细胞

A、等位基因A和a都可表达，只不过a基因表达的酶不能催化脑细胞脂质的分解和转化，所以基因型为aa的人患TSD病，A错误；B、A基因不能诱导基因a的发生突变，B错误；C、酶有高效性，只要有A基因，它表达的酶就能催化脑细胞脂质的分解和转化，C正确；D、酶有专一性，脑细胞脂质分解和转化，不能由另一种酶催化，D错误．故选：C

之前写过 NicheNet 的标准分析pipeline，实际上做细胞互作分析的时候我们更多的还是在做样本间的互作差异比较。平常我用CellChat比较多，但其实NicheNet也可以做多样本互作比较，而且效果更好。 加载所需要的包 读入演示数据 这个演示里面比较的是pEMT-high-niche和pEMT-low-niche，换成不同组都一样的。 读入NicheNet 受体配体网络 （25345*688）和 受体配体矩阵 如果分析的是小鼠的数据，需要先做一下基因的同源转换 每个niche应该至少有一个“sender/niche”细胞群和一个“receiver/target”细胞群。 在这个演示数据集中，我们想要去查看pEMT high和pEMT low的肿瘤组织中免疫细胞对肿瘤细胞的作用差异。因此“Malignant_High”和“Malignant_Low”被定义为“receiver/target”细胞群，其它细胞被定义为“sender/niche”细胞群。注意：T.Cell和Myeloid细胞只有在pEMT-High样本中才被定义为sender，因为pEMT-low样本中这两类细胞数目太少了。 u26a0ufe0f也就是说，NicheNet在做组间比较的时候，可以把condition-specific的细胞群考虑在内。（比较的是所有sender细胞的组间差异，而不是细胞特异性组间差异） ! Important: your receiver cell type should consist of 1 cluster! In this step, we will determine DE between the different niches for both senders and receivers to define the DE of L-R pairs. 这里得到的是差异性受体配体对 计算差异基因的方法默认是Seurat Wilcoxon test（也可以使用其它方法）。 可以看到，它是先计算了Sender：high的5种sender细胞分别和low的3中sender细胞的Sender DE，又反过来计算了low的3中sender细胞分别和high的5种sender细胞的DE。 然后计算了Receiver：肿瘤细胞high-low的差异基因和low-high的差异基因。 这样把细胞类型分开挨个计算而不是把所有sender和receiver细胞合并计算的意义是避免差异分析的结果主要被丰度高的细胞驱动。 根据细胞表达基因的百分比对差异基因做一下初步筛选，只有在超过设定阈值（10%）的细胞中有表达的基因才会被认为是普遍表达的差异基因。 如前所述，来自一种sender细胞的差异表达的配体是通过计算该样品这种sender细胞和另一样品中所有sender细胞得到的。因此我们有多种方法总结得到细胞类型的差异表达配体。我们可以使用average LFC，也可以使用minimum LFC。但是更推荐使用 minimum LFC 。因为它是评估配体表达的最强的特异性指标，因为高的min LFC意味着和niche 2中的所有细胞类型相比，这个配体在niche 1的这个细胞类型中表达更强（如果使用average LFC，则不能排除niche 2中一种或多种细胞也很强的表达这个配体）。 这一步主要得到了 DE_sender_receiver 这个对象，也就是不同niche中的差异基因。 限空间转录组数据 在这一步中，我们将要预测不同niches中receiver细胞类型的每个配体的活性。（和常规NicheNet的配体活性分析类似）。 为了计算配体活性，我们首先需要在每个niche中分别定义一个感兴趣的基因集。在这个示例中，pEMT-high的基因集是和pEMT-low肿瘤相比，pEMT-high中的上调基因。pEMT-low的基因集则相反。 在做配体活性分析之前，最好还是做一下基因集中的基因数的检测。一般认为对配体活性分析来说，感兴趣的基因集中有20-1000基因是比较合适的。如果得到的DE基因数过多，推荐使用更高的 lfc_cutoff 阈值。在有>2的receiver细胞/niches时或，我们建议使用0.15的cutoff值。如果只有2组receiver细胞/niches时，我们建议使用更高的阈值（比如0.25）。如果是测序深度比较深的数据比如Smart-seq2，同样建议使用更高的阈值。 在这个演示数据中，我们使用的是Smart-seq2的数据，而且只有比较了2个niches，所以我们使用高LFC阈值以得到更少的DE基因（更高的阈值得到的DE基因 更少，可信度更高）。 在这一步中，我们将会计算受体、配体和靶基因在不同细胞群中的平均(scaled)表达和表达fraction。这里是使用DotPlot展示的，也可以用其他方式展示。 这一步得到了ligand, receptor和target的表达表。以exprs_tbl_ligand为例，每个表中都有ligand/ receptor/ target的细胞类型，表达量和在细胞中的表达百分比。 在这一步中，我们将会基于受体表达强度计算配体-受体互作，对各细胞类型里各配体的受体进行打分，表达最强的受体将被给予最高的评分。这不会影响随后对单个配体的排序，但是将会帮助我们对每个配体最重要的受体进行排序。(next to other factors regarding the receptor - see later). 在这一步中，我们将会结合上面所有的计算结果来对ligand-receptor-target直接的links进行排序。We scale every property of interest between 0 and 1, and the final prioritization score is a weighted sum of the scaled scores of all the properties of interest. We provide the user the option to consider the following properties for prioritization (of which the weights are defined in prioritizing_weights ) : Note: these settings will give substantially more weight to DE ligand-receptor pairs compared to activity. Users can change this if wanted, just like other settings can be changed if that would be better to tackle the specific biological question you want to address. 在可视化之前，我们需要先定义每个niche中最重要的配体受体对。We will do this by first determining for which niche the highest score is found for each ligand/ligand-receptor pair. And then getting the top 50 ligands per niche. Now we will look first at the top ligand-receptor pairs for KCs (here, we will take the top 2 scoring receptors per prioritized ligand) Visualization: minimum LFC compared to other niches Show the spatialDE as additional information

慢性肾功能衰竭的患者，肾脏的机能会渐渐衰退，最后会完全依赖血液透析变为洗肾患者，过著饮食都要很小心，而一周约有3天将要在洗肾中心度过的日子，连出国都很难，除非移植肾脏，不然就只能一直过著不方便的生活。但因为捐赠的肾脏有限，所以大部分的洗肾患者只能过著血液透析的生活。在医疗资源充足的台湾，洗肾或许不是大问题，但因付不起高昂透析费，而只能等著肾衰竭到来的患者，据统计全球超过200万人，因此，利用干细胞的再生肾脏，将是解救洗肾患者的一个契机。 动物实验已成功产生具有功能性的肾脏 基于生物基因实验所遇到的「伦理道德问题」，目前无法直接运用人体胚胎肾原微环境(nephrogenic niche)进行诱导操作，只能计画将人类的iPS细胞移植到实验猪的肾脏环境培养出可用的肾脏细胞，实验猪肾脏原有的肾原母细胞，已经用生物基因工程和特殊药物除去了，所以人类的iPS干细胞会在里面分化为可作为移植用途的肾脏细胞。 所以2017年，日本熊本大学、东京慈惠会医科大学及明治大学所组成的联合研究团队，先进行以实验小鼠的肾脏为基底，培养实验大鼠iPS干细胞分化为肾脏细胞移植实验。研究人员先透过药物诱导iPS干细胞分化为肾原母细胞，并注入到小鼠的肾原微环境中，等干细胞培育分化为肾脏细胞后，再移植回大鼠的体内，并产生具有功能性的肾脏，成功实现了大鼠与小鼠，两个物种间的肾脏再生。 诱导干细胞变成肾脏细胞　移植进入患者体内 研究团队最终的目标是，在实验猪的肾脏环境中，诱导iPS细胞(万能干细胞)分化为肾源母细胞(nephron progenitor cells, NPCs)，在体外培育成肾芽细胞后，再移植到肾脏衰竭接受血液透析的患者体内。但由于临床试验中用到了猪细胞，涉及到猪与人类的异种移植问题。虽然目前大鼠和小鼠种间肾脏移植再生技术已经得以验证，但是一旦要推进到临床，国家监管部门的专家组会如何判断该技术的安全性现在还很难断定。如果被要求追加试验的话，招募第一例患者恐怕会遇到相当难度的挑战，所以研究团队预计在日本或法规较宽松的大陆招募到第一位受试者后，开始进行临床实验。

在光学显微镜下观察植物的细胞，可以看到它的结构分为下列四个部分1.细胞壁（Cell Wall）　　位于植物细胞的最外层，是一层透明的薄壁。它主要是由纤维素和果胶组成的，孔隙较大，物质分子可以自由透过。细胞壁对细胞起着支持和保护的作用。2.细胞膜（Cell Membrane)　　细胞壁的内侧紧贴着一层极薄的膜，叫做细胞膜。这层由蛋白质分子和磷脂双层分子组成的薄膜，水和氧气等小分子物质能够自由通过，而某些离子和大分子物质则不能自由通过，因此，它除了起着保护细胞内部的作用以外，还具有控制物质进出细胞的作用：既不让有用物质任意地渗出细胞，也不让有害物质轻易地进入细胞。4.细胞核　　细胞质里含有一个近似球形的细胞核（nucleus），是由更加黏稠的物质构成的。细胞核通常位于细胞的中央，成熟的植物细胞的细胞核，往往被中央液泡推挤到细胞的边缘。细胞核中有一种物质，易被洋红、苏木精、甲基绿等碱性染料染成深色，叫做染色质（chromatin）。生物体用于传种接代的物质即遗传物质，就在染色质上。当细胞进行有丝分裂时，染色质在分裂间期螺旋缠绕成染色体。　　细胞膜在光学显微镜下不易分辨。用电子显微镜观察，可以知道细胞膜主要由蛋白质分子和脂类分子构成。在细胞膜的中间，是磷脂双分子层，这是细胞膜的基本骨架。在磷脂双分子层的外侧和内侧，有许多球形的蛋白质分子，它们以不同深度镶嵌在磷脂分子层中，或者覆盖在磷脂分子层的表面。这些磷脂分子和蛋白质分子大都是可以流动的，可以说，细胞膜具有一定的流动性。细胞膜的这种结构特点，对于它完成各种生理功能是非常重要的。　3.细胞质（Cytoplasm）　　细胞膜包着的黏稠透明的物质，叫做细胞质。在细胞质中还可看到一些带折光性的颗粒，这些颗粒多数具有一定的结构和功能，类似生物体的各种器官，因此叫做细胞器。例如，在绿色植物的叶肉细胞中，能看到许多绿色的颗粒，这就是一种细胞器，叫做叶绿体。绿色植物的光合作用就是在叶绿体中进行的。在细胞质中，往往还能看到一个或几个液泡，其中充满着液体，叫做细胞液。在成熟的植物细胞中，液泡合并为一个中央大液泡，其体积占去整个细胞的大半。细胞质被挤压为一层。细胞膜以及液泡膜和 原生质层两层膜之间的细胞质称为原生质层。

在光学显微镜下观察植物的细胞，可以看到它的结构分为下列四个部分1.细胞壁（Cell Wall）位于植物细胞的最外层，是一层透明的薄壁。它主要是由纤维素和果胶组成的，孔隙较大，物质分子可以自由透过。细胞壁对细胞起着支持和保护的作用。2.细胞膜（Cell Membrane)细胞壁的内侧紧贴着一层极薄的膜，叫做细胞膜。这层由蛋白质分子和磷脂双层分子组成的薄膜，水和氧气等小分子物质能够自由通过，而某些离子和大分子物质则不能自由通过，因此，它除了起着保护细胞内部的作用以外，还具有控制物质进出细胞的作用：既不让有用物质任意地渗出细胞，也不让有害物质轻易地进入细胞。细胞膜在光学显微镜下不易分辨。用电子显微镜观察，可以知道细胞膜主要由蛋白质分子和脂类分子构成。在细胞膜的中间，是磷脂双分子层，这是细胞膜的基本骨架。在磷脂双分子层的外侧和内侧，有许多球形的蛋白质分子，它们以不同深度镶嵌在磷脂分子层中，或者覆盖在磷脂分子层的表面。这些磷脂分子和蛋白质分子大都是可以流动的，可以说，细胞膜具有一定的流动性。细胞膜的这种结构特点，对于它完成各种生理功能是非常重要的。物质跨膜运输的方式分为被动运输和主动运输两种。（1）被动运输，是顺着膜两侧浓度梯度扩散，即由高浓度向低浓度。分为自由扩散和协助扩散。①自由扩散：物质通过简单的扩散作用进入细胞。细胞膜两侧的浓度差以及扩散的物质的性质（如根据相似相溶原理，脂溶性物质更容易进出细胞）对自由扩散的速率有影响，常见的能进行自由扩散的物质有氧气、二氧化碳、甘油、乙醇、苯、尿素、胆固醇、水、氨等。②协助扩散：进出细胞的物质借助载体蛋白扩散。细胞膜两侧的浓度差以及载体的种类和数目对协助扩散的速率有影响。红细胞吸收葡萄糖是依靠协助扩散。（2）主动运输：物质从低浓度一侧运输到高浓度一侧，需要载体蛋白的协助，同时还需要消耗细胞内化学反应所释放的能量。主动运输保证了活细胞能够按照生命活动的需要，主动选择吸收所需要的营养物质，排出代谢废物和对细胞有害的物质。各种离子由低浓度到高浓度过膜都是依靠主动运输。能进行跨膜运输的都是离子和小分子，当大分子进出细胞时，包裹大分子物质的囊泡从细胞膜上分离或者与细胞膜融合（胞吞和胞吐），大分子不需跨膜便可进出细胞。细胞膜的基本结构：（1）脂双层：磷脂、胆固醇、糖脂，每个动物细胞质膜上约有109个脂分子，即每平方微米的质膜上约有5x106个脂分子。（2）膜蛋白，分内在蛋白和外在蛋白两种。内在蛋白以疏水的部分直接与磷脂的疏水部分共价结合，两端带有极性，贯穿膜的内外；外在蛋白以非共价键结合在固有蛋白的外端上，或结合在磷脂分子的亲水头上。如载体、特异受体、酶、表面抗原。（3）膜糖和糖衣:糖蛋白、糖脂细胞膜的特性：（1）结构特性：以磷脂双分子层作为基本骨架－－流动性；（2）功能特性：载体蛋白在一定程度上决定了细胞内生命活动的丰富程度－－选择透过性。3.细胞质（Cytoplasm）细胞膜包着的黏稠透明的物质，叫做细胞质。在细胞质中还可看到一些带折光性的颗粒，这些颗粒多数具有一定的结构和功能，类似生物体的各种器官，因此叫做细胞器。例如，在绿色植物的叶肉细胞中，能看到许多绿色的颗粒，这就是一种细胞器，叫做叶绿体。绿色植物的光合作用就是在叶绿体中进行的。在细胞质中，往往还能看到一个或几个液泡，其中充满着液体，叫做细胞液。在成熟的植物细胞中，液泡合并为一个中央大液泡，其体积占去整个细胞的大半。细胞质被挤压为一层。细胞膜以及液泡膜和两层膜之间的细胞质称为原生质层。植物细胞的原生质层相当于一层半透膜。当细胞液浓度小于外界浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁的伸缩性大，当细胞不断失水时，原生质层与细胞壁分离，也就是发生了质壁分离。当细胞液浓度大于外界溶液浓度时，外界溶液中的水分透过原生质层进入细胞液中使原生质层复原，逐渐发生质壁分离的复原。细胞质不是凝固静止的，而是缓缓地运动着的。在只具有一个中央液泡的细胞内，细胞质往往围绕液泡循环流动，这样便促进了细胞内物质的转运，也加强了细胞器之间的相互联系。细胞质运动是一种消耗能量的生命现象。细胞的生命活动越旺盛，细胞质流动越快，反之，则越慢。细胞死亡后，其细胞质的流动也就停止了。除叶绿体外，植物细胞中还有一些细胞器，它们具有不同的结构，执行着不同的功能，共同完成细胞的生命活动。这些细胞器的结构需用电子显微镜观察。在电镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构。①线粒体线粒体（mitochondrium）线粒体是一些线状、小杆状或颗粒状的结构。在活细胞中可用詹纳斯绿（Janus green）【anus Green B 别名：健那绿 化学式：C30H31N6Cl 詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。】，染成蓝绿色。在电子显微镜下观察，线粒体表面是由双层膜构成的。内膜向内形成一些隔，称为线粒体嵴（cristae）。在线粒体内有丰富的酶系统。线粒体是细胞呼吸的中心，它是生物有机体借氧化作用产生能量的一个主要机构，它能将营养物质（如葡萄糖、脂肪酸、氨基酸等）氧化产生能量，储存在ATP（三磷酸腺苷）的高能磷酸键上，供给细胞其他生理活动的需要，因此有人说线粒体是细胞的“动力工厂”。根据对线粒体机能的了解，近些年来试验用“线粒体互补法”进行育种工作，即将两个亲本的线粒体从细胞中分离出来并加以混合，如果测出混合后呼吸率比两亲本的都高，证明杂交后代的杂种优势强，应用这种育种方法，能增强育种工作的预见性，缩短育种年限②叶绿体叶绿体（coloroplasts）是绿色植物细胞中重要的细胞器，其主要功能是进行光合作用。叶绿体由双层膜、基粒（类囊体）和基质三部分构成。类囊体是一种扁平的小囊状结构，在类囊体薄膜上，有进行光合作用必需的色素和酶。许多类囊体叠合而成基粒。基粒之间充满着基质，其中含有与光合作用有关的酶。基质中还含有DNA。③内质网内质网（endoplasmic reticulum）是细胞质中由膜构成的网状管道系统广泛的分布在细胞质基质内。它与细胞膜及核膜相通连，对细胞内蛋白质及脂质等物质的合成和运输起着重要作用。内质网有两种：一种是表面光滑的是滑面内质网，主要与脂质的合成有关；另一种是上面附着许多小颗粒状的，是粗面内质网，与蛋白质的合成有关。内质网增大了细胞内的膜面积，膜上附着着许多酶，为细胞内各种化学反应的正常进行提供了有利条件。④高尔基体高尔基体（Golgi body）普遍存在于植物细胞和动物细胞中。一般认为，细胞中的高尔基体与细胞分泌物的形成有关，高尔基体本身没有合成蛋白质的功能，但可以对蛋白质进行加工和转运。植物细胞分裂时，高尔基体与细胞壁的形成有关（赤道板周围有特别多的高尔基体，以便合成纤维素及果胶）。⑤核糖体核糖体（ribosomes）是椭球形的粒状小体，有些附着在内质网膜的外表面（供给膜上及膜外蛋白质），有些游离在细胞质基质中（供给膜内蛋白质，不经过高尔基体，直接在细胞质基质内的酶的作用下形成空间构形），是合成蛋白质的重要基地。⑥中心体中心体（centrosome）存在于动物细胞和某些低等植物细胞中，因为它的位置靠近细胞核，所以叫中心体。每个中心体由两个互相垂直排列的中心粒及其周围的物质组成。 动物细胞的中心体与有丝分裂有密切关系。.中心粒（centriole）这种细胞器的位置是固定的，具有极性的结构。在间期细胞中，经固定、染色后所显示的中心粒仅仅是1或2个小颗粒。而在电子显微镜下观察，中心粒是一个柱状体，长度约为0.3μm～0.5μm，直径约为0.15μm，它是由9组小管状的亚单位组成的，每个亚单位一般由3个微管构成。这些管的排列方向与柱状体的纵轴平行。中心粒通常是成对存在，2个中心粒的位置常成直角。中心粒在有丝分裂时有重要作用⑦液泡液泡（vacuole）是植物细胞中的泡状结构。成熟的植物细胞中的液泡很大，可占整个细胞体积的90%。液泡的表面有液泡膜。液泡内有细胞液，其中含有糖类、无机盐、色素和蛋白质等物质，可以达到很高的浓度。因此，它对细胞内的环境起着调节作用，可以使细胞保持一定的渗透压，保持膨胀的状态。动物细胞也同样有小液泡。⑧溶酶体溶酶体是细胞内具有单层膜囊状结构的细胞器。其内含有很多种水解酶类，能够分解很多物质。⑨微丝及微管在细胞质内除上述结构外，还有微丝（microfilament）和微管（microtubule）等结构，它们的主要机能不只是对细胞起骨架支持作用，以维持细胞的形状，如在红血细胞微管成束平行排列于盘形细胞的周缘，又如上皮细胞微绒毛中的微丝；它们也参加细胞的运动，如有丝分裂的纺锤丝，以及纤毛、鞭毛的微管。此外，细胞质内还有各种内含物，如糖原、脂类、结晶、色素等。4.细胞核细胞质里含有一个近似球形的细胞核（nucleus），是由更加黏稠的物质构成的。细胞核通常位于细胞的中央，成熟的植物细胞的细胞核，往往被中央液泡推挤到细胞的边缘。细胞核中有一种物质，易被洋红、苏木精、甲基绿等碱性染料染成深色，叫做染色质（chromatin）。生物体用于传种接代的物质即遗传物质，就在染色质上。当细胞进行有丝分裂时，染色质在分裂间期螺旋缠绕成染色体。多数细胞只有一个细胞核，有些细胞含有两个或多个细胞核，如肌细胞、肝细胞等。细胞核可分为核膜、染色质、核液和核仁四部分。核膜与内质网相通连，染色质位于核膜与核仁之间。染色质主要由蛋白质和DNA组成。DNA是一种有机物大分子，又叫脱氧核糖核酸，是生物的遗传物质。在有丝分裂时，染色体复制，DNA也随之复制为两份，平均分配到两个子细胞中，使得后代细胞染色体数目恒定，从而保证了后代遗传特性的稳定。还有RNA，RNA是DNA在复制时形成的单链，它传递信息，控制合成蛋白质，其中有转移核糖核酸(tRNA)、信使核糖核酸(mRNA)和核糖体核糖核酸(rRNA)。　细胞核的机能是保存遗传物质，控制生化合成和细胞代谢，决定细胞或机体的性状表现，把遗传物质从细胞（或个体）一代一代传下去。但细胞核不是孤立的起作用，而是和细胞质相互作用、相互依存而表现出细胞统一的生命过程。细胞核控制细胞质；细胞质对细胞的分化、发育和遗传也有重要的作用。

细胞外基质主要由5类物质组成，即胶原蛋白、非胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖与氨基聚糖，按分布部位划分主要分为基底膜（Basement membrane）和间质基质(Interstitial matrix)。胶原蛋白（Collagen）属于不溶性纤维形蛋白质，是细胞外基质的主要成分，遍布于各器官和组织。胶原蛋白一般占哺乳动物体内蛋白总量的25%（质量分数）。结缔组织中的胶原主要是Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原，Ⅳ型胶原主要存在于基底膜。生物组织中弹性较大的结构蛋白，较大量存在于韧带、血管壁和皮肤等弹性组织中，是弹性纤维的主要成分。能拉长到原长度的几倍，在张力松弛后很快恢复到原来的大小和形状。具有高弹性的原因是由于在弹性蛋白形成过程中，赖氨酸残基间发生了交联；并且只有在铜离子存在下交联才会发生，否则弹性蛋白将成为无弹性粘性组织。细胞外基质生物学合成：哺乳动物中，细胞外基质的成分由成纤维细胞及成骨细胞（Osteoblast）合成，其中前者位于皮肤、肌腱及其它结缔组织中，后者位于骨骼中。胶原蛋白、非胶原糖蛋白等物质在这些细胞中被合成，并通过胞外分泌（Exocytosis）释放到其外部，在胞外完成组装。例如，胶原蛋白在组装前以原骨胶原（Procollagen）的形式在这两种细胞中被合成，其在N端及C段各比胶原蛋白多一段保护性肽链。当原骨胶原被分泌到胞外时，存在于细胞外的成骨胶原蛋白酶（Procollagen proteinase）将两端的保护性肽链切去，并完成胶原蛋白高级结构的组装。部分人群的这一蛋白酶存在缺陷，会导致细胞外基质的紧致性丧失，产生皮肤的过度伸展性（Hyperextensibility）。这一疾病称为Ehlers‐Danlos综合征。

http://baike.baidu.com/view/32273.htm?fr=ala0_1_1细胞膜上的糖蛋白，也就是寡糖链是决定细胞的特异性的

细胞壁：支持保护细胞膜：细胞的边界；控制物质的进出；信息交流细胞质：细胞代谢的主要场所细胞核：细胞的代谢遗传控制中心；遗传信息库

中学阶段不算，大学算

用用英文的维基百科吧

细胞由水脂肪蛋白质和核酸组成。它的结构主要由细胞膜细胞质细胞核组成。它的主要作用是维持人的生命。人的生命就是由细胞构成的。没有细胞就没有人的生命。

真核细胞的主要的细胞结构有细胞壁细胞膜，细胞质，和细胞核

细胞质膜曾称细胞膜，是指包围在细胞表面的一层极薄的膜，主要由膜脂和膜蛋白所组成。细胞质膜的基本作用是维护细胞内微环境的相对稳定，并参与同外界环境进行物质交换、能量和信息传递。另外，在细胞的生存、生长、分裂、分化中起重要作用。真核生物除了具有细胞表面膜外，细胞质中还有许多由膜分隔成的各种细胞器，这些细胞器的膜结构与质膜相似，但功能有所不同，这些膜称为内膜（internal membrane）。内膜包括细胞核膜、内质网膜、高尔基体膜等。由于细菌没有内膜，所以细菌的细胞质膜代行胞质膜的作用。作用1，保护作用：细胞外被具有一定的保护作用，去掉细胞外被，并不会直接损伤质膜.2，细胞识别：细胞识别与构成细胞外被的寡糖链密切相关.寡糖链由质膜糖蛋白和糖脂伸出，每种细胞寡糖链的单糖残基具有一定的排列顺序，编成了细胞表面的密码，它是细胞的"指纹",为细胞的识别形成了分子基础

细胞质膜在细胞的生存、生长、分裂、分化中起重要作用。细胞质膜(plasmamembrane)曾称细胞膜（cellmembrane），是指包围在细胞表面的一层极薄的膜，主要由膜脂和膜蛋白所组成。细胞质膜的基本作用是维护细胞内微环境的相对稳定，并参与同外界环境进行物质交换、能量和信息传递。另外，在细胞的生存、生长、分裂、分化中起重要作用。真核生物除了具有细胞表面膜外，细胞质中还有许多由膜分隔成的各种细胞器，这些细胞器的膜结构与质膜相似，但功能有所不同，这些膜称为内膜（internalmembrane）。内膜包括细胞核膜、内质网膜、高尔基体膜等。由于细菌没有内膜，所以细菌的细胞质膜代行胞质膜的作用。

细胞核，细胞质，细胞膜

细胞质膜的不对称性是指细胞质膜脂双层中各种成分不是均匀分布的，包括种类和数量的不均匀。 　　■ 不对称性的表现 　　膜的主要成分是蛋白、脂和糖，膜的不对称性主要是指这些成分分布的不对称以及这些分子在方向上的不对称。 　　● 膜脂的不对称性 膜脂的不对称性表现在脂双层中分布的各类脂的比例不同， 各种细胞的膜脂不对称性差异很大。　　● 膜蛋白的不对称 每种膜蛋白在膜中都有特定的排布方向，与其功能相适应，这是膜蛋白不对称性的主要因素。膜蛋白的不对称性包括外周蛋白分布的不对称以及整合蛋白内外两侧氨基酸残基数目的不对称。图3-30 红细胞血型糖蛋白A在质膜中不对称分布 　　● 膜糖的不对称 膜糖以糖蛋白或糖脂的形式存在，无论是糖蛋白还是糖脂的糖基都是位于膜的外表面。　　■ 不对称性的意义 　　膜脂、膜蛋白及膜糖分布的不对称性导致了膜功能的不对称性和方向性。保证了生命活动的高度有序性。 　　膜结构不对称性的意义是什么？ 　　■ 不对称性的研究方法 　　研究膜结构不对称性的方法有很多种，其中最重要的就是冰冻断裂技术，此外还有同位素标记法、酶水解法等。

细胞膜(cell membrane)又称细胞质膜（plasma membrane）。细胞表面的一层薄膜。有时称为细胞外膜或原生质膜。细胞膜的化学组成基本相同，主要由脂类、蛋白质和糖类组成。各成分含量分别约为50%、42%、2%~8%。此外，细胞膜中还含有少量水分、无机盐与金属离子等。细胞膜是防止细胞外物质自由进入细胞的屏障，它保证了细胞内环境的相对稳定，使各种生化反应能够有序运行。但是细胞 必须与周围环境发生信息、物质与能量的交换，才能完成特定的生理功能。因此细胞必须具备一套物质转运体系，用来获得所需物质和排出代谢废物，据估计细胞膜上与物质转运有关的蛋白占核基因编码蛋白的15~30%，细胞用在物质转运方面的能量达细胞总消耗能量的三分之二。 　　原始生命向细胞进化所获得的重要形态特征之一，是生命物质外面出现了一层膜性结构，即细胞膜。细胞膜位于细胞表面，厚度通常为7～8nm，由脂类和蛋白质组成。它最重要的特性是半透性，或称选择透过性，对进出入细胞的物质有很强的选择透过性。细胞膜和细胞内膜系统总称为生物膜（biomembrane），具有相同的基本结构特征。 　　细胞膜又称质膜（plasmalemma），是位于原生质体外围、紧贴细胞壁的膜结构。组成质膜的主要物质是蛋白质和脂类，以及少量的多糖、微量的核酸、金属离子和水。在电子显微镜下，用四氧化锇固定的细胞膜具有明显的“暗-明-暗”三条平行的带，其内、外两层暗带由蛋白质分子组成，中间一层明带由双层脂类分子组成，三者的厚度分别约为2.5 nm、3.5 nm和2.5nm，这样的膜称为单位膜（unit membrane）或生物膜（biomembrane）细胞膜有重要的生理功能，它即使细胞维持稳定代谢的胞内环境，又能调节和选择物质进出细胞。细胞膜通过胞饮作用（pinocytosis）、吞噬作用（phagocytosis）或胞吐作用（exocytosis）吸收、消化和外排细胞膜外、内的物质。在细胞识别、信号传递、纤维素合成和微纤丝的组装等方面，质膜也发挥重要作用。有些细胞间的信息交流并不是考细胞膜上的受体来实现的，比如某些细胞分泌的甾醇类物质，这些物质可以作为信号，与其他细胞进行信息交流，但是这些物质并不是和细胞膜上的受体结合的，而是穿过细胞膜，与细胞核内或细胞质内的某些受体相结合，从而介导两个细胞间的信息交流的！所以说细胞膜的生理作用并不是很大。只是用来保护细胞。

1分泌功能2、排泄功能3、免疫功能

百科

是细胞的边界是由双层磷脂分子构成，并含有一些蛋白质的膜，且有选择透过性

细胞膜，细胞质细胞核。你可以把细胞看成一个球体，细胞膜，就是最外面的那一层，细胞质是里面流动的液体，细胞核就是里面的中心物质，遗传的物质都在细胞核里。

生物膜是由磷脂双分子层和蛋白质组成的 元素上上磷脂由CHONP组成。蛋白质几乎是糖蛋白组成。蛋白质和通透性有关，如主动运输，糖蛋白就是载体。而有时候糖蛋白也是黏着基。缺少这东西就会呈游离状态扩散。癌细胞很不幸就有这个特点，而他的糖蛋白数量就受到了遗传物质改变带来的影响而减少。数量的话，磷脂双分子层，当然是由两层磷脂组成啊。有亲水的有疏水的。

概述 　　细胞质膜（plasma membrane）是指包围在细胞表面的一层极薄的膜（图3-1），基本作用是保持细胞内微环境的相对稳定， 并参与同外界环境进行物质交换、能量和信息传递。另外， 细胞质膜在细胞的生存、生长、分裂、 分化中起重要作用。 　　真核生物除了具有细胞表面膜外，还有胞质膜（cytoplasmic membrane，图3-2）。细胞的膜结构 　　膜（membrane）是细胞的重要结构， 包括细胞质膜（plasma membrane）、内膜（internal membrane）， 习惯上把细胞所有膜结构统称为生物膜（biomembrane，图3-3）。

细胞外被是指动物细胞表面存在着一层富含糖类物质的结构，又叫糖萼，是由构成质膜的糖蛋白和糖脂伸出的寡糖链组成的，实质上是质膜结构的一部分。用重金属染料如：钌红染色后，在电镜下可显示厚约10~20nm的结构，边界不甚明确。扩展资料：质膜(plasmamembrane)是每个细胞把自己的内容物包围起来的一层界膜又称细胞膜(cellmembrane)，一般厚度在5～10nm。质膜与细胞内膜(即各种细胞器的膜)具有共同的结构和相近的功能，统称为生物膜，也常统一简称为膜(membrane)。质膜使细胞与外界环境有所分隔，而又保持种种联系。它首先是一个具有高度选择性的滤过装置和主动的运输装置，保持着细胞内外的物质浓度差异，控制着营养成分的进入细胞和废物、分泌物的排出细胞。其次它是细胞对外界信号的感受装置，介导了细胞外因子对细胞引发的各种反应。它还是细胞与相邻细胞和细胞外基质的连接中介。而内膜则将细胞内部分隔成不同的区室(compartments)，让细胞内各种化学反应在相对隔离的微环境中进行。参考资料来源：百度百科-细胞外被参考资料来源：百度百科-质膜

人体进入磁共振室后，在强磁场环境下，氢原子的自旋方向会发生改变，产生塞曼分裂，这是磁共振成像（MRI）的基础原理之一。目前的研究表明，磁共振成像过程中所用的强磁场和无线电频率对人体没有直接的有害影响。具体来说，磁共振成像中使用的磁场在强度上与地球磁场相比仍然较小，且无线电频率低于微波和无线电广播所用的频率范围，因此不会对人体产生伤害。然而，进入磁共振室的过程中，由于磁场变化和噪声等原因，有些人可能会感到头晕、恶心、呕吐等不适，这些是由于人体对环境变化的生理反应。

naive 原始；primed始发

naive和primed的胚胎干细胞都具有向三个胚层各种组织类型细胞分化的能力。最大的不同是，naive的ES具有全能性，具有形成嵌合胚胎的能力，即将naive的ES显微注射到一个囊胚腔内，能够参与后者胚胎发育，或者将naive的ES注射到一个四倍体胚胎中，能够形成完全由naive的ES来源的胚胎。而primed的ES不具备形成嵌合胚胎的能力。此外，就primed的ES而言，不同细胞系之间基因表达的异质性比较大，存在细胞系之间分化能力的差异，而naive的ES在不同细胞系之间基因表达的异质性较小，分化能力不存在明显差别。最后，对于小鼠ES，naive的ES具有向滋养外胚层分化的能力，而primed的ES（即epiESCs）向滋养外胚层分化能力差。而人类，primed的ES（即传统的hESCs）也具有向滋养外胚层分化的能力，这个是人与小鼠ES的一个差别。

naive和primed的胚胎干细胞都具有向三个胚层各种组织类型细胞分化的能力。最大的不同是，naive的ES具有全能性，具有形成嵌合胚胎的能力，即将naive的ES显微注射到一个囊胚腔内，能够参与后者胚胎发育，或者将naive的ES注射到一个四倍体胚胎中，能够形成完全由naive的ES来源的胚胎。而primed的ES不具备形成嵌合胚胎的能力。此外，就primed的ES而言，不同细胞系之间基因表达的异质性比较大，存在细胞系之间分化能力的差异，而naive的ES在不同细胞系之间基因表达的异质性较小，分化能力不存在明显差别。最后，对于小鼠ES，naive的ES具有向滋养外胚层分化的能力，而primed的ES（即epiESCs）向滋养外胚层分化能力差。而人类，primed的ES（即传统的hESCs）也具有向滋养外胚层分化的能力，这个是人与小鼠ES的一个差别。

naive和primed的胚胎干细胞都具有向三个胚层各种组织类型细胞分化的能力。最大的不同是，naive的ES具有全能性，具有形成嵌合胚胎的能力，即将naive的ES显微注射到一个囊胚腔内，能够参与后者胚胎发育，或者将naive的ES注射到一个四倍体胚胎中，能够形成完全由naive的ES来源的胚胎。而primed的ES不具备形成嵌合胚胎的能力。此外，就primed的ES而言，不同细胞系之间基因表达的异质性比较大，存在细胞系之间分化能力的差异，而naive的ES在不同细胞系之间基因表达的异质性较小，分化能力不存在明显差别。最后，对于小鼠ES，naive的ES具有向滋养外胚层分化的能力，而primed的ES（即epiESCs）向滋养外胚层分化能力差。而人类，primed的ES（即传统的hESCs）也具有向滋养外胚层分化的能力，这个是人与小鼠ES的一个差别。

DNA凝胶电泳的结果判断有误。正常活细胞的DNA 电泳为一条区带；细胞凋亡的DNA 电泳为梯状条带(DNA ladder)；坏死细胞的DNA 电泳类似血抹片时的连续条带。郭燕子,符健.肿瘤细胞凋亡及常用检测方法[J].中国热带医学,2017,17(04):413-417.

一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。二、DNA凝胶电泳（一）检测原理细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。（二）结果判断正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER）条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。（一）检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；2、在微定量板上吸附组蛋白体；3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合；4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合；5、加酶的底物，测光吸收制。（二）用途该法敏感性高，可检测5*100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。四、流式细胞仪分析（一）检测原理细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。（二）应用价值流式细胞仪检测具有以下特点：1）、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确2）、可以做许多相关性分析3）、结合被检测细胞的DNA含量的分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期■检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性液增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。利用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有抗拒性，荧光染色很浅，凋亡细胞主要摄取Hoecha染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI）而呈强的红色荧光。■DNA片断原位标记法凋亡细胞DNA片断原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，DUTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3.的羟基（－OH）端结合，经显色反应后检测DNA裂解点的技术。DNA片段原位标记法有二种：1、原位缺口转移（in situ nick-translation，ISNT）技术，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸连接到断裂DNA的3－OH端2、原位缺口末端标记技术（in situ end labelling technique，ISEL），即TUNEL法，它是利用TdT将标记的DUPT接到3－OH端。研究证明，TUNEL法的敏感性远高于ISNT，尤其对早期凋亡的检测，TUNEL为合适。■检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法1、原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V（Annexin V）是钙依赖性的磷脂结合蛋白，它于PS具有高度的结合力。因此，Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V，将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），同时结合使用PI拒染法（因坏死细胞PS亦暴露于细胞膜外测，且对PI高染）进行凋亡细胞双染法后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。2、结果判断：正常活细胞Annexin V 、PI均低染；凋亡细胞Annexin V高染、PI低染；坏死细胞Annexin V/PI均高染。3、应用价值：细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。又Annexin V联合PI染色不需固定细胞，可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此，Annexin V联合PI法更加省时，结果更为可靠，是最为理想的检测细胞凋亡的方法。

似乎不能，细菌太小不适合流式。我觉得还是固体培养基的稀释法就可以。要多精确？ --那你试试用吸光度测OD值。细菌多，光吸收多，这是这个方法的原理，只是不能得到一个确切的数值。细菌总量还可以用蛋白总量来替代。凯氏定氮法；用“菌体蛋白ELISA定量”检索得到另一个方法。这些方法不能得到一个数字，但你要的是前后对比，可以采用。

理论上是可以的。原理和检测细胞因子相同。BEADS 为基础的MULIPEX检测。一下子可以同时测很多个目标。如果你只测一个IGG4，成本太高了，比如用ELISA.

。。。。。。问你们老板吧。。。。。。话说夹心饼干懂么

朋友你好！所谓免疫是指利用抗原抗体特异性结合原理对你目的蛋白进行染色或标记；所谓表型一般指某种特异性蛋白的表达。因此除了流式，你还可以用免疫荧光染色并用con-focal观察，事实上，只要你有目的蛋白的抗体以及直接或间接相连的标记物，那么其他任何手段（比如荧光标记物报告实验Luciferase）都是可行的。希望帮到你，欢迎追问~

由PE和Cy7这两种荧光素通过共价结合在一起。荧光素在受到适当波长的光线照射时，这个现象叫做荧光。激发光和释放光波长的差异是每种荧光素的分子特性所决定的。PE的最佳激发光在560纳米。这样大大增加了激发光和释放光波长的差别PE-Cy7是一种复合荧光素，而最强释放光在570纳米左右。而合成PE-cy7后，释放光还没有离开，就又Cy7这个分子吸收，成为Cy7的激发光，Cy7的释放光波长最强处为770纳米，由于两个分子的距离很小，会释放出波长比照射光长的光

你贴一个图上来，就图说容易一些。散点图，横坐标和纵坐标一般都是不同的荧光。一般都有的是FSC和SSC。这个一般代表细胞的大小FSC和内部的折光性SSC。其他的散点图，可以代表双重染色时，每种荧光的信号强弱

1、取得完全无血液残留的肺脏：实验前将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏。2、消化肺组织：常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用时间短暂，容易自我降解等问题。DobbsLG等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮细胞[9]。胰蛋白酶消化没有选择性，会带来像内皮细胞和间质细胞等一些不能在后面的分离步骤中去除的杂质细胞，因此弹性蛋白酶更有助于提高上皮细胞的纯度和产量。与此相反，CunninghamAC等发现，与弹性蛋白酶相比，用胰蛋白酶可以获得更大产量的Ⅱ型上皮细胞[10]。胶原酶可以用来辅助消化细胞间质。用几种酶混合的方法比单一酶消化效果更好，但目前还没有文献定量描述最优化的酶消化方法。FinkelsteinJN等发现可以通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。作者在自己的实验中也证实了通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化效果更好。3、分离纯化细胞：上皮细胞的分离纯化技术经过二三十年的发展日渐成熟，呈现多样化的特点。目前对细胞的分离纯化主要有以下几种方法：(1)密度梯度离心：密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同，在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。这是最早用于分离Ⅱ型上皮细胞的方法，至今仍在使用。用ficoll或percoll不连续梯度离心，猪肺泡Ⅱ型细胞最终纯度可以达到70%-85%左右[11-12]。沉降系数与细胞的直径和天然密度有关。由于Ⅱ型细胞与其他细胞存在密度和大小的交叉(如巨噬细胞)，仅仅通过离心并不能有效去除杂细胞。Kikkawa(1974)让巨噬细胞吞噬一些重颗粒(如硫酸钡)，改变其密度，可以帮助区分巨噬细胞和上皮细胞。离心后的纯度达到94%,但产量明显减少[8]。上皮细胞的大小和密度变化范围较大，用密度梯度离心要丢掉和其他细胞重叠的细胞层，这必然会造成某些密度大的Ⅱ型细胞损失，产量大大降低。(2)滤膜分离：滤膜分离的原理是根据细胞的大小不同来进行分离。Ⅱ型上皮细胞约10μm，比巨噬细胞(约25μm)和Ⅰ型细胞(50μm-100μm)小，用150μm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片，30μm～40μm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型细胞和部分巨噬细胞[13]，采用15μm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单，它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。(3)流式细胞技术：流式细胞技术分离的原理是根据不同细胞之间的荧光差异。根据不同种细胞的特征识别，用荧光物质标记筛选。上皮细胞内含有丰富的脂类物质，用亲脂性荧光素标记，可以得到纯度很高的细胞。FunkhouserJD等用抗Ⅱ型上皮细胞的单抗进行免疫荧光标记，再用流式细胞仪进行筛选，得到96%的Ⅱ型上皮细胞[14]。但荧光素对被标记细胞有害。RochatTR等发现自然荧光和直角光散射可以区分巨噬细胞和单核细胞，这给不经荧光标记分离上皮细胞提供了可能[15]。流式技术分离细胞的产量很低，但纯度极高。这种技术经过完善在将来会更有吸引力。(4)免疫黏附：免疫黏附的原理是各种细胞的膜表面有不同的免疫活性物质。巨噬细胞和其他大多数非Ⅱ型细胞表面都有IgG上的Fc片段的受体。Uhal(1989)用IgG包被塑料板，把细胞悬液置于板上，巨噬细胞和其他大多数非Ⅱ型细胞因为含有Fc片段的受体而与IgG结合，吸附到板上，不黏附的Ⅱ型细胞被冲洗下来[16]。经过多年的摸索，这种方法近几年已开始应用，简便易行，可除去绝大多数的巨噬细胞，有效的提高上皮细胞的纯度。(5)贴壁选择：贴壁选择的原理是各种细胞完成贴壁的时间不同，这种特性用在培养时做筛选。根据最终目的，综合其中几种方法能达到较好的效果。例如先用滤膜过滤，再用IgG包被法

液体闪烁计数器 液体闪烁计数器[1](liquid scintillation counter)是使用液体闪烁体（闪烁液）接受射线并转换成荧光光子的放射性计量仪。 1. 仪器原理简介 液体闪烁计数器主要测定发生β核衰变的放射性核素，尤其对低能β更为有效。其基本原理是依据射线与物质相互作用产生荧光效应。首先是闪烁溶剂分子吸收射线能量成为激发态，再回到基态时将能量传递给闪烁体分子，闪烁体分子由激发态回到基态时，发出荧光光子。荧光光子被光电倍增管（PM）接收转换为光电子，再经倍增，在PM阳极上收集到好多光电子，以脉冲信号形式输送出去。将信号符合、放大、分析、显示，表示出样品液中放射性强弱与大小。 2. 主要功能 液体闪烁计数器虽以测定低能β放射性核素为主，但近几年来，随着核技术应用领域的不断拓展，还开发出许多其它领域的测试功能。该仪器一次可测300个样，自动换样、显示、打印，有三个计数道，对3H计数效率大于60%，14C计数效率大于95%。 2.1 常用放射性核素测定 液闪计数器可用于3H、14C、32P、33P、35S、45Ca、55Fe、36Cl、86Rb、65Zn、90Sr、203Hg等含有放射性核素的动植物、微生物和非生物样品测定。 2.2 H number法猝灭校正 在测定样品放射性的同时，测出H#数值，可以直观的判断出该样品的猝灭程度。 2.3 两相检测 用于检测含水放射性样品与闪烁液的分相问题，以避免由此而引起的计数效率下降。 2.4 自动猝灭补偿（AQC） 通过最佳的窗口等条件设置，以期使猝灭样品达到较高的计数效率。 2.5 随机符合监测（RCM） 可用于监测制样过程中化学发光引起的单光子事件的假计数，可以从测定结果中扣除。 2.6 能谱寻找与分析 此功能对未知核素的β能谱定位与分布做出可靠准确的测量，为道宽设置提供依据。 2.7 单光子监测（SPM） 可用于生物发光与生物中单光子事件的测定。 2.8 半衰期校正 对于短半衰期核素可校正出放射性强度与时间的关系。给出现存放射性强度的量。 2.9 双标与三标记测定 通过设置不同道宽等条件，测定同一个样品中的双标记或三标记放射性，区分出各个标记的放射性强度。 3. 应用 液体闪烁计数器主要用于探测一些低能β核素示踪原子的放射性样品，目前已广泛的应用于工业、农业、生物医学、分子生物学、环境科学、考古与地质构造等领域科研工作中的核素示踪与核辐射测量。主要包括以下几个方面： 3.1 细胞与分子生物学 主要利用3H、14C、32P等放射性核素进行体内或体外标记，研究细胞生物体内核酸、蛋白质等生物大分子的合成与降解代谢及其转化途径。尤其在核酸分子标记及分子杂交、探针制备等方面应用更为广泛。 3.2 生物医学 利用放射免疫分析技术测定动物或人体内激素等微量活性物质，研究动物和人体体内内分泌和其它生理代谢行为。 3.3 动植物营养 通过对大量或微量元素标记测定，研究动物、植物对营养元素、矿质元素的吸收利用率、生理代谢及其缺素症，为研究防治对策提供依据。 3.4 环境科学 利用标记示踪原子，研究有毒有害物质在环境体系的行为、去向和污染程度，包括用于重金属和农药等污染研究，以及在环境中水体、大气、土壤、居室内放射性天然背景值的监测。 3.5 生物体中发光测定 利用单光子监测了测定生物体内发光与单光子事件和环境变化关系的研究。 下面的链接 是关于 流式细胞仪的http://baike.baidu.com/view/87884.htm

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。目前临床中运用流式细胞仪进行外周血白细胞、骨髓细胞以及肿瘤细胞等的检测是临床检测的重要组成部分。

您好，现在这个行业发展的不错，生物实验技术外包也会跟着发展，比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展，或者涉及的设备比较昂贵，技术要求高，都会寻求外包。但是现在竞争也比较大，的得看单位这边整体做的怎么样。 其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物。

目录 1 拼音 2 英文参考 3 流式细胞术发展简史 4 工作原理 5 检测范围 6 流式细胞术的临床应用 7 科研应用 8 常规检测时的样品制备 8.1 直接免疫荧光标记法 8.2 间接免疫荧光标记法 9 质量控制和注意事项 9.1 流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制 9.2 DNA倍体分析的质量控制 9.3 操作 9.4 资料分析 1 拼音 liú shì xì bāo shù 2 英文参考 flow cytometry 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 3 流式细胞术发展简史 流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是：①测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。 概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。 1934年，Moldavan1首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置计测的设想，在此之前，人们还习惯于测量静止的细胞，因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成较大的细胞和细胞团块的淤阻。1953年Crosland –Taylor根据雷诺对牛顿流体在圆形管中流动规律的研究认识到：管中轴线流过的鞘液流速越快，载物通过的能力越强，并具有较强的流体动力聚集作用。于是设计了一个流动室，使待分析的细胞悬浮液都集聚在圆管轴线附近流过，外层包围着鞘液；细胞悬浮液和鞘液都在作层液。这就奠定了现代流式细胞术中的液流技术基础。 1956年，Coulter在多年研究的基础上利用Coulter效应生产了Coulter 计数器。其基本原理是：使细胞通过一个小孔，只在细胞与悬浮的介质之间存在着导电性上的差异，便会影响小孔道的电阻特性，从而形成电脉冲信号，测量电脉冲的强度和个数则可获得有关细胞大小和数目方面的信息。1967年Holm等设计了通过汞弧光灯激发荧光染色的细胞，再由光电检测设备计数的装置。1973年Steinkamp设计了一种利用激光激发双色荧光色素标记的细胞，既能分析计数，又能进行细胞分选的装置。这样就基本完成了现代FCM计数技术的主要历程。 现代的FCM数据采集和分析技术是从组织化学发源的，其开拓者是Kamentsky。1965年，Kamentsky在组织化学的基础上提出了两个新设想：（1）细胞的组分是可以用光光度学来定量测定的，即分光光度术可以定量地获得有关细胞组织化学的重要信息。（2）细胞的不同组分可以同时进行多参数测量，从而可以对细胞进行分类。换句话说，对同一细胞可以同时获得有关不同组分的多方面信息，用作鉴别细胞的依据。Kamentsky不仅思路敏捷，而且能身体力行。他是第一个把计算机接口接到仪器上并记录分析了多参数数据的人，也是第一个采用了二维直方图来显示和分析多参数的人。 流式细胞术在细胞化学中的应用的先驱者是Van Dilla和美国的Los Alamos小组。他们在1967年研制出流液束、照明光轴、检测系统光轴三者相互正交的流式细胞计的基础上，首次用荧光Feulgen反应对DNA染色显示出DNA的活性与荧光之间存在着线性关系，并在DNA的直方图上清楚地显示出细胞周期的各个时相。Gohde 和Dittrich接着把这项技术推向实用，他们用流式细胞术测定细胞周期借以研究细胞药代动力学问题。FCM用于免疫组织化学中的关键是对细胞进行免疫荧光染色，其它和在细胞化学的应用并没有多大差异。 近20年来，国内外在FCM上都做了不少的研究和应用工作，也取得了不少成果。特别是随着仪器和方法和日臻完善，人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作以扩大FCM的应用领域和使用效果。FCM在免疫组织化学中的应用也大致差不多，并注重了在临床应用的推广。 4 工作原理 流式细胞术 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。 这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模／数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。 检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 5 检测范围 1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。 2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。 6 流式细胞术的临床应用 1．流式细胞术在肿瘤学中的应用：流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡； 2．流式细胞术在血液学中的应用：检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞（CD34+）计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测； 3．流式细胞术在免疫学中的应用：可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。 7 科研应用 主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。 8 常规检测时的样品制备 8.1 直接免疫荧光标记法 取一定量细胞（约1×106 细胞/ml），直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），孵育20～60分钟后，用PBS（pH7.2 ～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 8.2 间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（约1X106 细胞/ml），先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原抗体抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 9 质量控制和注意事项 流式细胞仪并非是完全自动化的仪器，准确的实验结果还需要准确的人工技术配合，所以标本制备需要规范，仪器本身亦需要质量控制。 9.1 流式细胞术免疫学检测的影响因素和质量控制 流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用，其免疫荧光染色的标本制备非常重要，常常由于标本制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等影响检测结果。解决这些影响因素的方法如下： (1) 确保标本上机检测前的浓度为1X106/ml，细胞浓度过低直接影响检测结果。 (2) 使用蛋白封闭剂，封闭非特异结合位点，尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。 (3) 荧光抗体染色后充分洗涤，注意混匀和离心速度，减少重叠细胞和细胞碎片。 (4) 设置对照样品，采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。 (5)判定结果时，应注意减去本底荧光，为使免疫荧光的定量分析更精确，应用计算机程序软件，用拟合曲线方法从实验组的曲线峰值中减去对照组的曲线峰值，可以得到更准确的免疫荧光定量结果。 (6) 注意染色后避光，保证细胞免疫荧光的稳定。 9.2 DNA倍体分析的质量控制 DNA倍体分析的质量控制仍没有统一的标准， 各文献报道的实验结果差异较大，1993年10月美国癌症研究组织制定了FCMDNA定的统一标准，我们根据这些标准并结合国内有经验的专家多年的实践，对FCM的DNA分析技术的质控和注意事项进行说明。 (1) 手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时，要避免出血坏死组织。 (2) 标本采集后要及时固定或深低温保存，以免组织发生自溶，DNA降解，而造成测试结果的误差。 (3) 固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度，70%的乙醇固定效果较好。 (4) 单细胞悬液制备过程中，注意将待测细胞成分分离出来，减少其他成分的干扰，并注意不要损伤该群细胞。 (5) 细胞样品的采集要保证足够的细胞浓度，即1X106/ml，杂质、碎片、团块和重叠细胞应<2%，对肿瘤细胞DNA异倍体的分析样品，至少有20%的肿瘤细胞存在。 (6) 石蜡包埋组织单细胞制备时要注意：取材时应选取无自溶、坏死的组织，对肿瘤组织标本，选取含肿瘤细胞丰富的区域；石蜡组织片的厚度要适宜，最好为40～50μm 。过薄或过厚的切片均会影响检测结果；彻底脱蜡，以免残留的石蜡影响酶的消化活性，验证脱蜡是否完全的方法是弃去二甲苯，加入100%乙醇，如果无絮状物浮起，说明蜡已脱净；水化要充分，使组织还原到与新鲜组织相似的状态；注意消化的时间和消化酶的活性。常规使用0.5%胃蛋白酶，pH 1.5。 9.3 操作 (1)流式细胞仪在整个工作过程中处于最佳状态，能保证定量检测的准确性和检测精度。使用标准样品调整仪器的变异系数在最小范围，分辨率在最好状态，能避免在测量过程中仪器条件的变化引起的检测误差。 (2)评价仪器精度的重要指标是仪器的变异系数（CV），对于校准样品，其CV值越小越好，CV值越小，说明仪器校正的精度越高。校准样品包括非生物样品（荧光微球）和生物细胞样品（人淋巴细胞、鸡红细胞等）。目前，非生物荧光微球已有商品试剂，CV一般<2%～3%。 9.4 资料分析 (1) 当样品中碎片杂质或团块过多，所测细胞数在20%以下，组方图的基线抬高时，应放弃分析处理。 (2) 做细胞周期分析时，样品细胞数应在1万个，排除碎片、杂质和团块，当异倍体细胞数占总细胞数10%以下时，需要结合其他诊断指标，不可盲目下结论，至少异倍体细胞占总细胞数的20%以上，可以确定异倍体的存在。 (3)DNA分析时，正常二倍体细胞组方图CV值>8%时放弃分析，但肿瘤细胞的CV值>8%，与肿瘤细胞的异质性有关。另外，DNA倍体分析时，同源组织的不同个体会出现10%的漂移。

一、形态学观察方法　　1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。　　2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。　　3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。　　4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。　　二、DNA凝胶电泳　　（一）检测原理　　细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。　　（二）结果判断　　正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER）条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。　　三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定　　凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。　　（一）检测步骤　　1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；　　2、在微定量板上吸附组蛋白体；　　3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合；　　4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合；　　5、加酶的底物，测光吸收制。　　（二）用途　　该法敏感性高，可检测5*100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。　　四、流式细胞仪分析　　（一）检测原理　　细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。　　（二）应用价值　　流式细胞仪检测具有以下特点：　　1）、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确　　2）、可以做许多相关性分析　　3）、结合被检测细胞的DNA含量的分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期　　■检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法　　细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性液增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。　　利用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有抗拒性，荧光染色很浅，凋亡细胞主要摄取Hoecha染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI）而呈强的红色荧光。　　■DNA片断原位标记法　　凋亡细胞DNA片断原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，DUTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3.的羟基（－OH）端结合，经显色反应后检测DNA裂解点的技术。　　DNA片段原位标记法有二种：　　1、原位缺口转移（in situ nick-translation，ISNT）技术，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸连接到断裂DNA的3－OH端　　2、原位缺口末端标记技术（in situ end labelling technique，ISEL），即TUNEL法，它是利用TdT将标记的DUPT接到3－OH端。研究证明，TUNEL法的敏感性远高于ISNT，尤其对早期凋亡的检测，TUNEL为合适。　　■检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法　　1、原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V（Annexin V）是钙依赖性的磷脂结合蛋白，它于PS具有高度的结合力。因此，Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V，将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），同时结合使用PI拒染法（因坏死细胞PS亦暴露于细胞膜外测，且对PI高染）进行凋亡细胞双染法后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。　　2、结果判断：正常活细胞Annexin V 、PI均低染；凋亡细胞Annexin V高染、PI低染；坏死细胞Annexin V/PI均高染。　　3、应用价值：细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。又Annexin V联合PI染色不需固定细胞，可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此，Annexin V联合PI法更加省时，结果更为可靠，是最为理想的检测细胞凋亡的方法

不能直接测量。这2种药物本身没有荧光，也不能固定在细胞内再用荧光抗体识别。流式一般是用来检测用药后细胞的反应，比如凋亡，细胞周期的变化等等

流式细胞仪（Flowcytometer）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节分辨率为零。流式细胞仪主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。

请看维基百科相关记述：流式细胞术维基百科，自由的百科全书(重定向自流式细胞仪)Jump to: navigation, searchImage:03wiki-zn-frontpage-icon.gif流式细胞术正在翻译。目前已翻译90%，原文在en:flow cytometry。希望您积极翻译与修订。流式细胞术(英文flow cytometry)是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。目录[隐藏] * 1 原理 * 2 流式细胞仪(flow cytometer) * 3 应用 * 4 参见[编辑]原理一束单色光（通常是激光）照到流体力学聚焦的一股流体上。若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点，其中一个和激光在同一直在线（称作前散射(FSC)），其它几个和激光垂直（旁散射(SSC)和一个或几个荧光监测器）。当每个悬浮颗粒通过光束时会按某种方式把光散射，同时所带有的荧光化合物被激发并发射出频率低于激发光的荧光。这些散射光和荧光的组合数据被检测器记录，根据各检测器亮度的波动（每个细胞会显出一个散射或荧光的峰）就能够推算出每个颗粒的物理和化学性质。前散射与细胞体积相关，而旁散射取决于颗粒的内部复杂程度（比如核的形状、胞质内颗粒的种类或者末的粗糙程度）。可以检测的参数有： * 细胞的体积和形态复杂程度 * 细胞中的色素 * DNA（细胞周期分析、细胞动力学、细胞增殖等） * RNA * 染色体分析和分选（文库构建、染色体涂染） * 蛋白质 * 细胞表面抗原（CD标记） * 胞内抗原（各种细胞因子(cytokine)、次级媒介等） * 核抗原 * 酶活性 * pH，胞内离子化的钙、镁，膜电势 * 膜流动性 * 细胞凋亡(apoptosis)（定量检测DNA降解、线粒体膜电位、通透性变化） * 细胞存活能力 * 监测细胞电通透性 * 氧爆作用(oxidative burst) * 研究癌细胞中的多重耐药性(multi-drug resistance, MDR) * 谷胱甘肽 * 各种组合（DNA/表面抗原等等）这个列表非常长，而且在不断地扩展。[编辑]流式细胞仪(flow cytometer)流式细胞仪又称荧光激活细胞分选器、荧光活化细胞分类计（FACS，Fluorescence Activated Cell Sorter）。现代的流式细胞仪每秒可以实时检测几千个颗粒，并且可以主动分离具有不同特性的颗粒。流式细胞仪和显微镜比较像，但能够对大量的单个细胞利用一组参数进行高通量的自动量化。固体组织需要在检测前制备成单细胞的悬浮液。一个流式细胞仪包括五个组成部分： * 细胞流动系统：液流（鞘液(sheath fluid)）携带细胞，使颗粒以串流形式通过光束。 * 光源：有通常的灯（汞或氙）、高功率水冷的激光源（氩、氪、染料激光）、低功率气冷激光（氩(488nm)，红氦氖(633nm)，绿氦氖，氦镉(紫外)）、偶极激光（蓝、绿、红、紫）。 * 检测和模数转换(analogue-to-digital conversion, ADC)系统：产生前散射、旁散射光和荧光的信号。 * 放大系统，线性或对数放大。 * 计算机，用于分析信号。早期的流式细胞仪主要是实验设备，但目前仪器和相关的试剂有了很广的市场。不同厂商的仪器特性也不同，主要的厂商和品牌如下： * Beckman-Coulter (ex-Coulter): Epics XL/XL-MCL; Epics Altra (Hypersort) (IBM-PC compatible platforms) * Becton, Dickinson: (FACS"s): FACSCAlibur, FACScan, FACSort, FASCSVantage (Mac OS platform) FACS Canto, LSRII, Aria, DiVa (PC PLatform) * Cytomation: MoFlo, Cyan (IBM-PC platform) * Partec/Dako: Galaxy; PAS; CCA; PA (IBM-PC compatible platforms)[编辑]应用流式细胞术在很多领域中都有应用，包括分子生物学、病理学、免疫学和海洋生物学等。在分子生物学中，它主要用于荧光标记的抗体。特异性的抗体与靶细胞上的抗原结合，能够通过流式细胞仪研究这些细胞的特别信息。这在医学（尤其是器官移植、血液学、肿瘤免疫学和化疗、遗传学）中具有很广泛的应用。现代的流式细胞仪具有多个激光和荧光检测器（目前商业用仪器的记录是4个激光和14个检测器），可以用于多个抗体标记，以便在表现型中更准确地区别某个靶群体。流式细胞仪也是很有用的分选仪器。当细胞/颗粒通过时，可以被选择性地加上某种电荷，并在通过电磁场后偏转，从不同出口流出。这样就可以从一个混合物中高速（理论上可达到每秒大约9万个细胞）准确地分离开四类细胞。由流式细胞仪得到的数据可以画成一维的柱状图或者二位或者三维的散点图。The data coming from flow-cytometers can be plotted in 1-D to produce histograms or seen in 2D as dot plots or in 3D with newer software. The regions on these plots can be sequentially separated by a series of subset extractions which are termed gates. Specific gating protocols exist for diagnostic and clinical purposes especially in relation to haematology. The plots are often made on logarithmic scales. Because of overlaping fluorescent dyes, emission spectrum generated interfering signals by detectors signals have to be compensated electronically.海洋中主要的光合生物之一——占海洋浮游生物总细胞数将近1/3的原绿球藻(Prochlorococcus)就是通过流式细胞术发现的。因为其细胞小，叶绿素含量少，在通常的荧光观察中被迅速漂白(bleach)，但由于在流式细胞术中细胞通过光束的时间极短，胞内叶绿素的荧光可被观察到。[编辑]参见 * 荧光显微镜 * 荧光活化细胞分选取自"http://wikipedia.cnblog.org/wiki/%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E8%A1%93"页面分类: 待翻译文章 | 细胞生物学 | 实验室技术 | 解剖病理学 | 血液学 | 医学检验

在2019年的三月份我正式开始做单细胞相关研究工作，有趣的同时也是朋友我们经常误会的是：你是不是用流式细胞术？而我在得知自己要做这单细胞（single cell ）的研究时，在Google搜关键词（single cell ），居然有不少是介绍流式细胞术的。流式细胞术应用到高通量测序领域就变成了微流控技术。可见，把生命科学的视界拉倒单细胞水平的比高通量测序更早的是流式细胞术。 那么在单细胞测序技术出现之前，人们在研究单细胞的时候都是怎么做的呢，都有哪些分析点呢？单细胞测序技术给单细胞研究带来了哪些新的视角？这一切的答案都要求我们对流式细胞术有一个基本的了解。 流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。 流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。 采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。 （1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统 激光光源：气冷式氩离子激光器 分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长 光束成形器：两十字交叉放置的透镜 透镜组：形成平行光，除去室内光 滤片：长通、短通、带通 光电倍增管：FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（荧光） 测得的FS与SS信号通过计算机处理，可得到FS-SS图，由此可仅用散射光信号对未染色的活细胞进行分析或分选。此为血细胞分类的基本原理，但不能分析表面分子。 荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。 每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的光电倍增管。 选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。 线性放大器和对数放大器 通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。 FS：反映颗粒的大小 SS：反映颗粒的内部结构复杂程度 FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少 单参数直方图 双参数直方图:点图 二维等高图 假三维等高图 三参数直方图 多参数分析 双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。 双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。 由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。 等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。 曲线层次越高(越里面的线) 所代表的细胞数愈多。 等高线越密集则表示细胞数变化率越大。 流式细胞仪(FCM)是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。 ①细胞生物学 ：细胞凋亡研究；定量分析细胞周期并分选不同细胞周期时相的细胞；分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表达产物等物质与细胞增殖周期的关系，进行染色体核型分析，并可纯化X或Y染色体。 [详细] ②肿瘤学 ：DNA倍体含量测定是鉴别良、恶性肿瘤的特异指标。近年来已应用DNA倍体测定技术，对白血病、淋巴瘤及肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种实体瘤细胞进行探测。用单克降抗体技术清除血液中的肿瘤细胞。 [详细] ③免疫学 ：研究细胞周期或DNA倍体与细胞表面受体及抗原表达的关系；进行免疫活性细胞的分型与纯化；分析淋巴细胞亚群与疾病的关系；免疫缺陷病如艾滋病的诊断；器官移植后的免疫学监测等。 [详细] ④血液学 ：血液细胞的分类、分型，造血细胞分化的研究，血细胞中各种酶的定量分析，如过氧化物酶、非特异性酯酶等；用NBT及DNA双染色法可研究白血病细胞分化成熟与细胞增殖周期变化的关系，检测母体血液中Rh(+)或抗D抗原阳性细胞，以了解胎儿是否可能因Rh血型不合而发生严重溶血；检测血液中循环免疫复合物可以诊断自身免疫性疾病，如红斑狼疮等。 [详细] ⑤药物学 ：检测药物在细胞中的分布，研究药的作用机制，亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰，Bcl-2凋亡调节蛋白等。 [详细] 细胞凋亡研究 ：细胞凋亡是细胞在基因控制下的有序死亡，在疾病发生、发展中有重要作用，因而研究细胞凋亡有重要意义。细胞凋亡检测方法很多，应用流式细胞仪技术可根据细胞在凋亡过程中发生一系列形态、生化变化从多个角度对细胞凋亡进行定性和定量的测定。 [详细] ** 细胞分选**：流式细胞仪能够分选某一亚群细胞,分选纯度＞95%。目前细胞分选主要用于研究，临床应用较少。利用流式细胞仪分选免疫担当细胞进行细胞免疫学研究也是目前的热门课题。流式细胞仪能够分选出你想得到的任何一亚群细胞，只要你想得到的某一亚群细胞有合适的单克隆抗体标记。 [详细] ** 细胞因子的检测**：随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。本文主要对胞内细胞因子流式细胞技术作介绍。 [详细] ** 血液学应用**：本文向您介绍流式细胞仪在血液研究领域的应用，包括DNA倍体分析及细胞周期分析，淋巴细胞亚群测定，白血病免疫分型，淋巴瘤免疫分型，红细胞疾病诊断，血小板功能分析和血小板病诊断，微小残留白血病检测，白细胞吞噬功能测定，NK和LAK细胞活性测定，造血干/祖细胞测定等。 [详细]

流式细胞仪在使用前，甚至在使用过程中都要精心进行调试，以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节　气体压力大小以获得稳定的液流速度。测量区光路调节　：这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交，而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。

序前言1 概述1.1 流式细胞术基本概念1.2 分析型流式细胞仪介绍1.3 分选型流式细胞仪介绍参考文献2 流式细胞仪的原理2.1 液流系统2.2 光路系统2.3 检测分析系统2.4 分选系统参考文献3 流式图3.1 流式通道3.2 流式直方图3.3 流式散点图3.4 流式等高线图参考文献4 流式细胞术的基本操作与技巧4.1 样品制备4.1.1 独立细胞样品制备4.1.2 免疫器官样品制备4.1.3 实体脏器样品制备4.2 荧光素偶联抗体及其标记方法4.2.1 荧光素4.2.2 荧光素偶联抗体4.2.3 样品封闭4.2.4 荧光素偶联抗体标记4.3 光电倍增管电压设定4.4 对照的设置4.4.1 阴性对照的设置4.4.2 FM.对照4.4.3 阳性对照的设置4.5 补偿调节4.5.1 补偿调节的原理4.5.2 调节补偿的具体方法4.5.3 三色和四色分析补偿调节方法4.5.4 影响补偿大小的因素4.6 阈值设定4.7 流式分析中的死细胞问题4.7.1 减少样品中死细胞比例的方法4.7.2 流式分析时区分死细胞和活细胞的方法4.8 流式分选模式选择4.8.1 纯化模式4.8.2 富集模式4.8.3 单细胞模式4.9 上样速度控制4.9.1 流式分析速度控制4.9.2 流式分选速度控制4.10 分选设门基本原则4.11 流式分选基本步骤参考文献5 流式分析术的应用5.1 细胞群比例测定5.2 表型测定5.3 检测细胞因子5.3.1 胞内染色法检测细胞因子5.3.2 胞内染色法与ELISA法比较5.3.3 CBA法测定细胞因子5.3.4 CBA法与ELISA法比较5.4 检测细胞增殖5.4.1 相对计数法5.4.2 示踪染料标记法5.4.3 Brdu标记法5.4.4 其他方法5.5 检测细胞凋亡5.5.1 annexinV/PI双染色法5.5.2 SYTO/PI双染色法5.5.3 细胞：DNA含量分析法检测细胞凋亡5.5.4 线粒体损伤检测法5.5.5 活化的caspase-3检测法5.5.6 荧光素偶联的caspase抑制剂(FLICA)标记法5.5.7 甲酰胺诱导ssDNA单抗检测法5.5.8 TUNEL法5.6 检测细胞周期5.6.1 非特异性核酸荧光染料标记法5.6.2 特异性细胞周期调节蛋白检测法5.7 检测细胞杀伤能力5.8 检测细胞吞噬功能5.9 检测胞内活化的激酶5.10 检测基因表达5.10.1 GFP报道基因系统5.10.2 JocZ报道基因系统5.10.3 内酰胺酶报道基因系统5.11 微生物学中的应用5.11.1 荧光素偶联抗体直接检测法5.11.2 抗体结合人工荧光微球直接检测法5.11.3 微生物活性流式检测5.11.4 人工微球荧光免疫试验检测抗体5.11.5 荧光原位杂交流式检测法5.11.6 PCR免疫微珠法5.11.7 原位PCR杂交流式检测法5.12 检测钙相关分子5.12.1 检测细胞内游离的钙离子水平5.12.2 检测钙蛋白酶活性5.12.3 检测细胞膜钙泵活性5.13 表观遗传学中的应用5.13.1 ChIP一0n-beads法5.13.2 检测细胞水平组蛋白修饰情况……6 流式分选术的应用参考文献

●细胞生物学新技术进展：介绍细胞生物学技术的发展，随着其经典方法与当代生物医学研究（如分子生物学、生物化学、生物物理学及生物信息学技术等）日益密切的结合，已发展为当代医学研究不可分离的重要手段，有着广阔的应用前景。●肿瘤等细胞的原代培养及鉴定技术：培养肿瘤细胞的应用；肿瘤细胞培养过程；培养肿瘤细胞的特性及鉴定；体外培养细胞的转化、永生化、恶性转化；转移性肿瘤细胞的建立及鉴定。●细胞杂交及突变株制备：细胞杂交的基本方法，杂交细胞的特点，杂交细胞的选择原理，细胞杂交技术应用实例（单克隆抗体的制备），突变株制备的基本原理及基本过程等。●成体干细胞的技术与临床应用研究：干细胞生物学特性的研究、干细胞组织工程的应用基础及干细胞的临床应用研究。●干细胞培养及鉴定技术：介绍包括胚胎干细胞和多种成体干细胞的培养技术及鉴定方法●激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪在细胞生物学研究中的应用：荧光标记基本知识、选择抗体及制作标本的注意事项；.激光扫描共聚焦显微镜的原理、功能及应用；流式细胞仪的原理、功能，图形知识，应用注意。

一、原理在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。二、注意事项1、必须活细胞检测，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时，有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤，导致晚期凋亡或坏死比例非常高，不能反映真实结果。实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞比例。3、由于Annexin-V为钙离子依赖的磷脂结合蛋白，只有在钙离子存在的情况下与PS的亲和力才大，因而在消化细胞时，建议一般不采用含EDTA的消化液。4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）。

用试剂盒可以简化步骤，但并不是必须的。你要知道所用的原理，可以准备独立的各种试剂。比如基因组损伤，可以利用检测磷酸化H2AX的存在。你使用相应的荧光抗体就可以了。

请看维基百科相关记述： 流式细胞术 维基百科，自由的百科全书 (重定向自流式细胞仪) Jump to: navigation, search Image:03wiki-zn-frontpage-icon.gif流式细胞术正在翻译。 目前已翻译90%，原文在en:flow cytometry。希望您积极翻译与修订。 流式细胞术(英文flow cytometry)是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。 目录 [隐藏] * 1 原理 * 2 流式细胞仪(flow cytometer) * 3 应用 * 4 参见 [编辑] 原理 一束单色光（通常是激光）照到流体力学聚焦的一股流体上。若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点，其中一个和激光在同一直在线（称作前散射(FSC)），其它几个和激光垂直（旁散射(SSC)和一个或几个荧光监测器）。当每个悬浮颗粒通过光束时会按某种方式把光散射，同时所带有的荧光化合物被激发并发射出频率低于激发光的荧光。这些散射光和荧光的组合数据被检测器记录，根据各检测器亮度的波动（每个细胞会显出一个散射或荧光的峰）就能够推算出每个颗粒的物理和化学性质。前散射与细胞体积相关，而旁散射取决于颗粒的内部复杂程度（比如核的形状、胞质内颗粒的种类或者末的粗糙程度）。 可以检测的参数有： * 细胞的体积和形态复杂程度 * 细胞中的色素 * DNA（细胞周期分析、细胞动力学、细胞增殖等） * RNA * 染色体分析和分选（文库构建、染色体涂染） * 蛋白质 * 细胞表面抗原（CD标记） * 胞内抗原（各种细胞因子(cytokine)、次级媒介等） * 核抗原 * 酶活性 * pH，胞内离子化的钙、镁，膜电势 * 膜流动性 * 细胞凋亡(apoptosis)（定量检测DNA降解、线粒体膜电位、通透性变化） * 细胞存活能力 * 监测细胞电通透性 * 氧爆作用(oxidative burst) * 研究癌细胞中的多重耐药性(multi-drug resistance, MDR) * 谷胱甘肽 * 各种组合（DNA/表面抗原等等） 这个列表非常长，而且在不断地扩展。 [编辑] 流式细胞仪(flow cytometer) 流式细胞仪又称荧光激活细胞分选器、荧光活化细胞分类计（FACS，Fluorescence Activated Cell Sorter）。 现代的流式细胞仪每秒可以实时检测几千个颗粒，并且可以主动分离具有不同特性的颗粒。 流式细胞仪和显微镜比较像，但能够对大量的单个细胞利用一组参数进行高通量的自动量化。固体组织需要在检测前制备成单细胞的悬浮液。 一个流式细胞仪包括五个组成部分： * 细胞流动系统：液流（鞘液(sheath fluid)）携带细胞，使颗粒以串流形式通过光束。 * 光源：有通常的灯（汞或氙）、高功率水冷的激光源（氩、氪、染料激光）、低功率气冷激光（氩(488nm)，红氦氖(633nm)，绿氦氖，氦镉(紫外)）、偶极激光（蓝、绿、红、紫）。 * 检测和模数转换(analogue-to-digital conversion, ADC)系统：产生前散射、旁散射光和荧光的信号。 * 放大系统，线性或对数放大。 * 计算机，用于分析信号。 早期的流式细胞仪主要是实验设备，但目前仪器和相关的试剂有了很广的市场。不同厂商的仪器特性也不同，主要的厂商和品牌如下： * Beckman-Coulter (ex-Coulter): Epics XL/XL-MCL; Epics Altra (Hypersort) (IBM-PC compatible platforms) * Becton, Dickinson: (FACS"s): FACSCAlibur, FACScan, FACSort, FASCSVantage (Mac OS platform) FACS Canto, LSRII, Aria, DiVa (PC PLatform) * Cytomation: MoFlo, Cyan (IBM-PC platform) * Partec/Dako: Galaxy; PAS; CCA; PA (IBM-PC compatible platforms) [编辑] 应用 流式细胞术在很多领域中都有应用，包括分子生物学、病理学、免疫学和海洋生物学等。在分子生物学中，它主要用于荧光标记的抗体。特异性的抗体与靶细胞上的抗原结合，能够通过流式细胞仪研究这些细胞的特别信息。这在医学（尤其是器官移植、血液学、肿瘤免疫学和化疗、遗传学）中具有很广泛的应用。 现代的流式细胞仪具有多个激光和荧光检测器（目前商业用仪器的记录是4个激光和14个检测器），可以用于多个抗体标记，以便在表现型中更准确地区别某个靶群体。 流式细胞仪也是很有用的分选仪器。当细胞/颗粒通过时，可以被选择性地加上某种电荷，并在通过电磁场后偏转，从不同出口流出。这样就可以从一个混合物中高速（理论上可达到每秒大约9万个细胞）准确地分离开四类细胞。 由流式细胞仪得到的数据可以画成一维的柱状图或者二位或者三维的散点图。 The data coming from flow-cytometers can be plotted in 1-D to produce histograms or seen in 2D as dot plots or in 3D with newer software. The regions on these plots can be sequentially separated by a series of subset extractions which are termed gates. Specific gating protocols exist for diagnostic and clinical purposes especially in relation to haematology. The plots are often made on logarithmic scales. Because of overlaping fluorescent dyes, emission spectrum generated interfering signals by detectors signals have to be compensated electronically. 海洋中主要的光合生物之一——占海洋浮游生物总细胞数将近1/3的原绿球藻(Prochlorococcus)就是通过流式细胞术发现的。因为其细胞小，叶绿素含量少，在通常的荧光观察中被迅速漂白(bleach)，但由于在流式细胞术中细胞通过光束的时间极短，胞内叶绿素的荧光可被观察到。 [编辑] 参见 * 荧光显微镜 * 荧光活化细胞分选 取自"http://wikipedia.cnblog.org/wiki/%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E8%A1%93"

1. 手工计数 见上贴。2. 如果你有流式细胞仪或计数器，将制备的细胞悬液加入计数即可。

经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。光电倍增管（PMT）最为常用。PMT的响应时间短，仅为ns数量级；光谱响应特性好，在200～900nm的光谱区，光量子产额都比较高。光电倍增管的增益从10到10可连续调节　，因此对弱光测量十分有利。光电管运行时特别要注意稳定性问题，工作电压要十分稳定，工作电流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W；最大阳极电流在几个毫安。此外要注意对光电管进行暗适应处理，并注意良好的磁屏蔽。在使用中还要注意安装位置不同的PMT，因为光谱响应特性不同，不宜互换。也有用硅光电二极管的，它在强光下稳定性比PMT好。从PMT输出的电信号仍然较弱，需要经过放大后才能输入分析仪器。流式细胞计中一般备有两类放大器。一类是输出信号辐度与输入信号成线性关系，称为线性放大器。线性放大器适用于在较小范围内变化的信号以及代表生物学线性过程的信号，例DNA测量等。另一类是对数放大器，输出信号和输入信号之间成常用对数关系。在免疫学测量中常使用对数放大器。因为在免疫分析时常要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群，它们的荧光强度相差1～2个数量级；而且在多色免疫荧光测量中，用对数放大器采集数据易于解释。此外还有调节　便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。 流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。在流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量：①前向角（即0角）散射（FSC）；②侧向散射（SSC），又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来，前向角散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系；对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大，尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关，但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。在实际使用中，仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时，可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。荧光信号主要包括两部分：①自发荧光，即不经荧光染色，细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子（例核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是：①尽量选用较亮的荧光染料；②选用适宜的激光和滤片光学系统；③采用电子补偿电路，将自发荧光的本底贡献予以补偿。 流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的过程是：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉，某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。稳定的小液滴是由流动室上的压电晶体在几十KHz的电信号作用下发生振动而迫使液流均匀断裂而形成的。一般液滴间距约数百μm。实验经验公式f=v/4.5d给出形成稳定水滴的振荡信号频率。其中v是液流速度，d为喷孔直径。由此可知使用不同孔径的喷孔及改变液流速度，可能会改变分选效果。使分选的含细胞液滴在静电场中的偏转是由充电电路和偏转板共同完成的。充电电压一般选+150V，或-150V；偏转板间的电位差为数千伏。充电电路中的充电脉冲发生器是由逻辑电路控制的，因此从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间，一般为数十ms。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键，仪器多采用移位寄存器数字电路来产生延迟。可根据具体要求予以适当调整。（50）数据处理原理：FCM的数据处理主要包括数据的显示和分析，至于对仪器给出的结果如何解释则随所要解决的具体问题而定。①数据显示：FCM的数据显示方式包括单参数直方图、二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。直方图是一维数据用作最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X—Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，坐标可以是线性标度或对数标度，用“道数”来表示,实质上是所测的荧光或散射光的强度。坐标一般表示的是细胞的相对数。图10-2给出的是直方图形式。只能显示一个参数与细胞之间的关系是它的局限性。二维点图能够显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系。坐标和坐标分别为与细胞有关的两个独立参数，平面上每一个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在（图10-3）。可以由二维点图得到两个一维直方图，但是由于兼并现象存在，二维点图的信息量要大于二个一维直方图的信息量。所谓兼并就是说多个细胞具有相同的二维坐标在图上只表现为一个点，这样对细胞点密集的地方就难于显示它的精细结构。图10-2　 直方图 图10-3　 二维点图二维等高图类似于地图上的等高线表示法。它是为了克服二维点图的不足而设置的显示方法。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。曲线层次越高所代表的细胞数愈多。一般层次所表示的细胞数间隔是相等的，因此等高线越密集则表示变化率越大，等高线越疏则表示变化平衡。图10-4给出了二维等高图的样式。假三维图是利用计算机技术对二维等高图的一种视觉直观的表现方法。它把原二维图中的隐坐标—细胞数同时显现，但参数维图可以通过旋转、倾斜等操作，以便多方位的观察“山峰”和“谷地”的结构和细节　，这无疑是有助于对数据进行分析的。图10-5为假三维图的示意图。图10-4　 二维等高图 图10-5　 假三维图列表模式其实只是多参数数据文件的一种计算机存贮方式，三个以上的参数数据显示是用多个直方图、二维图和假三维图来完成的。可用ListMode中的特殊技术，开窗或用游标调出相关部分再改变维数进行显示。例如，“一调二”就是在一维图上调出二维图来；“二调一”就是从二维图中调出一维图来。图10-6给出了从二维图等高图中调出相应窗口的直方图的示意图。图10-6　从二维图设窗调出直方图示意上面简要地介绍了几种数据显示形式，在实际应用中，可根据需要选择匹配，以便了解和获得尽可能多的有用信息。②数据分析：数据分析的方法总的可分为参数方法和非参数方法两大类。当被检测的生物学系统能够用某种数学模型技术时则多使用参数方法。数学模型可以是一个方程或方程组，方程的参数产生所需要的信息来自所测的数据。例如在测定老鼠精子的DNA含量时，可以获取细胞频数的尖锐波形分布。如果采用正态分布函数来描述这些数据，则参数即为面积、平均值和标准偏差。方程的数据拟合则通常使用最小二乘法。而非参数分析法对测量得到的分布形状不需要做任何假设，即采用无设定参数分析法。分析程序可以很简单，只需要直观观测频数分布；也可能很复杂，要对两个或多个直方图逐道地进行比较。逐点描图（或用手工，或用描图仪、计算机系统）是大家常用的数据分析的重要手段。我们常可以用来了解数据的特性、寻找那些不曾预料的特异征兆、选择统计分析的模型、显示最终结果等。事实上，不经过先对数据进行直观观察分析就决不应该对这批数据进行数值分析。从这一点来看，非参数分析是参数分析的基础。逐道比较工作量较大，但用直观法很容易发现明显的差异，特别是对照组和测试组。考虑到FCM的可靠性，要注意到对每组测量，都要有对照组，对照组可以是空白对照组、阴性对照组、或零时刻对照组等，具体设置应根据整体实验要求而定。对照组和测试组的逐道比较往往可以减少许多不必要的误差和错误解释。顺便指出，进行比较时对曲线的总细胞数进行归一化处理，甚至对两条曲线逐道相减而得到“差结果曲线”往往是适宜的。因为数据分析往往和结果解释关系十分密切，也就是说和生物学背景相关，因此具体的分析法和原理将在后面结合实例再介绍。

细胞或者其他颗粒状的物体可以被荧光标记的抗体或者替他荧光染料染色。当这些被标记的物体通过流式细胞仪的时候，激光照射，得到不同的激发光。用途：1. 临床诊断：比如白血病，淋巴瘤的分型，可以指导治疗。检测干细胞的百分率，可以判断干细胞治疗的效果等等2. 实验研究。根据前面所说的原理。只要可以被染色的，都可以用流式来分析。可以检查各种抗原的含量。代谢状态等等。3. 细胞的分选。最后，根据染色的状态，可以把不同的细胞筛选出来，进行下一步的研究。

实验原理：流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。

待测样品(如细胞、微球、精子或细菌等)被制成单细胞悬液，在一定压力下被鞘液包裹着形成单列的细胞进入流动室，并与激光束相交。细胞被激光激发后产生散射光和荧光，经光电转换器处理后变为电信号，在电脑上以数字信号的形式展现出来。

最常用的是annexinv /pi双染检测凋亡，凋亡的细胞膜上的PS（磷脂酰丝氨酸蛋白）会从膜内转移到膜外，我们利用annexinv抗体即可与之结合，有结和得说明这个细胞有凋亡，pi是用来区分死活细胞的，一般认为annexinv阳性，pi阴性的那群细胞即为早期凋亡细胞。

利用流式细胞术快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选，主要通过几个步骤：制备单细胞悬液，用特异性荧光染料标记的抗体进行染色，经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室，在鞘液的包裹下细胞呈单行排列，依次通过检测区域，在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号，通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，进行分析。流式细胞术实验流程单细胞悬液的制备：流式细胞术检测的对象一般是细胞，并且是呈独立状态的悬浮于液体中的细胞。如果要检测组织中的细胞，须先将组织制备成单细胞悬液。如果该培养细胞是贴壁细胞，需用胰酶消化处理；如果是胸腺、脾脏和淋巴结等外周免疫器官，直接将脏器用研磨制成单细胞悬液；如果是实体脏器（如肺脏、肝脏和肿瘤组），细胞之间结合较紧密，将脏器剪碎后加入IV型胶原酶和DNA核酸内切酶进行细胞消化后再进行研磨。荧光标记与上样：细胞悬液制成后，用特异性荧光标记的抗体与细胞上的抗原结合以达到对细胞荧光标记（染色）。在恒定气体的压力下进入流动室，不含细胞或微粒的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流形成一定角度，鞘液包绕着样品高速流动，组成一个圆柱形的液流束，待测细胞或微粒在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。激光照射及荧光信号收集：流式细胞仪通常以激光作为发光源，经过聚焦的光束垂直照射在样品流上，细胞上的荧光染料被激发，产生散射光和激发荧光。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。数据处理分析：荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度，光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。内容引自流式细胞术

利用流式细胞术快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选，主要通过几个步骤：制备单细胞悬液，用特异性荧光染料标记的抗体进行染色，经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室，在鞘液的包裹下细胞呈单行排列，依次通过检测区域，在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号，通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，进行分析。流式细胞术实验流程单细胞悬液的制备：流式细胞术检测的对象一般是细胞，并且是呈独立状态的悬浮于液体中的细胞。如果要检测组织中的细胞，须先将组织制备成单细胞悬液。如果该培养细胞是贴壁细胞，需用胰酶消化处理；如果是胸腺、脾脏和淋巴结等外周免疫器官，直接将脏器用研磨制成单细胞悬液；如果是实体脏器（如肺脏、肝脏和肿瘤组），细胞之间结合较紧密，将脏器剪碎后加入IV型胶原酶和DNA核酸内切酶进行细胞消化后再进行研磨。荧光标记与上样：细胞悬液制成后，用特异性荧光标记的抗体与细胞上的抗原结合以达到对细胞荧光标记（染色）。在恒定气体的压力下进入流动室，不含细胞或微粒的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流形成一定角度，鞘液包绕着样品高速流动，组成一个圆柱形的液流束，待测细胞或微粒在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。激光照射及荧光信号收集：流式细胞仪通常以激光作为发光源，经过聚焦的光束垂直照射在样品流上，细胞上的荧光染料被激发，产生散射光和激发荧光。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。数据处理分析：荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度，光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。内容引自流式细胞术

流式细胞仪检测原理：待测样品(如细胞、微球、精子或细菌等)被制成单细胞悬液，在一定压力下被鞘液包裹着形成单列的细胞进入流动室，并与激光束相交。细胞被激光激发后产生散射光和荧光，经光电转换器处理后变为电信号，在电脑上以数字信号的形式展现出来。

汽车暖风系统不热可以分为两方面的原因，一是暖风的控制机构工作不良导致汽车暖风不热的，一是发动机冷却系统造成汽车暖风不热的。在维修时，我们要先判定是哪一方面原因引起汽车暖风不热的，再进行相应的维修。判别造成汽车暖风不热原因的方法很简单，看一下暖风小水箱的两个进水管温度，如果两根管都够热，说明是风量控制机构问题，反之，如果两根水管都凉，或者是一根热一根凉，说明是冷却系统问题。

细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。生命是从一代向下一代传递的连续过程，因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂， 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。通常将子细胞形成作为一次细胞分裂结束的标志，细胞周期是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。（一） 间期间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。1. G1期（first gap）　从有丝分裂到DNA复制前的一段时期，又称合成前期，此期主要合成RNA和核糖体。该期特点是物质代谢活跃，迅速合成RNA和蛋白质，细胞体积显著增大。这一期的主要意义在于为下阶段S期的DNA复制作好物质和能量的准备。细胞进入G1期后，并不是毫无例外地都进入下一期继续增殖，在此时可能会出现三种不同前景的细胞：①增殖细胞：这种细胞能及时从G1期进入S期，并保持旺盛的分裂能力。例如消化道上皮细胞及骨髓细胞等；②暂不增殖细胞或休止细胞：这类细胞进入G1期后不立即转入S期，在需要时，如损伤、手术等，才进入S期继续增殖。例如肝细胞及肾小管上皮细胞等；③不增殖细胞：此种细胞进入G1期后，失去分裂能力，终身处于G1期，最后通过分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神经细胞、肌细胞及成熟的红细胞等。2. S期（synthesis）　即DNA合成期，在此期，除了合成DNA外，同时还要合成组蛋白。DNA复制所需要的酶都在这一时期合成。3. G2期（second gap）期为DNA合成后期，是有丝分裂的准备期。在这一时期，DNA合成终止，大量合成RNA及蛋白质，包括微管蛋白和促成熟因子等。　（二）分裂期M期：细胞分裂期。细胞分裂期：前期，中期，后期，末期。细胞的有丝分裂（mitosis）需经前、中、后，末期，是一个连续变化过程，由一个母细胞分裂成为两个子细胞。一般需1～2小时。1. 前期（prophase）染色质丝高度螺旋化，逐渐形成染色体（chromosome）。染色体短而粗，强嗜碱性。两个中心体向相反方向移动，在细胞中形成两极；而后以中心粒随体为起始点开始合成微管，形成纺锤体。随着核仁相随染色质的螺旋化，核仁逐渐消失。核被膜开始瓦解为离散的囊泡状内质网。2. 中期（metaphase）细胞变为球形，核仁与核被膜已完全消失。染色体均移到细胞的赤道平面，从纺锤体两极发出的微管附着于每一个染色体的着丝点上。从中期细胞可分离得到完整的染色体群，共46个，其中44个为常染色体，2个为性染色体。男性的染色体组型为44+XY，女性为44+XX。分离的染色体呈短粗棒状或发夹状，均由两个染色单体借狭窄的着丝点连接构成。3．后期（anaphase）由于纺锤体微管的活动，着丝点纵裂，每一染色体的两个染色单体分开，并向相反方向移动，接近各自的中心体，染色单体遂分为两组。与此同时，细胞波拉长，并由于赤道部细胞膜下方环行微丝束的活动，该部缩窄，细胞遂呈哑 铃形。4．末期（telophase）染色单体逐渐解螺旋，重新出现染色质丝与核仁；内质网囊泡组合为核被膜；细胞赤道部缩窄加深，最后完全分裂为两个2倍体的子细胞。G0期：暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，去执行一定生物学功能的细胞所处的时期。在体内根据细胞的分裂能力可把它们[1]分为三类：①周期性细胞，如造血干细胞，表皮与胃肠粘膜上皮的干细胞。这类细胞始终保持活跃的分裂能力，连续进入细胞周期循环；②终端分化细胞，如成熟的红细胞、神经细胞等高度分化的细胞，它们丧失了分裂能力，又称终末细胞（end cell）；③暂不增殖细胞群（G0期细胞），如肝细胞、肾小管上皮细胞、心肌细胞、甲状腺滤泡上皮细胞。它们是分化的，并执行特定功能的细胞，在通常情况下处于G0期，故又称G0期细胞。在某种刺激下，这些细胞重新进入细胞周期。如肝部分切除术后，剩余的肝细胞迅速分裂。周期作用折叠编辑本段目前，科学家已发现有几类调控因子在细胞周期中起着重要作用。一类是对细胞分裂增殖有调控作用的细胞生长因子。如第二类细胞周期调控因子，又称内源性调节因子，是细胞内自己合成的蛋白质。细胞周期调控机制的序幕已经拉开，科学家们正在从不同的角度研究细胞周期与癌基因、抑癌基因、生长因子以及细胞增殖分化的关系，相信通过努力，我们最终能找到控制细胞周期的神奇“开关”。在肿瘤治疗中我们也可利用细胞周期的原理对症下药。如G0细胞对化疗不敏感，往往成为日后癌症复发的根源。因而可以设法诱导G0期癌细胞进入增殖周期再行杀灭。这是一个尚在探索中具有理论意义和实践意义的问题。 相关检测折叠编辑本段Ⅰ、样品准备　准备以下一种或几种样品A、组织单细胞悬浮液（如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞）B、组织培养细胞C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞Ⅱ、反应体系－DNA低渗缓冲液柠檬酸三钠 0.25gTriton-X 100 0.75mlPropidium iodide 0.025g核糖核酸酶　0.005g蒸馏水　250ml我们将该DNA低渗溶液于密闭瓶子中存放数月后并无发现有任何染色活性的丢失Ⅲ、染色1、 每一个管子中放入1×106个细胞；2、 样品离心后尽可能完全地移去上清液，并且不要打碎沉淀块；3、 入1ml的DNA低渗染色（可用甲基绿进行染色）缓冲液至沉淀中，并混匀；4、 样品于4℃下避光30分钟或最长不超过1个小时以备流式细胞仪分析。注意：延长在低渗缓冲液的曝光时间会引起样品碎片的增加。细胞周期检测可以作为生物相容性评价指标，示例如下：　应用体外细胞培养法，观察不同质量分数羟基磷灰石浸提液对L-929细胞的细胞学形态的影响，同时采用MTT比色法评价羟基磷灰石对L-929生长和增殖的影响，流式细胞仪检测羟基磷灰石浸提液对L-929细胞生长周期及凋亡的影响。结果表明，羟基磷灰石浸提液对体外培养的细胞形态无明显影响，对细胞生长和增殖无明显抑制作用；不同质量分数材料浸提液的细胞毒性为 0~1级，随羟基磷灰石浸提液质量分数的升高，细胞凋亡率逐渐上升；50%、75%、100%羟基磷灰石浸提液组能明显降低G0 /G1 期细胞比例，增加S,G2 /M期细胞比例，能增加L-929细胞DNA的合成，促进细胞生长和组织修复。细胞周期检测是生物材料生物相容性评价的一种可靠方法和指标。其他资料折叠编辑本段细胞周期（细胞有丝分裂）口诀 折叠以植物细胞有丝分裂为例：有丝分裂分五段间前中后末相连间期首先作准备间期染体复制在其间前期 两消两现一散乱中期 着丝点聚赤道板后期 丝牵染体两极走末期 两消两现壁重建注：动物细胞末期不生成细胞壁。周期详解 折叠以有丝分裂方式增殖的细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的过程。这一过程周而复始。细胞周期是50年代细胞学上重大发现之一。在这之前认为有丝分裂期是细胞增殖周期中的主要阶段，而把处于分裂间期的细胞视为细胞的静止阶段。1951 年霍华德等用P-磷酸盐标记了蚕豆根尖细胞，通过放射自显影研究根尖细胞DNA合成的时间间隔，观察到P之掺入不是在有丝分裂期，而是在有丝分裂前的间期中的一段时间内。发现间期内有一个DNA合成期（S期），P只在这时才掺入到DNA;S期和分裂期（M期）之间有一个间隙无P掺入，称为G2期，在M期和S期之间有另一个间隙称为G1期，G1期也不能合成DNA。于是他们提出了细胞周期的概念，并首先证明间期是细胞周期中极为重要的一个阶段，发生着许多与细胞分裂有关的特殊生化事件。这一发现被以后学者们用H-胸腺嘧啶核苷进行的类似研究所证实。细胞生命活动大部分时间是在间期度过的，如大鼠角膜上皮细胞的细胞周期内,间期占14000分钟。分裂期仅占70分钟。细胞周期各阶段都有复杂的生化变化。间期是细胞合成DNA、RNA、蛋白质和各种酶的时期，是为细胞分裂准备物质基础的主要阶段。在一个增殖的细胞群中，所有细胞并非是同步增殖的，它们在细胞周期运行中，可能有四种命运（图1）：①细胞经M期又开始第二次周期；②停止于G2期，称为G2期细胞（R2），它受某种刺激后可进入周期；③停止在G1期，称为休止细胞或名G0期细胞，这类细胞受某种刺激仍能进入周期，并开始DNA合成和有丝分裂；④丧失生命力近于死亡的细胞，称为丢失细胞，或称不再分裂的细胞。继续分裂的细胞沿着细胞周期从一个有丝分裂期到下一个分裂期。不再分裂的细胞离开了细胞周期不再分裂，最终死亡。G1期 进行大量物质合成时期。细胞体积逐渐增大，制造RNA（包括tRNA，mRNA，rRNA以及核糖体等）。RNA的合成又导致结构蛋白和酶蛋白的形成，这些酶又控制着形成新细胞成分的代谢活动。G1又分为G1早期和G1晚期两个阶段；细胞在G1早期中合成各种在G1期内所特有的RNA和蛋白质，而在G1晚期至S期则转为合成DNA复制所需要的若干前体物和酶分子，包括胸腺嘧啶激酶、胸腺嘧啶核苷酸激酶、脱氧胸腺嘧啶核苷酸合成酶等，特别是DNA聚合酶急剧增高。这些酶活性的增高对于充分利用核酸底物在S期合成DNA是不可少的条件。G1期持续时间变异很大，多数细胞的G1期较长，是与细胞需要增加质量有关。但在某些单细胞生物如大变形虫、四膜虫和多细胞生物的某些细胞（如海胆胚胎，小鼠胚胎细胞）则无G1期，中国仓鼠卵巢细胞的变异株无G1和G2期，以致M期和S期连接在一起。G1期的长短之所以变化很大，与G1期内存在一个校正点或阻止点（简称R点）有关。R点主要控制 G1期时间的长短。通过了此点，细胞就能以正常速度不受外界条件的影响而完成细胞周期的其他时期。因此，有人认为细胞的生长是在G1期R点上停止的，例如当细胞内环腺苷酸（cAMP）水平增高，细胞密度增加时，可阻止细胞从G1期向S期过渡，用嘌呤霉素抑制蛋白质合成或用放射线菌素D抑制RNA合成，也能延缓细胞从G1期进入S期。有人发现 G1期内能合成一种有触发作用的蛋白质；它是不稳定的，极易被分解，故称为v蛋白。v蛋白在G1细胞中达到一定水平时，细胞便可通过R点进入S期。G0期 细胞周期的调节主要是通过G1期的阻留而实现的，G0期即指细胞处于阻留的状态。细胞通过M期一分为二，有的可继续分裂进行周期循环，有的转入G0期。G0期是脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段。但在一定适宜刺激下，又可进入周期（图1），合成DNA与分裂。G0期的特点为：①在未受刺激的G0细胞，DNA合成与细胞分裂的潜力仍然存在;②当G0细胞受到刺激而增殖时，又能合成DNA和进行细胞分裂。S期 在这一阶段完成DNA的合成以及合成与DNA组装构成染色质等有关的组蛋白。DNA含量在此时期增加一倍。S期终结时，每一染色体复制成两个染色单体（Hole,1979）。生成的两个子代DNA分子与原来DNA分子的结构完全相同。一个人体细胞核直径10～20微米，其中DNA含量为10克，如拉成一根DNA链，长度可达3米。哺乳类动物细胞S期一般为6～8小时。DNA的复制能在几小时内完成，主要是由于DNA链分成许多的复制单位（复制子）（可多达10000个左右），它们可在S期的不同时间分别复制。另外，在S期内还有组蛋白的合成──组蛋白基因在G1-S期之间活化，组蛋白mRNA的转录增大，并在整个S期内连续进行。已合成的组蛋白使新合成的DNA很快转为核组蛋白复合体。S期细胞含有一种因素能诱导DNA合成，用细胞融合实验证明，G1细胞在与S期细胞融合后能加速其核内DNA复制的起点启动。S期不同阶段复制的DNA碱基组成是不同的，早期复制的DNA富有G-C碱基，晚期复制的DNA富有A-T碱基，即常染色质比异染色质复制较早（图2）。G2期 是DNA复制结束和开始有丝分裂之间的间隙，在这期间细胞合成某些蛋白质和RNA分子，为进入有丝分裂提供物质条件。用放射标记的RNA前体和蛋白质前体示踪，表明G2期进行着强烈的RNA和蛋白质的合成。假如破坏这些合成过程，细胞就不能过渡到M期。G2期合成的是染色体浓缩以及形成有丝分裂器所需的成分。有人认为G2期继续完成从S期就开始的微管蛋白的合成，为M期纺锤丝的组装提供原料。在G2晚期开始合成有丝分裂因子。在某些缺少G1期细胞中，G2期更为复杂，还要担负起其他细胞G1期中所要完成的事件。也有少数情况，S期结束后立即开始有丝分裂，而不存在G2期。M期 有丝分裂时期，是细胞形态结构发生急速变化的时期，包括一系列核的变化、染色质的浓缩、纺锤体的出现，以及染色体精确均等地分配到两个子细胞中的过程，使分裂后的细胞保持遗传上的一致性。M期分为前期、中期、后期和末期（见有丝分裂）。M期虽是形态变化最为显著的时期，但其呼吸作用反而降低，蛋白质合成明显下降，RNA合成及其他代谢周转停止，这是由于有丝分裂期所需要的能量和其他基本物质均在间期内合成和贮备好了有关。细胞周期中，细胞形态也发生一系列变化，从光学显微镜下可看到G1期细胞最小，细胞扁平而光滑，随着向S→G2→M期的发展细胞逐渐增大，从扁平变成球形。扫描电镜下可明显看到各时期内细胞表面形态的变化，如微绒毛逐渐增加，这些变化和细胞内各种生化的和生理的周期性变化是有关的。调控细胞周期中的许多生化事件是按一定顺序，有条不紊地进行着，这和基因按一定顺序表达密切相关。有人认为，细胞周期内有两个阶段最为重要：G1到S和G2到M；这两个阶段正处在复杂活跃的分子水平变化的时期，容易受环境条件的影响，如果能够人为的进行调控，将对深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。已发现很多体内因素可以激发或抑制细胞的增殖，例如多种激素、血清因子、多胺、蛋白水解酶、神经氨酶、cAMP、cGMP以及甘油二脂（DG）、 三磷酸肌醇（1P3）和Ca信使系统等等。细胞内cAMP浓度增加对细胞增殖有抑制作用，凡能使细胞内cAMP增高的因素都能抑制细胞的增殖，降低细胞生长速度；反之，凡能使细胞内cAMP含量下降的因素都能促进DNA的合成与细胞的增殖。细胞周期的各期中的cAMP含量也不相同（见表）。在中国仓鼠卵巢细胞株中，M期cAMP含量最低，M期后cAMP的水平增高三倍，从G1早期至G1晚期，cAMP水平降低到中等水平，直至S期仍维持低的水平（图3）。还有许多实验指出cGMP 也对细胞增殖起调控作用，如将cGMP或双丁酰cGMP加到休止在G1期的 3T3 细胞时，能诱导DNA含量的增加， 促进细胞的分裂。如提高细胞cGMP水平，就可促进细胞的有丝分裂，反过来，促进有丝分裂的药物也能增加cGMP的浓度。cAMP能抑制细胞的分裂，促进细胞的分化，cGMP则能抑制细胞分化，促进细胞增殖，在正常生长的细胞中，cAMP和cGMP维持在适当的水平，调节控制细胞周期的运转。抑素是细胞产生的一种小分子蛋白质或多肽，有的还含有糖或RNA。它无种属特异性，但有细胞特异性，对同类细胞增殖有抑制作用并且可逆。当抑素含量达到一定浓度时可抑制同类细胞的增殖，抑素浓度下降则细胞增殖活跃。有人认为抑素作用的机制，在于它能激活细胞膜上的腺苷环化酶活性，提高细胞内cAMP的浓度，因而抑制细胞的增殖，也可能通过cAMP-依赖性蛋白激酶对蛋白质的磷酸化作用来影响调节基因的活动。细胞周期也受机体调节系统的影响，例如肝再生就是由调节系统的作用加速肝细胞增殖。但是肿瘤细胞，由于宿主失去对它的调控，因而恶性增殖。在肿瘤治疗中可应用细胞周期的原理，如G0期细胞对化疗不敏感，往往成为日后癌症复发的根源，因而可通过调控机理的研究，诱发G0期癌细胞进入细胞周期，再合理用抗癌药物加以杀灭，是防止癌转移和扩散的重要调控措施，也是细胞动力学中有理论意义和实践意义的研究问题。总之，目前所了解的细胞增殖调控的分子基础还少，尚待进一步探索。细菌DNA增值特点 折叠细菌DNA复制、RNA转录和蛋白质合成同时进行，这是细菌对快速生长的适应。DNA复制不受细胞周期的限制，快速生长的细菌，在上一次细胞分裂结束时，细胞内的DNA经复制到一半进程，以保证迅速进行下一次分裂。

目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。 一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。 另一种是间接的方法，即细胞活力（cellviability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。 显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。 所以最直接的证据应该采用方法一。 用于检测细胞增殖能力最经典的方法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷处理细胞，再检测DNA链中氚含量。 若细胞具有增殖能力，DNA合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料，因此检测细胞DNA链内标记核苷酸的量可判断细胞是否进行DNA的合成。 但更为常用的方法是BrdU检测法。 用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。 细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量（如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定），从而判断细胞的增殖能力。 Calbiochem/EMD公司提供一种BrdU检测试剂盒，以微孔板的形式，合并所有清洗、固定、变性的步骤以单一试剂当中。 比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数，所有操作在3小时内结束。 而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。 1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2小时，100个细胞则采用过夜预孵育，即可检测细胞的增殖能力。 BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。 有些情况下，研究者可能希望在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，然而，在变性条件下，DNA的双链结构将被破坏，DAPI和Hoechest33342等核酸标记探针就不再能识别DNA，因而也无法估计DNA总量。 MolecularProbes公司的Click-iTEdU(5－乙炔－2"－脱氧尿嘧啶)检测试剂盒可以解决这个问题。 这种方法不需要变性步骤，因为荧光探针标记的叠氮化物小分子，而不是庞大的抗体分子，可以很轻易的识别并结合未变性DNA双链中的EdU分子。 采用BrdU方法时，你必须非常小心的去对DNA进行变性，才能一方面使BrdU抗体进入细胞，另一方面又保留足够的双链DNA分子来进行细胞周期的分析。 有了EdU后则不同，由于你不再需要变性，这一切都很简单了；另外，常常用于DNA变性的HCl，可能破细胞内坏蛋白的抗原识别位点，因而限制了BrdU检测法中同时检测其他蛋白的应用，但这种情况在EdU法中不存在。 图1：EdU及BrdU原理示意图（摘至invitrogen说明书） 在一些情况下，细胞活力的检测相当于细胞增殖能力的测定。 用于细胞活力检测的方法又很多，这些方法主要采用特殊的试剂来测定细胞的代谢活力，AlamarBlue，MTT及其他四唑盐。 它们通过检测细胞的氧化还原活性来检测细胞增殖能力，所以这是一种间接的方法。 Calbiochem的快速细胞增殖试剂盒，或者，严格来说，叫细胞活力试剂盒，采用一种四唑盐试剂WST-1来对细胞活力进行快速的检测。 线粒体剪切WST－1试剂，产生一种水溶性的formazan盐，所以这是一种相对可靠的测定健康细胞活力的方法。 一种类似的但更为灵敏的方法是Calbiochem公司的超敏细胞增殖试剂盒，采用calcein-AM（一种荧光探针）来标记细胞。 这种增加的灵敏度来自于额外的检测步骤，即采用PBS替代培养基或血清来减小背景。 Invitrogen公司还提供了一种采用荧光素酶检测细胞内ATP水平的方法。 健康细胞中荧光素激发出的光可以很容易读出，并且具有非常小的背景。 无荧光信号表明细胞线粒体不在产生ATP。 因此，这些方法当然也可用于细胞毒性检测实验。 细胞增殖检测方法：总论 一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法 胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。 用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。 但是具有放射性。 二、MTT检测法 MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比 三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使CE成为一种良好的细胞标记物。 CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。 当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。 这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 四、Brdu检测法 Brdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。 同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系，IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的时候药物的浓度。把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。要点：药品2倍稀释，多做梯度，做点线图即可！举个例子：各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。代入 计算公式：Pm=0.95Pn=0.06P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1Xm=lg0.1=-1lgI=lg0.1/0.01=1lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025IC50=0.00025 有一个公式可供参考;lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)Xm:lg 最大剂量I:lg(最大剂量/相临剂量)P:阳性反应率之和Pm:最大阳性反应率Pn:最小阳性反应率抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率 例：用96孔板培养SMMC-7721肝癌做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适?根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。一般要低于IC50，避免非调亡性杀伤的细胞太多，造成流式细胞仪检测碎片太多。我一般用1/2-1/3的IC50，作用时间为36h。一般肿瘤细胞系空白处理的调亡率应低于1%，用药后一般为5-10%（Annexin V），细胞周期的亚G0峰比较明显.

可以，这个和western定量的原理类似，需要有标准品来作比对。不过很难。因为流式主要是用来最相对量的比较的。细胞内的蛋白，用荧光标记的单克隆抗体识别后，用流式可以测出每个细胞的相对荧光强度。有一种特异性的微球，可以吸附一系列不同定量分子数的抗体。这种微球吸附同样的荧光抗体，可以做出荧光强度和所吸附抗体分子数量的标准曲线。然后拿细胞检测的荧光强度和这个标准曲线对比，得到细胞内所结合的抗体数。因为单克隆抗体只结合相同的抗原表位，所以可以推算出细胞内蛋白的分子数量了。解释结果的时候要考虑到抗体的特异性和染色的效果等影响因素。

细胞生物学新技术进展：介绍细胞生物学技术的发展，随着其经典方法与当代生物医学研究（如分子生物学、生物化学、生物物理学及生物信息学技术等）日益密切的结合，已发展为当代医学研究不可分离的重要手段，有着广阔的应用前景。肿瘤等细胞的原代培养及鉴定技术：培养肿瘤细胞的应用；肿瘤细胞培养过程；培养肿瘤细胞的特性及鉴定；体外培养细胞的转化、永生化、恶性转化；转移性肿瘤细胞的建立及鉴定。细胞杂交及突变株制备：细胞杂交的基本方法，杂交细胞的特点，杂交细胞的选择原理，细胞杂交技术应用实例（单克隆抗体的制备），突变株制备的基本原理及基本过程等。成体干细胞的技术与临床应用研究：干细胞生物学特性的研究、干细胞组织工程的应用基础及干细胞的临床应用研究。干细胞培养及鉴定技术：介绍包括胚胎干细胞和多种成体干细胞的培养技术及鉴定方法激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪在细胞生物学研究中的应用：荧光标记基本知识、选择抗体及制作标本的注意事项；.激光扫描共聚焦显微镜的原理、功能及应用；流式细胞仪的原理、功能，图形知识，应用注意。

我也做流式，我觉得pbs除了有缓冲作用外，最主要是洗掉之前消化用的胰酶，因为胰酶对细胞有持续的损失作用，进一步作用会引起假阳性！所以我每次都会加多点pbs洗干净点！希望对你有用啊！

慢病毒转染进细胞后细胞会漂浮起来吗？不会，除非你转染太多，细胞死了。为什么慢病毒转染进细胞24小时后要收集上清离心阿～？因为慢病毒可以被细胞分泌出胞外，大量存在于血清中。收集上清多方便啊~还有如何流式测滴度？流式细胞仪的原理就是将细胞分群，将感染和非感染的细胞分群。具体操作最好问专业的操作人员，因为每台机子都不一样……

这个是流式细胞仪的工作原理决定的。流式细胞仪用激光激发荧光素，再检测所发出的荧光。所以一般都是用荧光素标记的抗体或者荧光素直接染色，这样才能有特异性的信号。

流式细胞仪从细胞技术开始发展到今天，60年代至70年代是其飞速发展时期，激光技术、喷射技术以及计算机的应用使流式细胞仪在原理和结构上形成了固定的模式。80年代则是流式细胞仪的商品化时期，这期间不断有新型号的仪器推出，在多参数检测技术上不断提高。进入90年代，随着微电子技术特别是计算机技术的发展，计算能力不断提高，流式细胞仪的功能也越来越强大。在数据管理、数据分析方面有了长足进步。但是，在技术原理和设计方面并没有突破性的进展。人们的注意力开始转向流式细胞仪的应用，新的荧光探针、新的荧光染料、新的染色方法不断推出，使流式细胞技术在新的细胞参数分析方面日益发展。从新推出的仪器看，流式细胞仪会在硬件上不断更新，采用更新的器件（如半导体激光、大规模集成电路），以实现小型化；用数字电路取代模拟电路，充分发挥微处理器的功能以实现简单化；在软件上提高数据自动分析能力，充分发挥图形界面的优点，使操作更加简便。目前，FCM是定量外周血中HPC的参考方法，广泛应用于外周血干细胞移植实验室，用于决定PBSC采集的时机及评价外周血采集液的收益。其基本原理为荧光免疫分析，即根据外周血与骨髓中HPC表达同样的CD34抗原(CD34+)，并利用荧光标记CD34抗体与HPC膜表面CD34抗原结合，在特定波长的激光照射下，检测CD34+胞发出的荧光强度并结合其光学特性，即较低的侧向散射（SSC）和较高的前向散射（FSC），从而检测CD34+细胞。CD34+细胞实际上包括所有的HPC，如CFU-GM，红细胞暴发形成单位(BFU-E),巨核细胞形成单位（CFU-Mk）,混合细胞集落形成单位（CFU-Mix）和原始细胞集落形成单位（CFU-Blast）。后两种HPC明显具有许多干细胞的特征，如它们可以自我更新，也可定向分化为一定数目的造血细胞系。体内试验也发现，经过致死剂量照射的狒狒移植足够数量的自体CD34+细胞，可以完全恢复其造血功能，同样的现象也可在经过骨髓、摧毁性治疗的病人中出现。有人认为，CD34+细胞在功能上可根据是否表达CD33抗原而分为2个细胞群。早期的HPC，如CFU-Blast和LTC-IC仅表达Q CD34抗原（CD34+/CD33-），而较为成熟的定向祖细胞可同时表达CD34和CD33抗原（CD34+/CD33+）。还有人根据CD38抗原表达与否，将CD34+细胞分为CD34+/CD38-和CD34+/CD38+两个亚型，并且认为LTC-IC主要分布于CD34+/CD38-亚型，而更为原始的ELTC-IC则仅分布于CD34+/CD28-细胞群，说明CD34+/CD38-亚型性质上更接近PBSC。回顾性资料表面，移植经历了与移植物中不同分化程度的HPC有关的两个阶段。起初，与早期造血恢复有关的是移植 物中定向祖 细胞（committed progenitor cell）；继之，持续性的移植 相由多能造血干细胞产生。因此，周血中不同分化程度的HPC，对指导干细胞采集及移植成功尤为必要。目前多参数及双参数流式细胞低度均可通过CD34、CD33和CD38抗体等检测标本中不 同CD34+细胞亚型，来决定采血的时机和预测移植效果。Barnett等报道，采集液CD34+细胞数量与外周血中CD34+细胞百分率显著相关（r=0.71），并且认为准确计数循环中CD34+细胞，可更好地预测采集液中造血干/祖 细胞含量。Weaver等观察692例患者外周血祖细胞（PBPC）采集液中CD34+细胞、单个核细胞、集落形成单位的数量与移植动力学关系，认为PBPC采集液中CD34+细胞含量是预移植后中性粒细胞和血小板数量回升最有力的指标。虽然，FCM测定CD34+细胞是检测HPC数量的参考方法，但仍有一些技术问题有待解决：（1）单平台分析代替传统双平台分析的可行性；（2）应对单平台FCM分析实验室进行多中心的横向研究；（3）标本制备方法；（4）确定引起移植后快速和长期造血功能恢复的不同干细胞亚型及移植所需数目等。此外，FCM法需特殊仪器，操作技术要求高，价格昂贵，结果的重复性欠佳，促使人们追求更经济、快捷、简便的方法。

一、实验目的1.了解流式细胞仪的组成、原理及应用：初步了解流式细胞仪的工作元件及基本应用原理；能够认识流式细胞术的应用，特别是常用的一些功能。2. 熟悉用流式细胞术检测小鼠脾脏T细胞表面标志的基本流程3. 学习并掌握流式细胞术结果的分析：能够基本看懂结果图，重点掌握“门”和“补偿”两个概念。

流式细胞仪原理简单来讲就是将细胞包裹在细细的液流中，将细胞以一个一个的形式通过激光，GFP本身属于绿色荧光蛋白，受到488左右的激光激发会释放出荧光，通过检测侧向散射的荧光强度经过信号放大可以得到样品的荧光情况。具体的操作根据设备的不同都有不同，建议直接查看仪器的操作手册，但基本原理都是相同的，需要先将要鉴定的细胞消化、过滤网去除大块杂质，然后细胞悬液经由上样管进入流式分析仪或分选仪。第一次鉴定的话，需要准备阴性及阳性的对照，即不表达GFP的同种细胞，用该细胞设门，再上带有GFP的细胞，检测未知样品时，用FITC或相对应的通道的信号强度，去除阴性的门就是阳性的细胞亚群了。

1.流式细胞仪原理 ACEA:豪森 2.流式细胞技术应用 3.流式细胞技术发展 流式细胞技术特点： 流式细胞仪构成：流体部分，光学部分，电子部分。 流式信号：散射光信号（体积+颗粒度） 荧光信号（标记物） 前向散射光FSC（反映体积大小）： 0度 侧向散射光SSC（反映细胞颗粒度）：90度 荧光信号：（CDS FITC，CD16+56PE，CD45PerCP,CD8PE-Cy7，CD19APC,CD4APC-Cy7） 流体聚焦：流动室 光信号产生：信号脉冲 阈值（threshold)：阈值设置 线性坐标和对数坐标： 线性坐标信号范围：（2-10级）DNA标记染色 对数坐标信号范围：（>100级）抗体染色 图的类型：直方图、散点图、密度图、等高线图 门类型：设门： 二分门：区分阴性和阳性。四分门，多边形门，等分门，曲线四分门，偏移四分门，蜘蛛门，【方形门、椭圆形门】 技术应用：细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫表型、报告基因检测、细胞内基因检测、细胞外基因检测：液相芯片：液相芯片，又称悬浮阵列、流式荧光技术，是基于美国Luminex 公司研制的多功能流式点阵仪 （Luminex 100TM）开发的多功能生物芯片平台，通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究。蛋白磷酸化、单细胞水平RNA检测、淋巴细胞亚群分析、强直性脊柱炎、白血病/淋巴瘤、造血干细胞、CD4+绝对计数、精子计数/封闭抗体 技术发展：1.固态温控激光器 2.固定光路 3.防堵设计 1.免调电压 2.一键操作 3.多种补偿 4.智能软件 高分辨率：灵敏度：FITC35000evens/s 低CV值：CV=d/m*100% d:分布标准误差 m:分布平均值 Novecyte:CV 高精度绝对计数、多色分析、灵活配置、自由升级。

A、由以上分析知，对照组和试验组的细胞数目在a峰中细胞的DNA含量均为40，在b峰中细胞的DNA含量均为80，所以b峰中细胞的DNA含量是a峰中的2倍，A错误； B、在a峰与b峰之间细胞内的DNA在逐渐加倍，所以正进行着DNA分子的复制，B正确； C、DNA的复制发生在间期，处于细胞分裂期的细胞中DNA是加倍的，所以处于分裂期的细胞均被计数在b峰中，C错误； D、比较实验组和对照组中的b峰细胞的数量，可以看出实验组中进行DNA复制的癌细胞数量明显减少，说明该药物对癌细胞DNA复制有抑制作用，D错误． 故选：B．

第1章　流式细胞仪基本结构与原理1.1 流式细胞仪基本结构与功能1.1.1 流式细胞仪基本结构1.1.2 流式细胞仪的基本功能与应用1.2 流式细胞术的重要术语1.2.1 前向散射与侧向散射1.2.2 Coulter效应与电子体积1.2.3 荧光信号及其面积与宽度1.2.4 光谱重叠与荧光补偿1.2.5 细胞基础荧光域值与阴性对照置信区间1.3 流式细胞术基本原理1.3.1 流式细胞术分析的基本原理1.3.2 流式细胞术分选的基本原理1.3.3 流式细胞仪荧光补偿设置1.4 流式细胞术的样本设置1.4.1 常用对照1.4.2 一套完整的流式细胞术检测样本设置1.5 流式细胞术的数据分析1.5.1 数据显示与分析1.5.2 设门1.5.3 数据分析中几种常见图形及分析原则第2章　抗原抗体反应基本特点与流式抗体及荧光染料的选择2.1 抗原抗体反应基本特点2.1.1 抗原抗体结合具有特异性2.1.2 抗原与抗体的结合是可逆的化学反应2.2 抗原抗体反应影响因素2.2.1 电解质2.2.2 反应温度与时间2.2.3 pH值2.3 流式抗体的选择2.3.1 尽量使用直标抗体2.3.2 注意流式抗体的应用级别2.3.3 抗体滴度或标记量的选择2.3.4 根据流式细胞仪的类型及荧光素的荧光光谱选择荧光抗体2.3.5 根据检测物（抗原）表达量选择荧光染料2.4 荧光染料特性及其应用2.4.1 抗体标记荧光染料特性及其应用2.4.2 核酸荧光染料的特性及其应用2.4.3 细胞膜及其他荧光探针的特性及其应用第3章　细胞表面分子的检测与分析3.1 流式细胞术在细胞表面分子的检测与分析中的应用3.1.1 免疫细胞及其亚群的检测与功能分析3.1.2 血液系统细胞表面标志的研究3.1.3 细胞群体及细胞表面标志变化的监测3.1.4 细胞表面标志构成性质的分析3.2 标本制备3.2.1 血液或骨髓标本的制备3.2.2 体液、灌洗液或悬浮培养细胞的制备3.2.3 贴壁细胞的制备3.2.4 组织标本的制备3.3 细胞表面分子免疫标记方法3.3.1 直接免疫荧光法3.3.2 间接免疫荧光法3.3.3 全血直接标记法3.3.4 直接与间接免疫荧光混合染色法3.4 常用的免疫细胞表面标志的检测与分析3.4.1 T淋巴细胞及其亚类检测3.4.2 B淋巴细胞及其亚类检测3.4.3 NK细胞与NKT细胞检测第4章　细胞内或细胞核内抗原检测与分析4.1 流式细胞术分析细胞内或细胞核内抗原基本步骤4.1.1 细胞固定剂和穿膜剂的选择4.1.2 最佳抗体浓度的选择4.1.3 细胞膜内外FCR的封闭4.2 胞内抗原的检测与分析——胞内细胞因子的检测与分析4.3 核内抗原的检测与分析——调节性T细胞（Treg，CD4+CD25+Foxp3+）的检测与分析第5章　细胞凋亡的检测与分析5.1 样品来源与收集5.2 PI单染法——亚“G1”峰检测法5.3 Annexin-V-PI复染法5.4 末端转移酶标记技术（TUNEL）5.5 细胞周期特异性细胞凋亡的检测（PI-Annexin-V，PA法）第6章　DNA含量检测与细胞周期的分析6.1 常用DNA和RNA染料6.2 DNA倍体分析在肿瘤诊断和治疗中的意义6.2.1 DNA倍体分析的判定标准6.2.2 DNA倍体分析在肿瘤诊断和治疗中的意义6.3 细胞DNA检测的内参考标准6.3.1 鸡红细胞6.3.2 人淋巴细胞6.3.3 鳖红细胞6.4 DNA样品的制备和检测6.4.1 DNA样品的制备和检测的影响因素与注意事项6.4.2 培养细胞或悬浮样品的DNA含量检测6.4.3 新鲜组织细胞核的DNA含量检测6.4.4 石蜡包埋组织块切片的DNA含量检测6.4.5 FCM在肿瘤脱落细胞学检查的应用6.5 数据采集后的软件分析6.5.1 运用ModFit LT进行自动分析6.5.2 运用ModFit LT进行手动分析6.5.3 运用ModFit进行同步化分析6.5.4 运用ModFit LT进行增殖分析6.6 药物对细胞周期的影响6.7 流式细胞核型分析6.8 FCM-DNA检测的质量控制6.8.1 标本采集和固定方法的质控6.8.2 单细胞悬液制备的质控制备6.8.3 石蜡包埋组织单细胞悬液制备的质控6.8.4 脱落细胞样品的采集6.8.5 细胞悬液荧光染色的质控6.8.6 流式细胞仪器操作技术质控6.8.7 流式细胞分析资料处理的质控6.8.8 定量荧光细胞染色技术的评价标准第7章　细胞增殖的检测与分析7.1 以检测细胞增殖抗原标志物为基础的分析法7.1.1 BrdU/DNA双参数法7.1.2 Ki-67检测与分析7.1.3 PCNA/DNA双参数法7.1.4 Cyclins/DNA双参数法7.2 以检测细胞分裂情况为基础的分析法7.2.1 检测细胞增殖的常用荧光染料及其分析原理7.2.2 以检测细胞分裂情况为基础的分析法的应用第8章　细胞毒的检测与分析8.1 体外细胞毒检测方法8.1.1 CFSE/PI或PKH-67/PI检测法8.1.2 GFP/PI检测法——以NK杀伤活性为例8.2 体内CTL细胞毒检测方法——CFSE标记法第9章　可溶性蛋白质分子的检测与分析9.1 可溶性蛋白质分子的定性、定量检测与分析9.2 可溶性蛋白质分子的定量检测与分析——液相芯片技术（LabMAPTM和CBA技术）9.2.1 液相芯片技术的基本原理9.2.2 液相芯片的技术优势9.2.3 液相芯片的主要实验步骤9.2.4 LabMAPTM技术9.2.5 BD微球阵列分析技术（CBA技术）第10章　报告基因的检测和分析10.1 报告基因GFP及其突变体10.2 报告基因GFP及其突变体在生物学中的应用10.2.1 筛选新的药物10.2.2 发育分子机理研究10.2.3 细胞筛选或分选标记物10.2.4 基因产物功能及基因定位研究10.2.5 细胞功能活动的动态观察10.2.6 细胞、分子之间的相互作用研究10.2.7 体内示踪与应用10.2.8 在RNA干扰与核酶体研究中的应用10.2.9 免疫反应示踪标志物10.2.10 在细胞凋亡相关基因研究中的应用10.3 报告基因（GFP）的检测与分析10.3.1 报告基因转染效率和（或）GFP融合蛋白表达的检测与分析10.3.2 GFP融合基因的细胞周期检测与分析——GFP/PI双标记法10.3.3 在细胞凋亡相关基因研究中的应用一GFP/Annexin-V/PI三色标记法第11章　其他流式细胞术应用技术11.1 胞内活性氧水平的检测与分析11.1.1 DCFH-DA单染色法11.1.2 DCFH/PI染色法11.1.3 双氢罗丹明（Rhodamine）123染色法11.2 细胞膜电位的检测与分析11.2.1 检测细胞膜电位的染料及其检测原理11.2.2 Cyanine（花青苷）染色法11.2.3 罗丹明123染色法11.2.4 JC-1染色法11.3 细胞内钙离子浓度的检测与分析11.3.1 检测细胞内钙离子浓度的荧光探针与检测原理11.3.2 细胞内钙离子浓度的检测与分析——Fluo-3/AM染色法11.4 荧光共振能量转移技术及应用11.5 干细胞（SP）的检测——Hoechst33342法第12章　流式细胞仪的发展和商品化仪器12.1 流式细胞仪的发展历史和趋势12.1.1 专业化的流式细胞仪纷纷面世12.1.2 仪器全面自动化12.1.3 多色多参数分析迅速发展12.2 流式细胞仪商品仪器概述12.2.1 激发光源及其荧光染料12.2.2 液流系统12.2.3 信号检测和光电转换12.2.4 分选系统12.2.5 数据处理与分析12.2.6 流式微球芯片12.2.7 图像流式细胞仪12.3 流式细胞仪的主要技术指标12.3.1 荧光分辨率12.3.2 荧光灵敏度12.3.3 前向角散射光灵敏度12.3.4 前向角散射光分辨率12.3.5 分析速度12.3.6 分选指标附录1 常见流式细胞术及荧光显微镜荧光染料激发波长与发射波长快查表附录22.1 常用溶液的配制2.2 Hanks液的配制2.3 磷酸盐缓冲液（PB）的配制参考文献·收起全部<<

流式细胞技术 （Flow Cytometer, FCM）是细胞学的研究手段之一。其能在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数。例如，采用双激光的方法，研究者可进行核型分析和鉴定，分离纯化某号染色体并构建染色体特异性DNA文库。流式细胞技术是当代最先进的细胞定量分析技术之一。 该技术依托 流式细胞仪 。其主要部件为光源、流动室、荧光检测部件、分选器。 （1）光源。通常是激光光源，目的是提供足够的荧光激光能量。 （2）流动室。其为流式细胞仪中最重要的部分。目的是使细胞流稳定流动，依次通过固定的检测区。其间一道加入还有鞘液（sheath fluid），使样品微粒之间相互分离，基于 鞘流原理 ，使微粒恒定处于同轴流动的中心位置。流动室的设计运用 液体聚焦原理 ，把激光激发点放在液流聚焦点上，该处是液流直径最小处，通常为10-20μm，做到了单个细胞进入检测区。 （3）荧光检测部件。染色细胞通过激光束时会发出荧光，检测系统将接收的这些荧光转换成与其量大小成正比的电压脉冲信号，该脉冲称为 峰值脉冲 ，分析系统根据这些来自不同方向的信号把不同的细胞群加以区分。散射光是围绕细胞360°散发的，所以检测装置里一般有90°散色光检测器（SSC，侧向散射光）和前向散射光检测器（FSC，前向角度散射光）。由于侧向散射光强度较弱，因此光电转换器件选用增益较大的 光电倍增管 。一般来说，6°以内的前向散射光为小角度散射光，可反映细胞体积的大小。大于6°的前向散射为大角度散射光，可提供细胞内的信息，特别是分叶核的信息，细胞质粒存在与否会明显改变前向大角度散射光的强度。由于前向散射光的强度较强，因此用光电二极管作 光电转换器 。 （4）分选器。细胞的分选是通过分离含有单细胞的滴液实现的。通过特异性识别与给液滴加电（2kV～6kV），施加静电场，来实现分离。 过程细节：被激光照射的染色细胞会产生散射光和激发荧光。这两种光信号同时被光电二极管和光电倍增管接收后转换成电脉冲信号。无论是散射光或荧光信号，检测的目的都是要分析不同的粒子。分析的方法有两种，一是测量粒子通过激光束的最大电压（与荧光强度成正比），二是测量脉冲的面积。再经过A/D 转换器将脉冲信号变换成二进制数字信号由计算机处理。光信号基本上反映了细胞体积的大小，荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度。这种属分析型流式细胞仪。分选型则是则是将液滴充电后送入上面描述的分选器中进行分离，目的是为了将所需的细胞做进一步的培养、观察和实验。 染色体倍性不同的细胞，染料吸附于染色体的量迥异，激发的荧光强度限定于一定区间。因此可以对染色体倍性实施鉴定。 总而言之，流式细胞仪能够对细胞的性质进行系列分析，是细胞学研究的重要工具。 [1] 何克健.流式细胞技术与流式细胞仪[J].医疗装备,2000(05):6-8. [2] 罗庆,高建有,李洁维,叶开玉,莫权辉,蒋桥生,查满荣,王发明,刘世彪.利用流式细胞仪对51份猕猴桃种质染色体倍性的鉴定[J/OL].生物学杂志:1-8[2022-06-02]. http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1081.Q.20220321.1515.00

在细胞培养液中加入模拟核苷酸EdU （比较老的方法也可以用BrdU）。培养一小时 后，更换为正常的培养液继续培养。模拟核苷酸可以像天然核苷酸一样被细胞摄取并整合入新合成的DNA。培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。再加入PI对DNA染色。在二维坐标图上，横坐标设为线性PI荧光强度，纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度（log）。典型的图就像下面一样：G1, G2 和S期就按照图中的划分来做。G1期的细胞没有新合成DNA，所以BrdU信号是阴性，而PI的信号位于1倍体期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是阳性。G2期是已经合成好了2倍的DNA，所以位于2倍体期，信号是G1期的一倍。这个图中，G1 PI信号是300， G2就是600.

转染的质粒带有标记基因，比如EGFP。分析绿色细胞的比例就得到了转染效率了。