传统媒体对人才也会有不同的要求。2、新媒体。新媒体的“新”主要是相对传统媒体而言的，包括网络媒体与其他新媒体(如手机报、手机电视、移动电视等)。相比传统媒体，以数字技术和互联网技术为依托的新媒体，在信息时代是具潜力的朝阳行业之一。作为朝阳产业，新媒体行业更需要市场高手来策划有效消费，因此媒介经营管理方面的人才也大受欢迎。

主要方式：银行贷款融资、民间资本融资、通过保险平台贷款融资、租赁融资。

一、医学道德教育的意义1、有助于行务人员的内在品质，是把医学道德原则和规范转化为内心信念的重要一环。2、有助于培养医务人员的人文素养和道德情操，是形成良好医德医风的重要环节。3、有助于培养高素质的医学人才，是促进医学科学工作发展的重要措施。二、医学道德教育的过程1、提高医德认识。2、．培养医德情感。3、锻炼医德意志。4、坚定医德信念。5、养德行为和习惯。扩展资料比较完整的道德教育过程，一般包括提高认识、陶冶情感、锻炼意志、确立信念和培养行为习惯等主要环节。与通常的知识教育相比较，道德教育具有广融性、同时性、多端性、重复性、强烈实践性和渐进性等主要特点。确定道德教育的方法和手段，主要是根据道德品质形成的特点和受教育者的实际状况，一般采取正面疏导的方针，实行传授道德知识和总结受教育者的道德生活经验相结合，个人示范和集体影响相结合，榜样激励和舆论扬抑相结合的方法。社会主义社会的道德教育，主要是培养人民的共产主义道德品质，提高人民的历史主动性，推动社会秩序和社会风气的不断改善。它既从现实经济政治关系的实际需要和可能出发，又着眼于人民道德境界的不断升华。它不仅注重清除一切旧道德的消极残余和影响，积极配合和保证政治、法律、知识、审美等方面的教育，而且更注重于培养人民的社会责任感和道德选择能力。

根据表象系统，顾客分为三种类型视觉型、听觉型、感觉型1、视觉型（着装、配饰）“随便看看”“一看就不好”“看不出来有什么特别的”“看起来怎么这么黑？”应对技巧：“看得出来，你很细心” “看看价格还是款式” “一看，你就是见过世面的人”2、听觉型特点：语速、语调、节奏都要比较适中“听说、听起来、我朋友告诉我”应对技巧：“我相信你也听你朋友讲过” “你以前是不是听说过” “听得出来，你是比较懂的人” “听你说话，就知道你是很认真、严谨的人”3、感觉型特点：语速、语调、节奏比较缓慢“感觉太贵了、感觉不好、我觉得”应对技巧：“我能理解你这种感觉”“你是感觉质量不放心还是款式不合适“ “你给我的感觉是非常稳重”“我能感觉得出来，你是个很负责、很认真的人”根据顾客性格特征，顾客可划分为1. 豪放型VS细腻型 2. 理智型VS感性型 3. 求同型VS求异型 4. 追求型VS逃避型1. 豪放型VS细腻型豪放型：大方向、大格局、大趋势（成功身份品味、流行趋势、讨厌啰嗦）“感觉很豪气，大气，感觉好”“有没有新款，这款都太普通了、品牌大不大、最流行什么、款式的意义”细腻型：“等级、切工如何; 有没有印记；有哪些服务项目”应对技巧：具体细节（越详细越好，全国连锁店具体数量、省市 ）价格分析（钻石切割面数、加工时间、形成时间，越详细越有安全感）2、理智型VS感性型理智型特点：走路自然，目标感强，自顾自看，大方得体、神色自然；喜欢自已看不被打扰；要求别人有问必答；各家全方位比较性价比应对技巧：强调我们的独特优势；各种服务价值衡量；尊重对方的选择顾客：“你们的款式没另一家新颖；打完折后比它们多了500多。”导购：“我尊重您最后的选择，但是如果可以的话，我还是希望您能选择我们的品牌···”感性型特点：冲动、三分热血、容易被感动、容易听起别人的意见、优柔寡断型应对技巧：多赞美、解释原因，注意打配合（哪个好）3、求同型VS求异型求同型特点： 跟潮流、喜欢大众化的东西、喜欢被认同或认可、喜欢攀比“XXXX品牌比较好”应对技巧：1）问：我不能否认您的看法，同时你觉得它好在哪里呢？ 2）相同点：你讲得很好，同时我们品牌也有这几个优势特点？ 3）差异性：另外，我们品牌还有其它几个优势特点。4）客户见证：很多消费者都了解我们、连锁店的数量、广告代言人、网站、杂志等 。求异型特点：个性化、独特款式、不喜欢一样、好面子、喜欢发达自已的看法、鸡蛋里挑骨头应对技巧：不要对着干 、较劲，主动败阵 负负得正4、追求型VS逃避型一个人作出决定的两大原因：追求快乐或逃离痛苦追求型特点：要什么、希望什么、想怎么样“我要什么款式；有什么优惠；有什么服务；有什么礼品”应对技巧：-要让这种顾客产生拥有快乐、幸福的感觉；-描述顾客戴上产品后的感觉； -描绘一下顾客以后享受各种服务时的感受与情况。逃避型特点：不要什么、害怕什么、不想怎么样（保障）“我不要什么样的；不会是假的吧；不会出现问题吧；不会掉吧；不会麻烦吧”应对技巧：-要让这种顾客产生安全、保障、没有后顾之忧的感觉；-阐述公司的产品与服务保证； -描绘公司售后服务可以帮助顾客避免哪些麻烦。根据顾客个人性格，顾客划分为休闲型 急躁型 害羞型 博知型 猜疑型 优柔寡断型1、休闲型特点：挑选商品不紧不慢，没有时间概念应对技巧：耐心的介绍，让其慢慢选购 ，不焦急或催促顾客2、急躁型特点：急性子、容易发怒、神情紧张应对技巧：谨慎的语言和态度，注意不要激怒顾客；反应敏捷、动作麻利 、不要让顾客等待；避免喋喋不休、拖拖拉拉。3、害羞型特点： 不爱说话、腼腆、年龄偏小、预算比较紧张应对技巧：细心观察顾客表情、动作、言语要轻柔；以具体的询问来引导，“问”出他的意见和需求。4、博知型特点：知识丰富、主观、还有点傲慢应对技巧：多赞美，如“你知道的真多”来赞美其独到的眼光和品位；在态度和语言上特别要有耐心，不要强硬；表达出足够的尊敬，可沟通他对我们产品的看法 。5、猜疑型特点：对导购员极不相信，比较冷漠，习惯质疑、反驳导购员的介绍应对技巧：把握顾客的疑问点，运用专业的产品知识，使用相关宣传册，消除其疑虑；要表现出对自己产品的强大信心，来感染顾客 。6、优柔寡断型特点：欠缺判断力，没有主见，犹豫不决应对技巧：缩小顾客选择范围，有重点地推荐；给出中肯的建议如“我认为您带这款比较好” ；切忌推荐太多款式，令顾客眼花缭乱，更无法决定。根据顾客购物习惯，顾客划分为自主型 融合型 创新型 分析型 豪爽型 1、自主型特点：喜欢自己做主，不喜欢销售人员为他挑选；决断、 爽快、冷漠；与销售人员保持距离；喜欢别人赞同他的观点应对技巧：-掌握顾客的观点及对货品的认知，投其所好，认同对方的观点；-对顾客提出的疑问需实时做出回应听从指示，不要催促、大方及庄重,多眼神接触及点头回应，表示尊重 。2、融合型特点：喜欢得到销售人员的注意与赞美；喜欢与别人分享自己关心的事和感受；随和、友善、容易与人相处；拿不定注意，一会看这，一会看那应对技巧：-关注她所分享的事，殷勤款待，有耐性；-关注顾客关心的人，例如（子女、朋友）；-多了解他的需求，多加建议，加快决定；-气氛开朗、亲切、友善。3、创新型特点：喜欢新品，追求潮流，例如：最新款，最时尚；具有潮流触感；喜欢追求独特及美丽的事物；重视时尚及品牌应对技巧：-介绍新货品及与独特之处；-显示对时尚潮流及新鲜事物的认同；-交换潮流意见，激情幽默；-表现出新派、爽快、干练的服务形象，以欣赏的目光注视顾客。4、分析型特点：会详细了解货品的FAB；非常关注价位，追求物有所值，物超所值；需要一些时间才能做出购买决定应对技巧：-提供专业意见，提供精确的产品信息 让顾客产生信任；-强调物有所值,运用证据加强说服力； -有耐性、诚实可靠、避免目光轻浮、紧张；-保持站姿端正，切勿身体摇摆不定，动作过大 。5、豪爽型特点：喜欢名牌，消费能力较高；只要喜欢就买；不太关注价格应对技巧：-按其需求去推荐产品，而不是价格；-介绍商品时要自信干练；-需要重点对待，使其成为忠实顾客。根据顾客重要性，顾客分六级潜在顾客 准顾客 普通顾客 黄金顾客 钻石顾客 翡翠顾客1、潜在顾客1）有消费需求，短期内没有消费能力或消费的可能性；2）有消费能力，没有消费需求、欲望或意识。2、准顾客有消费需求、有消费能力、有决策权3、普通顾客一般性消费者、单次消费额不大、斤斤计较、爱占小便宜4、黄金顾客单次消费额高、后续消费能力强，无品牌意识、无品牌印象、无忠诚度5、钻石顾客1）多次消费、累计消费额高、后续消费能力强；2）关系良好、有品牌意识、有一定品牌印象、有一定忠诚度。6、翡翠顾客1）多次消费、单次及累计消费额都高、超强后续消费能力；2）关系超好、超强忠诚度、死心踏地、宣传、带人来；

室内消火栓减压孔板拆除步骤如下：1、把消火栓本体拆下来。2、将减压孔板从壁上撬下。3、用一个尖头的工具或一把小螺丝刀来撬开。4、如果孔板过于死结，可以使用电钻或其他加大力度的工具来拆除。